CN113475397B - 船盔乌头的组培快繁方法及其应用 - Google Patents

船盔乌头的组培快繁方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本申请涉及植物繁殖技术领域,尤其涉及一种船盔乌头的组培快繁方法,包括:(1)获取船盔乌头的种子;(2)对所述种子进行消毒处理;(3)将经过消毒处理的所述种子接种到初始培养基上,进行启动培养,得到第一无菌苗;(4)截取所述第一无菌苗的中间节段,并将所述中间节段接种到分化培养基上,并在光照条件下进行分化培养,培养温度为20±2℃,得到带有腋芽的第二无菌苗;(5)将所述第二无菌苗接种到生根培养基上,并在光照和无光照交替的条件培养,得到含有根系的船盔乌头植株。该方法可以实现船盔乌头的快速繁殖。

Description

船盔乌头的组培快繁方法及其应用
技术领域
本申请涉及植物繁殖技术领域,尤其涉及一种船盔乌头的组培快繁方法及其应用。
背景技术
船盔乌头(Aconitum naviculare(Brühl.)Stapf)是藏药中的一味重要药材。目前,船盔乌头的供给目前仅靠野生资源,随着藏药生产的扩大,对船盔乌头的需求量日渐增多,但自然状态下船盔乌头分布零星,单株产量低下,自然生长赶不上人为采集,采集量的增大不仅破坏种群的自然更新,也破坏了船盔乌头的生境,使得船盔乌头的资源趋于濒危状态,已在一定程度上影响到藏医药事业的健康发展。因此,研究船盔乌头的扩繁和栽培技术迫在眉睫。
发明内容
本申请提供了一种船盔乌头的组培快繁方法及其应用,以提供一种可快速繁殖船盔乌头的育苗技术。
第一方面,本申请提供了一种船盔乌头的组培快繁方法,包括如下步骤:
(1)获取船盔乌头的种子;
(2)对所述种子进行消毒处理;
(3)将经过消毒处理的所述种子接种到初始培养基上,进行启动培养;其中,所述启动培养包括:暗培养,然后,移植到光照条件下进行培养,培养温度为20±2℃,得到第一无菌苗;所述初始培养基为添加了0.1g/L肌醇、30g/L蔗糖、5g/L琼脂粉的MS培养基;
(4)截取所述第一无菌苗的中间节段,并将所述中间节段接种到分化培养基上,并在光照条件下进行分化培养,培养温度为20±2℃,得到带有腋芽的第二无菌苗;其中,所述分化培养基为添加了20ml/L 6-BA、30g/L蔗糖、6g/L琼脂粉、0.1g/L肌醇的1/2MS培养基;
(5)将所述第二无菌苗接种到生根培养基上,并在光照和无光照交替的条件培养,得到含有根系的船盔乌头植株;其中,
所述生根培养基为添加有30g/L蔗糖、5g/L琼脂粉、0.25g/L活性炭、0.1g/L肌醇的MS培养基;或者,
所述生根培养基为5ml/L 6-BA、30g/L蔗糖、6g/L琼脂粉、活性炭0.25g/L、0.1g/L肌醇的1/2MS培养基。
在一个实施例中,所述获取船盔乌头的种子包括:获取长1.5-2.2mm、宽0.6-1.1mm,表面不光滑、皱缩,且种脊边缘延生成翅状的种子。
在一个实施例中,所述对所述种子进行消毒处理包括:将所述种子洗净;使用70%乙醇水溶液对所述种子进行第一步消毒;然后,在无菌环境中,使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8-10min,再用无菌水清洗4-5次,沥干水分。
在该实施例的一个示例中,所述使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8-10min具体为:使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8min或10min。
在一个实施例中,所述第一无菌苗的中间节段为所述第一无菌苗中长度为2-3cm的节段。
在该实施例的一个示例中,所述启动培养的持续时间为54天;其中,暗培养14天,光照条件下培养40天。
在一个实施例中,在所述步骤(3)或步骤(4)中,光照条件包括光照强度为1000-1500Lx。
在一个实施例中,所述分化培养的持续时间为20天。
在一个实施例中,在所述步骤(5)中,所述光照和无光照交替的条件包括:每个光照周期为12小时,在光照周期中,培养温度为20±2℃,光照强度为1000-1500Lx;每个无光照周期为12小时,在无光照周期中,温度10℃±1℃。
第二方面,本发明实施例该提供了第一方面所述方法在生产船盔乌头中的应用。
本发明实施例提供的方案为一种实用、有效的育苗途径,可以实现船盔乌头的快速繁殖,缓解船盔乌头野生资源匮乏、用药资源紧缺的压力。
具体实施方式
下面在具体实施例中,对本说明书提供的方案进行举例描述。
船盔乌头(Aconitum naviculare(Brühl.)Stapf)又名船形乌头、“榜嘎”,其为毛茛科乌头属的矮小草本植物,一级濒危藏药材,多年生小草本,性味苦,寒,有小毒。船盔乌头生于高山碎石缝隙和高山草甸,其块根状如小象犬牙,叶翠绿,花螺状,有清热利湿的功效,能治胃炎,肝炎,肾炎,肠炎。其中,西藏地区藏药“榜嘎”的实际基原是船盔乌头的干燥全草或地上部分。据自治区藏药厂提供的资料,约30%的藏药组方中都有船盔乌头的组分。具体而言,含“榜嘎”的藏成药主要有安儿宁颗粒、大月晶丸、坐珠达西、流感丸、十三味榜嘎丸、十二味奇效汤散、八味獐牙菜、二十五味松石丸和亚玛众清制剂等。
2015年由西藏自治区科技厅组织的根据我区藏医药专家、植物学家、各企业等对我区濒危藏药材品种的选定进行收集和整理后,评选出西藏濒危藏药材品种,划分为三个保护等级,其中,船盔乌头列入一级濒危名录。
目前,船盔乌头的快繁技术研究尚属空白,本发明实施例提供的船盔乌头的组培快繁方法,为一种实用、有效的育苗途径,可以实现船盔乌头的快速繁殖,缓解船盔乌头野生资源匮乏、用药资源紧缺的压力。
接下来,在具体实施例中,介绍船盔乌头得组培快繁方法。
实施例1,外植体的选取及处理
选择船盔乌头的种子、茎段和叶片作为外植体。
船盔乌头干种子黑褐色,呈“扁金字塔”形,长1.5~2.2mm,宽0.6~1.1mm,厚可达0.8mm。种子表面不光滑,皱缩,种脊边缘延生成翅状。船盔乌头种子千粒重为(0.495±0.003)g,属于极小粒种子。船盔乌头的茎段下部无毛,上部疏被反曲而紧贴的短柔毛,为空心。首先用肥皂水将种子清洗干净,后用70%乙醇水溶液(V/V)对种子进行第一步消毒。最后在超净工作台上以0.1%HgCl2溶液浸泡种子,进行第二次消毒,其中,消毒时间梯度6-12min。第二步消毒后,再用无菌水清洗4-5次,沥干水分。
船盔乌头的叶片肾状五角形或肾形,长1-2厘米,宽1.4-3厘米,三裂近中部,中央裂片菱状倒梯形,侧裂片斜扇形,不等二裂近中部,表面疏被短柔毛,背面无毛;叶柄长2.5-14厘米,无毛,基部具不明显的鞘。茎生叶1-3枚,稀疏排列,具较短柄。选择较嫩的叶片,剪成两片,先用水清洗干净,再用70%乙醇水溶液(V/V)进行消毒,后用0.1%HgCl2溶液浸泡,设置消毒时间梯度2-8min。之后再用无菌水清洗4-5次,沥干水分。
船盔乌头的茎段呈圆柱形空心,取嫩枝上的茎段,用肥皂水进行清洗,再用70%乙醇水溶液(V/V)进行消毒,以0.1%HgCl2溶液浸泡,设置消毒时间梯度6-10min。之后,再用无菌水清洗4-5次,沥干水分。
实施例2,外植体的启动培养
将已消毒处理好的外植体接种至初始培养基上,初始培养基为MS+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5g/L,pH值5.8。灭菌条件为:压力0.15MPA,温度120℃,时间20min。其中,对于茎段和叶子而言,将其插置在初始培养基上,以完成接种。对于种子而言,将其均匀洒在初始培养基上,以完成接种。接种后暗培养14d后。三种外植体中只有0.1%HgCl2溶液消毒时间为8min和10min的种子萌发成功,萌发率分别能达到70%和90%,再移至培养室光照条件下培养20d,培养温度为20±2℃,光照强度为1000-1500Lx。即可长出小苗,再培养20d无菌小苗可长至约4cm高。其余外植体都未萌发成功。
实施例3,分化培养
将启动培养得到的无菌苗去除两头,剪切成2-3cm的中间节段,分别接接种到培养基A和培养基B当中。然后,在培养室的光照条件下培养至20d。得到在腋芽的茎段。其中,光照强度为1000-1500Lx。结果如表1所示,能观察到培养基B里的无菌苗存活率和长势都优于培养基A中的无菌苗。其中,培养基A的配方为:1/2MS+6-BA 10ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+肌醇0.1g/L,PH值5.8培养基。培养基B的配方为:1/2MS+6-BA 20ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+肌醇0.1g/L,PH值5.8。在西藏高原环境下,培养基A和培养基B的灭菌条件均为:压力0.15MPA,温度120℃,时间20min。
表1,不同分化培养基对比
Figure GDA0003560199490000051
实施例4,生根培养
将分化培养得到的无菌苗分别接种到培养基C、培养基D、培养基E和培养基F四种生根培养基上。
其中,培养基C的配方为:MS+蔗糖30g/L+琼脂粉5g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,PH值5.8。
培养基D的配方为:1/2MS+6-BA 5ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,pH值5.8。
培养基E的配方为:1/2MS+NAA 0.5ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,pH值5.8。
培养基F的配方为:1/2MS+IAA 0.5mL/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,pH值5.8。
在西藏高原环境下,上述培养基的灭菌条件均为:压力0.15MPA,温度120℃,时间20min。
接种时将带腋芽节段斜插在培养基上,接种后放在人工智能培养箱内进行培养。培养箱的环境设置白天、夜晚两个时段,白天12小时,温度20℃,光照强度1000-1500Lx;夜晚12小时,温度10℃,无光照,在此培养箱内培养20d左右可以发现有明显的根部粗壮现象,相比之下培养基C和培养基D的中的植株长势最好。具体可以如表2所示
表2,不同生根培养基对比
Figure GDA0003560199490000061
实施例5,结果与分析
综合以上实施例的实验结果,可得出如下结论,
5.1,船盔乌头的种子作为外植体比较方便消毒,更容易获得无菌材料
5.2培养基MS+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5g/L,pH值5.8有利益船盔乌头的种子的萌发,萌发率最高能达到90%;培养基1/2MS+6-BA 20ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+肌醇0.1g/L,PH5.8适合于船盔乌头初始无菌苗的分化,分化率为80%;培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂粉5g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,PH值5.8和1/2MS+6-BA 5ml/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L+活性炭0.25g/L+肌醇0.1g/L,pH值5.8,适合船盔乌头的生根培养,生根率分别能达到80%和85%。
本发明实施例提供的船盔乌头组培快繁方案,可以高效、快速的得到大量船盔乌头植株,从而为大规模培育和生产船盔乌头提供了支持。
以上所述的具体实施方式,对本申请的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本申请的具体实施方式而已,并不用于限定本申请的保护范围,凡在本申请的技术方案的基础之上,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包括在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种船盔乌头的组培快繁方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)获取船盔乌头的种子;
(2)对所述种子进行消毒处理;
(3)将经过消毒处理的所述种子接种到初始培养基上,进行启动培养;其中,所述启动培养包括:暗培养,然后,移植到光照条件下进行培养,培养温度为20±2℃,得到第一无菌苗;所述初始培养基为添加了0.1g/L肌醇、30g/L蔗糖、5g/L琼脂粉的MS培养基;
(4)截取所述第一无菌苗的中间节段,并将所述中间节段接种到分化培养基上,并在光照条件下进行分化培养,培养温度为20±2℃,得到带有腋芽的第二无菌苗;其中,所述分化培养基为添加了20ml/L 6-BA、30g/L蔗糖、6g/L琼脂粉、0.1g/L肌醇的1/2MS培养基;
(5)将所述第二无菌苗接种到生根培养基上,并在光照和无光照交替的条件培养,得到含有根系的船盔乌头植株;其中,
所述生根培养基为添加有30g/L蔗糖、5g/L琼脂粉、0.25g/L活性炭、0.1g/L肌醇的MS培养基;或者,
所述生根培养基为5ml/L 6-BA、30g/L蔗糖、6g/L琼脂粉、活性炭0.25g/L、0.1g/L肌醇的1/2MS培养基。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述获取船盔乌头的种子包括:
获取长1.5-2.2mm、宽0.6-1.1mm,表面不光滑、皱缩,且种脊边缘延生成翅状的种子。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对所述种子进行消毒处理包括:
将所述种子洗净;
使用70%乙醇水溶液对所述种子进行第一步消毒;
然后,在无菌环境中,使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8-10min,再用无菌水清洗4-5次,沥干水分。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8-10min具体为:使用0.1%HgCl2溶液浸泡所述种子8min或10min。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一无菌苗的中间节段为所述第一无菌苗中长度为2-3cm的节段。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述启动培养的持续时间为54天;其中,暗培养14天,光照条件下培养40天。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述步骤(3)或步骤(4)中,光照条件包括光照强度为1000-1500Lx。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述分化培养的持续时间为20天。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述步骤(5)中,所述光照和无光照交替的条件包括:
每个光照周期为12小时,在光照周期中,培养温度为20±2℃,光照强度为1000-1500Lx;
每个无光照周期为12小时,在无光照周期中,温度10℃±1℃。
10.权利要求1-9任一项所述的方法在生产船盔乌头中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000057690A2 (en) * 1999-03-25 2000-10-05 University Of Guelph Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants
CN106212275A (zh) * 2016-07-21 2016-12-14 西南科技大学 一种乌头附子种苗组织培养快繁再生方法
RU2631927C1 (ru) * 2016-10-24 2017-09-28 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" (ТГУ, НИ ТГУ) Способ получения каллусной культуры борца бородатого (Aconitum barbatum Patr. ex Pers.)
CN107535354A (zh) * 2016-06-23 2018-01-05 罗华 一种科学有效的川附子繁殖方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102392255B1 (ko) * 2020-06-30 2022-05-02 한국 한의학 연구원 이삭바꽃의 기내 배양용 배지 조성물 및 이를 이용한 이삭바꽃 육묘의 대량생산 방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000057690A2 (en) * 1999-03-25 2000-10-05 University Of Guelph Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants
CN107535354A (zh) * 2016-06-23 2018-01-05 罗华 一种科学有效的川附子繁殖方法
CN106212275A (zh) * 2016-07-21 2016-12-14 西南科技大学 一种乌头附子种苗组织培养快繁再生方法
RU2631927C1 (ru) * 2016-10-24 2017-09-28 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" (ТГУ, НИ ТГУ) Способ получения каллусной культуры борца бородатого (Aconitum barbatum Patr. ex Pers.)

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
In Vitro Propagation of Aconitum chasmanthum Stapf Ex Holmes: An Endemic and Critically Endangered Plant Species of the Western Himalaya;Shah Rafiq等;《Horticulturae》;20211217;第7卷;第1-12页 *
乌头属植物组织培养的研究进展;尹碧薇等;《中国中药杂志》;20200720;第45卷(第23期);第5645-5649页 *
濒危藏药材船盔乌头种子萌发特性研究;王立辉等;《现代农业科技》;20110810;第104、105、124页 *

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