CN113462676B - 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用 - Google Patents

一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113462676B
CN113462676B CN202110580502.6A CN202110580502A CN113462676B CN 113462676 B CN113462676 B CN 113462676B CN 202110580502 A CN202110580502 A CN 202110580502A CN 113462676 B CN113462676 B CN 113462676B
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
ala
val
thr
asn
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110580502.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113462676A (zh
Inventor
王晶
张晓立
李瑞琦
李华珍
章家泉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baikuiri Tianjin Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Baikuiri Tianjin Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baikuiri Tianjin Biotechnology Co ltd filed Critical Baikuiri Tianjin Biotechnology Co ltd
Priority to CN202110580502.6A priority Critical patent/CN113462676B/zh
Publication of CN113462676A publication Critical patent/CN113462676A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113462676B publication Critical patent/CN113462676B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种在细胞表面展示裂解酶的方法，该方法是以裂解酶的编码基因与表面结合蛋白的编码基因作为外源基因在表达细胞中生产，裂解酶通过表面结合蛋白结合在展示细胞的表面。本发明还公开了在细胞表面展示裂解酶的展示细胞及其应用。本发明的方案通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在基于细胞的固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌；通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。

Description

一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用。
背景技术
动物肠道健康对动物的成长起举足轻重的作用。致病菌如产气荚膜梭菌、回肠劳森菌、沙门氏菌、大肠杆菌等是威胁动物肠道健康的主要几大因素。但由于长期抗生素滥用，所造成的抗生素耐药问题已经成为全球最大的健康挑战之一。在这种背景下，我国自2020年7月1日起全面禁止在饲料中添加抗生素，抗生素替代物成为饲料添加剂中的重中之重。目前，市场上现有的替代抗生素产品包括益生菌、益生元、酶等微生态制剂，中药，及其他提高动物机体免疫力的产品。
其中，益生菌通过定殖在动物肠道内，调节肠道黏膜与系统免疫功能，或调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康，是非常重要的添加剂之一。酶制剂作饲料添加剂可以提高畜禽消化道内源酶活性，补充内源酶的不足；破坏植物细胞壁，提高饲料的利用效率；消除饲料中的抗营养因子，促进营养物质的消化吸收。例如植酸酶能够优化肠道结构，增强小肠对营养物质的吸收。而溶菌酶则可以杀灭有害细菌，调节肠道菌群平衡。但是益生菌存在稳定性差，菌群平衡点难控制、增加营养消耗，难保管，现场用药时导致益生菌无效；产品标准化不足等多种问题。而酶制剂又无抑菌及免疫调节功能；无法替代抗生素。
噬菌体是一类对致病菌有非常强特异性杀灭作用的病毒。针对细菌的噬菌体，天然就是抗生素的替代品。而噬菌体自身的能力也展现出了这方面的潜力，比如它的专一性很强，只针对某一种细菌，因此可以避免误伤有益菌及机体本身的细胞，而且极不容易产生耐药。对于多种致病菌的防治，则可以针对性地开发噬菌体鸡尾酒疗法(像混合鸡尾酒一样，混合多种噬菌体)。但是，采用在饲料中添加噬菌体的方式，由于其本身是病毒，含有遗传物质，对机体存在毒性风险，产品开发投入大，筛选难度大，周期长，市场上也难以广泛推广。
因此，基于上述技术问题，如何能够有效地结合上述益生菌与噬菌体的各自优势，开发一种能够在细胞表面，尤其是益生菌表面展示裂解酶的方法，以及可生产用于该用途的裂解酶的重组基因工程菌(生产菌株)，将展示裂解酶的益生菌(展示菌株)应用于动物饲料是业界亟待解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种在细胞表面展示裂解酶的方法，用于生产该裂解酶的重组基因工程菌，以及在细胞表面展示该裂解酶的展示细胞在动物饲料中的应用。通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在基于细胞的固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌。另外，通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种在细胞表面展示裂解酶的方法，该方法是以裂解酶的编码基因与表面结合蛋白的编码基因作为外源基因在表达细胞中生产，融合了表面结合蛋白的裂解酶，通过表面结合蛋白结合在展示细胞的表面。
优选地，以裂解酶的编码基因与表面结合蛋白的编码基因作为外源基因在表达细胞中生产，还包括构建重组表达载体并将其导入表达细胞的步骤。
优选地，所述重组表达载体为质粒。
优选地，所述裂解酶为针对细菌有特异性裂解作用的噬菌体裂解酶。
优选地，所述表面结合蛋白包括与裂解酶特异性匹配的多肽支架对及连接所述裂解酶与肽支架对连接肽。
优选地，所述多肽支架对是由细胞表面展示载体及与之特异性结合的支架A成对组成。
优选地，所述多肽支架对为如下组合中的一组或者多组：
细胞表面展示载体Cohesin I对应与DockerinCelE结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin II对应与DockerinCelA结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin III对应与DockerinScaA结合的多肽支架对。
优选地，所述表达细胞与展示细胞为同一细胞或者不同细胞，当所述表达细胞与展示细胞为同一细胞时，外源基因在表达细胞中表达后，融合了表面结合蛋白的裂解酶通过表面结合蛋白结合在表达细胞的表面；当所述表达细胞与展示细胞为不同细胞时，外源基因在表达细胞中表达后，融合了表面结合蛋白的裂解酶通过表面结合蛋白结合在展示细胞的表面。
另一方面，本发明还提供了用于生产表面展示的裂解酶的表达细胞，该表达细胞包含外源基因裂解酶的编码基因和表面结合蛋白的编码基因，该外源基因在细胞中表达。表达细胞所生产的裂解酶用于在细胞表面展示，该裂解酶生产细胞包含外源基因裂解酶的编码基因和表面结合蛋白的编码基因，该外源基因在细胞中表达。表达后裂解酶可存在于细胞内，或分泌到胞外。
优选地，该外源基因是通过构建的重组表达载体导入细胞进行表达的。
优选地，所述重组表达载体为质粒。
优选地，所述裂解酶为针对细菌有特异性裂解作用的噬菌体裂解酶。
通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌。另外，通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。
优选地，所述表面结合蛋白包括与裂解酶特异性匹配的多肽支架对及连接所述裂解酶与肽支架对连接肽。
优选地，所述多肽支架对是由细胞表面展示载体及与之特异性结合的支架A成对组成。
优选地，所述多肽支架对为如下组合中的一组或者多组：
细胞表面展示载体Cohesin I对应与DockerinCelE结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin II对应与DockerinCelA结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin III对应与DockerinScaA结合的多肽支架对。
再则，本发明还提供了一种在细胞表面展示裂解酶的展示细胞，该展示细胞的表明展示有融合了表面结合蛋白的裂解酶，所述裂解酶是在上述方案中的表达细胞中表达产生的。
优选地，所述表达细胞与展示细胞为同一细胞或者不同细胞，当所述表达细胞与展示细胞为同一细胞时，外源基因在表达细胞中表达后，融合了表面结合蛋白的裂解酶通过表面结合蛋白结合在表达细胞的表面；当所述表达细胞与展示细胞为不同细胞时，外源基因在表达细胞中表达后，融合了表面结合蛋白的裂解酶通过表面结合蛋白结合在展示细胞的表面。
优选地，所述展示细胞为益生菌。更优地，所述益生菌包括乳酸杆菌类，双歧杆菌类，凝结芽孢杆菌、费氏丙酸杆菌、粪肠球菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌，酵母菌在内的一种或者多种。
另外，本发明还提供了上述在细胞表面展示裂解酶的展示细胞在用作动物饲料添加剂中的应用，以及上述的表达细胞在生产细胞表面展示裂解酶中的的应用。
本发明方案具有如下有益效果：
通过表面展示的方法把噬菌体裂解酶与益生菌结合：
1)通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌。
2)通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。
附图说明
图1是本发明技术原理图。
图2是本发明实施例1、3中重组质粒质粒载体pYD1的结构图。
图3是本发明实施例1重组质粒质粒载体pESC-LEU的结构图。
图4本发明实施例1中对大肠杆菌抑菌效果测试实验结果图。
图5是本发明实施例2中重组质粒质粒载体pESC-LEU的结构图。
图6本发明实施例2中对沙门氏菌抑菌效果测试实验结果图中平板背面照片。
图7本发明实施例2中对沙门氏菌抑菌效果测试实验结果图中平板正面照片(与图6对应)。a阴性对照，涂板梯度10-5，b阴性对照，涂板梯度10-6，c样品，涂板梯度10-5，d样品，涂板梯度10-6。
图8是本发明实施例3序列结构一和结构二构建的重组质粒质粒载体pESC-LEU的结构图。
图9是本发明实施例3中对大肠杆菌抑菌效果测试实验结果图。a阴性对照，涂板梯度10-5，b阴性对照，涂板梯度10-6，c阴性对照，涂板梯度10-7，d样品，涂板梯度10-5，e样品，涂板梯度10-6，f样品，涂板梯度10-7。
图10是本发明实施例3中对金黄色葡萄球菌抑菌效果测试实验结果图。a阴性对照，涂板梯度2×10-6，b阴性对照，涂板梯度2×10-7，c阴性对照，涂板梯度2×10-8，d样品，涂板梯度2×10-6，e样品，涂板梯度2×10-7，f样品，涂板梯度2×10-8。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
本发明的方案通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌。另外，通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。
如图1所示，从原理上讲，裂解酶通过相应的表面结合蛋白与益生菌表面的展示载体结合，达到表面展示效果。本发明还提供的在细胞表面展示裂解酶的展示细胞，该展示细胞包含外源基因裂解酶的编码基因和表面结合蛋白的编码基因，该外源基因在细胞中表达，表达后裂解酶分泌到胞外，然后通过表面结合蛋白直接结合在细胞表面。具体实现时，外源基因是通过构建的重组表达载体导入细胞进行表达的。具体实现时，重组表达载体为质粒，质粒可以选择pYD1及pESC-LEU等常用质粒。
其中，所述裂解酶为针对细菌有特异性裂解作用的噬菌体裂解酶。在本发明的实施例中，裂解酶根据其具体作用，包括但不限于Ply3626，LysAB2，SE1gp146，CF301，CPS2(其来源及应对有害菌如表1所示)。裂解酶Ply3626，LysAB2，SE1gp146，CF301，CPS2蛋白序列如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：5所示。
