CN113454124A - Arm和自然杀伤细胞的组合疗法 - Google Patents

Arm和自然杀伤细胞的组合疗法 Download PDF

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Abstract

除了其他方面，本公开文本提供了包含免疫细胞和抗体募集分子的技术。在一些实施方案中，免疫细胞是记忆样自然杀伤细胞。在一些实施方案中，所提供的技术对于治疗病症、障碍或疾病如癌症是特别有用的。在一些实施方案中，所提供的技术提供了较高的功效。在一些实施方案中，所提供的技术提供了与自然杀伤细胞疗法相关的更少的副作用或不太严重的副作用。

Description

ARM和自然杀伤细胞的组合疗法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年12月20日提交的美国申请号62/783,036的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
背景技术
免疫系统活动可用于预防或治疗包括癌症在内的各种病症、障碍和疾病。
发明内容
自然杀伤(NK)细胞能够诱导各种靶标(例如，癌细胞等患病细胞)的细胞死亡。除了其他方面，正在开发NK细胞(例如，体外扩增和/或预活化的NK细胞)用于癌症治疗。在一些实施方案中，本公开文本涵盖以下认知，即NK细胞疗法可以通过药剂而得到显著改善，所述药剂可帮助和/或促进NK细胞识别靶标。在一些实施方案中，本公开文本提供了包含NK细胞和此类药剂的技术(例如，方法、组合物等)，特别地，在一些实施方案中，本公开文本提供了包含NK细胞和抗体募集分子(ARM)的技术，所述抗体募集分子包含(i)可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分，(ii)可结合细胞的靶标结合部分，以及任选地(iii)连接抗体结合部分与靶标结合部分的接头部分。
在一些实施方案中，ARM可以显著提高NK细胞疗法的效率，例如，通过促进NK细胞识别靶细胞。在一些实施方案中，ARM可以增强NK细胞与其靶细胞之间的相互作用，和/或促进由NK细胞诱导的靶细胞死亡。在一些实施方案中，ARM促进NK细胞的活化，例如，通过将抗体募集到靶细胞，然后所述抗体可以募集并激活NK细胞。
另外或可替代地，在一些实施方案中，ARM减少和/或延迟NK细胞疗法的一种或多种副作用的发作，例如，通过将NK细胞引导至靶细胞并减少脱靶效应。在一些实施方案中，NK细胞通常在施用于受试者之前被活化、富集和/或扩增。此类预活化的NK细胞更强大并且可能是有效杀伤靶细胞所必需的，然而，由于它们的活化，这些细胞可能会引起显著更多的副作用，例如，杀伤非预期细胞。除了其他方面，本公开文本提供了ARM可以将NK细胞引导至靶细胞并减少与NK细胞疗法相关的副作用和毒性的技术。此外，鉴于降低的脱靶效应，在一些实施方案中，可利用更多活化的NK细胞来进一步提高治疗效率。
除了其他方面，抗体结合部分(在一些实施方案中称为抗体结合端(ABT))可以结合抗体(或其片段)。在一些实施方案中，抗体结合部分结合可变区。在一些实施方案中，抗体结合部分结合Fab区。在一些实施方案中，抗体结合部分(“通用ABT”或“uABT”)可以(除了其他方面)例如通过结合Fc区而募集具有各种抗原特异性的抗体(或其片段)。在一些实施方案中，uABT的使用可以避免特定抗体群体的依赖性和可能由特定抗体群体的个体变异引起的不良影响。在一些实施方案中，uABT能够优先募集IgG1、IgG2和/或IgG4。在一些实施方案中，抗体(例如，IgG亚类)的募集受施用的ARM剂量限制，和/或不受个体中具有特定Fab区的抗体水平的限制。在一些实施方案中，ABT结合并募集内源性抗体。在一些实施方案中，uABT优选结合IgG分子超过人IgA或IgM。典型地，在被抗体结合部分结合后，抗体仍然能够进行其一种或多种免疫活性，例如与NK细胞相互作用，这可导致NK细胞杀伤靶细胞。
典型地，靶标结合部分(在一些实施方案中，称为靶标结合端(TBT))可以通过例如结合区分靶标与非靶标(例如，患病细胞与其他细胞类型)的实体(例如，细胞表面受体)而赋予ARM对其靶标的特异性(例如，患病的目的细胞)。
除了其他方面，ARM可以通过ABT实现靶标特异性的抗体(例如，内源性抗体、施用的抗体等)募集，和/或触发、产生、鼓励和/或增强NK细胞相关的免疫活性，例如，NK细胞杀伤靶细胞。多种技术(例如，测定、试剂、方法等)可用于评估抗体结合部分、靶标结合部分和ARM，并且可以根据本公开文本而使用。
在一些实施方案中，ARM包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合抗体的Fab区。
在一些实施方案中，ARM包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合抗体的Fc区。
在一些实施方案中，ARM包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合具有不同Fab区的两种或更多种抗体。
在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分)结合抗体的Fc区。在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分)结合抗体的保守Fc区。在一些实施方案中，抗体结合部分结合IgG抗体的Fc区。
在一些实施方案中，本公开文本的药剂(例如，ARM)是具有式I结构的化合物：
Figure BDA0003196682070000031
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。在一些实施方案中，药剂是式I的化合物或其盐。
在一些实施方案中，药剂是式I-a的化合物：
Figure BDA0003196682070000032
或其盐，其中每个变量如本公开文本所定义和描述。在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)是式I-a或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，式I的化合物是式I-a的化合物。
在一些实施方案中，药剂是式I-b的化合物：
Figure BDA0003196682070000041
或其盐，其中每个变量如本公开文本所定义和描述。在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)是式I-b或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所提供的式I的化合物是式I-b的化合物。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)是具有式II结构的化合物：
Figure BDA0003196682070000042
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。在一些实施方案中，药剂是式II的化合物或其盐。在一些实施方案中，式I的化合物是式II的化合物或其盐。在一些实施方案中，具有式I-a结构的化合物是式II的化合物。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)是具有式III结构的化合物：
Figure BDA0003196682070000043
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。在一些实施方案中，药剂是式III的化合物或其盐。在一些实施方案中，式I的化合物是式III的化合物或其盐。在一些实施方案中，具有式I-b结构的化合物是式III的化合物。
本公开文本的NK细胞和药剂(例如，ARM)的组合可在治疗包括癌症在内的各种病症、障碍或疾病方面特别有效。在一些实施方案中，本公开文本提供了以下组合，其包含：
扩增的、富集的和/或预活化的自然杀伤细胞群；和
抗体募集分子(ARM)，其中：
所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
在一些实施方案中，本公开文本提供了用于在系统中诱导细胞死亡、抑制细胞生长和/或减少细胞数量的方法，其包括向系统施用：
以下中的一种或两种：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分；
所述系统于是暴露于这两者，并且与不存在所述自然杀伤细胞和所述抗体募集分子的情况相比，所述系统中的细胞数量减少。
本领域技术人员将理解，所提供的技术适用于如本文所述的各种系统。例如，在一些实施方案中，系统是有机体。在一些实施方案中，系统是受试者。在一些实施方案中，系统是人类。在一些实施方案中，系统是患者。在一些实施方案中，系统是非人动物。在一些实施方案中，系统是可用作疾病模型的非人动物。在一些实施方案中，系统是器官。在一些实施方案中，系统是组织。在一些实施方案中，系统是体内系统。在一些实施方案中，系统是离体系统。在一些实施方案中，系统是体外系统。在一些实施方案中，系统是或包含细胞培养物。
在一些实施方案中，本公开文本提供了用于治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用：
以下中的一种或两种：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合癌细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
受试者于是暴露于这两者。
在一些实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，受试者是人类患者。在一些实施方案中，该受试者是非人动物。在一些实施方案中，受试者是可用作疾病模型的非人动物。
在一些实施方案中，与不存在自然杀伤细胞和抗体募集分子的情况相比，受试者中的癌细胞数量减少。在一些实施方案中，与不存在自然杀伤细胞和抗体募集分子的情况相比，受试者中的癌细胞生长减少。在一些实施方案中，与不存在自然杀伤细胞和抗体募集分子的情况相比，受试者中的癌细胞增殖减少。在一些实施方案中，与不存在自然杀伤细胞和抗体募集分子的情况相比，受试者中的癌细胞体积减小。
在一些实施方案中，本公开文本提供了用于治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合癌细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
在一些实施方案中，本公开文本提供了用于降低使用自然杀伤细胞的治疗的毒性或副作用的方法，其包括向受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合治疗的靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
在一些实施方案中，本公开文本提供了在通过施用多个自然杀伤细胞治疗受试者的方法中的改进，所述改进还包括施用抗体募集分子(ARM)，其中ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接抗体结合部分与靶标结合部分的接头部分。
本公开文本的药剂(例如，ARM)可以在NK细胞(例如，扩增的、富集的和/或预活化的NK细胞)之前、同时和/或之后施用。
附图说明
图1.所提供的技术具有较低的毒性。A.死NK细胞的频率。B.相对于DMSO处理的对照归一化的死NK细胞的频率。
图2.所提供的技术可以有效杀伤癌细胞。A.NK-SUDHL-4共培养物中死SUDHL-4细胞的频率。B.相对于DMSO处理的对照归一化的NK-SUDHL-4共培养物中死SUDHL-4细胞的频率。
图3.所提供的技术可以减少浆细胞的数量。
图4.所提供的技术不导致不希望的NK细胞自相残杀或导致低水平的不希望的NK细胞自相残杀。
具体实施方式
1.本发明的某些实施方案的一般描述：
如上所述，在一些实施方案中，本公开文本提供了用于在系统中诱导细胞死亡、抑制细胞生长和/或减少细胞数量的技术。可替代地或另外，在一些实施方案中，本公开文本提供了用于治疗癌症和/或用于降低细胞免疫疗法(例如，NK细胞疗法)的毒性和/或副作用的技术。
在一些实施方案中，本公开文本利用ARM药剂连同诸如NK细胞疗法(例如，涉及NK细胞的体外扩增)等细胞免疫疗法。在一些实施方案中，将如本文所述的一种或多种ARM药剂施用于受试者，所述受试者已经、正在或将要接受NK细胞疗法，或者另外具有或将具有靶向目的位点(例如，肿瘤)的NK细胞群。相反，在一些实施方案中，将细胞免疫疗法(例如，NK细胞疗法)施用于受试者，所述受试者已经、正在或将要接受如本文所述的ARM药剂疗法。
在一些实施方案中，本公开文本使用包含抗体结合部分的ARM药剂，所述抗体结合部分(“uABT”)可以结合具有不同Fab结构的抗体(或其片段)。特别地，在一些实施方案中，相关ARM药剂包含结合抗体Fc区的抗体结合部分；在某些实施方案中，这种与抗体Fc区的结合不干扰抗体的一种或多种免疫活性，例如，与Fc受体(例如，CD16a)相互作用、募集效应细胞(如用于ADCC的NK细胞)等。如本领域技术人员所理解的，本公开文本所提供的包含uABT的技术(药剂、化合物、组合物、方法等)可以提供多种优势，例如，所提供的技术可以利用免疫系统中具有不同Fab区的抗体来避免或最小化患者群体中抗体变异的不良影响，并且可以触发和/或增强针对靶标的免疫活性，例如，杀伤靶标患病细胞，如癌细胞。
在一些实施方案中，本公开文本的技术可用于将抗体和NK细胞募集到各种靶标(例如，癌细胞)。在一些实施方案中，所提供的技术可用于调节针对靶标(患病细胞、外来物体或实体等)的免疫活性(如涉及NK细胞的ADCC)。在一些实施方案中，所提供的技术可用于调节NK细胞针对靶细胞(例如，患病细胞，如癌细胞)的活性。在一些实施方案中，靶标结合部分是抑制剂部分。在一些实施方案中，靶标结合部分是酶抑制剂部分。在一些实施方案中，靶标结合部分结合细胞表面实体(例如，蛋白质、糖类、脂质等)。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合Fab区。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合Fc区。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中抗体结合部分可以结合具有不同Fab区的两种或更多种抗体。
在一些实施方案中，用于实施本公开文本的技术的药剂包含两个或更多个抗体结合部分。在一些实施方案中，有用的药剂包含两个或更多个靶标结合部分。
抗体结合部分可以与抗体的任何部分相互作用。在一些实施方案中，抗体结合部分结合抗体的Fc区。在一些实施方案中，抗体结合部分结合抗体的保守Fc区。在一些实施方案中，抗体结合部分结合IgG抗体的Fc区。如本领域技术人员所理解的，可以根据本公开文本使用各种抗体结合部分、接头和靶标结合部分。除了其他方面，如实施例中所证明的，在一些实施方案中，本公开文本提供了抗体结合部分、接头和靶标结合部分及其组合，所述抗体结合部分、接头和靶标结合部分及其组合对于构建ARM分子以将抗体募集至靶细胞和/或触发、产生、鼓励和/或增强针对靶细胞(例如，患病细胞，如癌细胞)的免疫系统活性特别有用和有效。
在一些实施方案中，抗体结合部分可以结合Fc区，所述Fc区结合Fc受体(例如，FcγRIIIa、CD16a等)。在一些实施方案中，所提供的部分和/或药剂(例如，如本公开文本中所述的各种式的化合物/ARM)包含抗体结合部分，所述抗体结合部分结合包含Fc区和Fc受体的复合物。在一些实施方案中，复合物包含：
药剂，其包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
Fc区，以及
Fc受体，
其中药剂的抗体结合部分可以结合具有不同Fab区的两种或更多种抗体。
在一些实施方案中，Fc区是受试者的内源性抗体的Fc区。在一些实施方案中，Fc区是外源性抗体的Fc区。在一些实施方案中，Fc区是所施用的药剂的Fc区。在一些实施方案中，Fc受体属于受试者的患病细胞。在一些实施方案中，Fc受体属于受试者的癌细胞。
在某些实施方案中，药剂(例如，ARM)具有式I：
Figure BDA0003196682070000091
或其药学上可接受的盐，其中：
ABT是抗体结合部分；
L是连接ABT与TBT的二价接头部分；并且
TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，ABT是通用抗体结合部分。
在一些实施方案中，抗体结合部分包含一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，抗体结合部分是或包含肽部分。在一些实施方案中，抗体结合部分是或包含环肽部分。在一些实施方案中，此类抗体结合部分包含一个或多个天然氨基酸残基。在一些实施方案中，此类抗体结合部分包含一个或多个非天然天然氨基酸残基。
在一些实施方案中，氨基酸具有式A-I的结构：
NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH，
A-I
或其盐，其中：
Ra1、Ra2、Ra3各自独立地是-La-R’；
La1和La2各自独立地是La；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，抗体结合部分是环肽部分。在一些实施方案中，化合物(例如，药剂、ARM)是式I-a：
Figure BDA0003196682070000111
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
t是0-50；
z是1-50；
L是接头部分；
TBT是靶标结合部分；
每个Rc独立地是-La-R’；
a和b各自独立地是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，a是1。在一些实施方案中，b是1。在一些实施方案中，a是1且b是1，并且式I-a的化合物具有
Figure BDA0003196682070000121
的结构。
在一些实施方案中，每个氨基酸残基，例如式I-a中的每个Xaa，独立地是具有式A-I结构的氨基酸残基。在一些实施方案中，每个Xaa独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-的结构。在一些实施方案中，氨基酸残基(例如，式I-a的化合物中的)的两个或更多个侧链(例如，一个氨基酸残基的Ra2或Ra3与另一氨基酸残基的Ra2或Ra3)任选地一起形成桥(例如，化合物I-10、I-12、I-14、I-18、I-19、I-22、I-23、I-25等)，例如，在一些实施方案中，两个半胱氨酸残基形成-S-S-桥，如在天然蛋白质中通常观察到的。在一些实施方案中，所形成的桥具有Lb的结构，其中Lb是如本公开文本中所述的La。在一些实施方案中，Lb的每个末端独立地连接环肽的主链原子(例如，由式I-a中的-(Xaa)z-形成的环的环原子)。在一些实施方案中，Lb包含R基团(例如，当Lb的亚甲基单元被-C(R)2-或-N(R)-替代时)，其中R基团与附接到主链原子的R基团(例如，Ra1、Ra2、Ra3等，如果是R的情况下)和其间插原子一起形成环。在一些实施方案中，Lb通过氨基酸残基(例如，式I-a中的Xaa)的侧链连接至环，例如，由式I-a中的-(Xaa)z-形成的环。在一些实施方案中，此类侧链包含氨基基团或羧酸基团。
在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000122
是抗体结合部分(
Figure BDA0003196682070000123
结合抗体)。在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000124
是通用抗体结合部分。在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000131
是可结合具有不同Fab区的抗体的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000132
是可结合Fc区的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，具有
Figure BDA0003196682070000133
的结构的通用抗体结合部分)可以结合与Fc受体结合的Fc区。在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，具有
Figure BDA0003196682070000134
的结构的抗体结合部分)具有
Figure BDA0003196682070000135
的结构。在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000136
具有
Figure BDA0003196682070000137
的结构。
在某些实施方案中，化合物(例如，药剂、ARM等)具有式II：
Figure BDA0003196682070000138
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R3和R5各自独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元任选取代的饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元任选取代的饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R5基团和附接到同一碳原子的R5’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元任选取代的饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；或者
两个R5基团任选地连同其间插原子一起形成C1-10任选取代的二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
R1’、R3’和R5’各自独立地是氢或任选取代的C1-3脂肪族；
R2、R4和R6各自独立地是氢或任选取代的C1-4脂肪族，或：
R2和R1任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选取代的饱和或部分不饱和单环杂环；
R4和R3任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选取代的饱和或部分不饱和单环杂环；或者
R6基团及其相邻的R5基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选取代的饱和或部分不饱和单环杂环；
L1是连接
Figure BDA0003196682070000151
的三价接头部分；
L2是共价键或C1-30任选取代的二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-10个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070000152
Figure BDA0003196682070000153
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
TBT是靶标结合部分；并且
m和n各自独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。
在一些实施方案中，抗体结合部分是或包含肽部分。在一些实施方案中，化合物(例如，药剂、ARM等)具有式I-b的结构：
Figure BDA0003196682070000154
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
每个z独立地是1-50；
每个L独立地是接头部分；
TBT是靶标结合部分，
每个Rc独立地是-La-R’；
a1和a2各自独立地是0或1，其中a1和a2中的至少一个不是0；
a和b各自独立地是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，a1是1。在一些实施方案中，a2是1。在一些实施方案中，b是1。在一些实施方案中，式I-b的化合物具有
Figure BDA0003196682070000161
的结构。在一些实施方案中，式I-b的化合物具有
Figure BDA0003196682070000162
的结构。在一些实施方案中，式I-b的化合物具有
Figure BDA0003196682070000163
的结构。在一些实施方案中，式I-b的化合物具有
Figure BDA0003196682070000164
的结构。
在一些实施方案中，每个氨基酸残基，例如式I-b中的每个Xaa，独立地是具有式A-I结构的氨基酸残基。在一些实施方案中，每个Xaa独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-的结构。在一些实施方案中，氨基酸残基(例如，式I-a的化合物中的)的两个或更多个侧链(例如，一个氨基酸残基的Ra2或Ra3与另一氨基酸残基的Ra2或Ra3)任选地一起形成桥(例如，化合物I-10、I-12、I-14、I-18、I-19、I-22、I-23、I-25等)，例如，在一些实施方案中，两个半胱氨酸残基形成-S-S-桥，如在天然蛋白质中通常观察到的。在一些实施方案中，所形成的桥具有Lb的结构，其中Lb是如本公开文本中所述的La。在一些实施方案中，Lb的每个末端独立地连接环肽的主链原子(例如，由式I-a中的-(Xaa)z-形成的环的环原子)。在一些实施方案中，Lb包含R基团(例如，当Lb的亚甲基单元被-C(R)2-或-N(R)-替代时)，其中R基团与附接到主链原子的R基团(例如，Ra1、Ra2、Ra3等，如果是R的情况下)和其间插原子一起形成环。在一些实施方案中，Lb通过氨基酸残基(例如，式I-a中的Xaa)的侧链连接至环，例如，由式I-b中的-(Xaa)z-形成的环。在一些实施方案中，此类侧链包含氨基基团或羧酸基团。
在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-是抗体结合部分(Rc-(Xaa)z-H结合抗体)。在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-是通用抗体结合部分。在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-是可结合具有不同Fab区的抗体的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-是可结合Fc区的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，具有Rc-(Xaa)z-结构的通用抗体结合部分)可以结合与Fc受体结合的Fc区。在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-具有
Figure BDA0003196682070000171
的结构。在一些实施方案中，Rc-(Xaa)z-L-具有
Figure BDA0003196682070000172
的结构。
在某些实施方案中，化合物(例如，药剂、ARM等)具有式III：
Figure BDA0003196682070000173
或其药学上可接受的盐，其中：
每个R7独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R7基团和附接到同一碳原子的R7’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元任选取代的饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元任选取代的饱和或部分不饱和螺环杂环；
每个R7'独立地是氢或任选取代的C1-3脂肪族；
每个R8独立地是氢或任选取代的C1-4脂肪族，或：
R8基团及其相邻的R7基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选取代的饱和或部分不饱和单环杂环；
R9是氢、任选取代的C1-3脂肪族或-C(O)-(任选取代的C1-3脂肪族)；
L3是连接
Figure BDA0003196682070000181
与TBT的二价接头部分；
TBT是靶标结合部分；并且
o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
2.定义：
本发明的化合物包括本文一般描述的那些，并通过本文公开的类别、亚类和种类进一步说明。如本文所用，除非另外指出，否则以下定义将适用。出于本发明的目的，根据元素周期表(Periodic Table of the Elements，CAS版本)，化学与物理手册(Handbook ofChemistry and Physics，第75版)鉴定了化学元素。此外，有机化学的一般原理描述于“Organic Chemistry[有机化学]”,Thomas Sorrell,University Science Books[大学科学书籍出版社],索萨利托:1999，以及“March’s Advanced Organic Chemistry[马奇高等有机化学]”,第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,John Wiley&Sons[约翰·威利父子出版社],纽约:2001中，其全部内容通过引用特此并入。
施用：如本文所用，术语“施用”通常是指向受试者或系统施用组合物。本领域普通技术人员将知晓，在适当的情况下，可使用多种途径来向受试者(例如，人)施用。例如，在一些实施方案中，施用可以是眼部、口服、肠胃外、局部等施用。在一些特定实施方案中，施用可以是支气管(例如，通过支气管滴注)、颊、真皮(其可以是或包含例如一种或多种局部施用至真皮、真皮内、真皮间、透皮等)、肠内、动脉内、真皮内、胃内、髓内、肌肉内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、心室内、特定器官内(例如，肝内))、粘膜、鼻、口腔、直肠、皮下、舌下、局部、气管(例如，通过气管内滴注)、阴道、玻璃体等施用。在一些实施方案中，施用可以涉及间歇(例如，按时间分开的多个剂量)给药和/或周期性(例如，由共同的时间段分开的单个剂量)给药。在一些实施方案中，施用可以涉及至少选定时间段的连续给药(例如，灌注)。
药剂：一般而言，如本文所用，术语“药剂”可用于指任何化学类别的化合物或实体，包括例如多肽、核酸、糖类、脂质、小分子、金属或其组合或复合物。在适当的情况下，如本领域技术人员从上下文中所清楚的那样，所述术语可用于指代是或包含细胞或生物体或其级分、提取物或组分的实体。可替代地或另外，如上下文所清楚的，所述术语可用于指天然产物，因为它在自然界中发现和/或从自然界获得。在一些例子中，再次从上下文可以清楚地看出，所述术语可用于指一个或多个人造实体，因为它是通过人手操作产生的和/或在自然界中找不到。在一些实施方案中，药剂可以以分离的或纯的形式使用；在一些实施方案中，药剂可以以粗品形式使用。在一些实施方案中，潜在药剂可以作为集合或库提供，例如，所述集合或库可以被筛选以鉴定或表征其中的活性药剂。在一些情况下，术语“药剂”可以指代是或包含聚合物的化合物或实体；在一些情况下，所述术语可以指包含一个或多个聚合物部分的化合物或实体。在一些实施方案中，术语“药剂”可以指代不是聚合物和/或基本上不含任何聚合物和/或一种或多种特定聚合物部分的化合物或实体。在一些实施方案中，所述术语可以指缺少或基本上不含任何聚合物部分的化合物或实体。在一些实施方案中，药剂是化合物。在一些实施方案中，药剂是如本文所述的ARM。
脂肪族：如本文所用，“脂肪族”意指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，未分支的)或支链经取代或未取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的经取代或未取代的单环、双环、或多环烃环，或其组合。除非另有说明，脂肪族基团含有1-100个脂肪族碳原子。在一些实施方案中，脂肪族基团含有1-20个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团含有1-10个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团含有1-9个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团含有1-8个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团含有1-7个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，脂肪族基团含有1-6个脂肪族碳原子。在又其他实施方案中，脂肪族基团含有1-5个脂肪族碳原子，且在又其他实施方案中，脂肪族基团含有1、2、3或4个脂肪族碳原子。合适的脂肪族基团包括但不限于线性或支链、经取代或未取代的烷基、烯基、炔基基团及其杂合体。
烯基：如本文所用，术语“烯基”是指具有一个或多个双键的如本文所定义的脂肪族基团。
亚烯基：术语“亚烯基”是指二价烯基基团。
烷基：如本文所用，术语“烷基”以其在本领域中的普通含义给出并且可以包括饱和脂肪族基团，包括直链烷基基团、支链烷基基团、环烷基(脂环族)基团、烷基取代的环烷基基团、以及环烷基取代的烷基。在一些实施方案中，烷基具有1-100个碳原子。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有约1-20个碳原子(例如，对于直链，C1-C20；对于支链，C2-C20)，并且可替代地具有约1-10个碳原子。在一些实施方案中，环烷基环在其环结构(其中此类环为单环、双环或多环)中具有约3-10个碳原子，并且可替代地在环结构中具有约5、6或7个碳。在一些实施方案中，烷基基团可以是低级烷基基团，其中低级烷基基团包含1-4个碳原子(例如，对于直链低级烷基，C1-C4)。
亚烷基：术语“亚烷基”是指二价烷基基团。
氨基酸：在其最广泛的意义上，如本文所用，是指可掺入多肽链中(例如，通过形成一个或多个肽键)的任何化合物和/或物质。在一些实施方案中，氨基酸包含氨基基团和羧酸基团。在一些实施方案中，氨基酸具有通用结构NH(R’)-C(R’)2-COOH，其中每个R'独立地如本公开文本中所述。在一些实施方案中，氨基酸具有通用结构H2N-C(R’)2-COOH，其中R'如本公开文本中所述。在一些实施方案中，氨基酸具有通用结构H2N-C(H)(R’)-COOH，其中R'如本公开文本中所述。在一些实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是非天然氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是D-氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是L-氨基酸。“标准氨基酸”是指天然存在的肽中常见的二十种标准L-氨基酸中的任何一种。“非标准氨基酸”是指除标准氨基酸之外的任何氨基酸，无论其是合成制备的还是从天然来源获得的。在一些实施方案中，与上述通用结构相比，多肽中包括羧基和/或氨基末端氨基酸的氨基酸可含有结构修饰。例如，在一些实施方案中，与通用结构相比，氨基酸可被甲基化、酰胺化、乙酰化、聚乙二醇化、糖基化、磷酸化和/或取代(例如，氨基基团、羧酸基团、一个或多个质子、一个或多个氢和/或羟基基团被取代)修饰。在一些实施方案中，与含有其他方面相同的未修饰氨基酸的多肽相比，此类修饰可以例如改变含有经修饰氨基酸的多肽的循环半衰期。在一些实施方案中，与含有其他方面相同的未修饰氨基酸的多肽相比，此类修饰不会显著改变含有经修饰氨基酸的多肽的相关活性。从上下文可以清楚地看出，在一些实施方案中，术语“氨基酸”可用于指游离氨基酸；在一些实施方案中，它可用于指多肽的氨基酸残基。
动物：如本文所用，是指动物界的任何成员。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的性别不限的人。在一些实施方案中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人动物。在某些实施方案中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、绵羊、牛、灵长类动物、和/或猪)。在一些实施方案中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类、昆虫、和/或蠕虫。在一些实施方案中，动物可以是转基因动物、基因工程动物、和/或克隆。
抗体：如本文所用，术语“抗体”是指包含足以赋予特定靶抗原特异性结合的标准免疫球蛋白序列元件的多肽。如本领域已知的，天然产生的完整抗体是大约150kD的四聚体药剂，其由两个相同的重链多肽(每个约50kD)和两个相同的轻链多肽(每个约25kD)组成，所述重链多肽和轻链多肽彼此缔合成通常称为的“Y形”结构。每条重链包含至少四个结构域(每个结构域长约110个氨基酸)-一个氨基末端可变(VH)结构域(位于Y结构的顶端)，然后是三个恒定结构域：CH1、CH2和羧基末端CH3(位于Y茎的基部)。称为“开关”的短区域连接重链可变区和恒定区。“铰链”将CH2和CH3结构域连接到抗体的其余部分。铰链区中的两个二硫键将完整抗体中的两个重链多肽彼此连接起来。每条轻链包含两个结构域-一个氨基末端可变(VL)结构域，然后是一个羧基末端恒定(CL)结构域，由另一个“开关”彼此分隔。完整抗体四聚体包含两个重链-轻链二聚体，其中重链和轻链通过一个二硫键彼此连接；另外两个二硫键将重链铰链区彼此连接起来，从而使二聚体彼此连接并形成四聚体。天然产生的抗体也被糖基化，通常在CH2结构域上被糖基化。天然抗体中的每个结构域都具有表征为“免疫球蛋白折叠”的结构，所述“免疫球蛋白折叠”由两个β片层(例如，3股、4股或5股片层)在压缩的反平行β桶中相互堆积而成。每个可变结构域包含三个高变环，称为“互补决定区”(CDR1、CDR2和CDR3)，和四个稍微不变的“框架”区(FR1、FR2、FR3和FR4)。当天然抗体折叠时，FR区形成为结构域提供结构框架的β片层，来自重链和轻链的CDR环区在三维空间中聚集在一起，从而产生位于Y结构的顶端的单个高变抗原结合位点。天然存在的抗体的Fc区结合补体系统的元件，也结合效应细胞(包括例如介导细胞毒性的效应细胞)上的受体。如本领域已知的，Fc区对Fc受体的亲和力和/或其他结合属性可以通过糖基化或其他修饰来调节。在一些实施方案中，根据本公开文本产生和/或利用的抗体包含糖基化的Fc结构域，包括具有经修饰或工程化的此类糖基化的Fc结构域。出于本公开文本的目的，在某些实施方案中，包含在天然抗体中发现的足够免疫球蛋白结构域序列的任何多肽或多肽复合物可称为和/或用作“抗体”，无论此类多肽是天然产生的(例如，由生物体与抗原反应而产生)还是通过重组工程化、化学合成或其他人工系统或方法产生的。在一些实施方案中，抗体是多克隆抗体；在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体具有小鼠、兔、灵长类动物或人抗体所特有的恒定区序列。在一些实施方案中，抗体序列元件被人源化、灵长类化、嵌合等，如本领域已知的。此外，如本文所用的术语“抗体”在适当的实施方案中(除非另有说明或上下文清楚可见)可以指用于任何本领域已知或开发的构建体或形式，以用于在替代性呈现中利用抗体结构和功能特征。例如，在一些实施方案中，根据本公开文本使用的抗体处于以下形式，所述形式选自但不限于：完整IgA、IgG、IgE或IgM抗体；双特异性或多特异性抗体(例如，
Figure BDA0003196682070000221
等)；抗体片段，如Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段和分离的CDR或其集合；单链Fv；多肽-Fc融合物；单结构域抗体(例如，鲨鱼单结构域抗体，如IgNAR或其片段)；骆驼抗体；掩蔽抗体(例如，
Figure BDA0003196682070000222
)；小模块免疫药物(“SMIPsTM”)；单链或串联双抗体(
Figure BDA0003196682070000223
)；VHH；
Figure BDA0003196682070000224
微抗体；
Figure BDA0003196682070000225
锚蛋白重复蛋白或
Figure BDA0003196682070000226
Figure BDA0003196682070000231
DART；TCR样抗体；
Figure BDA0003196682070000232
Figure BDA0003196682070000233
微生物蛋白质；
Figure BDA0003196682070000234
CovX-Bodies；以及CrossMab。在一些实施方案中，抗体可能缺乏其在天然产生时将具有的共价修饰(例如，聚糖的附接)。在一些实施方案中，抗体可含有共价修饰(例如，聚糖、有效载荷[例如，可检测部分、治疗部分、催化部分等]、或其他侧基[例如，聚乙二醇等]的附接)。
大约：如本文所用，当应用于一个或多个感兴趣的值时，术语“大约”或“约”是指与所述参考值类似的值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指落入所述参考值的任一方向(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少内的一系列值，除非另有说明或以其他方式从上下文显而易见(除非此类数字超过可能值的100％)。
芳基：单独使用或作为较大部分(如在“芳烷基”、“芳烷氧基”、“芳氧基烷基”等中)的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共五至三十个环成员的单环、双环或多环环系统，其中系统中的至少一个环是芳族的。在一些实施方案中，芳基基团是具有总共五至十四个环成员的单环、双环或多环系统，其中系统中的至少一个环是芳族的，并且其中系统中的每个环含有3至7个环成员。在一些实施方案中，芳基基团是联芳基基团。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。在本公开文本的某些实施方案中，“芳基”是指芳环系统，其包括但不限于可具有一个或多个取代基的苯基、联苯基、萘基、联萘基、蒽基等。在一些实施方案中，还包括在如本文所用的术语“芳基”范围内的是其中芳环稠合至一个或多个非芳环的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基(phthalimidyl)、邻萘二甲酰亚胺基(naphthimidyl)、菲啶基或四氢萘基等，其中附接的基团或点位于芳基环上。
关联：如果一个事件或实体的存在、水平和/或形式与另一个事件或实体的存在、水平和/或形式相关，则两个事件或实体彼此“关联”，如本文所用的术语。例如，如果特定实体的存在、水平和/或形式与疾病、障碍或病症的发病率和/或易感性相关(例如，在相关人群中)，则所述特定实体(例如，核酸(例如，基因组DNA、转录物、mRNA等)、多肽、遗传特征、代谢物、微生物、细胞等)被认为与所述特定疾病、障碍或病症相关。
载体：如本文所用，是指与组合物一起施用的稀释剂、辅助剂、赋形剂或媒介物。在一些示例性实施方案中，载体可以包括无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在一些实施方案中，载体是或包含一种或多种固体组分。
可比较的：如本文所用，术语“可比较的”是指两种或更多种药剂、实体、情况、条件组等，它们可能彼此不同但足够相似以允许在它们之间进行比较，使得本领域技术人员将理解，可以基于观察到的差异或相似性合理地得出结论。在一些实施方案中，可比较的条件组、环境、个体或群体的特征在于多个基本相同的特征和一个或少量不同的特征。本领域普通技术人员将理解，在上下文中，在任何给定情况下，需要两种或更多种这样的药剂、实体、情况、条件组的多少同一度才能被视为可比较的。例如，本领域普通技术人员将理解，当以足够数量和类型的基本上相同的特征表征以保证以下合理结论，即在不同的环境组、个体或群体下获得的结果或观察到的现象的差异是由这些改变的特征的变化引起的或表明这些改变的特征的变化时，环境组、个体或群体彼此是可比较的。
脂环族：如本文所用，术语“脂环族”是指具有例如3至30个成员的饱和或部分不饱和脂肪族单环、双环或多环系统，其中所述脂肪族环系统任选地被取代。脂环族基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环辛烯基、降莰基、金刚烷基和环辛二烯基。在一些实施方案中，环烷基具有3-6个碳。术语“脂环族”还可包括稠合至一个或多个芳族或非芳族环的脂肪族环，如十氢萘基或四氢萘基，其中附接的基团或点位于脂肪族环上。在一些实施方案中，碳环基团是双环的。在一些实施方案中，碳环基团是三环的。在一些实施方案中，碳环基团是多环的。在一些实施方案中，“脂环族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和的或含有一个或多个不是芳族的不饱和单元的单环C3-C6烃或C8-C10双环烃，或完全饱和的或含有一个或多个不是芳族的不饱和单元的C9-C16三环烃。
衍生物：如本文所用，术语“衍生物”是指参考物质的结构类似物。也就是说，“衍生物”是与参考物质显示出显著结构相似性的物质，例如共享核心或共有结构，但在某些分离方式上也有所不同。在一些实施方案中，衍生物是可以通过化学操作从参考物质产生的物质。在一些实施方案中，衍生物是可通过进行与产生参考物质的合成方法基本相似(例如，共用多个步骤)的合成方法而产生的物质。
剂型或单位剂型：本领域技术人员将理解，术语“剂型”可用于指用于向受试者施用的活性剂(例如，治疗剂或诊断剂)的物理离散单元。典型地，每个这样的单元含有预定量的活性剂。在一些实施方案中，这样的量是适合于根据给药方案施用的单位剂量(或其全部部分)，所述给药方案已被确定当施用于相关群体(即，用治疗性给药方案施用)时与期望的或有益的结果相关。本领域普通技术人员理解，向特定受试者施用的治疗性组合物或药剂的总量由一名或多名主治医师确定并且可能涉及多种剂型的施用。
给药方案：本领域技术人员将理解，术语“给药方案”可用于指一组单位剂量(通常多于一个)，它们单独施用于受试者，通常以时间段间隔开。在一些实施方案中，给定的治疗剂具有推荐的可以包括一个或多个剂量的给药方案。在一些实施方案中，给药方案包含多个剂量，每个剂量在时间上与其他剂量间隔开。在一些实施方案中，单个剂量彼此间隔相同长度的时间段；在一些实施方案中，给药方案包含多个剂量和至少两个间隔单个剂量的不同时间段。在一些实施方案中，给药方案内的所有剂量具有相同的单位剂量量。在一些实施方案中，给药方案内的不同剂量具有不同的量。在一些实施方案中，给药方案包含第一剂量量的第一剂量，然后是不同于第一剂量量的第二剂量量的一个或多个额外剂量。在一些实施方案中，给药方案包含第一剂量量的第一剂量，然后是与第一剂量量相同的第二剂量量的一个或多个额外剂量。在一些实施方案中，当在相关群体中施用时，给药方案与期望的或有益的结果相关(即，是治疗性给药方案)。
卤素：术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
杂脂肪族：术语“杂脂肪族”以其在本领域中的普通含义给出并且是指如本文所述的脂肪族基团，其中一个或多个碳原子被一个或多个杂原子(例如，氧、氮、硫、硅、磷等)替代。
杂芳基：单独使用或作为较大部分(例如，“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指具有例如总共5至30个(例如，5、6、9、10、14个等)环成员的单环、双环或多环系统，其中系统中的至少一个环是芳族的并且至少一个芳族环原子是杂原子。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧或硫。在一些实施方案中，杂芳基基团是具有5至14个环原子的基团(即，单环、双环或多环)；在一些实施方案中，是具有5、6、9、10或14个环原子的基团。在一些实施方案中，杂芳基基团具有在环状阵列中共用的6、10或14个π电子；并且除了碳原子外，还具有一至五个杂原子。杂芳基基团包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。在一些实施方案中，杂芳基是杂联芳基，如联吡啶基等。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括其中杂芳环稠合至一个或多个芳基环、脂环族环或杂环基环的基团，其中附接的基团或点位于杂芳环上。非限制性例子包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基基团可以是单环、双环或多环的。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”或“杂芳基基团”互换使用，这些术语中的任何一个都包括被任选取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基基团取代的烷基基团，其中烷基和杂芳基部分独立地被任选地取代。
