CN113466317A - 用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，涉及一种葡萄糖定量方法，由于现存的测定方法大多利用化学反应进行测量，不够方便和精准，使得葡萄糖定量测定和实际值有偏差，从而造成诊断出现一定的误差，所以本申请包括器材与试剂选择；其后：检查防护措施；其后：制备待分析样品溶液；其后：点样；其后：飞行时间质谱分析，将点样过程得到的材料进行质谱检测，检测待分析的溶液得出的数据；其后：数据处理，用于对飞行时间质谱分析所得到的数据进行处理分析，本申请通过利用飞行时间质谱仪，对葡萄糖做定量实验，过程简单且精准度高，不需要利用各种化学试剂的添加造成成本的增加，具有很强的可操作性和简便性。

Description

用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法

技术领域

本发明涉及一种葡萄糖定量方法，具体是一种用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法。

背景技术

葡萄糖定量测定在现代生物医学上是一种广泛存在的检测方法，通常是用来对血清葡萄糖进行测定，且现存的测定方法大多利用化学反应进行测量，不够方便和精准，使得葡萄糖定量测定和实际值有偏差，从而造成诊断出现一定的误差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，包括

器材与试剂选择，对操作中所需要的组分进行取样，用于后续操作；其后：

检查防护措施，对操作中的安全进行保障；其后：

制备待分析样品溶液，利用取样设施取样中得到的原材料进行操作得到待分析样品溶液；其后：

点样，利用点样操作得到需要进行分析的样品，用于对样品的外形进行检测和制作检测样品；其后：

飞行时间质谱分析，将点样过程得到的材料进行质谱检测，检测待分析的溶液得出的数据；其后：

数据处理，用于对飞行时间质谱分析所得到的数据进行处理分析。

作为本发明进一步的方案：所述器材与试剂选择包括选取离心管、移液枪、超纯水、乙醇、冰、2,5-二羟基苯甲酸、葡萄糖、¹³C₆-葡萄糖和磷酸缓冲盐溶液。

作为本发明再进一步的方案：所述检查防护措施包括检查操作人员是否正确穿着实验服，检查操作人员是否正确佩戴防护手套，检查操作人员是否正确佩戴防护目镜，检查通风橱是否正常工作。

作为本发明再进一步的方案：所述制备待分析样品溶液包括制备70％的乙醇溶液、70％乙醇PBS溶液、200mmol/L葡萄糖储备液、200mmol/L¹³C₆葡萄糖储备液、2,5-DHB溶液、¹³C₆葡萄糖的2,5-DHB溶液、20.0mmol/L葡萄糖溶液、葡萄糖梯度溶液、混合标准样品与基质溶液和混合待测样品与基质溶液。

作为本发明再进一步的方案：所述点样包括清洗靶板、点标准溶液、点待测样品溶液、干燥和检查样品点外貌，所述点标准溶液过程是将混合标准样品与基质溶液的混合液放置于靶板的空靶点上，所述待测样品溶液是将混合标准样品和混合待测样品放置于靶板的空靶点上。

作为本发明再进一步的方案：所述飞行时间质谱分析包括检查飞行时间质谱仪的状态，随后进靶，进行设置分析条件后进行校准质荷比，最后分析样品，所述进靶是将载有样品点的靶板放置进入飞行时间质谱仪内部。

作为本发明再进一步的方案：所述设置分析条件是设置激光系统参数、设置移动平台参数、设置分析器参数和设置检测器参数。

作为本发明再进一步的方案：所述校准质荷比首先根据分析条件分析0mmol/L葡萄糖梯度溶液，随后根据质荷比的测量值分别与标准值进行对比，得到飞行时间质荷比换算公式中的参数，随后保存校准后的参数，计算后续操作过程中的质谱数据中的质荷比。

作为本发明再进一步的方案：所述分析样品是使用选定的分析条件，分析靶板上的样品点，将得到的质谱数据保存。

作为本发明再进一步的方案：所述数据处理首先进行预处理，随后进行选峰，其后汇总葡萄糖信号强度，随后进行质量控制，最后计算原始样品中的葡萄糖浓度；

在预处理的时首先选择合适的谱图处理软件，得到质谱数据，随后对峰强信号应用平滑算法，对峰强信号应用基线校正算法，对质荷比进行内标法校正；

在选峰的时候，筛选出个样品对应谱图中的峰质荷比和峰高，以含¹³C₆-葡萄糖的2,5-DHB溶液的谱图为背景，排除其余样品对应的谱图中的相应峰；

在质量控制时，利用分辨率和信噪比对质量进行管控。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本申请通过利用飞行时间质谱仪，对葡萄糖做定量实验，过程简单且精准度高，不需要利用各种化学试剂的添加造成成本的增加，具有很强的可操作性和简便性。