如表1裂解酶来源说明及应对有害菌
裂解酶名称 来源 应对有害菌
ply3626 产气荚膜梭菌噬菌体 产气荚膜梭菌
LysAB2 鲍曼不动杆菌噬菌体 大肠杆菌
SE1gp146 沙门氏菌噬菌体 沙门氏菌
CF301 猪链球菌噬菌体 金黄色葡萄球菌
CPS2 产气荚膜梭菌噬菌体 产气荚膜梭菌
在本发明的实施例中，所述展示细胞为益生菌，益生菌包括并不限于乳酸杆菌类，双歧杆菌类，凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichiissp.shermanii)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)，酵母类。通过表面展示的方法把裂解酶与益生菌类细胞结合，能够集合相关菌类细胞和噬菌体裂解酶的功能，使展示细胞能够杀灭或抑制有害细菌，同时裂解酶在固定载体上更稳定，且能够在肠道环境中针对性杀灭致病菌。另外，通过在益生菌类细胞表面展示一种或者多种裂解酶，针对同一种细菌的一个或者多个靶点，或者针对多种有害菌，起到杀菌作用，促进肠道健康，维持良好的肠道菌群微生态。
所述表面结合蛋白包括与裂解酶特异性匹配的多肽支架对及连接所述裂解酶与肽支架对连接肽(Linker)。其中，裂解酶通过Linker序列：特定的多肽序列GGGGS与Dockerin序列与支架结合。所述多肽支架对是由细胞表面展示载体及与之特异性结合的支架A(Dockerin)成对组成。所述多肽支架对为如下组合中的一组或者多组：
细胞表面展示载体Cohesin I对应与DockerinCelE结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin II对应与DockerinCelA结合的多肽支架对；
细胞表面展示载体Cohesin III对应与DockerinScaA结合的多肽支架对。
其中，Cohesin I-Cohesin III的序列如SEQ ID NO：9-SEQ ID NO：11所示；DockerinCelE、DockerinCelA、DockerinScaA序列如SEQ ID NO：6-SEQ IDNO：8所示。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1裂解酶LysAB2通过支架在酿酒酵母表面展示及对大肠抑菌效果评估
1、使用质粒载体一：pYD1
插入支架结构及序列：CohesinI—CBD(t)—Cohesin II—CohesinIII，如SEQ IDNO：12所示。其结构如图2所示。
将其插入pYD1质粒的NheI和KpnI酶切位点。
2、使用质粒载体二：pESC-LEU
插入表面展示外源蛋白序列结构：Yeast-secretion signal(α-factor)-LysAB2-GS linker-Dockerin(CelA)，如SEQ ID NO：13所示。其结构如图3所示。
将其插入pESC-LEU质粒GAL1启动子后的BamHI和XhoI酶切位点。
3、将上述步骤1和2中的质粒载体按照如下步骤进行转化：
(1)单菌落接种10mL YPD，30℃过夜培养
(2)转接种到50mLYPD，初始OD600为0.2，30℃培养4-5h
(3)2500rpm离心5min，后用40mL 1×TE重悬
(4)2500rpm离心5min，2mL的1×LiAc/0.5×TE重悬，室温孵育10min，分装100ul/管
(5)上述酵母悬浮物100μl与1μg质粒DNA和100μg变性剪切鲑鱼精DNA混合
(6)加入700μL 1×LiAc/40％PEG-3350/1×TE，混合均匀
(7)30℃孵育30min，期间混合，加入88μL二甲基亚砜DMSO，混合均匀，42℃热激7min
(8)在微型离心机中离心10秒，弃上清，重悬在1mL 1×TE中，离心，重悬在50-100μL TE中，涂板Minimal Dextrose平板培养基，Minimal Dextrose平板培养基：0.67％YNB(with ammonium sulfate,without amino acids)，2％glucose，1.5％agar。
当然在本发明的其他实施例中也可以采用本领域技术人员采用的其他可行转化方式将质粒载体转化到酵母细胞或者其他益生菌进行胞内表达。
4、对大肠杆菌抑菌效果测试
实验方案：先用PBS缓冲液将通过NB培养基37℃过夜培养的大肠杆菌培养液稀释到10-4，再稀释10倍到浓度为130个OD的酿酒酵母表面展示裂解酶LysAB2样品中，置于37℃孵育1.5h，然后用PBS进一步分别稀释到10-6/10-7进行涂板培养(NA培养基)。阴性对照则用PBS对大肠杆菌培养液进行稀释到相应的梯度进行涂板培养。观察大肠杆菌的生长情况并作对比。
实验结果：如果表2所示，对应的平板抑菌效果实验结果图如图4所示。
表2平板中大肠杆菌菌落数量
Figure BDA0003085951320000091
实施例2裂解酶SE1gp146通过支架在酿酒酵母表面展示及对沙门氏菌抑菌效果评估
1.使用质粒载体二：pESC-LEU
插入表面展示外源蛋白序列结构：Yeast-secretion signal(α-factor)-LL-37-SE1gp146-GSlinker-Dockerin(ScaA)，如SEQ ID NO：14所示。其结构如图5所示。
将其插入pESC-LEU质粒GAL1启动子后的BamHI和XhoI酶切位点。
2、将上述步骤1的质粒载体按照如下步骤进行转化：
(1)单菌落接种10mL YPD，30℃过夜培养
(2)转接种到50mLYPD，初始OD600为0.2，30℃培养4-5h
(3)2500rpm离心5min，后用40mL 1×TE重悬
(4)2500rpm离心5min，2mL的1×LiAc/0.5×TE重悬，室温孵育10min，分装100ul/管
(5)上述酵母悬浮物100μl与1μg质粒DNA和100μg变性剪切鲑鱼精DNA混合
(6)加入700μL1×LiAc/40％PEG-3350/1×TE，混合均匀
(7)30℃孵育30min，期间混合，加入88μL二甲基亚砜DMSO，混合均匀，42℃热激7min
(8)在微型离心机中离心10秒，弃上清，重悬在1mL 1×TE中，离心，重悬在50-100μL TE中，涂板Minimal Dextrose平板培养基，Minimal Dextrose平板培养基：0.67％YNB(with ammonium sulfate,without amino acids)，2％glucose，1.5％agar。
当然在本发明的其他实施例中也可以采用本领域技术人员采用的其他可行转化方式将质粒载体转化到酵母细胞或者其他益生菌进行胞内表达。
3、对沙门氏菌抑菌效果测试
实验方案：先用PBS缓冲液将通过NB培养基37℃过夜培养的沙门氏菌培养液稀释到10-4，再稀释10倍到浓度为170个OD的酿酒酵母表面展示裂解酶SE1gp146样品中，置于37℃孵育1h，然后用PBS进一步分别稀释到10-6进行涂板培养(木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基)。阴性对照则用PBS对沙门氏菌培养液进行稀释到相应的梯度进行涂板培养。观察沙门氏菌的生长情况并作对比。
实验结果：如果表3所示，对应的平板抑菌效果实验结果图如图6、7所示。
表3平板中沙门氏菌菌落数量
Figure BDA0003085951320000101
实施例3裂解酶LysAB2与CF301通过支架在酿酒酵母组合表面展示及对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果评估
1、使用质粒载体一：pYD1
插入支架结构及序列：CohesinI—CBD(t)—Cohesin II—CohesinIII，如SEQ IDNO：12所示。其结构如图2所示。
将其插入pYD1质粒的NheI和KpnI酶切位点。
2、使用质粒载体二：pESC-LEU
插入表面展示外源蛋白序列结构，包括：
(1)序列结构一：Yeast-secretion signal(α-factor)-LysAB2-GS linker-Dockerin(CelA)，如SEQ ID NO：13所示。其结构如图3所示。
将其插入pESC-LEU质粒GAL1启动子后的BamHI和XhoI酶切位点。
(2)序列结构二：Yeast-secretion signal(α-factor)–CF301-GS linker-Dockerin(CelE)，如SEQ ID NO：15所示。其结构如图8所示。
将其插入pESC-LEU质粒GAL10启动子后的NotI和BglII酶切位点。
3、将上述步骤1和2中的质粒载体按照如下步骤进行转化：
(1)单菌落接种10mL YPD，30℃过夜培养
(2)转接种到50mL YPD，初始OD600为0.2，30℃培养4-5h
(3)2500rpm离心5min，后用40mL 1×TE重悬
(4)2500rpm离心5min，2mL的1×LiAc/0.5×TE重悬，室温孵育10min，分装100ul/管
(5)上述酵母悬浮物100μl与1μg质粒DNA和100μg变性剪切鲑鱼精DNA混合
(6)加入700μL 1×LiAc/40％PEG-3350/1×TE，混合均匀
(7)30℃孵育30min，期间混合，加入88μL二甲基亚砜DMSO，混合均匀，42℃热激7min
(8)在微型离心机中离心10秒，弃上清，重悬在1mL 1×TE中，离心，重悬在50-100μL TE中，涂板Minimal Dextrose平板培养基，Minimal Dextrose平板培养基：0.67％YNB(with ammonium sulfate,without amino acids)，2％glucose，1.5％agar。
当然在本发明的其他实施例中也可以采用本领域技术人员采用的其他可行转化方式将质粒载体转化到酵母细胞或者其他益生菌进行胞内表达。
4、对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果测试
(1)对大肠杆菌抑菌效果测试实验方案：先用PBS缓冲液将通过NB培养基37℃过夜培养的大肠杆菌培养液稀释到10-4，再稀释10倍到浓度为160个OD的酿酒酵母表面展示裂解酶LysAB2及CF301的样品中，置于37℃孵育1h，然后用PBS进一步分别稀释到10-6/10-7进行涂板培养(NA培养基)。阴性对照则用PBS对大肠杆菌培养液进行稀释到相应的梯度进行涂板培养。观察大肠杆菌的生长情况并作对比。
实验结果：如果表4所示，对应的平板抑菌效果实验结果图如图9所示。
表4平板中大肠杆菌菌落数量
Figure BDA0003085951320000121
(2)对金黄色葡萄球菌抑菌效果测试实验方案：先用PBS缓冲液将通过NB培养基37℃过夜培养的金黄色葡萄球菌培养液稀释到10-4，再稀释2×10-2倍到浓度为160个OD的酿酒酵母表面展示裂解酶LysAB2及CF301的样品中，置于37℃孵育30min，然后用PBS进一步分别稀释到2×10-6/2×10-7/2×10-8进行涂板培养(Baird-Parker培养基)。阴性对照则用PBS对金黄色葡萄球菌培养液进行稀释到相应的梯度进行涂板培养。观察金黄色葡萄球菌的生长情况并作对比。
实验结果：如果表5所示，对应的平板抑菌效果实验结果图如图10所示。
表5平板中金黄色葡萄球菌菌落数量
Figure BDA0003085951320000122
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
序列表
<110> 百葵锐（天津）生物科技有限公司
<120> 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用
<160> 15
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 347
<212> PRT
<213> 产气荚膜梭菌噬菌体(perfringens phage)
<400> 1
Met Lys Ile Ala Glu Arg Gly Gly His Asn Phe Gln Ala Thr Gly Ala
1               5                   10                  15
Val Gly Leu Ile Asn Glu Thr Val Glu Asp Arg Lys Val Leu Ala Ala
            20                  25                  30
Ala Tyr Lys Tyr Thr Lys Ala Ala Gly Tyr Asp Val Leu Asp Val Thr
        35                  40                  45
Pro Gly Asn Cys Asp Ser Asn Thr Asp Leu Ile Leu Gly Val Asn Lys