杂原子：术语“杂原子”意指既不是碳也不是氢的原子。在一些实施方案中，杂原子是氧、硫、氮、磷、硼或硅(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；杂环的任何碱性氮或可取代氮的季铵化形式(例如，如在3,4-二氢-2H-吡咯基中的N)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中)；等等)。在一些实施方案中，杂原子是硼、氮、氧、硅、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧、硅、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧或硫。
杂环基：如本文所用，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环(heterocyclic ring)”可互换使用，是指饱和或部分不饱和并具有一个或多个杂原子环原子的单环、双环或多环部分(例如，3-30元)。在一些实施方案中，杂原子是硼、氮、氧、硅、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧、硅、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧、硫或磷。在一些实施方案中，杂原子是氮、氧或硫。在一些实施方案中，杂环基基团是饱和或部分不饱和的并且除碳原子外还具有一个或多个(优选一个至四个)如上所定义的杂原子的稳定的3至7元单环或7至10元双环杂环部分。当用于提及杂环的环原子时，术语“氮”包括经取代的氮。例如，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基)、或+NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基附接，并且任何环原子可以任选地被取代。此类饱和或部分不饱和杂环基团的例子包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂
Figure BDA0003196682070000271
基、氧氮杂
Figure BDA0003196682070000272
基、硫氮杂
Figure BDA0003196682070000273
基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环(heterocycle/heterocyclyl ring)”、“杂环基”、“杂环基团(heterocyclic group/heterocyclic radical)”、“杂环部分”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环稠合到一个或多个芳基、杂芳基、或脂环族环(如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基)的基团，其中附接的基团或点位于杂脂肪族环上。杂环基基团可以是单环、双环或多环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基基团，其中烷基和杂环基部分独立地被任选地取代。
“改善”、“增加”或“减少”：如本文所用，这些术语或语法上可比较的比较性术语表示相对于可比较的参考测量结果的值。例如，在一些实施方案中，相对于用可比较的参考药剂获得的评估值，用目的药剂获得的评估值可以被“改善”。可替代地或另外地，在一些实施方案中，相对于在不同条件下(例如，在如施用目的药剂的事件之前或之后)在同一受试者或系统中或在不同的可比较受试者中(例如，在与目的受试者或系统不同的可比较受试者或系统中，在目的特定疾病、障碍或病症的一种或多种指标存在下，或在暴露于病症或药剂之前，等等)获得的评估值，在目的受试者或系统中获得的评估值可以被“改善”。在一些实施方案中，比较性术语是指统计学相关的差异(例如，具有足以实现统计学相关性的流行率和/或量级)。本领域技术人员将知晓或能够容易地在给定上下文中确定差异的程度和/或流行率(其是实现这种统计学显著性所需的或足够的)。
部分不饱和：如本文所用，术语“部分不饱和”是指包含至少一个双键或三键的部分。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的基团，但不旨在包括芳基或杂芳基部分。
药物组合物：如本文所用，术语“药物组合物”是指与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的活性剂(例如，化合物)。在一些实施方案中，活性剂以适于在治疗方案中施用的单位剂量量存在，所述单位剂量量当施用于相关群体时显示出达到预定治疗效果的统计学显著概率。在一些实施方案中，药物组合物可以特别配制用于以固体或液体形式施用，所述形式包括适于以下的那些：口服施用，例如，药水(drench)(水溶液或非水溶液或悬浮液)、片剂(例如，定向用于颊、舌下和全身吸收的那些)、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于向舌施用的糊剂；肠胃外施用，例如，通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射，例如作为无菌溶液或悬浮液、或持续释放配制品；局部应用，例如，作为乳膏、软膏或受控释放的贴剂或应用于皮肤、肺或口腔的喷雾；阴道内或直肠内，例如，作为阴道栓、乳膏或泡沫；舌下；眼部；透皮；或经鼻、肺部和其他粘膜表面。
药学上可接受的：如本文所用，术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而不产生过度毒性、刺激、过敏反应、或其他问题或并发症，同时具有相称的合理受益/风险比的那些化合物、材料、组合物、和/或剂型。
药学上可接受的载体：如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、或溶剂包囊材料，它们参与从一个器官或身体的一部分向另一个器官或身体的一部分运送或运输主题化合物。各载体必须在与配制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上是“可接受的”。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些例子包括糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原质水；等渗生理盐水；林格氏溶液；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐类；以及其他在药物配制品中采用的非毒性相容物质。
药学上可接受的盐：如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指适用于药物环境的化合物的盐，即，在合理的医学判断范围内，适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/风险比相称的盐。药学上可接受的盐是众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)中详细地描述了药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐包括但不限于无毒酸加成盐，其是氨基基团与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用其他已知方法(如离子交换)形成的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐包括但不限于己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬酯酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等等。在一些实施方案中，药学上可接受的盐包括但不限于无毒碱加成盐，如由所提供的化合物的酸性基团与碱形成的盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是铵盐(例如，-N(R)3 +)。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是钠盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是钙盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐在适当时包括使用平衡离子(如卤化物、氢氧化物、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1至6个碳原子的烷基、磺酸根和芳基磺酸根)形成的无毒铵阳离子、季铵阳离子和胺阳离子。在一些实施方案中，所提供的化合物呈药学上可接受的盐的形式。
保护基团：如本文所用，短语“保护基团(protecting group或protectiongroup)”是指保护潜在反应性官能团免于不希望的化学转变的临时取代基。此类保护基团的例子分别包括羧酸的酯、醇的甲硅烷基醚以及醛和酮的缩醛和缩酮。“Si保护基团”是包含Si原子的保护基团，如Si-三烷基(例如，三甲基甲硅烷基、三丁基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基)、Si-三芳基、Si-烷基-二苯基(例如，叔丁基二苯基甲硅烷基)、或Si-芳基-二烷基(例如，Si-苯基二烷基)。通常，Si保护基团附接到氧原子上。对保护基团化学领域进行了综述(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团],第2版；Wiley[威利出版社]:纽约,1991)。此类保护基团(和相关的受保护部分)在下文详细描述。
受保护的羟基基团是本领域众所周知的，并且包括详细描述于ProtectingGroups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团],T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons[约翰·威立父子出版社],1999中的那些，将该文献全部内容通过引用并入本文。适当受保护的羟基基团的例子进一步包括但不限于酯、碳酸酯、磺酸酯、烯丙基醚、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。合适的酯的例子包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、戊酸酯、巴豆酸酯和苯甲酸酯。合适的酯的具体例子包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亚乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酸酯)、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苄基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯。合适的碳酸酯的例子包括9-芴基甲基碳酸酯、乙基碳酸酯、2,2,2-三氯乙基碳酸酯、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯、2-(苯基磺酰基)乙基碳酸酯、乙烯基碳酸酯、烯丙基碳酸酯和对硝基苄基碳酸酯。合适的甲硅烷基醚的例子包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三异丙基甲硅烷基醚和其他三烷基甲硅烷基醚。合适的烷基醚的例子包括甲基醚、苄基醚、对甲氧基苄基醚、3,4-二甲氧基苄基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚和烯丙基醚、或其衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛，如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、苄氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氢吡喃-2-基醚。合适的芳基烷基醚的例子包括苄基醚、对甲氧基苄基(MPM)醚、3,4-二甲氧基苄基醚、邻硝基苄基醚、对硝基苄基醚、对卤代苄基醚、2,6-二氯苄基醚、对氰基苄基醚、2-吡啶甲基醚和4-吡啶甲基醚。
受保护的胺是本领域众所周知的并且包括在Greene(1999)中详细描述的那些。合适的单保护胺进一步包括但不限于芳烷基胺、氨基甲酸酯、烯丙基胺、酰胺等。合适的单保护氨基部分的例子包括叔丁氧基羰基氨基(-NHBOC)、乙氧基羰基氨基、甲氧基羰基氨基、三氯乙氧基羰基氨基、烯丙氧基羰基氨基(-NHAlloc)、苄氧基羰基氨基(-NHCBZ)、烯丙基氨基、苄基氨基(-NHBn)、芴基甲氧基羰基氨基(-NHFmoc)、甲酰胺基、乙酰胺基、氯乙酰胺基、二氯乙酰胺基、三氯乙酰胺基、苯基乙酰胺基、三氟乙酰胺基、苯甲酰胺基、叔丁基二苯基甲硅烷基等。合适的二保护胺包括被两个取代基(独立地选自上述作为单保护胺的那些)取代的胺，并且进一步包括环状酰亚胺，如邻苯二甲酰亚胺、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺等。合适的二保护胺还包括吡咯等、2,2,5,5-四甲基-[1,2,5]氮杂二噻咯烷等、以及叠氮化物。
受保护的醛是本领域众所周知的并且包括在Greene(1999)中详细描述的那些。合适的受保护醛进一步包括但不限于无环缩醛、环状缩醛、腙、亚胺等。此类基团的例子包括二甲基缩醛、二乙基缩醛、二异丙基缩醛、二苄基缩醛、双(2-硝基苄基)缩醛、1,3-二噁烷、1,3-二氧戊环、缩氨基脲及其衍生物。
受保护的羧酸是本领域众所周知的并且包括在Greene(1999)中详细描述的那些。合适的受保护的羧酸进一步包括但不限于任选取代的C1-6脂肪族酯、任选取代的芳基酯、甲硅烷基酯、活化的酯、酰胺、酰肼等。此类酯基团的例子包括甲酯、乙酯、丙酯、异丙酯、丁酯、异丁酯、苄酯和苯酯，其中每个基团任选地被取代。其他合适的受保护的羧酸包括噁唑啉和原酸酯。
受保护的硫醇是本领域众所周知的并且包括在Greene(1999)中详细描述的那些。合适的受保护的硫醇进一步包括但不限于二硫化物、硫醚、甲硅烷基硫醚、硫代酯、硫代碳酸酯和硫代氨基甲酸酯等。此类基团的例子包括但不限于烷基硫醚、苄基硫醚和取代的苄基硫醚、三苯基甲基硫醚和三氯乙氧基羰基硫代酯，仅举几例。
参考：如本文所用，描述与其进行比较的标准或对照。例如，在一些实施方案中，将目的药剂、动物、个体、群体、样品、序列或值与参考或对照药剂、动物、个体、群体、样品、序列或值进行比较。在一些实施方案中，与目的测试或确定基本上同时测试和/或确定参考或对照。在一些实施方案中，参考或对照是历史参考或对照，任选地以有形介质体现。典型地，如本领域技术人员所理解的，在与评估中的那些相当的条件或环境下确定或表征参考或对照。本领域技术人员将理解，当存在足够的相似性时才能证明对特定可能的参考或对照的依赖和/或比较是合理的。
取代：如本文所述，本公开文本的化合物可以含有任选取代的/取代的部分。通常，术语“取代的”无论前面是否有术语“任选地”均意指指定部分的一个或多个氢被合适取代基替代。除非另外指示，否则“任选取代的”基团可在该基团的每个可取代位置处具有合适取代基，且当任何给定结构中的超过一个位置可被超过一个选自指定群组的取代基取代时，在每个位置处的取代基可相同或不同。依据本公开文本预想的取代基组合优选地为引起形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。如本文所用，术语“稳定的”是指这样的化合物，当经受它们的生产、检测、以及在某些实施方案中它们的回收、纯化以及用于本文披露的一个或多个目的的用途所容许的条件时，它们基本上不改变。
合适的单价取代基包括卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro；-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；可被Ro取代的-(CH2)0-4Ph；可被Ro取代的-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph；可被Ro取代的-CH＝CHPh；可被Ro取代的-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)N(Ro)2；-N(Ro)C(S)N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)N(Ro)2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSi(Ro)3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4OC(O)N(Ro)2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2N(Ro)2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2N(Ro)2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)N(Ro)2；-Si(Ro)3；-OSi(Ro)3；-OSi(ORo)3；-P(Ro)2；-P(ORo)2；-OP(Ro)2；-OP(ORo)2；-N(Ro)P(Ro)2；-OP(O)(Ro)2；-OP(O)(ORo)2；-N(Ro)P(O)(Ro)2；-N(Ro)P(O)(ORo)2；-B(Ro)2；-OB(Ro)2；-OB(ORo)2；-P(O)(Ro)2；-OP(O)(Ro)2；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2；其中每个Ro可以如下文所定义的被取代并且独立地是氢，C1-20脂肪族，具有1-5个独立选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的C1-20杂脂肪族，-CH2-(C6-14芳基)，-O(CH2)0-1(C6-14芳基)，-CH2-(5-14元杂芳基环)，具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的5-20元单环、双环或多环饱和环、部分不饱和环或芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的o连同其一个或多个间插原子一起形成具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的3-20元单环、双环或多环饱和环、部分不饱和环或芳基环，其可以如下文所定义被取代。
Ro(或通过将两个独立出现的Ro连同其间插原子连接在一起形成的环)上的合适的单价取代基独立地是氢、-(CH2)0-2Rλ、-(卤代Rλ)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2ORλ、-(CH2)0-2CH(ORλ)2、-O(卤代Rλ)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)Rλ、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)ORλ、-(CH2)0-2SRλ、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHRλ、-(CH2)0-2NRλ 2、-NO2、-SiRλ 3、-OSiRλ 3、-C(O)SRλ、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)ORλ、或-SSRλ，其中每个Rλ未被取代或前面有“卤代”的其仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph和具有0-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环。Ro的饱和碳原子上合适的二价取代基包括＝O和＝S。
合适的二价取代基(例如，在合适的碳原子、氮原子等上)独立地包括以下：＝O、＝S、＝CR* 2、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2- 3O-、或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个R*可以如下文所定义被取代并且独立地是氢、C1-20脂肪族、具有1-5个独立选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的C1-20杂脂肪族，-CH2-(C6-20芳基)，-O(CH2)0-1(C6-20芳基)，-CH2-(具有1-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的5-20元杂芳基环)，具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的5-20元单环、双环或多环饱和环、部分不饱和环或芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的R*连同其一个或多个间插原子一起形成具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的3-20元单环、双环或多环饱和环、部分不饱和环或芳基环，其可以如下文所定义被取代。与“任选取代的”基团的邻位可取代原子结合的合适的二价取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-。
R*(或通过将两个独立出现的R*连同其间插原子连接在一起形成的环)上的合适的单价取代基独立地是氢、-(CH2)0-2Rλ、-(卤代Rλ)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2ORλ、-(CH2)0-2CH(ORλ)2、-O(卤代Rλ)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)Rλ、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)ORλ、-(CH2)0-2SRλ、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHRλ、-(CH2)0-2NRλ 2、-NO2、-SiRλ 3、-OSiRλ 3、-C(O)SRλ、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)ORλ、或-SSRλ，其中每个Rλ未被取代或前面有“卤代”的其仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph和具有0-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环。R*的合适二价取代基包括＝O和＝S。
在一些实施方案中，“任选取代的”基团的可取代氮上的合适取代基包括
Figure BDA0003196682070000331
Figure BDA0003196682070000341
其中每个
Figure BDA0003196682070000342
独立地是氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族、未取代的-OPh、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的
Figure BDA0003196682070000343
连同其一个或多个间插原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3-12元饱和环、部分不饱和环或芳基单环或双环。
在一些实施方案中，
Figure BDA0003196682070000344
的脂肪族基团上的合适取代基独立地是卤素、-Rλ、-(卤代Rλ)、-OH、-ORλ、-O(卤代Rλ)、-CN、-C(O)OH、-C(O)ORλ、-NH2、-NHRλ、-NRλ 2、或-NO2，其中每个Rλ未被取代或前面有“卤代”的其仅被一个或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环。
受试者：如本文所用，术语“受试者”或“测试受试者”是指对其根据本公开文本施用所提供的化合物或组合物的任何生物体，例如，用于实验、诊断、预防和/或治疗目的。典型的受试者包括动物(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人；昆虫；蠕虫等)和植物。在一些实施方案中，受试者可患有疾病、障碍和/或病症，和/或对疾病、障碍和/或病症易感。在一些实施方案中，受试者是人类。
易感：对疾病、障碍和/或病症易感的个体是比普通公众的一员有更高的患所述疾病、障碍和/或病症的风险的个体。在一些实施方案中，对疾病、障碍和/或病症易感的个体可能不会被诊断有所述疾病、障碍和/或病症。在一些实施方案中，对疾病、障碍和/或病症易感的个体可能表现出所述疾病、障碍和/或病症的症状。在一些实施方案中，对疾病、障碍和/或病症易感的个体可能不会表现出所述疾病、障碍和/或病症的症状。在一些实施方案中，对疾病、障碍和/或病症易感的个体将发展所述疾病、障碍和/或病症。在一些实施方案中，对疾病、障碍和/或病症易感的个体不会发展所述疾病、障碍和/或病症。
治疗剂：如本文所用，短语“治疗剂”是指当施用于受试者时具有治疗效果和/或引发所希望的生物学和/或药理学作用的药剂。在一些实施方案中，治疗剂是可用于减轻、改善、缓解、抑制、预防疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度和/或降低其发生率的任何物质。在一些实施方案中，所提供的化合物可用作治疗剂。
治疗方案：如本文所用的术语“治疗方案”是指给药方案，其在相关群体中的施用可能与期望的或有益的治疗结果相关。
治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”意指当作为治疗方案的一部分施用时引起期望的生物反应的物质(例如，治疗剂、组合物和/或配制品)的量。在一些实施方案中，物质的治疗有效量是当施用于患有疾病、障碍和/或病症或对疾病、障碍和/或病症易感的受试者时，足以治疗、诊断、预防所述疾病、障碍和/或病症和/或延迟其发作的量。如本领域普通技术人员将理解的，物质的有效量可根据诸如期望的生物学终点、待递送的物质、靶细胞或组织等因素而变化。例如，用于治疗疾病、障碍和/或病症的配制品中的化合物的有效量是减轻、改善、缓解、抑制、预防所述疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度和/或降低其发生率的量。在一些实施方案中，治疗有效量以单一剂量施用；在一些实施方案中，需要多个单位剂量来递送治疗有效量。在一些实施方案中，所提供的化合物以治疗有效量，以单一剂量或多个单位剂量施用。
治疗：如本文所用，术语“治疗(treat、treatment或treating)”是指用于部分或完全减轻、改善、缓解、抑制、预防疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度和/或降低其发生率的任何方法。治疗可以施用于没有表现出疾病、障碍和/或病症的迹象的受试者。在一些实施方案中，治疗可以施用于仅表现出疾病、障碍和/或病症的早期迹象的受试者，例如出于降低发展与所述疾病、障碍和/或病症相关的病理的风险的目的。
单位剂量：如本文所用的表达“单位剂量”是指作为单一剂量和/或以药物组合物的物理离散单位而施用的量。在许多实施方案中，单位剂量包含活性剂的预定量。在一些实施方案中，单位剂量包含药剂的整个单一剂量。在一些实施方案中，施用多于一个单位剂量以实现总单一剂量。在一些实施方案中，需要或预期需要施用多个单位剂量，以实现预期效果。单位剂量可以是例如液体的体积(例如，可接受的载体)，所述液体包含预定量的一种或多种治疗剂、预定量的一种或多种固体形式的治疗剂、持续释放配制品或含有预定量的一种或多种治疗剂等的药物递送装置。应当理解，单位剂量可以存在于配制品中，所述配制品包含除一种或多种治疗剂之外的多种组分中的任一种。例如，可如下所述地包括可接受的载体(例如，药学上可接受的载体)、稀释剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂等。本领域技术人员将理解，在许多实施方案中，特定治疗剂的总适当日剂量可以包括一部分或多个单位剂量，并且其可以例如由主治医师在合理的医学判断范围内确定。在一些实施方案中，用于任何特定受试者或生物体的具体有效剂量水平可以取决于多种因素，包括所治疗的障碍和障碍的严重程度；所采用的具体活性化合物的活性；所采用的具体组合物；受试者的年龄、体重、总体健康状况、性别以及饮食；施用时间和所采用的具体活性化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的一种或多种具体化合物组合或同时使用的药物和/或额外的疗法、以及医学领域中熟知的类似因素。
不饱和：如本文所用，术语“不饱和”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
野生型：如本文所用，术语“野生型”具有本领域理解的含义，指具有如在自然界中在“正常”(与突变的、患病的、改变的等相比)状态或环境中发现的结构和/或活性的实体。本领域普通技术人员将理解，野生型基因和多肽通常以多种不同形式(例如，等位基因)存在。
除非另有说明，否则包括所提供的化合物(例如，药剂、ARM等)的盐(如药学上可接受的酸或碱加成盐)、立体异构形式和互变异构形式。除非另有说明，否则本文描绘的结构还包括包含各种同位素(例如，氢被氘或氚替代，碳被13C或14C替代等)的化合物。在一些实施方案中，包含化合物的组合物包含在化合物中的富集水平的同位素。除了其他方面，此类化合物和组合物可用作分析工具、生物测定中的探针或治疗剂等。
除非从上下文中另外清楚可见，否则在本公开文本中，(i)术语“一个/种”可以理解为表示““至少一个/种”；(ii)术语“或”可理解为表示“和/或”；(iii)术语“包含”和“包括”可以理解为涵盖逐项列出的组分或步骤，无论是单独呈现还是与一个或多个额外组分或步骤一起呈现；(iv)术语“约”和“大约”可以理解为允许本领域普通技术人员所知晓的标准变化；(v)在提供范围的地方，包括端点。
3.细胞免疫疗法
各种免疫细胞，特别是NK细胞，可与本文所述的药剂一起使用以治疗包括癌症在内的各种病症、障碍或疾病。此类细胞可以在本文所述的药剂(例如，ARM)之前、同时和/或之后施用。在一些实施方案中，此类细胞(例如，NK细胞)与药剂(例如，ARM)以包含NK细胞和ARM两者的同一组合物同时施用。在一些实施方案中，此类细胞(例如，NK细胞)与药剂(例如，ARM)以分开的组合物(例如，一种包含NK细胞但不包含ARM的组合物和一种包含ARM但不包含NK细胞的组合物)同时施用。
如本领域技术人员所理解的，有用的免疫细胞如NK细胞可以来自各种来源和/或被多种方法工程化。例如，在一些实施方案中，NK细胞源自干细胞。在一些实施方案中，NK细胞源自iPSC系。在一些实施方案中，NK细胞源自克隆的主iPSC系。在一些实施方案中，NK细胞被工程化以表达某些受体，例如，高亲和力、任选的不可切割的CD16受体。在一些实施方案中，NK细胞被工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)，例如，在一些实施方案中，NK细胞可被工程化以表达抗CD19 CAR。在一些实施方案中，NK细胞是CAR-NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞被工程化以表达细胞因子受体。在一些实施方案中，NK细胞包含IL-15受体融合物，其在不需要共同施用细胞因子支持的情况下增强持久性和扩增能力。在一些实施方案中，NK细胞被工程化以阻止某些细胞蛋白(例如，某些细胞表面蛋白)的表达。在一些实施方案中，NK细胞被工程化以阻止CD38的表达。在一些实施方案中，NK细胞源自胎盘。在一些实施方案中，NK细胞是供体NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞是单倍体相同的供体NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞是错配的供体NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞是相关的供体NK细胞，例如，错配的相关供体NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞是无关的供体NK细胞。在一些实施方案中，NK细胞源自受试者，例如，患者。在一些实施方案中，所提供的技术包括先天细胞接合物，例如，与先天细胞(例如，NK细胞和巨噬细胞)结合同时与特定肿瘤细胞结合的先天细胞接合物。在一些实施方案中，NK细胞源自脐带血干细胞和祖细胞。在一些实施方案中，NK细胞通过信号传导通路(例如，Notch信号传导通路)的调节而获得。在一些实施方案中，纳米颗粒用于改善和/或维持NK细胞的生长。在一些实施方案中，如本文所述，NK细胞是离体产生的。在一些实施方案中，NK细胞可以作为现成细胞疗法以多剂量冷冻保存和储存。某些此类技术的例子包括Fate Therapeutics、NantKwest Inc.、Celularity,Inc.、GCPharma、Sorrento Therapeutics,Inc.、Affimed GmbH/MD Anderson Cancer Center、Gamida Cell Ltd.、Nohla Therapeutics、Kiadis Pharma N.V.等公司所使用的那些。本领域技术人员将理解，在所提供的包含本文所述的ARM的技术中可能不需要针对某些此类技术中使用的特定抗原的抗体和/或CAR，它们可以任选地使用。
细胞群/制剂
在一些实施方案中，有用的细胞(例如，NK细胞)在施用于受试者之前被加工。在许多实施方案中，NK细胞在施用于受试者之前在体外被富集、预活化和/或扩增。在一些实施方案中，与参考组合物(例如，来自待施用这种组合物的受试者的血液)相比，用于施用的包含NK细胞的组合物富含NK细胞。在一些实施方案中，富集是或包含单位体积(例如，每mL)的细胞数增加。在一些实施方案中，富集是或包含此类组合物中NK细胞的百分比增加。在一些实施方案中，富集是或包含单位体积的细胞数增加并且组合物中NK细胞的百分比增加。在一些实施方案中，组合物是基本上纯的NK细胞组合物，因为组合物中的非NK细胞是来自生产过程的“杂质”(例如，由于不完全的分离、纯化等)。如本领域技术人员所理解的，化学和生物过程很少(如果有的话)完成和/或进行到完成或实现或避免绝对结果。因此，术语“基本上”在本公开文本中用于获得在许多生物和化学现象中潜在缺少的固有完整性。
用于富集NK细胞的多种技术在本领域中是可用的并且可以根据本公开文本而使用。例如，在一些实施方案中，NK细胞使用白细胞单采术分离，任选地伴随纯化步骤，如CD3耗竭和/或CD56阳性选择。在一些实施方案中，与参考NK细胞群(例如，供体或受试者血液中的NK细胞)相比，NK细胞(例如，预活化的记忆样NK细胞)富集CD56并耗尽CD3表达细胞。
在施用于受试者之前，NK细胞通常被预活化，例如，用细胞因子(例如，IL-12、IL-15和IL-18)预活化合适的时间段(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25或更多小时，例如，约16小时)。在一些实施方案中，在施用之前用细胞因子处理NK细胞。在一些实施方案中，将NK细胞用合适量的IL-12(例如，约10ng/mL)、IL-15(例如，50ng/mL)和IL-18(例如，50ng/mL)处理合适的时间段(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25或更多小时，例如，约16小时)以使它们预活化。NK细胞的预活化条件和预活化的NK细胞可以通过评估一种或多种标记物(例如，CD94、NKG2A、NKp46、CD25、NKp30、NKp44、CD62L、CD27、TRAIL、细胞毒性分子穿孔素和颗粒酶B等)来评估。某些有用的标记物描述于以下文献中：Romee等人,Blood 120,4751-4760,(2012)；Leong等人,Biol.Blood Marrow Transplant.20,463-473(2014)；Romee等人,Sci Transl Med.2016年9月21日；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341；等等。在一些实施方案中，NK细胞是经由用IL-12、IL-15和IL-18预活化在体外分化成记忆样NK细胞的原代人NK细胞。
除了其他方面，这种细胞因子诱导的记忆样NK细胞在预活化后数周至数月内表现出对细胞因子或活化性受体再刺激的反应增强，并且可特别用于治疗包括癌症在内的各种病症、障碍或疾病。在一些实施方案中，此类预活化的记忆样NK细胞具有增强的干扰素-γ(IFN-γ)产生和/或针对靶细胞(例如，癌细胞)的细胞毒性。用于制备、评估和施用此类NK细胞的示例性程序可以在以下文献中找到：Romee等人,Blood 120,4751-4760,(2012)；Leong et al.,Biol.Blood Marrow Transplant.20,463-473(2014)；Romee等人,SciTransl Med.2016年9月21日；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341；等等。在一些实施方案中，与可比较的参考NK细胞(例如，类似制备但未预活化(例如，未用细胞因子处理，仅用低剂量IL-15处理等)的NK细胞)，此类NK细胞具有增强的增殖、表达或表达更高水平的高亲和力IL-2受体αβγ，和/或在再刺激(例如，用细胞因子或经由活化性受体等)后提供增加的IFN-γ产生。
与参考NK细胞相比，预活化的记忆样NK细胞在许多蛋白质(例如，CD94、NKG2A、NKp46、CD25、NKp30、NKp44、CD62L、CD27、TRAIL、细胞毒性分子穿孔素和颗粒酶B等)的表达方面可能具有显著差异。在一些实施方案中，此类NK细胞表现出NKp80表达的降低。除了其他方面，此类标记物可用于单独或组合地富集、纯化和/或鉴定记忆样NK细胞。示例性有用标记物可以使用多种技术来鉴定，例如，大量细胞计数法和多维分析。用于鉴定可区分预活化记忆样NK细胞与参考(例如，对照)NK细胞的蛋白质的示例性程序和示例性此类蛋白质描述于Romee等人,Sci Transl Med.2016年9月21日；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341中。
在一些实施方案中，免疫细胞(例如，NK细胞)与GSK3α/β抑制剂接触。在一些实施方案中，此类细胞被GSK3α/β抑制剂预活化。
在一些实施方案中，免疫细胞是细胞因子诱导型记忆样NK细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是IL-12、IL-15和IL-18预活化的NK细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是同种异体的、HLA-单倍体相同的、IL-12、IL-15和IL-18预活化的NK细胞。本发明不受任何限制，IL-12、IL-15和IL-18预活化后的记忆样NK细胞可能由包括分化的过程产生，所述分化产生长期功能能力改变。具有这种功能能力的记忆样NK细胞可以通过用其他药剂(例如，其他细胞因子，或其他小分子、肽、蛋白质等)处理来制备。用于评估诸如药剂和/或结果NK细胞的治疗的技术(例如，蛋白质标记物、测定等)是本领域可用的并且可以根据本公开文本来使用(例如，Romee等人,Sci Transl Med.2016年9月21日；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341中所述的那些技术)。在一些实施方案中，记忆样NK细胞具有抑制性受体、活化性受体和细胞因子受体(例如，CD94/NKG2A、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、CD62L和CD25等)的增加的表达，和/或某些蛋白质(例如，NKp80)的降低的表达。在一些实施方案中，某些受体的水平基本不变(例如，KIR、CD57、NKG2C、DNAM-1、CD137、CD11b等)。在一些实施方案中，活化、抑制、细胞因子和粘附受体的变化与分化一致。在一些实施方案中，被细胞因子预活化提供了对某些基因(例如，IFN-γ)的表观遗传调节。例如，在一些实施方案中，IL-12、IL-15和IL-18活化(例如，持续5天)导致人NK细胞中IFN-γ保守非编码序列1基因座的甲基化减少。在一些实施方案中，某些预活化的NK细胞(例如，细胞因子诱导的细胞)以增强的活化状态存在而没有实质性分化。
在一些实施方案中，NK细胞在预活化后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周，或4、5、6、7、8、9、10、11个月或数月内施用。
除了其他方面，本公开文本包括以下认知，即具有增强的性质和/或活性的此类NK细胞可以提供增强的癌细胞抑制或杀伤，可能导致更多和/或更严重的副作用和/或毒性，例如，对正常细胞的脱靶毒性。因此，在一些实施方案中，本公开文本提供了用于减少此类副作用和/或毒性的技术，所述技术包括施用一种或多种药剂(特别是ARM)，所述一种或多种药剂尤其可以促进、鼓励和/或增强NK细胞与其靶标的相互作用并减少与NK细胞施用相关的副作用和/或毒性。
在一些实施方案中，NK细胞被扩增，例如，在预活化之前、期间和/或之后。在一些实施方案中，NK细胞在施用前被纯化以去除例如某些培养基(或其组分)、活化性细胞因子等。
在一些实施方案中，待施用于受试者的NK细胞是从受试者分离和/或扩增的(自体的)。在一些实施方案中，待施用于受试者的NK细胞是从另一受试者分离和/或扩增的(同种异体的；例如，来自HLA-单倍体相同的供体)。
在一些实施方案中，在施用前处理(例如，分离、纯化、预活化等)如上所述的NK细胞。在一些实施方案中，用于施用的NK细胞组合物包含某些人工培养基或其组分，例如，含有L-谷氨酰胺、HEPES、NEAA、青霉素/链霉素和10％人AB血清且任选地补充有支持存活的rhIL-15(1ng/mL)的完全RPMI-1640培养基。
施用
免疫细胞(例如，预活化的记忆样NK细胞)可以以本领域已知的各种形式配制用于向受试者施用。根据要治疗的受试者和/或病症、障碍或疾病，施用合适量的细胞以提供临床益处。在一些实施方案中，细胞剂量水平是0.01-100、0.1-50、0.1-20、0.1-10、0.05、0.1、0.2、0.3、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80或90百万个/千克。在一些实施方案中，剂量水平是0.5x106个/kg。在一些实施方案中，剂量水平是1x106个/kg。在一些实施方案中，剂量水平不超过10x106个/kg。如本领域技术人员所理解的，与未活化的NK细胞或非记忆样的预活化NK细胞(例如，仅用IL-2或IL-15处理例如持续过夜)相比，预活化的记忆样NK细胞可以以较低水平施用以实现相同或更多的临床益处，或在以相同水平施用时提供更多的临床益处。
在许多实施方案中，经由静脉内输注施用细胞。在一些实施方案中，经由输注施用包含细胞(例如，预活化的NK细胞)的组合物。在一些实施方案中，通过过继转移施用此类组合物。
在一些实施方案中，将受试者(例如，AML患者)用化疗药物预处理(例如，在第0天)以施用细胞。例如，在一些实施方案中，将AML患者在第0天用氟达拉滨/环磷酰胺预处理。
在一些实施方案中，在施用诸如ARM的药剂之前施用免疫细胞(例如，预活化的NK细胞)。在一些实施方案中，它们与诸如ARM的药剂同时施用。在一些实施方案中，它们在诸如ARM的药剂之后施用。在一些实施方案中，当不同时施用时，免疫细胞(例如，预活化的NK细胞)和诸如ARM的药剂以受试者暴露于这两者的方式施用。用于施用NK细胞的某些技术描述于Miller等人,Blood 105,3051-3057(2005)中，并且可以根据本公开文本来使用。
在一些实施方案中，在施用免疫细胞之后或同时，施用某些细胞因子以支持所施用的免疫细胞。在一些实施方案中，施用通常低剂量的rhIL-2以通过其诱导的高亲和力IL-2Rαβγ来支持记忆样NK细胞。例如，参见Leong等人,Biol.Blood Marrow Transplant,20,463-473(2014)。
在一些实施方案中，例如，使用供体或患者特异性抗HLA单克隆抗体在具有信息性HLA的受试者的血液中追踪供体记忆样NK细胞。在一些实施方案中，此类细胞在例如输注后第7至14天达到频率峰值，并且在接受者T细胞恢复后数量可能减少。如果需要，可以施用额外剂量的此类NK细胞(在一些实施方案中，可以施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个剂量)。在一些实施方案中，在施用后的某个时间(例如，在第7天)，记忆样NK细胞包含不少于约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、或90％的血液NK细胞。在一些实施方案中，所述水平超过约10％。在一些实施方案中，所述水平超过约20％。在一些实施方案中，所述水平超过约30％。在一些实施方案中，所述水平超过约40％。在一些实施方案中，所述水平超过约50％。在一些实施方案中，所述水平超过约60％。在一些实施方案中，所述水平超过约70％。在一些实施方案中，所述水平超过约80％。在一些实施方案中，所述水平超过约90％。在一些实施方案中，例如，相比于第1天和稍后的时间点(例如，第7天)，血液中的记忆样NK细胞的计数增加至少50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000倍。在一些实施方案中，所述增加为至少100倍。在一些实施方案中，所述增加为至少200倍。在一些实施方案中，所述增加为至少300倍。在一些实施方案中，所述增加为至少400倍。在一些实施方案中，所述增加为至少500倍。在一些实施方案中，所述增加为至少600倍。在一些实施方案中，所述增加为至少700倍。在一些实施方案中，所述增加为至少800倍。在一些实施方案中，所述增加为至少900倍。在一些实施方案中，所述增加为至少1000倍。通常，在施用记忆样NK细胞后(例如，在第5、6、7、8、9、10、11、12、13和/或14天)，记忆样NK细胞的百分比和绝对数量(计数)也增加到例如上述的百分比(例如，不低于约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％或90％；在一些实施方案中，至少90％)和计数(例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000倍或更多；在一些实施方案中，100、200、300、400、500、600倍或更多)。
在一些实施方案中，施用后记忆样NK细胞具有增强的功能，例如，如通过刺激后增加的IFN-γ产生所证明的。
在一些实施方案中，记忆样NK细胞在施用后(例如，在第3天和/或第7天)具有增加的增殖(Ki-67+)。
在一些实施方案中，预活化的记忆样NK细胞是细胞因子诱导型记忆样NK细胞。在一些实施方案中，记忆样NK细胞表达抑制性KIR受体。在一些实施方案中，无论KIR-配体相互作用如何，此类细胞都可以执行一种或多种功能(例如，抑制和/或杀伤靶细胞如癌细胞)。
在一些实施方案中，施用的免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)在受试者的血液和骨髓中可检测持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间。在一些实施方案中，此类细胞在施用于受试者后在体内增殖和/或扩增。在一些实施方案中，此类细胞在受试者体内分化并且表现出针对靶标如癌细胞(例如，白血病细胞)的增强的功能性。
在一些实施方案中，免疫细胞(例如，预活化的NK细胞)与ARM同时施用。在一些实施方案中，它们以单一组合物施用。在一些实施方案中，它们作为分开的组合物施用。
在一些实施方案中，还可以与ARM一起施用适量的抗体，在同一组合物中或在分开的组合物中(并且任选地可以在ARM之前、同时或之后施用)。在一些实施方案中，施用包含ARM、预活化的NK细胞和任选的抗体或其片段的组合物。在一些实施方案中，施用包含ARM、预活化的NK细胞和任选的IgM的组合物，所述ARM包含uABT。在一些实施方案中，所提供的组合物包含复合物，所述复合物包含NK细胞、抗体或其片段和ARM。在一些实施方案中，在这样的复合物中，NK细胞的CD16a受体与抗体或其片段相互作用，并且ARM的抗体结合部分与同一抗体或其片段相互作用。
4.示例性ARM药剂
