CN113474470A - 来源于罗斯氏菌属细菌的纳米囊泡及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡及其用途。发明人已经通过实验证实了在从患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者获得的临床样品中的囊泡与正常个体相比显著减少，并且当施用从菌株中分离的囊泡时，由病原囊泡(例如来源于大肠杆菌的囊泡)引起的炎症性介质的分泌被显著抑制，且来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著抑制应激激素引起的脑神经细胞损伤，并且因此，根据本发明的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡可有效地用于开发诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的方法以及开发用于预防或治疗糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病的组合物。

Description

来源于罗斯氏菌属细菌的纳米囊泡及其用途

技术领域

本发明涉及来源于罗斯氏菌属(genus Rothia)细菌的纳米囊泡及其用途，更具体地，涉及使用来源于罗斯氏菌属细菌的纳米囊泡诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病、特应性皮炎等的方法，和一种用于预防、缓解或治疗糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病的组合物，其包含所述囊泡。

本申请要求2019年2月14日提交的韩国专利申请No.10-2019-0017064和2020年2月3日提交的韩国专利申请No.10-2020-0012637的优先权，并且这些申请中的说明书和附图中的所有公开的内容并入本申请。

背景技术

自21世纪初以来，在过去被认为是流行病的急性传染病已变得不那么重要，而由于人类与微生物群落之间的不和谐而导致的伴随免疫功能障碍的慢性炎症性疾病已经改变疾病模式，成为决定生活质量和人类寿命的主要疾病。作为21世纪的顽固性慢性病，癌症、心血管疾病、慢性肺部疾病、代谢性疾病和神经精神疾病是决定人类寿命和生活质量的重大疾病，并且成为公共卫生的一大挑战。顽固性慢性病的特征是慢性炎症并伴有致病因素引起的免疫功能异常。

众所周知，人体中共存的微生物数量已达到100万亿，是人体细胞数量的10倍，微生物基因数量是人体基因数量的100倍以上。微生物群或微生物组是指微生物群落，包括存在于给定栖息地中的细菌，古细菌和真核生物。

同时，我们体内共存的细菌和周围环境中存在的细菌会分泌纳米大小的囊泡，以便与其他细胞交换有关基因、低分子化合物、蛋白质等的信息。粘膜形成物理防御膜，尺寸为200纳米(nm)或更大的颗粒无法通过该物理防御膜，因此，共存于粘膜中的细菌不能通过粘膜，但来源于细菌的囊泡的大小为100纳米或更小并通过粘膜相对自由地穿过上皮细胞后被吸收到我们体内。由细菌局部分泌的来源于细菌的囊泡经粘膜上皮细胞吸收，从而引起局部炎症反应，而穿过上皮细胞的囊泡经淋巴管系统吸收，从而分布在各个器官中，并且免疫和炎症性反应在分布有囊泡的器官中受到调节。例如，来源于诸如大肠杆菌之类的致病性革兰氏阴性细菌的囊泡局部引起结肠炎，并且在被吸收到血管中时，通过血管内皮炎症反应促进全身性炎症反应和血液凝固，以及在被吸收到胰岛素作用肌细胞中时引起胰岛素耐受性和糖尿病等等。另一方面，来源于有益细菌的囊泡可通过控制由致病性囊泡引起的免疫功能障碍和代谢功能障碍来控制疾病。

作为对来源于细菌的囊泡等因子的免疫应答，以白介素(以下称IL)-17细胞因子的分泌为特征的Th17免疫应答发生，并且在暴露于来源于细菌的囊泡时分泌IL-6，从而诱导Th17免疫应答。由Th17免疫应答引起的炎症的特征在于嗜中性粒细胞浸润，并且在发生炎症的过程中，从炎症细胞(如中性白细胞和巨噬细胞)分泌的肿瘤坏死因子-α(以下称为TNF-α)对于炎症和癌症的发生起着重要的作用。

脑源性神经营养因子(BDNF)是大脑中由BDNF基因产生的一种蛋白质，并且是一组神经营养因子中的一种，其作为生长因子的一部分。该因子与碱性神经生长因子有关，已知在抑郁症、痴呆症、阿尔茨海默病、自闭症等中该因子的表达降低。

同时，罗斯氏属细菌是共存于口腔和呼吸器官中的厌氧革兰氏阳性菌，被称为一般不会引起疾病的细菌。然而，迄今为止，尚未报道囊泡由罗斯氏属细菌从细胞外分泌，特别是其在糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎等疑难杂症的诊断和治疗中其应用的案例也未见报道。

因此，在本发明中，证实了与正常人相比，在糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎患者的临床样品中，来自罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少，从而诊断疾病。此外，通过从属于罗斯氏菌属的污水沟罗斯氏菌(Rothiaamarae)中分离囊泡并评价其治疗效果，证实它们可以用作预防或治疗糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病、炎症性疾病等的组合物。

发明内容

[技术问题]

作为早期研究以解决上述常规问题的结果，发明人证实，通过宏基因组分析，与正常个体相比，在从来源于患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者获得的样品中，来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的含量显著降低。此外，当巨噬细胞用从属于罗斯氏菌属的污水沟罗斯氏菌中分离的囊泡处理时，证实了由病原性囊泡引起的作为炎症介质的IL-6和TNF-α的分泌受到显著抑制，抑制由应激激素引起的脑神经细胞损伤的BDNF表达显著增加，因此，在此基础上完成了本发明。

因此，本发明的一个目的是提供一种为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的诊断提供信息的方法。

此外，本发明的另一个目的是提供一种用于预防、缓解或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的来自于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

然而，本发明要实现的技术问题不限于上述问题，并且本领域技术人员根据以下描述可以清楚地理解未提及的其他问题。

[技术方案]

为了实现上述本发明的目的，本发明提供了一种提供用于诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的信息的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从分离自正常个体样品和受试者样品的囊泡中提取DNA；

(b)使用基于在16S rDNA中存在的基因序列制备的成对的引物对所提取的所述DNA进行PCR(聚合酶链式反应)以获得每一种PCR产品；以及

(c)通过对所述PCR产物的定量分析将其中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量低于所述正常个体样品的情况分类为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎。

此外，本发明提供了一种诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从分离自正常个体样品和受试者样品的囊泡中提取DNA；

(b)使用基于在16S rDNA中存在的基因序列制备的成对的引物对所提取的所述DNA进行PCR(聚合酶链反应)以获得每种PCR产物；以及

(c)通过对所述PCR产物的定量分析将其中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量低于所述正常个体样品的情况确定为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎。

作为本发明的一实施方案，步骤(a)中的样本可以是血液或尿液。

作为本发明的另一实施方案，步骤(b)中的引物对可以是SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2的引物。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组的一种或多种疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

此外，本发明提供了一种用于预防或缓解选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的食品组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

此外，本发明提供了一种用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的吸入剂组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

此外，本发明提供了一种预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的方法，所述方法包括将包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物施用给受试者的步骤。

此外，本发明提供了包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物的用途，其用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

此外，本发明提供了来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡用于制备药物的用途，所述药物用于治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