附图说明

图1为用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法的葡萄糖标准溶液配制及测试流程图。

图2为用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法中血清乙醇提取液测试流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

专业术语解释：

血清：人体血液除去血细胞、再经凝血处理(自然凝血或添加凝血因子)所得液体；

血清乙醇提取液：血清按照[血清样品代谢物提取标准操作流程]处理，得到的液体样品；

MALDI-ToF：基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱；

靶板：与MALDI-ToF适配的、承载待分析样品的金属板；

靶点：靶板表面位置固定、边界均匀的二维区域，一般为圆形斑点，用于约束待分析样品；

质荷比：离子的相对质量与离子所带电荷(以电子电荷为单位)的比值，简写为m/z。

实施例1

本发明实施例中，请参阅图1-图2，用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，首先包括器材与试剂选择，检查防护措施，制备待分析样品溶液，点样，飞行时间质谱分析和数据处理。

所述器材与试剂选择选取需要选取离心管，本申请中特选取合适数量的、洁净的1.5mL和0.6mL的聚丙烯离心管；还需要选取

移液枪，本申请中特选取1000μL、100μL(或者200μL)、1μL(或者2.5μL)移液枪，以及相应溶剂的洁净枪头；还需要选取

超纯水，本申请中特取至少10mL超纯水，其电阻率至少是18MΩ(在25℃)。超纯水是现取现用，可以短期(小于1小时)存放在带盖的、经过超纯水润洗3次的聚丙烯容器中；还需要选取

乙醇，本申请中特取至少10mL无水乙醇，纯度等级至少为HPLC级，将乙醇放置于带盖的玻璃容器中备用；还需要选取

冰(湿冰)，本申请中特取100g碎冰，其原料水的纯度等级至少是去离子级，将冰置于带盖的聚乙烯(或者聚碳酸酯)容器中，在-20℃下备用；还需要选取

2,5-二羟基苯甲酸(2,5-DHB，基质)，本申请特取20mg2,5-二羟基苯甲酸，其纯度至少为99％；还需要选取

葡萄糖(D-Glucose)，本申请特取20mg葡萄糖，其纯度至少为99％；还需要选取

¹³C₆-葡萄糖(D-Glucose-¹³C₆)，本申请特取20mg¹³C₆葡萄糖，其纯度至少为99％，同位素纯度(¹³C(¹²C+¹³C))至少为98％；还需要选取

磷酸缓冲盐溶液(PBS，1X)取至少10mL磷酸缓冲盐溶液，其主要成分为：水、Na⁺(140mmol/L)、K⁺(4.5mmol/L)、Cl^-(140mmol/L)、HPO42^-/H2PO4^-(14mmol/L)，pH为7.3(25℃)。

所述检查防护措施包括检查操作人员是否正确穿着实验服、检查操作人员是否正确佩戴防护手套、检查操作人员是否正确佩戴防护目镜和检查通风橱是否正常工作。

所述制备待分析样品溶液包括制备70％的乙醇溶液、70％乙醇PBS溶液、200mmol/L葡萄糖储备液、200mmol/L¹³C₆葡萄糖储备液、2,5-DHB溶液、¹³C₆葡萄糖的2,5-DHB溶液、20.0mmol/L葡萄糖溶液、葡萄糖梯度溶液、混合标准样品与基质溶液和混合待测样品与基质溶液。

所述制备70％乙醇溶液首先需要取洁净的1.5mL离心管，用记号笔或者标签在管壁上标注溶液名称，随后用1000μL移液枪向离心管中加入390μL超纯水，继而用1000μL移液枪向离心管中加入910μL乙醇，最后将离心管密封后置于涡流混匀仪上振荡10秒；

所述70％乙醇PBS溶液的制备首先需要取洁净的1.5mL离心管，用1000μL移液枪向离心管中加入330μL磷酸缓冲盐溶液(PBS)，随后用1000μL移液枪向离心管中加入990μL乙醇，继而将离心管密封后置于高速离心机上，于4℃、15000×g离心10分钟，随后用1000μL移液枪吸取离心后的上清液，将其转移至另一洁净的1.5mL离心管中，原离心管内剩余液体的液面至少应高于管底2mm，最后用记号笔或标签纸在盛有上清液的离心管管壁上标注溶液名称；

所述200mmol/L葡萄糖储备液的制备是以葡萄糖固体和超纯水为原料，溶解混合制备1mL 200mmol/L葡萄糖的70％水溶液，将其放置在带盖的1.5mL离心管中备用，该溶液可在4℃环境保存1个月；

所述200mmol/L¹³C₆-葡萄糖储备液的制备是以³C₆-葡萄糖固体和超纯水为原料，配制1mL200mmol/L¹³C₆-葡萄糖的水溶液，将其置于带盖的1.5mL离心管中备用；该溶液可在4℃环境保存1个月；

所述2,5-DHB溶液(基质溶液)的制备是以2,5-DHB固体和70％乙醇溶液为原料溶解混合，配制1mL 20g/L 2,5-DHB的70％乙醇溶液，将其置于带盖的1.5mL离心管中备用；

所述¹³C₆葡萄糖的2,5-DHB溶液(加标基质溶液)的制备是首先取洁净的1.5mL离心管，用记号笔或标签纸在管壁上标注溶液名称，随后用1000μL移液枪向离心管中加入700μL20g/L 2,5-DHB的70％乙醇溶液，随后用200μL移液枪向离心管中加入14μL的200mmol/L¹³C₆-葡萄糖储备液，其后用1000μL移液枪向离心管中加入686μL70％乙醇溶液，接下来将离心管密封后置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒，得到¹³C₆葡萄糖的2,5-DHB溶液，该溶液应当现配现用，可短期(小于7天)存放于低温(0～4℃)环境中；

所述20.0mmol/L葡萄糖溶液的制备是首先取取洁净的1.5mL离心管，用记号笔或标签纸在管壁上标注溶液名称，随后用1000μL移液枪移取900μL75％乙醇PBS溶液于离心管中，继而用200μL移液枪移取100μL的200mmol/L葡萄糖储备液于离心管中，将离心管密封后置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒后得到目标溶液；

所述葡萄糖梯度溶液的制备是首先取6只洁净的0.6mL离心管，用记号笔或标签纸在管壁上标注样品名称、基质名称和内标名称，随后将盛有葡萄糖梯度的容器置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒，继而用100μL移液枪分别移取100μL 0、2.0、4.0、6.0、8.0、和10.0mmol/L葡萄糖梯度溶液于6只离心管中，随后用100μL移液枪分别移取100μL¹³C₆-葡萄糖的2,5-DHB溶液于6只离心管中且将含有混合溶液的离心管密封，将其置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒，随后将含有混合液的离心管置于低速离心机上，于1360×g离心1分钟，最后将离心后的样品应避免振动，并立即用于靶板点样；

所述混合待测样品与基质溶液的制备是1)取待测血清乙醇提取液，将其置于冰上，然后检查容器外观是否完好，样品标签上的信息是否完整、一致，2)取洁净的0.6mL离心管，用记号笔或标签纸在管壁上标注样品名称、基质名称和内标名称，3)将盛有待测血清乙醇提取液的容器置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒，4)用100μL移液枪移取50μL血清乙醇提取液于0.6mL离心管中，5)密封盛有血清乙醇提取液的容器，将其放回冰上，6)用100μL移液枪移取50μL¹³C₆-葡萄糖的2,5-DHB溶液于离心管中，7)密封含有混合溶液的离心管，将其置于涡旋混匀仪上涡旋振荡10秒，8)将盛有血清乙醇提取液的容器转移至原始保存环境中，9)将含有混合液的离心管置于低速离心机上，于1360×g离心1分钟，10)离心后的样品应避免振动，并立即用于靶板点样。

所述点样包括清洗靶板、点标准溶液、点待测样品溶液、干燥和检查样品点外貌，

所述清洗靶板是首先参考MALDI-ToF仪器使用说明书，取适用于仪器分析的不锈钢靶板，并按照说明书中的规定清洗；再用高纯氮气均匀地吹扫靶板表面至少10秒，确保靶板表面没有残余液体；

所述点标准溶液是用1μL移液枪移取0.5μL混合标准样品和基质溶液中的混合溶液于靶板上的空靶点，记录样品编号、靶点编号和点样量；

所述点待测样品溶液是用1μL移液枪移取0.5μL混合待测样品与基质溶液中的混合溶液于靶板上的空靶点，记录样品编号、靶点编号和点样量；

所述干燥是将靶板置于通风橱中，等待样品点中的溶剂完全挥发、固体析出；

所述检查样品点外貌是检查样品点应当接近圆形、样品点内不应出现未被固体覆盖的空缺区域和样品点的边界不应超过靶点边界，当若某个样品点不符合上述要求，应当取混合待测样品与基质溶液中的混合溶液和混合标准样品和基质溶液中的混合溶液重复进行点标准溶液、点待测溶液、干燥和检查样品点外貌的操作。

所述所述飞行时间质谱分析包括检查飞行时间质谱仪的状态，随后进靶，进行设置分析条件后进行校准质荷比，最后分析样品，所述进靶是将载有样品点的靶板放置进入飞行时间质谱仪内部，

所述检查飞行时间质谱仪的状态是参考MALDI-ToF仪器使用说明书，检查MALDI-ToF仪器是否正常工作；

所述进靶是参考MALDI-ToF仪器使用说明书，将载有样品点的靶板送入仪器，包括混合标准样品与基质溶液和混合待测样品与基质溶液；

所述设置分析条件是选择合适的分析条件，使得待分析物对应的信号强度满足实验要求，首先设置激光系统参数，本申请特设置大尺寸光斑、激光功率93％、激光频率400Hz，随后设置移动平台参数，本申请特设置随机采样10点、每点200次激光脉冲，接下来是设置分析器参数，本申请采用的是正离子线性模式，最后设置检测器参数，本申请特设置采样频率5GHz、检测范围100～1000Da，累积所有信号作为最终信号强度；

所述校准质荷比是首先根据使用选定的分析条件，分析混合标准样品与基质溶液制备的0mmol/L葡萄糖梯度溶液，随后参考MALDI-ToF仪器使用说明书，选择m/z＝137、177、215、273和375附近的三个峰，其后将其质荷比的测定值分别与137.0233([M+H-H₂O]+)、177.0158([M+Na]⁺)、214.9717([M-H+Na+K]⁺)、273.0394([2M+H-2H₂O]⁺)、375.0063([2M-2H+3Na]⁺)对比，得到飞行时间与质荷比换算公式中的参数，最后保存校准后的参数，并用其计算后续操作过程中得到的质谱数据中的质荷比；

本申请中的分析样品是使用选定的分析条件，分析靶板上其余样品点，将所得质谱数据以原生格式和mzXML格式保存于硬盘；

所述数据处理首先进行预处理，随后进行选峰，其后汇总葡萄糖信号强度，随后进行质量控制，最后计算原始样品中的葡萄糖浓度，

所述预处理包括选择合适的谱图处理软件，首先打开分析样品中获得的质谱数据，随后对峰强信号应用平滑(smoothing)算法，对峰强信号应用基线校正(baselinesubstraction)算法，对质荷比进行内标法校正(peak alignment)；

所述选峰是首先应用合适的统计算法，分别筛选出各样品对应的谱图中的峰质荷比和峰高，随后以¹³C₆-葡萄糖的2,5-DHB溶液对应的谱图为背景，排除其余样品对应的谱图中的相应峰；

所述汇总葡萄糖信号强度包括首先选取各谱图中m/z＝203.05±0.1(葡萄糖，[M+Na]⁺)处的信号，应用合适的统计算法，分别计算质荷比、峰高、分辨率，随后选取各谱图中m/z＝209.07±0.1(¹³C₆-葡萄糖，[M+Na]⁺)处的信号，应用合适的统计算法，分别计算质荷比、峰高、分辨率，其后对于每张谱图，以m/z＝203.05±0.1处的峰强除以m/z＝209.07±0.1处的峰强，得到相对峰高，最后将计算结果汇总为如下形式的表格：

所述质量控制包括分析分辨率和信噪比，所述分辨率的分析过程是选取制备混合待测样品与基质溶液中的样品对应的谱图，将m/z＝203.05±0.1处的分辨率逐一与1000比较。若某张谱图对应的分辨率小于1000，则该谱图不能满足定量要求，应当对相应的样品重复进行预处理、选峰和汇总葡萄糖信号强度这三步，所述信噪比是选取制备混合标准样品与基质溶液中的0mmol/L葡萄糖梯度溶液对应的谱图，将m/z＝203.05±0.1处的峰高的平均值作为背景强度(记为I0)；选取其余样品对应的谱图，将m/z＝203.05±0.1处的峰高(记为I)逐一与背景强度比较。若某张谱图对应的峰高小于背景强度的6倍(I<6×I0)，则该谱图不能满足定量要求，应当对相应的样品重新进行预处理、选峰和汇总葡萄糖信号强度这三步，

所述计算原始样品中的葡萄糖浓度的过程包括(1)绘制加标曲线

对2.0、4.0、6.0、8.0和10.0mmol/L葡萄糖梯度溶液样品，以葡萄糖浓度为自变量，相应谱图的葡萄糖相对峰高(记为IR)为因变量，绘制散点图，随后使用一次多项式和最小二乘法拟合每张谱图中的数据点，得到多项式参数(截距a0、斜率a1)和决定系数(R2)，其后检查决定系数是否低于0.95；如低于0.95，则该拟合结果不能满足定量要求，应当对相应的样品重新进行预处理、选峰、汇总葡萄糖信号强度和质量控制这四步，接下来对每一份血清乙醇提取物样品，按下式计算原始样品中的葡萄糖浓度，结果以mmol/L为单位，经四舍五入法保留两位小数；式中D为制备血清乙醇提取物时血清样品的稀释倍数，如使用[血清样品代谢物提取标准操作流程]进行操作，则取D＝4(I_N–a₀)÷a₁×D，最后将计算结果汇总为如下形式的表格：

作为本发明进一步实施例，所述MALDI-ToF仪器利用动能相同的离子(E)，飞行相同的距离(L)，所用时间的不同(T)从而将不同的离子区分开，通过测量离子的飞行时间T，推算离子的质荷比(m/z)，由于能量守恒，所以mv²/2＝neV,L＝vT(暂不考虑初始动能)。

m：离子质量；v：离子速度；ne：离子总电荷；V：离子所在地点的电势；

L：飞行距离；T：飞行时间

当飞行时间L和工作电压V一定时，离子的飞行时间T和离子质荷比一一对应。

本发明的有益效果是：

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，包括

器材与试剂选择，对操作中所需要的组分进行取样，用于后续操作；其后：

检查防护措施，对操作中的安全进行保障；其后：

制备待分析样品溶液，利用取样设施取样中得到的原材料进行操作得到待分析样品溶液；其后：

点样，利用点样操作得到需要进行分析的样品，用于对样品的外形进行检测和制作检测样品；其后：

飞行时间质谱分析，将点样过程得到的材料进行质谱检测，检测待分析的溶液得出的数据；其后：

数据处理，用于对飞行时间质谱分析所得到的数据进行处理分析。

2.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述器材与试剂选择包括选取离心管、移液枪、超纯水、乙醇、冰、2,5-二羟基苯甲酸、葡萄糖、¹³C₆-葡萄糖和磷酸缓冲盐溶液。

3.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述检查防护措施包括检查操作人员是否正确穿着实验服，检查操作人员是否正确佩戴防护手套，检查操作人员是否正确佩戴防护目镜，检查通风橱是否正常工作。

4.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述制备待分析样品溶液包括制备70％的乙醇溶液、70％乙醇PBS溶液、200mmol/L葡萄糖储备液、200mmol/L¹³C₆葡萄糖储备液、2,5-DHB溶液、¹³C₆葡萄糖的2,5-DHB溶液、20.0mmol/L葡萄糖溶液、葡萄糖梯度溶液、混合标准样品与基质溶液和混合待测样品与基质溶液。

5.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述点样包括清洗靶板、点标准溶液、点待测样品溶液、干燥和检查样品点外貌，所述点标准溶液过程是将混合标准样品与基质溶液的混合液放置于靶板的空靶点上，所述待测样品溶液是将混合标准样品和混合待测样品放置于靶板的空靶点上。

6.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述飞行时间质谱分析包括检查飞行时间质谱仪的状态，随后进靶，进行设置分析条件后进行校准质荷比，最后分析样品，所述进靶是将载有样品点的靶板放置进入飞行时间质谱仪内部。

7.根据权利要求6所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述设置分析条件是设置激光系统参数、设置移动平台参数、设置分析器参数和设置检测器参数。

8.根据权利要求6所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述校准质荷比首先根据分析条件分析0mmol/L葡萄糖梯度溶液，随后根据质荷比的测量值分别与标准值进行对比，得到飞行时间质荷比换算公式中的参数，随后保存校准后的参数，计算后续操作过程中的质谱数据中的质荷比。

9.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述分析样品是使用选定的分析条件，分析靶板上的样品点，将得到的质谱数据保存。

10.根据权利要求1所述的用飞行时间质谱做葡萄糖定量的方法，其特征在于，所述数据处理首先进行预处理，随后进行选峰，其后汇总葡萄糖信号强度，随后进行质量控制，最后计算原始样品中的葡萄糖浓度；

在预处理的时首先选择合适的谱图处理软件，得到质谱数据，随后对峰强信号应用平滑算法，对峰强信号应用基线校正算法，对质荷比进行内标法校正；

在选峰的时候，筛选出个样品对应谱图中的峰质荷比和峰高，以含¹³C₆-葡萄糖的2,5-DHB溶液的谱图为背景，排除其余样品对应的谱图中的相应峰；

在质量控制时，利用分辨率和信噪比对质量进行管控。

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