可以根据本公开文本使用各种ARM药剂。在一些实施方案中，ARM包含与Fab区相互作用的抗体结合部分，并且可以优选地结合并募集含有此类Fab区的抗体(和/或其片段)。在一些实施方案中，ARM包含与Fc区相互作用的抗体结合部分(例如，本文所述的uABT)，并且可以结合并募集含有此类Fc区的各种抗体(和/或其片段)。如本领域技术人员所理解的，由此类ARM募集的抗体(和/或其片段)可以含有不同的Fab区并且可以具有不同的特异性。在一些实施方案中，没有单个募集的抗体(或其片段)具有超过1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％或90％的总募集抗体及其片段。
在某些实施方案中，有用的ARM是式I的化合物：
Figure BDA0003196682070000441
或其药学上可接受的盐，其中：
ABT是抗体结合部分；
L是连接ABT与TBT的二价接头部分；并且
TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，有用的ARM是式I-a的化合物或其盐。在一些实施方案中，有用的ARM是式I-b的化合物或其盐。
在某些实施方案中，有用的ARM是式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R3和R5各自独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R5基团和附接到同一碳原子的R5’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；或者
两个R5基团任选地连同其间插原子一起形成C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
R1’、R3’和R5’各自独立地是氢或C1-3脂肪族；
R2、R4和R6各自独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R2和R1任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R4和R3任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；或者
R6基团及其相邻的R5基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
L1是连接
Figure BDA0003196682070000451
的三价接头部分；
L2是共价键或C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070000461
Figure BDA0003196682070000462
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
TBT是靶标结合部分；并且
m和n各自独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。
在某些实施方案中，有用的ARM是式III的化合物：
Figure BDA0003196682070000463
或其药学上可接受的盐，其中：
每个R7独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R7基团和附接到同一碳原子的R7’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
每个R7'独立地是氢或C1-3脂肪族；
每个R8独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R8基团及其相邻的R7基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R9是氢、C1-3脂肪族或-C(O)C1-3脂肪族；
L3是连接
Figure BDA0003196682070000471
与TBT的二价接头部分；
TBT是靶标结合部分；并且
o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体结合部分
各种抗体结合部分是本领域已知的并且可以根据本公开文本来使用。
在一些实施方案中，抗体结合部分主要与Fab区相互作用。在一些实施方案中，抗体结合部分主要与包含某些Fab结构和/或针对某些抗原的抗体和/或其片段相互作用。
在一些实施方案中，抗体结合部分与Fc区相互作用。在一些实施方案中，本文所述的抗体结合部分(例如，uABT)与Fc区相互作用并且可以募集已连接至具有不同结构和/或抗原特异性的Fab区的Fc区。在一些实施方案中，有用的药剂包含通用抗体结合部分，所述通用抗体结合部分可以结合具有不同Fab区和不同特异性的抗体。在一些实施方案中，抗体结合部分是与Fc区结合的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，抗体结合部分与抗体(或其片段)的结合(例如，uABT与Fc区的结合)可以与Fc受体(例如，CD16a)与相同抗体(或其片段)的结合同时发生(例如，在uABT与Fc结合的情况下，可以在相同Fc区的不同位置/氨基酸残基处发生)。在一些实施方案中，在结合通用抗体结合部分后，Fc区仍可与Fc受体相互作用并执行其一种或多种或所有免疫活性，包括免疫细胞(例如，效应细胞，如NK细胞)的募集，和/或触发、产生、鼓励和/或增强针对靶细胞、组织、物体和/或实体的免疫系统活动，例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或ADCP。
可以根据本公开文本使用各种通用抗体结合部分，并且许多技术(例如，实施例中所述的那些)可用于鉴定和/或评估通用抗体结合部分。在一些实施方案中，通用抗体结合部分包含一个或多个氨基酸残基，每个氨基酸残基独立地是天然的或非天然的。在一些实施方案中，通用抗体结合部分具有结构
Figure BDA0003196682070000481
或其盐形式。在一些实施方案中，通用抗体结合部分具有结构
Figure BDA0003196682070000482
或其盐形式。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含肽部分，例如，具有结构Rc-(Xaa)z-的部分。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含环肽部分，例如，具有结构
Figure BDA0003196682070000483
的部分。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是Rc-(Xaa)z-或
Figure BDA0003196682070000484
并且是或包含肽单元。在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含肽单元。在一些实施方案中，肽单元包含氨基酸残基，例如，具有带正电荷的侧链的式A-I的氨基酸残基(例如，在生理pH约7.4下，“带正电荷的氨基酸残基”，XaaP)。在一些实施方案中，肽单元包含R。在一些实施方案中，至少一个Xaa是R。在一些实施方案中，肽单元是或包含APAR。在一些实施方案中，肽单元是或包含RAPA。在一些实施方案中，肽单元包含氨基酸残基，例如，具有包含芳族基团的侧链的式A-I的氨基酸残基(“芳族氨基酸残基”，XaaA)。在一些实施方案中，肽单元包含带正电荷的氨基酸残基和芳族氨基酸残基。在一些实施方案中，肽单元包含W。在一些实施方案中，肽单元包含带正电荷的氨基酸残基和芳族氨基酸残基。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaAXaaXaaPXaaP。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaPXaaPXaaXaaA。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaPXaaAXaaP。在一些实施方案中，肽单元是或包含两个或更多个XaaPXaaAXaaP。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaPXaaAXaaPXaaXaaPXaaAXaaP。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaPXaaPXaaAXaaAXaaP。在一些实施方案中，肽单元是或包含XaaPXaaPXaaPXaaA。在一些实施方案中，肽单元是或包含两个或更多个XaaAXaaAXaaP。在一些实施方案中，肽残基包含一个或多个脯氨酸残基。在一些实施方案中，肽单元是或包含HWRGWA。在一些实施方案中，肽单元是或包含WGRR。在一些实施方案中，肽单元是或包含RRGW。在一些实施方案中，肽单元是或包含NRFRGKYK。在一些实施方案中，肽单元是或包含NARKFYK。在一些实施方案中，肽单元包含带正电荷的氨基酸残基、芳族氨基酸残基、和以下氨基酸残基，例如，具有带负电荷的侧链的式A-I的氨基酸残基(例如，在生理pH约7.4下，“带负电荷的氨基酸残基”，XaaN)。在一些实施方案中，肽残基是RHRFNKD。在一些实施方案中，肽单元是TY。在一些实施方案中，肽单元是TYK。在一些实施方案中，肽单元是RTY。在一些实施方案中，肽单元是RTYK。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自PAM的序列。在一些实施方案中，肽单元是WHL。在一些实施方案中，肽单位是ELVW。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自AWHLGELVW的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自DCAWHLGELVWCT的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如在天然蛋白质中发现的二硫键。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自Fc-III的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自DpLpAWHLGELVW的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自FcBP-1的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自DpLpDCAWHLGELVWCT的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自FcBP-2的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自CDCAWHLGELVWCTC的序列，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以各自独立地形成如在天然蛋白质中的二硫键。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自Fc-III-4c的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含选自FcRM的序列。在一些实施方案中，肽单元是或包含环肽单元。在一些实施方案中，环肽单元包含由侧链的氨基基团和C末端的-COOH形成的酰胺基团。
在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含[X1]p1[X2]p2-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-[X13]p13-[X14]p14[X15]p15[X16]p16，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13各自独立地是氨基酸残基，例如，式A-I的氨基酸残基，并且p1、p2、p13、p14、p15和p16各自独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13各自独立地是式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13各自独立地是天然氨基酸残基。在一些实施方案中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13中的一个或多个独立地是如本公开文本中所述的非天然氨基酸残基。
在一些实施方案中，肽单元在氨基酸残基中包含可与另一个氨基酸残基的官能团反应的官能团。在一些实施方案中，肽单元包含具有侧链的氨基酸残基，所述侧链包含可与另一氨基酸残基的侧链的另一官能团反应以形成键联的官能团(例如，参见表1中的化合物)。在一些实施方案中，一个氨基酸残基的一个官能团与另一氨基酸残基的官能团连接以形成键联(或桥)。键联与肽单元的骨架原子键合且不包含骨架原子。在一些实施方案中，肽单元包含由不相邻氨基酸残基的两条侧链形成的键联。在一些实施方案中，键联与两个不相邻氨基酸残基的两个骨架原子键合。在一些实施方案中，键合至键联的两个骨架原子都是碳原子。在一些实施方案中，键联具有Lb的结构，其中Lb是如在本公开文本中所述的La，其中La不是共价键。在一些实施方案中，La包含-Cy-。在一些实施方案中，La包含-Cy-，其中-Cy-是任选取代的杂芳基。在一些实施方案中，-Cy-是
Figure BDA0003196682070000501
在一些实施方案中，La是
Figure BDA0003196682070000502
在一些实施方案中，这样的La可以由一个氨基酸残基的侧链的-N3基团和另一个氨基酸残基侧链的-≡-形成。在一些实施方案中，通过连接两个硫醇基团(例如，两个半胱氨酸残基)形成键联。在一些实施方案中，La包含-S-S-。在一些实施方案中，La是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施方案中，通过连接氨基基团(例如，赖氨酸残基侧链中的-NH2)和羧酸基团(例如，天冬氨酸或谷氨酸残基侧链中的-COOH)形成键联。在一些实施方案中，La包含-C(O)-N(R’)-。在一些实施方案中，La包含-C(O)-NH-。在一些实施方案中，La是-CH2CONH-(CH2)3-。在一些实施方案中，La包含-C(O)-N(R’)-，其中R'是R并且连同肽主链上的R基团一起形成环(例如，在I-27中)。在一些实施方案中，La是-(CH2)2-N(R’)-CO--(CH2)2-。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的亚苯基。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的1,2-亚苯基。在一些实施方案中，La是
Figure BDA0003196682070000503
在一些实施方案中，La是
Figure BDA0003196682070000504
在一些实施方案中，La是任选取代的二价C2-20二价脂肪族。在一些实施方案中，La是任选取代的-(CH2)9-CH＝CH-(CH2)9-。在一些实施方案中，La是-(CH2)3-CH＝CH-(CH2)3-。
在一些实施方案中，与键联键合的两个氨基酸残基被它们之间的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超过15个氨基酸残基(不包括与键联键合的两个氨基酸残基)隔开。在一些实施方案中，所述数量是1。在一些实施方案中，所述数量是2。在一些实施方案中，所述数量是3。在一些实施方案中，所述数量是4。在一些实施方案中，所述数量是5。在一些实施方案中，所述数量是6。在一些实施方案中，所述数量是7。在一些实施方案中，所述数量是8。在一些实施方案中，所述数量是9。在一些实施方案中，所述数量是10。在一些实施方案中，所述数量是11。在一些实施方案中，所述数量是12。在一些实施方案中，所述数量是13。在一些实施方案中，所述数量是14。在一些实施方案中，所述数量是15。
在一些实施方案中，p1、p2、p13、p14、p15和p16各自是0。在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X12是XaaA或XaaP。
在一些实施方案中，X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是如在本公开文本中所述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，X5是XaaA或XaaP。在一些实施方案中，X5是XaaA。在一些实施方案中，X5是XaaP。在一些实施方案中，X5是如下氨基酸残基，其侧链包含任选取代的饱和环、部分饱和环或芳环。在一些实施方案中，X5是
Figure BDA0003196682070000511
在一些实施方案中，X5是
Figure BDA0003196682070000512
在一些实施方案中，X6是XaaA。在一些实施方案中，X6是XaaP。在一些实施方案中，X6是His。在一些实施方案中，X12是XaaA。在一些实施方案中，X12是XaaP。在一些实施方案中，X9是Asp。在一些实施方案中，X9是Glu。在一些实施方案中，X12是
Figure BDA0003196682070000513
在一些实施方案中，X12是
Figure BDA0003196682070000514
在一些实施方案中，X7、X10和X11各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。在一些实施方案中，X7是XaaH。在一些实施方案中，X7是
Figure BDA0003196682070000521
在一些实施方案中，X7是Val。在一些实施方案中，X10是XaaH。在一些实施方案中，X10是Met。在一些实施方案中，X10是
Figure BDA0003196682070000522
在一些实施方案中，X11是XaaH。在一些实施方案中，X11是
Figure BDA0003196682070000523
在一些实施方案中，X8是Gly。在一些实施方案中，X4是Pro。在一些实施方案中，X3是Lys。在一些实施方案中，X12的-COOH与Lys(X3)的侧链氨基基团形成酰胺键，并且Lys(X3)的另一个氨基基团与接头部分然后与靶标结合部分连接。
在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X12是XaaA或XaaP。
在一些实施方案中，X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是如在本公开文本中所述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，两个不相邻氨基酸残基通过Lb连接。在一些实施方案中，X5和X10通过Lb连接。在一些实施方案中，存在一个键联Lb。在一些实施方案中，X6是XaaA。在一些实施方案中，X6是XaaP。在一些实施方案中，X6是His。在一些实施方案中，X9是Asp。在一些实施方案中，X9是Glu。在一些实施方案中，X12是XaaA。在一些实施方案中，X12是
Figure BDA0003196682070000531
在一些实施方案中，X12是
Figure BDA0003196682070000532
在一些实施方案中，X12是
Figure BDA0003196682070000533
在一些实施方案中，X4、X7和X11各自独立地是XaaH。在一些实施方案中，X4是XaaH。在一些实施方案中，X4是Ala。在一些实施方案中，X7是XaaH。在一些实施方案中，X7是
Figure BDA0003196682070000534
在一些实施方案中，X11是XaaH。在一些实施方案中，X11是
Figure BDA0003196682070000535
在一些实施方案中，X8是Gly。在一些实施方案中，X3是Lys。在一些实施方案中，X12的-COOH与Lys(X3)的侧链氨基基团形成酰胺键，并且Lys(X3)的另一个氨基基团与接头部分然后与靶标结合部分连接。在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000536
在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000537
在一些实施方案中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施方案中，X5和X10都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。
在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X4是XaaA；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；并且
X11是XaaA。
在一些实施方案中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是如在本公开文本中所述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，两个不相邻氨基酸残基通过Lb连接。在一些实施方案中，存在一个键联Lb。在一些实施方案中，X2和X12通过Lb连接。在一些实施方案中，Lb是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施方案中，Lb是-CH2-CH2-S-CH2-。在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000541
在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000542
在一些实施方案中，Lb是-CH2CH2CO-N(R’)-CH2CH2-。在一些实施方案中，R'连同与-N(R’)-CH2CH2-键合的骨架原子上的R基团一起形成环，例如，如在I-27中的环。在一些实施方案中，所形成的环是3、4、5、6、7或8元环。在一些实施方案中，所形成的环是单环。在一些实施方案中，所形成的环是饱和环。在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000543
在一些实施方案中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施方案中，X4是XaaA。在一些实施方案中，X4是Tyr。在一些实施方案中，X5是XaaA。在一些实施方案中，X5是XaaP。在一些实施方案中，X5是His。在一些实施方案中，X8是Asp。在一些实施方案中，X8是Glu。X11是Tyr。在一些实施方案中，X2和X12都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施方案中，X3、X6、X9和X10各自独立地是XaaH。在一些实施方案中，X3是XaaH。在一些实施方案中，X3是Ala。在一些实施方案中，X6是XaaH。在一些实施方案中，X6是Leu。在一些实施方案中，X9是XaaH。在一些实施方案中，X9是Leu。在一些实施方案中，X9是
Figure BDA0003196682070000544
在一些实施方案中，X10是XaaH。在一些实施方案中，X10是Val。在一些实施方案中，X10是
Figure BDA0003196682070000545
在一些实施方案中，X7是Gly。在一些实施方案中，p1是1。在一些实施方案中，X1是Asp。在一些实施方案中，p13是1。在一些实施方案中，p14、p15和p16是0。在一些实施方案中，X13是包含极性不带电侧链的氨基酸残基(例如，在生理pH下，“极性不带电氨基酸残基”，XaaL)。在一些实施方案中，X13是Val。在一些实施方案中，p13是0。在一些实施方案中，Rc是-NHCH2CH(OH)CH3。在一些实施方案中，Rc是(R)-NHCH2CH(OH)CH3。在一些实施方案中，Rc是(S)-NHCH2CH(OH)CH3。
在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；并且
X11是XaaA。
在一些实施方案中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是如在本公开文本中所述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，两个不相邻氨基酸残基通过Lb连接。在一些实施方案中，存在一个键联Lb。在一些实施方案中，存在两个或更多个键联Lb。在一些实施方案中，存在两个键联Lb。在一些实施方案中，X2和X12通过Lb连接。在一些实施方案中，X4和X9通过Lb连接。在一些实施方案中，X4和X10通过Lb连接。在一些实施方案中，Lb是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000551
在一些实施方案中，Lb是
Figure BDA0003196682070000552
在一些实施方案中，X2和X12都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施方案中，X4和X10都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施方案中，X4和X9通过Lb连接，其中Lb是
Figure BDA0003196682070000553
在一些实施方案中，X4和X9通过Lb连接，其中Lb是
Figure BDA0003196682070000561
在一些实施方案中，X5是XaaA。在一些实施方案中，X5是XaaP。在一些实施方案中，X5是His。在一些实施方案中，X8是Asp。在一些实施方案中，X8是Glu。在一些实施方案中，X11是Tyr。在一些实施方案中，X11是
Figure BDA0003196682070000562
在一些实施方案中，X2和X12通过Lb连接，其中Lb是-CH2-S-CH2CH2-。在一些实施方案中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施方案中，X3、X6和X9各自独立地是XaaH。在一些实施方案中，X3是XaaH。在一些实施方案中，X3是Ala。在一些实施方案中，X6是XaaH。在一些实施方案中，X6是Leu。在一些实施方案中，X6是
Figure BDA0003196682070000563
在一些实施方案中，X9是XaaH。在一些实施方案中，X9是Leu。在一些实施方案中，X9是
Figure BDA0003196682070000564
在一些实施方案中，X10是XaaH。在一些实施方案中，X10是Val。在一些实施方案中，X7是Gly。在一些实施方案中，p1是1。在一些实施方案中，X1是XaaN。在一些实施方案中，X1是Asp。在一些实施方案中，X1是Glu。在一些实施方案中，p13是1。在一些实施方案中，p14、p15和p16是0。在一些实施方案中，X13是XaaL。在一些实施方案中，X13是Val。
在一些实施方案中，-(Xaa)z-是或包含-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15和X16各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X3是XaaN；
X6是XaaA；
X7是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X13是XaaA。
在一些实施方案中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是如在本公开文本中所述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施方案中，两个不相邻氨基酸残基通过Lb连接。在一些实施方案中，存在一个键联Lb。在一些实施方案中，存在两个或更多个键联Lb。在一些实施方案中，存在两个键联Lb。在一些实施方案中，X2通过Lb连到X16。在一些实施方案中，X4通过Lb连到X14。在一些实施方案中，X2和X16都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施方案中，X4和X14都是Cys，并且它们侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施方案中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施方案中，X3是Asp。在一些实施方案中，X3是Glu。在一些实施方案中，X5是XaaH。在一些实施方案中，X5是Ala。在一些实施方案中，X6是XaaA。在一些实施方案中，X6是Tyr。在一些实施方案中，X7是XaaA。在一些实施方案中，X7是XaaP。在一些实施方案中，X7是His。在一些实施方案中，X8是XaaH。在一些实施方案中，X8是Ala。在一些实施方案中，X9是Gly。在一些实施方案中，X10是Asp。在一些实施方案中，X10是Glu。在一些实施方案中，X11是XaaH。在一些实施方案中，X11是Leu。在一些实施方案中，X12是XaaH。在一些实施方案中，X12是Val。在一些实施方案中，X13是XaaA。在一些实施方案中，X13是Tyr。在一些实施方案中，X15是包含极性不带电侧链的氨基酸残基(例如，在生理pH下，“极性不带电氨基酸残基”，XaaL)。在一些实施方案中，X15是Val。在一些实施方案中，p1是1。在一些实施方案中，在一些实施方案中，X1是XaaN。在一些实施方案中，X1是Asp。在一些实施方案中，X1是Glu。
如本领域技术人员所理解的，一个氨基酸残基可以被具有相似特性的另一个氨基酸残基替代，例如，一个XaaH(例如，Val、Leu等)可以被另一个XaaH(例如，Leu、Ile、Ala等)替代，一个XaaA可以被另一个XaaA替代，一个XaaP可以被另一个XaaP替代，一个XaaN可以被另一个XaaN替代，一个XaaL可以被另一个XaaL替代等。
在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分)是表1中化合物的通用抗体结合部分。在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分)是或包含任选取代的。
Figure BDA0003196682070000581
Figure BDA0003196682070000591
Figure BDA0003196682070000601
Figure BDA0003196682070000611
Figure BDA0003196682070000621
Figure BDA0003196682070000631
Figure BDA0003196682070000641
Figure BDA0003196682070000651
Figure BDA0003196682070000661
在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-1。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-2。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-3。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-4。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-5。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-6。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-7。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-8。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-9。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-10。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-11。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-12。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-13。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-14。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-15。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-16。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-17。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-18。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-19。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-20。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-21。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-22。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-23。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-24。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-25。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-26。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-27。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-28。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-29。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-30。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-31。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-32。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-33。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-34。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-35。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-36。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-37。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-38。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-39。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-40。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-41。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-42。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-43。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-44。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-45。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-46。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-47。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-48。在一些实施方案中，通用抗体结合部分是或包含任选取代的A-49。在一些实施方案中，其未被取代。在一些实施方案中，其被取代。
在一些实施方案中，通用抗体结合部分包含肽单元，并通过肽单元的C末端连接到接头部分。在一些实施方案中，它通过肽单元的N末端连接到接头部分。在一些实施方案中，它通过肽单元的侧链基团连接。
在一些实施方案中，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分)是或包含小分子实体，其分子量例如为小于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000、1500、1000等。合适的此类抗体结合部分包括小分子Fc结合部分，例如，在US 9,745,339、US20130131321等中描述的那些。
如本领域技术人员所理解的，具有各种特性和活性的抗体(例如，识别不同抗原、具有任选的修饰等的抗体)可以被本公开文本中所述的抗体结合部分募集。在一些实施方案中，此类抗体包括向受试者施用例如用于治疗目的的抗体。在一些实施方案中，由抗体结合部分募集的抗体包括针对不同抗原的抗体。在一些实施方案中，由抗体结合部分募集的抗体包括其抗原不存在于靶细胞(例如，诸如癌细胞等靶细胞)的表面或细胞膜上的抗体。在一些实施方案中，由抗体结合部分募集的抗体包括不靶向存在于靶标(例如，诸如癌细胞等靶细胞)的表面或细胞膜上的抗原的抗体。在一些实施方案中，靶细胞表面上的抗原可能干扰结合此类抗原的募集的抗体的结构、构象和/或一种或多种特性和/或活性。在一些实施方案中，如本领域技术人员所理解的，所提供的技术包括募集具有不同特异性的抗体的通用抗体结合部分，并且不超过1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的经募集的抗体针对同一抗原、蛋白质、脂质、糖类等。除了其他方面，本公开文本的一个优点是所提供的包含通用抗体结合部分的技术可以利用不同的抗体库，如存在于血清中的抗体库。在一些实施方案中，本公开文本的通用抗体结合部分(例如，ARM中的那些)与多种抗体接触，其中不超过1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的多种抗体针对同一抗原、蛋白质、脂质、糖类等。
氨基酸
在一些实施方案中，有用的化合物和药剂(例如，ARM)可以包含一个或多个氨基酸部分，例如，在通用抗体结合部分、接头部分等中的氨基酸部分。氨基酸部分可以是天然氨基酸或非天然氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸具有式A-I的结构：
NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH，
A-I
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。在一些实施方案中，氨基酸残基具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-的结构。
在一些实施方案中，La1是共价键。在一些实施方案中，式A-I的化合物具有NH(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH结构。
在一些实施方案中，La2是共价键。在一些实施方案中，式A-I的化合物具有NH(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH结构。
在一些实施方案中，La1是共价键并且La2是共价键。在一些实施方案中，式A-I的化合物具有NH(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-COOH结构。
在一些实施方案中，La是共价键。在一些实施方案中，La是任选取代的C1-6二价脂肪族。在一些实施方案中，La是任选取代的C1-6亚烷基。在一些实施方案中，La是-CH2-。在一些实施方案中，La是-CH2CH2-。在一些实施方案中，La是-CH2CH2CH2-。
在一些实施方案中，R'是R。在一些实施方案中，Ra1是R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Ra2是R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Ra3是R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Ra1、Ra2和Ra3各自独立地是R，其中R如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，Ra1是氢。在一些实施方案中，Ra2是氢。在一些实施方案中，Ra3是氢。在一些实施方案中，Ra1是氢，并且Ra2和Ra3中的至少一个是氢。在一些实施方案中，Ra1是氢，Ra2和Ra3之一是氢，另一个不是氢。
在一些实施方案中，Ra2是-La-R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Ra2是-La-R，其中R是任选取代的基团，其选自C3-30脂环族，C5-30芳基，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基。在一些实施方案中，Ra2是-La-R，其中R是任选取代的基团，其选自C6-30芳基以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基。在一些实施方案中，Ra2是氨基酸的侧链。在一些实施方案中，Ra2是标准氨基酸的侧链。
在一些实施方案中，Ra3是-La-R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Ra3是-La-R，其中R是任选取代的基团，其选自C3-30脂环族，C5-30芳基，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基。在一些实施方案中，Ra3是-La-R，其中R是任选取代的基团，其选自C6-30芳基以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基。在一些实施方案中，Ra3是氨基酸的侧链。在一些实施方案中，Ra3是标准氨基酸的侧链。
在一些实施方案中，R是环状基团。在一些实施方案中，R是任选取代的C3-30脂环族基团。在一些实施方案中，R是环丙基。
在一些实施方案中，R是芳族基团，并且式A-I的氨基酸的氨基酸残基是XaaA。在一些实施方案中，R是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R是苯基。在一些实施方案中，R是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R是4-三氟甲基苯基。在一些实施方案中，R是4-苯基苯基。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的5-30元杂芳基。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的5-14元杂芳基。在一些实施方案中，R是
Figure BDA0003196682070000701
在一些实施方案中，R是任选取代的吡啶基。在一些实施方案中，R是1-吡啶基。在一些实施方案中，R是2-吡啶基。在一些实施方案中，R是3-吡啶基。在一些实施方案中，R是
Figure BDA0003196682070000702
在一些实施方案中，R’是-COOH。在一些实施方案中，式A-I的氨基酸的化合物和氨基酸残基是XaaN。
在一些实施方案中，R’是-NH2。在一些实施方案中，式A-I的氨基酸的氨基酸残基的化合物是XaaP。
在一些实施方案中，Ra2或Ra3是R，其中R是如本公开文本中所述的C1-20脂肪族。在一些实施方案中，式A-I的氨基酸的氨基酸残基的化合物是XaaH。在一些实施方案中，R是-CH3。在一些实施方案中，R是乙基。在一些实施方案中，R是丙基。在一些实施方案中，R是环丙基。
在一些实施方案中，Ra1、Ra2和Ra3中的两个或更多个是R并且一起形成任选取代的如本公开文本中所述的环。
在一些实施方案中，Ra1以及Ra2和Ra3之一是R并且一起形成任选取代的3-6元环，所述环除了与Ra1键合的氮原子外，没有额外的环杂原子。在一些实施方案中，所形成的环是如脯氨酸中的5元环。
在一些实施方案中，Ra2和Ra3是R并且一起形成任选取代的如本公开文本中所述的3-6元环。在一些实施方案中，Ra2和Ra3是R并且一起形成具有一个或多个氮环原子的任选取代的3-6元环。在一些实施方案中，Ra2和Ra3是R并且一起形成具有一个且不超过一个为氮原子的环杂原子的任选取代的3-6元环。在一些实施方案中，环是饱和环。
在一些实施方案中，氨基酸是天然氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是非天然氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是α-氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是β-氨基酸。
靶标
在一些实施方案中，本公开文本提供了用于选择性地将包含靶标结合部分的药剂(例如，ARM化合物)、抗体和免疫细胞(例如，NK细胞)引导至包含一个或多个靶标的期望靶位点的技术。如本领域技术人员所理解的，所提供的技术可用于各种类型的靶标。
在一些实施方案中，靶标是受损或有缺陷的组织。在一些实施方案中，靶标是受损组织。在一些实施方案中，靶标是有缺陷的组织。在一些实施方案中，靶标与疾病、障碍或病症(例如，癌症、伤口等)相关。在一些实施方案中，靶标是肿瘤。在一些实施方案中，靶标是或包含患病细胞。在一些实施方案中，靶标是或包含癌细胞。在一些实施方案中，靶标是外物。在一些实施方案中，靶标是或包含传染性病原体。在一些实施方案中，靶标是微生物。在一些实施方案中，靶标是或包含细菌。在一些实施方案中，靶标是或包含病毒。
在许多实施方案中，靶标是与疾病、障碍或病症，特别是各种类型的癌症相关的组织和/或细胞。在一些实施方案中，靶标是或包含癌细胞。除了其他方面，本公开文本提供了特别适用于通过免疫系统经由例如募集抗体(例如，内源性抗体)和免疫细胞(例如，NK细胞)、通过使用ARM而选择性靶向癌细胞的技术。
在许多实施方案中，靶标是癌症或增殖性病症、障碍或疾病的细胞。在一些实施方案中，癌症或增殖性病症、障碍或疾病选自良性肿瘤、恶性肿瘤、实体瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌(breast)、胃癌、胃肿瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、宫颈癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、皮肤癌、骨或甲状腺癌、肉瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌(尤其是结肠癌或结直肠腺瘤)、颈部和头部肿瘤、表皮过度增生、银屑病、前列腺增生、瘤变、上皮特征的瘤变、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤、霍奇金病和非霍奇金病、乳腺癌(mammary carcinoma)、滤泡癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、血液系统恶性肿瘤(包括白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、ABC DLBCL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和血管内大B细胞淋巴瘤)。
靶位点典型地包含一种或多种物理、化学和/或生物标记物，其可例如通过化合物(例如，ARM)的靶标结合部分用于选择性地募集抗体和/或其片段，和/或将免疫细胞募集至靶标。
在一些实施方案中，靶位点的细胞包含一种或多种可用于靶向的特征剂。在一些实施方案中，此类剂是蛋白质和/或其片段。在一些实施方案中，此类剂是与疾病、障碍或病症特异地相关的抗原。