作为本发明的一实施方案，所述心血管疾病可以为选自由心房颤动、心肌病、心肌梗塞、高血压、缺血性心脏病、冠状动脉疾病、心绞痛、动脉粥样硬化、动脉硬化和心律失常组成的群组中的一种或多种。

作为本发明的另一实施方案，所述肝脏疾病可以为选自由肝癌、肝硬化、肝炎、肝硬化和脂肪肝组成的群组中的一种或多种。

作为本发明的另一实施方案，所述脑神经疾病可以为选自由抑郁症、强迫症、精神分裂症、痴呆、阿尔茨海默病、癫痫、自闭症和帕金森病组成的群组中的一种或多种。

作为本发明的另一实施方案，所述炎症性疾病可以为选自由牙龈炎、牙周炎、胃炎、炎症性肠炎、结肠炎、特应性皮炎、痤疮、脱发、银屑病、鼻炎、鼻息肉、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、退行性关节炎和类风湿性关节炎组成的群组中的一种或多种。

此外，本发明提供一种用于预防或缓解炎症性皮肤病的化妆品组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

作为本发明的一实施方案，所述炎症性皮肤病可以是选自由特应性皮炎、痤疮、脱发和牛皮癣组成的群组中的一种或多种。

作为本发明的一实施方案，囊泡的平均直径可以为10至200nm。

作为本发明的另一实施方案，囊泡可以由罗斯氏菌属细菌天然或人工分泌。

作为本发明的另一个实施方案，来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡可以从污水沟罗斯氏菌分泌。

[有益效果]

发明人证实肠道细菌不会通过上皮细胞吸收到体内，但是来源于细菌的囊泡会被吸收，全身分布，然后通过肾脏、肝脏和肺部排泄出体内，以及通过对来源于在患者的血液中存在的细菌的囊泡进行宏基因组分析，也证实了与正常个体相比，来源于在患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者的血液或尿液中存在的罗斯氏菌属的细菌的囊泡明显减少。此外，当炎症性细胞与从作为罗斯氏菌属的一种细菌物种的污水沟罗斯氏菌体外培养和分离的囊泡一起在体外施用时，观察到由致病性囊泡引起的炎症介质的分泌受到显著抑制。此外，由于证实了被应激激素抑制的神经细胞的BDNF表达被囊泡显著恢复，因此根据本发明的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡有望被有效地使用在诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的方法中，以及使用在用于预防、缓解或治疗糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病的食品、吸入剂或药物组合物中。

附图说明

图1A是在对小鼠口服施用细菌和来源于细菌的囊泡(EV)之后按时间捕获细菌和来源于细菌的囊泡(EV)的分布模式的一系列照片，并且图1B是通过在口服施用细菌和囊泡后12小时收集血液、肾脏、肝脏和各种器官来评估细菌和囊泡的体内分布模式的结果。

图2是在对糖尿病患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图3是在对心房颤动患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图4是在对心肌病患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图5是在对肝癌患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图6是在对肝硬化患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布的结果。

图7是在对痴呆患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图8是在对抑郁症患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图9是在对帕金森病患者和正常个体的尿液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图10是在对特应性皮炎患者和正常个体的血液中存在的来源于细菌的囊泡进行了宏基因组分析之后，比较来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的分布的结果。

图11A是通过在处理作为致病性囊泡的大肠杆菌囊泡(E.coli EV)之前对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡进行预处理来评价大肠杆菌囊泡对作为炎症介质的IL-6分泌的影响而获得的结果，以评估来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的抗炎和免疫调节作用(NC：阴性对照；PC：阳性对照，大肠杆菌EV1.0μg/ml；LP_1.0：植物乳杆菌EV 1.0μg/ml；RAM101：污水沟罗斯氏菌EV)。

图11B是通过在处理作为致病性囊泡的大肠杆菌囊泡(E.coli EV)之前来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡进行预处理来评价大肠杆菌囊泡对作为炎症介质的TNF-α分泌的影响而获得的结果，以评估来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的抗炎和免疫调节作用(NC：阴性对照；PC：阳性对照，大肠杆菌EV 1.0μg/ml；LP_1.0：植物乳杆菌EV 1.0μg/ml；RAM101:污水沟罗斯氏菌(Rothia amarae)EV)。

图12显示了通过同时用来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡处理已经用作为应激激素的肾上腺皮质激素(GC)处理过的神经细胞来评估对由神经细胞进行的脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响的结果，以评估来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的神经细胞保护作用(EV：污水沟罗斯氏菌细胞外囊泡)。

具体实施方式

本发明涉及来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡及其用途。

发明人证实，通过宏基因组分析，与正常个体相比，在患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者的样品中，来源于罗斯氏菌属的细菌的囊泡的含量显著降低，并且在此基础上完成了本发明。

因此，本发明如上所述，本发明提供了一种提供用于诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的信息的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从分离自正常个体样品和受试者样品的囊泡中提取DNA；

(b)使用基于在16S rDNA中存在的基因序列制备的成对的引物对所提取的所述DNA进行PCR以获得每种PCR产物；以及

(c)通过对所述PCR产物的定量分析将其中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量低于所述正常个体样品的情况分类为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎。

如本文所使用的，术语“诊断”是指广义上在所有方面确定患者的疾病状况。确定的内容是疾病的实体、病因、发病机理、严重程度、疾病的详细方面、是否存在并发症、预后等。本发明中的诊断是指确定糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和/或特应性皮炎是否发生，疾病的程度等。

如本文所使用的，术语“纳米囊泡”或“囊泡”是指由从各种细菌分泌的纳米尺寸的膜组成的结构。来源于革兰氏阴性细菌的囊泡或外膜囊泡(OMV)具有内毒素(脂多糖)、毒性蛋白、以及细菌DNA和RNA，以及来源于革兰氏阳性细菌的囊泡除了蛋白质和核酸之外还具有肽聚糖和脂磷壁酸，它们是细菌的细胞壁组分。在本发明中，纳米囊泡或囊泡是由罗斯氏菌属细菌天然分泌的或人工产生的，呈球形，平均直径为10至200nm。

如本文所使用的，术语“宏基因组”还指微生物组，并且是指在诸如土壤和动物肠等独立区域中的包括所有病毒、细菌、真菌等的全部基因组，并且通常用作基因组的概念，解释通过使用序列分析仪一次鉴定大量微生物以分析未培养的微生物(uncultivatedmicroorganisms)。特别地，宏基因组不是指一种物种的基因组，而是指一种混合基因组，作为一种环境单位的所有物种的基因组。当在组学生物学的发展过程中定义一个物种时，该宏基因组就是从形成完整物种的观点衍生的术语，它是由各种彼此相互作用的物种以及一种功能上存在的物种形成的。从技术上讲，宏基因组是技术的目标，该技术通过使用快速序列分析方法，分析所有DNA和RNA(不考虑物种)来识别一个环境中的所有物种，并研究相互作用和代谢。

在本发明中，来源于患者的样品可以是血液或尿液，但不受限于此。

在本发明中，步骤(b)中的引物对可以是SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的引物，但不受限于此。