    50                  55                  60
Ala Glu Arg Phe Gly Ala Glu Leu Phe Leu Ser Tyr His Phe Asp Lys
65                  70                  75                  80
Cys Tyr Asp Glu Tyr Asn Gly Ala Leu Gly Val Ala Cys Trp Ile Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Gly Gly Lys Ala Glu Glu Tyr Ala Lys Ser Ile Val Asp Thr
            100                 105                 110
Ile Ala Ala Gly Thr Gly Leu Lys Asn Arg Gly Val Lys Val Asn Pro
        115                 120                 125
Lys Leu Tyr Glu Leu Arg Lys Thr Ser Met Pro Ala Val Ile Val Glu
    130                 135                 140
Val Cys Phe Cys Glu Ala Thr Glu Asp Val Arg Ile Tyr Lys Glu Lys
145                 150                 155                 160
Gly Ala Asp Leu Ile Gly Lys Leu Ile Ala Glu Gly Val Cys Lys Val
                165                 170                 175
Ala Gly Gly Gln Val Pro Gly Thr Val Ile Glu Asn Val Glu Tyr Glu
            180                 185                 190
Val Gln Glu Ser Lys Pro Val Pro Val Tyr Asp Arg Asn Lys Phe Lys
        195                 200                 205
Thr Asn Ala Arg Ala Leu Val Asn Leu Asp Pro Arg Asp Arg Ala Ser
    210                 215                 220
Gly Ile Tyr Glu Asp Leu Gly Glu Ile Tyr Lys Asp Glu Arg Phe Tyr
225                 230                 235                 240
Val Leu Pro Glu Val Cys Asp Lys Gly Asp Tyr Leu Pro Val Leu Tyr
                245                 250                 255
Trp Lys Asp Gly Ala Asn Arg Ala Ser Asn Lys Val Trp Val Ser Ser
            260                 265                 270
Lys Gln Lys Tyr Met Met Ile Asp Thr Tyr His Arg Val Val Asn Val
        275                 280                 285
Val Thr Glu Leu Asp Ala Arg Tyr Glu Pro Ser Pro Asn Ser Asn Arg
    290                 295                 300
Met Gly Tyr Val Cys Asn Ala Glu Arg Val Tyr Val His Lys Ile Glu
305                 310                 315                 320
Gly Asn Tyr Ala Leu Cys Thr Tyr Phe Ala Gly Glu Gly Tyr Lys Thr
                325                 330                 335
Ala Trp Phe Thr Ala Lys Tyr Leu Glu Arg Ile
            340                 345
<210> 2
<211> 185
<212> PRT
<213> 不动杆菌噬菌体(Acinetobacter phage)
<400> 2
Met Ile Leu Thr Lys Asp Gly Phe Ser Ile Ile Arg Asn Glu Leu Phe
1               5                   10                  15
Gly Gly Lys Leu Asp Gln Thr Gln Val Asp Ala Ile Asn Phe Ile Val
            20                  25                  30
Ala Lys Ala Thr Glu Ser Gly Leu Thr Tyr Pro Glu Ala Ala Tyr Leu
        35                  40                  45
Leu Ala Thr Ile Tyr His Glu Thr Gly Leu Pro Ser Gly Tyr Arg Thr
    50                  55                  60
Met Gln Pro Ile Lys Glu Ala Gly Ser Asp Ser Tyr Leu Arg Ser Lys
65                  70                  75                  80
Lys Tyr Tyr Pro Tyr Ile Gly Tyr Gly Tyr Val Gln Leu Thr Trp Lys
                85                  90                  95
Glu Asn Tyr Glu Arg Ile Gly Lys Leu Ile Gly Val Asp Leu Ile Lys
            100                 105                 110
Asn Pro Glu Lys Ala Leu Glu Pro Leu Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ile
        115                 120                 125
Lys Gly Met Leu Asn Gly Trp Phe Thr Gly Val Gly Phe Arg Arg Lys
    130                 135                 140
Arg Pro Val Ser Lys Tyr Asn Lys Gln Gln Tyr Val Ala Ala Arg Asn
145                 150                 155                 160
Ile Ile Asn Gly Lys Asp Lys Ala Glu Leu Ile Ala Lys Tyr Ala Ile
                165                 170                 175
Ile Phe Glu Arg Ala Leu Arg Ser Leu
            180                 185
<210> 3
<211> 184
<212> PRT
<213> 沙门氏菌噬菌体(Salmonella phage)
<400> 3
Met Lys Leu Thr Gln Ala Gln Leu Asp Lys Ile Phe Pro Val Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Ser Gly Arg Asn Ala Lys Phe Leu Lys Pro Leu Asn Asp Leu Phe
            20                  25                  30
Glu Lys Thr Glu Ile Asn Thr Val Asn Arg Val Ala Gly Phe Leu Ser
        35                  40                  45
Gln Ile Gly Val Glu Ser Ala Glu Phe Arg Tyr Val Arg Glu Leu Gly
    50                  55                  60
Asn Asp Ala Tyr Phe Asp Lys Tyr Asp Thr Gly Pro Ile Ala Glu Arg
65                  70                  75                  80
Leu Gly Asn Thr Pro Gln Lys Asp Gly Asp Gly Ala Lys Tyr Lys Gly
                85                  90                  95
Arg Gly Leu Ile Gln Val Thr Gly Leu Ala Asn Tyr Lys Ala Cys Gly
            100                 105                 110
Lys Ala Leu Gly Leu Asp Leu Val Asn His Pro Glu Leu Leu Glu Gln
        115                 120                 125
Pro Glu Tyr Ala Val Ala Ser Ala Gly Trp Tyr Trp Asp Thr Arg Asn
    130                 135                 140
Ile Asn Ala Ala Cys Asp Ala Asp Asp Ile Val Lys Ile Thr Lys Leu
145                 150                 155                 160
Val Asn Gly Gly Thr Asn His Leu Ala Glu Arg Thr Ala Tyr Tyr Lys
                165                 170                 175
Lys Ala Lys Ser Val Leu Thr Ser
            180
<210> 4
<211> 245
<212> PRT
<213> 猪链球菌噬菌体(Streptococcus phage)
<400> 4
Met Thr Thr Val Asn Glu Ala Leu Asn Asn Val Arg Ala Gln Val Gly
1               5                   10                  15
Ser Gly Val Ser Val Gly Asn Gly Glu Cys Tyr Ala Leu Ala Ser Trp
            20                  25                  30
Tyr Glu Arg Met Ile Ser Pro Asp Ala Thr Val Gly Leu Gly Ala Gly
        35                  40                  45
Val Gly Trp Val Ser Gly Ala Ile Gly Asp Thr Ile Ser Ala Lys Asn
    50                  55                  60
Ile Gly Ser Ser Tyr Asn Trp Gln Ala Asn Gly Trp Thr Val Ser Thr