例如，在一些实施方案中，癌细胞可包含一种或多种肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原。如本公开文本中所述的靶标结合部分可以选择性地结合此类标记物。在一些实施方案中，本公开文本的靶标结合部分是用于结合细胞表面蛋白质和/或细胞内蛋白质的小分子。
在一些实施方案中，特征剂(例如，具有靶位点的细胞的特征剂等)是或包含糖类，例如，在细胞表面上、在糖基化蛋白质等中的那些。在一些实施方案中，特征剂是或包含脂质。
在一些实施方案中，特征剂(例如，具有靶位点的细胞的特征剂等)在细胞外。在一些实施方案中，特征剂是细胞外蛋白质。在一些实施方案中，特征剂在细胞表面上。在一些实施方案中，特征剂是存在于细胞表面上的蛋白质。例如，在许多肿瘤组织中，细胞表面和/或细胞外粘蛋白显示出不同的糖基化水平和/或模式，并且可用于进行靶向。
在一些实施方案中，靶位点(例如，疾病组织等)具有一种或多种可被靶向结合部分利用的物理、生物和/或化学特性。在一些实施方案中，这样的特性是pH。在一些实施方案中，这样的特性是一种或多种化学物质的浓度。例如，肿瘤微环境通常是缺氧和/或酸性的(例如，pH 6.5-6.9与7.2-7.4)。
在一些实施方案中，靶标是或包含肽或其片段。在一些实施方案中，靶标是或包含蛋白质或其片段。在一些实施方案中，靶标是亲和素。在一些实施方案中，靶标是链霉亲和素。在一些实施方案中，靶标是或包含抗原。在一些实施方案中，靶标是或包含肿瘤特异性抗原。在一些实施方案中，靶标是或包含肿瘤相关抗原(TAA)。
在一些实施方案中，肿瘤相关抗原是或包含糖类。在一些实施方案中，所提供的靶标结合部分靶向此类TAA。在一些实施方案中，糖类是糖蛋白的一部分。在一些实施方案中，糖类是糖脂的一部分。许多病症、障碍和疾病(例如，各种类型的癌症)都与异常糖基化相关。在一些实施方案中，肿瘤相关糖抗原(TACA)包括改变的唾液酸表达、改变的路易斯糖抗原表达、改变的神经节苷脂表达等，和/或与其相关。在一些实施方案中，本公开文本的靶标结合部分可以靶向各种类型的TACA，包括本领域中，例如在Chua和Durrant,MonoclonalAntibodies Against Tumour-Associated Carbohydrate Antigens,CarbohydrateMahmut Caliskan,IntechOpen,DOI:10.5772/66996中所述的那些。
在一些实施方案中，肿瘤相关抗原是细胞表面受体。在一些实施方案中，TAA选自BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型，Genbank登录号NM.sub.-001203)；E16(LAT1，SLC7A5，Genbank登录号NM.sub.-003486)；STEAP1(六跨膜前列腺上皮抗原，Genbank登录号NM.sub.-012449)；0772P(CA125，MUC16，Genbank登录号AF361486)；MPF(MPF，MSLN，SMR，巨核细胞强化因子，间皮素，Genbank登录号NM.sub.-005823)；Napi3b(NAPI-3B，NPTIIb，SLC34A2，可溶性载体家族34(磷酸钠)成员2，II型钠依赖性磷酸盐转运体3b，Genbank登录号NM.sub.-006424)；Sema 5b(FLJ10372，KIAA1445，Mm.42015，SEMA5B，SEMAG，臂板蛋白5bHlog，sema结构域，七个血小板反应蛋白重复(1型和1型样)，跨膜结构域(TM)和短胞质结构域，(臂板蛋白)5B，Genbank登录号AB040878)；PSCA hlg(2700050C12Rik，C530008016Rik，RIKEN cDNA 2700050C12，RIKEN cDNA 2700050C12基因，Genbank登录号AY358628)；ETBR(内皮素B型受体，Genbank登录号AY275463)；MSG783(RNF124，假定蛋白FLJ20315，Genbank登录号NM.sub.-017763)；STEAP2(HGNC.sub.-8639，IPCA-1，PCANAP1，STAMPI，STEAP2，STMP，前列腺癌相关基因1，前列腺癌相关蛋白1，六跨膜前列腺上皮抗原2，六跨膜前列腺蛋白，Genbank登录号AF455138)；TrpM4(BR22450，FLJ20041，TRPM4，TRPM4B，瞬时受体电位阳离子通道，亚族M成员4，Genbank登录号NM.sub.-017636)；CRIPTO(CR，CR1，CRGF，CRIPTO，TDGF1，畸胎瘤衍生生长因子，Genbank登录号NP.sub.-003203或NM.sub.-003212)；CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/EB病毒受体)或Hs.73792，Genbank登录号M26004)；CD79b(CD79B，CD79.β.，IGb(免疫球蛋白相关蛋白β)，B29，Genbank登录号NM.sub.-000626)；FcRH2(IFGP4，IRTA4，SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白1a的SH2结构域)，SPAP1B，SPAP1C，Genbank登录号NM.sub.-030764)；HER2(Genbank登录号M1730)；NCA(Genbank登录号M18728)；MDP(Genbank登录号BC017023)；IL20Rα(Genbank登录号AF184971)；Brevican(Genbank登录号AF229053)；EphB2R(Genbank登录号NM.sub.-004442)；ASLG659(Genbank登录号AX092328)；PSCA(Genbank登录号AJ297436)；GEDA(Genbank登录号AY260763)；BAFF--R(B细胞活化因子受体，BLyS受体3，BR3，NP.sub.-443177.1)；CD22(B细胞受体CD22-B同种型，NP.sub.-001762.1)；CD79a(CD79A，CD79.α.，免疫球蛋白相关蛋白α，B细胞特异性蛋白，其与Igβ(CD79B)共价相互作用并在表面与Ig M分子形成复合物，转导参与B细胞分化的信号，Genbank登录号NP.sub.--001774.1)；CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1，G蛋白偶联受体，其被CXCL13趋化因子激活，在淋巴细胞迁移和体液防御中起作用，在HIV-2感染和可能的AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病的发展中发挥作用，Genbank登录号NP.sub.-001707.1)；HLA-DOB(MHC II类分子(Ia抗原)的β亚基，其结合肽并将肽呈递给CD4+T淋巴细胞，Genbank登录号NP.sub.-002111.1)；P2X5(嘌呤能受体P2X配体门控离子通道5，一种由细胞外ATP门控的离子通道，其可能参与突触传导和神经发生，其缺陷可能导致特发性逼尿肌不稳定的病理生理学，Genbank登录号NP.sub.-002552.2)；CD72(B细胞分化抗原CD72，Lyb-2，Genbank登录号NP.sub.-001773.1)；LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)，富含亮氨酸的重复序列(LRR)家族的I型膜蛋白，其调节B细胞活化和凋亡，其功能丧失与系统性红斑狼疮患者的疾病活动度增加有关，Genbank登录号NP.sub.--005573.1)；FcRH1(Fc受体样蛋白1，一种免疫球蛋白Fc结构域的推定受体，包含C2型Ig样结构域和ITAM结构域，可能在B淋巴细胞分化中起作用，Genbank登录号NP.sub.-443170.1)；IRTA2(免疫球蛋白超家族受体易位相关2，一种可能在B细胞发育和淋巴瘤发生中发挥作用的推定免疫受体，易位导致的该基因的失调发生在一些B细胞恶性肿瘤中，Genbank登录号NP.sub.-112571.1)；以及TENB2(推定的跨膜蛋白聚糖，与生长因子和卵泡抑素的EGF/调蛋白家族有关，Genbank登录号AF 179274)。
在一些实施方案中，靶标是或包含核酸。
在一些实施方案中，靶标是或包含脂质。
在一些实施方案中，靶标是或包含糖类。在一些实施方案中，靶标是或包含与疾病、障碍或病症相关的糖类。在一些实施方案中，靶标是或包含与癌症相关的糖类，例如，作为蛋白质的聚糖修饰的糖类，例如，在癌细胞的表面上或细胞外。
靶标结合部分
可以根据本公开文本使用各种类型和化学类别的靶标结合部分，并且可以根据本公开文本使用用于鉴定和/或评估靶标结合部分的特性的多种技术(例如，测定、试剂、试剂盒等)。通常，靶标结合部分通过一种或多种物理、生物和/或化学特性与靶位点相互作用。在一些实施方案中，靶标结合部分结合如本公开文本中所述的特征剂。在一些实施方案中，靶标结合部分结合表面、细胞外和/或细胞内蛋白质、糖类和/或核酸。在一些实施方案中，靶标结合部分结合靶细胞的表面蛋白。在一些实施方案中，靶标结合部分是小分子部分。在一些实施方案中，靶标结合部分是抗体药剂。在一些实施方案中，靶标结合部分是核酸药剂，如适体。在一些实施方案中，靶标结合部分是脂质部分。某些类型的靶标结合部分描述如下；本领域技术人员理解，可以根据本公开文本使用其他类型的靶标结合部分(包括本领域已知的许多靶标结合部分)。
在一些实施方案中，靶向结合部分通过靶标中的一种或多种蛋白质、脂质、核酸、糖类、小分子等与靶标结合。例如，在一些实施方案中，靶标结合部分结合靶癌细胞的肿瘤特异性抗原。在一些实施方案中，肿瘤特异性抗原是或包含糖类或其片段。在一些实施方案中，肿瘤特异性抗原是或包含蛋白质或其片段。
在一些实施方案中，靶标结合部分结合细胞表面蛋白质、糖类或脂质。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD19。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD20。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD22。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD30。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD33。在一些实施方案中，靶标结合部分结合CD123。
a.小分字子
在一些实施方案中，靶标结合部分是小分子部分。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000、1500、1000、900、800、700或600。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过8000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过7000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过6000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过5000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过4000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过3000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过2000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过1500。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过1000。在一些实施方案中，小分子部分的分子量不超过900。除了其他方面，本公开文本涵盖以下认知，即小分子靶标结合部分可能能够结合靶标(例如，癌细胞)外部、表面和/或内部的标记物。
在一些实施方案中，小分子靶标结合部分是或包含选择性结合蛋白质或其片段(例如，癌抗原)的部分。例如，在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含选择性结合前列腺特异性膜抗原(PSMA)的部分。在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含
Figure BDA0003196682070000761
在一些实施方案中，小分子靶标结合部分是或包含生物素部分。在一些实施方案中，小分子靶标结合部分是或包含
Figure BDA0003196682070000762
在一些实施方案中，小分子靶标结合部分是或包含
Figure BDA0003196682070000763
b.肽剂
在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含肽剂。在一些实施方案中，靶标结合部分是肽部分。在一些实施方案中，肽部分可以是线性的或环状的。在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含环肽部分。各种肽靶标结合部分是本领域已知的并且可以根据本公开文本使用。
在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含肽适体剂。
c.适体剂
在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含核酸剂。在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含寡核苷酸部分。在一些实施方案中，靶标结合部分是或包含适体剂。各种适体剂是本领域已知的或者可以使用常用技术容易地开发，并且可以根据本公开文本在所提供的技术中使用。
接头部分
在一些实施方案中，抗体结合部分任选地通过接头部分连接至靶标结合部分。可以根据本公开文本使用各种类型和/或用于各种目的的接头部分，例如，用于抗体-药物缀合物等中的接头部分。
接头部分可以是二价的或多价的。在一些实施方案中，接头部分是二价的。在一些实施方案中，接头是多价的并且连接超过两个部分。
在一些实施方案中，接头部分是L。在一些实施方案中，L是共价键，或是包含一个或多个脂肪族、芳基、具有1-20个杂原子的杂脂肪族、具有1-20个杂原子的杂芳族或其任何组合的任选取代的二价或多价线性或支链C1-100基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R’)2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-C(O)C(R’)2N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR’)-、-P(O)(SR’)-、-P(O)(R’)-、-P(O)(NR’)-、-P(S)(OR’)-、-P(S)(SR’)-、-P(S)(R’)-、-P(S)(NR’)-、-P(R’)-、-P(OR’)-、-P(SR’)-、-P(NR’)-、或-[(-O-C(R’)2-C(R’)2-)n]-替代，其中n是1-20。
在一些实施方案中，L是二价的。在一些实施方案中，L是二价或任选取代的线性或支链基团，其选自C1-00脂肪族和具有1-50个杂原子的C1-100杂脂肪族，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R’)2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-C(O)C(R’)2N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR’)-、-P(O)(SR’)-、-P(O)(R’)-、-P(O)(NR’)-、-P(S)(OR’)-、-P(S)(SR’)-、-P(S)(R’)-、-P(S)(NR’)-、-P(R’)-、-P(OR’)-、-P(SR’)-、-P(NR’)-、或-[(-O-C(R’)2-C(R’)2-)n]-替代。
在一些实施方案中，L是共价键。在一些实施方案中，L是任选取代的二价线性或支链C1-100脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施方案中，L是任选取代的二价线性或支链C6-100芳基脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施方案中，L是具有1-20个杂原子的任选取代的二价线性或支链C5-100杂芳基脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施方案中，L是具有1-20个杂原子的任选取代的二价线性或支链C1-100杂脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。
在一些实施方案中，接头部分(例如，L)是或包含一个或多个聚乙二醇单元。在一些实施方案中，接头部分是或包含-(CH2CH2O)n-，其中n如本公开文本中所述。在一些实施方案中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-(CH2CH2O)n-替代。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。在一些实施方案中，n是6。在一些实施方案中，n是7。在一些实施方案中，n是8。在一些实施方案中，n是9。在一些实施方案中，n是10。在一些实施方案中，n是11。在一些实施方案中，n是12。在一些实施方案中，n是13。在一些实施方案中，n是14。在一些实施方案中，n是15。在一些实施方案中，n是16。在一些实施方案中，n是17。在一些实施方案中，n是18。在一些实施方案中，n是19。在一些实施方案中，n是20。
在一些实施方案中，接头部分包含可用于与其他部分连接的一个或多个部分，例如，氨基、羰基等。在一些实施方案中，接头部分包含一个或多个-NR’-，其中R'如本公开文本中所述。在一些实施方案中，-NR’-提高溶解度。在一些实施方案中，-NR’-用作与另一部分的连接点。在一些实施方案中，R'是-H。在一些实施方案中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-NR’-替代，其中R'如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含-C(O)-基团，所述基团可用于与部分连接。在一些实施方案中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-C(O)-替代。
在一些实施方案中，接头部分是或包含一个或多个环部分，例如，L的一个或多个亚甲基单元被-Cy-替代。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含芳基环。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含杂芳基环。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含脂肪族环。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含杂环基环。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)包含多环。在一些实施方案中，接头部分(例如，L)中的环是3-20元环。在一些实施方案中，环是5元环。在一些实施方案中，环是6元环。在一些实施方案中，接头中的环是用于将不同部分连接在一起的环加成反应(例如，点击化学及其变体)的产物。
在一些实施方案中，接头部分(例如，L)是或包含
Figure BDA0003196682070000791
在一些实施方案中，L的亚甲基单元被
Figure BDA0003196682070000792
替代。在一些实施方案中，-Cy-是
Figure BDA0003196682070000793
在一些实施方案中，接头部分如表1中所述。额外的接头部分例如包括针对L2所述的那些。在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的L1。在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的L2。在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的L3。在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的Lb。
在一些实施方案中，L是
Figure BDA0003196682070000794
Figure BDA0003196682070000795
变量的某些实施方案
作为例子，贯穿本公开文本描述了变量的示例性实施方案。如本领域技术人员所理解的，不同变量的实施方案可以任选地组合。
如上文所定义和本文所述，ABT是抗体结合部分。
在一些实施方案中，ABT是抗体结合部分。
在一些实施方案中，ABT选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，L是连接ABT与TBT的二价接头部分。
在一些实施方案中，L是连接ABT与TBT的二价接头部分。
在一些实施方案中，L选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，TBT选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，R1、R3和R5各自独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；R3和R3'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；R5基团和附接到同一碳原子的R5’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；或两个R5基团任选地连同其间插原子一起形成C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基。
在一些实施方案中，R1是氢。在一些实施方案中，R1是任选取代的基团，其选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环。在一些实施方案中，R1是任选取代的C1-6脂肪族基团。在一些实施方案中，R1是任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，R1是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R1是任选取代的8-10元双环芳族碳环。在一些实施方案中，R1是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。在一些实施方案中，R1是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳环。在一些实施方案中，R1是具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳环。
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000811
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000812
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000813
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000814
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000815
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000816
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000817
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000818
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000819
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA00031966820700008110
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA00031966820700008111
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA00031966820700008112
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000821
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000822
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000823
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000824
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000825
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000826
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000827
在一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003196682070000828
在一些实施方案中，R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环。在一些实施方案中，R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环。
在一些实施方案中，R1选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R1。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R1。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R1。
在一些实施方案中，R3是氢。在一些实施方案中，R3是任选取代的基团，其选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环。在一些实施方案中，R3是任选取代的C1-6脂肪族基团。在一些实施方案中，R3是任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，R3是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R3是任选取代的8-10元双环芳族碳环。在一些实施方案中，R3是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。在一些实施方案中，R3是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳环。在一些实施方案中，R3是具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳环。
在一些实施方案中，R3是甲基。在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000829
在一些实施方案中，R3是
Figure BDA00031966820700008210
在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000831
在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000832
在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000833
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000834
其中附接位点具有(R)立体化学。在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000835
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000836
其中附接位点具有(R)立体化学。
在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000837
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R3是
Figure BDA0003196682070000838
其中附接位点具有(R)立体化学。
在一些实施方案中，R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环。在一些实施方案中，R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环。
在一些实施方案中，R3选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R2。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R2。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R2。
在一些实施方案中，R5是氢。在一些实施方案中，R5是任选取代的基团，其选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环。在一些实施方案中，R5是任选取代的C1-6脂肪族基团。在一些实施方案中，R5是任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，R5是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R5是任选取代的8-10元双环芳族碳环。在一些实施方案中，R5是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。在一些实施方案中，R5是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳环。在一些实施方案中，R5是具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳环。
在一些实施方案中，R5是甲基。在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000841
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000842
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000843
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000844
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000845
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000846
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000847
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000848
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000849
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008410
其中附接位点具有(R)立体化学。在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008411
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008412
其中附接位点具有(R)立体化学。在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008413
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008414
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008415
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008416
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008417
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008418
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008419
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008420
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008421
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008422
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008423
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008424
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008425
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008426
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000851
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000852
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000853
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000854
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000855
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000856
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000857
在一些实施方案中，R4是5
Figure BDA0003196682070000858
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA0003196682070000859
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008510
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008511
在一些实施方案中，R5是
Figure BDA00031966820700008512
在一些实施方案中，R4是
Figure BDA00031966820700008513
其中附接位点具有(S)立体化学。在一些实施方案中，R4是
Figure BDA00031966820700008514
其中附接位点具有(R)立体化学。
在一些实施方案中，R5和附接到同一碳原子的R5'基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环。在一些实施方案中，R5和附接到同一碳原子的R5'基团任选地连同其间插碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环。
在一些实施方案中，两个R5基团连同其间插原子一起形成C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基。
在一些实施方案中，两个R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA00031966820700008515
在一些实施方案中，两个R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA00031966820700008516
在一些实施方案中，两个R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA00031966820700008517
在一些实施方案中，两个R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000861
在一些实施方案中，R5选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R5。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R5。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R5。
如上文所定义和本文所述，R1'、R3'和R5'各自独立地是氢或C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R1’是氢。在一些实施方案中，R1’是C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R1’是甲基。在一些实施方案中，R1’是乙基。在一些实施方案中，R1’是正丙基。在一些实施方案中，R1’是异丙基。在一些实施方案中，R1’是环丙基。
在一些实施方案中，R1’选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R3’是氢。在一些实施方案中，R3’是C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R3’是甲基。在一些实施方案中，R3’是乙基。在一些实施方案中，R3’是正丙基。在一些实施方案中，R3’是异丙基。在一些实施方案中，R3’是环丙基。
在一些实施方案中，R3’选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R5’是氢。在一些实施方案中，R5’是C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R5’是甲基。在一些实施方案中，R5’是乙基。在一些实施方案中，R5’是正丙基。在一些实施方案中，R5’是异丙基。在一些实施方案中，R5’是环丙基。
在一些实施方案中，R5’选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，R2、R4和R6各自独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：R2和R1任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；R4和R3任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；或R6基团及其相邻的R5基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R2是氢。在一些实施方案中，R2是C1-4脂肪族。在一些实施方案中，R2是甲基。在一些实施方案中，R2是乙基。在一些实施方案中，R2是正丙基。在一些实施方案中，R2是异丙基。在一些实施方案中，R2是正丁基。在一些实施方案中，R2是异丁基。在一些实施方案中，R2是叔丁基。
在一些实施方案中，R2和R1连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R2和R1连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000871
在一些实施方案中，R2和R1连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000872
在一些实施方案中，R2选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R4是氢。在一些实施方案中，R4是C1-4脂肪族。在一些实施方案中，R4是甲基。在一些实施方案中，R4是乙基。在一些实施方案中，R4是正丙基。在一些实施方案中，R4是异丙基。在一些实施方案中，R4是正丁基。在一些实施方案中，R4是异丁基。在一些实施方案中，R4是叔丁基。
在一些实施方案中，R4和R3连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R4和R3连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000873
在一些实施方案中，R4和R3连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000874
在一些实施方案中，R4选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R6是氢。在一些实施方案中，R6是C1-4脂肪族。在一些实施方案中，R6是甲基。在一些实施方案中，R6是乙基。在一些实施方案中，R6是正丙基。在一些实施方案中，R6是异丙基。在一些实施方案中，R6是正丁基。在一些实施方案中，R6是异丁基。在一些实施方案中，R6是叔丁基。
在一些实施方案中，R6基团及其相邻的R5基团连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R6基团及其相邻的R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000881
在一些实施方案中，R6基团及其相邻的R5基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000882
在一些实施方案中，R6选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R1’。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R1’。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R1’。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R3’。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R3’。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R3’。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R2。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R2。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R2。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R4。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R4。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R4。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R6。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R6。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R6。
如上文所定义和本文所述，L1是连接
Figure BDA0003196682070000883
Figure BDA0003196682070000884
的三价接头部分。
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000891
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000892
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000893
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000894
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000901
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000902
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000903
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000904
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000911
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000912
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000913
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000914
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000915
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000921
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000922
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000923
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000931
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000932
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000933
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000934
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000935
在一些实施方案中，L1是
Figure BDA0003196682070000941
在一些实施方案中，L1选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，L2是共价键或C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070000942
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基。
在一些实施方案中，L2是共价键。在一些实施方案中，L2是C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070000943
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基。