本发明的另一方面提供了用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

在本发明中，该组合物包括药物组合物和吸入剂组合物。

此外，本发明提供了一种预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的方法，所述方法包括将包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物施用给受试者的步骤。

此外，本发明提供了包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物的用途，其用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

此外，本发明提供了来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡用于制备药物的用途，所述药物用于治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

如本文所使用的术语“预防”是指通过施用根据本发明的组合物来抑制糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病、炎症性疾病或类似疾病或者延迟其发作的所有行为。

如本文所使用的，术语“治疗”是指通过施用根据本发明的组合物来减轻或有益地改变糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病、炎症性疾病或类似疾病的症状的所有行为。

如本文所使用的，术语“缓解”是指通过施用根据本发明的组合物减少与糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病、炎症性疾病或类似疾病相关的参数(例如症状的程度)的所有行为。

本文所用的术语“受试者”是指需要治疗疾病的靶标，并且更具体地，哺乳动物，例如人或非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马、牛等。

本文使用的术语“施用”是指通过任何合适的方法向受试者提供本发明的组合物。

本文所用的术语“心血管疾病”是发生在心脏和大动脉中的疾病的总称，在本发明中，心血管疾病可以为选自由心房颤动、心肌病、心肌梗塞、高血压、缺血性心脏病、冠状动脉疾病、心绞痛、动脉粥样硬化、动脉硬化和心律失常组成的群组中的一种或多种，但本发明不限于此。

本文所用的术语“肝脏疾病”是肝功能受损的总称，在本发明中，肝脏疾病可以为选自由肝癌、肝硬化、肝炎、肝硬化和脂肪肝组成的群组中的一种或多种，但不限于此。

本文所用的术语“脑神经疾病”是由脑神经细胞问题引起的疾病的总称，在本发明中，所述脑神经疾病可以为选自由抑郁症、强迫症、精神分裂症、痴呆、阿尔茨海默病、癫痫、自闭症和帕金森病组成的群组中的一种或多种，但本发明不限于此。

本文所用的术语“炎症性疾病”是指通过由构成免疫系统的体液介质的直接反应或局部或全身效应系统的刺激发生的一系列生物反应引起的疾病，并且在本发明中，所述炎症性疾病可以为选自由牙龈炎、牙周炎、胃炎、炎症性肠炎、结肠炎、特应性皮炎、痤疮、脱发、银屑病、鼻炎、鼻息肉、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、退行性关节炎和类风湿性关节炎组成的群组中的一种或多种。

可通过使用选自离心、超高速离心、高压处理、挤出、超声处理、细胞裂解、均质化、冷冻-解冻、电穿孔、机械分解、化学处理、过滤器过滤、凝胶过滤色谱、自由流动电泳和毛细管电泳的一种或多种方法，从包含罗斯氏菌属细菌的培养液中分离囊泡。此外，可以进一步包括诸如用于去除杂质的洗涤和对所获得的囊泡的浓缩之类的过程。

在本发明的一个实施方案中，通过对小鼠口服施用细菌和来源于细菌的囊泡并观察该细菌和囊泡的体内吸收、分布和排泄模式，证实了，尽管细菌不是通过肠粘膜吸收的，但是来源于细菌的囊泡在施用后5分钟内被吸收并全身分布，且通过肾脏、肝脏等排泄(参见实施例1)。

在本发明的另一实施方案中，通过使用从正常个体的血液或尿液中分离的囊泡进行细菌宏基因组分析，所述正常个体的年龄和性别与患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者匹配。结果证实，与正常个体的样品相比，在患有糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病和特应性皮炎的患者的临床样品中，来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见实施例3至11)。

在本发明的又一实施方案中，评估了培养的污水沟罗斯氏菌菌株分泌的囊泡是否表现出免疫调节和抗炎作用，并作为通过用不同浓度的来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡处理巨噬细胞，然后用作为炎症性疾病的致病因子的来源于大肠杆菌的囊泡处理巨噬细胞来评估炎症介质分泌的结果，证实了由来源于大肠杆菌的囊泡引起的IL-6和TNF-α的分泌被来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡有效抑制(参见实施例13)。

在本发明的又一实施方案中，评估了来源于污水沟罗斯氏菌株的囊泡的神经细胞保护作用，并且作为通过同时用来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡处理已经用用刺激神经细胞的肾上腺皮质激素处理过的神经细胞来评估脑源性神经营养因子(BDNF)表达的结果，证实了来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡有效增加BDNF的表达，BDNF是防止神经细胞损伤的介质(参见实施例14)

本发明的组合物中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量可以根据疾病的症状、症状的发展程度和患者的病情进行适当控制，例如，基于组合物的总重量，囊泡的含量可以为0.0001至99.9重量％，或0.001至50重量％，但本发明不限于此。含量比是基于除去了溶剂的干重确定的值。

根据本发明的药物组合物还可包括通常用于制备药物组合物的合适的载体、赋形剂和稀释剂。赋形剂可以是例如选自由稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、吸附剂、湿润剂、薄膜包衣材料和控释添加剂组成的群组中的一种或多种。

根据本发明的药物组合物可以通过按照常用方法配制成例如以下形式来使用：散剂、颗粒剂、缓释型颗粒剂、肠溶颗粒剂、液体剂、滴眼剂、酏剂、乳剂、混悬剂、烈酒、锭剂、芳香水、柠檬水、片剂、缓释片、肠溶片、舌下片、硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、肠溶胶囊、丸剂、酊剂、软提取物、干提取物、流体提取物、注射剂、胶囊、灌注液或外用制剂，例如膏药、洗剂、糊剂、喷雾剂、吸入剂、贴剂、无菌注射液或气雾剂。外用制剂可以具有诸如霜剂、凝胶剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、搽剂、糊膏或糊剂等制剂。

作为可包含在根据本发明的药物组合物中的载体、赋形剂和稀释剂，可以使用乳糖、右旋糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。

对于制剂，使用常用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、增稠剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂。

作为根据本发明的片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、锭剂的添加剂，可以使用赋形剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、小麦淀粉、乳糖、白糖、葡萄糖、果糖、D-甘露醇、沉淀碳酸钙、合成硅酸铝、磷酸氢钙、硫酸钙、氯化钠、碳酸氢钠、纯化羊毛脂、微晶纤维素、糊精、海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、高岭土、尿素、胶体硅胶、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素1928、2208、2906、2910、丙二醇、酪蛋白、乳酸钙和