65                  70                  75                  80
Ser Gly Pro Phe Lys Ala Gly Gln Ile Val Thr Leu Gly Ala Thr Pro
                85                  90                  95
Gly Asn Pro Tyr Gly His Val Val Ile Val Glu Ala Val Asp Gly Asp
            100                 105                 110
Arg Leu Thr Ile Leu Glu Gln Asn Tyr Gly Gly Lys Arg Tyr Pro Val
        115                 120                 125
Arg Asn Tyr Tyr Ser Ala Ala Ser Tyr Arg Gln Gln Val Val His Tyr
    130                 135                 140
Ile Thr Pro Pro Gly Thr Val Ala Gln Ser Ala Pro Asn Leu Ala Gly
145                 150                 155                 160
Ser Arg Ser Tyr Arg Glu Thr Gly Thr Met Thr Val Thr Val Asp Ala
                165                 170                 175
Leu Asn Val Arg Arg Ala Pro Asn Thr Ser Gly Glu Ile Val Ala Val
            180                 185                 190
Tyr Lys Arg Gly Glu Ser Phe Asp Tyr Asp Thr Val Ile Ile Asp Val
        195                 200                 205
Asn Gly Tyr Val Trp Val Ser Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Lys Arg Asn
    210                 215                 220
Tyr Val Ala Thr Gly Ala Thr Lys Asp Gly Lys Arg Phe Gly Asn Ala
225                 230                 235                 240
Trp Gly Thr Phe Lys
                245
<210> 5
<211> 253
<212> PRT
<213> 产气荚膜梭菌噬菌体(Clostridium perfringens phage)
<400> 5
Met Lys Ile Ile Gln Ser Asn Ile His Phe Asn Gly Asn Lys Ala Gly
1               5                   10                  15
Gly Asn Asn Pro Lys Glu Ile Ile Val His His Ser Glu His Ser Thr
            20                  25                  30
Ala Asn Val Tyr Asp Ile Asp Arg Trp His Lys Asp Lys Gly Trp Cys
        35                  40                  45
Gly Ile Gly Tyr His Tyr Phe Ile Asp Lys Gln Gly Asn Ile Tyr Thr
    50                  55                  60
Gly Arg Pro Glu Asp Trp Thr Gly Ala His Cys Ile Asp His Asn Thr
65                  70                  75                  80
Lys Ser Ile Gly Ile Cys Leu Gln Gly Arg Leu Gln Val Glu Ser Val
                85                  90                  95
Thr Asp Ala Gln Tyr Asn Ala Leu Leu Trp Leu Ile Lys Asp Ile Arg
            100                 105                 110
Asn Arg Arg Gly Asn Met Pro Ile Tyr Gly His Lys Glu Leu Asn Ser
        115                 120                 125
Thr Asp Cys Pro Gly Asn Leu Asp Leu Asn Lys Leu Arg Thr Asp Val
    130                 135                 140
Asn Asn Lys Val Val Asp Ser Asn Gly Gly Tyr Thr Glu Asn Ala Thr
145                 150                 155                 160
Val Val Asn Val Asn Ser Tyr Leu Asn Val Arg Ser Lys Pro Ser Asp
                165                 170                 175
Glu Ile Ile Gly Lys Leu Phe Pro Asn Glu Arg Ile Gln Val Asn Trp
            180                 185                 190
Val Asp Ser Asn Tyr Leu Gly Trp Tyr Tyr Ile Thr Tyr Arg Val Asn
        195                 200                 205
Glu Thr Asn Lys Leu Lys Ser Gly Tyr Val Ser Ala Lys Tyr Ile Lys
    210                 215                 220
Lys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Arg Ala Gln Arg Gln Ser
225                 230                 235                 240
Ser Arg Gly Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp His Ile
                245                 250
<210> 6
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Met Lys Ile Ile Gln Ser Asn Ile His Phe Asn Gly Asn Lys Ala Gly
1               5                   10                  15
Gly Asn Asn Pro Lys Glu Ile Ile Val His His Ser Glu His Ser Thr
            20                  25                  30
Ala Asn Val Tyr Asp Ile Asp Arg Trp His Lys Asp Lys Gly Trp Cys
        35                  40                  45
Gly Ile Gly Tyr His Tyr Phe Ile Asp Lys Gln Gly Asn Ile Tyr Thr
    50                  55                  60
Gly Arg Pro Glu Asp Trp Thr Gly Ala His Cys Ile Asp His Asn Thr
65                  70                  75                  80
Lys Ser Ile Gly Ile Cys Leu Gln Gly Arg Leu Gln Val Glu Ser Val
                85                  90                  95
Thr Asp Ala Gln Tyr Asn Ala Leu Leu Trp Leu Ile Lys Asp Ile Arg
            100                 105                 110
Asn Arg Arg Gly Asn Met Pro Ile Tyr Gly His Lys Glu Leu Asn Ser
        115                 120                 125
Thr Asp Cys Pro Gly Asn Leu Asp Leu Asn Lys Leu Arg Thr Asp Val
    130                 135                 140
Asn Asn Lys Val Val Asp Ser Asn Gly Gly Tyr Thr Glu Asn Ala Thr
145                 150                 155                 160
Val Val Asn Val Asn Ser Tyr Leu Asn Val Arg Ser Lys Pro Ser Asp
                165                 170                 175
Glu Ile Ile Gly Lys Leu Phe Pro Asn Glu Arg Ile Gln Val Asn Trp
            180                 185                 190
Val Asp Ser Asn Tyr Leu Gly Trp Tyr Tyr Ile Thr Tyr Arg Val Asn
        195                 200                 205
Glu Thr Asn Lys Leu Lys Ser Gly Tyr Val Ser Ala Lys Tyr Ile Lys
    210                 215                 220
Lys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Arg Ala Arg Ala Gln Arg Gln Ser
225                 230                 235                 240
Ser Arg Gly Arg Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp His Ile
                245                 250
<210> 7
<211> 54
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Tyr Gly Asp Val Asn Gly Asp Gly Asn Val Asn Ser Thr Asp Leu Thr
1               5                   10                  15
Met Leu Lys Arg Tyr Leu Leu Lys Ser Val Thr Asn Ile Asn Arg Glu
            20                  25                  30