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000944
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000945
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000946
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000947
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000951
在一些实施方案中，L2是
Figure BDA0003196682070000952
在一些实施方案中，L2选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的L2。
如上文所定义和本文所述，TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，TBT是靶标结合部分。
在一些实施方案中，TBT是
Figure BDA0003196682070000953
在一些实施方案中，TBT是
Figure BDA0003196682070000954
在一些实施方案中，TBT选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，m和n各自独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一些实施方案中，m是1。在一些实施方案中，m是2。在一些实施方案中，m是3。在一些实施方案中，m是4。在一些实施方案中，m是5。在一些实施方案中，m是6。在一些实施方案中，m是7。在一些实施方案中，m是8。在一些实施方案中，m是9。在一些实施方案中，m是10。
在一些实施方案中，m选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。在一些实施方案中，n是6。在一些实施方案中，n是7。在一些实施方案中，n是8。在一些实施方案中，n是9。在一些实施方案中，n是10。
在一些实施方案中，n选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，每个R7独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：R7基团和附接到同一碳原子的R7'基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环。
在一些实施方案中，R7是氢。在一些实施方案中，R7是任选取代的基团，其选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环。在一些实施方案中，R7是任选取代的C1-6脂肪族基团。在一些实施方案中，R7是任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，R7是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R7是任选取代的8-10元双环芳族碳环。在一些实施方案中，R7是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。在一些实施方案中，R7是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳环。在一些实施方案中，R7是具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳环。
在一些实施方案中，R7是甲基。在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000961
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000962
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000963
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000964
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000965
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000966
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000967
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000968
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000969
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA00031966820700009610
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA00031966820700009611
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA00031966820700009612
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA00031966820700009613
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA00031966820700009614
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000971
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000972
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000973
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000974
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000975
在一些实施方案中，R7是
Figure BDA0003196682070000976
在一些实施方案中，R7基团和附接到同一碳原子的R7'基团连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环。在一些实施方案中，R7基团和附接到同一碳原子的R7'基团连同其间插碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环。
在一些实施方案中，R7选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，每个R7'独立地是氢或C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R7’是氢。在一些实施方案中，R7’是甲基。在一些实施方案中，R7’是乙基。在一些实施方案中，R7’是正丙基。在一些实施方案中，R7’是异丙基。
在一些实施方案中，R7’选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，每个R8独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：R8基团及其相邻的R7基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R8是氢。在一些实施方案中，R8是C1-4脂肪族。在一些实施方案中，R8是甲基。在一些实施方案中，R8是乙基。在一些实施方案中，R8是正丙基。在一些实施方案中，R8是异丙基。在一些实施方案中，R8是正丁基。在一些实施方案中，R8是异丁基。在一些实施方案中，R8是叔丁基。
在一些实施方案中，R8基团及其相邻的R7基团连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环。
在一些实施方案中，R8基团及其相邻的R7基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000981
在一些实施方案中，R8基团及其相邻的R7基团连同其间插原子一起形成
Figure BDA0003196682070000982
在一些实施方案中，R8选自下表1中描绘的那些。
如上文所定义和本文所述，R9是氢、C1-3脂肪族或-C(O)C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R9是氢。在一些实施方案中，R9是C1-3脂肪族。在一些实施方案中，R9是-C(O)C1-3脂肪族。
在一些实施方案中，R9是甲基。在一些实施方案中，R9是乙基。在一些实施方案中，R9是正丙基。在一些实施方案中，R9是异丙基。在一些实施方案中，R9是环丙基。
在一些实施方案中，R9是-C(O)Me。在一些实施方案中，R9是-C(O)Et。在一些实施方案中，R9是-C(O)CH2CH2CH3。在一些实施方案中，R9是-C(O)CH(CH3)2。在一些实施方案中，R9是-C(O)环丙基。
在一些实施方案中，R9选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R7。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R7。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R7。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R7’。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R7’。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R7’。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R8。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R8。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R8。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R8’。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R8’。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R8’。在一些实施方案中，R是如本公开文本中所述的R9。在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R9。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R9。
如上文所定义和本文所述，L3是连接
Figure BDA0003196682070000983
与TBT的二价接头部分。
在一些实施方案中，L3是连接
Figure BDA0003196682070000991
与TBT的二价接头部分。
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000992
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000993
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000994
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000995
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000996
在一些实施方案中，L3是
Figure BDA0003196682070000997
在一些实施方案中，L3选自下表1中描绘的那些。
在一些实施方案中，L是本公开文本中所述的L3。
如上文所定义和本文所述，o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一些实施方案中，o是1。在一些实施方案中，o是2。在一些实施方案中，o是3。在一些实施方案中，o是4。在一些实施方案中，o是5。在一些实施方案中，o是6。在一些实施方案中，o是7。在一些实施方案中，o是8。在一些实施方案中，o是9。在一些实施方案中，o是10。
在一些实施方案中，o选自下表1中描绘的那些。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070000998
并且TBT是
Figure BDA0003196682070000999
从而形成式II-a的化合物：
Figure BDA0003196682070001001
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070001002
并且TBT是
Figure BDA0003196682070001003
从而形成式II-b的化合物：
Figure BDA0003196682070001004
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070001011
并且TBT是
Figure BDA0003196682070001012
从而形成式II-c的化合物：
Figure BDA0003196682070001013
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070001014
并且TBT是
Figure BDA0003196682070001015
从而形成式II-d的化合物：
Figure BDA0003196682070001016
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070001021
并且TBT是
Figure BDA0003196682070001022
从而形成式II-e的化合物：
Figure BDA0003196682070001023
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在某些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)是式II的化合物，其中L2是
Figure BDA0003196682070001024
并且TBT是
Figure BDA0003196682070001025
从而形成式II-f的化合物：
Figure BDA0003196682070001026
或其药学上可接受的盐，其中单独地和组合地，L1、R1、R1’、R2、R3、R3’、R4、R5、R5’、R6和m各自如上所定义并且如本文的实施方案中所述。
在一些实施方案中，Ra1是如本公开文本中所述的R。在一些实施方案中，Ra1是任选取代的C1-4脂肪族。
在一些实施方案中，La1是本公开文本中所述的La。在一些实施方案中，La1是共价键。
在一些实施方案中，La2是本公开文本中所述的La。在一些实施方案中，La2是共价键。
在一些实施方案中，La是共价键。在一些实施方案中，La是选自C1-C10脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C10杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代。在一些实施方案中，La是选自C1-C5脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C5杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代。在一些实施方案中，La是任选取代的二价C1-C5脂肪族，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代。在一些实施方案中，La是任选取代的二价C1-C5脂肪族。在一些实施方案中，La是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的C1-C5杂脂肪族。
在一些实施方案中，Ra2是如本公开文本中所述的R。在一些实施方案中，Ra2是天然氨基酸的侧链。在一些实施方案中，Ra3是如本公开文本中所述的R。在一些实施方案中，Ra3是天然氨基酸的侧链。在一些实施方案中，R2a和R3a之一是氢。
在一些实施方案中，每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是如本公开文本中所述的任选取代的环，例如对于R和CyL，但是是二价的环。
在一些实施方案中，-Cy-是单环的。在一些实施方案中，-Cy-是双环的。在一些实施方案中，-Cy-是多环的。在一些实施方案中，-Cy-是饱和的。在一些实施方案中，-Cy-是部分不饱和的。在一些实施方案中，-Cy-是芳族的。在一些实施方案中，-Cy-包含饱和环状部分。在一些实施方案中，-Cy-包含部分不饱和的环状部分。在一些实施方案中，-Cy-包含芳族环状部分。在一些实施方案中，-Cy-包含饱和、部分不饱和、和/或芳族环状部分的组合。在一些实施方案中，-Cy-是3元的。在一些实施方案中，-Cy-是4元的。在一些实施方案中，-Cy-是5元的。在一些实施方案中，-Cy-是6元的。在一些实施方案中，-Cy-是7元的。在一些实施方案中，-Cy-是8元的。在一些实施方案中，-Cy-是9元的。在一些实施方案中，-Cy-是10元的。在一些实施方案中，-Cy-是11元的。在一些实施方案中，-Cy-是12元的。在一些实施方案中，-Cy-是13元的。在一些实施方案中，-Cy-是14元的。在一些实施方案中，-Cy-是15元的。在一些实施方案中，-Cy-是16元的。在一些实施方案中，-Cy-是17元的。在一些实施方案中，-Cy-是18元的。在一些实施方案中，-Cy-是19元的。在一些实施方案中，-Cy-是20元的。
在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的二价C3-20脂环族环。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的二价饱和C3-20脂环族环。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的二价部分不饱和C3-20脂环族环。在一些实施方案中，-Cy-H是如本公开文本中所述的任选取代的脂环族，例如，R的脂环族实施方案。
在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的C6-20芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的亚苯基。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的1,2-亚苯基。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的1,3-亚苯基。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的1,4-亚苯基。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的二价萘环。在一些实施方案中，-Cy-H是如本公开文本中所述的任选取代的芳基，例如，R的芳基实施方案。
在一些实施方案中，-Cy-是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的二价5-20元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的二价5-20元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-4个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-3个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-2个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有一个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，-Cy-H是如本公开文本中所述的任选取代的杂芳基，例如，R的杂芳基实施方案。在一些实施方案中，-Cy-是
Figure BDA0003196682070001051
在一些实施方案中，-Cy-是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的二价3-20元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的二价3-20元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-4个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价3-6元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-4个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-3个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有1-2个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是具有一个独立地选自氧、氮、硫的杂原子的任选取代的二价5-6元杂环基环。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的饱和二价杂环基基团。在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的部分不饱和二价杂环基基团。在一些实施方案中，-Cy-H是如本公开文本中所述的任选取代的杂环基，例如，R的杂环基实施方案。
在一些实施方案中，每个Xaa独立地是氨基酸残基。在一些实施方案中，每个Xaa独立地是式A-I的氨基酸的氨基酸残基。
在一些实施方案中，t是0。在一些实施方案中，t是1-50。在一些实施方案中，t是如本公开文本中所述的z。
在一些实施方案中，z是1。在一些实施方案中，z是2。在一些实施方案中，z是3。在一些实施方案中，z是4。在一些实施方案中，z是5。在一些实施方案中，z是6。在一些实施方案中，z是7。在一些实施方案中，z是8。在一些实施方案中，z是9。在一些实施方案中，z是10。在一些实施方案中，z是11。在一些实施方案中，z是12。在一些实施方案中，z是13。在一些实施方案中，z是14。在一些实施方案中，z是15。在一些实施方案中，z是16。在一些实施方案中，z是17。在一些实施方案中，z是18。在一些实施方案中，z是19。在一些实施方案中，z是20。在一些实施方案中，z大于20。
在一些实施方案中，Rc是如本公开文本中所述的R’。在一些实施方案中，Rc是如本公开文本中所述的R。在一些实施方案中，Rc是-N(R’)2，其中每个R’独立地如本公开文本中所述。在一些实施方案中，Rc是-NH2。在一些实施方案中，Rc是R-C(O)-，其中R如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，a是1。在一些实施方案中，a是2-100。在一些实施方案中，a是5。在一些实施方案中，a是10。在一些实施方案中，a是20。在一些实施方案中，a是50。
在一些实施方案中，b是1。在一些实施方案中，b是2-100。在一些实施方案中，b是5。在一些实施方案中，b是10。在一些实施方案中，b是20。在一些实施方案中，b是50。
在一些实施方案中，a1是0。在一些实施方案中，a1是1。
在一些实施方案中，a2是0。在一些实施方案中，a2是1。
在一些实施方案中，Lb是本公开文本中描述的La。在一些实施方案中，Lb包含-Cy-。在一些实施方案中，Lb包含双键。在一些实施方案中，Lb包含-S-。在一些实施方案中，Lb包含-S-S-。在一些实施方案中，Lb包含-C(O)-N(R’)-。
在一些实施方案中，R’是-R、-C(O)R、-C(O)OR、或-S(O)2R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述。在一些实施方案中，R'是-C(O)R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，R'是-C(O)OR，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，R'是-S(O)2R，其中R如本公开文本中所述。在一些实施方案中，R’是氢。在一些实施方案中，R’不是氢。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的C1-20脂肪族。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的C1-20杂脂肪族。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的C6-20芳基。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的C6-20芳基脂肪族。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的C6-20芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的5-20元杂芳基。在一些实施方案中，R'是R，其中R是如本公开文本中所述的任选取代的3-20元杂环基。在一些实施方案中，两个或更多个R'是R，并且任选地且独立地一起形成如本公开文本中所述的任选取代的环。
在一些实施方案中，每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-20脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-20杂脂肪族，C6-20芳基，C6-20芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-20芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-20元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-20元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基。
在一些实施方案中，每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-20脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-20杂脂肪族，C6-20芳基，C6-20芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-20芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基。
在一些实施方案中，R是氢。在一些实施方案中，R不是氢。在一些实施方案中，R是任选取代的基团，其选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环。
在一些实施方案中，R是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-20脂肪族，苯基，3-7元饱和或部分不饱和碳环，8-10元双环饱和环、部分不饱和环或芳基环，具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环，具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-10元双环饱和或部分不饱和杂环，或具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环。
在一些实施方案中，R是任选取代的C1-30脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-20脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-15脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-10脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是任选取代的己基、戊基、丁基、丙基、乙基或甲基。在一些实施方案中，R是任选取代的己基。在一些实施方案中，R是任选取代的戊基。在一些实施方案中，R是任选取代的丁基。在一些实施方案中，R是任选取代的丙基。在一些实施方案中，R是任选取代的乙基。在一些实施方案中，R是任选取代的甲基。在一些实施方案中，R是己基。在一些实施方案中，R是戊基。在一些实施方案中，R是丁基。在一些实施方案中，R是丙基。在一些实施方案中，R是乙基。在一些实施方案中，R是甲基。在一些实施方案中，R是异丙基。在一些实施方案中，R是正丙基。在一些实施方案中，R是叔丁基。在一些实施方案中，R是仲丁基。在一些实施方案中，R是正丁基。在一些实施方案中，R是-(CH2)2CN。
在一些实施方案中，R是任选取代的C3-30脂环族。在一些实施方案中，R是任选取代的C3-20脂环族。在一些实施方案中，R是任选取代的C3-10脂环族。在一些实施方案中，R是任选取代的环己基。在一些实施方案中，R是环己基。在一些实施方案中，R是任选取代的环戊基。在一些实施方案中，R是环戊基。在一些实施方案中，R是任选取代的环丁基。在一些实施方案中，R是环丁基。在一些实施方案中，R是任选取代的环丙基。在一些实施方案中，R是环丙基。
在一些实施方案中，R是任选取代的3-30元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的3-7元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的3元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的4元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的5元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的6元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的7元饱和或部分不饱和碳环。在一些实施方案中，R是任选取代的环庚基。在一些实施方案中，R是环庚基。在一些实施方案中，R是任选取代的环己基。在一些实施方案中，R是环己基。在一些实施方案中，R是任选取代的环戊基。在一些实施方案中，R是环戊基。在一些实施方案中，R是任选取代的环丁基。在一些实施方案中，R是环丁基。在一些实施方案中，R是任选取代的环丙基。在一些实施方案中，R是环丙基。
在一些实施方案中，当R是或包含环结构(例如，环脂肪族、环杂脂肪族、芳基、杂芳基等)时，环结构可以是单环、双环或多环。在一些实施方案中，R是或包含单环结构。在一些实施方案中，R是或包含双环结构。在一些实施方案中，R是或包含多环结构。
在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的C1-30杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-10个杂原子的任选取代的C1-20杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷或硅(任选地包括氮、硫、磷或硒的一种或多种氧化形式)的杂原子的任选取代的C1-20杂脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-30杂脂肪族，其包含1-10个独立地选自以下的基团：
Figure BDA0003196682070001101
-N＝、≡N、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-O-、＝O、
Figure BDA0003196682070001102
在一些实施方案中，R是任选取代的C6-30芳基。在一些实施方案中，R是任选取代的苯基。在一些实施方案中，R是苯基。在一些实施方案中，R是经取代的苯基。
在一些实施方案中，R是任选取代的8-10元双环饱和环、部分不饱和环或芳基环。在一些实施方案中，R是任选取代的8-10元双环饱和环。在一些实施方案中，R是任选取代的8-10元双环部分不饱和环。在一些实施方案中，R是任选取代的8-10元双环芳基环。在一些实施方案中，R是任选取代的萘基。
在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的5-30元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的5-30元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的5-30元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的5-30元杂芳基环。
在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的经取代的5-6元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未取代的5-6元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的经取代的5-6元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、硫和氧的杂原子的未取代的5-6元单环杂芳基环。
在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的6元单环杂芳基环。
在一些实施方案中，R是具有一个选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元单环杂芳基环。在一些实施方案中，R是任选取代的吡咯基、呋喃基或噻吩基。
在一些实施方案中，R是具有两个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元杂芳基环。在某些实施方案中，R是具有一个氮原子和选自硫或氧的额外杂原子的任选取代的5元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有三个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有四个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元杂芳基环。
在一些实施方案中，R是具有1-4个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-3个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在其他实施方案中，R是具有1-2个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有四个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有三个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有两个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。在某些实施方案中，R是具有一个氮原子的任选取代的6元杂芳基环。
在某些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5,6-稠合杂芳基环。在某些实施方案中，R是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的6,6-稠合杂芳基环。
在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的3-30元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的3-30元杂环。
在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的3-7元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的经取代的3-7元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未取代的3-7元饱和或部分不饱和杂环。在某些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5-7元部分不饱和单环。在某些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5-6元部分不饱和单环。在某些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元部分不饱和单环。在某些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的6元部分不饱和单环。在某些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的7元部分不饱和单环。在一些实施方案中，R是具有一个选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的4元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的6元杂环。在一些实施方案中，R是具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的7元杂环。
在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的3元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的4元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的6元饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的7元饱和或部分不饱和杂环。
在某些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5-6元部分不饱和单环。在某些实施方案中，R是任选取代的四氢吡啶基、二氢噻唑基、二氢噁唑基或噁唑啉基。
在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的7-10元双环饱和或部分不饱和杂环。在一些实施方案中，R是任选取代的吲哚啉基。在一些实施方案中，R是任选取代的异吲哚啉基。在一些实施方案中，R是任选取代的1,2,3,4-四氢喹啉基。在一些实施方案中，R是任选取代的1,2,3,4-四氢异喹啉基。在一些实施方案中，R是任选取代的氮杂双环[3.2.1]辛基。
在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳基环。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选取代的5,6-稠合杂芳基环。
在一些实施方案中，R是任选取代的C6-30芳基脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C6-20芳基脂肪族。在一些实施方案中，R是任选取代的C6-10芳基脂肪族。在一些实施方案中，芳基脂肪族的芳基部分具有6、10或14个芳基碳原子。在一些实施方案中，芳基脂肪族的芳基部分具有6个芳基碳原子。在一些实施方案中，芳基脂肪族的芳基部分具有10个芳基碳原子。在一些实施方案中，芳基脂肪族的芳基部分具有14个芳基碳原子。在一些实施方案中，芳基部分是任选取代的苯基。
在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的C6-30芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的C6-30芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的C6-20芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的C6-20芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选取代的C6-10芳基杂脂肪族。在一些实施方案中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选取代的C6-10芳基杂脂肪族。
在一些实施方案中，两个R基团任选地且独立地一起形成共价键。在一些实施方案中，形成了-C＝O。在一些实施方案中，形成了-C＝C-。在一些实施方案中，形成了-C≡C-。
在一些实施方案中，同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-20元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-10元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-5个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-6元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-3个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-5元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-3个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-20元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-10元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-10元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-5个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-6元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-3个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。在一些实施方案中，两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-5元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-3个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，R基团中或由两个或更多个R基团一起形成的结构中的杂原子选自氧、氮和硫。在一些实施方案中，所形成的环是3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20元环。在一些实施方案中，所形成的环是饱和环。在一些实施方案中，所形成的环是部分饱和环。在一些实施方案中，所形成的环是芳环。在一些实施方案中，所形成的环包含饱和环部分、部分饱和环部分或芳环部分。在一些实施方案中，所形成的环包含5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个芳环原子。在一些实施方案中，所形成的环含有不超过5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个芳环原子。在一些实施方案中，芳环原子选自碳、氮、氧和硫。
在一些实施方案中，由两个或更多个R基团(或两个或更多个选自R和可以是R的变量的基团)一起形成的环是C3-30脂环族，C6-30芳基，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，或具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基；环如对R所述，但是是二价或多价的。
本发明的示例性化合物列于下表1中。
表1.示例性化合物
Figure BDA0003196682070001151
Figure BDA0003196682070001161
Figure BDA0003196682070001171
Figure BDA0003196682070001181
Figure BDA0003196682070001191
Figure BDA0003196682070001201
Figure BDA0003196682070001211
Figure BDA0003196682070001221
Figure BDA0003196682070001231
Figure BDA0003196682070001241
Figure BDA0003196682070001251
Figure BDA0003196682070001261
Figure BDA0003196682070001271
Figure BDA0003196682070001281
Figure BDA0003196682070001291
Figure BDA0003196682070001301
在一些实施方案中，有用的ARM是上表1中列出的化合物或其药学上可接受的盐。
5.制备免疫细胞和ARM药剂的示例性方法
本领域的多种技术可用于制备免疫细胞，例如，本公开文本的NK细胞和药剂。某些方法(包括分离、纯化、预活化、表征、评估等)描述于以下文献中：Romee等人,Blood 120,4751-4760,(2012)；Leong等人,Biol.Blood Marrow Transplant.20,463-473(2014)；Romee等人,Sci Transl Med.2016 Sep 21；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341；等等。
可以例如通过实施例中例示的合成方法来制备诸如ARM等药剂。
例如，在一些实施方案中，通过环加成反应(例如，点击化学或其变体)来构建有用的化合物(例如，ARM)。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式IV的结构：
Figure BDA0003196682070001302
或其盐，其中
ABT是抗体结合部分；
L是接头部分；
Rd是-La-R’，其中Rd包含-C≡C-或-N3；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式IV-a的结构：
Figure BDA0003196682070001311
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式IV-b的结构：
Rc-(Xaa)z-L-Rd，
IV-b
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式IV-c的结构：
Figure BDA0003196682070001321
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式IV-d的结构：
Figure BDA0003196682070001322
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，例如可用于制备本公开文本的药剂(例如，ARM)的化合物具有式V的结构：
Figure BDA0003196682070001323
或其盐，其中每个变量独立地如本公开文本中所述。
在一些实施方案中，用于制备化合物(例如，ARM)的方法包括以下步骤：
提供式IV、IV-a、IV-b、IV-c或IV-d的第一化合物或其盐，其中所述化合物包含第一反应性部分；
提供包含第二反应性部分的式V的第二化合物或其盐；以及
使第一化合物与第二化合物反应，其中第一反应性部分通过环加成反应与第二反应性部分反应。
可以根据本公开文本使用许多环加成反应。在一些实施方案中，环加成反应是[4+2]反应。在一些实施方案中，环加成反应是[3+2]反应。在一些实施方案中，[3+2]反应是点击化学反应。在一些实施方案中，第一反应性部分是-C≡C-并且第二反应性部分是-N3。在一些实施方案中，第一反应性部分是-N3并且第二反应性部分是-C≡C-。
6.用途、配制品以及施用
药学上可接受的组合物
在一些实施方案中，本公开文本提供了一种组合物，所述组合物包含免疫细胞(例如，预活化的记忆样NK细胞)以及药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物。在一些实施方案中，本公开文本提供了一种组合物，所述组合物包含药剂及其药物上可接受的衍生物以及药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物。在一些实施方案中，本公开文本提供了一种组合物，所述组合物包含免疫细胞和药剂及其药物上可接受的衍生物以及药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物。在一些实施方案中，免疫细胞和有用的药剂(例如，ARM)以分开的组合物提供。在一些实施方案中，免疫细胞和有用的药剂(例如，ARM)以同一组合物提供。
在许多实施方案中，通常以足以提供治疗益处而没有严重副作用的量施用免疫细胞。例如，在一些实施方案中，免疫细胞以0.01-100、0.1-50、0.1-20、0.1-10、0.05、0.1、0.2、0.3、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80或90百万个/千克受试者体重施用。
药剂(例如，ARM)通常以有效地将内源性抗体(例如，内源性抗体)和/或其片段选择性地重定向至靶细胞(例如，癌细胞)从而诱导抗体导向的、细胞介导的免疫(例如，细胞毒性)的量施用。在某些实施方案中，本公开文本的组合物中化合物的量使得它们有效地将内源性抗体选择性地重定向至癌细胞，从而在生物样品或受试者中诱导抗体导向的、细胞介导的细胞毒性。在一些实施方案中，量为0.01-100mg/kg体重。在一些实施方案中，量为0.01-50mg/kg体重。在一些实施方案中，量为从约1mg/kg至约25mg/kg。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物是不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体、辅助剂或媒介物。可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的载体、辅助剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、硅溶胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。在一些实施方案中，可以在合适的培养基中提供免疫细胞。
在一些实施方案中，药剂可以作为药学上可接受的衍生物提供，其可以是本公开文本的化合物的无毒盐、酯、酯的盐或其他衍生物，其在施用于接受者后能够直接或间接提供所述药剂。
本公开文本的组合物可口服、经胃肠外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、含服、经阴道或经由植入式储药器而施用。在一些实施方案中，肠胃外施用包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内以及颅内注射或输注技术。优选地，组合物经口、腹膜内或静脉内施用。优选地，静脉内施用包含免疫细胞的组合物。本公开文本的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。可以根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如，作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物和溶剂中，可使用的是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，常规地使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
在一些实施方案中，将药剂(例如，ARM)配制成用于延迟和/或持续释放的组合物。用于持续释放和/或缓慢吸收的技术是本领域广泛可用的并且可以根据本公开文本而使用。
在一些实施方案中，可以使用温和的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备可注射剂，天然的药学上可接受的油如橄榄油或蓖麻油、尤其是它们的聚氧乙烯化的形式也是如此。此类油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳剂和悬浮液)的类似分散剂。出于配制的目的，也可以使用其他常用的表面活性剂，如Tweens、Spans和其他乳化剂或生物利用度增强剂，它们通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型。
本公开文本的药剂(例如，ARM)的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型(例如，胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液)口服施用。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。还可以添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服使用水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和/或悬浮剂组合。如果需要，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
例如用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在一些实施方案中，将待递送的药剂(例如，ARM)与至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体(如柠檬酸钠或磷酸氢钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，如高岭土和膨润土；以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。
固体组合物也可用作软填充和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，这些明胶胶囊使用这样的赋形剂如乳糖(lactose/milk sugar)和高分子量聚乙二醇等。在一些实施方案中，片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶包衣和药物配制领域熟知的其他包衣)制备。在一些实施方案中，固体组合物可以任选地含有乳浊剂并且可以仅或优先地在受试者的某一部位(例如，肠道的某一部位)中、任选地以延迟方式释放待递送的药剂。可以使用的包埋组合物的例子包括聚合物质和蜡。
在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)可以呈具有一种或多种如上所述赋形剂的微囊化形式。在一些实施方案中，片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶包衣、控释包衣以及药物配制领域熟知的其他包衣)制备。在此类固体剂型中，待递送的药剂可以与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。此类剂型还可以如在正常实践中一样包含额外的物质，例如，压片润滑剂和其他压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在一些实施方案中，在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型可以包含缓冲剂。
可替代地，药学上可接受的组合物可以以栓剂的形式施用以进行直肠施用。这些可以通过将所述药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体的而在直肠温度下是液体的并且因此在直肠中将会溶化从而释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
还可以局部施用本发明的药学上可接受的组合物，尤其是当治疗靶标包含局部施用易于接近的区域或器官时，包括眼部、皮肤或者低位肠道的疾病。针对这些区域或器官中的每一个，可以容易地制备合适的局部配制品。
对于局部施用，药学上可接受的组合物可以被配制在合适的软膏中，所述软膏含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不局限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡以及水。可替代地，药学上可接受的组合物可以被配制在合适的洗液或乳膏中，所述洗液或乳膏含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不局限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇以及水。
对于眼部使用，可以将药学上可接受的组合物配制为在等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或优选地，配制为在等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液(在有或没有防腐剂如苯扎氯铵的情况下)。可替代地，对于眼部使用，可以将药学上可接受的组合物配制在软膏如矿脂中。
还可以通过鼻气雾剂或吸入剂施用药学上可接受的组合物。使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、提高生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶剂或分散剂，根据药物配制领域中熟知的技术制备此类组合物，并且可以将此类组合物制成在盐水中的溶液。
可以配制药剂(例如，ARM)的药学上可接受的组合物用于口服施用。此类配制品可以与食物一起施用或在没有食物的情况下施用。在一些实施方案中，在没有食物的情况下施用药学上可接受的组合物。在其他实施方案中，将药学上可接受的组合物与食物一起施用。
还应理解，针对具体受试者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，例如，所用特定免疫细胞和/或药剂的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合、治疗医师的判断以及所治疗特定疾病的严重程度等。
用途
除了其他方面，本公开文本涵盖以下认知，即某些免疫细胞(如预活化的记忆样NK细胞)对其靶标(例如，癌细胞)具有改进的特性和/或活性，并且可以特别有效地治疗病症、障碍或疾病(如癌症)；然而，此类免疫细胞例如由于其增加的细胞毒性也可能引起更严重的副作用，例如，导致脱靶作用。因此，在一些实施方案中，本公开文本提供了使受试者暴露于此类免疫细胞和药剂(例如，ARM)这两者的技术，所述药剂可促进免疫细胞靶向所需靶标(例如，癌细胞)并减少此类免疫细胞疗法的副作用。
在一些实施方案中，有用的药剂将抗体(例如，内源性抗体)选择性地导向至患病细胞(例如，癌细胞)，从而诱导和/或促进抗体导向的、细胞介导的免疫应答，例如，由免疫细胞(例如，预活化的记忆样NK细胞(例如，细胞因子诱导型记忆样NK细胞))产生的细胞毒性。在一些实施方案中，募集的抗体包括一种或多种内源性抗体。在一些实施方案中，募集的抗体对一种或多种抗原具有特异性。在一些实施方案中，募集的抗体对一种或多种肽抗原或蛋白质具有特异性。在一些实施方案中，募集的抗体是异质的，因为它们不是针对同一抗原或蛋白质的抗体。
在一些实施方案中，有用的药剂(例如，ARM)触发、产生鼓励和/或增强针对靶标的一种或多种免疫系统活性。在一些实施方案中，免疫系统活性是或包含由NK细胞产生的ADCC。在一些实施方案中，免疫系统活性是或包含由预活化的记忆样NK细胞(例如，细胞因子诱导型记忆样NK细胞)产生的ADCC。在一些实施方案中，靶标是癌细胞。在一些实施方案中，靶标是受试者中的癌细胞。
如本文所述，施用免疫细胞(如预活化的记忆样NK细胞，例如，细胞因子诱导型记忆样NK细胞)和药剂(如ARM)使受试者可以暴露于这两者。在一些实施方案中，免疫细胞(或其剂量)在ARM药剂(或其剂量)之前施用。在一些实施方案中，免疫细胞(或其剂量)在ARM药剂(或其剂量)之后施用。在一些实施方案中，免疫细胞(或其剂量)与ARM药剂(或其剂量)同时施用。当同时施用时，免疫细胞和ARM可以在一种组合物中或作为分开的组合物施用。在一些实施方案中，在彼此的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20周之内施用免疫细胞和ARM。免疫细胞和药剂(例如，ARM)可以作为单剂量或多剂量独立施用。在一些实施方案中，施用的免疫细胞(例如，预活化的记忆样NK细胞)与施用的ARM连同受试者中的靶标(例如，癌细胞)和抗体(或其片段)形成复合物，其中抗体(或其片段)与免疫细胞和ARM相互作用，并且ARM与抗体(或其片段)和靶标(例如，癌细胞)相互作用。
在一些实施方案中，如本文所用的“治疗(treating或treatment)”包括逆转、减轻、延迟病症、障碍或疾病或其一种或多种症状的发作或抑制其进展。在一些实施方案中，可以在一种或多种症状已经出现之后施用治疗。在其他实施方案中，可以在没有症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前(例如，以症状的病史为根据和/或以遗传或其他易感因素为根据)对易感个体施用治疗。症状消退后也可继续治疗，例如以防止或延迟它们复发。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗一种或多种障碍、疾病和/或病症的方法，其中所述障碍、疾病或病症是癌症。除了其他方面，所提供的技术(例如，化合物、组合物、方法等)对于预防和/或治疗癌症特别有用。
在一些实施方案中，癌症是导致癌性或恶性肿瘤形成和生长的病理过程，所述肿瘤即是通过细胞增殖而生长的异常组织，通常比正常组织的生长更快并在引发新的生长的刺激停止之后继续生长。恶性肿瘤可以显示与正常组织的结构性组织和功能性协调的部分或全部丧失，并且多数恶性肿瘤侵入周围组织，转移至若干部位，并且除非充分治疗，很可能在尝试移除之后复发并引起患者死亡。在一些实施方案中，如本文所用，术语瘤形成包括所有癌性疾病状态，并且包括或涵盖与恶性血液系统肿瘤、腹水瘤和实体瘤相关的病理过程。代表性癌症包括例如前列腺癌、转移性前列腺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌(renal)、脑癌/CNS癌、头颈癌、喉癌(throat)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、尤文氏肉瘤、小细胞肺癌、绒毛膜癌、横纹肌肉瘤、维尔姆斯瘤、神经母细胞瘤、毛细胞白血病、口腔癌/咽癌、食道癌、喉癌(larynx)、肾癌(kidney)和淋巴瘤等，它们可以用一种或多种根据本发明的化合物治疗。
在一些实施方案中，癌症是白血病。在一些实施方案中，所提供的技术对于治疗白血病是特别有用的。在一些实施方案中，所提供的技术对于治疗急性髓性白血病(AML)是特别有用的。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是黑色素瘤。
在一些实施方案中，在施用本发明的疗法(例如，暴露于施用的预活化的记忆样NK细胞和ARM)之前，受试者可能已经用另一种疗法(例如，化学疗法、免疫疗法、手术等)进行了治疗。在一些实施方案中，受试者对复发性或难治性癌症易感，或患有复发性或难治性癌症。在一些实施方案中，受试者对复发性或难治性白血病易感，或患有复发性或难治性白血病。在一些实施方案中，受试者对复发性或难治性AML易感，或患有复发性或难治性AML。
在一些实施方案中，可以向进行淋巴细胞清除方案的受试者施用治疗。在一些实施方案中，清除免疫调节元件(例如，使用细胞毒剂或全身辐照)可以增强所施用的免疫细胞的活性。在一些实施方案中，向受试者施用细胞毒剂，如氟达拉滨、环磷酰胺和/或阿仑单抗。
组合疗法
在某些实施方案中，所提供的技术(例如，包含免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)和ARM的技术)与一种或多种其他疗法组合施用。在一些实施方案中，除了免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)和ARM药剂之外，还向受试者施用另一种疗法。在一些实施方案中，受试者患有癌症，并且这样的另一种疗法是癌症疗法，例如，化学疗法、免疫疗法、手术等。
除了其他方面，包括免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)和ARM的本公开文本的技术可以与其他疗法组合使用，即，此类技术可以与一种或多种其他治疗剂或医疗程序同时、在其之前或在其之后施用，特别是用于治疗各种癌症。在一些实施方案中，此类技术可以与其他抗增殖化合物组合使用。在一些实施方案中，可用于组合的治疗剂是化疗剂或抗增殖化合物。示例性化疗剂包括但不限于烷化剂、亚硝基脲剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、来源于植物的生物碱、拓扑异构酶抑制剂、激素治疗药物、激素拮抗剂、芳香酶抑制剂、P-糖蛋白抑制剂、铂络合物衍生物、其他免疫治疗药物、以及其他抗癌剂。此外，所提供的技术可以与作为癌症治疗辅助剂的白细胞减少(嗜中性粒细胞)药物、血小板减少药物、止吐药物和癌症疼痛药物一起用于患者的QOL恢复，或者与它们一起制成混合物。在一些实施方案中，治疗剂是抗体。在一些实施方案中，治疗剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，免疫调节剂靶向免疫细胞上的细胞表面信号传导分子。在一些实施方案中，免疫调节剂靶向免疫细胞上的细胞表面信号传导分子，其中所述药剂是阻断共抑制途径的拮抗剂。在一些实施方案中，免疫调节剂是检查点阻断剂。在一些实施方案中，免疫调节剂是靶向由免疫细胞表达的细胞表面信号传导蛋白的抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是靶向选自以下的蛋白质的抗体：PD-1、PD-L1、CTLA4、TIGIT、BTLA、TIM-3、LAG3、B7-H3和B7-H4。在一些实施方案中，免疫调节剂是PD-1抗体(例如，纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、BMS 936559、MPDL328OA等)。在一些实施方案中，免疫调节剂是PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是CTLA4抗体(例如，伊匹单抗)。在一些实施方案中，免疫调节剂是TIGIT抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是BTLA抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是Tim-3抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是LAG3抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是B7-H3抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂是B7-H4抗体。在一些实施方案中，免疫调节剂靶向免疫细胞上的细胞表面信号传导分子，其中所述药剂是参与共刺激途径的激动剂。在一些实施方案中，此类免疫调节剂是或包含靶向共刺激受体的抗体。在一些实施方案中，抗体激活T细胞共刺激受体。在一些实施方案中，抗体靶向肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员。在一些实施方案中，抗体靶向选自CD137(4-1BB)、CD357(GITR、TNFRS18、AITR)、CD134(OX40)和CD 40(TNFRSF5)的蛋白质。在一些实施方案中，抗体是抗CD137抗体(例如，乌瑞鲁单抗(urelumab))。在一些实施方案中，抗体是抗CD357抗体。在一些实施方案中，抗体是抗CD40抗体。在一些实施方案中，抗体是抗CD134抗体。其他示例性T细胞共刺激和共抑制受体描述于以下文献中：Chen L,Flies DB.,Molecular mechanisms of T cell co-stimulation and co-inhibition.Nat.Rev.Immunol.2013,13(4),227-42，以及Yao S等人,Advances intargeting cell surface signalling molecules for immunemodulation.Nat.Rev.Drug Discov.2013,12(2),136-40。在一些实施方案中，治疗剂是激活此类刺激性受体或阻断此类抑制性受体的抗体。
在一些实施方案中，对于血液恶性肿瘤，用于组合的有用的额外治疗剂可以是利妥昔单抗
Figure BDA0003196682070001411
环磷酰胺
Figure BDA0003196682070001412
多柔比星
Figure BDA0003196682070001413
长春新碱
Figure BDA0003196682070001414
强的松、刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/pan-JAK抑制剂、TYK2抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂及其组合。在一些实施方案中，对于实体瘤，用于组合的有用的治疗剂选自利妥昔单抗
Figure BDA0003196682070001415
环磷酰胺
Figure BDA0003196682070001416
多柔比星
Figure BDA0003196682070001417
长春新碱
Figure BDA0003196682070001418
强的松、刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/pan-JAK抑制剂、TYK2抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂及其组合。在一些实施方案中，用于组合的有用的额外药剂是刺猬(Hh)信号传导通路抑制剂。
在一些实施方案中，病症、障碍或疾病是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，针对DLBCL的、用于组合的有用的额外药剂选自利妥昔单抗
Figure BDA0003196682070001419
环磷酰胺
Figure BDA00031966820700014110
多柔比星
Figure BDA00031966820700014111
长春新碱
Figure BDA00031966820700014112
强的松、刺猬信号传导抑制剂及其组合。
在另一个实施方案中，病症、障碍或疾病是多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，用于组合的有用的额外药剂选自硼替佐米
Figure BDA00031966820700014113
和地塞米松
Figure BDA00031966820700014114
刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/pan-JAK抑制剂、TYK2抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂与来那度胺
Figure BDA00031966820700014115
的组合，及其组合。
在另一个实施方案中，病症、障碍或疾病是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。在一些实施方案中，有用的额外治疗剂选自苯丁酸氮芥
Figure BDA00031966820700014116
环磷酰胺
Figure BDA00031966820700014117
氟达拉滨
Figure BDA00031966820700014118
克拉屈滨
Figure BDA00031966820700014119
利妥昔单抗
Figure BDA00031966820700014120
刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/pan-JAK抑制剂、TYK2抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂及其组合。
在一些实施方案中，用于组合的一种或多种其他治疗剂是或包含肿瘤特异性免疫细胞。在一些实施方案中，用于组合的组合物包含免疫增强物质。可以与所提供的包含免疫细胞和ARM的技术组合使用的示例性免疫增强物质包括各种细胞因子和肿瘤抗原。刺激免疫反应的细胞因子包括例如GM-CSF，M-CSF，G-CSF，干扰素-α、β、γ，IL-1，IL-2，IL-3和IL-12等。阻断抑制性受体和/或激活刺激性受体的抗体(其在本领域中广为人知并在本文中描述，例如，B7配体衍生物、抗CD3抗体、抗CD28抗体和抗CTLA-4抗体)可改善所希望的免疫反应。在一些实施方案中，用于组合的治疗剂包含或是用于免疫调节的小分子。在一些实施方案中，治疗剂是介导抗肿瘤免疫活性的小分子。在一些实施方案中，治疗剂是靶向直接参与免疫调节的酶的小分子。在一些实施方案中，治疗剂是吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂是IDO1抑制剂，例如，F001287、英多莫德(indoximod)、NLG-919和INCB024360。在一些实施方案中，治疗剂是色氨酸-2,3双加氧酶(TDO)抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂是IDO/TDO双重抑制剂。在一些实施方案中，治疗剂是IDO选择性抑制剂。在一些实施方案中，一些其他实施方案，治疗剂是TDO选择性抑制剂。在一些实施方案中，所提供的组合物包含IDO抑制剂。在一些实施方案中，所提供的组合物包含IDO抑制剂。
在一些实施方案中，可与化合物、组合物和方法组合使用的医疗程序包括手术、放射疗法(例如，γ-放射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距离放射疗法、全身放射性同位素等)、内分泌疗法、生物反应调节剂(例如，干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子(TNF)等)、热疗、冷冻疗法和过继T细胞转移(例如，TIL疗法、转基因TCR、CAR T细胞疗法等)。在一些实施方案中，医疗程序是手术。在一些实施方案中，医疗程序是放射疗法。
在一些实施方案中，可用于组合的抗增殖化合物包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素药；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷化化合物；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环加氧酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤性抗代谢物；铂化合物；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物和其他抗血管生成化合物；靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；戈那瑞林激动剂；抗雄激素药；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；二膦酸盐；生物反应调节剂；抗增殖抗体；乙酰肝素酶抑制剂；Ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液恶性肿瘤的化合物；靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物；Hsp90抑制剂，如17-AAG(17-烯丙基氨基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙基氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、来自ConformaTherapeutics公司的CNF1010；替莫唑胺
Figure BDA0003196682070001431
纺锤体驱动蛋白抑制剂，如来自GlaxoSmithKline公司的SB715992或SB743921，或来自CombinatoRx公司的喷他脒/氯丙嗪；MEK抑制剂，如来自Array BioPharma公司的ARRY142886、来自AstraZeneca公司的AZD6244、来自Pfizer公司的PD181461以及亚叶酸。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂是抑制雌激素产生的化合物，例如，抑制底物雄烯二酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇。在一些实施方案中，它包括类固醇，尤其是阿他美坦、依西美坦和福美坦，并且特别地是非类固醇，尤其是氨鲁米特、罗谷亚胺、吡啶格鲁米特、曲洛司坦、睾内酯、酮康唑、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。在一些实施方案中，与作为芳香酶抑制剂的化疗剂的组合对于治疗激素受体阳性肿瘤(如乳腺肿瘤)是特别有用的。
在一些实施方案中，抗雌激素药是在雌激素受体水平拮抗雌激素作用的化合物。在一些实施方案中，它选自它莫西芬、氟维司群、雷洛昔芬和雷洛昔芬盐酸盐。在一些实施方案中，与作为抗雌激素药的化疗剂的组合对于治疗雌激素受体阳性肿瘤(如乳腺肿瘤)是特别有用的。
在一些实施方案中，抗雄激素药是能够抑制雄激素的生物效应的物质。在一些实施方案中，它是比卡鲁胺(CasodexTM)。在一些实施方案中，戈那瑞林激动剂是阿巴瑞克、戈舍瑞林或醋酸戈舍瑞林。
在一些实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自拓扑替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148。
在一些实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自蒽环类药物，如多柔比星(包括脂质体配制品，如CaelyxTM)、道诺霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类的米托蒽醌和洛索蒽醌；以及鬼白毒素类的依托泊苷和替尼泊苷。
在一些实施方案中，微管活性剂选自微管稳定化合物或微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制剂，例如，紫杉烷类，如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱、和长春瑞滨；圆皮海绵内酯；秋水仙素和埃坡霉素及其衍生物。
在一些实施方案中，烷化剂是环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。
在一些实施方案中，组蛋白脱乙酰酶抑制剂或HDAC抑制剂是抑制组蛋白脱乙酰酶并具有抗增殖活性的化合物。在一些实施方案中，HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。在一些实施方案中，可用于组合的HDAC抑制剂是MS275、SAHA、FK228(原名FR901228)、曲古抑菌素A或US 6,552,065中披露的化合物，例如，N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐、N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐(特别是乳酸盐)。
在一些实施方案中，抗肿瘤性抗代谢物选自5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨、吉西他滨、DNA脱甲基化化合物如5-氮杂胞苷和地西他滨、甲氨蝶呤和依达曲沙、以及叶酸拮抗剂如培美曲塞。
在一些实施方案中，铂化合物是卡铂、顺铂(cis-platin或cisplatinum)或奥沙利铂。
在一些实施方案中，靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物、或者靶向/降低蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物、或其他抗血管生成化合物是蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如，a)靶向、降低或抑制血小板衍生生长因子受体(PDGFR)活性的化合物，如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，尤其是抑制PDGF受体的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)活性的化合物，如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物，尤其是抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物，或靶向IGF-I受体或其生长因子的细胞外结构域的抗体；d)靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族活性的化合物，或ephrin B4抑制剂；e)靶向、降低或抑制AxI受体酪氨酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受体酪氨酸激酶活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向、降低或抑制作为PDGFR家族一部分的C-kit受体酪氨酸激酶活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶家族活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成员、其基因融合产物(例如，BCR-Abl激酶)和突变体活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-Abl家族成员及其基因融合产物活性的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼罗替尼(AMN107)、PD180970、AG957、NSC 680410、来自ParkeDavis的PD173955、或达沙替尼(BMS-354825)；j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)和丝氨酸/苏氨酸激酶的Raf家族的成员，MEK、SRC、JAK/pan-JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族成员，和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)成员的活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，如米哚妥林(midostaurin)；其他化合物的例子包括UCN-01、沙芬戈(safingol)、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福辛、伊莫福辛(llmofosine)、RO 318220和RO 320432、GO 6976、lsis 3521、LY333531/LY379196、异喹啉化合物、FTI、PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向、降低或抑制蛋白酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物，例如，靶向、降低或抑制蛋白酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物包括甲磺酸伊马替尼(GleevecTM)或酪氨酸磷酸化抑制剂，如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810、AG 99、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490、酪氨酸磷酸化抑制剂B44、酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555、AG 494、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和adaphostin(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，adaphostin)；l)靶向、降低或抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶家族(EGFR1 ErbB2、ErbB3、ErbB4作为同二聚体或异二聚体)及其突变体活性的化合物，例如，靶向、降低或抑制表皮生长因子受体家族活性的化合物尤其是抑制EGF受体酪氨酸激酶家族成员(如EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4)或与EGF或EGF相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体，CP358774，ZD 1839，ZM 105180；曲妥珠单抗(HerceptinTM)、西妥昔单抗(ErbituxTM)、Iressa、Tarceva、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3、以及7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-Met活性的化合物，尤其是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-Met的细胞外结构域或与HGF结合的抗体，n)靶向、降低或抑制一个或多个JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或pan-JAK)激酶活性的化合物，包括PRT-062070、SB-1578、巴瑞克替尼(baricitinib)、帕利替尼(pacritinib)、莫洛替尼(momelotinib)、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼和鲁索替尼；o)靶向、降低或抑制PI3激酶(PI3K)的激酶活性的化合物，包括ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕利司(buparlisib)、皮吹利司(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、达托利司(dactolisib)、XL-147、XL-765和艾拉利司(idelalisib)；以及；以及q)靶向、降低或抑制刺猬蛋白(Hh)或平滑受体(SMO)通路的信号传导效应的化合物，包括环巴胺、维莫德吉(vismodegib)、伊曲康唑、尔莫德吉(erismodegib)和IPI-926(萨利德吉(saridegib))。
在一些实施方案中，PI3K抑制剂是对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶具有抑制活性的化合物，包括但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。可用于组合的PI3K抑制剂的例子包括ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕利司、皮吹利司、PF-4691502、BYL-719、达托利司、XL-147、XL-765和艾拉利司。
在一些实施方案中，BTK抑制剂是对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)具有抑制活性的化合物，例如，AVL-292、依鲁替尼等。
在一些实施方案中，SYK抑制剂是对脾酪氨酸激酶(SYK)具有抑制活性的化合物，例如，PRT-062070、R-343、R-333、Excellair、PRT-062607、福他替尼等。BTK抑制性化合物的其他例子可在WO 2008039218和WO 2011090760中找到。
SYK抑制性化合物的例子可以在WO 2003063794、WO 2005007623和WO 2006078846中找到。
PI3K抑制性化合物的例子可以在WO 2004019973、WO 2004089925、WO2007016176、US8138347、WO 2002088112、WO 2007084786、WO 2007129161、WO 2006122806、WO 2005113554和WO 2007044729中找到。
JAK抑制性化合物的例子可以在WO 2009114512、WO 2008109943、WO 2007053452、WO 2000142246和WO 2007070514中找到。
在一些实施方案中，抗血管生成化合物对其活性具有另一种机制，例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关，例如，沙利度胺(ThalomidTM)和TNP-470。
可用于组合的蛋白酶体抑制剂的例子包括硼替佐米、双硫仑、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)、盐孢酰胺(salinosporamide)A、卡非佐米、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
在一些实施方案中，靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物是例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，如冈田酸或其衍生物。在一些实施方案中，诱导细胞分化过程的化合物是例如视黄酸、α-γ-或δ-生育酚或者α-γ-或δ-生育三烯酚等。
在一些实施方案中，环加氧酶抑制剂选自Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸和衍生物，如塞来昔布(CelebrexTM)、罗非昔布(VioxxTM)、依托昔布、伐地昔布或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸(如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸)、罗美昔布。
在一些实施方案中，二膦酸盐选自依替膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。在一些实施方案中，mTOR抑制剂是抑制哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司
Figure BDA0003196682070001471
依维莫司(CerticanTM)、CCI-779或ABT578。
在一些实施方案中，乙酰肝素酶抑制剂靶向、减少或抑制硫酸肝素降解。在一些实施方案中，它是PI-88。在一些实施方案中，生物反应调节剂是淋巴因子或干扰素。
在一些实施方案中，Ras致癌同种型(如H-Ras、K-Ras和/或N-Ras)的抑制剂是靶向、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物；例如，“法呢基转移酶抑制剂”，如L-744832、DK8G557或R115777(ZarnestraTM)。在一些实施方案中，端粒酶抑制剂是靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物。在一些实施方案中，靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒抑素。
在一些实施方案中，甲硫氨酸氨肽酶抑制剂是靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物。在一些实施方案中，靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物是苯甲酰胺或其衍生物。
在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物。在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米(VelcadeTM)或MLN 341。
在一些实施方案中，基质金属蛋白酶抑制剂(“MMP”抑制剂)选自胶原拟肽和非拟肽抑制剂、四环素衍生物，例如异羟肟酸酯拟肽抑制剂巴马司他及其口服可生物利用的类似物马立马司他(BB-2516)、普马司他(AG3340)、美他司他(NSC 683551)、BMS-279251、BAY12-9566、TAA211、MMI270B和AAJ996。
在一些实施方案中，用于治疗血液恶性肿瘤的化合物选自FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物；干扰素、1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(ara-c)和白消安(bisulfan)；以及ALK抑制剂，它们是靶向、减少或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。
在一些实施方案中，靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物是抑制Flt-3R受体激酶家族成员的化合物、蛋白质或抗体，如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
在一些实施方案中，HSP90抑制剂是靶向、降低或抑制HSP90的固有ATP酶活性；或经由泛素蛋白体途径降解、靶向、减少或抑制HSP90客户蛋白的化合物。在一些实施方案中，此类化合物选自17-烯丙基氨基、17-脱甲氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素衍生物；其他格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
在一些实施方案中，抗增殖抗体选自曲妥珠单抗(HerceptinTM)、曲妥珠单抗-DM1、爱必妥、贝伐单抗(AvastinTM)、利妥昔单抗
Figure BDA0003196682070001481
PRO64553(抗CD40)和2C4抗体。
在一些实施方案中，对于急性髓性白血病(AML)的治疗，包括免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)和ARM的技术可以与各种白血病疗法组合使用，特别是与用于治疗AML的疗法(例如，法呢基转移酶抑制剂和/或用于治疗AML的其他药物，如道诺霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂或PKC412)组合使用。在一些实施方案中，抗白血病化合物是Ara-C，其是一种嘧啶类似物，是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。在一些实施方案中，抗白血病化合物是次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)或磷酸氟达拉滨的嘌呤类似物。
在一些实施方案中，生长抑素受体拮抗剂(如奥曲肽和SOM230)靶向、治疗或抑制生长抑素受体。在一些实施方案中，肿瘤细胞损伤方法包括或为电离辐射。电离辐射可能以电磁射线(如X射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)的形式出现。在一些实施方案中，电离辐射在放射疗法中提供并且是本领域已知的。
在一些实施方案中，用于组合的有用药剂是EDG结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。在一些实施方案中，EDG结合剂是一类调节淋巴细胞再循环的免疫抑制剂，如FTY720。在一些实施方案中，核糖核苷酸还原酶抑制剂是嘧啶或嘌呤核苷类似物，如氟达拉滨和/或胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯基嘌呤(尤其是与ara-C组合以对抗ALL)和/或喷司他丁。在一些实施方案中，核糖核苷酸还原酶抑制剂选自羟基脲和2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
在一些实施方案中，有用的化合物、蛋白质或单克隆抗体(例如，靶向VEGF的那些)选自1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸酯；AngiostatinTM；EndostatinTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；ZD6474；SU5416；SU6668；贝伐单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体(如rhuMAb和RHUFab)、VEGF适体(如Macugon)；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、Angiozyme(RPI4610)和贝伐单抗(AvastinTM)。
在一些实施方案中，用于组合疗法的光动力疗法是指使用某些称为光敏化合物的化学物质来治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的例子包括用化合物，如VisudyneTM和卟吩姆钠治疗。
在一些实施方案中，有用的血管生成抑制性类固醇是阻断或抑制血管生成的化合物，如阿奈可他、曲安西龙、氢化可的松、11-α-表氢化可的松、皮甾酮、17α-羟基孕酮、皮质酮、脱氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
在一些实施方案中，包含皮质类固醇的植入物是包含氟轻松和/或地塞米松的植入物。
在一些实施方案中，化疗化合物选自植物生物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或混杂的化合物或具有其他或未知作用机制的化合物。
在一些实施方案中，用于组合的额外药剂选自抗炎物质、支气管扩张物质或抗组胺药物物质。在一些实施方案中，合适的抗炎药选自类固醇，特别是糖皮质激素，如布地奈德、二丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松；非甾体糖皮质激素受体激动剂；LTB4拮抗剂，如LY293111、CGS025019C、CP-195543、SC-53228、BIIL 284、ONO 4057、SB209247；LTD4拮抗剂，如孟鲁司特和扎鲁司特等；PDE4抑制剂，如西洛司特(
Figure BDA0003196682070001501
GlaxoSmithKline)、罗氟司特(Byk Gulden)、V-11294A(Napp)、BAY19-8004(Bayer)、SCH-351591(Schering-Plough)、Arofylline(Almirall Prodesfarma)、PD189659/PD168787(Parke-Davis)、AWD-12-281(Asta Medica)、CDC-801(Celgene)、SeICID(TM)CC-10004(Celgene)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe)、KW-4490(Kyowa Hakko Kogyo)；A2a激动剂；A2b拮抗剂；以及β-2肾上腺素受体激动剂，如沙丁胺醇(albuterol/salbutamol)、间羟异丙肾上腺素、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、丙卡特罗，尤其是福莫特罗及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，合适的支气管扩张药选自抗胆碱能或抗毒蕈碱化合物，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托溴铵盐和CHF4226(Chiesi)以及格隆溴铵。在一些实施方案中，抗组胺药物选自盐酸西替利嗪、对乙酰氨基酚、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和盐酸非索非那定、阿伐斯汀、阿司咪唑、氮卓斯汀、依巴斯汀、依匹斯汀、咪唑斯汀和特非那定。
在一些实施方案中，用于组合的抗炎药是具有趋化因子受体的拮抗剂的那些，例如，CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、CCR-9和CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特别是CCR-5拮抗剂，如Schering-Plough拮抗剂SC-351125、SCH-55700和SCH-D，以及Takeda拮抗剂，如N-[[4-[[[6,7-二氢-2-(4-甲基苯基)-5H-苯并-环庚烯-8-基]羰基]氨基]苯基]-甲基]四氢-N,N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化铵(TAK-770)。
当组合使用时，组合物可以单独施用或与一种或多种其他治疗剂组合施用。那些额外的药剂可以分开施用，例如，作为多剂量方案的一部分。可替代地，这些药剂可以是与包含免疫细胞和/或ARM的组合物混合在一起的单一剂型的一部分。药剂可以同时、顺序地或彼此相隔一段时间(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25小时，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周)施用。在一些实施方案中，受试者同时暴露于组合中的所有药剂(例如，免疫细胞、ARM和额外的药剂)。
在一些实施方案中，额外治疗剂以及包含免疫细胞和ARM的技术协同作用。因此，此类组合中额外治疗剂的量可能少于仅使用所述治疗剂的单一疗法所需的量。
除了其他方面，本公开文本提供了以下示例性实施方案：
1.一种用于在系统中诱导细胞死亡、抑制细胞生长和/或减少细胞数量的方法，所述方法包括向所述系统施用：
以下中的一种或两种：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与
所述靶标结合部分的接头部分；
所述系统于是暴露于这两者，并且与不存在所述自然杀伤细胞和所述抗体募集分子的情况相比，所述系统中的细胞数量减少。
2.一种用于治疗病症、障碍或疾病的方法，所述方法包括向患有所述病症、障碍或疾病的受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合癌细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
3.根据实施方案2所述的方法，其中所述病症、障碍或疾病是癌症。
4.一种用于降低使用自然杀伤细胞的治疗的毒性/副作用的方法，所述方法包括向受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合治疗的靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
5.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞是记忆样自然杀伤细胞。
6.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞是细胞因子诱导型记忆样自然杀伤细胞。
7.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与参考自然杀伤细胞相比，所述自然杀伤细胞具有抑制性受体、活化性受体和细胞因子受体的增加的表达。
8.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与参考自然杀伤细胞相比，所述自然杀伤细胞具有CD94/NKG2A、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、CD62L和CD25中的一种或多种的增加的表达。
9.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与参考自然杀伤细胞相比，所述自然杀伤细胞具有NKp80的降低的表达。
10.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与参考自然杀伤细胞相比，所述自然杀伤细胞具有增加的增殖。
11.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与参考自然杀伤细胞相比，所述自然杀伤细胞在刺激后具有增加的IFN-γ产生。
12.根据实施方案7-11中任一项所述的方法，其中参考自然杀伤细胞是从未经细胞因子处理的受试者分离的自然杀伤细胞。
13.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞由IL-12、IL-15和IL-18诱导。
14.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中同时施用所述自然杀伤细胞和所述抗体募集分子。
15.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞和所述抗体募集分子以一种组合物施用。
16.根据实施方案1-13中任一项所述的方法，其中在所述抗体募集分子之前施用所述自然杀伤细胞。
17.根据实施方案1-13中任一项所述的方法，其中在所述抗体募集分子之后施用所述自然杀伤细胞。
18.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中以0.01-100x106个/公斤受试者体重的剂量施用所述自然杀伤细胞。
19.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中施用所述自然杀伤细胞和所述ARM，使得受试者暴露于这两者。
20.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗体募集分子的抗体结合部分是通用抗体结合部分。
21.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗体募集分子的靶标结合部分结合靶细胞的表面蛋白。
22.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗体募集分子的靶标结合部分结合CD22。
23.根据实施方案1-21中任一项所述的方法，其中所述抗体募集分子的靶标结合部分结合CD33。
24.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
25.根据实施方案24所述的方法，其中所述癌细胞是血液肿瘤细胞。
26.根据实施方案24所述的方法，其中所述癌细胞是实体瘤细胞。
27.根据实施方案24所述的方法，其中所述癌症是AML。
28.根据实施方案24所述的方法，其中所述癌症选自前列腺癌、转移性前列腺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌(renal)、脑癌/CNS癌、头颈癌、喉癌(throat)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、尤文氏肉瘤、小细胞肺癌、绒毛膜癌、横纹肌肉瘤、维尔姆斯瘤、神经母细胞瘤、毛细胞白血病、口腔癌/咽癌、食道癌、喉癌(larynx)、肾癌(kidney)和淋巴瘤。
29.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞与GSK3α/β抑制剂接触。
30.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述ARM是式I的化合物：
Figure BDA0003196682070001531
或其药学上可接受的盐，其中：
ABT是抗体结合部分；
L是连接ABT与TBT的二价接头部分；并且
TBT是靶标结合部分。
31.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是式II的化合物：
Figure BDA0003196682070001541
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R3和R5各自独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R5基团和附接到同一碳原子的R5’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；或者
两个R5基团任选地连同其间插原子一起形成C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
R1’、R3’和R5’各自独立地是氢或C1-3脂肪族；
R2、R4和R6各自独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R2和R1任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R4和R3任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；或者
R6基团及其相邻的R5基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
L1是连接
Figure BDA0003196682070001551
的三价接头部分；
L2是共价键或C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、
-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070001552
Figure BDA0003196682070001553
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
TBT是靶标结合部分；并且
m和n各自独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。
32.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是式III的化合物：
Figure BDA0003196682070001554
或其药学上可接受的盐，其中：
每个R7独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R7基团和附接到同一碳原子的R7’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
每个R7'独立地是氢或C1-3脂肪族；
每个R8独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R8基团及其相邻的R7基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R9是氢、C1-3脂肪族或-C(O)C1-3脂肪族；
L3是连接
Figure BDA0003196682070001561
与TBT的二价接头部分；
TBT是靶标结合部分；并且
o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
33.根据实施方案31所述的方法，其中R2是氢。
34.根据实施方案31所述的方法，其中R4是氢。
35.根据实施方案31所述的方法，其中R1’是氢。
36.根据实施方案31所述的方法，其中R3’是氢。
37.根据实施方案31所述的方法，其中L1是
Figure BDA0003196682070001562
Figure BDA0003196682070001571
Figure BDA0003196682070001581
38.根据实施方案31所述的方法，其中L2是C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure BDA0003196682070001591
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基。
39.如实施方案30至38中任一项所述的方法，其中TBT选自
Figure BDA0003196682070001592
40.根据实施方案31所述的方法，其中所述化合物具有式II-a、II-b、II-c、II-d、II-e或II-f之一：
Figure BDA0003196682070001593
Figure BDA0003196682070001601
41.根据实施方案31所述的方法，其中L2是
Figure BDA0003196682070001611
Figure BDA0003196682070001612
42.根据实施方案32所述的方法，其中L3是
Figure BDA0003196682070001613
Figure BDA0003196682070001614
43.根据实施方案29至42中任一项所述的方法，其中所述化合物选自表1中描绘的那些。
44.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是具有式I-a结构的化合物：
Figure BDA0003196682070001615
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
t是0-50；
z是1-50；
L是接头部分；
TBT是靶标结合部分；
每个Rc独立地是-La-R’；
a和b各自独立地是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
45.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是具有式I-b结构的化合物：
Figure BDA0003196682070001621
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
每个z独立地是1-50；
每个L独立地是接头部分；
TBT是靶标结合部分，
每个Rc独立地是-La-R’；
a1和a2各自独立地是0-200，其中a1和a2中的至少一个不是0；
b是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
46.根据实施方案45所述的方法，其中a1是1并且a2是0。
47.根据实施方案45所述的方法，其中a1是0并且a2是1。
48.根据实施方案44-47中任一项所述的方法，其中a是1。
49.根据实施方案44-48中任一项所述的方法，其中b是1。
50.根据实施方案44-49中任一项所述的方法，其中-(Xaa)z-是或包含-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X12是XaaA或XaaP，
其中每个XaaA独立地是其侧链包含芳族基团的氨基酸残基，每个XaaP独立地是其侧链包含带正电荷的侧链的氨基酸残基，并且每个XaaN独立地是其侧链包含带负电荷的侧链的氨基酸残基。
51.根据实施方案50所述的方法，其中X5是XaaA。
52.根据实施方案50所述的方法，其中X5是XaaP。
53.根据实施方案50-52中任一项所述的方法，其中X12是XaaA。
54.根据实施方案50-52中任一项所述的方法，其中X12是XaaP。
55.根据实施方案50-54中任一项所述的方法，其中X7、X10和X11各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。
56.根据实施方案44-49中任一项所述的方法，其中-(Xaa)z-是或包含-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；
X12是XaaA或XaaP；并且
其中每个XaaA独立地是其侧链包含芳族基团的氨基酸残基，每个XaaP独立地是其侧链包含带正电荷的侧链的氨基酸残基，并且每个XaaN独立地是其侧链包含带负电荷的侧链的氨基酸残基。
57.根据实施方案56的方法，其中X5和X10通过Lb连接。
58.根据实施方案56-57中任一项所述的方法，其中X6是XaaA。
59.根据实施方案56-57中任一项所述的方法，其中X6是XaaP。
60.根据实施方案56-59中任一项所述的方法，其中X12是XaaA。
61.根据实施方案56-59中任一项所述的方法，其中X12是XaaP。
62.根据实施方案56-61中任一项所述的方法，其中X4、X7和X11各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。
63.根据实施方案44-49中任一项所述的方法，其中-(Xaa)z-是或包含-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2和X12通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X4是XaaA；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；
X11是XaaA；并且
其中每个XaaA独立地是其侧链包含芳族基团的氨基酸残基，每个XaaP独立地是其侧链包含带正电荷的侧链的氨基酸残基，并且每个XaaN独立地是其侧链包含带负电荷的侧链的氨基酸残基。
64.根据实施方案63所述的方法，其中X5是XaaP。
65.根据实施方案63-64中任一项所述的方法，其中X5是XaaA。
66.根据实施方案63-65中任一项所述的方法，其中X3、X6、X9和X11各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。
67.根据实施方案44-49中任一项所述的方法，其中-(Xaa)z-是或包含-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；
X11是XaaA；并且
其中每个XaaA独立地是其侧链包含芳族基团的氨基酸残基，每个XaaP独立地是其侧链包含带正电荷的侧链的氨基酸残基，并且每个XaaN独立地是其侧链包含带负电荷的侧链的氨基酸残基。
68.根据实施方案67的方法，其中X2和X12通过Lb连接。
69.根据实施方案67-68中任一项所述的方法，其中X4和X9通过Lb连接。
70.根据实施方案67-69中任一项所述的方法，其中X5是XaaA。
71.根据实施方案67-69中任一项所述的方法，其中X5是XaaP。
72.根据实施方案67-71中任一项所述的方法，其中X3、X6和X9各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。
73.根据实施方案44-49中任一项所述的方法，其中-(Xaa)z-是或包含-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15和X16各自独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过键联Lb连接；
Lb是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代，其中Lb与一个氨基酸残基的骨架原子和另一个氨基酸残基的骨架原子键合并且不包含骨架原子；
X3是XaaN；
X6是XaaA；
X7是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；
X13是XaaA；并且
其中每个XaaA独立地是其侧链包含芳族基团的氨基酸残基，每个XaaP独立地是其侧链包含带正电荷的侧链的氨基酸残基，并且每个XaaN独立地是其侧链包含带负电荷的侧链的氨基酸残基。
74.根据实施方案73所述的方法，其中X2通过Lb连接到X16。
75.根据实施方案73或74所述的方法，其中X2通过Lb连接到X16。
76.根据实施方案73-75中任一项所述的方法，其中X7是XaaA。
77.根据实施方案73-75中任一项所述的方法，其中X7是XaaP。
78.根据实施方案73-76中任一项所述的方法，其中X5、X8和X11各自独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。
79.根据实施方案44-78中任一项所述的方法，其中每个氨基酸残基独立地是具有式A-I结构的氨基酸的残基：
NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH，
A-I
或其盐，其中：
Ra1、Ra2、Ra3各自独立地是-La-R’；
La1和La2各自独立地是La；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
80.根据实施方案79所述的方法，其中每个La独立地是共价键或任选取代的二价C1-C5脂肪族，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代。
81.根据实施方案79所述的方法，其中La1和La2各自是共价键。
82.根据实施方案56-81中任一项所述的方法，其中Lb与两个不同氨基酸残基的两个骨架碳原子键合。
83.根据实施方案56-82中任一项所述的方法，其中Lb是
Figure BDA0003196682070001681
84.根据实施方案56-83中任一项所述的方法，其中Lb是
Figure BDA0003196682070001682
85.根据实施方案56-84中任一项所述的方法，其中Lb是-CH2-S-S-CH2-。
86.根据实施方案56-85中任一项所述的方法，其中Lb是-CH2-CH2-S-CH2-。
87.根据实施方案56-86中任一项所述的方法，其中Lb是
Figure BDA0003196682070001683
88.根据实施方案56-86中任一项所述的方法，其中Lb是-CH2CH2CO-N(R’)-CH2CH2-。
89.根据实施方案59所述的方法，其中R'连同与-N(R’)-CH2CH2-键合的骨架原子上的R基团一起形成环。
90.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是药剂，其包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中所述抗体结合部分结合具有不同Fab区的两种或更多种抗体。
91.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，其中所述ARM是药剂，其包含：
抗体结合部分，
靶标结合部分，以及
任选的接头部分，
其中所述抗体结合部分结合抗体的Fc区。
92.根据实施方案90或91中任一项所述的方法，其中所述药剂是根据实施方案29-89中任一项所述的化合物或其盐。
93.如前述实施方案中任一项所述的方法，其中将所述ARM与抗体或其片段一起施用。
94.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述ARM与IgM或其片段一起施用。
95.在通过施用自然杀伤细胞的制剂治疗受试者的方法中的改进，所述改进还包括施用抗体募集分子(ARM)，其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
96.根据实施方案95所述的改进，其中所述自然杀伤细胞是根据前述实施方案中任一项所述的自然杀伤细胞，和/或所述ARM是根据前述实施方案中任一项所述的ARM。
97.一种组合，所述组合包含：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，其中：
所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
98.根据实施方案97所述的组合，其中所述自然杀伤细胞是根据实施方案1-94中任一项所述的自然杀伤细胞，和/或所述ARM是根据实施方案1-94中任一项所述的ARM。
99.一种组合物，所述组合物包含：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，其中：
所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
100.根据实施方案99所述的组合物，其中所述自然杀伤细胞是根据实施方案1-94中任一项所述的自然杀伤细胞，和/或所述ARM是根据实施方案1-94中任一项所述的ARM。
101.根据实施方案99或100所述的组合物，其中所述组合物包含抗体或其片段。
102.根据实施方案99或100所述的组合物，其中所述组合物包含IgM。
103.根据实施方案99-102中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含支持所述自然杀伤细胞的培养基。
例证
多种技术可用于制备、表征、评估和/或使用免疫细胞(例如，记忆样NK细胞)和根据本公开文本使用的ARM。下面描述了某些此类技术。应当理解，许多其他技术是可用的并且可以被使用。
实施例1.ARM药剂的合成。
如本领域技术人员所理解的，许多化学技术是本领域可用的，以用于制备和表征ARM药剂。某些ARM药剂是或包含肽实体。在一些实施方案中，使用标准的、自动化的氟烯基甲氧基羰基(Fmoc)固相肽合成程序来制备此类肽。
肽合成
在一些实施方案中，使用标准Fmoc化学来合成肽。下面描述示例性程序。
1)将DCM添加到含有CTC树脂(0.1mmol)和Fmoc-Trp(Boc)-OH(42.5mg，0.08mmol，0.80当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)逐滴添加DIEA(4.0当量)并混合2小时。
3)添加MeOH(0.1mL)并混合30min。
4)排干并用DMF洗涤5次。
5)添加20％哌啶/DMF并反应30min。
6)排干并用DMF洗涤5次。
7)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加活化缓冲液，N2鼓泡约1小时。
8)对下一个氨基酸偶联，重复步骤4到7。
在一些实施方案中，使用HATU(1.5当量)和DIEA(3.0当量)将生物素-PEG8-CH2CH2COOH(1.5当量)偶联。在一些实施方案中，使用HBTU(2.85当量)和DIEA(6当量)将氨基酸偶联3当量。在一些实施方案中，使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续一段合适的时间，例如30min。通常通过茚三酮试验监测偶联反应。树脂通常用DMF洗涤5次。
肽切割和纯化
下面描述了肽切割和纯化的示例性程序。
1)在室温，将切割缓冲液(95％TFA/2.5％TIS/2.5％H2O)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌3小时。
2)将肽用冷的异丙醚沉淀并离心(以3000rpm离心3min)。
3)用异丙醚再洗涤两次。
4)在真空下干燥粗肽2小时。
5)通过制备型HPLC(A：在H2O中的0.1％TFA，B：ACN)纯化粗肽并冻干，得到最终产物(64.3mg，52.3％产率)。
纯化条件
在示例性程序中，反相HPLC(Gilson 281)在串联的Luna C18(200×25mm；10um)和Gemini C18(150*30mm；5um)上进行。溶剂A：含0.075％三氟乙酸的水；溶剂B：乙腈。梯度：在室温，以20mL/min在60min内从15％B到45％B；然后经10min以20mL/min到90％B，UV检测(波长＝215nm)。将肽冻干，得到呈白色固体的所需产物(64.3mg，52.3％产率)。
所有最终化合物都显示出所需化合物的正确质量。
实施例2.I-13的合成。
Figure BDA0003196682070001721
肽合成
使用标准Fmoc化学来合成肽。
1)将DCM添加到含有CTC树脂(0.4mmol)和Fmoc-Gly-OH(356.7mg，1.2mmol，3.0当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)逐滴添加DIEA(6.0当量)并混合2小时。
3)添加MeOH(2mL)并混合30min。
4)排干并用DMF洗涤5次
5)添加20％哌啶/DMF并反应30min。
6)排干并用DMF洗涤5次
7)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加活化缓冲液，N2鼓泡约1小时。
8)对下一个氨基酸偶联，重复步骤4到7。
9)将Dde保护基用在DMF中的3％肼脱保护2次，每次20min。合成规模：0.4mmol。
表2在I-13的合成中使用的Fmoc氨基酸。
Figure BDA0003196682070001722
Figure BDA0003196682070001731
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。通过茚三酮试验监测偶联反应，并将树脂用DMF洗涤5次。
肽切割、环化和纯化
6)在室温，将切割缓冲液(1％TFA/99％DCM 14mL)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌0.5小时。
7)将反应混合物过滤，并将所得滤液用无水DCM稀释至1mM。添加DIEA以将pH调整到约为8。向上述溶液中添加TBTU(835.30mg，1.2mmol，3.0当量)和HOBT(162.15mg，1.2mmol，3.0当量)，并使所得溶液在室温反应3-4h。通过LCMS监测反应。
8)反应完成后，将反应混合物用1N HCl(200mL)洗涤一次。将有机相在真空下干燥，得到粗肽，将其用95％TFA/2.5％H2O/2.5％TIPS的混合物处理约1h。
9)将粗肽用甲基叔丁基醚沉淀。
10)通过HPLC(A：H2O，B：ACN)纯化粗肽，得到最终产物(78.90mg，11.44％产率)。
纯化条件
反相HPLC(Gilson 281)在串联的Luna C18(200×25mm；10um)和Gemini C18(150*30mm；5um)上进行。溶剂A：含0.1％三氟乙酸的水；溶剂B：含0.1％三氟乙酸的乙腈。梯度：在室温，以20mL/min，在60min内从5％B到35％B；然后经10min以20mL/min到90％B，UV检测(波长＝215nm)。将肽冻干，得到呈白色固体的所需产物I-13(78.90mg，11.44％)。
实施例3.I-29的合成。
Figure BDA0003196682070001741
制备化合物3.1的一般程序
Figure BDA0003196682070001742
肽合成
使用标准Fmoc化学来合成肽。
合成规模：0.2mmol。
1)将DCM添加到含有CTC树脂和Fmoc-Ile-OH(70.68mg，200.00umol，1当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)排干，然后用DMF洗涤30秒，共3次。
3)添加20％哌啶/DMF并混合30min。
4)排干，然后用DMF洗涤30秒，共5次。
5)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加偶联试剂，伴随N2鼓泡约1小时。
6)对下一个氨基酸偶联，重复步骤2到5。
7)当偶联完成时，在25℃，向DCE中的树脂中添加第1代Grubb's(20％)，伴随N2鼓泡16小时。
表3.在I-29的制备中使用的Fmoc氨基酸。
# 材料 偶联试剂
1 Fmoc-Ile-OH(1当量) DIEA(4当量)
2 Fmoc-Gln(Trt)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
3 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
4 Fmoc-Ile-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
5 S5(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
6 Fmoc-Ser(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
7 Fmoc-Gln(Trt)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
8 Fmoc-Thr(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
9 S5(1.5当量) HBTU(1.5当量)和DIEA(3当量)
10 Fmoc-Lys(Boc)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
11 Fmoc-Tyr(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
12 (Boc)<sub>2</sub>O(3当量) DIEA(6当量)
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。通过茚三酮试验监测偶联反应，并将树脂用DMF洗涤5次。
肽切割和后处理
1)在室温，将切割缓冲液(1％TFA/99％DCM)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌0.5小时并且过滤。
2)将滤液添加到DIEA中进行中和并用水萃取两次。
3)将粗肽在真空下干燥16小时，得到呈棕色固体的粗化合物(290mg，64％产率)。
制备化合物3.3的一般程序
Figure BDA0003196682070001761
Figure BDA0003196682070001771
在25℃在N2下，向化合物3.1(290mg，128.61umol，1当量)、化合物3.2(164.32mg，257.23umol，2当量)和HOAt(35.01mg，257.23umol，2当量)在DCM(10mL)中的混合物中一次性添加DIC(32.46mg，257.23umol，39.83uL，2当量)。将混合物在25℃搅拌5小时。LC-MS显示化合物3.1被完全消耗。将反应混合物用1M HCL 30mL(10mL*3)萃取并经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗化合物3.3(300mg，81％产率)。
制备I-29的一般程序
Figure BDA0003196682070001772
Figure BDA0003196682070001781
在25℃，向化合物3.3的混合物(300mg，113.93umol，1当量)中一次性添加95％TFA/2.5％TIS/2.5％H2O。将混合物在25℃搅拌2小时。LC-MS显示化合物3.3被完全消耗。将肽用冷的叔丁基甲醚沉淀并离心(以3000rpm离心2min)。将残余物通过制备型HPLC(0.075％TFA/H2O，ACN)纯化，得到呈白色固体的I-29(75.5mg，38.40umol，33.70％产率)。
实施例4.I-30的合成。
Figure BDA0003196682070001791
制备化合物4.1的一般程序
Figure BDA0003196682070001792
肽合成
使用标准Fmoc化学来合成肽。
合成规模：0.2mmol。
1)将DCM添加到含有CTC树脂和Fmoc-Thr(tBu)-OH(79.68mg，200.00umol，1当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)排干，然后用DMF洗涤30秒，共3次。
3)添加20％哌啶/DMF并混合30min。
4)排干，然后用DMF洗涤30秒，共5次。
5)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加偶联试剂，伴随N2鼓泡约1小时。
6)对下一个氨基酸偶联，重复步骤2到5。
7)当偶联完成时，在25℃，向DCE中的树脂中添加第1代Grubb's(20％)，伴随N2鼓泡16小时。
表4.在I-30的合成中使用的Fmoc氨基酸。
# 材料 偶联试剂
1 Fmoc-Thr(tBu)-OH(1当量) DIEA(4当量)
2 Fmoc-Val-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
3 S5(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
4 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
5 Fmoc-Ile-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
6 Fmoc-Ala-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
7 S5(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
8 Fmoc-Gln(Trt)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
9 Fmoc-Thr(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
10 (Boc)<sub>2</sub>O(3当量) DIEA(6当量)
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。通过茚三酮试验监测偶联反应，并将树脂用DMF洗涤5次。
肽切割和后处理
1)在室温，将切割缓冲液(1％TFA/99％DCM)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌0.5小时并且过滤。
2)将滤液添加到DIEA中进行中和并用水萃取两次。
3)将粗肽在真空下干燥16小时，得到呈棕色固体的粗化合物(110mg，36％产率)。
制备化合物4.2的一般程序
Figure BDA0003196682070001801
Figure BDA0003196682070001811
在25℃在N2下，向化合物4.1(110mg，72.9umol，1当量)、NH2-PEG8-D-生物素(93.2mg，145.9umol，2当量)和HOAt(19.86mg，145.9umol，2当量)在DCM(10mL)中的混合物中一次性添加DIC(18.41mg，145.9umol，22.59uL，2当量)。将混合物在25℃搅拌5小时。LC-MS显示化合物4.1被完全消耗。将反应混合物用1M HCL 30mL(10mL*3)萃取并经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗化合物4.2(100mg，64.4％产率)。
制备I-30的一般程序
Figure BDA0003196682070001812
Figure BDA0003196682070001821
在25℃，向化合物4.2的混合物(100mg，47umol，1当量)中一次性添加95％TFA/TIS/EDT/H2O。将混合物在25℃搅拌2小时。LC-MS显示化合物3被完全消耗。将肽用冷的叔丁基甲醚沉淀并离心(以5000rpm离心2min)。将残余物通过制备型HPLC(0.075％TFA/H2O，ACN)纯化，得到呈白色固体的I-30(24.2mg，15.00umol，32％产率)。
实施例5.I-31的合成。
Figure BDA0003196682070001822
Figure BDA0003196682070001831
制备化合物5.1的一般程序
Figure BDA0003196682070001832
肽合成
使用标准Fmoc化学来合成肽。
合成规模：0.2mmol。
1)将DCM添加到含有CTC树脂和Fmoc-Asn(Trt)-OH(119.2mg，200.00umol，1当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)排干，然后用DMF洗涤30秒，共3次。
3)添加20％哌啶/DMF并混合30min。
4)排干，然后用DMF洗涤30秒，共5次。
5)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加偶联试剂，伴随N2鼓泡约1小时。
6)对下一个氨基酸偶联，重复步骤2到5。
7)当偶联完成时，在25℃，向DCE中的树脂中添加第1代Grubb's(20％)，伴随N2鼓泡16小时。
表5.在I-31的合成中使用的Fmoc氨基酸。
Figure BDA0003196682070001833
Figure BDA0003196682070001841
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。通过茚三酮试验监测偶联反应，并将树脂用DMF洗涤5次。
肽切割和后处理
1)在室温，将切割缓冲液(1％TFA/99％DCM)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌0.5小时并且过滤。
2)将滤液添加到DIEA中进行中和并用水萃取两次。
3)将粗肽在真空下干燥16小时，得到呈棕色固体的粗化合物(335mg，62.29％产率)。
制备化合物5.3的一般程序
Figure BDA0003196682070001842
Figure BDA0003196682070001851
在25℃在N2下，向化合物5.1(335mg，124.52umol，1当量)、化合物5.2(159.09mg，249.04umol，2当量)和HOAt(33.9mg，249.04umol，2当量)在DCM(10mL)中的混合物中一次性添加DIC(249.04umol，38.59uL，2当量)。将混合物在25℃搅拌5小时。LC-MS显示化合物5.1被完全消耗。将反应混合物用1M HCL 30mL(10mL*3)萃取。经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗化合物5.3(350mg，84.89％产率)。
制备I-31的一般程序
Figure BDA0003196682070001861
在25℃，向化合物5.3的混合物(350mg，105.71umol，1当量)中一次性添加95％TFA/TIS/EDT/H2O。将混合物在25℃搅拌2小时。LC-MS显示化合物5.3被完全消耗。将肽用冷的叔丁基甲醚沉淀并离心(以5000rpm离心2min)。将残余物通过制备型HPLC(0.075％TFA/H2O，ACN)纯化，得到呈白色固体的I-31(43.8mg，21.1umol，20％产率)。
实施例6.I-32的合成。
Figure BDA0003196682070001871
制备化合物6.1的一般程序
Figure BDA0003196682070001872
肽合成
使用标准Fmoc化学来合成肽。
合成规模：0.2mmol。
1)将DCM添加到含有CTC树脂和Fmoc-Leu-OH(70.68mg，200.00umol，1当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)排干，然后用DMF洗涤30秒，共3次。
3)添加20％哌啶/DMF并混合30min。
4)排干，然后用DMF洗涤30秒，共5次。
5)添加Fmoc-氨基酸溶液并混合30秒，然后添加偶联试剂，伴随N2鼓泡约1小时。
6)对下一个氨基酸偶联，重复步骤2到5。
表6.在I-32的合成中使用的Fmoc氨基酸。
# 材料 偶联试剂
1 Fmoc-Leu-OH(1当量) DIEA(4当量)
2 Fmoc-Gln(Trt)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
3 Fmoc-Phe-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
4 Fmoc-Tyr(Boc)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
5 Fmoc-Thr(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
6 Fmoc-Thr(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
7 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
8 Fmoc-Ser(tBu)-OH(3当量) HBTU(2.9当量)和DIEA(6当量)
9 Fmoc-Lys(Dde)-OH(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
10 Peg<sub>8</sub>(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
11 生物素(1.5当量) HATU(1.5当量)和DIEA(3当量)
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。通过茚三酮试验监测偶联反应，并将树脂用DMF洗涤5次。
肽切割和后处理：
1)在室温，将切割缓冲液(1％TFA/99％DCM)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌0.5小时并且过滤。
2)将滤液添加到DIEA中进行中和并用水萃取两次。
3)将粗肽在真空下干燥16小时，得到呈白色固体的粗化合物(300mg，64％产率)。
制备化合物6.2的一般程序
Figure BDA0003196682070001881
Figure BDA0003196682070001891
在25℃在N2下，向化合物6.1(300mg，128.10umol，1当量)、HOBt(34.62mg，256.21umol，2当量)和TBTU(82.26mg，256.21umol，2当量)在DCM(200mL)中的混合物中逐滴添加DIEA(66.22mg，512.41umol，89.25uL，4当量)。将混合物在25℃搅拌30min。LC-MS显示化合物6.1被完全消耗。将反应混合物用EtOAc 200mL稀释，并用水200mL(100mL*2)萃取。将合并的有机层用盐水200mL(100mL*2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗化合物6.2(180mg，77.46umol，60.47％产率)。
制备I-32的一般程序
Figure BDA0003196682070001892
Figure BDA0003196682070001901
在25℃，向化合物6.2的混合物(180mg，77.46umol，1当量)中一次性添加95％TFA/TIS/EDT/H2O。将混合物在25℃搅拌2小时。LC-MS显示化合物6.2被完全消耗。将肽用冷的叔丁基甲醚沉淀并离心(以5000rpm离心2min)。将残余物通过制备型HPLC(0.075％TFA/H2O，ACN)纯化，得到呈白色固体的I-32(2mg，1.5％产率)。
使用根据本公开文本的实施例中阐明的技术类似地制备并表征表1中的其他化合物。
实施例7.IgG Fc结合ELISA。
如本文所证明的，本公开文本的ARM药剂可以结合抗体或其片段的Fc区。下面描述了用于评估ARM与Fc区之间的相互作用的示例性测定。
将生物素化的测试化合物或蛋白质A对照(Pierce：29989)以100uL/孔(PBS0.05％tween-20-PBST，含0.2％BSA)添加到链霉亲和素包被的ELISA板(Thermo Fisher：15502)中。将板在25℃在旋转下孵育2h，然后去除溶液，并用等体积的PBST洗涤板两次。将荧光素缀合的人IgG FC(50nM，在含有0.2％BSA的PBST中，Rockland：009-0203)以(100uL/孔)添加到板中，并在25℃孵育45min。去除溶液，将板用PBST洗涤两次，拍干，并用每孔的面积扫描进行读取(Biotek Synergy H1酶标仪，490/525ex/em)。
表7显示了本发明的所选化合物在IgG FC结合ELISA测定分析中的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。具有指定为“A”的活性的化合物相对于1,000nM的标准蛋白A提供90％-120％的信号％；具有指定为“B”的活性的化合物相对于1,000nM的标准蛋白A提供>4％且<90％的信号％；具有指定为“C”的活性的化合物相对于1,000nM的标准蛋白A提供2％-4％的信号％；具有指定为“D”的活性的化合物相对于1,000nM的标准蛋白A提供<2％的信号％。
表7.IgG FC结合ELISA数据
Figure BDA0003196682070001911
实施例8.募集的抗体的CD16a结合。
在一些实施方案中，由ARM募集的抗体与CD16a结合。多种技术可用于评估抗体与CD16a之间的相互作用，并可根据本公开文本而使用。下面描述示例性程序。
CD16a荧光标记-200nM(PBST)并与Monolith NT His-标签标记试剂盒、RED-tris-NTA染料(100nM)以等体积组合的CD16a158V(Sino Biologicals：10389-H27H1)。将溶液在25℃在黑暗中在旋转下孵育45min，然后以12000rpm旋转15min以除去任何未复合的试剂。
生物素化分子固定-将生物素化测试化合物或对照抗体(IgG：Rockland 009-0602，IgM：Rockland，IgA：Rockland)以50uL/孔(含有0.2％BSA的PBST)添加到链霉亲和素包被的ELISA板(Thermo Fisher：15502)中。将板在25℃在旋转下孵育1h，然后除去溶液，并用PBST洗涤板三次。
血清抗体募集-将合并的正常人血清(Innovative Research，批号：20966)在冰上解冻，并在使用前在4℃以12000rpm旋转10min，以除去碎片和沉淀的蛋白质。使用上清液来制备2.5％溶液或制备为稀释系列(含有0.2％BSA的PBST)。将血清溶液添加到板(50uL/孔)中并在旋转下孵育1h。除去溶液并用PBST洗涤板三次。
CD16a结合募集的抗体-然后将标记的CD16a以25nM添加到各孔中并孵育45min。除去溶液并用PBST洗涤板两次。然后用每孔的面积扫描读取板(Biotek Synergy H1酶标仪，650/665ex/em)。
表8显示了本发明的所选化合物在CD16a结合募集的抗体的测定中的活性。将荧光读数相对于生物素化IgG和在250nM处固定的相应生物素化分子进行归一化。化合物编号对应于表1中的化合物编号。具有指定为“A”的活性的化合物提供>2的荧光读数；具有指定为“B”的活性的化合物提供1.5-2的荧光读数荧光读数；具有指定为“C”的活性的化合物提供1.0-1.5的荧光读数；并且具有指定为“D”的活性的化合物提供<1的荧光读数。
表8.CD16a结合募集的抗体的测定数据
化合物ID 250nM下的荧光读数
I-17 A
I-18 C
I-19 B
实施例9.ADCC报告基因测定。
如本文所述，所提供的技术可用于抑制和/或杀伤癌细胞。所提供的技术的此类功能可通过本领域可用的多种方法来评估，例如，本文所述的ADCC报告基因测定。
在一个例子中，将LNCaP细胞(源自人前列腺癌，ATCC：CRL-1740)分离并重悬浮在RPMI中的1％BSA中。在计数(Life Technologies Countless II细胞计数器)和铺板(10,000个细胞，25uL/孔；Corning板：3917)之前，过滤细胞溶液以除去细胞聚集体(带有细胞过滤器的聚苯乙烯管，Corning：352235)。将板离心(5min，300xg)，然后立即添加化合物溶液(25uL/孔)。在37℃孵育45min后，添加抗体溶液(25uL/孔，IgG1 FC-Thermo Fisher：10702HNAH5；Dintrophenyl-KLH多克隆抗体-Thermo Fisher：A-6430)。然后将板与抗体溶液一起孵育45min，以在添加效应细胞(60K个，25uL/孔，ADCC报告细胞-Promega试剂盒：G7018)之前形成细胞-ARM-抗体三元复合物。将板离心(5min，300xg)并将效应细胞在37℃孵育5h。诱导期后，将板平衡至25℃，然后添加萤光素酶底物(75uL/孔，1小瓶，在10mL Bio-Glo测定缓冲液中，Promega试剂盒：G7018)。然后将板离心(5min，300xg)并测量发光(Biotek Synergy H1酶标仪)。
使用多种细胞(LNCap、22Rv1)的测定结果表明，所提供的化合物可以有效地诱导ADCC。下面呈现了一组示例数据：
LNCaP靶细胞和具有CD16a-158V/V变体的报告细胞
Figure BDA0003196682070001931
*减去作为每个指定抗体处理组的背景的、在没有化合物情况下的抗体孔/靶细胞孔/报告细胞孔的平均值。
实施例10.ARM与抗体和靶细胞形成复合物
如本文所证明的，在一些实施方案中，药剂(例如，ARM)可以募集抗体至靶细胞以形成三元复合物并诱导免疫活性。多种技术都适用于评估复合物形成。下面描述了这样的测定的一个例子。本领域技术人员理解，可以调整一个或多个参数和/或条件并且也可以使用其他测定/试剂/条件等。
使用Accumax(Sigma-Aldrich A7089-100 ml)收获贴壁细胞(LNCap、CRL-1740，例如以下结果)。将化合物在DMSO(MP 191418)中稀释至在96孔聚丙烯板(Corning 3357)中的测定中所用起始浓度的1000倍。然后将它们以1/2 log增量连续稀释，以在DMSO中产生8-12个浓度(取决于测定)。然后将这些DMSO储备液按1/10逐步稀释到PBS(VWR，目录号20012043)中。然后将逐步稀释的化合物系列添加到聚丙烯测定板中，其体积为测定体积的1/100。将用于测定的细胞计数并离心，并以每200ul 100,000个细胞的浓度重悬浮于流动缓冲液中：1％BSA(American Bio AB01088-00100)；0.5mM EDTA(VWR 45001-122)；具有20ug/ml兔抗DNP Alexa 488(Thermo Fisher Scientific A11097)的PBS(VWR，目录号20012043)。然后将细胞与逐步稀释的化合物一起添加到聚丙烯板中，并在4℃孵育30min。在孵育结束时，将细胞离心并用含有0.5％Tween 20(BP337-500)的流动缓冲液洗涤2次。在BD FacsCelesta上分析样品。使用Graphpad Prism分析平均荧光，并使用log(抑制剂)与响应拟合曲线-可变斜率(四个参数)。
示例结果如下所示：
化合物ID EC50(nM)
I-11 6.6
I-33 3
I-34 8.7
I-16 7.4
实施例11.记忆样NK细胞的产生。
可以使用多种技术来生产、表征和评估记忆样NK细胞。用于产生这种细胞的一种方法包括细胞因子诱导，如下所述。还参见Romee等人,Sci Transl Med.2016年9月21日；8(357):357ra123.doi:10.1126/scitranslmed.aaf2341。
为了产生记忆样细胞和对照(参考)细胞，将PBMC或纯化的NK细胞以例如3-5x106个细胞/mL铺板，并使用细胞因子(例如，rhIL-12(10ng/mL)加rhIL-18(50ng/mL)和rhIL-15(50ng/mL))或对照条件(例如，rhIL-15 1ng/mL)预活化一段合适的时间(例如，16±2小时)，洗涤3次以除去细胞因子，并在补充有rhIL-15(1ng/mL)以支持存活、含有L-谷氨酰胺、HEPES、NEAA、青霉素/链霉素和10％人AB血清(Sigma)的完全RPMI-1640培养基中培养。每2天更换一半培养基并补充rhIL-15。还参见Romee等人,Blood,120,4751-4760(2012)。
实施例12.所提供的技术可以有效地杀伤癌细胞
下面描述了用于评估所提供的技术的有用测定。本领域技术人员理解，许多其他技术是可用的并且可以根据本公开文本而使用。
ADCC Daudi KilR和Raji KilR+NK，使用Dara&RTX：E:T 7.5:1(37500:5000)，18h测定。
在一个例子中，测定体积为100μL：
4x靶细胞25uL；用DiscoveRx 97-0002制成的Kilr细胞
4x ARM或培养基(对照)25uL；
4x抗体25uL；以及
4x效应细胞。
使用的培养基是Opti-mem ThermoFisher 31985070(无血清以确保没有外源性抗体)。
一项实验中使用的条件和程序：
1.计数靶细胞Raji或Daudi细胞。5,000/25uL＝2x10^5/ml
2.在DMSO中连续稀释ARM化合物-储备液5mM
a.稀释5mM化合物15uL+10.05uL DMSO＝3mM(1000x3uM)
b.连续稀释1/3 10uL 3mM化合物+20uL DMSO＝1mM
c.连续稀释1/3.3 10uL 1mM化合物+23uL DMSO＝0.3mM
d.重复交替步骤b和c，总共8个浓度
3.稀释Pan人IgG抗体(Sigma Aldrich 4506-100MG-重悬浮在2mL Opti-mem中)
a.50mg/mL储备液稀释1/1250＝40ug/mL＝4x10ug/mL-2uL+2.5mL Opti-mem
b.将25uL/孔添加到指定接收化合物的所有孔中
4.达雷木单抗(Dara)稀释曲线：Creative Bio 1mg/mL工作储备液，足以用于20孔x25uL＝500uL
a.稀释1/833＝1200ng/mL＝4x300ng/mL-4uL+1000uL Opti-mem
b.连续稀释1/2 500uL+500uL Opti-mem
c.重复，总共8个浓度
5.利妥昔单抗(RTX)稀释曲线：Creative Bio 1mg/mL工作储备液，足以用于42孔＝500uL
a.稀释1/833＝1200ng/mL＝4x300ng/mL-1.2uL+1000uL Opti-mem
b.连续稀释1/2 500uL+500uL Opti-mem
c.重复，总共8个浓度
6.在使用前逐步稀释化合物：
a.在分配前，将2uL DMSO/来自步骤13的化合物添加到500uL Opti-mem混合液中
b.将25uL逐步稀释的化合物以一式三份或四份添加到各孔中
7.添加25uL Dara/RTX曲线/孔：一式三份或四份
8.将25uL空白培养基添加到仅接收Dara或RTX的孔中
9.将25uL靶细胞添加到所有孔中
10.将25uL效应细胞/NK细胞添加到所有孔中
11.制作一个测定对照板，其含有：一式三份的被动对照和裂解对照
a.单独的靶标kilr细胞25uL，补足至100uL
b.靶标25uL+效应细胞25uL，补足至100uL
c.靶标25uL+效应细胞25uL+Pan人IgG，补足至100uL
d.重复对照a、b和c(这些将在Kilr检测试剂前30min接受2uL裂解试剂)
12.将Kilr试剂从-20C移至4C，o/n
13.37C孵育，o/n
14.第二天，将2uL裂解试剂添加到裂解对照中
15.再孵育30min
16.将板和试剂拿到室温下
17.制作Kilr检测试剂混合物：100uL/孔
a.均2mL，#2和#3；
b.8mL，#1
18.添加100uL/孔
19.置于避光的振荡器上
20.在黑暗中孵育，在1h时读取发光
示例性结果描述如下：
2.5∶1 5∶1 7.5∶1 10∶1
IC50 0.036 0.044 0.033 0.029
实施例13.所提供的技术可以有效地杀伤体内癌细胞
许多技术可用于评估根据本公开文本的所提供的技术。在一些实施方案中，可以在临床试验中评估所提供的技术的安全性、功效等。
在一项临床试验中，向患有rel/refAML的人类受试者施用同种异体的、HLA单倍体相同的、IL-12、IL-15和IL-18预活化的NK细胞，其添加有饱和量的靶向CD33或CD22的ARM(离体给予ARM)。在良好操作规范(GMP)实验室中，在添加饱和量的靶向CD33或CD22的ARM的情况下，将供体NK细胞通过CD3耗竭随后是CD56阳性选择进行纯化，用rhIL-12、rhIL-15和rhIL-18预活化12至16小时，洗涤，并且输注到在第0天用氟达拉滨/环磷酰胺预处理的AML患者中。过继转移后，施用低剂量的rhIL-2以通过其诱导的高亲和力IL-2Rαβγ支持记忆样NK细胞。在一些实施方案中，将施用NK细胞获得的结果与离体添加ARM化合物的结果进行比较。
3x3个剂量递增：0.5×10 6/kg，1.0×10 6/kg，并评价所有生成的NK细胞(上限为10×10 6/kg)。
可以在所有具有信息性HLA的患者的血液中追踪供体记忆样NK细胞，例如，使用供体或患者特异性抗HLA单克隆抗体，并显示出平均值和增殖增加(Ki-67+)。类似地，在一些实施方案中，在某个时间点(例如，输注后第8天)对骨髓的评估揭示了供体记忆样NK细胞的较大百分比和绝对数量。
可以通过例如测量在由K562白血病细胞触发的短期离体再刺激后患者的IFN-γ产生来评估NK细胞活化。在一些实施方案中，分析显示与接受者NK细胞相比，IFN-γ阳性供体的NK细胞的频率增加。在一些实施方案中，与这些样品中的接受者NK细胞相比，供体的产生IFN-γ的NK细胞的绝对数量显著增加。类似地，在骨髓中，IFN-γ阳性供体记忆样NK细胞的数量可能大于接受者NK细胞的数量。
可以使用IWG反应标准来评价抗肿瘤反应以确定CR/CRi，并通过MLFS来确定总体反应率和CR/CRi率。
在一些实施方案中，观察到具有记忆样NK细胞和ARM两者的技术在治疗癌症方面比单独使用记忆样NK细胞或ARM更有效。在一些实施方案中，观察到与单独的记忆样NK细胞相比，具有记忆样NK细胞和ARM两者的技术具有更少的副作用和/或不太严重的副作用。
实施例14.所提供的技术可以有效地杀伤癌细胞而不引起显著的副作用。
癌症疗法可能会产生各种副作用。例如，那些使用针对某些癌抗原的抗体的疗法可能会伤害、抑制或杀伤包含相同抗原的非癌细胞。除了其他方面，本公开文本在下面呈现的结果证实，所提供的技术在对表达各种抗原的癌细胞有效的同时，与包括靶向相同抗原的基于抗体的技术的其他技术相比还具有更少的副作用/毒性。例如，与其他技术相比，所提供的技术不会显著减少表达相同靶标的非癌细胞的数量。
某些有用的程序
PBMC分离：从Key Biologics(受试者ID 20982200)获得身体质量指数(BMI)为19-25、50岁以下、至少2周未服用免疫抑制性药物且估计的PBMC细胞计数为>10^10个的供体的白细胞去除术产物，并在环境温度下运输。将白细胞去除术袋用70％EtOH擦拭，造一个小缝，并将内容物吸移到管中。用不含Ca++/Mg++的PBS以1:1稀释Leukopak内容物，并使20ml的这种混合物在25mL Ficoll的顶部分层。然后将管以400g离心30分钟，无需打碎。将PBMC从界面收集到单独的管中，并用PBS填充管至50mL。将细胞以120g离心10min以除去血小板。倒出上清液，并将细胞以7-10x10^6个细胞/ml的浓度重悬浮在RPMI(10％FBS)中。将细胞在37C、在5％CO2气氛中培养过夜直至NK细胞分离。
NK细胞分离：将PBMC以400g离心10min，并重悬浮在EasySep缓冲液中。使用来自STEMCELL Technologies的NK细胞分离试剂盒，根据试剂盒制造商的说明来分离NK细胞。通过台盼蓝和使用以下抗体混合物：抗CD56PE、CD3 APC的流式细胞术来评估NK细胞的纯度和表型，并使用台盼蓝排除法染料染色以及通过使用近红外可固定活力染料(ThermoFisher)的流式细胞术来确定活力。
CIML NK细胞生成：将分离的NK细胞以2x10^6个细胞/ml重悬浮在XVIVO 10％人血清和以下浓度的IL-15(50ng/ml)、IL-12(10ng/ml)、IL-18(50ng/ml)中持续12到18小时。收获细胞，并通过台盼蓝染色以及使用近红外可固定活力染料(Thermo Fisher)、CD3 APC(Biolegend)和CD56 PE(Biolegend)的流式细胞术测试细胞的纯度和活力。
用CD38 ARM处理：将靶向CD38的ARM溶解在DMSO中以制备25mM储备溶液。然后将储备液在100％DMSO中连续稀释，以达到将在实验中使用的1000倍浓度。然后将100％DMSO化合物储备液添加到管中，并且以每1ul化合物添加培养基至体积为1000ul并涡旋1分钟以确保得到均质混合物。将NK细胞沉淀以5x10^6个细胞/mL的细胞密度直接重悬浮在CD38 ARM溶液中。
CD38 ARM的结构是：
Figure BDA0003196682070001991
CD38 ARM的示例性制备
Figure BDA0003196682070002001
示例性肽合成。使用标准Fmoc化学来合成肽，例如：
1)将DCM添加到含有CTC树脂(1.00mmol，1.00g，1.00mmol/g)和Fmoc-Thr(tBu)-OH(3218mg，0.800mmol，0.80当量)的容器中，伴随N2鼓泡。
2)逐滴添加DIEA(4.00当量)并混合2小时。
3)添加MeOH(1.00mL)并混合30min。
4)排干并用DMF洗涤5次。
5)添加20％哌啶/DMF并反应30min。
6)排干并用DMF洗涤5次。
7)添加Fmoc-氨基酸溶液，先混合30秒，然后添加活化溶液，偶联反应持续1小时，伴随持续N2鼓泡。
8)对下一个氨基酸偶联，重复步骤4到7。
# 材料 偶联试剂
1 Fmoc-Thr(tBu)-OH(0.80当量) DIEA(4.00当量)
2 Fmoc-Cys(Trt)-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
3 Fmoc-Trp(Boc)-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
4 Fmoc-Val-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
5 Fmoc-Leu-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
6 Fmoc-Glu(OtBu)-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
7 Fmoc-Gly-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
8 Fmoc-Leu-OH(3.00当量) HBTU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
9 Fmoc-His(Trt)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
10 Fmoc-Trp(Boc)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
11 Fmoc-Ala-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
12 Fmoc-Cys(Trt)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
13 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
14 Fmoc-Gly-Gly-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.0当量)
15 Fmoc-D-γGlu(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.0当量)
16 Fmoc-D-γGlu(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
17 Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
18 Fmoc-D-γGlu(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
19 Fmoc-D-γGlu(OtBu)-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
20 Fmoc-Gly-OH(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
21 Fmoc-哌啶-4-甲酸(3.00当量) HATU(2.85当量)和DIEA(6.00当量)
合成规模：0.8mmol
使用在DMF中的20％哌啶进行Fmoc脱保护，持续30min。
通过茚三酮试验监测偶联反应。
最后一次氨基酸偶联后，除去N末端Fmoc，并将树脂用MeOH洗涤3次，然后在真空下干燥。
肽切割和纯化：
在室温，将切割混合物(95％TFA/2.5％EDT/2.5％H2O/2.5％TIS)添加到含有侧链受保护的肽的烧瓶中并搅拌2小时。
将肽用冷的异丙醚沉淀并通过离心(以3000rpm离心3min)收集。
将沉淀物用冷的异丙醚再洗涤两次。
在真空下干燥粗肽2小时。
将粗肽溶解在ACN/H2O(1:1，共800mL)中
用NaHCO3调节pH至8，搅拌16小时，并通过空气氧化形成二硫键，LCMS表明反应完成。
将反应混合物冻干以得到粗肽。
将粗肽通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，得到化合物2(102mg)。
将化合物2(102mg，1.0当量)和BCN-NHS(13.3mg，1.1当量)的混合物溶解在DMF(2mL)中，然后缓慢添加DIEA(6.00当量)。将混合物在20℃搅拌8小时。LCMS显示反应完成。然后将混合物直接通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，并获得呈白色固体的化合物3(43.0mg，39.4％产率)。
将化合物3(43.0mg，1.0当量)和化合物75(32.6mg，1.0当量，使用某些类似的技术制备)的混合物溶解在DMF(2.0mL)中，并将反应在20℃搅拌8小时。LCMS显示反应完成，然后将混合物直接通过制备型HPLC纯化。将具有所需m/z(例如，1158.8、927.2、772.7等)的级分合并并冻干，产生呈白色固体的CD38 ARM(41.1mg，56.9％产率，98.4％纯度)。纯化条件：
Figure BDA0003196682070002021
CIML NK细胞自相残杀测定：将NK细胞以每5x10^6个细胞/毫升的密度直接重悬浮在为每个浓度的CD38 ARM生成的溶液中。类似地，将NK细胞沉淀重悬浮在达雷木单抗对照抗体溶液(在PBS 5％HSA中，范围为3ug/ml至0.01ug/ml)中。将所得NK细胞悬浮液以55ul/孔等分在96孔v型底板中，并在37℃在5％CO2气氛中孵育2小时。
CIML NK细胞SUDHL-4细胞ADCC测定：将SUDHL-4细胞用CFSE标记并重悬浮在含有20％人血清的XVIVO15培养基中。将细胞以10,000个细胞/孔、18ul/孔等分在96孔V型底板中。以9:1的比率(90,000个NK细胞/孔)添加等体积(18ul/孔)的NK细胞(在PBS 5％HSA中)。将共培养物在37℃在5％CO2气氛中孵育过夜。第二天，洗涤细胞并用以下试剂染色：近红外可固定活力染料(Thermo Fisher)、CD3 FITC(Biolegend)和CD56 PE(Biolegend)。通过对近红外Live Dead染料也呈阳性的CFSE+细胞进行门控来计算死SUDHL-4细胞的百分比。
某些结果
NK细胞和CIML NK细胞的纯度和活力：除了其他方面，本公开文本提供了在从PBMC分离后高纯度和存活的NK细胞群。从白细胞去除术产物分离外周血单核细胞，通过台盼蓝和流式细胞术分析得到的分离后的PBMC活力为>99％。使用磁珠辅助阴性选择进行分离后，NK细胞纯度为90％，通过台盼蓝和流式细胞术得到的存活率均超过99％。在分离当天，发现NK细胞级分中的T细胞(CD3+CD56-细胞)污染为2.8％。在分离出NK细胞后，将它们分为两个处理组-CIML NK细胞和非CIML NK细胞(对照细胞)。将CIML NK细胞在含有10％人血清以及IL-12、IL-15和IL-18的XIVO15培养基中孵育过夜，而对照非CIML NK细胞未接受细胞因子处理。在过夜孵育后，在培养的细胞群中评估纯度和活力。在一项实验中，通过台盼蓝得到的CIML NK细胞和非CIML对照NK细胞的存活率为50％。通过流式细胞术得到的CIML NK细胞的存活率为75％，而通过流式细胞术方法得到的对照非CIML NK细胞的存活率为78％。在收获时，这两种培养物中的T细胞污染为1.2％-1.8％。
与包含针对相同靶标的抗体的相应技术相比，所提供的技术表现出显著更低的毒性。
在存在或不存在500ug/ml静脉内免疫球蛋白(IVIG)的情况下，与指定浓度的CD38ARM一起孵育2小时后，通过流式细胞术评估NK细胞自相残杀(针对同一培养物中的NK细胞的死亡)。图1示出了死NK细胞的频率与培养上清液中的达雷木单抗(针对CD38的治疗性抗体)或CD38 ARM浓度之间的关系。
如所证明的，所提供的技术显示出比使用抗体的相应技术显著更低的毒性，例如，当通过非癌细胞的细胞数量的减少进行评估时。例如，在孵育后仅2小时，对于CIML NK细胞，3ug/ml或20.1nM的达雷木单抗处理导致培养基中存在的死NK细胞的百分比增加4％，而在CD38 ARM+/-IVIG的情况下死NK细胞的百分比不增加，图1。在非CIML NK细胞的培养物中，与DMSO处理的对照相比，达雷木单抗处理使死NK细胞总共增加5.6％，而用最高浓度的CD38 ARM(25uM)处理导致死NK细胞增加1.7％(25uM的CD38 ARM对比DMSO对照)和增加0.93％(CD38 ARM IvIG对比DMSO IVIG对照)。图1(B)表示相对于DMSO处理的对照归一化的数据。如所示，即使是最高剂量的CD38 ARM，也未检测到明显的NK细胞自相残杀，这与FDA批准用于治疗多发性骨髓瘤的CD38治疗性抗体达雷木单抗形成鲜明对比。
所提供的技术可以有效地减少靶癌细胞的数量。
进行抗体依赖性细胞毒性测定以测量单独的CIML NK细胞以及与CD38ARM的组合对靶标SUDHL-4多发性骨髓瘤细胞的影响。通过使用未被细胞因子混合物刺激的NK细胞(非CIML NK细胞)评估基线活性。图2表示在孵育18小时后，在NK-SUDHL-4细胞共培养物中死SUDHL-4细胞的频率。
如图2B所示数据所表明的，CIML NK细胞是基线处SUDHL-4靶细胞(DMSO处理的对照)的强效杀手。CIML NK细胞与CD38 ARM的组合实现了超过DMSO处理的对照水平的额外靶细胞杀伤-观察到比背景增加了66％的杀伤。此外，如本文所证明的，所提供的技术可以有效地使用存在于人血清中的IgG并且不需要施用额外的抗体(例如，外源性抗体，如在基于抗体的疗法中使用的那些)。还包括使用靶向CD38的达雷木单抗获得的数据。如本文所证明的，所提供的技术在杀伤癌细胞方面非常有效，同时与基于抗体的技术相比毒性更小。
实施例15.所提供的技术可以以低毒性有效杀伤目的细胞。
除了其他方面，本实施例证实，所提供的技术可以有效减少癌细胞的数量。在本实施例中，使用了CD38 ARM(如以上实施例所示)、细胞因子诱导的记忆样NK细胞(CIML NK细胞)和任选的静脉内免疫球蛋白(IVIG)。除了其他方面，本公开文本证实了所提供的技术针对多发性骨髓瘤患者的骨髓浆细胞的活性。
材料、方法和设备
测试物品和对照物品
CD38 ARM(在DMSO中的25mM溶液)
达雷木单抗(Darzalex)-Parexel DRE0607
IVIG，静脉内人免疫球蛋白，Flebogamma-Grifols NDC 61935-0005-5
材料和设备
牛血清白蛋白(BSA)热休克，级分V-American Bio AB01088-00100
磷酸盐缓冲盐水(PBS)-Gibco 10010,(-)Ca(-)Mg，pH 7.4
IVIG，静脉内人免疫球蛋白，Flebogamma-Grifols NDC 61935-0005-5，100mg/ml-在PBS中稀释至1mg/ml
生物素化/His标记的人CD38蛋白，Avi标签-Acro Biosystems CD8-H82E7中性抗生物素蛋白-Invitrogen 31000，1mg/ml
二甲亚砜(DMSO)，Sigma-Aldrich 276855
牛血清白蛋白(BSA)热休克，级分V-American Bio AB01088-00100
乙二胺四乙酸(EDTA)，VWR 97062-656
流动缓冲液-PBS pH 7.4+0.05％(w/v)BSA，2mM EDTA
测定板，96孔V型底-VWR Corning 3357
Attune NxT流式细胞仪和Attune NxT软件
96孔的2ml深孔板，USA Scientific，目录号1896-2110
Ficoll(R)Paque Plus，GE Healthcare，目录号17-1440-03
EasySEPTM人NK细胞分离试剂盒，STEMCELL Technologies，目录号17955
人IL-15优等品，Miltenyi Biotec，目录号130-095-764
人IL-12优等品，Miltenyi Biotec，目录号130-096-705
人IL-18，R&D Systems，目录号9124-IL-010
特种细胞培养基，Lonza X-VIVO15，Thermo Fischer Scientific，目录号BW04-744Q
人血清AB，来自Clot Gemini Bioproducts，目录号100-318
来自人血清的白蛋白，Sigma Aldrich，目录号A5843-5G
RBC裂解缓冲液10x，Tonbo Biosciences，目录号TNB-4300-L100
微小残留病抗体染色板：
抗原 荧光团 克隆 供应商 目录号
CD138 BV421 MI15 BD Biosciences 562935
CD27 BV510 O323 Biolegend 302835
CD38ME FITC 多表位 Cytognos CYT-38F2
CD56 PE 5.1H111 Biolegend 362508
CD45 PERCPCY5.5 HI30 Biolegend 304028
CD19 PECY7 HIB19 Biolegend 302216
CD117 APC 104D2 BD 341096
从Discovery Life Sciences获得患者骨髓和血液。
方案
在环境温度下运送来自Discovery Biosciences的患者骨髓(3ml)和血液(20ml)。用PBS以1:1稀释骨髓，并将50μl的骨髓-PBS混合物等分到96深孔板中。将骨髓细胞孵育过夜直到第二天添加CIML细胞。
通过Ficoll密度梯度离心从血液中分离PBMC。将PBMC以400g离心10min，并重悬浮在EasySep缓冲液中。使用来自STEMCELL Technologies的NK细胞分离试剂盒，根据试剂盒制造商的说明来分离NK细胞。
将NK细胞以1x106个细胞/ml重悬浮在XVIVO15、10％人血清、IL-15(50ng/ml)、IL-12(10ng/ml)、IL-18(50ng/ml)中，并孵育18小时。在与细胞因子孵育过夜后，将NK细胞用PBS 5％人血清白蛋白洗涤两次，计数并以2x105个细胞/ml的细胞密度重悬浮在XVIVO15培养基中。每孔添加二十微升(4000个细胞)，每孔含有50μl的骨髓:PBS混合物。将达雷木单抗(3μg/ml[20nM]至0.3μg/ml[2nM])和CD38 ARM(25μM至3μM终浓度)制成用于在测定中使用的终浓度的10倍，并将8μl的CD38 ARM或7μl的达雷木单抗10倍储备溶液添加到相关的孔中。向CD38 ARM处理的孔中添加人IVIG至终浓度为10μg/ml。对照孔接受XVIVO15培养基。通过上下移液混合孔中的内容物，并将板以400g离心1min。
然后将测定在37℃5％CO2下孵育4小时。孵育后，将1ml 1X红细胞裂解缓冲液添加到每孔中，并将细胞在室温孵育15min。将板以400g离心3分钟，再进行一轮红细胞裂解和离心。然后将细胞重悬浮在200μl的FACS缓冲液中并离心。弃去缓冲液，并将细胞重悬浮在100μl的荧光抗体混合物中。将细胞在4℃孵育15min，每孔添加200μl的FACS缓冲液进行洗涤，将细胞以400g离心3min并弃去上清液。将洗涤再重复2次。最后，将细胞重悬浮在200μl的FACS缓冲液中，并使用Attune流式细胞仪进行分析。使用FlowJo软件分析数据并使用GraphPad Prism绘图。
所提供的技术减少了浆细胞的数量。
图3显示在自体患者CIML NK细胞和达雷木单抗或CD38 ARM的存在下孵育4小时后，患者骨髓中CD38+CD138+细胞频率的降低百分比。如图3所示，与用CIML NK细胞孵育的未处理对照骨髓相比，CD38 ARM有效降低了浆细胞(CD38+CD138+)的频率。
所提供的技术不会显著影响免疫细胞群。
除了其他方面，本实施例进一步证实所提供的技术具有低毒性，尤其是与使用针对与ARM相同的靶标的抗体的疗法相比时。如图4所示(CD56+CD138-CIML NK细胞与患者骨髓和达雷木单抗或CD38 ARM共孵育4小时时的频率)，在CD38 ARM的存在下，NK细胞数量没有变化，而达雷木单抗显示NK细胞自相残杀的剂量依赖性增加。
虽然本文已经描述和举例说明了各种实施方案，但是本领域的普通技术人员将容易地想到用于执行所述功能和/或获得所述结果和/或本公开文本中所述的一个或多个所述优点的各种其他手段和/或结构，并且每个这样的变化和/或修改被认为包括在内。更通常地，本领域技术人员将容易认识到本文所述的所有参数、尺寸、材料和构造都意于是示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或构造可能取决于使用本公开文本的教导的具体的一种或多种应用。仅使用常规实验，本领域技术人员就能认识到或能够确定本公开文本的实施方案的许多等效物。因此，应当理解，前述实施方案是仅通过举例来呈现，并且在所附权利要求及其等效物的范围内，所要求保护的技术可以按与具体地描述和要求不同的方式实践。另外，两个或更多个特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合，如果这些特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法不相互矛盾，则包括在本公开文本的范围内。

Claims (22)

1.一种用于在系统中诱导细胞死亡、抑制细胞生长和/或减少细胞数量的方法，所述方法包括向所述系统施用：
以下中的一种或两种：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分；
所述系统于是暴露于这两者，并且与不存在所述自然杀伤细胞和所述抗体募集分子的情况相比，所述系统中的细胞数量减少。
2.一种用于治疗病症、障碍或疾病的方法，所述方法包括向患有所述病症、障碍或疾病的受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合癌细胞的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症、障碍或疾病是癌症。
4.一种用于降低使用自然杀伤细胞的治疗的副作用的方法，所述方法包括向受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合治疗的靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
5.一种用于降低使用自然杀伤细胞的治疗的毒性的方法，所述方法包括向受试者施用：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，
其中所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合治疗的靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞是记忆样自然杀伤细胞。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述自然杀伤细胞是由IL-12、IL-15和IL-18诱导的细胞因子诱导型记忆样自然杀伤细胞。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述自然杀伤细胞和所述ARM同时施用，任选地在一种组合物中。
9.根据权利要求6所述的方法，其中在所述ARM之前或之后施用所述自然杀伤细胞。
10.根据权利要求6所述的方法，其中所述ARM的抗体结合部分是通用抗体结合部分。
11.根据权利要求6所述的方法，其中所述ARM是式I的化合物：
Figure FDA0003196682060000021
或其药学上可接受的盐，其中：
ABT是抗体结合部分；
L是连接ABT与TBT的二价接头部分；并且
TBT是靶标结合部分。
12.根据权利要求6所述的方法，其中所述ARM是式II的化合物：
Figure FDA0003196682060000022
或其药学上可接受的盐，其中：
R1、R3和R5各自独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R1和R1'任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R3和R3’任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
R5基团和附接到同一碳原子的R5’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；或者
两个R5基团任选地连同其间插原子一起形成C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
R1’、R3’和R5’各自独立地是氢或C1-3脂肪族；
R2、R4和R6各自独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R2和R1任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R4和R3任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；或者
R6基团及其相邻的R5基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
L1是连接
Figure FDA0003196682060000041
的三价接头部分；
L2是共价键或C1-10二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-3个亚甲基单元独立地并且任选地被-S-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、
Figure FDA0003196682060000042
Figure FDA0003196682060000043
或-Cy1-替代，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂亚芳基；
TBT是靶标结合部分；并且
m和n各自独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10；或者
其中所述ARM是式III的化合物：
Figure FDA0003196682060000044
或其药学上可接受的盐，其中：
每个R7独立地是氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂肪族，3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，苯基，8-10元双环芳族碳环，具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环，具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳环；或者：
R7基团和附接到同一碳原子的R7’基团任选地连同其间插碳原子一起形成3-8元饱和或部分不饱和螺环碳环或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和螺环杂环；
每个R7'独立地是氢或C1-3脂肪族；
每个R8独立地是氢或C1-4脂肪族，或者：
R8基团及其相邻的R7基团任选地连同其间插原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环；
R9是氢、C1-3脂肪族或-C(O)C1-3脂肪族；
L3是连接
Figure FDA0003196682060000051
与TBT的二价接头部分；
TBT是靶标结合部分；并且
o是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
13.根据权利要求6所述的方法，其中所述ARM是具有式I-a结构的化合物：
Figure FDA0003196682060000052
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
t是0-50；
z是1-50；
L是接头部分；
TBT是靶标结合部分；
每个Rc独立地是-La-R’；
a和b各自独立地是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
其中所述ARM是具有式I-b结构的化合物：
Figure FDA0003196682060000061
或其盐，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸残基；
每个z独立地是1-50；
每个L独立地是接头部分；
TBT是靶标结合部分，
每个Rc独立地是-La-R’；
a1和a2各自独立地是0-200，其中a1和a2中的至少一个不是0；
b是1-200；
每个La独立地是共价键或是选自C1-C20脂肪族或具有1-5个杂原子的C1-C20杂脂肪族的任选取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被-C(R’)2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R’)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR’)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R’)-、-C(O)S-、或-C(O)O-替代；
每个-Cy-独立地是任选取代的二价基团，其选自C3-20脂环族环，C6-20芳基环，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R、或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-30脂肪族，具有1-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族，C6-30芳基，C6-30芳基脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族，具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基，以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同所述原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除所述原子外还具有0-10个独立选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地连同其间插原子一起形成任选取代的3-30元单环、双环或多环，所述单环、双环或多环除间插原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子。
14.根据权利要求6所述的方法，其中将所述ARM与抗体或其片段一起施用。
15.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体结合部分是或包含肽单元，所述肽单元是或包含DCAWHLGELVWCT，其中两个半胱氨酸残基任选地形成二硫键。
16.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体结合部分是或包含肽单元，所述肽单元是或包含CDCAWHLGELVWCTC，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及所述序列中间的两个半胱氨酸各自独立地且任选地形成二硫键。
17.一种组合，所述组合包含：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，其中：
所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
18.根据权利要求17所述的组合，其中所述自然杀伤细胞是根据权利要求1-16中任一项所述的自然杀伤细胞，和/或所述ARM是根据权利要求1-16中任一项所述的ARM。
19.一种组合物，所述组合物包含：
多个自然杀伤细胞；和
抗体募集分子(ARM)，其中：
所述ARM包含可结合一种或多种抗体或其片段的抗体结合部分、可结合靶标实体的靶标结合部分、以及任选的连接所述抗体结合部分与所述靶标结合部分的接头部分。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述自然杀伤细胞是根据权利要求1-16中任一项所述的自然杀伤细胞，和/或所述ARM是根据权利要求1-16中任一项所述的ARM。
21.根据权利要求19或20所述的组合物，其中所述组合物包含抗体或其片段。
22.根据示例性实施方案1-103中任一项所述的方法、改进、组合或组合物。
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