以及粘合剂，例如明胶、阿拉伯胶、乙醇、琼脂粉、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、葡萄糖、纯净水、酪蛋白酸钠、甘油、硬脂酸、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素钠、甲基纤维素、微晶纤维素、糊精、羟纤维素、羟丙基淀粉、羟甲基纤维素、纯化虫胶、淀粉、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮；并且可以使用崩解剂，如羟丙基甲基纤维素、玉米淀粉、琼脂粉、甲基纤维素、膨润土、羟丙基淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、羧甲基纤维素钙、柠檬酸钙、十二烷基硫酸钠、硅酸酐、1-羟丙基纤维素、葡聚糖、离子交换树脂、聚醋酸乙烯酯、甲醛处理的酪蛋白和明胶、海藻酸、直链淀粉、瓜尔胶、碳酸氢钠、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、凝胶淀粉、阿拉伯胶、支链淀粉、果胶、聚磷酸钠、乙基纤维素、白糖、硅酸铝镁、二山梨糖醇溶液和轻质无水硅酸；以及润滑剂，例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、氢化植物油、滑石粉、石松粉、高岭土、凡士林、硬脂酸钠、可可脂、水杨酸钠、水杨酸镁、聚乙二醇4000、6000、液体石蜡、氢化豆油(路博(Lubri)蜡)、硬脂酸铝、硬脂酸锌、十二烷基硫酸钠、氧化镁、聚乙二醇、合成硅酸铝、硅酸酐、高级脂肪酸、高级醇、硅油、石蜡油、聚乙二醇脂肪酸醚、淀粉、氯化钠、醋酸钠、油酸钠、dl-亮氨酸和轻质无水硅酸。

作为根据本发明的液体的添加剂，可以使用水、稀盐酸、稀硫酸、柠檬酸钠、单硬脂酸蔗糖、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯(双酯)、聚氧乙烯单烷基醚、羊毛脂醚、羊毛脂酯、乙酸、盐酸、氨水、碳酸铵、氢氧化钾、氢氧化钠、醇溶蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素和羧甲基纤维素钠。

在根据本发明的糖浆中，可以使用白糖溶液、其他糖或甜味剂等，并且根据需要，可以使用香料、着色剂、防腐剂、稳定剂、悬浮剂、乳化剂、粘稠剂等。

在根据本发明的乳液中，可以使用纯净水，并且根据需要可以使用乳化剂、防腐剂、稳定剂、香料等。

在根据本发明的悬浮液中，可以使用悬浮剂，例如阿拉伯胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、海藻酸钠、羟丙基甲基纤维素1828、2906、2910等，并且根据需要，还可以使用表面活性剂、防腐剂、稳定剂、着色剂和香料。

根据本发明的注射剂可以包括：溶剂，例如注射用蒸馏水、0.9％氯化钠溶液、林格氏溶液、葡萄糖溶液、葡萄糖+氯化钠溶液、PEG、乳酸林格氏溶液、乙醇、丙二醇、非-挥发油-芝麻油、棉籽油、花生油、豆油、玉米油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、以及苯甲酸苯；助溶剂，例如苯甲酸钠、水杨酸钠、乙酸钠、尿素、氨基甲酸乙酯(urethane)、单乙基乙酰胺、丁唑烷、丙二醇、吐温系列、烟酸酰胺、六胺、以及二甲基乙酰胺；缓冲剂，例如弱酸及其盐(乙酸和乙酸钠)、弱碱及其盐(氨和乙酸铵)、有机化合物、蛋白质、白蛋白、蛋白胨和树胶；等渗剂，例如氯化钠；稳定剂，例如亚硫酸氢钠(NaHSO₃)、二氧化碳气体、焦亚硫酸钠(Na₂S₂O₃)、亚硫酸钠(Na₂SO₃)、氮气(N₂)、乙二胺四乙酸等；硫酸化剂，例如0.1％硫化氢钠、甲醛次硫酸氢钠、硫脲、乙二胺四乙酸二钠、以及丙酮亚硫酸氢钠；止痛剂，例如苯甲醇、氯丁醇、盐酸普鲁卡因、葡萄糖、以及葡萄糖酸钙；以及悬浮剂，例如CMC钠、海藻酸钠、吐温80、单硬脂酸铝。

在根据本发明的栓剂中，可以使用基质，例如可可脂、羊毛脂、合成脂肪酸酯(Witepsol)、聚乙二醇、甘油明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸和油酸的混合物、Subanal、棉籽油、花生油、棕榈油、可可脂+胆固醇、卵磷脂、兰尼(lanette)蜡、单硬脂酸甘油酯、吐温或斯盘(Tween or span)、伊姆豪森(imhausen)、monolan(单硬脂酸丙二醇酯)、甘油、混合脂肪酸甘油酯(Adeps solidus)、buytyrum Tego-G、cebes Pharma 16、六内酯碱95、cotomar、Hydrokote SP、S-70-XXA,S-70-XX75(S-70-XX95)、Hydrokote 25、Hydrokote711、idropostal、massa estrarium(A,AS,B,C,D,E,I,T)、masa-MF、masupol、masupol-15、neosuppostal-N、paramount-B、supposiro OSI、OSIX、A、B、C、D、H、L，栓剂基质IV型AB、B、A、BC、BBG、E、BGF、C、D、299、suppostal N、Es、Wecoby W、R、S、M、Fs和Tegester甘油三酯物质(TG-95,MA,57)。

用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且此类固体制剂通过将组合物与至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)混合而配制。除了简单的赋形剂外，还使用硬脂酸镁和滑石粉等润滑剂。

用于口服给药的液体制剂的实例包括悬浮液、内服液体、乳剂、糖浆剂等，并且这些液体制剂除了简单的常用稀释剂(如水和液体石蜡)之外还可以包括各种类型的赋形剂，例如，润湿剂、甜味剂、香料、防腐剂等。肠胃外给药制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂。非水溶剂和悬浮液的非限制性实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射酯(例如油酸乙酯)。

根据本发明的药物组合物以药学有效量施用。在本发明中，药学有效量是指足以以适用于医疗的合理利益/风险比治疗疾病的量，并且有效剂量水平可根据包括患者的疾病类型、疾病的严重程度、药物活性、对药物的敏感性、施用时间、施用途径、排泄率、治疗期和同时使用的药物的因素，以及其他医学领域众所周知的因素确定。

根据本发明的组合物可以作为单独的治疗剂施用或与其他治疗剂组合施用，可以与相关技术中的治疗剂顺序或同时施用，并且可以单剂量或多剂量施用。考虑到所有上述因素，重要的是以可以在没有任何副作用的情况下获得最大效果的最小量施用组合物，这可以由本领域普通技术人员容易地确定。

本发明的药物组合物可以通过各种途径施用于个体。可以预测所有施用方法，并且可以通过例如口服施用、皮下注射、腹腔施用、静脉注射、肌肉注射、鞘内(脊髓周围空间)注射、舌下施用、经口腔粘膜施用、直肠内插入、阴道内插入、眼内施用、耳内施用、鼻内给药、吸入、经口或鼻喷洒、透皮施用、经皮给药等施用药物组合物。

本发明的药物组合物根据作为活性成分的药物的类型，以及各种相关因素，例如所治疗的疾病、施用途径、患者的年龄、性别和体重、以及疾病的严重程度来确定。

本发明的吸入剂组合物不仅可以包含来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡，还可以包含吸入剂组合物中常用的成分，例如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素和调味剂等常用辅料以及载体。

本发明的另一方面提供了用于预防或缓解选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的食品组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