Ala Ala Asp Val Asn Arg Asp Gly Ala Ile Asn Ser Ser Asp Met Thr
        35                  40                  45
Ile Leu Lys Arg Tyr Leu
    50
<210> 8
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Pro Gly Thr Lys Leu Val Pro Thr Trp Gly Asp Thr Asn Cys Asp Gly
1               5                   10                  15
Val Val Asn Val Ala Asp Val Val Val Leu Asn Arg Phe Leu Asn Asp
            20                  25                  30
Pro Thr Tyr Ser Asn Ile Thr Asp Gln Gly Lys Val Asn Ala Asp Val
        35                  40                  45
Val Asp Pro Gln Asp Lys Ser Gly Ala Ala Val Asp Pro Ala Gly Val
    50                  55                  60
Lys Leu Thr Val Ala Asp Ser Glu Ala Ile Leu Lys Ala Ile Val Glu
65                  70                  75                  80
Leu Ile Thr Leu Pro Gln
                85
<210> 9
<211> 136
<212> PRT
<213> 纤维分解梭菌(Cellulomonas cellasea)
<400> 9
Leu Lys Val Thr Val Gly Thr Ala Asn Gly Lys Pro Gly Asp Thr Val
1               5                   10                  15
Thr Val Pro Val Thr Phe Ala Asp Val Ala Lys Met Lys Asn Val Gly
            20                  25                  30
Thr Cys Asn Phe Tyr Leu Gly Tyr Asp Ala Ser Leu Leu Glu Val Val
        35                  40                  45
Ser Val Asp Ala Gly Pro Ile Val Lys Asn Ala Ala Val Asn Phe Ser
    50                  55                  60
Ser Ser Ala Ser Asn Gly Thr Ile Ser Phe Leu Phe Leu Asp Asn Thr
65                  70                  75                  80
Ile Thr Asp Glu Leu Ile Thr Ala Asp Gly Val Phe Ala Asn Ile Lys
                85                  90                  95
Phe Lys Leu Lys Ser Val Thr Ala Lys Thr Thr Thr Pro Val Thr Phe
            100                 105                 110
Lys Asp Gly Gly Ala Phe Gly Asp Gly Thr Met Ser Lys Ile Ala Ser
        115                 120                 125
Val Thr Lys Thr Asn Gly Ser Val
    130                 135
<210> 10
<211> 145
<212> PRT
<213> 热梭菌(Thermococcus barophilus)
<400> 10
Asn Ala Ile Lys Ile Lys Val Asp Thr Val Asn Ala Lys Pro Gly Asp
1               5                   10                  15
Thr Val Asn Ile Pro Val Arg Phe Ser Gly Ile Pro Ser Lys Gly Ile
            20                  25                  30
Ala Asn Cys Asp Phe Val Tyr Ser Tyr Asp Pro Asn Val Leu Glu Ile
        35                  40                  45
Ile Glu Ile Lys Pro Gly Glu Leu Ile Val Asp Pro Asn Pro Asp Lys
    50                  55                  60
Ser Phe Asp Thr Ala Val Tyr Pro Asp Arg Lys Ile Ile Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Phe Ala Glu Asp Ser Gly Thr Gly Ala Tyr Ala Ile Thr Lys Asp Gly
                85                  90                  95
Val Phe Ala Thr Ile Val Ala Lys Val Lys Ser Gly Ala Pro Asn Gly
            100                 105                 110
Leu Ser Val Ile Lys Phe Val Glu Val Gly Gly Phe Ala Asn Asn Asp
        115                 120                 125
Leu Val Glu Gln Arg Thr Gln Phe Phe Asp Gly Gly Val Asn Val Gly
    130                 135                 140
Asp
145
<210> 11
<211> 128
<212> PRT
<213> 黄色瘤胃菌(Ruminococcus bromii)
<400> 11
Val Glu Trp Leu Ile Pro Thr Val Thr Ala Ala Pro Gly Gln Thr Val
1               5                   10                  15
Thr Met Pro Val Val Val Lys Ser Ser Ser Leu Ala Val Ala Gly Ala
            20                  25                  30
Gln Phe Lys Ile Gln Ala Ala Thr Gly Val Arg Tyr Ser Ser Lys Thr
        35                  40                  45
Asp Gly Asp Ala Tyr Gly Ser Gly Ile Val Tyr Asn Asn Ser Lys Tyr
    50                  55                  60
Ala Phe Gly Gln Gly Ala Gly Arg Gly Ile Val Ala Ala Asp Asp Ser
65                  70                  75                  80
Val Val Leu Thr Leu Ala Tyr Thr Val Pro Ala Asp Cys Ala Glu Gly
                85                  90                  95
Thr Tyr Asp Val Lys Trp Ser Asp Ala Phe Val Ser Asp Thr Asp Gly
            100                 105                 110
Gln Asn Ile Thr Ser Lys Val Thr Leu Thr Asp Gly Ala Ile Ile Val
        115                 120                 125
<210> 12
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Met Gly Asp Ser Leu Lys Val Thr Val Gly Thr Ala Asn Gly Lys Pro
1               5                   10                  15
Gly Asp Thr Val Thr Val Pro Val Thr Phe Ala Asp Val Ala Lys Met
            20                  25                  30
Lys Asn Val Gly Thr Cys Asn Phe Tyr Leu Gly Tyr Asp Ala Ser Leu
        35                  40                  45
Leu Glu Val Val Ser Val Asp Ala Gly Pro Ile Val Lys Asn Ala Ala
    50                  55                  60
Val Asn Phe Ser Ser Ser Ala Ser Asn Gly Thr Ile Ser Phe Leu Phe
65                  70                  75                  80
Leu Asp Asn Thr Ile Thr Asp Glu Leu Ile Thr Ala Asp Gly Val Phe
                85                  90                  95
Ala Asn Ile Lys Phe Lys Leu Lys Ser Val Thr Ala Lys Thr Thr Thr
            100                 105                 110
Pro Val Thr Phe Lys Asp Gly Gly Ala Phe Gly Asp Gly Thr Met Ser
        115                 120                 125
Lys Ile Ala Ser Val Thr Lys Thr Asn Gly Ser Val Thr Ile Asp Pro
    130                 135                 140
Thr Lys Gly Ala Thr Pro Thr Asn Thr Ala Thr Pro Thr Lys Ser Ala
145                 150                 155                 160
Thr Ala Thr Pro Thr Arg Pro Ser Val Pro Thr Asn Thr Pro Thr Asn
                165                 170                 175
Thr Pro Ala Asn Thr Pro Val Ser Gly Asn Leu Lys Val Glu Phe Tyr
            180                 185                 190
Asn Ser Asn Pro Ser Asp Thr Thr Asn Ser Ile Asn Pro Gln Phe Lys
        195                 200                 205