本发明的食品组合物包括保健功能食品组合物。

当本发明的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡用作食品添加剂时，来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡可以单独添加或与不同的食品或食品成分组合添加，或者可以按照常规方法适当地使用。活性成分的混合量可以根据其使用目的(用于预防、保健或治疗)适当地确定。通常，当制备食品或饮料时，本发明的源自罗斯氏菌属细菌的囊泡的加入量为原料的15重量％以下，优选为10重量％以下。但是，在以健康卫生或健康控制为目的而长期摄取的情况下，该量可以低于上述范围，并且由于安全性方面没有问题，活性成分可以以超出上述范围的量使用。

对食物的种类没有特别限制。可以添加材料的食物的示例可以包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果、小吃、糖果、比萨、拉面、其他面条、口香糖、包括冰淇淋在内的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮料、酒精饮料和维生素复合物，并且一般意义上包括所有的健康功能性食品。

根据本发明的健康饮料组合物可以包含多种调味剂或天然碳水化合物作为附加成分，如常规饮料。上述天然碳水化合物包括单糖，例如葡萄糖和果糖，二糖，如麦芽糖和蔗糖，多糖，如糊精和环糊精，以及糖醇，如木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇。作为甜味剂，可以使用例如索马甜和甜菊提取物等天然甜味剂，以及例如糖精和阿斯巴甜等合成甜味剂。天然碳水化合物的比例通常为每100mL本发明组合物约0.01至0.20g、或0.04至0.10g。

此外，本发明的组合物可含有各种营养素、维生素、电解质、调味剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇或用于苏打水的碳化剂。除此之外，本发明的组合物可以含有用于生产天然果汁、果汁饮料和植物饮料的果浆。这些成分可以单独使用或组合使用。添加剂的比例一般基于100重量份的本发明组合物在0.01-0.20重量份范围内选择，但不是很重要。

本发明的另一方面提供了一种用于预防或减轻炎症性皮肤病的化妆品组合物，其包含源自罗斯氏菌属细菌的囊泡作为活性成分。

在本发明中，炎症性皮肤病可以是选自特应性皮炎、痤疮、脱发和牛皮癣中的一种或多种，但不限于此。

用于根据本发明的化妆品组合物的制剂可包括润肤露、皮肤柔软剂、爽肤水、收敛剂、洗液、乳液、保湿乳液、滋养乳液、按摩霜、滋养霜、喷雾、保湿霜、护手霜、润手乳液、粉底、香精、滋养香精、面膜、肥皂、清洁泡沫、清洁乳液、清洁霜、清洁油、清洁膏、润肤露或身体清洁剂。

本发明的化妆品组合物还可包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、聚合物肽、聚合物多糖和鞘脂的组合物。

水溶性维生素可以是可与化妆品混合的任何物质，但其实例包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、吡哆醇、盐酸吡哆醇、维生素B12、泛酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、维生素C、维生素H等，并且其盐(硫胺素盐酸盐、抗坏血酸钠等)或其衍生物(抗坏血酸-2-磷酸钠、抗坏血酸-2-磷酸镁等)也被包含在可用于本发明的水溶性维生素中。这些水溶性维生素可以通过常规方法获得，所述常规方法例如微生物转化、从微生物培养物中纯化、酶法或化学合成法。

油溶性维生素可以是可与化妆品混合的任何物质，但其实例包括维生素A、胡萝卜素、维生素D2、维生素D3、维生素E(d1-α-生育酚、d-α-生育酚)等，及其衍生物(例如，抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、d1-α-生育酚乙酸酯、d1-α-生育酚烟酸酯、维生素E、DL-泛醇、D-泛醇、泛酰乙醚)也可包括在本发明中使用的油溶性维生素中。这些油溶性维生素可通过常规方法获得，该常规方法例如微生物转化、从微生物培养物中纯化、或酶促或化学合成。

聚合物肽可以是可与化妆品共混的任何物质，但其实例可以包括胶原蛋白、水解胶原蛋白、明胶、弹性蛋白、水解弹性蛋白和角蛋白。聚合物肽可以通过例如从微生物培养物的纯化、酶法、化学合成法等任何常规方法纯化并获得，或者可以一般通过从猪、牛等的真皮等和蚕的丝纤维之类的天然物质中纯化来使用。

聚合多糖可以是可与化妆品混合的任何物质，其实例可以包括羟乙基纤维素、黄原胶、透明质酸钠和硫酸软骨素或其盐(钠盐)。例如，硫酸软骨素或其盐通常可以从哺乳动物或鱼类中纯化并使用。

鞘脂可以是任何可与化妆品共混的物质，其实例可包括神经酰胺、植物鞘氨醇和鞘糖脂。鞘脂可以通过常规方法从哺乳动物、鱼类、贝类、酵母或植物中纯化，或者可以通过化学合成方法获得。

根据需要，本发明的化妆品组合物可以包括与上述必需成分一起混合在常规化妆品中的其他成分。

要混合的附加成分的实例可以包括脂质成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机和无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、消毒剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、酒精、色素、香料、血液循环促进剂、清凉剂、止汗剂和纯净水。

脂质组分可以包括例如酯脂质、烃脂质、硅酮脂质、氟脂质、动物脂肪、植物油等。

酯脂质可以包括，例如，三-2-乙基己酸甘油酯、2-乙基己酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸乙酯、棕榈酸辛酯、异硬脂酸异十六烷基酯、硬脂酸丁酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异十六烷基酯、肉豆蔻酸异硬脂酯、棕榈酸异硬脂酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、异硬脂酸异十六烷基酯、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯、新戊酸异烷基酯、三(辛基、癸酸)甘油酯、三羟甲基丙烷(trimethylolpropane)三-2-乙基己酸酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、季戊四醇四-2-乙基己酸酯、十六烷基辛酸酯、月桂酸癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸十六烷基酯、硬脂酸硬脂酸酯、油酸癸酯、十六烷基蓖麻油酸酯、月桂酸异硬脂酸酯、肉豆蔻酸异十三烷基酯、棕榈酸异十六烷基酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异十六烷基酯、油酸异癸酯、油酸辛基十二烷基酯、亚油酸辛基十二烷基酯、异硬脂酸异丙酯、2-乙基己酸鲸蜡硬脂酯、2-乙基己酸硬脂基酯、异硬脂酸己酯、乙二醇二辛酸丙二醇酯、乙二醇二油酸酯、丙二醇二癸酸酯、丙二醇二(辛酸酯、癸酸酯)、丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二辛酸酯、新戊二醇二辛酸酯、三辛酸甘油酯、甘油三十一酸酯(glyceryl triundecylate)、甘油三异棕榈酸酯、甘油三异硬脂酸酯、辛基十二烷基新戊酸酯、辛酸异硬脂酯、异壬酸辛酯、新癸酸己基癸酯、新癸酸辛基十二烷酯、异硬脂酸异十六烷基酯、异硬脂酸异硬脂酯、异硬脂酸辛基癸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、柠檬酸三异鲸蜡酯、柠檬酸三异烷基酯、柠檬酸三异辛酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、乳酸鲸蜡酯、乳酸辛基癸酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰三乙酯、柠檬酸乙酰三丁酯、柠檬酸三辛酯、苹果酸二异硬脂酯、羟基硬脂酸-2-乙基己酯、琥珀酸二-2-乙基己酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、癸二酸二辛酯、硬脂酸胆甾醇酯、胆固醇异硬脂酸酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、胆固醇油酸酯、二氢胆固醇油酸酯、植物甾醇异硬脂酸酯、植物甾醇油酸酯、异十六烷基-12-硬脂酰羟基硬脂酸酯、硬脂酰-12-硬脂酰羟基硬脂酸酯、异硬脂酰-12-硬脂酰羟基硬脂酸酯等等。

烃类脂质可包括例如角鲨烯、液体石蜡、α-烯烃低聚物、异链烷烃、地蜡、石蜡、液体异链烷烃、聚丁烯、微晶蜡、凡士林等。

硅酮脂质可以包括例如聚甲基硅、甲基苯基硅、甲基环聚硅氧烷、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基环硅氧烷、二甲基硅氧烷/甲基十六烷氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷/甲基硬脂氧基硅氧烷共聚物、烷基改性硅油、氨基改性硅油等。

氟脂质可包括全氟聚醚等。

动物油或植物油可包括鳄梨油、杏仁油、橄榄油、芝麻油、米糠油、红花油、大豆油、玉米油、菜花油、杏仁油、棕榈仁油、棕榈油、蓖麻油、葵花籽油、葡萄籽油、棉籽油、椰子油、牛油果油、小麦胚芽油、大米胚芽油、乳木果油、月见草油、澳洲坚果油、草甸泡沫籽油、蛋黄油、牛脂、大麻籽油、貂油、橙皮油、荷荷巴油、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、液体羊毛脂、脱水蓖麻油等。

湿润剂可包括水溶性低分子湿润剂、油溶性分子湿润剂、水溶性聚合物、油溶性聚合物等。

水溶性低分子保湿剂可包括丝氨酸、谷氨酰胺、山梨糖醇、甘露醇、吡咯烷酮羧酸钠、甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、乙二醇、聚乙二醇B(聚合度：n＝2或更高)、聚丙二醇(聚合度：n＝2或更高)、聚甘油B(聚合度：n＝2或更高)、乳酸、乳酸盐等。

油溶性低分子保湿剂可包括胆固醇、胆固醇酯等。

水溶性聚合物可包括羧乙烯基聚合物、聚天冬酰胺酸盐、黄蓍胶、黄原胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、水溶性甲壳质、壳聚糖、糊精等。

油溶性聚合物可包括，例如，聚乙烯吡咯烷酮/二十碳烯(eicosen)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮/十六烯共聚物、硝基纤维素、糊精脂肪酸酯、有机硅聚合物等。

润肤剂可包括，例如，长链胆固醇酯酰基谷氨酸酯、羟基硬脂酸胆固醇酯、12-羟基硬脂酸、硬脂酸、松香酸、羊毛脂脂肪酸胆固醇酯等。

表面活性剂可以包括例如非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂等。

非离子表面活性剂可以包括自乳化型单硬脂酸甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯(POE)脱水山梨糖醇脂肪酸酯、POE山梨糖醇脂肪酸酯、POE甘油脂肪酸酯、POE烷基醚、POE脂肪酸酯、POE脱水蓖麻油、POE蓖麻油、聚氧乙烯/聚氧丙烯(POE/POP)共聚物、POE/POP烷基醚、聚醚改性有机硅、月桂酸链烷醇酰胺、氧化烷基胺、水合大豆磷脂等。

阴离子表面活性剂可包括脂肪酸皂、α-酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基烯丙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、POE烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、烷基磷酸盐、POE烷基磷酸盐、烷基酰胺磷酸盐、烷酰基烷基牛磺酸盐、N-酰基氨基酸盐、POE烷基醚羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸钠、酰化水解胶原肽盐、全氟烷基酯磷酸酯等。

阳离子表面活性剂可以包括，例如，烷基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、硬脂基芳基二甲基苄基氯化铵、山嵛基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、二乙基氨基乙基酰胺硬脂酸铵盐、二甲氨基丙基酰胺硬脂酸酯、羊毛脂衍生物的季铵盐等等。

两性表面活性剂可包括羧基甜菜碱、酰胺甜菜碱、磺基甜菜碱、羟基磺基甜菜碱、酰胺磺基甜菜碱、磷酸甜菜碱、氨基羧酸盐、咪唑啉衍生物、基于酰胺胺的两性表面活性剂等。

有机和无机颜料可包括：无机颜料，例如硅酸、无水硅酸、硅酸镁、滑石、绢云母、云母、高岭土、三氧化二铁(bengala)、粘土、膨润土、二氧化钛包覆的云母、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、氧化钛、氧化铝、硫酸钙、硫酸钡、硫酸镁、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁、群青(ultramarine)、氧化铬、氢氧化铬、炉甘石及其组合；有机色素，例如聚酰胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯基树脂、尿素树脂、酚醛树脂、氟树脂、硅树脂、丙烯酸树脂、三聚氰胺树脂、环氧树脂、聚碳酸酯树脂、二乙烯基苯/苯乙烯共聚物、丝粉、纤维素、CI颜料黄和CI颜料橙；以及无机颜料和有机颜料的复合颜料。

有机粉末可以包括：金属皂，如硬脂酸钙；烷基磷酸的金属盐，例如十六烷酸锌钠、月桂酸锌、月桂酸钙；酰基氨基酸的多金属盐，例如N-月桂酰-β-丙氨酸钙、N-月桂酰-β-丙氨酸锌、以及N-月桂酰甘氨酸钙；

酰胺磺酸的多金属盐，例如N-月桂酰-牛磺酸钙和N-棕榈酰-牛磺酸钙；N-酰基碱性氨基酸，例如N-ε-月桂酰-L-赖氨酸、N-ε-棕榈酰赖氨酸、N-α-棕榈酰尼丁、N-α-月桂酰精氨酸和N-α-脱水牛脂脂肪酸酰基精氨酸；N-酰基多肽，例如N-月桂酰甘氨酰甘氨酸；α-氨基脂肪酸，例如α-氨基辛酸和α-氨基月桂酸；聚乙烯；聚丙烯；尼龙；聚甲基丙烯酸甲酯；聚苯乙烯；二乙烯基苯/苯乙烯共聚物；四氟化乙烯等等。

紫外线吸收剂可以包括对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸戊酯、对氨基苯甲酸辛酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸苯酯、水杨酸辛酯、水杨酸苄酯、水杨酸丁基苯酯、水杨酸高薄荷酯、肉桂酸苄酯、对甲氧基肉桂酸-2-乙氧基乙基、对甲氧基肉桂酸辛酯、二对甲氧基肉桂酸单-2-乙基己基甘油酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、肉桂酸二异丙基/二异丙基酯混合物、尿烷酸、尿烷酸乙酯、羟基甲氧基二苯甲酮、羟基甲氧基二苯甲酮磺酸及其盐、二羟基甲氧基二苯甲酮、二羟基甲氧基二苯甲酮二磺酸钠、二羟基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮、4-叔丁基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷、2,4,6-三苯胺-对-(碳-2'-乙基己基-1'-氧基)-1,3,5-三嗪、2-(2-羟基-5-甲基苯基)苯并三唑等。