Val Thr Asn Thr Gly Ser Ser Ala Ile Asp Leu Ser Lys Leu Thr Leu
    210                 215                 220
Arg Tyr Tyr Tyr Thr Val Asp Gly Gln Lys Asp Gln Thr Phe Trp Cys
225                 230                 235                 240
Asp His Ala Ala Ile Ile Gly Ser Asn Gly Ser Tyr Asn Gly Ile Thr
                245                 250                 255
Ser Asn Val Lys Gly Thr Phe Val Lys Met Ser Ser Ser Thr Asn Asn
            260                 265                 270
Ala Asp Thr Tyr Leu Glu Ile Ser Phe Thr Gly Gly Thr Leu Glu Pro
        275                 280                 285
Gly Ala His Val Gln Ile Gln Gly Arg Phe Ala Lys Asn Asp Trp Ser
    290                 295                 300
Asn Tyr Thr Gln Ser Asn Asp Tyr Ser Phe Lys Ser Ala Ser Gln Phe
305                 310                 315                 320
Val Glu Trp Asp Gln Val Thr Ala Tyr Leu Asn Gly Val Leu Val Trp
                325                 330                 335
Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Val Val Pro Ser Thr Gln Pro Val Thr
            340                 345                 350
Thr Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Pro Ala
        355                 360                 365
Thr Thr Ile Pro Pro Ser Asp Asp Pro Asn Ala Ile Lys Ile Lys Val
    370                 375                 380
Asp Thr Val Asn Ala Lys Pro Gly Asp Thr Val Asn Ile Pro Val Arg
385                 390                 395                 400
Phe Ser Gly Ile Pro Ser Lys Gly Ile Ala Asn Cys Asp Phe Val Tyr
                405                 410                 415
Ser Tyr Asp Pro Asn Val Leu Glu Ile Ile Glu Ile Lys Pro Gly Glu
            420                 425                 430
Leu Ile Val Asp Pro Asn Pro Asp Lys Ser Phe Asp Thr Ala Val Tyr
        435                 440                 445
Pro Asp Arg Lys Ile Ile Val Phe Leu Phe Ala Glu Asp Ser Gly Thr
    450                 455                 460
Gly Ala Tyr Ala Ile Thr Lys Asp Gly Val Phe Ala Thr Ile Val Ala
465                 470                 475                 480
Lys Val Lys Ser Gly Ala Pro Asn Gly Leu Ser Val Ile Lys Phe Val
                485                 490                 495
Glu Val Gly Gly Phe Ala Asn Asn Asp Leu Val Glu Gln Arg Thr Gln
            500                 505                 510
Phe Phe Asp Gly Gly Val Asn Val Gly Asp Ile Gly Ser Ala Gly Gly
        515                 520                 525
Leu Ser Ala Val Gln Pro Asn Val Ser Leu Gly Glu Val Leu Asp Val
    530                 535                 540
Ser Ala Asn Arg Thr Ala Ala Asp Gly Thr Val Glu Trp Leu Ile Pro
545                 550                 555                 560
Thr Val Thr Ala Ala Pro Gly Gln Thr Val Thr Met Pro Val Val Val
                565                 570                 575
Lys Ser Ser Ser Leu Ala Val Ala Gly Ala Gln Phe Lys Ile Gln Ala
            580                 585                 590
Ala Thr Gly Val Arg Tyr Ser Ser Lys Thr Asp Gly Asp Ala Tyr Gly
        595                 600                 605
Ser Gly Ile Val Tyr Asn Asn Ser Lys Tyr Ala Phe Gly Gln Gly Ala
    610                 615                 620
Gly Arg Gly Ile Val Ala Ala Asp Asp Ser Val Val Leu Thr Leu Ala
625                 630                 635                 640
Tyr Thr Val Pro Ala Asp Cys Ala Glu Gly Thr Tyr Asp Val Lys Trp
                645                 650                 655
Ser Asp Ala Phe Val Ser Asp Thr Asp Gly Gln Asn Ile Thr Ser Lys
            660                 665                 670
Val Thr Leu Thr Asp Gly Ala Ile Ile Val
        675                 680
<210> 13
<211> 346
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1               5                   10                  15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
            20                  25                  30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
        35                  40                  45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
    50                  55                  60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65                  70                  75                  80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Met Ile Leu Thr Lys Asp Gly
                85                  90                  95
Phe Ser Ile Ile Arg Asn Glu Leu Phe Gly Gly Lys Leu Asp Gln Thr
            100                 105                 110
Gln Val Asp Ala Ile Asn Phe Ile Val Ala Lys Ala Thr Glu Ser Gly
        115                 120                 125
Leu Thr Tyr Pro Glu Ala Ala Tyr Leu Leu Ala Thr Ile Tyr His Glu
    130                 135                 140
Thr Gly Leu Pro Ser Gly Tyr Arg Thr Met Gln Pro Ile Lys Glu Ala
145                 150                 155                 160
Gly Ser Asp Ser Tyr Leu Arg Ser Lys Lys Tyr Tyr Pro Tyr Ile Gly
                165                 170                 175
Tyr Gly Tyr Val Gln Leu Thr Trp Lys Glu Asn Tyr Glu Arg Ile Gly
            180                 185                 190
Lys Leu Ile Gly Val Asp Leu Ile Lys Asn Pro Glu Lys Ala Leu Glu
        195                 200                 205
Pro Leu Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ile Lys Gly Met Leu Asn Gly Trp
    210                 215                 220
Phe Thr Gly Val Gly Phe Arg Arg Lys Arg Pro Val Ser Lys Tyr Asn
225                 230                 235                 240
Lys Gln Gln Tyr Val Ala Ala Arg Asn Ile Ile Asn Gly Lys Asp Lys
                245                 250                 255
Ala Glu Leu Ile Ala Lys Tyr Ala Ile Ile Phe Glu Arg Ala Leu Arg
            260                 265                 270