消毒剂可以包括桧醇、三氯酸、三氯羟基二苯醚、葡萄糖酸氯己定、苯氧乙醇、间苯二酚(resorcine)、异丙基甲基苯酚、薁(azulene)、水杨酸、吡啶硫酮锌、苯扎氯铵、301号光敏元素、单硝基愈创木酚钠和十一碳烯酸等。

抗氧化剂可以包括丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、反山梨酸等。

pH调节剂可包括柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、富马酸、富马酸钠、琥珀酸、琥珀酸钠、氢氧化钠、单氢磷酸钠等。

醇可以包括高级醇，例如鲸蜡醇。

此外，要混合的其他成分不限于上述示例，任何一种上述成分都可以在不影响本发明的目的和效果的范围内混合，但占组合物总重量可以在0.01重量％至5重量％或0.01重量％至3重量％的范围内。

对于本发明的洗剂、糊剂、霜剂或凝胶制剂，可以使用作为载体成分的动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石、锌氧化物等。

对于本发明的粉末或喷雾制剂，乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末可用作载体成分。特别地，在喷雾制剂的情况下，组合物还可包括推进剂，例如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。

对于本发明的溶液或乳液制剂，可以使用溶剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分，载体成分可以是例如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇脂肪酸酯。

对于本发明的悬浮制剂，可以使用作为载体成分的液体稀释剂，例如水、乙醇或丙二醇，悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯或聚氧乙烯山梨糖醇酯、微晶纤维素、铝甲醇、膨润土、琼脂、黄蓍胶等。

对于本发明的含有表面活性剂的清洁制剂，可以使用作为载体成分的脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等。

在下文中，将提出有助于理解本发明的优选实施例。然而，提供以下实施例仅是为了更容易理解本发明，并且本发明的内容不受以下实施例的限制。

实施例

实施例1.肠道细菌和来源于细菌的囊泡的体内吸收、分布和排泄模式的分析

为了评估细菌和来源于细菌的囊泡是否通过粘液被全身吸收，用以下方法进行实验。首先，将50μg剂量的带有荧光标记的肠道细菌和来源于肠道细菌的囊泡中的每种施用至小鼠的胃，并在0分钟、5分钟、3小时、6小时和12小时后测量荧光。作为观察小鼠的整个图像的结果，如图1A所示，细菌不被全身吸收，但是在施用后5分钟，来源于细菌的囊泡被全身吸收，并且在施用后3小时在膀胱中观察到强烈荧光，从而可以看出囊泡是排泄到泌尿道。此外，可以看出，囊泡在体内存在直至施用后12小时(参见图1A)。

此外，为了评估其中的肠道细菌和来源于肠道细菌的囊泡被全身吸收后渗透到各个器官中的模式，以与上述相同的方式施用50μg带有荧光标记的细菌和来源于细菌的囊泡，然后在施用12小时后收集尿液、心脏、肺、肝脏、肾、脾、脂肪和肌肉。作为观察到的在收集的组织中的荧光的结果，如图1B所示，可以看出来源于细菌的囊泡分布在尿液、心脏、肺、肝、脾、脂肪、肌肉和肾中，但是细菌没有被吸收(参见图1B)。

实施例2.临床样品中来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

在首先将血液或尿液放入10ml试管中，并且通过离心(3,500×g，10分钟，4℃)使悬浮物沉降后，仅将上清液转移至新的10ml试管。使用0.22-μm的过滤器除去细菌和杂质后，将它们转移到Centriprep管(离心过滤器50kD)中，并在1,500×g和4℃下离心15分钟，弃去小于50kD的物质，将残余物浓缩至10ml。使用0.22-μm的过滤器再次除去细菌和杂质后，通过使用90Ti型转子在150,000×g和4℃下进行超高速离心3小时，弃去上清液，并将聚集的团块(pellet)溶解在生理盐水(PBS)中。

将通过上述方法分离的100μl囊泡在100℃下煮沸，从脂质中提取内部DNA，然后在冰上冷却5分钟。然后，为了除去残留的悬浮物，将DNA在10,000×g和4℃下离心30分钟，仅收集上清液。并且，通过使用Nanodrop定量DNA的量。

此后，为了确认提取的DNA中是否存在来源于细菌的DNA，用下表1所示的16s rDNA引物进行PCR，并确认提取的基因中存在来源于细菌的基因。

[表1]

使用16S rDNA引物对通过上述方法提取的DNA进行扩增，然后进行测序(IlluminaMiSeq测序仪)，结果以标准流程图格式(SFF)文件输出，使用GS FLX软件(v2.9)将SFF文件转换为序列文件(.fasta)和核苷酸质量评分文件，然后确认用于阅读的可靠性估计，并且其中窗口(20bps)的平均碱基检出准确性低于99％的部分(Phred分数<20)已删除。对于操作分类单元(OTU)分析，通过使用UCLUST和USEARCH根据序列相似性进行聚类，属、科、目、纲和门分别基于94％、90％、85％、80％和75％的序列相似性进行聚类，在每个OUT的门、纲、目、科和属级上进行分类，并使用BLASTN和GreenGenes(QIIME)的16S RNA序列数据库(108,453个序列)对在该属级上具有97％或更高的序列相似性的细菌进行分析。

实施例3.糖尿病患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从96例糖尿病患者和98例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自糖尿病患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表2和图2)。

[表2]

实施例4.心房颤动患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从66例心房颤动患者和71例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自心房颤动患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表3和图3)

[表3]

实施例5.心肌病患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从59例心肌病患者和69例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自心肌病患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表4和图4)。

[表4]

实施例6.肝癌患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从97例肝癌患者和109例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自乳腺癌患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表5和图5)。

[表5]

实施例7.肝硬化患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从101例肝硬化患者和126例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自肝硬化患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表6和图6)。

[表6]

实施例8.痴呆患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从61例淋巴瘤患者和70例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自痴呆患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表7和图7)。

[表7]

实施例9.抑郁症患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从84例抑郁症患者和92例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自抑郁症患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表8和图8)。

[表8]

实施例10.帕金森病患者的尿液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从54例帕金森病患者和62例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的尿液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的尿液相比，在来自帕金森病患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表9和图9)。

[表9]

实施例11.特应性皮炎患者的血液中的来源于细菌的囊泡的宏基因组分析

从57例特应性皮炎患者和63例正常个体(两组的年龄和性别均匹配)的血液中存在的囊泡中提取基因，使用实施例2的方法对所述血液进行宏基因组分析后，对来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的分布进行评估。结果，证实与来源于正常个体的血液相比，在来自特应性皮炎患者的血液中的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡显著减少(参见表10和图10)。

[表10]