Ser Leu Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gln Val Val Tyr Gly Asp Val Asn
        275                 280                 285
Gly Asp Gly Asn Val Asn Ser Thr Asp Leu Thr Met Leu Lys Arg Tyr
    290                 295                 300
Leu Leu Lys Ser Val Thr Asn Ile Asn Arg Glu Ala Ala Asp Val Asn
305                 310                 315                 320
Arg Asp Gly Ala Ile Asn Ser Ser Asp Met Thr Ile Leu Lys Arg Tyr
                325                 330                 335
Leu Ile Lys Ser Ile Pro His Leu Pro Tyr
            340                 345
<210> 14
<211> 401
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1               5                   10                  15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
            20                  25                  30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
        35                  40                  45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
    50                  55                  60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65                  70                  75                  80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg
                85                  90                  95
Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg
            100                 105                 110
Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val Pro Arg Thr Glu Ser Met Lys
        115                 120                 125
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Asp Lys Ile Phe Pro Val Gly Ala Ser Ser
    130                 135                 140
Gly Arg Asn Ala Lys Phe Leu Lys Pro Leu Asn Asp Leu Phe Glu Lys
145                 150                 155                 160
Thr Glu Ile Asn Thr Val Asn Arg Val Ala Gly Phe Leu Ser Gln Ile
                165                 170                 175
Gly Val Glu Ser Ala Glu Phe Arg Tyr Val Arg Glu Leu Gly Asn Asp
            180                 185                 190
Ala Tyr Phe Asp Lys Tyr Asp Thr Gly Pro Ile Ala Glu Arg Leu Gly
        195                 200                 205
Asn Thr Pro Gln Lys Asp Gly Asp Gly Ala Lys Tyr Lys Gly Arg Gly
    210                 215                 220
Leu Ile Gln Val Thr Gly Leu Ala Asn Tyr Lys Ala Cys Gly Lys Ala
225                 230                 235                 240
Leu Gly Leu Asp Leu Val Asn His Pro Glu Leu Leu Glu Gln Pro Glu
                245                 250                 255
Tyr Ala Val Ala Ser Ala Gly Trp Tyr Trp Asp Thr Arg Asn Ile Asn
            260                 265                 270
Ala Ala Cys Asp Ala Asp Asp Ile Val Lys Ile Thr Lys Leu Val Asn
        275                 280                 285
Gly Gly Thr Asn His Leu Ala Glu Arg Thr Ala Tyr Tyr Lys Lys Ala
    290                 295                 300
Lys Ser Val Leu Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Thr Lys Leu
305                 310                 315                 320
Val Pro Thr Trp Gly Asp Thr Asn Cys Asp Gly Val Val Asn Val Ala
                325                 330                 335
Asp Val Val Val Leu Asn Arg Phe Leu Asn Asp Pro Thr Tyr Ser Asn
            340                 345                 350
Ile Thr Asp Gln Gly Lys Val Asn Ala Asp Val Val Asp Pro Gln Asp
        355                 360                 365
Lys Ser Gly Ala Ala Val Asp Pro Ala Gly Val Lys Leu Thr Val Ala
    370                 375                 380
Asp Ser Glu Ala Ile Leu Lys Ala Ile Val Glu Leu Ile Thr Leu Pro
385                 390                 395                 400
Gln
<210> 15
<211> 399
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1               5                   10                  15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
            20                  25                  30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
        35                  40                  45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
    50                  55                  60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65                  70                  75                  80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Met Thr Thr Val Asn Glu Ala
                85                  90                  95
Leu Asn Asn Val Arg Ala Gln Val Gly Ser Gly Val Ser Val Gly Asn
            100                 105                 110
Gly Glu Cys Tyr Ala Leu Ala Ser Trp Tyr Glu Arg Met Ile Ser Pro
        115                 120                 125
Asp Ala Thr Val Gly Leu Gly Ala Gly Val Gly Trp Val Ser Gly Ala
    130                 135                 140
Ile Gly Asp Thr Ile Ser Ala Lys Asn Ile Gly Ser Ser Tyr Asn Trp
145                 150                 155                 160
Gln Ala Asn Gly Trp Thr Val Ser Thr Ser Gly Pro Phe Lys Ala Gly
                165                 170                 175
Gln Ile Val Thr Leu Gly Ala Thr Pro Gly Asn Pro Tyr Gly His Val
            180                 185                 190
Val Ile Val Glu Ala Val Asp Gly Asp Arg Leu Thr Ile Leu Glu Gln
        195                 200                 205
Asn Tyr Gly Gly Lys Arg Tyr Pro Val Arg Asn Tyr Tyr Ser Ala Ala
    210                 215                 220
Ser Tyr Arg Gln Gln Val Val His Tyr Ile Thr Pro Pro Gly Thr Val
225                 230                 235                 240
Ala Gln Ser Ala Pro Asn Leu Ala Gly Ser Arg Ser Tyr Arg Glu Thr
                245                 250                 255
Gly Thr Met Thr Val Thr Val Asp Ala Leu Asn Val Arg Arg Ala Pro
            260                 265                 270
Asn Thr Ser Gly Glu Ile Val Ala Val Tyr Lys Arg Gly Glu Ser Phe
        275                 280                 285