实施例12.来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的分离

基于上述实施例的结果，培养属于罗斯氏菌属的污水沟罗斯氏菌菌株，然后从中分离其囊泡。污水沟罗斯氏菌菌株在脑心浸液(BHI)培养基中，在37℃有氧室中培养至吸光度(OD600)为1.0至1.5，然后传代培养。之后，收集不含菌株的培养基上清液，并且在10,000g，4℃下离心15分钟，通过0.45-μm过滤器过滤，过滤后的上清液使用带有100kDa中空滤膜的QuixStand台式系统(GE Healthcare,UK)通过超滤浓缩至200mL体积。然后，将浓缩的上清液再次通过0.22-μm过滤器过滤，过滤后的上清液在150,000g和4℃下超速离心3小时，用Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)悬浮沉淀。随后，使用10％、40％和50％OptiPrep溶液(Axis-Shield PoC AS，挪威)进行密度梯度离心，并且用HEPES缓冲盐水(20mM HEPES，150mM NaCl，pH 7.4)稀释OptiPrep溶液，以制备低密度溶液。在200,000g和4℃下进行离心2小时，从上层分馏成相同体积1mL的每种溶液另外在150,000g和4℃下超速离心3小时。然后，使用双辛可宁酸(BCA)测定法对蛋白质进行定量，并对获得的囊泡进行实验。

实施例13.来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的抗炎作用

为了检查来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡对炎症细胞分泌炎症介质的作用，用来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡以不同浓度(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/mL)处理Raw 264.7细胞(其为小鼠巨噬细胞系)，然后用大肠杆菌EV(其是炎症性疾病的致病囊泡)进行处理，然后测量炎症介质(IL-6和TNF-α)的分泌量。更具体地说，将Raw264.7细胞以每孔1×10⁵细胞的密度接种到24孔细胞培养板中，并在完整的DMEM中培养24小时。之后，将培养上清液收集在1.5mL试管中，以3000g离心5分钟，将所得上清液在4℃下保存，然后进行ELISA分析。结果，当来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡进行预处理时，证实了由引起炎症的因素导致的IL-6(参见图11A)和TNF-α(参见图11B)的分泌被显著抑制。该结果表明，由来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡可以有效地抑制由来源于引起炎症的因素(例如来源于大肠杆菌的囊泡)诱导的炎症反应。

实施例14.来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的神经细胞保护效果

脑源性神经营养因子(BDNF)是保护神经细胞免受神经细胞损伤的主要介质，其在痴呆、抑郁、阿尔茨海默病、自闭症等中的表达降低。在本实施例中，为了评估来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡对脑神经疾病的治疗效果，通过用应激激素处理神经细胞来评价神经细胞保护效果。即，神经细胞(海马神经元细胞系，HT22细胞)与肾上腺皮质激素(GC：皮质酮400ng/ml)或来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡(EV，20μg/mL)在体外培养24小时，并且通过PCR评估BDNF表达。

结果证实，通过来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡的处理，显著恢复了被肾上腺皮质激素处理抑制的BDNF表达(参见图12)。这意味着来源于污水沟罗斯氏菌的囊泡可以有效抑制由例如压力之类的引起脑神经细胞损伤的因子所引起的脑神经疾病。

提供本发明的上述描述是出于说明的目的，并且本发明所属领域的普通技术人员应理解，在不改变本发明的技术精神或基本特征的情况下，可以容易地将本发明修改为其他特定形式。因此，应当理解，上述实施例在所有方面仅进行了说明，而不是限制性的。

【工业适用性】

根据本发明，来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡有望有效地用于诊断糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病或炎症性疾病的方法中；以及用于预防、缓解或治疗糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病的食品、吸入剂、化妆品或药物组合物中。

<110> MD保健株式会社

<120> 来源于罗斯氏菌属细菌的纳米囊泡及其用途

<130> MPO21-035CN

<150> KR 10-2019-0017064

<151> 2019-02-14

<150> KR 10-2020-0012637

<151> 2020-02-03

<160> 2

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 50

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 16S_V3_F

<220>

<221> misc_feature

<222> (42)

<223> n = a 或 g 或 c 或 t/u

<400> 1

tcgtcggcag cgtcagatgt gtataagaga cagcctacgg gnggcwgcag 50

<210> 2

<211> 55

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 16S_V4_R

<400> 2

gtctcgtggg ctcggagatg tgtataagag acaggactac hvgggtatct aatcc 55

Claims (22)

1.一种提供用于诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的信息的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从分离自正常个体样品和受试者样品的囊泡中提取DNA；

(b)使用基于在16S rDNA中存在的基因序列制备的成对的引物对所提取的所述DNA进行PCR(聚合酶链式反应)以获得每种PCR产物；以及

(c)通过对所述PCR产物的定量分析将其中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量低于所述正常个体样品的情况分类为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)中的所述样品是血液或尿液。

3.一种用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述心血管疾病为选自由心房颤动、心肌病、心肌梗塞、高血压、缺血性心脏病、冠状动脉疾病、心绞痛、动脉粥样硬化、动脉硬化和心律失常组成的群组中的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述肝脏疾病为选自由肝癌、肝硬化、肝炎、肝脏硬化和脂肪肝组成的群组中的一种或多种。

6.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述脑神经疾病为选自由抑郁症、强迫症、精神分裂症、痴呆、阿尔茨海默病、癫痫、自闭症和帕金森病组成的群组中的一种或多种。

7.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述炎症性疾病为选自由牙龈炎、牙周炎、胃炎、炎症性肠炎、结肠炎、特应性皮炎、痤疮、脱发、银屑病、鼻炎、鼻息肉、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、退行性关节炎和类风湿性关节炎组成的群组中的一种或多种。

8.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至200nm。

9.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述囊泡是由罗斯氏菌属细菌天然或人工分泌的。

10.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，来源于罗斯氏菌属细菌的所述囊泡是由污水沟罗斯氏菌分泌的。

11.一种用于预防或缓解选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的食品组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

12.根据权利要求11所述的食品组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至200nm。

13.根据权利要求11所述的食品组合物，其中所述囊泡是由罗斯氏菌属细菌天然或人工分泌的。

14.根据权利要求11所述的食品组合物，其中所述来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡是由污水沟罗斯氏菌分泌的。

15.一种用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的吸入剂组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

16.一种用于预防或缓解炎症性皮肤病的化妆品组合物，其包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡。

17.根据权利要求16所述的化妆品组合物，其中所述炎症性皮肤病是选自由特应性皮炎、痤疮、脱发和牛皮癣组成的群组中的一种或多种。

18.一种诊断糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎的方法，该方法包括以下步骤：

(a)从分离自正常个体样品和受试者样品的囊泡中提取DNA；

(b)使用基于在16S rDNA中存在的基因序列制备的成对的引物对所提取的所述DNA进行PCR(聚合酶链反应)以获得每种PCR产物；以及

(c)通过对所述PCR产物的定量分析将其中来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的含量低于所述正常个体样品的情况确定为糖尿病、心房颤动、心肌病、肝癌、肝硬化、痴呆、抑郁症、帕金森病或特应性皮炎。

19.根据权利要求18所述的方法，其中，步骤(a)中的所述样品是血液或尿液。

20.一种预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病的方法，所述方法包括将包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物施用给受试者的步骤。

21.包含作为活性成分的来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡的药物组合物的用途，其用于预防或治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

22.来源于罗斯氏菌属细菌的囊泡用于制备药物的用途，所述药物用于治疗选自由糖尿病、心血管疾病、肝脏疾病、脑神经疾病和炎症性疾病组成的群组中的一种或多种疾病。

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