Asp Tyr Asp Thr Val Ile Ile Asp Val Asn Gly Tyr Val Trp Val Ser
    290                 295                 300
Tyr Ile Gly Gly Ser Gly Lys Arg Asn Tyr Val Ala Thr Gly Ala Thr
305                 310                 315                 320
Lys Asp Gly Lys Arg Phe Gly Asn Ala Trp Gly Thr Phe Lys Gly Gly
                325                 330                 335
Gly Gly Ser Pro Pro Thr Asn Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Gly Asn
            340                 345                 350
Lys Asp Ala Leu Asp Phe Ala Ala Leu Lys Lys Ala Leu Leu Ser Gln
        355                 360                 365
Asp Thr Ser Thr Ile Asn Val Ala Asn Ala Asp Ile Asn Lys Asp Gly
    370                 375                 380
Ser Ile Asp Ala Val Asp Phe Ala Leu Leu Lys Ser Phe Leu Leu
385                 390                 395

Claims (7)

1.一种在酿酒酵母细胞表面展示裂解酶的方法，其特征在于：该方法是以裂解酶的编码基因与表面结合蛋白的编码基因作为外源基因在酿酒酵母细胞中生产，融合了表面结合蛋白的裂解酶，通过表面结合蛋白展示在酿酒酵母细胞的表面；
其中，所述裂解酶是LysAB2；
所述表面结合蛋白包括与裂解酶匹配的多肽支架对及连接所述裂解酶与多肽支架对的连接肽；
所述多肽支架对是CohesinI—CBD—Cohesin II—CohesinIII与DockerinCelA对接的多肽支架对；其中，所述DockerinCelA的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述CohesinI—CBD—Cohesin II—CohesinIII的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：以裂解酶的编码基因与表面结合蛋白的编码基因作为外源基因在酿酒酵母细胞中生产，还包括构建重组表达载体并将其导入酿酒酵母细胞的步骤。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体为质粒。
4.一种用于表面展示裂解酶的酿酒酵母细胞，其特征在于：该酿酒酵母细胞包含外源基因裂解酶的编码基因和表面结合蛋白的编码基因，该外源基因在细胞中表达；
其中，所述裂解酶是LysAB2；
所述表面结合蛋白包括与裂解酶匹配的多肽支架对及连接所述裂解酶与多肽支架对的连接肽；
所述多肽支架对是CohesinI—CBD—Cohesin II—CohesinIII对应与DockerinCelA对接的多肽支架对；其中，所述DockerinCelA的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述CohesinI—CBD—Cohesin II—CohesinIII的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。
5.如权利要求4所述的酿酒酵母细胞，其特征在于：该外源基因是通过构建的重组表达载体导入所述细胞进行表达的。
6.如权利要求5所述的酿酒酵母细胞，其特征在于：所述重组表达载体为质粒。
7.如权利要求4-6中任意一项所述的酿酒酵母细胞在细胞表面展示裂解酶中的应用。
CN202110580502.6A 2021-05-26 2021-05-26 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用 Active CN113462676B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110580502.6A CN113462676B (zh) 2021-05-26 2021-05-26 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110580502.6A CN113462676B (zh) 2021-05-26 2021-05-26 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113462676A CN113462676A (zh) 2021-10-01
CN113462676B true CN113462676B (zh) 2023-04-18

Family

ID=77871327

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110580502.6A Active CN113462676B (zh) 2021-05-26 2021-05-26 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113462676B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114807104B (zh) * 2022-04-11 2024-02-20 西南大学 肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶及其制备方法和应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1894272A (zh) * 2003-10-24 2007-01-10 昆士兰科技大学 蛋白质表达
WO2012118900A2 (en) * 2011-03-03 2012-09-07 The Regents Of The University Of California Surface display of cellulolytic enzymes and enzyme complexes on gram-positive microorganisms
GB201205796D0 (en) * 2012-03-30 2012-05-16 Univ Nottingham Bacterial expression system
EP2882844B1 (en) * 2012-08-10 2018-10-03 Cytomx Therapeutics Inc. Protease-resistant systems for polypeptide display and methods of making and using thereof
BR112016002430A2 (pt) * 2013-08-04 2018-01-30 Yeda Res & Dev celulossomas artificiais, compreendendo múltiplos suportes, e usos respectivos em degradação de biomassa
CN105624077B (zh) * 2014-11-05 2020-09-18 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种顺序酶表面共展示系统及其应用
JP2022502081A (ja) * 2018-09-20 2022-01-11 ワシントン・ユニバーシティWashington University 遺伝子操作された微生物ならびにそれを作製および使用する方法
CN110229220A (zh) * 2019-06-19 2019-09-13 南京林业大学 一种基于纤维小体的毕赤酵母表面共展示系统及其构建方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Li-Hai Fan等.Self-surface assembly of cellulosomes with two miniscaffoldins on Saccharomyces cerevisiae for cellulosic ethanol production.Proc Natl Acad Sci U S A . .2012,第109卷(第109期),13260-5. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113462676A (zh) 2021-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fernandes et al. Novel chimerical endolysins with broad antimicrobial activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus
CN109661464A (zh) 具有扩展宿主范围的噬菌体变体、其制备方法及其在将核酸转导至感兴趣的宿主中的用途
US20060008861A1 (en) Incorporation of anaerobic bacteria in feed formulation
CN113462676B (zh) 一种在细胞表面展示裂解酶的方法及其应用
CN101173260B (zh) 高杀菌活力t4溶菌酶在酵母中的表达及生产方法
EP1032675B1 (en) Attaching substances to micro-organisms
CN110951715A (zh) 一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及制备方法和应用
CN110592057B (zh) 嵌合裂解酶ILTphg和编码此酶的多核苷酸
CN113557027A (zh) 用于治疗胃肠道病原体的工程抗微生物益生菌的联合
CN104263709A (zh) 鸡蛋清溶菌酶及其制备方法
CN107475222B (zh) 基因工程改造的耐热人溶菌酶
KR20150092921A (ko) 담즙산에 의해 발현이 유도되는 프로모터를 포함하는 셔틀벡터 및 이를 포함하는 조성물
López et al. Cell wall hydrolases
Fuller et al. Genetic manipulation of gut microorganisms
JP3620831B2 (ja) 乳酸菌シャトルベクター
US20040014221A1 (en) Plasmid originated from bifidobacterium, recombinant expression vector using the plasmid and transformation method
US20220290114A1 (en) Antimicrobial endolysin polypeptides, compositions and formulations
CN108823193B (zh) 一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶及其突变体与应用
CN104418945A (zh) 一种肽的制备方法及其在制备药物和饲料添加剂中的应用
Lee et al. Characterization of a chitinase gene exhibiting antifungal activity from a biocontrol bacterium Bacillus licheniformis N1
CN114933644B (zh) 一种泥鳅抗菌肽Ma-sHep及其应用
CN106146629B (zh) 一组胰蛋白酶抗性抗菌肽及其制备方法
CN116640755B (zh) 一种链球菌前噬菌体裂解酶lys1519及其应用
CN113201050B (zh) 一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用
KR102126481B1 (ko) 엔도라이신 항균 활성 최적화를 위한 이스트 디스플레이 발현 체계 구축

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant