CN113444086B - Ezh2抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请提供式(I)和(II)中任一个的化合物。本文描述的化合物是组蛋白甲基转移酶(例如，zeste增强子同源物1(EZH1)和zeste增强子同源物2(EZH2))的抑制剂并用于治疗和/或预防宽范围的疾病(例如，增殖性疾病)。本申请还提供药物组合物、试剂盒、方法和用途，包括或使用本文描述的化合物。本申请还提供鉴别EZH1和/或EZH2抑制剂的方法。

Description

Ezh2抑制剂及其用途
本申请是基于申请日为2015年11月6日，申请号为201580072658.6 (PCT/US2015/059622)，发明名称为：“Ezh2抑制剂及其用途”的专利申请的分案申请。
相关申请
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2014年11月6日提交的美国临时申请U.S.S.N.62/076,410的权益，将U.S.S.N.62/076,410并入本申请作为参考。
背景技术
对于所有基于DNA的过程例如转录、修复和复制，染色质结构含有重要的调节信息。在真核生物中，多梳组(PcG)和果蝇Trx组(TrxG)蛋白复合物通过进化保守机制调节染色质结构，分别用于基因沉默或活化 (Schuettengruber等人，2007)。多梳蛋白组装到至少两个截然不同的复合物中，即多梳蛋白抑制复合物1和2(分别为PRC1和PRC2)。数条证据链证明， PCR2牵涉将所述PRC1复合物招募到它们共同靶标基因的启动子中。PcG 蛋白水平的精确平衡确保正确的细胞增殖和正常的组织内稳态，而PcG蛋白中异常表达模式或基因组改变可导致转录失调并造成各种疾病包括癌症(Laugesen and Helin,2014)。
组蛋白尾部从核小体核心伸出，该尾部经历多种修饰，包括磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化和苏素化。组蛋白修饰通过调节较高级染色质结构对转录调节产生重大影响。染色质有两种功能状态：常染色质和异染色质，它们分别是转录活化和转录失活的。一些组蛋白修饰，例如在组蛋白4赖氨酸 20(H4K20me3)、组蛋白3赖氨酸9(H3K9me3)或赖氨酸79(H3K79me3)上的三-甲基化，主要发生在组成性异染色质结构域中；而其它修饰例如在组蛋白3赖氨酸4(H3K4me3)上的三-甲基化和在组蛋白3赖氨酸27(H3K27ac) 上的乙酰化被认为是常染色质中活跃转录区域的标志。在组蛋白3赖氨酸27 (H3K27me3)上的三-甲基化通常与较高级真核生物的转录表达相关(Cao等人，2002；Czermin等人，2002；Muller等人，2002)。二价结构域(被称为抑制标志H3K27me3和激活标志H3K4me3的矛盾共存)，保持发育基因处于沉默但平衡的状态，用于在分化时激活(Chen and Dent,2014)。
Zeste增强子同源物2(EZH2)是PRC2的核心组分，其催化组蛋白H3赖氨酸27的二-和三-甲基化(H3K27me2/3)。EZH2在正常发育中起关键作用， EZH2缺陷型小鼠由于植入和原肠胚形成失败而死于胚胎早期(O’Carroll等人，2001)。导致酶活动过度的EZH2(例如，Y641N)的SET结构域中的体细胞突变已经在大部分滤泡和弥漫性大B细胞淋巴瘤中被识别出来，这暗示了 EZH2在癌症形成中的驱动子功能(Beguelin等人，2013；Morin等人，2010)。最近开发了具有突变的EZH2(Y641N)条件性表达的GEM模型，其与BCL2 合作诱导生发中心(GC)增生并加速淋巴瘤发生(Beguelin等人，2013)。
发明内容
在一个方面中，本文描述的是式(I)和(II)中任一个的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。本文描述的化合物是组蛋白甲基转移酶 (HMT，例如，zeste增强子同源物1(EZH1)、zeste增强子同源物2(EZH2)) 的抑制剂。所述化合物用于治疗和/或预防有需要的受试者中与HMT的异常活性或增加的活性相关的疾病，例如增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱。所述化合物也可用于在细胞中诱导凋亡。本申请还提供包含本文所述化合物的药物组合物、试剂盒、方法和用途。
在一个方面中，本申请提供式(I)化合物、及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药：
其中RA1、RA2、RA3、RA4和RA5如本文所定义。
示例性式(I)化合物包括但不限于：
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在另一个方面，本申请提供式(II)化合物、及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药：
其中RB1、RB2、RB3、RB4和RB5如本文所定义。
示例性式(II)化合物包括但不限于：
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在另一个方面，本文描述的是药物组合物，其包含本文所述的化合物和任选地药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，本文描述的药物组合物包含治疗或预防有效量的本文所述的化合物。在一些实施方案中，本文描述的药物组合物还包含额外的药物。所述药物组合物可用于调节(例如，抑制)受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性，用于治疗有需要的受试者的疾病(例如，增殖性疾病)或用于预防有需要的受试者的疾病。
在一些实施方案中，所述疾病为与HMT的异常活性相关的疾病。在一些实施方案中，HMT的异常活性为增加的HMT活性。在一些实施方案中，所述疾病为相比于正常细胞与HMT活性增加相关的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为增殖性疾病(例如，癌症、良性肿瘤、病理性血管发生)、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱。
在一些实施方案中，所述受试者为人。在一些实施方案中，所述受试者为非人动物。在一些实施方案中，所述细胞在体外。在一些实施方案中，所述细胞在体内。
在另一方面，本文描述的是包括装有本文所述的化合物或药物组合物的容器的试剂盒。本文描述的试剂盒可以包括单剂量或多剂量的化合物或药物组合物。所述试剂盒可用于抑制受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性，用于在有需要的受试者中治疗与HMT的异常活性相关的疾病，用于在有需要的受试者中预防与HMT的异常活性相关的疾病，用于在有需要的受试者中治疗疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)和/或用于在有需要的受试者中预防疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)。在一些实施方案中，本文所述的试剂盒还包括使用试剂盒中装有的化合物或药物组合物的说明书。
在另一个方面，本申请提供在有需要的受试者中调节(例如抑制)HMT的异常活性的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
在另一个方面，本申请提供在生物样品、组织或细胞中调节(例如抑制)HMT的活性的方法，包括使生物样品、组织或细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述化合物被给予或用于以选择性抑制特定 HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的活性。
在另一个方面，本申请提供诱导细胞凋亡的方法，所述方法包括使细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
本申请的另一方面涉及在有此需要的受试者中治疗疾病的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
在另一个方面，本申请提供在有此需要的受试者中预防疾病的方法，所述方法包括向受试者给予预防有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
本申请的另一方面涉及在有此需要的受试者中降低组蛋白的甲基化的方法，所述方法包括向受试者给予有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
本申请的另一方面涉及在生物样品、组织或细胞中降低组蛋白的甲基化的方法，所述方法包括使所述生物样品、组织或细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
本申请的另一方面涉及在有此需要的受试者中调节(例如，下调或上调)基因表达的方法，所述方法包括向受试者给予有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
本申请的另一方面涉及在生物样品、组织或细胞中调节(例如，下调或上调)基因表达的方法，所述方法包括使所述生物样品、组织或细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
本公开的另一方面涉及筛选化合物库以鉴定可用于本文所述方法的化合物的方法。
本申请的另一个方面涉及鉴定EZH1和/或EZH2抑制剂的方法。
在另一方面，本申请提供本文所述的化合物和药物组合物用于本申请的方法(例如，抑制HMT的异常活性的方法、诱导凋亡的方法、治疗疾病(例如，增殖性疾病)的方法或预防疾病(例如，增殖性疾病)的方法)。
定义
具体官能团和化学术语的定义在下文中进行更详细地描述。所述化学元素根据元素周期表，CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第75版，内封面确定，且具体官能团通常按本文所述进行定义。此外，有机化学的一般原理以及具体官能部分和反应性描述于Thomas Sorrell，Organic Chemistry，University Science Books，Sausalito，1999；Smith和March，March’sAdvanced Organic Chemistry，第5版，John Wiley&Sons，Inc.，NewYork， 2001；Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers，Inc.，New York，1989；和Carruthers，Some Modern Methods of Organic Synthesis，第3版，Cambridge University Press，Cambridge，1987。本申请不意在以任何方式受限于本文中所列举的示例性取代基。
本文所述化合物可包含一个或多个不对称中心，并因此可以各种异构体形式存在，例如，对映异构体和/或非对映异构体。例如，本文所述化合物可为单一对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或可为立体异构体的混合物的形式，包括外消旋混合物和富集一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法(包括手性高压液相色谱(HPLC) 和形成并结晶手性盐)从混合物中分离；或优选的异构体可通过不对称合成制备。参见，例如，Jacques等人，Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen等人，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill，NY，1962)；和 Wilen，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions第268页(E.L.Eliel 编辑，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN 1972)。本发明还包括作为基本上不含其他异构体的单一异构体的文中所述化合物，且或者，作为不同异构体的混合物的文中所述化合物。
当列出数值范围时，旨在涵盖该范围内的各数值和子范围。例如“C1-6”旨在涵盖C1、C2、C3、C4、C5、C6、C1–6、C1–5、C1–4、C1–3、C1–2、C2–6、C2–5、 C2–4、C2–3、C3–6、C3–5、C3–4、C4–6、C4–5和C5–6。
术语“脂肪族”包括饱和和不饱和，直链(即，非支链)、支链、非环状、环状或多环脂肪烃，其可任选地被一个或多个官能团取代。如本领域技术人员将理解地，“脂肪族”在本文中旨在包括但不限于：烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基和环炔基部分。因此，术语“烷基”包括直链、支链和环状烷基。类似的规则适用于其他通用术语，例如“烯基”、“炔基”等。此外，术语“烷基”、“烯基”、“炔基”等涵盖取代和未取代基团。在一些实施方案中，“低级烷基”用于表示具有1-6个碳原子的那些烷基(环状、非环状、取代、未取代、支链或非支链)。
在一些实施方案中，本发明中所使用的烷基、烯基和炔基包含1-20个脂肪族碳原子。在一些其他实施方案中，本发明中所使用的烷基、烯基和炔基包含1-10个脂肪族碳原子。还在其他实施方案中，本发明所使用的烷基、烯基和炔基包含1-8个脂肪族碳原子。还在其他实施方案中，本发明所使用的烷基、烯基和炔基包含1-6个脂肪族碳原子。还在其他实施方案中，本发明所使用的烷基、烯基和炔基包含1-4个碳原子。因此，示例性的脂肪族基团包括但不限于：例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、-CH2-环丙基、乙烯基、烯丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、-CH2- 环丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊基、环戊基、-CH2-环戊基、正己基、仲己基、环己基、-CH2-环己基部分等，其同样地可带有一个或多个取代基。烯基包括但不限于例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1- 基等。代表性的炔基包括但不限于乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基等。
术语“烷基”是指具有1至10个碳原子的直链或支链的饱和烃基(“C1-10烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至9个碳原子(“C1-9烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至8个碳原子(“C1-8烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至7个碳原子(“C1-7烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至6个碳原子(“C1-6烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1 至5个碳原子(“C1-5烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至4个碳原子(“C1-4烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至3个碳原子(“C1-3烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1至2个碳原子(“C1-2烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有1个碳原子(“C1烷基”)。在一些实施方案中，烷基基团具有2至6个碳原子(“C2-6烷基”)。C1-6烷基基团的实例包括甲基 (C1)、乙基(C2)、丙基(C3)(例如，正丙基、异丙基)、丁基(C4)(例如，正丁基、叔丁基、仲丁基、异丁基)、戊基(C5)(例如，正戊基、3-戊基、戊基、新戊基、 3-甲基-2-丁基、叔戊基)和己基(C6)(例如，正己基)。烷基基团的其他实例包括正庚基(C7)、正辛基(C8)等。除非另外指出，否则烷基基团在每种情况下独立地未取代(“未取代的烷基”)或被一个或多个取代基(例如，卤素，例如F) 取代(“取代的烷基”)。在一些实施方案中，所述烷基基团为未取代的C1-10烷基(例如未取代的C1-6烷基，例如，-CH3(Me)、未取代的乙基(Et)、未取代的丙基(Pr，例如，未取代的正丙基(n-Pr)、未取代的异丙基(i-Pr))、未取代的丁基(Bu，例如，未取代的正丁基(n-Bu)、未取代的叔丁基(tert-Bu或t-Bu)、未取代的仲丁基(sec-Bu)、未取代的异丁基(i-Bu))。在一些实施方案中，所述烷基基团为取代的C1-10烷基(例如取代的C1-6烷基，例如，-CF3、Bn)。
“烯基”是指具有2-20个碳原子、一或多个碳-碳双键且无叁键的直链或支链烃基的基团(“C2-20烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-10个碳原子 (“C2-10烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-9个碳原子(“C2-9烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-8个碳原子(“C2-8烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-7个碳原子(“C2-7烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-6个碳原子(“C2-6烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-5个碳原子(“C2-5烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-4个碳原子(“C2-4烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2-3个碳原子(“C2-3烯基”)。在一些实施方案中，烯基具有2个碳原子(“C2烯基”)。所述一个或多个碳-碳双键可为内部的(例如在2-丁烯基中)或末端的(例如在1-丁烯基中)。C2-4烯基的实例包括乙烯基(C2)、1-丙烯基(C3)、 2-丙烯基(C3)、1-丁烯基(C4)、2-丁烯基(C4)、丁二烯基(C4)等。C2-6烯基的实例包括上述C2-4烯基，以及戊烯基(C5)、戊二烯基(C5)、己烯基(C6)等。烯基的额外的实例包括庚烯基(C7)、辛烯基(C8)、辛三烯基(C8)等。除非另外规定，烯基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的烯基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的烯基”)。在一些实施方案中，所述烯基是未取代的C2-10烯基。在一些实施方案中，所述烯基是取代的C2-10烯基。在烯基基团中，立体化学未指定的C＝C双键(例如，-CH＝CHCH3或)可以为 (E)-或(Z)-双键。/>
“炔基”是指具有2-20个碳原子、一个或多个碳-碳叁键和任选地一个或多个双键的直链或支链烃基的基团(“C2-20炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-10个碳原子(“C2-10炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-9个碳原子(“C2-9炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-8个碳原子(“C2-8炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-7个碳原子(“C2-7炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-6个碳原子(“C2-6炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-5个碳原子(“C2-5炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-4个碳原子(“C2-4炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2-3个碳原子(“C2-3炔基”)。在一些实施方案中，炔基具有2个碳原子(“C2炔基”)。所述一个或多个碳-碳叁键可为内部的(例如在2-丁炔基中)或末端的(例如在1-丁炔基中)。C2-4炔基的实例包括但不限于乙炔基(C2)、1-丙炔基(C3)、2-丙炔基(C3)、1-丁炔基(C4)、2-丁炔基(C4)等。 C2-6炔基的实例包括上述C2-4炔基以及戊炔基(C5)、己炔基(C6)等。炔基的其他实例包括庚炔基(C7)、辛炔基(C8)等。除非另外规定，炔基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的炔基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的炔基”)。在一些实施方案中，所述炔基是未取代的C2-10炔基。在一些实施方案中，所述炔基是取代的C2-10炔基。
“碳环基”或“碳环的”是指具有3-10个环碳原子的非芳香环烃基的基团 (“C3-10碳环基”)且在该非芳香环系统中没有杂原子。在一些实施方案中，碳环基具有3-8个环碳原子(“C3-8碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有 3-6个环碳原子(“C3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有3-6个环碳原子(“C3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有5-10个环碳原子(“C5-10碳环基”)。示例性的C3-6碳环基包括但不限于：环丙基(C3)、环丙烯基(C3)、环丁基(C4)、环丁烯基(C4)、环戊基(C5)、环戊烯基(C5)、环己基(C6)、环己烯基(C6)、环己二烯基(C6)等。示例性的C3-8碳环基包括但不限于上述C3-6碳环基以及环庚基(C7)、环庚烯基(C7)、环庚二烯基(C7)、环庚三烯基(C7)、环辛基(C8)、环辛烯基(C8)、二环[2.2.1]庚基(C7)、二环[2.2.2]辛基(C8)等。示例性的C3-10碳环基包括但不限于上述C3-8碳环基以及环壬基(C9)、环壬烯基(C9)、环癸基(C10)、环癸烯基(C10)、八氢-1H-茚基(C9)、十氢萘基(C10)、螺[4.5]癸基(C10)等。如上述实例所说明，在一些实施方案中，所述碳环基是单环的(“单环碳环基”)或含有稠合、桥连或螺环系统，例如二环系统(“二环碳环基”)且可为饱和或部分不饱和的。“碳环基”还可包括环系统，其中如上文定义的所述碳环与一个或多个芳基或杂芳基稠合，其中所述连接点在该碳环上，且在这种情况下，碳数仍指的是在该碳环环系统中的碳的个数。除非另外规定，碳环基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的碳环基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的碳环基”)。在一些实施方案中，所述碳环基是未取代的C3-10碳环基。在一些实施方案中，所述碳环基是取代的C3-10碳环基。
在一些实施方案中，“碳环基”是具有3-10个环碳原子的单环、饱和碳环基(“C3-10环烷基”)。在一些实施方案中，环烷基具有3-8个环碳原子(“C3-8环烷基”)。在一些实施方案中，环烷基具有3-6个环碳原子(“C3-6环烷基”)。在一些实施方案中，环烷基具有5-6个环碳原子(“C5-6环烷基”)。在一些实施方案中，环烷基具有5-10个环碳原子(“C5-10环烷基”)。C5-6环烷基的实例包括环戊基(C5)和环己基(C6)。C3-6环烷基的实例包括上述C5-6环烷基以及环丙基(C3)和环丁基(C4)。C3-8环烷基的实例包括上述C3-6环烷基以及环庚基(C7) 和环辛基(C8)。除非另外规定，环烷基在每种情况下独立地为未取代(“未取代的环烷基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的环烷基”)。在一些实施方案中，所述环烷基是未取代的C3-10环烷基。在一些实施方案中，所述环烷基是取代的C3-10环烷基。
“杂环基”或“杂环的”是指具有环碳原子和1-4个环杂原子的3-至10-元非芳香环系统的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧、硫、硼、磷和硅(“3-10 元杂环基”)。在包含一个或多个氮原子的杂环基中，所述连接点可为碳或氮原子，只要化合价允许。杂环基可为单环的(“单环杂环基”)或稠合、桥连或螺环系统，例如二环系统(“二环杂环基”)，且可为饱和的或可为部分不饱和的。杂环基二环环系统可在一个或者两个环中包含一个或多个杂原子。“杂环基”还包括环系统，其中如上文所定义的杂环与一个或多个碳环基稠合，其中所述连接点在该碳环或杂环上，或包括环系统，其中如上文所定义的杂环与一个或多个芳基或杂芳基基团稠合，其中所述连接点在该杂环上，且在这种情况下，环原子数仍指的是在该杂环系统中的环原子个数。除非另外规定，杂环基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的杂环基”) 或被一个或多个取代基取代(“取代的杂环基”)。在一些实施方案中，所述杂环基是未取代的3-10元杂环基。在一些实施方案中，所述杂环基是取代的 3-10元杂环基。
在一些实施方案中，杂环基是具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-10 元非芳香环系统，其中各杂原子独立地选自氮、氧、硫、硼、磷和硅(“5-10 元杂环基”)。在一些实施方案中，杂环基是具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-8元非芳香环系统，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫(“5-8元杂环基”)。在一些实施方案中，杂环基是具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-6 元非芳香环系统，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫(“5-6元杂环基”)。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-3个环杂原子，其选自氮、氧和硫。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-2个环杂原子，其选自氮、氧和硫。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有一个环杂原子，其选自氮、氧和硫。
示例性的含有一个杂原子的3元杂环基包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基。示例性的含有一个杂原子的4元杂环基包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基。示例性的含有一个杂原子的5元杂环基包括但不限于：四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、吡咯烷基、二氢吡咯基和吡咯基-2,5-二酮。示例性的含有两个杂原子的5元杂环基包括但不限于：二氧杂环戊烷基、氧硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基和噁唑烷-2-酮。示例性的含有三个杂原子的5元杂环基包括但不限于三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基。示例性的含有一个杂原子的6 元杂环基包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基和硫杂环己基。示例性的含有两个杂原子的6元杂环基包括但不限于哌嗪基、吗啉基、二硫杂环己基和二氧杂环己基。示例性的含有三个杂原子的6元杂环基包括但不限于三嗪烷基。示例性的含有一个杂原子的7元杂环基包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。示例性的含有一个杂原子的8元杂环基包括但不限于氮杂环辛烷基、氧杂环辛烷基和硫杂环辛烷基。与C6芳环稠合的示例性的5元杂环基(在本文也称为5,6-二环杂环)包括但不限于：二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、苯并噁唑啉酮基等。与芳环稠合的示例性的6元杂环基(在本文中也称为6,6-二环杂环) 包括但不限于四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。
“芳基”是指单环或多环(例如，二环或三环)4n+2芳香环系统(例如，具有6、10或14个在环阵列中共享的π电子)的基团，其在该芳香环系统中具有6-14个环碳原子且无杂原子(“C6-14芳基”)。在一些实施方案中，芳基具有 6个环碳原子(“C6芳基”；例如，苯基)。在一些实施方案中，芳基具有10个环碳原子(“C10芳基”；例如，萘基，例如1-萘基和2-萘基)。在一些实施方案中，芳基具有14个环碳原子(“C14芳基”；例如，蒽基)。“芳基”还包括环系统，其中如上所定义的芳基环与一个或多个碳环基或杂环基稠合，其中所述基团或连接点在该芳基环上，且在这种情况下，碳原子数仍指的是在该芳基环系统中的碳原子的个数。除非另外规定，芳基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的芳基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的芳基”)。在一些实施方案中，所述芳基是未取代的C6-14芳基。在一些实施方案中，所述芳基是取代的C6-14芳基。
“芳烷基”是烷基和芳基的子集，且是指被任选取代的芳基取代的任选取代的烷基。在一些实施方案中，所述芳烷基是任选取代的苄基。在一些实施方案中，所述芳烷基是苄基。在一些实施方案中，所述芳烷基是任选取代的苯乙基。在一些实施方案中，所述芳烷基是苯乙基。
“杂芳基”是指5-10元单环或二环4n+2芳香环系统的基团(例如，具有6 或10个在环阵列中共享的π电子)，其在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4 个环杂原子，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫(“5-10元杂芳基”)。在含有一个或多个氮原子的杂芳基中，所述连接点可为碳或氮原子，只要化合价允许。杂芳基二环环系统可在一个或两个环中包含一个或多个杂原子。“杂芳基”包括环系统，其中如上文所定义的杂芳基环与一个或多个碳环基或杂环基稠合，其中所述连接点在该杂芳基环上，且在这种情况下，环原子数仍指的是在该杂芳基环系统中的环原子的个数。“杂芳基”还包括环系统，其中如上文所定义的杂芳基环与一个或多个芳基稠合，其中所述连接点在该芳基或杂芳基环上，且在这种情况下，环原子数指的是在该稠合的(芳基/杂芳基) 环系统中的环原子数。在其中一个环不包含杂原子的二环杂芳基(例如，吲哚基、喹啉基、咔唑基等)中，所述连接点可在任一环上，即，在含杂原子的环上(例如，2-吲哚基)或在不含杂原子的环上(例如，5-吲哚基)。
在一些实施方案中，杂芳基是5-10元芳香环系统，其在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4个环杂原子，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫 (“5-10元杂芳基”)。在一些实施方案中，杂芳基是5-8元芳香环系统，其在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4个环杂原子，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫(“5-8元杂芳基”)。在一些实施方案中，杂芳基是5-6元芳香环系统，其在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4个环杂原子，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫(“5-6元杂芳基”)。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有选自氮、氧和硫的1-3个环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有选自氮、氧和硫的1-2个环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6 元杂芳基具有选自氮、氧和硫的1个环杂原子。除非另外规定，杂芳基在每种情况下任选独立地被取代，即，未取代(“未取代的杂芳基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的杂芳基”)。在一些实施方案中，所述杂芳基是未取代的5-14元杂芳基。在一些实施方案中，所述杂芳基是取代的5-14元杂芳基。
示例性的含有一个杂原子的5元杂芳基包括但不限于吡咯基、呋喃基和噻吩基。示例性的含有两个杂原子的5元杂芳基包括但不限于：咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基和异噻唑基。示例性的含有三个杂原子的 5元杂芳基包括但不限于三唑基、噁二唑基和噻二唑基。示例性的含有四个杂原子的5元杂芳基包括但不限于四唑基。示例性的含有一个杂原子的6元杂芳基包括但不限于吡啶基。示例性的含有两个杂原子的6元杂芳基包括但不限于哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。示例性的含有三个或四个杂原子的6元杂芳基分别包括但不限于三嗪基和四嗪基。示例性的含有一个杂原子的7元杂芳基包括但不限于氮杂环庚三烯基、氧杂环庚三烯基和硫杂环庚三烯基。示例性的5,6-二环杂芳基包括但不限于：吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻二唑基、吲嗪基和嘌呤基。示例性的6,6-二环杂芳基包括但不限于：二氮杂萘基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹喔啉基、酞嗪基和喹唑啉基。
“杂芳烷基”是烷基和杂芳基的子集，且是指被任选取代的杂芳基取代的任选取代的烷基。
“不饱和”或“部分不饱和”是指包含至少一个双键或叁键的基团。“部分不饱和”环系统进一步旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包括芳香基团(例如，芳基或杂芳基)。同样地，“饱和”是指不含有双键或叁键的基团，即，只含单键。
烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基，作为二价桥连基团，使用前缀亚时，进一步表示，例如，亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚碳环基、亚杂环基、亚芳基和亚杂芳基。
除非另外明确规定，否则本文所述的原子、部分或基团可为未取代的或取代的，只要化合价允许。术语“任选取代的”是指取代的或未取代的。
除非另外明确规定，基团任选被取代。术语“任选取代的”是指被取代的或未取代的。在一些实施方案中，烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选被取代(例如，“取代的”或“未取代的”烷基、“取代的”或“未取代的”烯基、“取代的”或“未取代的”炔基、“取代的”或“未取代的”碳环基、“取代的”或“未取代的”杂环基、“取代的”或“未取代的”芳基或“取代的”或“未取代的”杂芳基)。通常，术语“取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，表示存在于基团(例如，碳或氮原子)上的至少一个氢原子被可允许的取代基(例如，经取代形成稳定化合物的取代基，例如所述化合物不会自发进行转化，如重排、环化、消除或其他反应)取代。除非另外指明，“取代的”基团在该基团的一个或多个可取代位置具有取代基，且当在任意给定结构中有超过一个位置被取代，则该取代基在各位置相同或不同。术语“取代的”旨在包括用有机化合物所有可允许的取代基(导致形成稳定化合物的本文所述的任意取代基)进行的取代。本发明包括任意和全部这种组合以得到稳定的化合物。出于本发明的目的，杂原子(例如氮)可具有氢取代基和/或本文所述的任意适当的取代基，其满足该杂原子的化合价并形成稳定的基团。在一些实施方案中，所述取代基是碳原子取代基。在一些实施方案中，所述取代基是氮原子取代基。在一些实施方案中，所述取代基是氧原子取代基。在一些实施方案中，所述取代基是硫原子取代基。
示例性碳原子取代基包括但不限于：卤素、–CN、–NO2、–N3、–SO2H、–SO3H、–OH、–ORaa、–ON(Rbb)2、–N(Rbb)2、–N(Rbb)3 +X–、–N(ORcc)Rbb、–SH、–SRaa、–SSRcc、–C(＝O)Raa、–CO2H、–CHO、–C(ORcc)2、–CO2Raa、–OC(＝O)Raa、–OCO2Raa、–C(＝O)N(Rbb)2、–OC(＝O)N(Rbb)2、–NRbbC(＝O)Raa、–NRbbCO2Raa、–NRbbC(＝O)N(Rbb)2、–C(＝NRbb)Raa、–C(＝NRbb)ORaa、–OC(＝NRbb)Raa、–OC(＝NRbb)ORaa、–C(＝NRbb)N(Rbb)2、–OC(＝NRbb)N(Rbb)2、–NRbbC(＝NRbb)N(Rbb)2、–C(＝O)NRbbSO2Raa、–NRbbSO2Raa、–SO2N(Rbb)2、–SO2Raa、–SO2ORaa、–OSO2Raa、–S(＝O)Raa、–OS(＝O)Raa、–Si(Raa)3、–OSi(Raa)3–C(＝S)N(Rbb)2、–C(＝O)SRaa、–C(＝S)SRaa、–SC(＝S)SRaa、–SC(＝O)SRaa、–OC(＝O)SRaa、–SC(＝O)ORaa、–SC(＝O)Raa、–P(＝O)(Raa)2、-P(＝O)(ORcc)2、–OP(＝O)(Raa)2、–OP(＝O)(ORcc)2、–P(＝O)(N(Rbb)2)2、–OP(＝O)(N(Rbb)2)2、 -NRbbP(＝O)(Raa)2、–NRbbP(＝O)(ORcc)2、–NRbbP(＝O)(N(Rbb)2)2、–P(Rcc)2、–P(Rcc)3 +X-、-P(ORcc)3 +X-、-P(Rcc)4、-P(ORcc)4、-P(ORcc)2、–OP(Rcc)2、–OP(Rcc)3、–B(Raa)2、–B(ORcc)2、–BRaa(ORcc)、C1–10烷基、C1–10全卤代烷基、C2–10烯基、C2–10炔基、C3–10碳环基、3–14元杂环基、C6–14芳基和5–14 元杂芳基，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rdd基团所取代；其中X-为抗衡离子；或碳原子上的两个偕位氢被基团＝O、＝S、＝NN(Rbb)2、＝NNRbbC(＝O)Raa、＝NNRbbC(＝O)ORaa、＝NNRbbS(＝O)2Raa、＝NRbb或＝NORcc替代；
每个Raa独立地选自C1–10烷基、C1–10全卤代烷基、C2–10烯基、C2–10炔基、C3–10碳环基、3–14元杂环基、C6–14芳基和5–14元杂芳基，或两个Raa基团连接形成3–14元杂环基或5–14元杂芳基环，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rdd基团所取代；
每个Rbb独立地选自氢、–OH、–ORaa、–N(Rcc)2、–CN、–C(＝O)Raa、–C(＝O)N(Rcc)2、–CO2Raa、–SO2Raa、–C(＝NRcc)ORaa、–C(＝NRcc)N(Rcc)2、–SO2N(Rcc)2、–SO2Rcc、–SO2ORcc、–SORaa、–C(＝S)N(Rcc)2、–C(＝O)SRcc、–C(＝S)SRcc、–P(＝O)(Raa)2、-P(＝O)(ORcc)2、–P(＝O)(N(Rcc)2)2、C1–10烷基、 C1–10全卤代烷基、C2–10烯基、C2–10炔基、C3–10碳环基、3–14元杂环基、 C6–14芳基和5–14元杂芳基，或两个Rbb基团连接形成3–14元杂环基或5–14 元杂芳基环，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rdd基团所取代；其中X-为抗衡离子；
每个Rcc独立地选自氢、C1–10烷基、C1–10全卤代烷基、C2–10烯基、C2–10炔基、C3–10碳环基、3–14元杂环基、C6–14芳基和5–14元杂芳基，或两个 Rcc基团连接形成3–14元杂环基或5–14元杂芳基环，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rdd基团所取代；
每个Rdd独立地选自卤素、–CN、–NO2、–N3、–SO2H、–SO3H、–OH、–ORee、–ON(Rff)2、–N(Rff)2、–N(Rff)3 +X–、–N(ORee)Rff、–SH、–SRee、–SSRee、–C(＝O)Ree、–CO2H、–CO2Ree、–OC(＝O)Ree、–OCO2Ree、–C(＝O)N(Rff)2、–OC(＝O)N(Rff)2、–NRffC(＝O)Ree、–NRffCO2Ree、–NRffC(＝O)N(Rff)2、–C(＝NRff)ORee、–OC(＝NRff)Ree、–OC(＝NRff)ORee、–C(＝NRff)N(Rff)2、–OC(＝NRff)N(Rff)2、–NRffC(＝NRff)N(Rff)2、–NRffSO2Ree、–SO2N(Rff)2、–SO2Ree、–SO2ORee、–OSO2Ree、–S(＝O)Ree、–Si(Ree)3、–OSi(Ree)3、–C(＝S)N(Rff)2、–C(＝O)SRee、–C(＝S)SRee、–SC(＝S)SRee、–P(＝O)(ORee)2、–P(＝O)(Ree)2、–OP(＝O)(Ree)2、–OP(＝O)(ORee)2、C1–6烷基、C1–6全卤代烷基、C2–6烯基、 C2–6炔基、C3–10碳环基、3-10元杂环基、C6–10芳基、5–10元杂芳基，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、 2、3、4或5个Rgg基团所取代，或两个偕位Rdd取代基可连接形成＝O或＝S；其中X-为抗衡离子；
每个Ree独立地选自C1–6烷基、C1–6全卤代烷基、C2–6烯基、C2–6炔基、C3–10碳环基、C6–10芳基、3-10元杂环基和3-10元杂芳基，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、 4或5个Rgg基团所取代；
每个Rff独立地选自氢、C1–6烷基、C1–6全卤代烷基、C2–6烯基、C2–6炔基、C3–10碳环基、3-10元杂环基、C6–10芳基和5–10元杂芳基，或两个Rff基团连接形成3–14元杂环基或5–14元杂芳基环，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rgg基团所取代；和
每个Rgg独立地为卤素、–CN、–NO2、–N3、–SO2H、–SO3H、–OH、–OC1–6烷基、–ON(C1–6烷基)2、–N(C1–6烷基)2、–N(C1–6烷基)3 +X–、–NH(C1–6烷基)2 +X–、–NH2(C1–6烷基)+X–、–NH3 +X–、–N(OC1–6烷基)(C1–6烷基)、–N(OH)(C1–6烷基)、–NH(OH)、–SH、–SC1–6烷基、–SS(C1–6烷基)、–C(＝O)(C1–6烷基)、–CO2H、–CO2(C1–6烷基)、–OC(＝O)(C1–6烷基)、–OCO2(C1–6烷基)、–C(＝O)NH2、–C(＝O)N(C1–6烷基)2、–OC(＝O)NH(C1–6烷基)、–NHC(＝O)(C1–6烷基)、–N(C1–6烷基)C(＝O)(C1–6烷基)、–NHCO2(C1–6烷基)、–NHC(＝O)N(C1–6烷基)2、–NHC(＝O)NH(C1–6烷基)、–NHC(＝O)NH2、–C(＝NH)O(C1–6烷基)、–OC(＝NH)(C1–6烷基)、–OC(＝NH)OC1–6烷基、–C(＝NH)N(C1–6烷基)2、–C(＝NH)NH(C1–6烷基)、–C(＝NH)NH2、–OC(＝NH)N(C1–6烷基)2、–OC(NH)NH(C1–6烷基)、–OC(NH)NH2、–NHC(NH)N(C1–6烷基)2、–NHC(＝NH)NH2、–NHSO2(C1–6烷基)、–SO2N(C1–6烷基)2、–SO2NH(C1–6烷基)、–SO2NH2、–SO2C1–6烷基、–SO2OC1–6烷基、–OSO2C1–6烷基、–SOC1–6烷基、–Si(C1–6烷基)3、–OSi(C1–6烷基)3、–C(＝S)N(C1–6烷基)2、C(＝S)NH(C1–6烷基)、C(＝S)NH2、–C(＝O)S(C1–6烷基)、–C(＝S)SC1–6烷基、–SC(＝S)SC1–6烷基、–P(＝O)2(C1–6烷基)、–P(＝O)(C1–6烷基)2、–OP(＝O)(C1–6烷基)2、–OP(＝O)(OC1–6烷基)2、C1–6烷基、C1–6全卤代烷基、C2–6烯基、C2–6炔基、C3–10碳环基、C6–10芳基、3-10元杂环基、 5–10元杂芳基；或两个偕位Rgg取代基可连接形成＝O或＝S；其中X–为抗衡离子。
“抗衡离子”或“阴离子抗衡离子”是与带正电荷的基团缔合的带负电荷的基团，以保持电中性。阴离子抗衡离子可为一价的(即，包括一个形式负电荷)。阴离子抗衡离子也可为多价的(即，包括一个以上的形式负电荷)，例如二价或三价。示例性的抗衡离子包括卤离子(例如，F–、Cl–、Br–、I–)、NO3 –、 ClO4 –、OH–、H2PO4 –、HCO3 -、HSO4 –、磺酸根离子(例如，甲磺酸根、三氟甲磺酸根、对甲苯磺酸根、苯磺酸根、10-樟脑磺酸根、萘-2-磺酸根、萘-1- 磺酸-5-磺酸根、乙烷-1-磺酸-2-磺酸根等)、羧酸根离子(例如，乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、乳酸根、酒石酸根、羟乙酸根、葡糖酸根等)、 BF4 -、PF4 –、PF6 –、AsF6 –、SbF6 –、B[3,5-(CF3)2C6H3]4]–、B(C6F5)4 -、BPh4 –、 Al(OC(CF3)3)4 –和碳硼烷阴离子(例如，CB11H12 –或(HCB11Me5Br6)–)。示例性的可为多价的抗衡离子包括CO3 2-、HPO4 2-、PO4 3-、B4O7 2-、SO4 2-、S2O3 2-、羧酸根阴离子(例如，酒石酸根、柠檬酸根、富马酸根、马来酸根、苹果酸根、丙二酸根、葡糖酸根、琥珀酸根、戊二酸根、己二酸根、庚二酸根、辛二酸根、壬二酸根、癸二酸根、水杨酸根、邻苯二甲酸根、天冬氨酸根、谷氨酸根等)和碳硼烷。
“卤代”或“卤素”是指氟(氟代,-F)、氯(氯代,-Cl)、溴(溴代,-Br)或碘(碘代,-I)。
“酰基”是指选自-C(＝O)Raa、-CHO、-CO2Raa、-C(＝O)N(Rbb)2、 -C(＝NRbb)Raa、-C(＝NRbb)ORaa、-C(＝NRbb)N(Rbb)2、-C(＝O)NRbbSO2Raa、 -C(＝S)N(Rbb)2、-C(＝O)SRaa或-C(＝S)SRaa的基团，其中Raa和Rbb如本文所定义。
氮原子可为取代的或未取代的，只要化合价允许，且包括伯、仲、叔和季氮原子。示例性的氮原子取代基包括但不限于：氢、–OH、–ORaa、–N(Rcc)2、–CN、–C(＝O)Raa、–C(＝O)N(Rcc)2、–CO2Raa、–SO2Raa、–C(＝NRbb)Raa、–C(＝NRcc)ORaa、–C(＝NRcc)N(Rcc)2、–SO2N(Rcc)2、–SO2Rcc、–SO2ORcc、–SORaa、–C(＝S)N(Rcc)2、–C(＝O)SRcc、–C(＝S)SRcc、–P(＝O)(ORcc)2、–P(＝O)(Raa)2、–P(＝O)(N(Rcc)2)2、C1–10烷基、C1–10全卤代烷基、C2–10烯基、C2–10炔基、 C3–10碳环基、3–14元杂环基、C6–14芳基和5–14元杂芳基，或连接于氮原子的两个Rcc基团结合形成3–14元杂环基或5–14元杂芳环，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5 个Rdd基团所取代，且其中Raa、Rbb、Rcc和Rdd如上所定义。
在一些实施方案中，氮原子上存在的取代基为氮保护基(也称为氨基保护基)。氮保护基包括但不限于：–OH、–ORaa、–N(Rcc)2、–C(＝O)Raa、–C(＝O)N(Rcc)2、–CO2Raa、–SO2Raa、–C(＝NRcc)Raa、–C(＝NRcc)ORaa、–C(＝NRcc)N(Rcc)2、–SO2N(Rcc)2、–SO2Rcc、–SO2ORcc、–SORaa、–C(＝S)N(Rcc)2、–C(＝O)SRcc、–C(＝S)SRcc、C1–10烷基(例如，芳烷基、杂芳烷基)、C2–10烯基、C2–10炔基、C3–10碳环基、3–14元杂环基、C6–14芳基和5–14元杂芳基，其中每个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳烷基、芳基和杂芳基独立地被0、1、2、3、4或5个Rdd基团所取代，且其中Raa、Rbb、Rcc和Rdd如本文所定义。氮保护基是本领域众所周知的且包括详细描述于Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene and P.G.M.Wuts，第三版，JohnWiley&Sons，1999中的那些，其在此引入作为参考。
例如，氮保护基如酰胺基团(例如，-C(＝O)Raa)包括但不限于：甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯基乙酰胺、3-苯基丙酰胺、吡啶-2-甲酰胺、吡啶-3-甲酰胺、N-苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、苯甲酰胺、对苯基苯甲酰胺、邻硝基苯基乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、乙酰基乙酰胺、(N’-二硫代苄氧基酰基氨基)乙酰胺、3-(对羟基苯基)丙酰胺、3-(邻硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻苯基偶氮苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻硝基肉桂酰胺、N-乙酰基蛋氨酸衍生物、邻硝基苯甲酰胺和邻(苯甲酰基氧基甲基)苯甲酰胺。
氮保护基如氨基甲酸酯基(例如，-C(＝O)ORaa)包括但不限于：氨基甲酸甲基酯、氨基甲酸乙基酯、氨基甲酸9-芴基甲基酯(Fmoc)、氨基甲酸9-(2- 磺基)芴基甲基酯、氨基甲酸9-(2,7-二溴)芴基甲基酯、氨基甲酸2,7-二-叔丁基-[9-(10,10-二氧代-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲基酯(DBD-Tmoc)、氨基甲酸 4-甲氧基苯甲酰甲基酯(Phenoc)、氨基甲酸2,2,2-三氯乙基酯(Troc)、氨基甲酸2-三甲基甲硅烷基乙基酯(Teoc)、氨基甲酸2-苯基乙基酯(hZ)、氨基甲酸 1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基酯(Adpoc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2-卤代乙基酯、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2-二溴乙基酯(DB-t-BOC)、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基酯(TCBOC)、氨基甲酸1-甲基-1-(4-联苯基)乙基酯(Bpoc)、氨基甲酸1-(3,5-二-叔丁基苯基)-1-甲基乙基酯(t-Bumeoc)、氨基甲酸2-(2’-和4’-吡啶基)乙基酯(Pyoc)、氨基甲酸2-(N,N-二环己基甲酰胺基)乙基酯、氨基甲酸叔丁基酯(BOC或Boc)、氨基甲酸1-金刚烷基酯(Adoc)、氨基甲酸乙烯基酯 (Voc)、氨基甲酸烯丙基酯(Alloc)、氨基甲酸1-异丙基烯丙基酯(Ipaoc)、氨基甲酸肉桂基酯(Coc)、氨基甲酸4-硝基肉桂基酯(Noc)、氨基甲酸8-喹啉基酯、氨基甲酸N-羟基哌啶基酯、氨基甲酸烷基二硫基酯、氨基甲酸苄基酯(Cbz)、氨基甲酸对甲氧基苄基酯(Moz)、氨基甲酸对硝基苄基酯、氨基甲酸对溴苄基酯、氨基甲酸对氯苄基酯、氨基甲酸2,4-二氯苄基酯、氨基甲酸4-甲基亚磺酰基苄基酯(Msz)、氨基甲酸9-蒽基甲基酯、氨基甲酸二苯基甲基酯、氨基甲酸2-甲基硫基乙基酯、氨基甲酸2-甲基磺酰基乙基酯、氨基甲酸2-(对甲苯磺酰基)乙基酯、氨基甲酸[2-(1,3-二噻烷基)]甲基酯(Dmoc)、氨基甲酸 4-甲基噻吩基酯(Mtpc)、氨基甲酸2,4-二甲基噻吩基酯(Bmpc)、氨基甲酸2- 磷鎓基乙基酯(Peoc)、氨基甲酸2-三苯基磷鎓基异丙基酯(Ppoc)、氨基甲酸 1,1-二甲基-2-氰基乙基酯、氨基甲酸间氯-对酰基氧基苄基酯、氨基甲酸对(二羟基硼基)苄基酯、氨基甲酸5-苯并异噁唑基甲基酯、氨基甲酸2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基酯(Tcroc)、氨基甲酸间硝基苯基酯、氨基甲酸3,5-二甲氧基苄基酯、氨基甲酸邻硝基苄基酯、氨基甲酸3,4-二甲氧基-6-硝基苄基酯、氨基甲酸苯基(邻硝基苯基)甲基酯、氨基甲酸叔戊基酯、硫代氨基甲酸S-苄基酯、氨基甲酸对氰基苄基酯、氨基甲酸环丁基酯、氨基甲酸环己基酯、氨基甲酸环戊基酯、氨基甲酸环丙基甲基酯、氨基甲酸对癸氧基苄基酯、氨基甲酸2,2-二甲氧基酰基乙烯基酯、氨基甲酸邻(N,N-二甲基甲酰胺基)苄基酯、氨基甲酸1,1-二甲基-3-(N,N-二甲基甲酰胺基)丙基酯、氨基甲酸1,1-二甲基丙炔基酯、氨基甲酸二(2-吡啶基)甲基酯、氨基甲酸2-呋喃基甲基酯、氨基甲酸2-碘乙基酯、氨基甲酸异冰片基酯、氨基甲酸异丁基酯、氨基甲酸异烟酰基酯、氨基甲酸p-(p’-甲氧基苯基偶氮基)苄基酯、氨基甲酸1-甲基环丁基酯、氨基甲酸1-甲基环己基酯、氨基甲酸1-甲基-1-环丙基甲基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(对苯基偶氮苯基) 乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-苯基乙基酯、氨基甲酸1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基酯、氨基甲酸苯基酯、氨基甲酸对(苯基偶氮基)苄基酯、氨基甲酸2,4,6-三- 叔丁基苯基酯、氨基甲酸4-(三甲基铵)苄基酯和氨基甲酸2,4,6-三甲基苄基酯。
氮保护基如磺酰胺基团(例如，-S(＝O)2Raa)，包括但不限于：对甲苯磺酰胺(Ts)、苯磺酰胺、2,3,6,-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(Mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(Mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(Mts)、2,6- 二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(iMds)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰胺(Pmc)、甲磺酰胺(Ms)、β-三甲基甲硅烷基乙烷磺酰胺(SES)、9-蒽磺酰胺、4-(4’,8’-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(DNMBS)、苄基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺和苯甲酰甲基磺酰胺。
其它氮保护基包括但不限于：吩噻嗪基-(10)-酰基衍生物、N’-对甲苯磺酰基氨基酰基衍生物、N’-苯基氨基硫代酰基衍生物、N-苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、N-乙酰基蛋氨酸衍生物、4,5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫代琥珀酰亚胺(Dts)、N-2,3-二苯基马来酰亚胺、N-2,5-二甲基吡咯、N-1,1,4,4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物(STABASE)、5- 取代的1,3-二甲基-1,3,5-三氮杂环己-2-酮、5-取代的1,3-二苄基-1,3,5-三氮杂环己-2-酮、1-取代的3,5-二硝基-4-吡啶酮、N-甲基胺、N-烯丙基胺、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺(SEM)、N-3-乙酰氧基丙基胺、N-(1-异丙基-4- 硝基-2-氧代-3-吡咯烷-3-基)胺、季铵盐、N-苄基胺、N-二(4-甲氧基苯基)甲基胺、N-5-二苯并环庚胺、N-三苯基甲基胺(Tr)、N-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(MMTr)、N-9-苯基芴基胺(PhF)、N-2,7-二氯-9-芴基亚甲基胺、N-二茂铁基甲基氨基(Fcm)、N-2-吡啶甲基氨基N’-氧化物、N-1,1-二甲基硫基亚甲基胺、N-亚苄基胺、N-对甲氧基亚苄基胺、N-二苯基亚甲基胺、N-[(2-吡啶基)基]亚甲基胺、N-(N’,N’-二甲基氨基亚甲基)胺、N,N’-亚异丙基二胺、 N-对硝基亚苄基胺、N-亚水杨基胺、N-5-氯亚水杨基胺、N-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基胺、N-亚环己基胺、N-(5,5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺、N- 硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-[苯基(五酰基铬-或钨)酰基]胺、N-铜螯合物、N-锌螯合物、N-硝基胺、N-亚硝基胺、胺N-氧化物、二苯基膦酰胺(Dpp)、二甲基硫代膦酰胺(Mpt)、二苯基硫代膦酰胺(Ppt)、二烷基氨基磷酸酯、二苄基氨基磷酸酯、二苯基氨基磷酸酯、苯亚磺酰胺、邻硝基苯亚磺酰胺(Nps)、2,4-二硝基苯亚磺酰胺、五氯苯亚磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯亚磺酰胺、三苯基甲基亚磺酰胺和3-硝基吡啶亚磺酰胺(Npys)。
示例性氧原子取代基包括但不限于：–Raa、–C(＝O)SRaa、–C(＝O)Raa、–CO2Raa、–C(＝O)N(Rbb)2、–C(＝NRbb)Raa、–C(＝NRbb)ORaa、–C(＝NRbb)N(Rbb)2、–S(＝O)Raa、–SO2Raa、–Si(Raa)3、–P(Rcc)2、–P(Rcc)3 +X-、-P(ORcc)2、-P(ORcc)3 +X-、–P(＝O)(Raa)2、–P(＝O)(ORcc)2和–P(＝O)(N(Rbb)2)2，其中X-、Raa、Rbb和Rcc如本文所定义。在一些实施方案中，存在于氧原子上的氧原子取代基是氧保护基(也称为羟基保护基)。氧保护基是本领域众所周知的且包括详细描述于Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene and P.G.M.Wuts，第三版，John Wiley&Sons，1999中的那些，其在此引入作为参考。示例性氧保护基包括但不限于：甲基、叔丁氧羰基(BOC或Boc)、甲氧基甲基(MOM)、甲基硫基甲基(MTM)、叔丁基硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基 (SMOM)、苄氧基甲基(BOM)、对甲氧基苄基氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈创木酚甲基(GUM)、叔丁氧基甲基、4-戊烯基氧基甲基(POM)、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氢吡喃基(THP)、3-溴代四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基(MTHP)、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-甲桥苯并呋喃(methanobenzofuran)-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苄基氧基乙基、1-甲基-1-苄基氧基-2-氟乙基、2,2,2- 三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基氢硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苄基(Bn)、对甲氧基苄基、3,4- 二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基、对苯基苄基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N- 氧化物、二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚三烯基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4′-溴代苯甲酰甲氧基苯基)二苯基甲基、 4,4′,4″-三(4,5-二氯苯二甲酰亚氨基苯基)甲基、4,4′,4″-三(乙酰丙酰基氧基苯基)甲基、4,4′,4″-三(苯甲酰基氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)双(4′,4″-二甲氧基苯基)甲基、1,1-双(4-甲氧基苯基)-1′-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)吨基、 9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二硫杂环戊烷(benzodisulfuran)-2-基、苯并异噻唑基S,S-二氧化物、三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)、二甲基异丙基甲硅烷基(IPDMS)、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS)、二甲基己基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苄基甲硅烷基、三-对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS)、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(亚乙基二硫代)戊酸酯(乙酰丙酰基二硫缩醛)、新戊酸酯、金刚酸酯、巴豆酸酯、 4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(米酮酸酯(mesitoate))、烷基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(Fmoc)、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2-三氯乙基碳酸酯(Troc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯 (TMSEC)、2-(苯基磺酰基)乙基碳酸酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)乙基碳酸酯 (Peoc)、烷基异丁基碳酸酯、烷基乙烯基碳酸酯、烷基烯丙基碳酸酯、烷基对硝基苯基碳酸酯、烷基苄基碳酸酯、烷基对甲氧基苄基碳酸酯、烷基3,4- 二甲氧基苄基碳酸酯、烷基邻硝基苄基碳酸酯、烷基对硝基苄基碳酸酯、烷基S-苄基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基碳酸酯、甲基二硫代碳酸酯、2-碘代苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、 2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基、4-(甲硫基甲氧基)丁酸酯、2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯 -4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-双(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、邻(甲氧基酰基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N,N,N’,N’-四甲基二氨基磷酸酯(phosphorodiamidate)、烷基N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基、烷基2,4-二硝基苯基次磺酸酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苄基磺酸酯和甲苯磺酸酯(Ts)。
示例性的硫原子取代基包括但不限于：–Raa、–C(＝O)SRaa、–C(＝O)Raa、–CO2Raa、–C(＝O)N(Rbb)2、–C(＝NRbb)Raa、–C(＝NRbb)ORaa、–C(＝NRbb)N(Rbb)2、–S(＝O)Raa、–SO2Raa、–Si(Raa)3、-P(Rcc)2、-P(Rcc)3 +X-、-P(ORcc)2、-P(ORcc)3 +X-、 -P(＝O)(Raa)2、-P(＝O)(ORcc)2和-P(＝O)(N(Rbb)2)2，其中Raa、Rbb和Rcc如本文所定义。在一些实施方案中，存在于硫原子上的硫原子取代基是硫保护基团(也称为巯基保护基)。硫保护基是本领域熟知的且包括Protecting Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，JohnWiley&Sons， 1999中详细描述的那些，将其并入本文作为参考。
术语“离去基团”被赋予其在合成有机化学领域的一般含义且是指能够被亲核试剂置换的原子或基团。参见，例如，Smith,March Advanced Organic Chemistry 6th ed.(501-502)。示例性离去基团包括但不限于：卤素(例如氯、溴、碘)及活化的取代的羟基(例如，–OC(＝O)SRaa、–OC(＝O)Raa、–OCO2Raa、–OC(＝O)N(Rbb)2、–OC(＝NRbb)Raa、–OC(＝NRbb)ORaa、–OC(＝NRbb)N(Rbb)2、–OS(＝O)Raa、–OSO2Raa、–OP(Rcc)2、–OP(Rcc)3、–OP(＝O)2Raa、–OP(＝O)(Raa)2、–OP(＝O)(ORcc)2、–OP(＝O)2N(Rbb)2和–OP(＝O)(NRbb)2，其中Raa、Rbb和Rcc如本文所定义)。在一些情况下，所述离去基团是磺酸酯，例如甲苯磺酸酯 (–OTs)、甲磺酸酯(–OMs)、对溴苯磺酰基氧基(–OBs)、–OS(＝O)2(CF2)3CF3(全氟丁基磺酸基，–ONf)、或三氟甲磺酸酯(–OTf)。在一些情况下，所述离去基团是对溴苯磺酸酯例如对溴苯磺酰基氧基。在一些情况下，所述离去基团是间硝基苯磺酸酯，例如2-硝基苯磺酰基氧基。在一些实施方案中，所述离去基团是含磺酸酯的基团。在一些实施方案中，所述离去基团是甲苯磺酸酯基团。所述离去基团也可为氧化膦(例如，在Mitsunobu反应中形成)或内部离去基团例如环氧化物或环硫酸酯。离去基团的其他非限制性实例是水、氨、醇、醚部分、硫醚部分、卤化锌、镁部分、重氮盐和铜部分。
“烃链”是指取代或未取代的二价烷基、烯基或炔基。烃链包括(1)一个或多个直接在烃链的两个基团之间的碳原子链；(2)任选在碳原子链上的一个或多个氢原子；和(3)任选在碳原子链上的一个或多个取代基(“非链取代基”，其不为氢)。碳原子链由连续连接的碳原子(“链原子”)组成且不包括氢原子或杂原子。然而，烃链的非链取代基可包含任何原子，包括氢原子、碳原子和杂原子。例如，烃链–CAH(CBH2CCH3)–包含一个链原子CA、一个在 CA上的氢原子和非链取代基–(CBH2CCH3)。术语“Cx烃链”，其中x为正整数，是指在烃链的两个基团之间包含x个链原子的烃链。如果x有多于一种可能的值，x可能的最小值用于烃链的定义。例如，–CH(C2H5)–为C1烃链，而为C3烃链。当使用一个范围的值时，该范围的含义如本文所述。例如，C3-10烃链是指直接连接在烃链的两个基团之间的碳原子的最短链的链原子个数为3、4、5、6、7、8、9或10的烃链。烃链可为饱和的(例如，–(CH2)4–)。烃链也可为不饱和的且在烃链的任何位置包含一个或多个C＝C和/或C≡C 键。例如，–CH＝CH–(CH2)2–、–CH2–C≡C–CH2–和–C≡C–CH＝CH–都为未取代和不饱和烃链的实例。在某些实施方案中，所述烃链为未取代的(例如，–C≡C–或–(CH2)4–)。在某些实施方案中，所述烃链为取代的(例如，–CH(C2H5)–和–CF2–)。烃链上任何两个取代基可连接以形成任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基，或任选取代的杂芳环。例如，
都为烃链的实例。相反，在某些实施方案中，/>不在本文所述的烃链的范围内。当Cx烃链的链原子被杂原子替代时，所得基团被称为其中链原子被杂原子替代的Cx烃链，这与Cx-1烃链形成对比。例如，/>为C3烃链，其中一个链原子被氧原子替代。
术语“药学上可接受的盐”是指那些盐，其在合理的医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触而没有过分毒性、刺激性、过敏反应等且与合理的利益/风险比相称。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中详细描述的药学上可接受的盐，将其引入本文作为参考。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自适当的无机和有机酸和无机和有机碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐或使用本领域已知的其他方法(例如离子交换)形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。衍生自适当的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4 -盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。其他药学上可接受的盐当合适时包括使用抗衡离子形成的无毒铵、季铵和胺阳离子的盐，所述抗衡离子例如卤化物、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根。
术语“溶剂化物”是指通常由溶剂分解反应形成的与溶剂缔合的化合物或其盐的形式。这种物理缔合可包括氢键键合。常规溶剂包括水、甲醇、乙醇、乙酸、DMSO、THF、乙醚等。本文所述的化合物可制备成，例如，结晶形式，且可被溶剂化。合适的溶剂化物包括药学上可接受的溶剂化物且进一步包括化学计量的溶剂化物和非化学计量的溶剂化物。在一些情况下，所述溶剂化物将能够分离，例如，当一或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”包括溶液状态的溶剂化物和可分离的溶剂化物。代表性的溶剂化物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。
术语“水合物”是指与水缔合的化合物。通常，包含在化合物的水合物中的水分子数与该水合物中该化合物分子数的比率是确定的。因此，化合物的水合物可用例如通式R·x H2O代表，其中R是该化合物，且x是大于0的数。给定化合物可形成超过一种水合物类型，包括，例如，单水合物(x为1)、低级水合物(x是大于0且小于1的数，例如，半水合物(R·0.5H2O))和多水合物 (x为大于1的数，例如，二水合物(R·2H2O)和六水合物(R·6H2O)。
术语“互变异构体”或“互变异构的”是指由至少一个氢原子的正式迁移和至少一种化合价变化(例如，单键到双键，叁键到单键，或反之亦然)引起的两种或多种可互相转化的化合物。互变异构体的确切比率取决于多种因素，包括温度、溶剂和pH。互变异构作用(即，提供互变异构对的反应)可用酸或碱催化。示例性的互变异构作用包括酮-烯醇、酰胺-酰亚胺、内酰胺- 内酰亚胺、烯胺-亚胺和烯胺-(不同烯胺)的互变异构作用。
还应理解，具有相同分子式但性质或它们的原子的键合顺序或它们的原子的空间排列不同的化合物被称为“异构体”。它们的原子的空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。
彼此间不是镜像关系的立体异构体被称为“非对映异构体”，而彼此间是非重叠镜像关系的那些被称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心时，例如，当它与四个不同的基团键合时，可能有一对对映异构体。对映异构体可通过其不对称中心的绝对构型表征且可用Cahn和Prelog的R-和S-次序规则进行描述，或通过以下方式进行描述，其中该分子在偏振光平面旋转并指定为右旋或左旋(即，分别为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以单一对映异构体或其混合物存在。含有等比例对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。
术语“多晶型物”是指化合物(或其盐、水合物或溶剂化物)的结晶形式。所有的多晶型物具有相同的元素组成。不同的结晶形式通常具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光电性质、稳定性和溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度和其他因素可导致一种结晶形式占优。化合物的各种多晶型物可在不同的条件下通过结晶制备。
术语“前药”是指化合物，其具有可断裂基团且通过溶剂分解或在生理条件下成为本文所述化合物，其在体内是药学上活性的。这种实例包括但不限于：胆碱酯衍生物等、N-烷基吗啉酯等。本发明化合物的其他衍生物在其酸或酸衍生物形式下均具有活性，但在酸敏感形式下通常在溶解度、组织相容性或哺乳动物生物体延迟释放方面提供优势(参见，Bundgard，H.，Design of Prodrugs，第7-9，21-24页，Elsevier，Amsterdam 1985)。前药包括本领域从业者熟知的酸衍生物，例如，通过母体酸与合适的醇的反应制备的酯，或通过母体酸化合物与取代或未取代的胺的反应制备的酰胺，或酸酐，或混合酸酐类。衍生自本发明化合物上的酸性基团的简单的脂肪族或芳族酯、酰胺和酸酐是具体的前药。在一些情况下，需要制备双酯型前药，例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。本文所述化合物的C1-C8烷基酯、C2-C8烯基酯、C2-C8炔基酯、芳基酯、C7-C12取代的芳基酯和C7-C12芳基烷基酯可为优选的。
术语“小分子”指的是具有相对低的分子量的分子，无论其是天然存在的还是人工生成的(例如，通过化学合成)。通常，小分子是有机化合物(即，它含有碳)。所述小分子可含有多个碳-碳键、立体中心和其他官能团(例如，胺、羟基、羰基和杂环等)。在一些实施方案中，小分子的分子量不多于约1,000 g/mol、不多于约900g/mol、不多于约800g/mol、不多于约700g/mol、不多于约600g/mol、不多于约500g/mol、不多于约400g/mol、不多于约300 g/mol、不多于约200g/mol或不多于约100g/mol。在一些实施方案中，小分子的分子量至少约100g/mol、至少约200g/mol、至少约300g/mol、至少约 400g/mol、至少约500g/mol、至少约600g/mol、至少约700g/mol、至少约800g/mol或至少约900g/mol或至少约1,000g/mol。上述范围的组合(例如，至少约200g/mol和不多于约500g/mol)也是可能的。在一些实施方案中，所述小分子是治疗活性剂，例如药物(例如，由美国食品与药物管理局批准，提供在美国联邦法规汇编(C.F.R.)中的分子)。所述小分子也可与一或多个金属原子和/或金属离子络合。在本申请中，所述小分子也被称作“小的有机金属分子”。优选的小分子是生物活性的，其在动物，优选哺乳动物，更优选人中产生生物效应。小分子包括但不限于放射性核素和显像剂。在一些实施方案中，所述小分子是药物。优选地，但不是必须的，该药物是已被合适的政府机构或监管机构认定为安全且有效地用于人或动物的药物。例如，批准用于人的药物由FDA在21C.F.R.§§330.5，331至361和440至460中列出，将其并入本文作为参考；兽医用途的药物由FDA在21C.F.R.§§500至589 中列出，将其并入本文作为参考。所有列出的药物被认为是可以接受地用于本发明。
术语“小分子药物”是指已被政府部门(例如，FDA)批准用于给予受试者 (例如，人或非人动物)的小分子或所述小分子的基团。
术语“小分子标签”是指能够被检测的小分子或这种小分子的基团。示例性小分子标签包括但不限于生物素、放射性同位素、酶、发光剂、沉淀剂、荧光团和染料。
术语“小分子荧光团”是指发荧光的小分子，例如能够在光激发时重新发光。示例性小分子荧光团包括但不限于荧光素、罗丹明、香豆素、花青及它们的衍生物。
“蛋白”、“肽”或“多肽”包括通过肽键连接在一起的氨基酸残基的聚合物。该术语是指任何大小、结构或功能的蛋白、多肽和肽。通常，蛋白将至少为3个氨基酸长度。蛋白可以是指单独的蛋白或蛋白的集合。本发明所述的蛋白优选仅含有天然氨基酸，但也可替代地采用非天然氨基酸(即，天然不存在但可掺入多肽链中的化合物)和/或本领域已知的氨基酸类似物。此外，蛋白中的一个或多个氨基酸可被修饰，例如，通过加入化学实体，例如碳水化合物基团、羟基、磷酸基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、用于缀合或官能化的连接基，或其他修饰。蛋白也可为单分子或可为多分子复合物。蛋白可为天然存在蛋白或肽的片段。蛋白可为天然存在的、重组的、合成的或这些的任意组合。
术语“多核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”、“核酸分子”、“核酸序列”和“寡核苷酸”是指DNA和RNA中的一系列核苷酸碱基(也被称作“核苷酸”)，并且是指两个或更多个核苷酸的任意链。多核苷酸可以是单链或双链的嵌合混合物或其衍生物或其经修饰形式。寡核苷酸可以在碱基部分，糖部分或磷酸骨架上进行修饰以例如提高分子的稳定性、其杂交参数等。所述反义寡核苷酸可以包含经修饰的碱基部分，其选自以下组，该组包括但不限于：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基Q核苷 (β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、 5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5’-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、 5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、wybutoxosine、假尿嘧啶、 Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲基酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、硫鸟嘌呤和2,6-二氨基嘌呤。核苷酸序列通常携带遗传信息，包括通过细胞机制制备蛋白质和酶所用的信息。这些术语包括双链或单链基因组和cDNA、RNA、任何合成和遗传操纵的多核苷酸，以及正义和反义多核苷酸。这包括单链和双链分子，即DNA-DNA， DNA-RNA和RNA-RNA杂交体，以及通过将碱结合到氨基酸主链而形成的“蛋白质核酸”(PNA)。这也包括含有碳水化合物或脂质的核酸。示例性DNA 包括单链DNA(ssDNA)、双链DNA(dsDNA)、质粒DNA(pDNA)、基因组 DNA(gDNA)、互补DNA(cDNA)、反义DNA、叶绿体DNA(ctDNA或 cpDNA)、微卫星DNA、线粒体DNA(mtDNA或mDNA)、动基体DNA (kDNA)、前病毒、溶素原、重复DNA、卫星DNA和病毒DNA。示例性RNA 包括单链RNA(ssRNA)、双链RNA(dsRNA)、小干扰RNA(siRNA)、信使 RNA(mRNA)、前体信使RNA(pre-mRNA)、小发夹RNA或短发夹 RNA(shRNA)、微RNA(miRNA)、导向RNA(gRNA)、转移RNA(tRNA)、反义RNA(asRNA)、异源核RNA(hnRNA)、编码RNA、非编码RNA(ncRNA)、长非编码RNA(长ncRNA或lncRNA)、卫星RNA、病毒卫星RNA、信号识别颗粒RNA、小细胞质RNA、小核RNA(snRNA)、核糖体RNA(rRNA)、Piwi 相互作用RNA(piRNA)、聚肌苷酸、核酶、flexizyme、小核仁RNA(snoRNA)、剪接前导RNA、病毒RNA和病毒卫星RNA。
本文描述的多核苷酸可以通过本领域已知的标准方法合成，例如通过使用自动化DNA合成仪(例如可从Biosearch，Applied Biosystems等商购获得的那些)合成。作为实例，硫代磷酸酯寡核苷酸可通过Stein等人,Nucl.Acids Res.,16,3209,(1988)的方法来制备,甲基磷酸酯寡核苷酸可通过使用可控孔隙玻璃聚合物载体来制备(Sarin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85,7448-7451,(1988))。已经开发了许多用于将反义DNA或RNA递送到细胞的方法，例如，可将反义分子直接注入组织位点或被设计用于靶向所需的细胞的经修饰的反义分子(反义连接到肽或抗体，该肽或抗体特异性结合靶细胞表面上表达的受体或抗原)可以被全身施用。或者，RNA分子可以通过体外和体内转录编码反义RNA分子的DNA序列产生。这样的DNA序列可以并入到多种载体中，其结合合适的RNA聚合酶启动子如T7或SP6聚合酶启动子。或者，可以将根据所使用的启动子组成性地或诱导性地合成反义RNA 的反义cDNA构建体稳定地引入到细胞系中。然而，通常难以实现所述反义的足以抑制内源mRNA的翻译的细胞内浓度。因此，优选的方法利用重组 DNA构建体，其中反义寡核苷酸被置于强启动子的控制下。使用这样的构建体转染患者中的靶细胞将导致足够量的单链RNA的转录，其将与内源靶基因转录物形成互补碱基对，从而防止靶基因mRNA的翻译。例如，可以在体内引入载体，使其被细胞吸收并指导反义RNA的转录。只要可以被转录以产生所需的反义RNA，这样的载体可以保持游离或变成染色体整合的。这样的载体可以通过本领域标准的重组DNA技术方法构建。载体可以是质粒，病毒或本领域已知的其它载体，用于在哺乳动物细胞中复制和表达。编码反义RNA的序列的表达可以由本领域已知的任何启动子在哺乳动物，优选在人的细胞中起作用。这样的启动子可以是可诱导的或组成型的。可以使用任何类型的质粒、粘粒、酵母人造染色体或病毒载体来制备可以被直接引入到组织位点中的重组DNA构建体。
所述多核苷酸可以侧接天然调节性(表达控制)序列，或者可以与异源序列缔合，所述异源序列包括启动子，内部核糖体进入位点(IRES)和其他核糖体结合位点序列，增强子，应答元件，抑制基因，信号序列，多聚腺苷酸化序列，内含子，5'-和3'-非编码区等。核酸也可以通过本领域已知的许多方法进行修饰。这样的修饰的非限制性实例包括甲基化，“帽”，用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，以及核苷酸间修饰，例如具有不带电连接基的那些修饰(例如，膦酸甲基酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和具有带电连接基的那些修饰(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)。多核苷酸可以含有一个或多个另外的共价连接的部分，例如蛋白(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)，嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)，螯合剂 (例如金属、放射性金属、铁、氧化金属等)和烷化剂。多核苷酸可以通过形成甲基或乙基磷酸三酯或氨基磷酸烷基酯键得以衍生化。此外，本文中的多核苷酸也可以用能够直接或间接提供可检测信号的标签进行修饰。示例性标签包括放射性同位素，荧光分子，同位素(例如，放射性同位素)，生物素等。
术语“抑制”或“抑制剂”是指相对于媒介物，化合物降低、减缓、停止或阻止细胞中具体生物过程的活性(例如，溴结构域和/或含溴结构域的蛋白的活性)的能力。
当化合物、药物组合物、方法、用途或试剂盒被称为“选择性地”、“特异性地”或“竞争性地”抑制HMT时，所述化合物、药物组合物、方法、用途或试剂盒以比抑制不同的HMT更高的程度(例如，不小于2倍、不小于5倍、不小于10倍、不小于30倍、不小于100倍、不小于1,000倍或不小于10,000 倍；和/或不大于2倍，不大于5倍，不大于10倍，不大于30倍，不大于 100倍，不大于1,000倍或不大于10,000倍)抑制所述HMT。
术语“异常活性”是指偏离正常活性的活性。在一些实施方案中，所述异常活性为增加的活性。在一些实施方案中，所述异常活性为减少的活性。术语“增加的活性”是指比正常活性高的活性。术语“减少的活性”是指比正常活性低的活性。
术语“组合物”和“制剂”可互换使用。
预期实施给药的“受试者”是指人(即，任何年龄组的男性或女性，例如，儿科受试者(例如，婴儿、儿童或青少年)或成人受试者(例如，年轻成人、中年成人或老年成人))或非人动物。在一些实施方案中，所述非人动物是哺乳动物(例如，灵长类(例如，食蟹猴、恒河猴)、市售相关的哺乳动物(例如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫或狗)或鸟(例如，市售相关的禽类，例如鸡、鸭、鹅或火鸡)。在一些实施方案中，所述非人动物是鱼、爬行动物或两栖动物。该非人动物可为任意发育阶段的雄性或雌性。该非人动物可为转基因动物或基因工程动物。“患者”是指需要疾病治疗的人受试者。所述受试者也可为植物。在一些实施方案中，所述植物为陆生植物。在一些实施方案中，所述植物为非维管陆生植物。在一些实施方案中，所述植物为维管陆生植物。在一些实施方案中，所述植物为种子植物。在一些实施方案中，所述植物为栽培植物。在一些实施方案中，所述植物为双子叶植物。在一些实施方案中，所述植物为单子叶植物。在一些实施方案中，所述植物为有花植物。在一些实施方案中，所述植物为谷类植物，例如，玉蜀黍(maize)、玉米(corn)、小麦、稻、燕麦、大麦、黑麦或粟。在一些实施方案中，所述植物是豆科植物，例如，豆植物，例如，大豆植物。在一些实施方案中，所述植物是树或灌木。
术语“生物样品”是指任何样品，包括组织样品(例如组织切片和组织的针刺活检)；细胞样品(例如，细胞学涂片(如Pap或血液涂片)或通过显微切割获得的细胞样品)；全生物样品(如酵母或细菌样品)；或细胞级分、片段或细胞器(例如通过裂解细胞获得并通过离心或其他方式分离其组分)。生物样品的其他实例包括血液、血清、尿液、精液、粪便、脑脊液、间质液、粘液、泪液、汗液、脓液、活检组织(例如通过外科活检或针刺活检获得)、乳头抽吸物、乳汁、阴道液、唾液、拭子(例如颊拭子)或含有衍生自第一生物样品的生物分子的任何材料。
术语“施用”、“给予”或“给药”是指植入、吸收、摄入、注射、吸入、或以其他的方式向受试者引入本申请所述的化合物，或其组合物。
术语“治疗”和“处理”是指逆转、减轻、延迟发作或抑制本文所述疾病的进展。在一些实施方案中，治疗可在该疾病已出现或已观察到一或多种迹象或症状后施用。在其他实施方案中，治疗可在没有该疾病的迹象或症状的情况下施用。例如，治疗可在症状发作前施用至易感受试者(例如，根据症状史和/或根据对病原体的暴露)。治疗也可在症状消失后继续，例如，以延迟和/或预防复发。
术语“预防”是指针对不曾患有疾病但具有发展成该疾病的风险或曾患有不是该疾病的疾病但处于该疾病复发风险中的受试者的预防性治疗。在一些实施方案中，所述患者比人群中的一般健康成员有更高的该疾病的发病风险或该疾病的复发风险。
术语“病症”、“疾病”和“障碍”可互换使用。
本文所述化合物的“有效量”是指足以引起所需生物学响应的量。本文所述化合物的有效量可根据以下因素而变化：预期生物学终点、化合物的药代动力学、所治疗的病症、给药方式和受试者的年龄和健康状况。在一些实施方案中，有效量是治疗有效量。在一些实施方案中，有效量是预防性治疗。在一些实施方案中，有效量是在单次剂量中的本发明化合物的量。在一些实施方案中，有效量是在多剂量中的本发明化合物的组合量。
本文所述化合物的“治疗有效量”是足以提供在治疗病症中的治疗益处或延迟或最小化与该病症有关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量是指单独或与其他疗法组合来提供治疗该病症的治疗益处的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可包括改善整个治疗、减轻或消除该病症的症状、迹象或病因和/或提高另一治疗剂的疗效的量。
本文所述化合物的“预防有效量”是有效预防病症或与该病症相关的一种或多种症状，或预防其复发的量。化合物的预防有效量是指单独或与其他药物组合来提供在预防该病症中预防性益处的治疗剂的量。术语“预防有效量”可包括提高整体预防或提高另一预防剂的预防效果的量。
术语“组蛋白”是指在真核细胞核中发现的高碱性蛋白，其将DNA包装并安排其进入被称为核小体的结构单元中。它们是染色质的主要蛋白组分，作为DNA缠绕的线轴，并在基因调控中发挥作用。在一些实施方案中，所述组蛋白为组蛋白H1(例如，组蛋白H1F、组蛋白H1H1)。在一些实施方案中，所述组蛋白为组蛋白H2A(例如，组蛋白H2AF、组蛋白H2A1、组蛋白H2A2)。在一些实施方案中，所述组蛋白为组蛋白H2B(例如，组蛋白 H2BF、组蛋白H2B1、组蛋白H2B2)。在一些实施方案中，所述组蛋白为组蛋白H3(例如，组蛋白H3A1、组蛋白H3A2、组蛋白H3A3)。在一些实施方案中，所述组蛋白为组蛋白H4(例如，组蛋白H41、组蛋白H44)。
“组蛋白甲基转移酶”或“HMT”为组蛋白修饰酶，其催化一个、两个或三个甲基转移到组蛋白的赖氨酸和/或精氨酸残基中。HMT通过甲基化在特定位点修饰组蛋白。组蛋白的甲基化具有生物学意义，因为这样的甲基化是决定基因表达、基因组稳定性、干细胞成熟、细胞谱系发育、遗传印迹、 DNA甲基化和/或细胞有丝分裂的染色质的主要表观遗传修饰。在一些实施方案中，本文描述的HMT为组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶。在一些实施方案中，本文描述的HMT为组蛋白-精氨酸N-甲基转移酶。在一些实施方案中，本文描述的HMT为EZH1。在一些实施方案中，本文描述的HMT为 EZH2。在一些实施方案中，本文描述的HMT为DOT1。在一些实施方案中，本文描述的HMT为G9a、GLP、MLL1、MLL2、MLL3、MLL4、NSD2、 PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT5、PRMT6、SET1b、SET7/9、SET8、SETMAR、 SMYD2、SUV39H1或SUV39H2。
术语“zeste增强子同源物1”、“zeste增强子2多梳蛋白抑制复合体1 亚单元”、“EZH1”、“EZH1酶”、“组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH1”指的是由EZH1基因编码的酶。人EZH1基因的ENSEMBL：ENSG00000108799。
术语“zeste增强子同源物2”、“zeste增强子2多梳蛋白抑制复合体2 亚单元”、“EZH2”、“EZH2酶”、“组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2”指的是由EZH2基因编码的酶。EZH2是多梳蛋白组(PcG)蛋白复合家族的核心催化组分。EZH2是组蛋白甲基转移酶，其在组蛋白H3赖氨酸27中催化二和三甲基化(H3K27me2/3)，从而使基因表达沉默。EZH2的催化位点存在于 SET结构域内，这是在几种染色质相关蛋白中发现的高度保守的序列基序。 EZH2在正常发育中起关键作用，EZH2缺陷型小鼠由于植入和原肠胚形成失败而在胚胎早期死亡。已知EZH2与胚胎外胚层发育蛋白、VAV1癌蛋白和X连锁核蛋白(XNP)相关联。EZH2也可能在造血和中枢神经系统中起作用。人类EZH2基因的ENSEMBL：ENSG00000106462。
术语“遗传疾病”是指由受试者的基因组中的一个或多个异常引起的疾病，例如从受试者出生时就存在的疾病。遗传疾病可能是遗传性的，可能会从父母的基因中传播下来。遗传性疾病也可能由受试者的DNA和/或RNA 的突变或变化引起。在这种情况下，如果遗传疾病发生在种系中，遗传性疾病将是可遗传的。示例性遗传疾病包括但不限于：阿-斯二氏综合征、阿瑟综合征、软骨发育不全、肢端发育不全、成瘾、脑白质肾上腺萎缩症、白化病、无睑-巨口综合征、阿拉日耶综合征、尿黑酸尿、α-1抗胰蛋白酶缺陷、奥尔波特综合征、阿耳茨海默氏病、哮喘、自身免疫性多腺体综合征、雄激素不敏感综合征、安格尔曼综合征、共济失调、共济失调性毛细血管扩张症、动脉粥样硬化、注意缺陷障碍伴多动(ADHD)、自闭症、秃顶、巴藤病(batten disease)、贝-威二氏综合征、贝斯特病、双相性精神障碍、短指畸形)、乳腺癌、伯基特淋巴瘤、慢性髓细胞样白血病、夏-马-图三氏病、克罗恩氏病、唇裂、科凯恩综合征、科-洛综合征、结肠癌、先天性肾上腺增生症、德朗热综合征、Costello综合征、考登综合征、颅额鼻发育异常、克-纳二氏综合征、克雅病、囊性纤维化、耳聋、抑郁(dexpression)、糖尿病、骨畸形性发育不良、迪格奥尔格综合征、唐氏综合征、阅读障碍，杜氏肌营养不良症，多博维茨综合征，外胚层发育不良、埃-范二氏综合征，埃-当综合征，大疱性表皮松解症，癫痫、特发性震颤、家族性高胆固醇血症、家族性地中海热、脆性X综合征、弗里德赖希氏共济失调症、戈谢病、青光眼、葡萄糖半乳糖吸收不良、戊二酸尿、脑回状萎缩、戈-施综合征(软腭-心-面综合征)、戈兰综合征、黑-黑病、偏侧肥大、血色素沉着病、血友病、遗传性运动与感觉神经病(HMSN)、遗传性非息肉病性结直肠癌症(HNPCC)、亨延顿氏舞蹈病、免疫缺陷伴高-IgM、青少年型糖尿病、克莱恩费尔特氏综合征、歌舞伎综合征、利氏病、长QT综合征、恶性黑色素瘤、躁狂型抑郁、马凡综合征、门克斯综合征、流产、粘多糖病、多发性内分泌腺瘤、多发性硬化、肌营养不良、肌侧索硬化、肌强直性营养不良、神经纤维瘤病、尼-皮二氏病、努南综合征、肥胖、卵巢癌、胰腺癌、帕金森氏病、阵发性夜间血红蛋白尿、彭德莱综合征、腓肌萎缩、苯丙酮尿症(PKU)、多囊性肾病、帕-魏二氏综合征、原发性胆汁性肝硬变、前列腺癌、REAR综合征、雷夫叙姆病、视网膜色素变性、视网膜母细胞瘤、雷特氏综合征、圣菲利波综合征、精神分裂症、重度联合免疫缺陷症、镰状细胞性贫血、脊柱裂、脊髓性肌萎缩、脊髓小脑萎缩、成人猝死综合症、丹吉尔病、泰-萨克斯病、血小板减少、桡骨缺失综合征、汤-布综合征、结节性硬化症、特纳综合征、乌谢尔综合征、(冯)希- 林二氏综合征、瓦尔敦堡综合征、韦弗综合征、沃纳综合征、威廉斯综合征、威尔逊病、着色性干皮病和泽韦格综合征。
“增殖性疾病”是指由于细胞增生造成的异常生长或扩张而造成的疾病 (Walker，Cambridge Dictionary of Biology；Cambridge University Press： Cambridge，UK，1990)。增殖性疾病可与以下有关：1)正常静止期细胞的病理增生；2)细胞从它们的正常位置的病理迁移(例如，肿瘤细胞的转移)； 3)蛋白水解酶(例如基质金属蛋白酶(例如，胶原酶、明胶酶和弹性蛋白酶)) 的病理表达；或4)在增殖性视网膜病和肿瘤转移中的病理性血管发生。示例性的增殖性疾病包括癌症(即，“恶性肿瘤”)、良性肿瘤、病理性血管发生、炎性疾病和自身免疫性疾病。
术语“血管发生(angiogenesis)”是指从早已存在的血管形成新的血管的生理过程。血管发生不同于血管新生(vasculogenesis)，其是从中胚层细胞前体从头形成内皮细胞。在通过血管新生形成发育胚胎的第一血管之后，血管发生在正常或异常发育过程中主要负责绝大多数的血管生长。血管发生在生长和发育，以及伤口愈合和肉芽组织的形成中是重要过程。但是，血管发生也是肿瘤从良性状态转变到恶性状态的基础步骤，从而导致在治疗癌症过程中使用血管发生抑制剂。血管发生可通过血管发生蛋白(例如生长因子(例如， VEGF))进行化学刺激。“病理性的血管发生”是指异常的(例如，过度或不足的)血管发生，其发展成疾病和/或与疾病有关。
术语“新生物(neoplasm)”和“肿瘤(tumor)”可互换使用并指的是组织的异常肿块，其中该肿块的生长超过正常组织的生长且与正常组织的生长不协调。新生物或肿瘤可为“良性的”或“恶性的”，其取决于以下特征：细胞分化程度(包括形态和功能)、生长速度、局部侵害和转移。“良性肿瘤”通常是充分分化的、比恶性肿瘤具有显著更慢的生长、并仍局限于起源位置。此外，良性肿瘤不具有渗透、侵入或转移到远距离位置的能力。示例性的良性肿瘤包括但不限于：脂肪瘤、软骨瘤、腺瘤、软垂疣、老年性血管瘤、脂溢性角化病、雀斑痣和皮脂腺增生。在一些情况下，一些“良性”肿瘤可能在以后引起恶性肿瘤，其可能是由于该肿瘤的肿瘤细胞亚群额外的基因变化所导致的，且这些肿瘤被称为“癌前肿瘤(pre-malignant neoplasm)”。示例性的癌前肿瘤是畸胎瘤。相反，“恶性肿瘤”通常为低分化的(间变(anaplasia))并具有显著地快速生长，伴有进行性渗透、侵入和破坏周围组织。此外，恶性肿瘤通常具有转移到远距离位置的能力。术语“转移”、“转移的”或“迁移”是指癌细胞从原发性或原始肿瘤扩散或转移至另一器官或组织且其通常通过以下进行确定：在继发性(转移性)肿瘤所在的器官或组织中，存在原发性或原始肿瘤的组织类型并且不是所在器官或组织的组织类型的“继发性肿瘤”或“继发性细胞肿块”。例如，已经转移到骨的前列腺癌被称为转移性前列腺癌并包括在骨组织中生长的癌性前列腺癌细胞。
术语“癌症”是指以异常细胞的发育为特征的一类疾病，所述异常细胞不受控增殖并具有浸润并破坏正常体组织的能力。参见，例如，Stedman’s Medical Dictionary,25thed.；Hensyl ed.；Williams&Wilkins：Philadelphia, 1990。示例性癌症包括但不限于血液性恶性肿瘤。其他示例性癌症包括但不限于：肺癌(例如，支气管癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺的腺癌)；肾癌(例如，肾胚细胞瘤、也被称作维尔姆斯瘤、肾细胞癌)；听神经瘤；腺癌；肾上腺癌；肛门癌；血管肉瘤(angiosarcoma)(例如，淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管肉瘤(hemangiosarcoma))；附件癌；良性单克隆性丙种球蛋白病；胆癌(例如，胆管癌)；膀胱癌；腺癌(例如，乳房的腺癌、乳房的乳头状癌、乳腺癌(mammary cancer)、乳房的髓样癌)；脑癌(例如，脑脊膜瘤、成胶质细胞瘤、胶质瘤(例如，星形细胞瘤、少突神经胶质瘤)、成神经管细胞瘤)；支气管癌；类癌瘤；宫颈癌(例如，宫颈腺癌)；绒毛膜癌；脊索瘤；颅咽管瘤；结肠直肠癌症(例如，结肠癌、直肠癌、结肠直肠腺癌)；结缔组织癌症；上皮癌；室管膜瘤；内皮肉瘤(例如，卡波西肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)；子宫内膜癌(例如，子宫癌、子宫肉瘤)；食管癌(例如，食管的腺癌、巴雷特腺癌)；尤因肉瘤；眼癌症(例如，眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)；家族性嗜伊红细胞增多症(familiar hypereosinophilia)；胆囊癌；胃癌(例如，胃腺癌)；胃肠道间质瘤(GIST)；生殖细胞癌；头和颈癌(例如，头和颈鳞状细胞癌、口腔症(例如，口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例如，喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌))；重链病(例如，α链病、γ链病、μ链病；成血管细胞瘤；喉咽癌；炎性肌纤维母细胞肿瘤；免疫细胞淀粉样变性；肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝细胞瘤)；平滑肌肉瘤(LMS)；肥大细胞增多症(例如，系统性肥大细胞增多症)；肌癌；骨髓增生异常综合征(MDS)；间皮瘤；骨髓增生性障碍(MPD)(例如，真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原因不明性髓样化生(AMM)，也称为骨髓纤维化(MF)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、嗜酸细胞增多综合征(HES))；神经母细胞瘤；神经纤维瘤(例如，神经纤维瘤病(NF)1型或2型、施万瘤病 (schwannomatosis))；神经内分泌肿瘤(例如，胃肠胰神经内分泌肿瘤 (GEP-NET)、类癌瘤)；骨肉瘤(例如，骨癌)；卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)；乳头状腺癌；胰腺癌(例如，胰腺腺癌(pancreaticandenocarcinoma)、导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)、胰岛细胞癌)；阴茎癌 (例如，阴茎和阴囊的佩吉特病)；松果体瘤；原始性神经外胚层肿瘤(PNT)；浆细胞瘤；副肿瘤综合征(paraneoplastic syndromes)；上皮内肿瘤；前列腺癌 (例如，前列腺腺癌)；直肠癌；横纹肌肉瘤；涎腺癌；皮肤癌(例如，鳞状细胞癌(SCC)、角化棘皮瘤(KA)、黑色素瘤、基底细胞癌(BCC))；小肠癌(例如，阑尾癌)；软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)；皮脂腺癌；小肠癌；汗腺癌；滑膜瘤；睾丸癌(例如，精原细胞瘤、睾丸胚胎性癌)；甲状腺癌(例如，甲状腺的乳头状癌、乳头状甲状腺癌(PTC)、髓样甲状腺癌)；尿道癌；阴道癌；和外阴癌(例如，外阴的佩吉特病)。
“血液疾病”包括影响造血细胞或组织的疾病。血液疾病包括与异常血液内含物和/或功能相关的疾病。示例性血液疾病包括骨髓照射或化学疗法治疗癌症导致的那些疾病，诸如以下疾病：恶性贫血，出血性贫血，溶血性贫血，再生障碍性贫血，镰状细胞性贫血，铁粒幼细胞贫血，与慢性感染如疟疾，锥虫病，HTV，肝炎病毒或其他病毒有关的贫血，由骨髓缺陷引起的骨髓性贫血，贫血引起的肾衰竭，贫血，红细胞增多症，感染性单核细胞增多症 (EVI)，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)，急性骨髓性白血病(AML)，急性早幼粒细胞性白血病(APL)，急性骨髓单核细胞性白血病(AMMoL)，真性红细胞增多症，淋巴瘤，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，慢性淋巴细胞性白血病，威尔姆斯肿瘤，尤因氏肉瘤，视网膜母细胞瘤，血友病，与血栓形成风险增加相关的疾病，疱疹，地中海贫血，抗体介导的疾病如输血反应和成红细胞增多症，红细胞的机械创伤例如微血管性溶血性贫血，血栓性血小板减少性紫癜和弥漫性血管内凝血、由例如疟原虫的寄生虫导致的感染，由例如铅中毒引起的化学损伤，和脾功能亢进。在一些实施方案中，血液疾病是血液恶性肿瘤。术语“血液恶性肿瘤”是指影响血液，骨髓和/或淋巴结的肿瘤。示例性血液恶性肿瘤包括但不限于白血病，例如急性淋巴细胞性白血病 (ALL)(例如，B-细胞ALL，T-细胞ALL)，急性骨髓性白血病(AML)(例如， B-细胞AML，T-细胞AML)，慢性骨髓性白血病(CML)(例如，B-细胞CML， T-细胞CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(例如，B-细胞CLL，T-细胞 CLL))；淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(HL)(例如，B-细胞HL，T-细胞HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如，B-细胞NHL，例如弥漫性大细胞淋巴瘤 (DLCL)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL，例如，活化的B细胞 (ABC)DLBCL(ABC-DLBCL)))，滤泡淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)，缘区B细胞淋巴瘤(例如，粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤，结节缘区B-细胞淋巴瘤，脾缘区B-细胞淋巴瘤)，原发性纵隔B-细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM，淋巴浆细胞性淋巴瘤)，毛细胞白血病(HCL)，免疫细胞大细胞淋巴瘤，前体B淋巴细胞性淋巴瘤，中枢神经系统(CNS)淋巴瘤(例如原发性 CNS淋巴瘤和继发性CNS淋巴瘤)；和T-细胞NHL，如前体T-成淋巴细胞性淋巴瘤/白血病，外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，皮肤T细胞淋巴瘤 (CTCL)(例如，蕈样真菌病，塞扎里综合征)，血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤，结节外自然杀伤T细胞淋巴瘤，肠病型T-细胞淋巴瘤，皮下扁桃体炎样 T-细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤)；免疫特异位点淋巴瘤(例如，脑淋巴瘤，眼淋巴瘤，胎盘淋巴瘤，胎儿淋巴瘤，睾丸淋巴瘤)；如上所述的一种或多种白血病/淋巴瘤的混合物；骨髓增生异常；和多发性骨髓瘤(MM)。
术语“炎性疾病”是指由炎症导致、引起或造成炎症的疾病。术语“炎性疾病”也可指失调的炎症反应，其导致由巨噬细胞、粒细胞和/或T-淋巴细胞引起的夸大反应，造成异常组织损伤和/或细胞死亡。炎性疾病可为急性或慢性炎性病症且可由感染或非感染性原因导致。炎性疾病包括但不限于：动脉粥样硬化、动脉硬化、自身免疫障碍、多发性硬化、系统性红斑狼疮、风湿性多肌痛(PMR)、痛风性关节炎、退行性关节炎、肌腱炎、滑囊炎、银屑病、囊性纤维化、骨关节炎、类风湿性关节炎、炎性关节炎、干燥综合征、巨细胞动脉炎、进行性系统性硬化(硬皮病)、强直性脊柱炎、多肌炎、皮肌炎、天疱疮、类天疱疮、糖尿病(例如，I型)、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、古德帕斯彻病、混合结缔组织病、硬化性胆管炎、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、恶性贫血、炎性皮肤病、常见间质肺炎(UIP)、石棉沉滞症、矽肺、支气管扩张症、铍中毒、滑石病、肺尘症、类肉状瘤病、脱屑性间质性肺炎、淋巴样间质性肺炎、巨细胞间质性肺炎、细胞间质性肺炎、外源性过敏性肺泡炎、韦格纳肉芽肿病和脉管炎的相关形式(颞动脉炎和结节性多发性动脉炎)、炎性皮肤病、肝炎、迟发型超敏反应(例如，毒葛皮炎)、肺炎、呼吸道炎症、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑炎、速发型超敏反应、哮喘、花粉症、过敏、急性过敏反应、风湿热、肾小球肾炎、肾盂肾炎、蜂窝织炎、膀胱炎、慢性胆囊炎、缺血(缺血性损伤)、再灌注损伤、阑尾炎、动脉炎、眼睑炎、细支气管炎、支气管炎、宫颈炎、胆管炎、绒毛膜羊膜炎、结膜炎、泪腺炎、皮肌炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、胃肠炎、牙龈炎、回肠炎、虹膜炎、喉炎、脊髓炎、心肌炎、肾炎、脐炎、卵巢炎、睾丸炎(orchitis)、骨炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、鼻炎、输卵管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、睾丸炎(testitis)、扁桃腺炎、尿道炎、膀胱炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎、外阴炎、外阴阴道炎、脉管炎、慢性支气管炎、骨髓炎、视神经炎、颞动脉炎、横贯性脊髓炎、坏死性筋膜炎和坏死性小肠结肠炎。眼炎性疾病包括但不限于手术后的炎症。
“自身免疫性疾病”是指由于受试者机体对通常存在于所述机体中的物质和组织的不恰当的免疫应答所造成的疾病。换句话说，免疫系统错把该机体的一部分当做病原体并攻击其自身的细胞。这可以被限制为特定的器官 (例如，在自身免疫性甲状腺炎中)或涉及不同位置的特定组织(例如，古德帕斯彻病，其可能影响肺和肾的基底膜)。自身免疫性疾病的治疗通常是用免疫抑制，例如，降低免疫应答的药物。示例性的自身免疫性疾病包括但不限于：肾小球肾炎、古德帕斯彻综合征、坏死性血管炎、淋巴结炎、结节性动脉周围炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、溃疡性结肠炎、系统性硬化症、皮肌炎/多肌炎、抗磷脂抗体综合征、硬皮病、寻常型天疱疮、ANCA相关的血管炎(例如，韦格纳肉芽肿病、显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis))、葡萄膜炎、干燥综合征、克罗恩病、赖特综合征、强直性脊柱炎、莱姆病、格林-巴利综合征、桥本甲状腺炎和心肌病。
术语“神经性疾病”是指神经系统的任何疾病，包括涉及中枢神经系统 (脑、脑干和小脑)、周围神经系统(包括颅神经)和自主神经系统(其部分位于中枢和周围神经系统)的疾病。神经变性疾病是指以神经细胞损失为特征的一种神经性疾病，包括但不限于：阿尔茨海默氏病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、Tau病变(包括额颞痴呆)和亨廷顿舞蹈病。神经性疾病的实例包括但不限于：头痛、麻木和昏迷、痴呆、癫痫、睡眠障碍、创伤、感染、肿瘤、神经眼科、运动障碍、脱髓鞘疾病、脊髓疾病和外周神经、肌肉和神经肌肉接头的疾病。成瘾和精神疾病包括但不限于双相性精神障碍和精神分裂症，也包括在神经性疾病的定义中。神经性疾病的其他实例包括获得型癫痫样失语症；急性播散性脑脊髓炎；肾上腺脑白质营养不良；胼胝体发育不全；失认症；艾卡迪综合征；亚历山大病；阿尔珀斯病；交叉性肢体瘫痪；阿尔茨海默氏病；肌萎缩侧索硬化；无脑畸形；安格尔曼综合征；血管瘤病；缺氧症；失语症；失用症；蛛网膜囊肿；蛛网膜炎；阿-希畸形；动静脉畸形；阿斯佩格综合征；运动失调性毛细血管扩张症；注意力缺陷伴多动障碍；自闭症；自主功能障碍；背痛；巴藤病；贝赫切特病；贝尔麻痹；良性自发性睑痉挛；良性病灶；肌肉萎缩；良性颅内高压；宾斯旺格病；眼睑痉挛；布 -苏综合征；臂丛神经损伤；脑脓肿；脑损伤；脑肿瘤(包括多形性成胶质细胞瘤)；脊髓肿瘤；布朗-塞卡尔综合征；卡纳万病；腕管综合征(CTS)；灼性神经痛；中枢性疼痛；中心性脑桥髓鞘溶解；头部障碍；脑动脉瘤；脑动脉硬化；大脑萎缩；大脑性巨人症；大脑性麻痹；夏-马-图三氏病；化学疗法诱导的神经病和神经性疼痛；Chiari畸形；舞蹈症；慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)；慢性疼痛；慢性区域性疼痛综合征；科-勒二氏综合征；昏迷，包括持续性植物人状态；先天性面瘫；皮质基底节变性(corticobasal degeneration)；颅动脉炎；颅缝早闭；克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)；累积创伤障碍；库欣综合征；嗜酸性巨细胞包涵体疾病(CIBD)；巨细胞病毒感染；舞眼舞脚综合征(dancing eyes-dancing feetsyndrome)；丹-沃二氏综合征；道森病；德摩西埃综合征；德热里纳-克隆普克瘫痪；痴呆；皮肌炎；糖尿病神经病变；弥漫性硬化；自主神经机能异常；书写困难；诵读困难；张力失调；早期幼儿癫痫性脑病；空蝶鞍综合征；脑炎；脑疝；脑三叉神经血管瘤病；癫痫；欧勃麻痹(Erb’s palsy)；特发性震颤；法布里病；法尔氏综合征(Fahr’s syndrome)；昏厥；家族性痉挛性瘫痪；发热性惊厥；菲希尔综合征；弗里德赖希共济失调；额颞痴呆和其他“Tau病变”；戈谢病；格斯特曼综合征；巨细胞动脉炎；巨细胞包涵体病；球样细胞脑白质营养不良；格 -巴二氏综合征；HTLV-1相关性脊髓病；哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatz disease)；头部损伤；头痛；半面痉挛；遗传性痉挛性截瘫；遗传病性多神经炎样共济失调(heredopathiaatactica polyneuritiformi)；耳部带状疱疹；带状疱疹；平山综合征(Hirayamasyndrome)；HIV-相关性痴呆和神经病(也参见AIDS 的神经性表现)；前脑无裂畸形；亨廷顿舞蹈病和其他多聚谷氨酰胺病；积水性无脑畸形；脑积水；皮质醇增多症；缺氧；免疫介导的脑脊髓炎；包涵体肌炎；色素失调症；婴儿植酸贮积病；婴儿雷弗苏姆病；婴儿痉挛症；炎症性肌病；颅内囊肿；颅内高压；朱伯综合征；卡恩斯-塞尔综合征；肯尼迪病；舞蹈眼综合征；克-费二氏综合征；克拉伯病；库-韦病；库鲁病；拉福拉病；朗-爱二氏肌无力综合征；Landau-Kleffner综合征；外侧髓质(Wallenberg)综合征；学习失能；利氏病；伦-加综合征；莱-萘二氏综合征；脑白质营养不良症；路易体痴呆；无脑回；闭锁综合症；Lou Gehrig氏病(也称为运动神经元疾病或肌萎缩侧索硬化)；椎间盘病变；莱姆病-神经系统后遗症；马查多-约瑟夫病；脑肥大；巨脑；迈-罗二氏综合征；梅尼埃病；脑膜炎；门克斯病；异染性脑白质营养不良症；小头畸型；偏头痛；米勒菲希尔综合征；小中风；线粒体肌病(mitochondrialmyopathie)；墨比乌斯综合征；单肢肌肉萎缩；运动神经元疾病；烟雾病；粘多糖病；多发梗塞性痴呆；多灶性运动神经病；多发性硬化和其他脱髓鞘疾病；多系统萎缩伴体位性低血压；肌营养不良；重症肌无力；脱髓鞘弥漫性硬化(myelinoclastic diffuse sclerosis)；婴儿肌阵挛性脑病；肌阵挛；肌病；先天性肌强直；发作性睡病；神经纤维瘤病；神经阻滞剂恶性综合征；艾滋病的神经性表现；狼疮的神经后遗症；神经性肌强直；神经元蜡样脂褐质沉积症；神经元移行障碍；尼曼 -皮克二氏病；O’Sullivan-McLeod综合征；枕神经痛；隐性脊柱神经管闭合不全序列征；大田原综合征；橄榄体脑桥小脑萎缩；斜视性眼阵挛-肌阵挛；视神经炎(optic neuriti)；体位性低血压；过度使用综合征；感觉异常；帕金森病；先天性副肌强直；副肿瘤病；阵发性发作；帕-罗二氏综合征；佩-梅二氏病；周期性瘫痪；周围神经病；疼痛性神经病和神经性疼痛；持续性植物人状态；综合性精神发育障碍；感光性喷嚏反射；植烷酸贮积病；皮克病；神经挟捏；垂体瘤；多肌炎；脑穿通畸形；小儿麻痹症后期综合征；带状疱疹后神经痛(PHN)；感染后脑脊髓炎；体位性低血压；帕-魏二氏综合征；原发性侧索硬化；朊病毒病；进行性单侧面萎缩；进行性多灶性脑白质病；进行性硬化性灰质萎缩；进行性核上麻痹；假脑瘤；拉姆齐-亨特综合征(I型和 II型)；Rasmussen脑炎；反射性交感神经营养不良综合征；雷夫叙姆病；重复性运动障碍；重复性应激损伤；不宁腿综合征；逆转录病毒相关性脊髓病；雷特综合征；雷氏综合征；舞蹈病；桑德霍夫病；谢尔德病；脑裂；透明隔-视神经发育不良；惊吓婴儿综合征；带状疱疹；夏伊-德雷格综合征；干燥综合征；睡眠呼吸暂停；索托综合征；痉挛状态；脊柱裂；脊髓损伤；脊髓肿瘤；脊髓性肌萎缩；僵人综合征；中风；斯特奇-韦伯二氏综合征；亚急性硬化性全脑炎；蛛网膜下腔出血；皮层下动脉硬化性脑病；西德纳姆舞蹈病；晕厥(syncope)；脊髓空洞症；迟发性运动障碍；泰-萨克斯病；颞动脉炎；脊髓栓系综合征；汤姆森病；胸廓出口综合征；三叉神经痛；托德瘫痪；图雷特综合征；短暂性脑缺血发作；传染性海绵状脑病；横贯性脊髓炎 (transverse myeliti)；创伤性脑损伤；震颤；三叉神经痛；脊髓栓系综合征；结节性硬化；血管性痴呆(多梗塞性痴呆)；血管炎，包括颞动脉炎；希-林二氏病(VHL)；瓦伦贝格综合征；Werdnig-Hoffman病；West综合征；急性颈部扭伤；威廉斯综合征；威尔逊病；和泽尔韦格综合征。
“疼痛性病症”包括但不限于神经性疼痛(例如，周围神经性疼痛)、中枢性疼痛、传入神经阻断性疼痛、慢性疼痛(例如，慢性伤害性疼痛和其它形式的慢性疼痛例如手术后疼痛(例如，髋、膝或其他置换手术后出现的疼痛)、术前疼痛、伤害性受体的刺激(伤害性疼痛)、急性疼痛(例如幻痛和短暂性急性疼痛)、非炎症性疼痛、炎症性疼痛、与癌症相关的疼痛、伤口疼痛、烧伤疼痛、术后疼痛、与医学操作相关的疼痛、由瘙痒引起的疼痛、疼痛性膀胱综合征、与经前期焦虑症和/或经前期综合征相关的疼痛、与慢性疲劳综合征相关的疼痛、与早产相关的疼痛、与药物成瘾的戒断症状相关的疼痛、关节痛、关节炎疼痛(例如，与结晶性关节炎、骨关节炎、银屑病性关节炎、痛风性关节炎、反应性关节炎、类风湿关节炎或赖特尔氏关节炎相关的疼痛)、腰骶痛、肌肉-骨骼疼痛、头痛、偏头痛、肌肉痛、腰痛、颈部疼痛、牙痛、牙齿/颌面疼痛、内脏痛等。本文考虑的一种或多种疼痛性病症可以包括上文和本文提供的各种类型的疼痛的混合(例如伤害性疼痛、炎症性疼痛、神经性疼痛等)。在一些实施方案中，以一种具体疼痛为主。在其他实施方案中，疼痛性病症包括两种或多种类型的疼痛，而没有以一个为主。熟练的临床医生可以基于疼痛性病症来确定针对具体受试者实现治疗有效量的剂量。
术语“精神疾病”是指精神方面的疾病，包括由美国精神病学协会 (WashingtonD.C.)(1994)出版的“精神障碍诊断与统计手册第四版(DSM-IV)”中列出的疾病和紊乱。精神疾病包括但不限于,焦虑障碍(例如，急性应激障碍、广场恐怖症、广泛性焦虑症、强迫症、惊恐性障碍、创伤后应激障碍、分离焦虑症、社交恐惧症和特异性恐惧症)、儿童期障碍(例如，注意力缺陷/ 多动障碍、行为紊乱和对立违抗性障碍)、进食障碍(例如，神经性厌食症和神经性贪食症)，心境障碍(例如，抑制症、双相性精神障碍、循环情感性精神障碍、情绪恶劣性障碍和重度抑郁症)、人格障碍(例如反社会人格障碍、回避型人格障碍、边缘型人格障碍、依赖型人格障碍、表演型人格障碍、自恋型人格障碍、强迫型人格障碍、偏执型人格障碍、精神分裂样人格障碍和分裂型人格障碍)、精神障碍(例如，短时精神障碍、妄想症、情感分裂性精神障碍、精神分裂症样精神障碍、精神分裂症和分享精神病)、物质相关障碍(例如酒精依赖、苯丙胺依赖、大麻依赖、可卡因依赖、致幻剂依赖、吸入剂依赖、尼古丁依赖、阿片样物质依赖、苯环利定依赖和镇静剂依赖)、适应性障碍、自闭症、谵妄、痴呆、多发性脑梗死性痴呆、学习和记忆障碍 (例如，健忘症和年龄相关的记忆丧失)和图雷特氏精神障碍。
术语“代谢紊乱”是指涉及碳水合物、脂质、蛋白、核酸或其组合的正常代谢的改变的任何病症。代谢病是与代谢途径中的缺乏或过量有关，导致核酸、蛋白、脂质和/或碳水合物的代谢失衡。影响代谢的因素包括并不限于，内分泌(激素)控制系统(例如，胰岛素途径、肠内分泌激素，包括GLP-1、PYY 等)、神经控制系统(例如，脑中的GLP-1)等。代谢病的实例包括但不限于：糖尿病(例如，I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病)、高血糖症、超高胰岛素血症、胰岛素抗性和肥胖症。
附图说明
图1显示用化合物5以1μM(上图)和0.1μM(下图)处理72小时的 H3K27me3的示例性Western印迹结果。uM：μM。
图2显示用化合物5以1μM处理72小时的H3K27的示例性二甲基化和三甲基化。
图3显示用化合物5处理72小时的所选细胞系的示例性细胞活力结果。上图：Ly18(EZH2 wt(野生型))细胞系。下图：K422(EZH2突变体)细胞系。 Log10[M]：log(化合物5的摩尔浓度)。
图4显示了用化合物5处理的H3K27的示例性二甲基化和三甲基化，使用ALPHALISA测定法测量。上图：H3K27me2。下图：H3K27me3。Log10 [M]：log(化合物5的摩尔浓度)。
图5显示化合物EZ-05对WT(野生型)和突变体EZH2 PRC2复合物的示例性活性。log[EZ-05]：log(化合物EZ-05的摩尔浓度)。
图6显示通过在表面上移动化合物JQEZ6以捕获PRC2五组分复合物获得的化合物JQEZ6的示例性表面等离子体共振(SPR)结果。
图7显示了本文所述的一组化合物(上图)和本文所述的另一组化合物(下图)对PRC2 5组分复合物的示例性抑制活性。log(uM)：log(化合物的微摩尔浓度)。log[Cpd]，nM：log(化合物的纳摩尔浓度)。％活性：％PRC2活性。
图8显示所选化合物的化学结构。
图9A-9E：EZH2过表达诱导鼠肺癌。(图9A)以图表形式描述了使用3 种不同策略表达Cre重组酶以诱导EZH2过表达的LSL-EZH2遗传工程化小鼠模型。(图9B)LSL-EZH2转基因小鼠(EZH2)相对于野生型小鼠(WT)的 Kaplan-Meier无肺癌生存概况图。(图9C)用苏木精和曙红染色的野生型肺(上部)和EZH2诱导的肺腺癌(底部)切片的组织学。右图显示Ki-67的免疫染色， Ki-67是增殖的标记物。比例尺表示50um。(图9D)在EZH2诱导的小鼠肺肿瘤(上部)和KRAS诱导的小鼠肺肿瘤(底部)中EZH2、p-AKT和p-ERK1/2的苏木精和曙红染色或免疫染色。比例尺表示50um。(图9E)在来自小鼠的正常肺组织、EZH2诱导的肿瘤肺组织以及KRAS诱导的肿瘤肺组织中的 EZH2、AKT、p-AKT、ERK1,2和p-ERK1,2表达的Western印记(上部)。用 ImageJ量化的相对蛋白表达水平(底部)。另见图15。
图10A-10C：EZH2驱动的肺癌，其为分子不同实体。(图10A)EZH2过表达(OE)的正常肺、KRAS突变型肺肿瘤、EGFR突变型肺肿瘤和EZH2-OE 肺肿瘤中相对于相应的正常肺组织的log2倍数变化(LFC)基因表达的热图。在所有样品中选择前500个最可变基因进行聚集。深灰色区域表示突变体或过表达组织中相对于对照的下调基因；浅灰色区域表示突变体或过表达组织中相对于对照的上调基因。(图10B)来自癌症基因组图谱(TCGA)的471个人肺腺癌(深灰色)相对于58个正常肺(浅灰色)的EZH2表达的分布。人肺腺癌平均EZH2表达水平为394.8，正常肺中为56.7。(图10C)为ssGSEA框图，其比较了具有特异性驱动子突变(KRAS，EGFR，未知)或高EZH2水平的 TCGA肺腺癌中MEK(左)和mTOR(右)基因集的富集。
图11A-11I：EZH2过表达调节小鼠肺中超级增强子相关的转录图谱。(图 11A)显示野生型(WT)和肿瘤肺组织中H3K27ac超级增强子(SE)区域的层次聚类分析的热图。相对的H3K27ac水平由颜色深度表示。(图11B)显示 WT与肿瘤组织之间超级增强子的相似性聚集的热图。颜色深度表明相似性增加。(图11C)为瀑布图，其显示在肿瘤和野生型(WT)肺之间在含超级增强子的区域中的H3K27ac信号的排序变化。X轴描绘H3K27ac信号中的LFC。增强子以信号中的LFC排序，其中在肿瘤中获得最多H3K27ac的区域在顶部。超级增强子的H3K27ac水平的变化由浅灰色至深灰色的强度变化来着色。(图11D)与超级增强子相关的基因的RPKM单元中RNA-seq表达的框图，所述超级增强子在肿瘤中相比于WT肺组织是增益的、不变的或丢失的。使用双尾t检验计算分布差异的显著性。**p<2e-4，***p<2e-6(图11E)归一化富集分数(NES)相对于假发现率(FDR)q值的散布图，将肿瘤中MSigDB策划的基因组富集与WT超级增强子相关基因相比较。X轴显示所评估的基因组的NES。Y轴显示每个基因组的假FDR q值。在肿瘤中上调的基因组具有高阳性NES，而下调的基因组具有负NES。虚线表示0.05的显著性截止值q值。深灰色点表示在肿瘤中下调的PRC2相关特征。对于PRC2特征，n＝8。(图11F)超级增强子相关基因集富集分析显示，肿瘤中相对于WT组织的EED靶标的下调。(图11G)在含超级增强子的区域， H3K27ac/H3K27me3信号中LFC的热图。蓝色或深灰色区域表明相对于WT 在肿瘤中具有H3K27me3强增益的超级增强子，而红色或浅灰色区域表示具有强损失的那些。(图11H)对于接近超级增强子区域的基因，在log10 RPKM 单元中的RNA-seq表达的虚线图，其中在肿瘤中相对于WT具有强增益的 H3K27me3。通过双尾t检验计算分布差异的显著性。**p<1e-5。(图11I) ssGSEA的框图，比较了具有高EZH2水平的TCGA肺腺癌中和正常肺组织中我们的小鼠H3K27me3基因组的富集。H3K27me3基因组由与SE区相邻的32个小鼠基因组成，其在鼠EZH2过表达肿瘤中具有强H3K27me3增益。另见图16。
图12A-12G：EZH2过表达转化人肺上皮细胞。(图12A)表达对照(ctl) 或EZH2(oeEZH2)构建体的人气管支气管上皮(hTBE)细胞的SDS-PAGE和 Western印迹分析。(图12B)集落形成测定过表达对照(左)或EZH2(右)构建体的hTBE细胞。(图12C)将表达对照(ct1)或EZH2(oeEZH2)的hTBE细胞体外培养10或20代，然后接种在软琼脂上进行集落形成测定。误差棒代表 SEM，*p<0.05，**p<0.001。(图12D)通过Western印迹法，分析表达非靶向对照shRNA(NT)或靶向EZH2(shEZH2-A和shEZH2-B)的两种不同shRNA 的H661(左)和H292(右)细胞的Ezh2表达。(图12E)通过表达对照(NT)或 EZH2靶向shRNA的H661细胞中的MTS测定法测量相对细胞生长。误差棒代表SEM,n＝3。**p<0.001。(F-G)将被含有对照(NT)或shEZH2的慢病毒所感染的H661细胞皮下注射到裸鼠的侧腹。当最大肿瘤的大小达到直径约5mm时，将小鼠安乐死并测量肿瘤。(图12F)将相对shEZH2肿瘤大小进行量化，与shNT肿瘤大小相比(平均值±SEM，n＝3/治疗)。(图12G)将被含有对照(NT)或shEZH2的慢病毒所感染的H661和H292细胞皮下注射到裸鼠的侧腹。当最大肿瘤的大小达到直径约5mm时，将小鼠安乐死并记录肿瘤(平均值±SEM，n＝3/治疗)。另见图17。
图13A-13C：小分子EZH2抑制剂开发。(图13A)阴性对照化合物JQEZ23 的化学结构。(图13B)使用放射性标记的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)在五组分 PRC2复合放射性闪烁邻近测定(SPA)中测量JQEZ5、JQEZ23、GSK-126和 UNC1999的小分子抑制活性。(图13C)随着SAM浓度的增加，测量JQEZ5 的IC50以证实其SAM竞争性结合活性。(图13D)JQEZ5与EZH2结合的计算对接模型。(图13E)配体相互作用图(LID)描述了JQEZ5如何与EZH2残基相互作用。(图13F)甲基转移酶组的选择性分布图显示，JQEZ5在22个甲基转移酶测定组中选择性地结合EZH2。另见图18。
图14A-14G：JQEZ5抑制肺癌的体外和体内生长。(图14A)将H661肺癌细胞与增加浓度的JQEZ5一起孵育。制备细胞裂解物，并进行SDS-PAGE，并用具有所指示的抗体进行Western印迹分析。(图14B)肺癌细胞系H661 中的甲基化水平的Western印记，用增加浓度的JQEZ23处理72h。H3是一个负载对照。(图14C)用增加浓度的JQEZ5处理48h或72h后，H661肺癌细胞系中的甲基化水平的Western印记。H3是一个负载对照。(图14D)将 H661和(E)H292肺癌细胞与增加浓度的JQEZ5一起孵育，通过MTS测定评估相对细胞生长。误差棒表示SD，n＝3。(图F)基于MRI对相对小鼠肿瘤体积进行定量。在JQEZ5治疗前和治疗三周后比较相对肿瘤大小(平均值±SEM，n＝2)。(图14G)MRI显示用JQEZ5体内治疗小鼠引起肺肿瘤消退，如圆圈所示。H，心脏。另见图19。
图15A-15E，涉及图9。LSL-Ezh2条件性转基因小鼠的产生。(图15A) 通过Frt介导的同源重组产生EZH2转基因小鼠的示意图。使携带EZH2 cDNA和pgkATGfrt的靶向载体通过共电穿孔用FLPe瞬时表达载体靶向位于ColA1基因座的3'非翻译区下游约500bp处的修饰位点。放置在CAG启动子和EZH2 cDNA之间的LOX-STOP-LOX(LSL)盒确保EZH2转基因仅当Cre介导的LSL盒切除存在时表达。E＝EcoRI；P＝PstI；S＝SpeI(图15B)使用两种不同的引物组--P1和P2或P3和P4对小鼠尾DNA进行基因分型。第一个引物组的靶标跨越整合位点，确保正确的重组。(图15C)通过Cre介导的LSL盒的切除来开启EZH2转基因的示意图。(图15D)将来自野生型和肌动蛋白-Cre：LSL-Ezh2小鼠的肺进行切片并通过免疫组织化学将Ezh2表达染色。比例尺表示50um。(图15E)从野生型(对照)、肌动蛋白-Ire： LSL-Ezh2和UBC：LSL-Ezh2小鼠的肺制备裂解物。将UBC：LSL-Ezh2小鼠在6周龄时用他莫西芬治疗，两周后收获组织。通过Western印迹分析裂解物的Ezh2蛋白表达水平。
图16A-16F，涉及图11。在EZH2小鼠肺肿瘤中的H3K27ac超级增强子(SE)分析。(图16A)在EZH2过表达的肿瘤中，与具有强H3K27me3增益的SE区邻近的32个小鼠基因。(图16B)在WT和肿瘤肺组织中，H3K27ac 和H3K27me3以rpm/bp为单位的ChIP-seq信号的全基因组轨迹。(图16C)在 WT和肿瘤肺组织中，对于在超级增强子(SE)区域的H3K27ac和H3K27me3，以rpm/bp为单位的ChIP-Seq信号的基因轨迹。(图16D)在WT或肿瘤肺组织中，对于在Foxf1a基因座上的H3K27ac和H3K27me3，以rpm/bp为单位的ChIP-seq信号的基因轨迹。(图16E)在WT或肿瘤肺组织中，对于在DUSP4 基因座上的H3K27ac和H3K27me3，以rpm/bp为单位的ChIP-seq信号的基因轨迹。(图16F)从正常肺(N-1，N-2和N-3)和肺肿瘤(T-1，T-2和T-3)样品制备的裂解物的Western印迹分析。
图17A-17B,涉及图12。具有低水平EZH2的细胞对EZH2的破坏不敏感。(图17A)Western印迹法比较NSCLC细胞系H661和H292之间的EZH2 表达水平。肌动蛋白是加载对照。(图17B)通过MTS测定法测定表达非靶向对照shRNA(NT)或靶向EZH2的两种不同shRNA(shEZH2-A和shEZH2-B) 的H292细胞的相对细胞生长。误差棒代表S.E.M，n＝3。
图18A-18D，涉及图13。JQEZ5的表征。(图18A)所报道的EZH2抑制剂、GSK-126和UNC1999的化学结构。(图18B)JQEZ5、阴性对照化合物、 JQEZ23和文献报道的EZH2抑制剂的IC50值，其在用于测量PRC2活性的放射性闪烁接近测定(SPA)中确定。(图18C)通过SPA测定，用增加浓度的 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)测量JQEZ5抗PRC2的抑制活性。(图18D)测定JQEZ5抗一组22个甲基转移酶的活性。列出了JQEZ5和对照化合物即S-腺苷-高半胱氨酸(SAH)的IC50值。
图19A-19C，涉及图14。JQEZ5的体内特性。(图19A)JQEZ5在小鼠中的半衰期，其通过在雄性CD1小鼠(n＝3)中腹膜内注射75mg/kg后的平均全血浓度随时间的药代动力学分析来揭示。(图19B)来自动物#1的MRI扫描显示，用JQEZ5进行的体内治疗可使第0周至第3周的肺肿瘤缓解。(图19C) 来自动物#2的MRI扫描显示，使用JQEZ5进行的体内治疗导致第0周至第3周的肺肿瘤缓解。
图20显示了所选择的比较化合物的化学结构。“EZH2-F”与“EZ-F”相同。
图21显示了可用于制备本文所述的酰肼的示例性醛和酮的化学结构。
图22显示了本文所述的所选择的化合物针对EZH2相对于EZH1的生化选择性的示例性结果。
图23A和23B图示了双色H3K27me3的Western印迹的示例性结果。用不同浓度的任一种测试化合物处理293T细胞3天。图23A：H3K27me3(Ms) 显示为绿色或浅灰色；组蛋白H3(Rb；C-末端Ab)显示为红色或深灰色。“uM”表示μM。图23B显示示例性的H3K27me3的量化结果。“[CPD]”表示测试化合物的摩尔浓度。
图24显示了本文所述的所选择化合物的EZH2(WT)相对于EZH2(Y641) 的生化选择性的示例性结果。
图25A至25C显示了Rhabdoid活力测定的示例性结果。测定以384孔模式进行。有625G401细胞/孔，并且有313BT16细胞/孔。用任一种测试化合物处理细胞4天。图25A显示用10μM EZ05处理的G401细胞和BT16 细胞的Z因子值。图25B显示用3.3μM EZ05处理的G401细胞和BT16细胞的Z因子值。图25C显示了G401细胞的％活力。DMSO用作对照。
图26A和26B显示DLBCL细胞活力的示例性结果。将OCI-LY-18(WT EZH2)细胞(图26A)和Karpas 422(突变体EZH2)细胞(图26B)用不同浓度的任何一种测试化合物处理6天。
图27A显示在雄性CD1小鼠中，在5mg/kg的IV剂量或10mg/kg的PO 剂量(N＝3)后，EZ26的示例性平均全血浓度-时间曲线。图27B显示了在雄性CD1小鼠中，在10mg/kg的PO剂量(N＝3)后，EZ26的示例性个体全血浓度-时间曲线。图27C显示在雄性CD1小鼠中，在25mg/kg的IV剂量或 50mg/kg的IP剂量(N＝3)后，EZ27的示例性平均全血浓度-时间曲线。图27D显示在雄性CD1小鼠中，在50mg/kg的PO剂量(N＝3)后EZ27的示例性平均全血浓度-时间曲线。图27E显示在雄性CD1小鼠中，在75mg/kg的IP 剂量(N＝3)后JQE5(EZ-005)的平均全血浓度-时间曲线。
图28A显示不同浓度的EZ05对野生型(WT)EZH2或具有Y641C突变、 Y641N突变或Y641S突变的EZH2的活性百分比。图28B显示不同浓度的 EZ05在EZH2+/+(WT)或Y641F/+突变体中的荧光强度。
图29显示了所选化合物抗野生型(WT)EZH2或具有Y641C突变、Y641N 突变或Y641S突变的EZH2的示例性IC50值(以nM计)。
图30A示出了本文描述的化合物，其包括弹头，例如所描绘的具有酰基酰胺(共价连接到酰基酰胺部分)的EZ05类似物和EZH的Cys641形成共价键。图30B显示了EZH复合物和所描述的具有酰基酰胺的EZ05类似物的能量最小化结构的示例性对接结果。图30C显示了所选择化合物抗野生型 (WT)EZH2或具有Y641C突变、Y641N突变或Y641S突变的EZH2的示例性IC50值(以nM计)。
图31描绘了使用AlphaAssay的EZ06与PRC2的结合。
图32描绘了用于PRC2 SAM竞争性抑制剂的竞争性AlphaScreen。
图33描绘了使用EZ05-FITC的PRC2-EZH2竞争性荧光偏振测定。
图34描绘了使用EZ05-FITC的PRC2-EZH2荧光偏振测定。
图35描绘了在EZH2配体-置换荧光偏振测定中筛选的所有化合物的结合等温线。
图36描述了在EZH2配体置换荧光偏振测定中筛选的最有效和最不有效的化合物的结合等温线。化合物“X#”，其中X是一个字母，#是1和12 之间的一个整数，包括端点，其表示通过下述方法制备的化合物：
其中为图21，板1中所示的醛或酮；“X”表示行数，和“#”表示列数。
图37报告了在EZH2配体置换荧光偏振测定中筛选的所选化合物的计算的IC50数据。化合物“X#”，其中X是一个字母，#是1到12之间的一个整数，包括端点，其表示如图36中所示的化合物。
图38描绘了EZ-TAMRA和EZ-TOM的结构。
图39描绘了细胞内EZH2结合测定。
图40描绘了细胞内竞争性EZH2结合测定。
发明详述
本文描述的是式(I)和(II)化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。本文所述的化合物结合蛋白甲基转移酶(HMT，例如EZH1和EZH2)，并且可用于调节(例如，抑制)受试者、生物样品、组织或细胞中HMT的活性(例如，异常活性)。所述化合物可用于治疗或预防有此需要的受试者中的疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)和/或用于治疗或预防与受试者中HMT的异常活性或增加的活性相关的疾病。还提供了包括本文描述的化合物的药物组合物、试剂盒和用途。在本公开中进一步提供鉴别 EZH1和/或EZH2抑制剂的方法。
化合物
本申请的一个方面涉及本文所述的化合物。本文描述的化合物是 HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的抑制剂。在一些实施方案中，本文描述的化合物为式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药。在一些实施方案中，本文描述的化合物为式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文描述的化合物为式(II)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药。在一些实施方案中，本文描述的化合物为式(II) 化合物或其药学上可接受的盐。
在一个方面中，本申请提供式(I)化合物、及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药：
其中：
RA1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORa、–N(Ra)2、–SRa、–CN、–SCN、–C(＝NRa)Ra、–C(＝NRa)ORa、–C(＝NRa)N(Ra)2、–C(＝O)Ra、–C(＝O)ORa、–C(＝O)N(Ra)2、–NO2、–NRaC(＝O)Ra、–NRaC(＝O)ORa、–NRaC(＝O)N(Ra)2、–OC(＝O)Ra、–OC(＝O)ORa、–OC(＝O)N(Ra)2、标记物或
每个Ra独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基或连于硫原子时的硫保护基，或者两个Ra连接形成取代或未取代的杂环或取代或未取代的杂芳环；
RA为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
RB为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
或者RA和RB连接形成取代或未取代的碳环或取代或未取代的杂环；
RC为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
RA2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、氮保护基、标记物或弹头；
RA3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa、–N(Ra)2或弹头；
RA4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RA5为下式：/>其中：
RA6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA10为–ORa–N(Ra)2或弹头；
每个RA11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
n为0、1、2、3或4；
RA12为氢、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头；
每个RA13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
m为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RA14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；和
RA17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头。
在一些实施方案中，所述EZH2抑制剂为式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中：
RA1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORa、–N(Ra)2、–SRa、–CN、–SCN、–C(＝NRa)Ra、–C(＝NRa)ORa、–C(＝NRa)N(Ra)2、–C(＝O)Ra、–C(＝O)ORa、–C(＝O)N(Ra)2、–NO2、–NRaC(＝O)Ra、–NRaC(＝O)ORa、–NRaC(＝O)N(Ra)2、–OC(＝O)Ra、–OC(＝O)ORa或–OC(＝O)N(Ra)2；
每个Ra独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基或连于硫原子时的硫保护基，或两个Ra连接形成取代或未取代的杂环或取代或未取代的杂芳环；
RA2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基或氮保护基；
RA3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RA5为下式： 其中：
RA6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA10为–ORa或–N(Ra)2；
每个RA11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
n为0、1、2、3或4；
RA12为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
每个RA13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
m为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RA14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；和
RA17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
式(I)在吡啶环上包括取代基RA。在一些实施方案中，RA1为卤素(例如， F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，RA1为Me。在一些实施方案中，RA1为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的烯基(例如，取代或未取代的C2-6烯基)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的炔基(例如，取代或未取代的C1-6炔基)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的1、 2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的哌嗪基。在一些实施方案中，RA1为下式：其中RA14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。在一些实施方案中， RA1为下式：/>在一些实施方案中，RA1为下式：/>其中RA14为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA1为下式：
在一些实施方案中，RA1为下式：其中LA为键、或取代或未取代的C1-100烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个链原子独立地被–O–、–S–或–NRa–替换；和XA为小分子、肽、蛋白或多核苷酸。在一些实施方案中，RA1为下式：/>其中r为0或1，k为0至11的整数，包括端点值，p为0至10的整数，包括端点值，和q为0至10的整数，包括端点值。在一些实施方案中，k为3至11的整数，包括端点值，p为0和q为0、1、 2、3、4、5或6。在一些实施方案中，XA为小分子。在一些实施方案中， XA为小分子药物(例如，/> 其中ZA为–O–或–NH–或本文描述的为小分子的其他药物)。在一些实施方案中，XA为小分子标签(例如，生物素部分(例如，/>)或小分子荧光团)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、取代或未取代的氮杂环庚烷基、或取代或未取代的二氮杂环庚烷基。在一些实施方案中，RA1为下式：/> 其中每个Ra独立地为未取代的C1-6烷基(例如，Me))。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的芳基(例如，取代或未取代的6- 至10-元芳基)。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的苯基。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的杂芳基(例如，取代或未取代的5-至6-元单环杂芳基，其中所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RA1为–ORa(例如，–OH、–O(取代或未取代的 C1-6烷基)(例如，–OMe、–OEt、–OPr、–OBu或–OBn)或–O(取代或未取代的苯基)(例如，–OPh))。在一些实施方案中，RA1为–SRa(例如，–SH、–S(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–SMe、–SEt、–SPr、–SBu或–SBn)或–S(取代或未取代的苯基)(例如，–SPh))。在一些实施方案中，RA1为–N(Ra)2(例如，–NH2、–NH(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–NHMe)或–N(取代或未取代的C1-6烷基)–(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–NMe2))。在一些实施方案中，RA1为–CN。在一些实施方案中，RA1为–SCN或–NO2。在一些实施方案中，RA1为–C(＝NRa)Ra、–C(＝NRa)ORa或–C(＝NRa)N(Ra)2。在一些实施方案中，RA1为–C(＝O)Ra(例如，–C(＝O)(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)(取代或未取代的苯基))。在一些实施方案中，RA1为–C(＝O)ORa(例如，–C(＝O)OH、–C(＝O)O(取代或未取代的烷基)(例如，–C(＝O)OMe)或–C(＝O)O(取代或未取代的苯基))。在一些实施方案中，RA1为–C(＝O)N(Ra)2(例如，–C(＝O)NH2、–C(＝O)NH(取代或未取代的烷基)、–C(＝O)NH(取代或未取代的苯基)、–C(＝O)N(取代或未取代的烷基)–(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)N(取代或未取代的苯基)–(取代或未取代的烷基))。在一些实施方案中，RA1为–NRaC(＝O)Ra(例如，–NHC(＝O)Me)。在一些实施方案中，RA1为–NRaC(＝O)ORa或–NRaC(＝O)N(Ra)2。在一些实施方案中，RA1为–OC(＝O)Ra、–OC(＝O)ORa或–OC(＝O)N(Ra)2。在一些实施方案中，RA1为取代或未取代的烷基、–ORa、–N(Ra)2、–C(＝O)ORa或–NRaC(＝O)Ra。在一些实施方案中，RA1为未取代的C1-6烷基、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe 或–NHC(＝O)Me。在一些实施方案中，RA1为/>本文描述的包括一个或多个部分/>的化合物为酰肼。
式(I)和(II)中任一个的部分包括取代基RA、RB和RC。在一些实施方案中，RA为H。在一些实施方案中，RA为取代的酰基。在一些实施方案中，RA为未取代的酰基。在一些实施方案中，RA为乙酰基。在一些实施方案中，RA为–C(＝O)Rc(例如，–C(＝O)(取代或未取代的烷基))。在一些实施方案中，RA为–C(＝O)ORc(例如，–C(＝O)O(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)OH)。在一些实施方案中，RA为–C(＝O)N(Rc)2(例如，–C(＝O)NH2、–C(＝O)NH(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)N(取代或未取代的烷基)2)。在一些实施方案中，RA为未取代的烷基.在一些实施方案中，RA为取代的烷基。在一些实施方案中，RA为未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA为取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA为被至少一个卤素取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA为–CH3。在一些实施方案中，RA为取代的甲基。在一些实施方案中，RA为–CH2F、–CHF2或–CF3。在一些实施方案中，RA为 Et、取代的乙基、Pr、取代的丙基、Bu或取代的丁基。在一些实施方案中， RA为未取代的烯基。在一些实施方案中，RA为取代的烯基。在一些实施方案中，RA为未取代的C1-6烯基。在一些实施方案中，RA为取代的C1-6烯基。在一些实施方案中，RA为未取代的炔基。在一些实施方案中，RA为取代的炔基。在一些实施方案中，RA为未取代的C1-6炔基。在一些实施方案中， RA为取代的C1-6炔基。在一些实施方案中，RA为取代的碳环基。在一些实施方案中，RA为未取代的碳环基。在一些实施方案中，RA为饱和碳环基。在一些实施方案中，RA为不饱和碳环基。在一些实施方案中，RA为在碳环系统中任选包括1、2或3个双键的3-至8-元单环碳环基。在一些实施方案中，RA为在碳环系统中任选包括1、2、3或4个双键的5-至14-元二环碳环基。在一些实施方案中，RA为在碳环系统中任选包括1、2、3、4或5个双键的5-至20-元三环碳环基。在一些实施方案中，RA为在碳环系统中任选包括1、2、3、4、5或6个双键的5-至26-元四环碳环基。在一些实施方案中， RA为取代的杂环基。在一些实施方案中，RA为未取代的杂环基。在一些实施方案中，RA为饱和杂环基。在一些实施方案中，RA为不饱和杂环基。在一些实施方案中，RA为在杂环系统中任选包括1或2个双键的3-至8-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA为在杂环系统中任选包括1、2或3个双键的5-至 14-元二环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA为在所述杂环系统中任选包括1、2、3 或4个双键的5-至20-元三环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2、3、4 或5个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA为取代的芳基。在一些实施方案中，RA为未取代的芳基。在一些实施方案中，RA为6-14元芳基。在一些实施方案中，RA为6-至10-元芳基。在一些实施方案中，RA为取代的苯基。在一些实施方案中，RA为未取代的苯基。在一些实施方案中， RA为取代的萘基。在一些实施方案中，RA为未取代的萘基。在一些实施方案中，RA为取代的杂芳基。在一些实施方案中，RA为未取代的杂芳基。在一些实施方案中，RA为5-至6-元单环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的 1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA为8-至 10-元二环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。
在一些实施方案中，RA为表1A中所示的基团。在一些实施方案中， RA为表1B中所示的基团。
表1A.示例性RA基团
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表1B.示例性RA和RB基团
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RA基团可独立地包括一个或多个取代基Rc。在一些实施方案中，所有 Rc都是相同的。在一些实施方案中，两个Rc彼此是不同的。在一些实施方案中，至少一个Rc为H。在一些实施方案中，每个Rc为H。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的酰基(例如，乙酰基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为–CH3。在一些实施方案中，至少一个Rc为–CF3、未取代的乙基、全氟乙基、未取代的丙基、全氟丙基、未取代的丁基或全氟丁基。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的烯基(例如，取代或未取代的C1-6烯基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的炔基(例如，取代或未取代的C1-6炔基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中任选包括1、 2或3个双键的取代或未取代的3-至8-元单环碳环基；或在碳环系统中任选包括1、2、3或4个双键的取代或未取代的5-至14-元二环碳环基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中任选包括1或2个双键的取代或未取代的3-至8-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫；或在杂环系统中任选包括1、2或3个双键的取代或未取代的5-至14-元二环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的芳基(例如，取代或未取代的6-至10-元芳基)。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的苯基。在一些实施方案中，至少一个Rc为取代或未取代的杂芳基(例如，取代或未取代的 5-至6-元单环杂芳基，或取代或未取代的8-至10-元二环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，当连于氮原子时至少一个Rc为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，当连于氧原子时Rc为氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、 TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，当连于硫原子时Rc为硫保护基(例如，乙酰氨基甲基、 t-Bu、3-硝基-2-吡啶硫基、2-吡啶-硫基或三苯基甲基)。在一些实施方案中，两个Rc连接形成取代或未取代的杂环(例如，在杂环系统中任选包括1或2个双键的取代或未取代的3-至8-元单环杂环，其中在所述杂环系统中的1、 2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，两个Rc连接形成取代或未取代的杂芳环(例如，取代或未取代的5-至6-元单环杂芳环，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。
在一些实施方案中，RB为H。在一些实施方案中，RB为取代的酰基。在一些实施方案中，RB为未取代的酰基。在一些实施方案中，RB为乙酰基。在一些实施方案中，RB为–C(＝O)Rd(例如，–C(＝O)(取代或未取代的烷基))。在一些实施方案中，RB为–C(＝O)ORd(例如，–C(＝O)O(取代或未取代的烷基) 或–C(＝O)OH)。在一些实施方案中，RB为–C(＝O)N(Rd)2(例如，–C(＝O)NH2、–C(＝O)NH(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)N(取代或未取代的烷基)2)。在一些实施方案中，RB为未取代的烷基。在一些实施方案中，RB为取代的烷基。在一些实施方案中，RB为未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB为取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB为被至少一个卤素取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB为–CH3。在一些实施方案中，RB为取代的甲基。在一些实施方案中，RB为–CH2F、–CHF2或–CF3。在一些实施方案中，RB为乙基。在一些实施方案中，RB为丙基。在一些实施方案中，RB为丁基。在一些实施方案中，RB为戊基。在一些实施方案中，RB为己基。在一些实施方案中，RB为未取代的烯基.在一些实施方案中，RB为取代的烯基。在一些实施方案中，RB为未取代的C1-6烯基。在一些实施方案中，RB为取代的C1-6烯基。在一些实施方案中，RB为未取代的炔基。在一些实施方案中，RB为取代的炔基。在一些实施方案中，RB为未取代的C1-6炔基。在一些实施方案中，RB为取代的C1-6炔基。在一些实施方案中，RB为取代的碳环基。在一些实施方案中，RB为未取代的碳环基。在一些实施方案中，RB为饱和碳环基。在一些实施方案中，RB为不饱和碳环基。在一些实施方案中，RB为在碳环系统中任选包括1、2或3个双键的3-至8-元单环碳环基。在一些实施方案中，RB为在碳环系统中任选包括1、2、3或4个双键的5-至14-元二环碳环基。在一些实施方案中，RB为在碳环系统中任选包括1、2、3、4或 5个双键的5-至20-元三环碳环基。在一些实施方案中，RB为在碳环系统中任选包括1、2、3、4、5或6个双键的5-至26-元四环碳环基。在一些实施方案中，RB为取代的杂环基。在一些实施方案中，RB为未取代的杂环基。在一些实施方案中，RB为饱和杂环基。在一些实施方案中，RB为不饱和杂环基。在一些实施方案中，RB为在杂环系统中任选包括1或2个双键的3- 至8-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RB为在杂环系统中任选包括1、2或3个双键的5-至14-元二环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RB为在所述杂环系统中任选包括 1、2、3或4个双键的5-至20-元三环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、 2、3、4或5个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RB为取代的芳基。在一些实施方案中，RB为未取代的芳基。在一些实施方案中，RB为 6-14元芳基。在一些实施方案中，RB为6-至10-元芳基。在一些实施方案中，RB为取代的苯基。在一些实施方案中，RB为未取代的苯基。在一些实施方案中，RB为取代的萘基。在一些实施方案中，RB为未取代的萘基。在一些实施方案中，RB为取代的杂芳基。在一些实施方案中，RB为未取代的杂芳基。在一些实施方案中，RB为5-至6-元单环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中， RB为8-至10-元二环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。
在一些实施方案中，RB为如表1A所示的基团。在一些实施方案中， RB为如表1B所示的基团。
RB基团可独立地包括一个或多个取代基Rd。在一些实施方案中，所有 Rd都是相同的。在一些实施方案中，两个Rd彼此是不同的。在一些实施方案中，至少一个Rd为H。在一些实施方案中，每个Rd为H。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的酰基(例如，乙酰基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为–CH3。在一些实施方案中，至少一个Rd为–CF3、未取代的乙基、全氟乙基、未取代的丙基、全氟丙基、未取代的丁基或全氟丁基。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的烯基(例如，取代或未取代的C1-6烯基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的炔基(例如，取代或未取代的C1-6炔基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中任选包括1、2或3 个双键的取代或未取代的3-至8-元单环碳环基；或在碳环系统中任选包括1、2、3或4个双键的取代或未取代的5-至14-元二环碳环基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中任选包括1 或2个双键的取代或未取代的3-至8-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫；或在杂环系统中任选包括1、2或3个双键的取代或未取代的5-至14-元二环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的芳基(例如，取代或未取代的6-至10-元芳基)。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的苯基。在一些实施方案中，至少一个Rd为取代或未取代的杂芳基(例如，取代或未取代的5-至6-元单环杂芳基、或取代或未取代的8-至10-元二环杂芳基，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，至少一个Rd为连于氮原子时的氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，Rd为连于氧原子时的氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、 THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，Rd为连于硫原子时的硫保护基(例如，乙酰氨基甲基、t-Bu、3-硝基-2- 吡啶硫基、2-吡啶-硫基或三苯基甲基)。在一些实施方案中，两个Rd连接形成取代或未取代的杂环(例如，在杂环系统中任选包括1或2个双键的取代或未取代的3-至8-元单环杂环，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，两个Rd连接形成取代或未取代的杂芳环(例如，取代或未取代的5-至6-元单环杂芳环，其中在所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。
在一些实施方案中，RA和RB都是相同的。在一些实施方案中，RA和 RB彼此是不同的。在一些实施方案中，RA为表1B项目表中所示的基团，和 RB为在所述项目表中所示的其他基团。
在一些实施方案中，RA和RB连接形成取代或未取代的、饱和或不饱和的碳环。在一些实施方案中，RA和RB连接形成3-至8-元单环碳环，任选地在碳环系统中包括1、2或3个双键。在一些实施方案中，RA和RB连接形成 5-至14-元二环碳环，任选地在所述碳环系统中包括1、2、3或4个双键。在一些实施方案中，RA和RB连接形成5-至20-元三环碳环，任选地在所述碳环系统中包括1、2、3、4或5个双键。
在一些实施方案中，RA和RB连接形成取代或未取代的、饱和或不饱和的杂环。在一些实施方案中，RA和RB连接形成3-至8-元单环杂环，任选地在杂环系统中包括1或2个双键，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA和RB连接形成5-至14-元二环杂环，任选地在杂环系统中包括1、2或3个双键，其中在所述杂环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫。在一些实施方案中，RA和RB连接形成5-至20-元三环杂环，任选地在杂环系统中包括1、2、3、4 或5个双键，其中在所述杂环系统中的1、2、3、4或5个原子独立地为氮、氧或硫。
在一些实施方案中，RA和RB连接形成表1C中所示的基团。
表1C.示例性基团
在一些实施方案中，RC为H。在一些实施方案中，RC为取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me、–CF3、未取代的乙基、全氟乙基、未取代的丙基、全氟丙基、未取代的丁基或全氟丁基)。在一些实施方案中，RC为Me。在一些实施方案中，RC为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
在一些实施方案中，RA1为标记物(例如，生物素衍生物、放射性标签或荧光团)。式(I)和(II)中的任一个可包括标记物。标记物为标签。术语“标签”包括能使其所连接的化合物被捕捉、检测或可见的任意部分。标签可为直接可检测的(即，其不需要任何进一步的反应或操作就为可检测的，例如，荧光团或生色团为直接可检测的)或其可为间接可检测(即，其通过与另一可检测的实体反应或结合而被制备为可检测的，例如，半抗原在与包含受体例如荧光团的合适抗体反应后通过免疫染色为可检测的)。适用于本发明的标签可以通过多种方式检测，包括但不限于光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学方法。合适的标签包括但不限于亲和标记物、放射性标签 (例如，放射性核素(例如，32P、35S、3H、14C、125I、131I等))、荧光染料、磷光染料、化学发光剂(例如，吖啶酯、稳定化二氧杂环丁烷等)、光谱可分辨的无机荧光半导体纳米晶体(即，量子点)、金属纳米颗粒(例如，金、银、铜和铂)或纳米团簇、酶(例如，在ELISA中使用的那些，即辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)、比色标签(例如，染料、胶体金等)、磁性标签(例如DynabeadsTM)和半抗原。
在一些实施方案中，所述标签包含荧光部分。多种化学结构和物理特性的大量已知的荧光标记部分适用于本发明的实践中。适当的荧光染料包括但不限于,荧光素和荧光素染料(例如，荧光素异硫氰酸(FITC)、萘荧光素、4′,5′- 二氯-2′,7′-二甲氧基-荧光素、6-羧基荧光素或FAM)、羰花青、部花青、苯乙烯染料、菁染料、藻红蛋白、赤藓红、曙红、罗丹明染料(例如，羧基四甲基罗丹明或TAMRA、羧罗丹明6G、羧基-X-罗丹明(ROX)、丽丝胺罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明绿、罗丹明红、四甲基罗丹明或TMR),香豆素和香豆素染料(例如，甲氧基香豆素、二烷基氨基香豆素、羟基香豆素和氨基甲基香豆素或AMCA)、俄勒冈绿染料(例如，俄勒冈绿488,俄勒冈绿500,俄勒冈绿514)、德克萨斯红、德克萨斯红-X、SpectrumRedTM、Spectrum GreenTM、花青染料(例如，Cy-3TM,Cy-5TM,Cy-3.5TM,Cy-5.5TM)、Alexa Fluor染料(例如，Alexa Fluor 350,Alexa Fluor 488,Alexa Fluor 532,Alexa Fluor 546,Alexa Fluor 568,Alexa Fluor 594,Alexa Fluor 633,Alexa Fluor 660和AlexaFluor680)、BODIPY染料(例如，BODIPY FL,BODIPY R6G,BODIPY TMR, BODIPY TR,BODIPY530/550,BODIPY 558/568,BODIPY 564/570,BODIPY 576/589,BODIPY 581/591,BODIPY630/650,BODIPY 650/665),IRDyes(例如，IRD40、IRD 700、IRD 800)等。合适的荧光染料的更多实例和用于将荧光染料偶联至其他化学实体的方法参见例如The Handbook ofFluorescent Probes and Research Products,9th Ed.,Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oregon。
术语“发光”或“发光的”是指任何光发射方法包括荧光、磷光、闪烁、化学发光和生物发光。
术语“化学发光”，“化学发光的”或“化学发光底物”是指由于化学反应而产生光的化学物质。常用的化学发光底物包括但不限于鲁米诺(5-氨基 -2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮)、洛粉碱(Lophine)(2,4,5-三苯基咪唑)、光泽精(双-N- 甲基吖啶鎓)、其他吖啶酯、萤光素-荧光素酶和二甲基噻吩衍生物。例如，在本领域公知的Amersham的ECLTM检测系统中，吖啶鎓底物被辣根过氧化物酶氧化以产生吖啶酯，其在碱性pH下与过量的过氧化物反应，以产生在 430nm处可见的化学发光。
在一些实施方案中，所述标签包含亲和标记物。术语“亲和标记物”包括参与有助于捕获和/或分子纯化的相互作用的任何部分(例如抗原和抗体，酶和底物，受体和配体)。这种亲和部分的实例包括小化学化合物(例如生物素及其衍生物)，短氨基酸序列(例如，长度为2至20个氨基酸，长度为4至 12个氨基酸)，例如(His)6标记物、(Leu)3标记物或FLAG标记物。亲和部分也可以是氟标记物，其是允许通过其与氟相(例如，氟液体相，氟固体)的相互作用回收分子的氟化烷基(例如，全氟烷基)。其它亲和部分是本领域公知的。在一些实施方案中，所述亲和部分选自(His)6标记物、(His)4标记物、 (His)3标记物、(His)2标记物、(Leu)4标记物、(Leu)3标记物、(Leu)2标记物、 HA标签、FLAG标记物、VSV-G标记物、HSV标记物、V5标记物、生物素和它们的衍生物、碳水化合物和聚糖。在一些实施方案中，所述亲和部分为C4-C20全氟烷基(例如，C6-C12全氟烷基、C6-C8全氟烷基、C4全氟烷基、 C5全氟烷基、C6全氟烷基、C7全氟烷基、C8全氟烷基、C9全氟烷基、C10全氟烷基、C11全氟烷基、C12全氟烷基、C13全氟烷基、C14全氟烷基、C15全氟烷基、C16全氟烷基、C17全氟烷基、C18全氟烷基、C19全氟烷基或C20全氟烷基)。在一些实施方案中，所述亲和部分为生物素。在一些实施方案中，所述亲和部分为C8全氟烷基。
标签可包括二价连接基。在一些实施方案中，所述二价连接基为任选取代的C1-60烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个碳单元独立地被以下替换：-C＝O-、-O-、-S-、-NRL3a-、-NRL3aC(＝O)-、-C(＝O)NRL3a-、-SC(＝O)-、 -C(＝O)S-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-、-NRL3aC(＝S)-、-C(＝S)NRL3a-、反式 -CRL3b＝CRL3b-、顺式-CRL3b＝CRL3b-、-C≡C-、-S(＝O)-、-S(＝O)O-、-OS(＝O)-、 -S(＝O)NRL3a-、-NRL3aS(＝O)-、-S(＝O)2-、-S(＝O)2O-、-OS(＝O)2-、-S(＝O)2NRL3a- 或-NRL3aS(＝O)2-。在一些实施方案中，所述二价连接基为PEG部分(例如，–(PEG)1-20–、–(PEG)1-12–、–(PEG)1-6–、–(PEG)6-12–)。在一些实施方案中，所述二价连接基为–(CH2)1-40–(例如，–(CH2)1-20–、–(CH2)1-10–)。在一些实施方案中，所述二价连接基为一个或多个PEG部分(例如，独立地为–(PEG)1-20–、–(PEG)1-12–、–(PEG)1-6–、–(PEG)6-12–)和一个或多个–(CH2)1-40–部分(例如，独立地为–(CH2)1-20–、–(CH2)1-10–)的组合，任选地其中所述PEG部分和/或所述–(CH2)1-40–部分的一个或多个亚甲基单元独立地被–C(＝O)NH–或–NHC(＝O)–替换。
式(I)可包括一个或多个取代基Ra。当式(I)包括两个或多个Ra时，任意两个Ra可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个Ra为H。在一些实施方案中，每个Ra为H。在一些实施方案中，至少一个Ra为取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)、连于氧原子时的氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、 Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)或连于硫原子时的硫保护基(例如，乙酰氨基甲基、t-Bu、3-硝基-2-吡啶硫基、2-吡啶-硫基或三苯基甲基)，或两个Ra连接形成取代或未取代的杂环或取代或未取代的杂芳环。
式(I)在2,7-二氮杂吲哚基环的1-位包括取代基RA2。在一些实施方案中， RA2为H。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的酰基。在一些实施方案中，RA2为–C(＝O)Ra，任选地其中Ra为取代或未取代的C1-6烷基(例如， Me)或取代或未取代的C2-6烯基。在一些实施方案中，RA2为–C(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中，RA2为–C(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RA2为–C(＝O)ORa，任选地其中Ra为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、 TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RA2为–C(＝O)N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氮保护基(例如，Bn、 Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，RA2为Me。在一些实施方案中，RA2为Et。在一些实施方案中，RA2为n-Pr。在一些实施方案中，RA2为i-Pr。在一些实施方案中，RA2为Bu(例如，n-Bu、i-Bu、sec-Bu或t-Bu)。在一些实施方案中，RA2为未取代的戊基(例如，未取代的正戊基、未取代的叔戊基、未取代的新戊基、未取代的异戊基、未取代的仲戊基或未取代的3-戊基)。在一些实施方案中， RA2为sec-Bu、t-Bu或未取代的3-戊基。在一些实施方案中，RA2为–CF3、Bn、全氟乙基、全氟丙基、全氟丁基或全氟戊基。在一些实施方案中，RA2为–CH2C(＝O)–NH–N＝C(Ra)2。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基)。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的环丙基。在一些实施方案中，RA2为未取代的环丙基。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的环丁基。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RA2为未取代的环丙基、未取代的环丁基或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的四氢吡喃基。在一些实施方案中，RA2为下式：在一些实施方案中，RA2为下式：/>在一些实施方案中，RA2为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、或取代或未取代的哌嗪基。在一些实施方案中，RA2为下式：/> 其中每个Ra独立地为未取代的C1-6烷基(例如，Me))。在一些实施方案中，RA2为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA2为Boc。在一些实施方案中，RA2为弹头。
式(I)和(II)中的任意一个可包括一个或多个弹头，其独立地选自：
/>
其中：
L3为键或任选取代的C1-4烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个碳单元独立地被以下替换：-C＝O-、-O-、-S-、-NRL3a-、-NRL3aC(＝O)-、 -C(＝O)NRL3a-、-SC(＝O)-、-C(＝O)S-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-、-NRL3aC(＝S)-、 -C(＝S)NRL3a-、反式-CRL3b＝CRL3b-、顺式-CRL3b＝CRL3b-、-C≡C-、-S(＝O)-、 -S(＝O)O-、-OS(＝O)-、-S(＝O)NRL3a-、-NRL3aS(＝O)-、-S(＝O)2-、-S(＝O)2O-、 -OS(＝O)2-、-S(＝O)2NRL3a-或-NRL3aS(＝O)2-，其中RL3a为氢、取代或未取代的 C1-6烷基或氮保护基，并且其中每次出现的RL3b独立地为氢、卤素、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或两个RL3b基团连接形成任选取代的碳环或任选取代的杂环；
L4为键或任选取代的支链或非支链C1-6烃链；
RE1、RE2和RE3各自独立地为氢、卤素、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、-CN、-CH2OREE、-CH2N(REE)2、-CH2SREE、-OREE、-N(REE)2、-Si(REE)3或-SREE，其中每次出现的REE独立地为氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或两个 REE基团连接形成任选取代的杂环；或RE1和RE3，或RE2和RE3，或RE1和 RE2连接形成任选取代的碳环或任选取代的杂环；
RE4为离去基团；
RE5为卤素；
RE6为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
每个Y独立地为O、S或NRE7，其中RE7为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
a为1或2；和
在化学键允许的情况下，每个z独立地为0、1、2、3、4、5或6。
在一些实施方案中，式(I)和(II)中的任一个不包括弹头。在一些实施方案中，式(I)和(II)中的任一个包括一个弹头。在一些实施方案中，式(I)和(II) 中的任一个包括两个或更多个弹头。当式(I)或(II)包括两个或更多个弹头时，所述弹头中的两个可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1a)：在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1b)：/>在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1c)：/> 在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1d)：/>在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1e)：/>在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1f)：/>在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1g)：在一些实施方案中，至少一个弹头为/>在一些实施方案中，至少一个弹头为/>(例如，/>)。在一些实施方案中，至少一个弹头为/>在一些实施方案中，至少一个弹头为/>在一些实施方案中，至少一个弹头为式(i-1h)：/>(例如，/>在一些实施方案中，至少一个弹头为/>(例如，/>)。在一些实施方案中，至少一个弹头为/>(例如，/>)。在一些实施方案中，至少一个弹头为(例如，/>)。
在一些实施方案中，RA2为标记物(例如，生物素衍生物、放射性标签或荧光团)。
式(I)在2,7-二氮杂吲哚基环的3-位包括取代基RA3。在一些实施方案中，RA3为H。在一些实施方案中，RA3为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA3为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA3为 Me。在一些实施方案中，RA3为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、 Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RA3为–ORa，任选地其中Ra为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)、取代或未取代的酰基或氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、 Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RA3为–OC(＝O)Ra，任选地其中Ra为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me) 或取代或未取代的C2-6烯基(例如，取代或未取代的乙烯基)。在一些实施方案中，RA3为–OC(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RA3为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)、取代或未取代的酰基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA3为–N(Ra)C(＝O)Ra，任选地其中每个Ra独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的C2-6烯基(例如，取代或未取代的乙烯基)。在一些实施方案中，RA3为–NHC(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RA3为弹头。
式(I)在氮原子上包括取代基RA4。在一些实施方案中，RA4为H。在一些实施方案中，RA4为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA4为Me。在一些实施方案中，RA4为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、 Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RA4为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
式(I)包括取代基RA5。在一些实施方案中，RA5为下式：(例如，其中RA7为Et、Pr或Bu)。在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA6为H。在一些实施方案中，RA6为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA6为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA6为Me。在一些实施方案中，RA6为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RA6为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RA6为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA6为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA6为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RA7为H。在一些实施方案中，RA7为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA7为取代或未取代的 C2-6烷基。在一些实施方案中，RA7为Et。在一些实施方案中，RA7为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RA7为n-Pr。在一些实施方案中，RA7为i-Pr。在一些实施方案中，RA7为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RA7为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RA7为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RA7为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3- 至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，RA7为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RA7为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA7为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA7为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RA7为取代或未取代的环丙基或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
在一些实施方案中，RA5为下式：(例如，/>其中 RA9为Me、Et、Pr或Bu)。下式的部分：/>也包括其互变异构形式/>在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA8为H。在一些实施方案中，RA8为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA8为取代或未取代的 C1-6烷基。在一些实施方案中，RA8为Me。在一些实施方案中，RA8为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RA8为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RA8为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA8为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如， Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA8为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RA9为H。在一些实施方案中，RA9为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中， RA9为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA9为Me。在一些实施方案中，RA9为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RA9为Et。在一些实施方案中，RA9为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RA9为n-Pr。在一些实施方案中，RA9为i-Pr。在一些实施方案中， RA9为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RA9为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RA9为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RA9为在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中， RA9为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RA9为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的 C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA9为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、 Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA9为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RA9为取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。
在一些实施方案中，RA5为下式：在一些实施方案中， RA5为下式：(例如，/>)。在一些实施方案中，RA5为下式：/>(例如，/>)。在一些实施方案中，RA5为下式：/>(例如，/> )。在一些实施方案中，RA5为下式：
在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA10为–ORa(例如，–OH)。在一些实施方案中，RA10为–N(Ra)2。在一些实施方案中，RA10为–NH2。在一些实施方案中，RA10为–NHRa，其中Ra为取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA10为弹头。在一些实施方案中，RA10为–NHC(＝O)Ra，任选地其中Ra为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中，RA10为–NHC(＝O)CH＝CH2。当式(I)包括两个或多个RA11时，任意两个RA11可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个RA11为卤素。在一些实施方案中，至少一个RA11为Br。在一些实施方案中，至少一个RA11为F、Cl或I。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，至少一个RA11为Me。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，至少一个RA11为Et。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，至少一个RA11为n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA11为i-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，至少一个RA11为Me、Et 或n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA11为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基 (例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，至少一个RA11为在碳环系统中包含 0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，至少一个RA11为–ORa(例如，–OH 或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，至少一个RA11为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，至少一个RA11为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，至少一个RA11为取代或未取代的 C1-6烷基、取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，n为 4。
在一些实施方案中，RA5为下式：在一些实施方案中， RA5为下式：(例如，/>例如/>)。在一些实施方案中，RA12为H。在一些实施方案中，RA12为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA12为Me。在一些实施方案中，RA12为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RA12为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA12为弹头。当式(I)包括两个或多个RA13时，任意两个RA13可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个RA13为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，至少一个RA13为Me。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，至少一个RA13为Et。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，至少一个RA13为n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA13为i-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，至少一个RA13为Me、Et 或n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RA13为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基 (例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，至少一个RA13为在碳环系统中包含 0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，至少一个RA13为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，至少一个RA13为–ORa(例如，–OH 或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，至少一个RA13为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，至少一个RA13为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，至少一个RA13为卤素、取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。在一些实施方案中，m为0。在一些实施方案中，m为1。在一些实施方案中，m为2。在一些实施方案中，m为3、4、5、6、7或8。在一些实施方案中，m为9。
式(I)包括取代基RA5。在一些实施方案中，RA5为下式：(例如，/>任选地其中RA16为Et、Pr或Bu)。在一些实施方案中， RA5为下式：在一些实施方案中，RA5为下式：/>在一些实施方案中，RA14为H。在一些实施方案中，RA14为卤素(例如，F、 Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA14为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA14为Me。在一些实施方案中，RA14为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RA14为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、 Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RA14为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA14为–N(Ra)2，任选地其中每个 Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA14为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RA15为H。在一些实施方案中，RA15为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RA15为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA15为Me。在一些实施方案中，RA15为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RA15为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RA15为–ORa(例如，–OH 或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA15为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA15为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RA16为H。在一些实施方案中，RA16为卤素(例如，F、Cl、Br或 I)。在一些实施方案中，RA16为取代或未取代的C2-6烷基。在一些实施方案中，RA16为Et。在一些实施方案中，RA16为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RA16为n-Pr。在一些实施方案中，RA16为i-Pr。在一些实施方案中，RA16为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RA16为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RA16为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RA16为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，RA16为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RA16为–ORa(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RA16为–N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA16为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RA16为取代或未取代的环丙基或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA17为H。在一些实施方案中，RA17为取代或未取代的酰基。在一些实施方案中，RA17为–C(＝O)Ra，任选地其中Ra为取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的C2-6烯基。在一些实施方案中，RA17为弹头。在一些实施方案中， RA17为–C(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中， RA17为–C(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RA17为–C(＝O)ORa，任选地其中Ra为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RA17为–C(＝O)N(Ra)2，任选地其中每个Ra独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RA17为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RA17为Me。在一些实施方案中，RA17为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RA17为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或 Ts)。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
/>
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中RA14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中RA2为氮保护基(例如，Boc)。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
任选地其中每个RA2为i-Pr。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中每个k独立地为3至11的整数，包括端点。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
示例性的式(I)化合物包括但不限于：
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
示例性的式(I)化合物进一步包括但不限于：
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为EZ05-TOM、EZ05-FITC、 EZ-TAMRA或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药。
在一些实施方案中，所述式(I)化合物为EZ05_生物素化的、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药。
在另一个方面，本申请提供式(II)化合物、及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药：
其中：
RB1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORb、–N(Rb)2、–SRb、–CN、–SCN、–C(＝NRb)Rb、–C(＝NRb)ORb、–C(＝NRb)N(Rb)2、–C(＝O)Rb、–C(＝O)ORb、–C(＝O)N(Rb)2、–NO2、–NRbC(＝O)Rb、–NRbC(＝O)ORb、–NRbC(＝O)N(Rb)2、–OC(＝O)Rb、–OC(＝O)ORb、–OC(＝O)N(Rb)2、标签或
每个Rb独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基或连于硫原子时的硫保护基，或两个Rb连接形成取代或未取代的杂环或取代或未取代的杂芳环；
RA为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
RB为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；
或RA和RB连接形成取代或未取代的碳环、或取代或未取代的杂环；
RC为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
RB2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、氮保护基、标签或弹头；和
RB3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb、–N(Rb)2或弹头；
RB4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RB5为下式：
其中：
RB6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基，或在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基，或在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB10为–ORb–N(Rb)2或弹头；
每个RB11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
u为0、1、2、3或4；
RB12为氢、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头；
每个RB13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
v为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RB14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORb或–N(Rb)2；和
RB17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头。
在一些实施方案中，所述EZH2抑制剂为式(II)化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中：
RB1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORb、–N(Rb)2、–SRb、–CN、–SCN、–C(＝NRb)Rb、–C(＝NRb)ORb、–C(＝NRb)N(Rb)2、–C(＝O)Rb、–C(＝O)ORb、–C(＝O)N(Rb)2、–NO2、–NRbC(＝O)Rb、–NRbC(＝O)ORb、–NRbC(＝O)N(Rb)2、–OC(＝O)Rb、–OC(＝O)ORb或–OC(＝O)N(Rb)2；
每个Rb独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基或连于硫原子时的硫保护基，或两个Rb连接形成取代或未取代的杂环、或取代或未取代的杂芳环；
RB2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基或氮保护基；
RB3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RB5为下式：
其中：
RB6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基或在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB10为–ORb或–N(Rb)2；
每个RB11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
u为0、1、2、3或4；
RB12为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
每个RB13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
v为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RB14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORb或–N(Rb)2；和
RB17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
式(II)在吡啶环上包括取代基RB1。在一些实施方案中，RB1为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，RB1为Me。在一些实施方案中，RB1为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的烯基(例如，取代或未取代的C2-6烯基)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的炔基(例如，取代或未取代的C1-6炔基)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的哌嗪基。在一些实施方案中，RB1为下式：其中RB14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。在一些实施方案中，RB1为下式：/>在一些实施方案中，RB1为下式：/>其中RB14为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中， RB1为下式：/>在一些实施方案中， RB1为下式：/>其中LB为键或取代或未取代的C1-100烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个链原子独立地被–O–、–S–或–NRb–替换；和XB为小分子、肽、蛋白或多核苷酸。在一些实施方案中，RB1为下式：/>其中z为0或1、w为0至11的整数，包括端点值，x为0至10的整数，包括端点值和y为0至10的整数，包括端点值。在一些实施方案中，w为3至11的整数，包括端点值、x为0和y为0、1、 2、3、4、5或6。在一些实施方案中，XB为小分子。在一些实施方案中， XB为小分子药物(例如，/> 其中ZB为–O–或–NH–或本文描述的为小分子的其他药物)。在一些实施方案中，XB为小分子标签(例如，生物素部分(例如，/>)或小分子荧光团)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、取代或未取代的氮杂环庚烷基、或取代或未取代的二氮杂环庚烷基。在一些实施方案中，RB1为下式：/> 其中每个Rb独立地为未取代的C1-6烷基(例如，Me))。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的芳基(例如，取代或未取代的6-至10- 元芳基)。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的苯基。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的杂芳基(例如，取代或未取代的5-至6-元单环杂芳基，其中所述杂芳环系统中的1、2、3或4个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RB1为–ORb(例如，–OH、–O(取代或未取代的C1-6烷基) (例如，–OMe、–OEt、–OPr、–OBu或–OBn)或–O(取代或未取代的苯基)(例如，–OPh))。在一些实施方案中，RB1为–SRb(例如，–SH、–S(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–SMe、–SEt、–SPr、–SBu或–SBn)或–S(取代或未取代的苯基)(例如，–SPh))。在一些实施方案中，RB1为–N(Rb)2(例如，–NH2、–NH(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–NHMe)或–N(取代或未取代的C1-6烷基)–(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–NMe2))。在一些实施方案中，RB1为–CN。在一些实施方案中，RB1为–SCN或–NO2。在一些实施方案中，RB1为–C(＝NRb)Rb、–C(＝NRb)ORb或–C(＝NRb)N(Rb)2。在一些实施方案中，RB1为–C(＝O)Rb(例如，–C(＝O)(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)(取代或未取代的苯基))。在一些实施方案中，RB1为–C(＝O)ORb(例如，–C(＝O)OH、–C(＝O)O(取代或未取代的烷基)(例如，–C(＝O)OMe)或–C(＝O)O(取代或未取代的苯基))。在一些实施方案中，RB1为–C(＝O)N(Rb)2(例如，–C(＝O)NH2、–C(＝O)NH(取代或未取代的烷基)、–C(＝O)NH(取代或未取代的苯基)、–C(＝O)N(取代或未取代的烷基)–(取代或未取代的烷基)或–C(＝O)N(取代或未取代的苯基)–(取代或未取代的烷基))。在一些实施方案中，RB1为–NRbC(＝O)Rb(例如，–NHC(＝O)Me)。在一些实施方案中，RB1为–NRbC(＝O)ORb或–NRbC(＝O)N(Rb)2。在一些实施方案中，RB1为–OC(＝O)Rb、–OC(＝O)ORb或–OC(＝O)N(Rb)2。在一些实施方案中，RB1为取代或未取代的烷基、–ORb、–N(Rb)2、–C(＝O)ORb或–NRbC(＝O)Rb。在一些实施方案中，RB1为未取代的C1-6烷基、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe或–NHC(＝O)Me。在一些实施方案中，RB1为/>在一些实施方案中，RB1为标记物 (例如，生物素衍生物、放射性标签或荧光团)。
式(II)可包括一个或多个取代基Rb。当式(II)包括一个或多个Rb时，任两个Rb可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个Rb为H。在一些实施方案中，每个Rb为H。在一些实施方案中，至少一个Rb为取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)、连于氧原子时的氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、 Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)或连于硫原子时的硫保护基(例如，乙酰氨基甲基、t-Bu、3-硝基-2-吡啶硫基、2-吡啶-硫基或三苯基甲基)，或两个Rb连接形成取代或未取代的杂环、或取代或未取代的杂芳环。
式(II)在吲哚环的1-位包括取代基RB2。在一些实施方案中，RB2为H。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的酰基。在一些实施方案中，RB2为–C(＝O)Rb，任选地其中Rb为取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的C2-6烯基。在一些实施方案中，RB2为–C(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中，RB2为–C(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RB2为–C(＝O)ORb，任选地其中Rb为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RB2为–C(＝O)N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的烷基(例如，取代或未取代的C1-6烷基)。在一些实施方案中，RB2为Me。在一些实施方案中，RB2为Et。在一些实施方案中，RB2为n-Pr。在一些实施方案中，RB2为i-Pr。在一些实施方案中，RB2为Bu(例如，n-Bu、i-Bu、sec-Bu或t-Bu)。在一些实施方案中，RB2为未取代的戊基(例如，未取代的正戊基、未取代的叔戊基、未取代的新戊基、未取代的异戊基、未取代的仲戊基或未取代的3-戊基)。在一些实施方案中，RB2为sec-Bu、t-Bu 或未取代的3-戊基。在一些实施方案中，RB2为–CF3、Bn、全氟乙基、全氟丙基、全氟丁基或全氟戊基。在一些实施方案中，RB2为–CH2C(＝O)–NH–N＝C(Rb)2。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的碳环基(例如，在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基)。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的环丙基。在一些实施方案中，RB2为未取代的环丙基。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的环丁基。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RB2为未取代的环丙基、未取代的环丁基或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的杂环基(例如，在杂环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫)。在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的四氢吡喃基。在一些实施方案中，RB2为下式：在一些实施方案中，RB2为下式：在一些实施方案中，RB2为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基或取代或未取代的哌嗪基。在一些实施方案中，RB2为下式：/>/> 其中每个Rb独立地为未取代的C1-6烷基(例如，Me))。在一些实施方案中，RB2为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB2为Boc。在一些实施方案中，RB2为弹头。在一些实施方案中，RB2为标记物(例如，生物素衍生物、放射性标签或荧光团)。
式(II)在吲哚环的3-位包括取代基RB3。在一些实施方案中，RB3为H。在一些实施方案中，RB3为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中， RB3为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB3为Me。在一些实施方案中，RB3为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RB3为–ORb，任选地其中Rb为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)、取代或未取代的酰基或氧保护基(例如，甲硅烷基、 TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RB3为–OC(＝O)Rb，任选地其中Rb为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的 C2-6烯基(例如，取代或未取代的乙烯基)。在一些实施方案中，RB3为–OC(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RB3为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)、取代或未取代的酰基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB3为–N(Rb)C(＝O)Rb，任选地其中每个Rb独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的C2-6烯基(例如，取代或未取代的乙烯基)。在一些实施方案中，RB3为–NHC(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RB3为弹头。
式(II)在氮原子上包括取代基RB4。在一些实施方案中，RB4为H。在一些实施方案中，RB4为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB4为Me。在一些实施方案中，RB4为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、 Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RB4为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、 Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
式(II)包括取代基RB5。在一些实施方案中，RB5为式(ii-1)： (例如，/>其中RB7为Et、Pr或Bu)。在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB6为H。在一些实施方案中，RB6为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB6为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB6为Me。在一些实施方案中，RB6为取代的甲基(例如，–CF3或 Bn)。在一些实施方案中，RB6为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RB6为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB6为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB6为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RB7为H。在一些实施方案中，RB7为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB7为取代或未取代的C2-6烷基。在一些实施方案中，RB7为Et。在一些实施方案中，RB7为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RB7为n-Pr。在一些实施方案中，RB7为i-Pr。在一些实施方案中，RB7为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RB7为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RB7为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RB7为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3- 至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，RB7为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RB7为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB7为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB7为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RB7为取代或未取代的环丙基或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
在一些实施方案中，RB5为下式：(例如，/>其中 RB9为Me、Et、Pr或Bu)。下式的部分：/>也包括其互变异构形式/>在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB8为H。在一些实施方案中，RB8为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB8为取代或未取代的 C1-6烷基。在一些实施方案中，RB8为Me。在一些实施方案中，RB8为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RB8为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RB8为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB8为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如， Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB8为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RB9为H。在一些实施方案中，RB9为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中， RB9为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB9为Me。在一些实施方案中，RB9为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RB9为Et。在一些实施方案中，RB9为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RB9为n-Pr。在一些实施方案中，RB9为i-Pr。在一些实施方案中， RB9为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RB9为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RB9为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RB9为在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中， RB9为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RB9为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的 C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB9为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、 Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB9为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RB9为取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。
在一些实施方案中，RB5为下式：在一些实施方案中， RB5为下式：(例如，/>)。在一些实施方案中，RB5为下式：/>(例如，/>)。在一些实施方案中，RB5为下式：/>(例如，)。在一些实施方案中，RB5为下式： />在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB10为–ORb(例如，–OH)。在一些实施方案中，RB10为–N(Rb)2。在一些实施方案中，RB10为–NH2。在一些实施方案中，RB10为–NHRb，其中Rb为取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB10为弹头。在一些实施方案中，RB10为–NHC(＝O)Rb，任选地其中Rb为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中，RB10为–NHC(＝O)CH＝CH2。当式(II)包括两个或多个RB11时，任何两个RB11可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个RB11为卤素。在一些实施方案中，至少一个RB11为Br。在一些实施方案中，至少一个RB11为F、Cl或I。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，至少一个RB11为Me。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，至少一个RB11为Et。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，至少一个RB11为n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB11为i-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，至少一个RB11为Me、Et 或n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB11为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基 (例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，至少一个RB11为在碳环系统中包含 0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基、或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，至少一个RB11为–ORb(例如，–OH 或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，至少一个RB1为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，至少一个RB11为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，至少一个RB11为取代或未取代的 C1-6烷基、取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。在一些实施方案中，u为0。在一些实施方案中，u为1。在一些实施方案中，u为2。在一些实施方案中，u为3。在一些实施方案中，u为 4。
在一些实施方案中，RB5为下式：在一些实施方案中， RB5为下式：(例如，/>如/>)。在一些实施方案中，RB12为H。在一些实施方案中，RB12为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB12为Me。在一些实施方案中，RB12为–CF3、Bn、Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RB12为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或 Ts)。在一些实施方案中，RB12为弹头。当式(II)包括两个或多个RB13时，任意两个RB13可彼此相同或不同。在一些实施方案中，至少一个RB13为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，至少一个RB13为取代或未取代的 C1-6烷基。在一些实施方案中，至少一个RB13为Me。在一些实施方案中，至少一个RB13为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，至少一个RB13为Et。在一些实施方案中，至少一个RB13为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，至少一个RB13为n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB13为i-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB13为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，至少一个RB13为Me、Et或n-Pr。在一些实施方案中，至少一个RB13为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，至少一个RB13为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，至少一个RB13为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，至少一个 RB13为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，至少一个RB13为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，至少一个RB13为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，至少一个RB13为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，至少一个RB13为卤素、取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基或连于氮原子时的氮保护基。在一些实施方案中， v为0。在一些实施方案中，v为1。在一些实施方案中，v为2。在一些实施方案中，v为3、4、5、6、7或8。在一些实施方案中，v为9。
式(II)包括取代基RB5。在一些实施方案中，RB5为下式：(例如，任选地其中RB16为Et、Pr或Bu)。在一些实施方案中， RB5为下式：在一些实施方案中，RB5为下式：/>在一些实施方案中，RB14为H。在一些实施方案中，RB14为卤素(例如，F、 Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB14为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB14为Me。在一些实施方案中，RB14为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RB14为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RB14为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB14为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB14为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RB15为H。在一些实施方案中，RB15为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB15为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB15为Me。在一些实施方案中，RB15为取代的甲基(例如，–CF3或Bn)。在一些实施方案中，RB15为Et、取代的乙基(例如，全氟乙基)、Pr、取代的丙基(例如，全氟丙基)、Bu或取代的丁基(例如，全氟丁基)。在一些实施方案中，RB15为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB15为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB15为–NH2、–NHMe或–N(Me)2。在一些实施方案中，RB16为H。在一些实施方案中，RB16为卤素(例如，F、Cl、Br或I)。在一些实施方案中，RB16为取代或未取代的C2-6烷基。在一些实施方案中，RB16为 Et。在一些实施方案中，RB16为取代的乙基(例如，全氟乙基)。在一些实施方案中，RB16为n-Pr。在一些实施方案中，RB16为i-Pr。在一些实施方案中， RB16为取代的丙基(例如，全氟丙基)。在一些实施方案中，RB16为Bu或未取代的戊基。在一些实施方案中，RB16为取代的丁基(例如，全氟丁基)或取代的戊基(例如，全氟戊基)。在一些实施方案中，RB16为在碳环系统中包含 0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。在一些实施方案中，RB16为取代或未取代的环丙基、取代或未取代的环丁基或取代或未取代的环戊基。在一些实施方案中，RB16为–ORb(例如，–OH或–O(取代或未取代的C1-6烷基)(例如，–OMe))。在一些实施方案中，RB16为–N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如， Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB16为–NH2、–NHMe、–NHEt、–N(Me)2或–N(Et)2。在一些实施方案中，RB16为取代或未取代的环丙基或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB17为H。在一些实施方案中，RB17为取代或未取代的酰基。在一些实施方案中，RB17为–C(＝O)Rb，任选地其中Rb为取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或取代或未取代的C2-6烯基。在一些实施方案中，RB17为弹头。在一些实施方案中， RB17为–C(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。在一些实施方案中， RB17为–C(＝O)CH＝CH2。在一些实施方案中，RB17为–C(＝O)ORb，任选地其中Rb为H、取代或未取代的C1-6烷基(例如，Me)或氧保护基(例如，甲硅烷基、TBDPS、TBDMS、TIPS、TES、TMS、MOM、THP、t-Bu、Bn、烯丙基、乙酰基、特戊酰基或苯甲酰基)。在一些实施方案中，RB17为–C(＝O)N(Rb)2，任选地其中每个Rb独立地为H、取代或未取代的C1-6烷基 (例如，Me)或氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。在一些实施方案中，RB17为取代或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，RB17为Me。在一些实施方案中，RB17为–CF3、Bn、 Et、全氟乙基、Pr、全氟丙基、Bu或全氟丁基。在一些实施方案中，RB17为氮保护基(例如，Bn、Boc、Cbz、Fmoc、三氟乙酰基、三苯基甲基、乙酰基或Ts)。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中RB14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中RB2为氮保护基(例如，Boc)。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
任选地其中每个RB2为i-Pr。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
其中每个w独立地为3至11的整数，包括端点。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
或其上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，当RB2为i-Pr，RB3为氢和RB5为式(ii-1)时，则RB1不是Me、–OMe或–NH(＝O)Me。在一些实施方案中，当RB2为未取代的C3-5烷基，RB3为Me或卤素和RB5为式(ii-1) 时，则RB1不是Me、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe或–NH(＝O)Me。在一些实施方案中，当RB2为i-Pr，RB3为氢和RB5为式(ii-1)时，则RB1不是未取代的C1-6烷基、–ORb、–NH(＝O)Rb、或未取代的或被一个未取代的C1-6烷基取代的饱和6-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的两个原子独立地为氧或氮。在一些实施方案中，当RB2为未取代的C3-5烷基，RB3为Me或卤素，和RB5为式(ii-1)时，则RB1不是未取代的C1-6烷基、–ORb、–N(Rb)2、–C(＝O)ORb、–NH(＝O)Rb、或未取代的或被一个未取代的C1-6烷基取代的饱和6-元单环杂环基，其中所述杂环系统中的两个原子独立地为氧或氮；其中每个Rb独立地为H或未取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，当RB5为式 (ii-1)时，则RB2不是未取代的C3-5烷基。在一些实施方案中，当RB3为氢和 RB5为式(ii-1)时，则RB2不是i-Pr。在一些实施方案中，式(II)化合物不是下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：/>
示例性式(II)化合物包括但不限于：
/>
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
示例性式(II)化合物进一步包括但不限于：
及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前药。
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
/>
在一些实施方案中，式(I)或(II)化合物为可逆的EZH2抑制剂。在一些实施方案中，不包括弹头的式(I)或(II)化合物为可逆的EZH2抑制剂。在一些实施方案中，不包括弹头的式(I)或(II)化合物不与EZH2形成共价键。
在一些实施方案中，式(I)或(II)化合物为不可逆的EZH2抑制剂。在一些实施方案中，包括一个或多个弹头的式(I)或(II)化合物为不可逆的EZH2 抑制剂。在一些实施方案中，包括一个或多个弹头的式(I)或(II)化合物与 EZH2(例如，EZH2的半胱氨酸残基)形成一个或多个共价键。在一些实施方案中，包括一个或多个弹头的式(I)或(II)化合物与EZH2(例如，EZH2的半胱氨酸残基)通过EZH2与至少一个所述弹头的反应(例如，迈克尔加成)形成一个或多个共价键。
在一些实施方案中，所述不可逆EZH2抑制剂为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
/>
/>
在一些实施方案中，所述式(II)化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶型物、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前药：
药物组合物,试剂盒和给药
本申请还提供药物组合物，其包含本文描述的化合物和任选地药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，本文所述的化合物以有效量提供在所述药物组合物中。在一些实施方案中，所述有效量为治疗有效量。在一些实施方案中，所述有效量为预防有效量。在一些实施方案中，治疗有效量为有效抑制HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的异常活性的量。在一些实施方案中，治疗有效量为有效治疗疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))的量。在一些实施方案中，治疗有效量为有效抑制HMT(例如，EZH1、 EZH2、DOT1)的异常活性和治疗疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))的量。在一些实施方案中，治疗有效量为在细胞中有效诱导凋亡的量。在一些实施方案中，预防有效量为有效抑制HMT(例如， EZH1、EZH2、DOT1)的异常活性的量。在一些实施方案中，预防有效量为有效预防有需要的受试者的疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))或使有需要的受试者的疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))减轻的量。在一些实施方案中，预防有效量为有效抑制HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的异常活性的量和有效预防有需要的受试者的疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))或使有需要的受试者的疾病(例如，与HMT的异常活性相关的疾病(例如，增殖性疾病))减轻的量。在一些实施方案中，预防有效量为在细胞中有效诱导凋亡的量。
在一些实施方案中，有效量为以至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％有效抑制HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的活性的量。在一些实施方案中，所述有效量为以不多于10％、不多于20％、不多于30％、不多于40％、不多于50％、不多于60％、不多于70％、不多于80％、不多于90％、不多于95％或不多于98％有效抑制HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1) 的活性的量。
在一些实施方案中，所述受试者为动物。所述动物可为任一性别和可在任意发育阶段。在一些实施方案中，所述的受试者为人。在一些实施方案中，所述的受试者为非人动物。在一些实施方案中，所述的受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，所述的受试者为非人的哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者为家养动物，例如狗、猫、牛、猪、马、羊或山羊。在一些实施方案中，所述受试者为伴侣动物，例如狗或猫。在一些实施方案中，所述受试者为家畜动物，例如牛、猪、马、羊或山羊。在一些实施方案中，所述受试者为动物园动物。在其他实施方案中，所述受试者为研究动物，例如啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠)、狗、猪或非人灵长类动物。在一些实施方案中，所述动物为基因工程动物。在一些实施方案中，所述动物为转基因动物(例如，转基因小鼠和转基因猪)。在一些实施方案中，所述受试者为鱼或爬行动物。
在一些实施方案中，所述细胞存在于体外。在一些实施方案中，所述细胞存在于体内。
本文所述药物组合物可通过药理学领域任何已知的方法制备。通常，这种制备方法包括以下步骤：将本文所述化合物(即，所述“活性成分”)与载体或赋形剂，和/或一种或多种其他助剂组合，然后，如果必须和/或需要，将该产物成型和/或包装成所需的单-或多剂量单位。
药物组合物可以单一单位剂量和/或多个单一单位剂量进行制备、包装和/或散装出售。“单位剂量”是包含预定量活性成分的药物组合物的离散量 (discrete amount)。所述活性成分的量通常等于给药至受试者的活性成分的剂量和/或该剂量的简单分数，例如，该剂量的二分之一或三分之一
在本发明药物组合物中的活性成分、药学上可接受的赋形剂和/或任意额外的成分的相对量将根据所治疗的受试者的特性、体型和/或病症而变化且进一步地根据该组合物的给药途径而变化。该组合物可包含0.1％至100％ (w/w)的活性成分。
在制备所提供的药物组合物中所用的药学上可接受的赋形剂包括惰性稀释剂、分散剂和/或造粒剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、结合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。赋形剂例如可可脂和栓剂蜡、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂也可存在于该组合物中。
示例性的稀释剂包括碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠、乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、糖粉及其混合物。
示例性的造粒剂和/或分散剂包括土豆淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、淀粉羟乙酸钠、粘土、海藻酸、瓜尔胶、柑橘浆、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联聚(乙烯基-吡咯烷酮)(交聚维酮)、羧甲基淀粉钠(淀粉羟乙酸钠)、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠(交联羧甲纤维素)、甲基纤维素、预胶化淀粉(淀粉 1500)、微晶淀粉、水不溶性淀粉、羧甲基纤维素钙、硅酸镁铝(Veegum)、月桂基硫酸钠、季铵化合物及其混合物。
示例性的表面活性剂和/或乳化剂包括天然乳化剂(例如，阿拉伯胶、琼脂、海藻酸、海藻酸钠、黄蓍胶、chondrux、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、皂土(例如，膨润土(硅酸铝) 和Veegum(硅酸镁铝))、长链氨基酸衍生物、高分子量醇(例如，硬脂醇、鲸蜡醇、单硬脂酸三乙酸甘油酯(triacetin monostearate)、乙二醇二硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯和丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如，羧基聚亚甲基(carboxy polymethylene)、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯基聚合物)、角叉菜胶、纤维素衍生物(例如，羧甲基纤维素钠、粉状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯聚氧乙烯脱水山梨糖醇/>聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯/>脱水山梨糖醇单棕榈酸酯/>脱水山梨糖醇单硬脂酸酯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯/>单油酸甘油酯、脱水山梨糖醇单油酸酯/>聚氧乙烯酯(例如，聚氧乙烯单硬脂酸酯/>聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚甲醛硬脂酸酯和/>)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如，/>)、聚氧乙烯醚(例如，聚氧乙烯月桂基醚/>)、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、二甘醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯，月桂基硫酸钠、/>F-68、泊洛沙姆P-188、西曲溴铵、西吡氯铵、苯扎氯铵、多库酯钠和/或其混合物。
示例性的粘合剂包括淀粉(例如，玉米淀粉和淀粉糊)、明胶、糖(例如，蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露糖醇等)、天然和合成树胶(例如，阿拉伯胶、海藻酸钠、爱尔兰苔藓提取物、潘瓦尔胶(panwar Rum)、印度胶(ghatti gum)、isabgol壳的粘胶(mucilage of isabgol husk)、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、乙酸纤维素、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、硅酸镁铝和落叶松阿拉伯半乳聚糖(larch arabogalactan))、海藻酸盐、聚氧化乙烯、聚乙二醇、无机钙盐、硅酸、聚甲基丙烯酸酯、蜡、水、乙醇和/或其混合物。
示例性的防腐剂包括抗氧化剂、螯合剂、抗微生物防腐剂、抗真菌防腐剂、抗原生动物防腐剂、乙醇防腐剂、酸性防腐剂和其他防腐剂。在一些实施方案中，所述防腐剂是抗氧化剂。在其他实施方案中，所述防腐剂是螯合剂。
示例性的抗氧化剂包括α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚、丁羟甲苯、硫代甘油、焦亚硫酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和亚硫酸钠。
示例性的螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)及其盐和水合物(例如，乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、乙二胺四乙酸二钠钙、乙二胺四乙酸二钾等)、柠檬酸及其盐和水合物(例如，柠檬酸单水合物)、富马酸及其盐和水合物、苹果酸及其盐和水合物、磷酸及其盐和水合物以及酒石酸及其盐和水合物。示例性的抗微生物防腐剂包括苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝丙二醇、西曲溴铵、西吡氯铵、氯己定、三氯叔丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶、咪脲、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇和硫柳汞。
示例性的抗真菌防腐剂包括对羟苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯甲酸钾、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠和山梨酸。
示例性的醇防腐剂包括乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚化合物、双酚、三氯叔丁醇、羟基苯甲酸酯和苯基乙醇。
示例性的酸性防腐剂包括维生素A、维生素C、维生素E、β胡萝卜素、柠檬酸、乙酸、脱氢乙酸、抗坏血酸、山梨酸和植酸。
其他防腐剂包括生育酚、生育酚乙酸酯、甲磺酸得立肟(deteroxime mesylate)、西曲溴铵、丁羟茴香醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸钠(SLS)、月桂基醚硫酸钠(SLES)、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、焦亚硫酸钾、Plus、/>对羟苯甲酸甲酯、/>115、/>II、/>和/>
示例性的缓冲剂包括柠檬酸盐缓冲溶液、乙酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡糖酸钙、D-葡糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酸、戊酮酸钙、戊酸、磷酸氢钙、磷酸、磷酸钙、磷酸氢氧化钙、乙酸钾、氯化钾、葡糖酸钾、钾混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾混合物、乙酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠混合物、氨丁三醇、氢氧化镁、氢氧化铝、海藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液、乙醇及其混合物。
示例性的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、二氧化硅、滑石、麦芽、甘油山嵛酸酯、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠及其混合物。
示例性的天然油包括杏仁油(almond)、苦杏仁油(apricot kernel)、鳄梨油、巴西棕榈树油(babassu)、佛手油、黑加仑种子油、琉璃苣油、杜松焦油(cade)、甘菊油(chamomile)、介花油芸苔、藏茴香油、棕榈油腊棕榈、蓖麻油、肉桂油、可可油、椰子油、鳕鱼肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鸸鹋油、桉树油、月见草油、鱼油、亚麻子油、香叶油、葫芦油、葡萄籽油、榛子油、海索油(hyssop oil)、肉豆蔻酸异丙酯油、希蒙得木油、夏威夷核油(kukui nut)、醒目熏衣草油(lavandin)、薰衣草油(lavender)、柠檬油、山苍子油、夏威夷果仁油(macademia nut)、锦葵油、芒果核油、白芒花籽油、貂油、肉豆蔻油、橄榄油、橙油、深海鱼油(orange roughy)、棕榈油、棕榈仁油、桃仁油、花生油、罂粟子油、南瓜子油、菜籽油、米糠油、迷迭香油、红花油、檀香木油、山茶花油(sasquana)、香薄荷油(savoury oil)、沙棘油、芝麻油、乳木果油、硅油、大豆油、向日葵油、茶树油、蓟油、椿油 (tsubaki)、岩石草油、核桃油和麦芽油。示例性的合成油包括但不限于：硬脂酸丁酯油、辛酸甘油三酯油、癸酸甘油三酯油、环甲基硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油360、肉豆蔻酸异丙酯油、矿物油、辛基十二烷醇油、油醇、硅油及其混合物。
用于口服和胃肠外给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。除了活性成分，所述液体剂型可包含本领域常用的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂(例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(例如，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯及其混合物)。除了惰性稀释剂，该口服组合物可包含佐剂，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。在胃肠外给药的一些实施方案中，将本发明的缀合物与增溶剂混合，所述增溶剂例如醇、油、改性油、二醇、聚山梨醇酯、环糊精、聚合物及其混合物。
可注射制剂，例如，无菌注射水性或油性混悬液可根据本领域已知的方法，使用适当的分散剂或湿润剂和悬浮剂进行配制。所述无菌注射制剂可为在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液、混悬液或乳液，例如，在1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受媒介物和溶剂是水、U.S.P.林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为了这一目的，任意刺激性小的不挥发油均可被采用，包括合成的单-或二- 甘油酯。此外，脂肪酸(例如油酸)可用于制备注射剂。
所述可注射制剂可通过以下进行灭菌，例如，通过细菌截留过滤器 (bacterial-retaining filter)过滤或通过加入无菌固体组合物形式的灭菌剂，其在使用前可被溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中。
为了延长药物疗效，通常期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的结晶或无定形物的液体悬浮液来实现。该药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率本身可能取决于晶体大小和结晶形式。或者，胃肠外施用的药物形式的延迟吸收可通过将该药物溶解或悬浮于油性媒介物中而实现。
直肠或阴道给药的组合物通常为栓剂，其可通过将本发明的缀合物与合适的无刺激性的赋形剂或载体(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡，其在常温为固体，但在体温为液体，并因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性成分) 混合进行制备。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在该固体剂型中，将该活性成分与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体 (例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或(a)填充剂或增充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，(b)粘合剂，例如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，(c)湿润剂，例如甘油，(d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、海藻酸、一些硅酸盐和碳酸钠， (e)溶液阻滞剂，例如石蜡，(f)吸收促进剂，例如季铵化合物，(g)湿润剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物进行混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，该剂型可包含缓冲剂。
相似类型的固体组合物可用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用例如乳糖或奶糖以及高分子量的聚乙二醇等的赋形剂。片剂、锭剂、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可用包衣和壳(例如肠溶衣和药理学领域熟知的其他包衣)进行制备。它们可任选地包含遮光剂且可为这样的组合物，其任选地以延迟的方式，仅在或优选地在肠道的特定部分释放活性成分。可使用的包封组合物的实例包括聚合物质和蜡。相似类型的固体组合物可用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用例如乳糖或奶糖以及高分子量的聚乙二醇等的赋形剂。
所述活性成分可与一种或多种上述赋形剂形成微胶囊形式。片剂、锭剂、胶囊、丸剂和颗粒剂的所述固体剂型可用包衣和壳(例如肠溶包衣、控释包衣和在药物制剂领域熟知的其他包衣)进行制备。在该固体剂型中，可将所述活性成分与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。这种剂型可包含，如一般实践，除惰性稀释剂之外的其他物质，例如，压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，该剂型可包含缓冲剂。它们可任选地包含遮光剂且可为这样的组合物，其任选地以延迟的方式，仅在或优选地在肠道的特定部分释放活性成分。可使用的包胶剂的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部和/或透皮施用本发明化合物的剂型可包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂和/或贴剂。通常，将该活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体或赋形剂和/或任意所需防腐剂和/或需要的缓冲剂混合。此外，本发明可以使用透皮贴剂，其通常具有将活性成分可控地递送至机体的附加优势。这种剂型可例如通过将该活性成分溶解和/或分散于适当的介质中进行制备。或者或此外，所述速率可通过提供速率控制膜和/或将活性成分分散于聚合物基质和/或凝胶中进行控制。
用于递送本文所述皮内药物组合物的合适的装置包括短针装置。皮内组合物可用限制针进入皮肤的有效穿透长度的装置进行给药。或者或此外，常规注射器可用于皮内给药的经典mantoux法。通过液体喷射注射器和/或通过刺穿角质层并产生到达真皮的射流的针将液体制剂递送至真皮的快速注射装置是合适的。使用压缩气体以加速粉末形式的化合物穿过皮肤外层到真皮的发射性粉末(Ballistic powder)/颗粒递送装置是合适的。
适用于局部给药的制剂包括但不限于液体和/或半液体制剂，例如搽剂、洗剂、水包油和/或油包水乳剂例如乳膏剂、软膏剂和/或糊剂，和/或溶液和 /或混悬液。局部给药的制剂可例如包含约1％至约10％(w/w)的活性成分，但该活性成分的浓度可高达该活性成分在该溶剂中的溶解度极限。用于局部给药的制剂还可包含一种或多种本文所述的额外的成分。
可将本发明药物组合物以适用于通过口腔进行肺部给药的制剂进行制备、包装和/或出售。这种制剂可包括干颗粒，其包含活性成分且其具有约 0.5至约7纳米或约1至约6纳米范围的直径。这种组合物以干粉剂的形式方便地进行给药，其使用包括干粉贮存器的装置，可将推进剂流引导至所述干粉贮存器中以分散该粉末，和/或使用自推进溶剂/粉末分配容器，例如包含在密闭容器中溶于和/或悬浮于低沸点推进剂中的活性成分的装置。这种粉剂包括颗粒，其中按重量计至少98％的颗粒具有大于0.5纳米的直径且按数量计至少95％的颗粒具有小于7纳米的直径。或者，按重量计至少95％的颗粒具有大于1纳米的直径和按数量计至少90％的颗粒具有小于6纳米的直径。干粉组合物可包括固体细粉稀释剂(例如糖)且以单位剂量形式方便地提供。
低沸点推进剂通常包括在大气压下具有低于65°F沸点的液体推进剂。通常，该推进剂可构成50-99.9％(w/w)的所述组合物，且所述活性成分可构成0.1至20％(w/w)的所述组合物。该推进剂可进一步包含额外的成分，例如液体非离子型和/或固体阴离子型表面活性剂和/或固体稀释剂(其可与包含活性成分的颗粒具有同量级的颗粒大小)。
配制的用于肺部递送的本发明药物组合物可提供溶液和/或混悬液的液滴形式的活性成分。这种制剂可作为水性和/或稀醇溶液和/或混悬液进行制备、包装和/或出售，任选地无菌，其包含活性成分，且可使用任意喷雾和/ 或雾化装置方便地进行施用。这种制剂还可包含一种或多种额外的成分，其包括但不限于：调味剂，例如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂和/或防腐剂，例如羟基苯甲酸甲酯。通过这一给药途径提供的液滴可具有约0.1至约200纳米范围的平均直径。
将本文所述用于肺部递送的制剂用于鼻内递送本申请所述的药物组合物。另一适用于鼻内给药的制剂是粗粉，其包含活性成分并具有约0.2至500 微米的平均粒径。这种制剂是通过从保持在鼻孔附近的粉末容器中快速吸入鼻道内进行给药的。
经鼻给药的制剂可例如包含约至少0.1％(w/w)至至多100％(w/w)的活性成分，并可包含一种或多种本文所述的额外的成分。本申请所述的药物组合物可以口腔给药制剂进行制备、包装和/或出售。这种制剂可例如，为使用常规方法制备的片剂和/或锭剂形式，且可包含例如，0.1至20％(w/w)的活性成分，包含口服溶解和/或降解的组合物的余量和任选地一种或多种本文所述的额外的成分。或者，口腔给药的制剂可包括含有活性成分的粉末和/或气溶胶化和/或雾化溶液和/或混悬液。当这种粉末状、气溶胶化和/或气溶胶化制剂分散时，其可具有约0.1至约200纳米范围的平均颗粒和/或液滴尺寸，且可进一步包含一种或多种本文所述的额外的成分。
本申请所述的药物组合物可以眼部给药制剂进行制备、包装和/或出售。这种制剂可例如为滴眼剂的形式，其包含例如0.1-1.0％(w/w)活性成分在水性或油性液体载体或赋形剂中的溶液和/或混悬液。这种滴剂还可包含缓冲剂、盐和/或一种或多种本文所述的其他额外的成分。其他有用的眼部施用制剂包括含有微晶形式和/或脂质体制剂形式的活性成分的那些。滴耳剂和/或滴眼剂也旨在涵盖在本发明公开的范围内。
尽管对本文所提供的药物组合物的描述主要涉及适用于给药至人的药物组合物，但本领域技术人员将理解，这种组合物通常适用于给药至各种动物。修改适用于给药至人的药物组合物以使得该组合物适用于给药至各种动物是熟知的，且本领域普通兽医可设计和/或用普通的试验实施这种修改。
本文提供的化合物通常配制成易于给药且剂量均一的剂量单位形式。但是将理解本发明组合物的总的每日剂量将由医生在合理的医学判断范围内来决定。对任意具体受试者或生物体而言的具体治疗有效剂量水平将取决于各种因素，包括所治疗的疾病和该疾病的严重性；所采用的具体活性成分的活性；所采用的具体组合物；该受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和所采用的具体活性成分的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体活性成分组合使用或同时使用的药物；和医学领域中熟知的类似的因素。
本文提供的化合物和组合物可通过任意途径进行给药，包括肠内(例如，口服)、胃肠外、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、皮下、心室内、透皮、皮内、直肠、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏剂、乳膏剂和/或滴剂)、经粘膜、经鼻、口腔、舌下；通过气管内滴注、支气管滴注和/ 或吸入；和/或作为口腔喷雾、鼻喷雾和/或气雾剂。特别考虑的途径是口服给药、静脉内给药(例如，全身性静脉内注射)、通过血液和/或淋巴供给的区域性给药和/或直接给药至受感染部位。通常，最合适的给药途径将取决于各种因素，包括药剂的性质(例如，在胃肠道环境中的稳定性)，和/或受试者的病症(例如，所述受试者是否能忍受口服给药)。在一些实施方案中，所述本申请所述的化合物或药物组合物适合局部给药至受试者的眼睛。
需要达到有效量的化合物的确切量因受试者而异，取决于，例如，受试者的物种、年龄和一般状况、副作用或障碍的严重性、具体化合物的特性、给药方式等。有效量可以包括在单剂量(例如，单一口服剂量)或多剂量(例如，多个口服剂量)中。在一些实施方案中，当给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞时，所述多剂量的任意两个剂量包括不同量或基本上相同量的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，当给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞时，给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞的频率为一天三剂、一天两剂、一天一剂、隔天一剂、每三天一剂、每周一剂、每两周一剂、每三周一剂或每四周一剂。在一些实施方案中，给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞的频率为一天一剂。在一些实施方案中，给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞的频率为一天两剂。在一些实施方案中，给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞的频率为一天三剂。在一些实施方案中，当给药多剂量至受试者或应用多剂量至生物样品、组织或细胞时，多剂量的第一剂和最后一剂之间的时间跨度为一天、两天、四天、一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、六个月、九个月、一年、两年、三年、四年、五年、七年、十年、十五年、二十年或受试者、组织或细胞的终身。在一些实施方案中，多剂量的第一剂和最后一剂之间的时间跨度为三个月、六个月或一年。在一些实施方案中，多剂量的第一剂和最后一剂之间的时间跨度为受试者、组织或细胞的终身。在一些实施方案中，本发明所述的剂量(例如，单剂量或多剂量的任意剂量)独立地包括0.1μg和 1μg之间、0.001mg和0.01mg之间、0.01mg和0.1mg之间、0.1mg和1mg 之间、1mg和3mg之间、3mg和10mg之间、10mg和30mg之间、30mg 和100mg之间、100mg和300mg之间、300mg和1,000mg之间或1g和 10g之间(包括端点在内)的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，本发明所述的剂量独立地包括1mg和3mg之间(包括端点在内)的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，本发明所述的剂量独立地包括3mg和10mg 之间(包括端点在内)的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，本发明所述的剂量独立地包括10mg和30mg之间(包括端点在内)的本申请所述的化合物。在一些实施方案中，本发明所述的剂量独立地包括30mg和100mg 之间(包括端点在内)的本申请所述的化合物。
本文所述的剂量范围为将所提供的药物组合物给药至成人提供指导。给药至例如儿童或青少年的量可由医生或本领域技术人员确定且可比施用至成人的量稍低或相同。
本发明化合物或组合物可以与一种或多种其他药物(例如，治疗和/或预防性活性药物)组合给药。所述化合物或组合物可以与其他药物组合给药以在受试者、生物样品、组织或细胞内，提高它们的活性(例如在以下方面中的活性(例如，效力和/或有效性)：治疗有此需要的受试者中的疾病，预防有此需要的受试者中的疾病，抑制受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT 的活性)，提高生物利用度，提高安全性，降低药物耐药性，降低和/或改进代谢，抑制排泄和/或改善分布。还应当理解，应用的治疗可以对相同病症取得所需效果，和/或可以取得不同的效果。在一些实施方案中，与包含本发明化合物或其他药物而非二者的药物组合物相比，包含本发明化合物和其他药物的本发明药物组合物显示协同作用。
可将化合物或组合物与一种或多种额外的药剂同时给药、在所述一种或多种额外的药剂之前或之后给药所述化合物或组合物，其可用作例如组合疗法。药剂包括治疗活性剂。药剂还包括预防活性剂。药剂包括小的有机分子，例如药物化合物(例如，由美国食品与药物管理局批准，提供在美国联邦法规汇编(CFR)中的人或兽用化合物)、肽类、蛋白、碳水化合物、单糖、寡糖、多糖、核蛋白、粘蛋白、脂蛋白、合成多肽或蛋白、连接蛋白的小分子、糖蛋白、甾类、核酸、DNA、RNA、核苷酸、核苷、寡核苷酸、反义寡核苷酸、脂质、激素、维生素和细胞。在一些实施方案中，所述额外的药剂是用于治疗和/或预防疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)的药剂。每种额外的药剂可以该药剂确定的剂量和/或时间表进行给药。所述额外的药剂也可彼此一起和/或与本申请所述的化合物或组合物一起，以单一剂量进行给药或以不同剂量分别进行给药。在该方案中所采用的具体组合将考虑本申请所述的化合物与额外的药剂的相容性和/或将实现的所需的治疗和/或预防效果。通常，预期所述额外的药剂在组合使用时所采用的水平是以不超过它们单独使用时的水平。在一些实施方案中，该组合所使用的水平将低于它们单独使用时的水平。
所述额外的药剂包括但不限于：抗增殖剂、抗癌剂、抗血管生成剂、抗炎剂、免疫抑制剂、抗菌剂、抗病毒剂、心血管药物、降脂药、抗糖尿病药、抗过敏剂、避孕药、疼痛缓解剂和它们的组合。在一些实施方案中，所述额外的药剂为抗增殖剂(例如，抗癌剂)。在一些实施方案中，所述额外的药剂为抗白血病药。在一些实施方案中，所述额外的药剂为ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ADE、阿霉素RDF(盐酸多柔比星)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、ARRANON(奈拉滨)、ARZERRA(奥法木单抗)、BOSULIF(博舒替尼)、 BUSULFEX(白消安)、CAMPATH(阿仑单抗)、CERUBIDINE(盐酸柔红霉素)、CLAFEN(环磷酰胺)、CLOFAREX(氯法拉滨)、CLOLAR(氯法拉滨)、 CVP、CYTOSAR-U(阿糖胞苷)、CYTOXAN(环磷酰胺)、ERWINAZE(门冬酰胺酶菊欧文氏菌)、FLUDARA(磷酸氟达拉滨)、FOLEX(甲氨蝶呤)、FOLEX PFS(甲氨蝶呤)、GAZYVA(奥比妥球单抗)、GLEEVEC(甲磺酸伊马替尼)、 Hyper-CVAD、ICLUSIG(盐酸普纳替尼)、IMBRUVICA(依鲁替尼)、 LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、LINFOLIZIN(苯丁酸氮芥)、MARQIBO(硫酸长春新碱脂质体)、METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲氨蝶呤)、 MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、盐酸米托蒽醌、MUSTARGEN(盐酸氮芥)、 MYLERAN(白消安)、NEOSAR(环磷酰胺)、ONCASPAR(培门冬酶)、 PURINETHOL(巯基嘌呤)、PURIXAN(巯基嘌呤)、Rubidomycin(盐酸柔红霉素)、SPRYCEL(达沙替尼)、SYNRIBO(高三尖杉酯碱)、TARABINE PFS (阿糖胞苷)、TASIGNA(尼罗替尼)、TREANDA(盐酸苯达莫司汀)、 TRISENOX(三氧化二砷)、VINCASAR PFS(硫酸长春新碱)、ZYDELIG(艾代拉里斯)或其组合。在一些实施方案中，所述额外的药剂为抗淋巴瘤药。在一些实施方案中，所述额外的药剂为ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ABVD、 ABVE、ABVE-PC、ADCETRIS(brentuximab vedotin)、ADRIAMYCIN PFS(盐酸多柔比星)、ADRIAMYCINRDF(盐酸多柔比星)、AMBOCHLORIN(苯丁酸氮芥)、AMBOCLORIN(苯丁酸氮芥)、ARRANON(奈拉滨)、BEACOPP、 BECENUM(卡莫司汀)、BELEODAQ(belinostat)、BEXXAR(托西莫单抗和碘I131托西莫单抗)、BICNU(卡莫司汀)、BLENOXANE(博莱霉素)、 CARMUBRIS(卡莫司汀)、CHOP、CLAFEN(环磷酰胺)、COPP、COPP-ABV、 CVP、CYTOXAN(环磷酰胺)、DEPOCYT(阿糖胞苷脂质体)、DTIC-DOME (达卡巴嗪)、EPOCH、FOLEX(甲氨蝶呤)、FOLEX PFS(甲氨蝶呤)、 FOLOTYN(普拉曲沙)、HYPER-CVAD、ICE、IMBRUVICA(依鲁替尼)、INTRON A(重组干扰素α-2b)、ISTODAX(罗米地辛)、LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、LINFOLIZIN(苯丁酸氮芥)、洛莫司汀、MATULANE(盐酸丙卡巴肼)、 METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲氨蝶呤)、MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、MOPP、MOZOBIL(普乐沙福)、MUSTARGEN(盐酸氮芥)、NEOSAR (环磷酰胺)、OEPA、ONTAK(地尼白介素2)、OPPA、R-CHOP、REVLIMID (来那度胺)、RITUXAN(利妥昔单抗)、STANFORD V、TREANDA(盐酸苯达莫司汀)、VAMP、VELBAN(硫酸长春碱)、VELCADE(硼替佐米)、VELSAR (硫酸长春碱)、VINCASAR PFS(硫酸长春新碱)、ZEVALIN(替伊莫单抗)、 ZOLINZA(伏立诺他)、ZYDELIG(艾代拉里斯)或其组合。在一些实施方案中，所述额外的药剂为REVLIMID(来那度胺)、DACOGEN(地西他滨)、 VIDAZA(阿扎胞苷)、CYTOSAR-U(阿糖胞苷)、IDAMYCIN(伊达比星)、 CERUBIDINE(柔红霉素)、LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、NEOSAR(环磷酰胺)、 FLUDARA(氟达拉滨)、LEUSTATIN(克拉屈滨)或其组合。在一些实施方案中，所述额外的药剂为ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ABRAXANE(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、AC、AC-T、ADE、ADRIAMYCIN PFS(盐酸多柔比星)、ADRUCIL(氟尿嘧啶)、AFINITOR(依维莫司)、AFINITOR DISPERZ(依维莫司)、ALDARA(咪喹莫特)、ALIMTA(培美曲塞二钠)、AREDIA(帕米膦酸二钠)、ARIMIDEX(阿那曲唑)、AROMASIN(依西美坦)、AVASTIN(贝伐单抗)、BECENUM(卡莫司汀)、BEP、BICNU(卡莫司汀)、BLENOXANE (博莱霉素)、CAF、CAMPTOSAR(盐酸伊立替康)、CAPOX、CAPRELSA(凡德他尼)、CARBOPLATIN-TAXOL、CARMUBRIS(卡莫司汀)、CASODEX(比卡鲁胺)、CEENU(洛莫司汀)、CERUBIDINE(盐酸柔红霉素)、CERVARIX(重组HPV二价疫苗)、CLAFEN(环磷酰胺)、CMF、COMETRIQ(卡博替尼-s- 苹果酸盐)、COSMEGEN(放线菌素D)、CYFOS(异环磷酰胺)、CYRAMZA (雷莫芦单抗)、CYTOSAR-U(阿糖胞苷)、CYTOXAN(环磷酰胺)、DACOGEN(地西他滨)、DEGARELIX、DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、 DOX-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-DOME(达卡巴嗪)、EFUDEX(氟尿嘧啶)、ELLENCE(盐酸表柔比星)、ELOXATIN(奥沙利铂)、ERBITUX(西妥昔单抗)、ERIVEDGE(维莫德吉)、ETOPOPHOS(磷酸依托泊苷)、EVACET (盐酸多柔比星脂质体)、FARESTON(托瑞米芬)、FASLODEX(氟维司群)、 FEC、FEMARA(来曲唑)、FLUOROPLEX(氟尿嘧啶)、FOLEX(甲氨蝶呤)、 FOLEX PFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-BEVACIZUMAB、FOLFIRI-CETUXIMAB、FOLFIRINOX、FOLFOX、FU-LV、GARDASIL(重组人乳头状瘤病毒(HPV)四价疫苗)、GEMCITABINE-CISPLATIN、GEMCITABINE-OXALIPLATIN、GEMZAR(吉西他滨盐酸盐)、GILOTRIF (二马来酸阿法替尼)、GLEEVEC(甲磺酸伊马替尼)、GLIADEL(卡莫司汀植入物)、GLIADEL WAFER(卡莫司汀植入物)、HERCEPTIN(曲妥珠单抗)、 HYCAMTIN(盐酸拓扑替康)、IFEX(异环磷酰胺)、IFOSFAMIDUM(异环磷酰胺)、INLYTA(阿西替尼)、INTRON A(重组干扰素α-2b)、IRESSA(吉非替尼)、IXEMPRA(伊沙匹隆)、JAKAFI(磷酸鲁索替尼)、JEVTANA(卡巴他赛)、KADCYLA(ado-trastuzumab emtansine)、KEYTRUDA(pembrolizumab)、 KYPROLIS(卡非佐米)、LIPODOX(盐酸多柔比星脂质体)、LUPRON(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT-3MONTH (乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT-4MONTH(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT-PED(乙酸亮丙瑞林)、MEGACE(乙酸甲地孕酮)、MEKINIST(曲美替尼)、METHAZOLASTONE(替莫唑胺)、METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲氨蝶呤)、MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、盐酸米托蒽醌、 MITOZYTREX(丝裂霉素c)、MOZOBIL(普乐沙福)、MUSTARGEN(盐酸氮芥)、MUTAMYCIN(丝裂霉素c)、MYLOSAR(阿扎胞苷)、NAVELBINE(酒石酸长春瑞滨)、NEOSAR(环磷酰胺)、NEXAVAR(甲苯磺酸索拉非尼)、NOLVADEX(柠檬酸他莫昔芬)、NOVALDEX(柠檬酸他莫昔芬)、OFF、PAD、 PARAPLAT(卡铂)、PARAPLATIN(卡铂)、PEG-INTRON(聚乙二醇化干扰素α-2b)、培美曲塞二钠、PERJETA(帕妥珠单抗)、PLATINOL(顺铂)、 PLATINOL-AQ(顺铂)、POMALYST(泊马度胺)、泼尼松、PROLEUKIN(阿地白介素)、PROLIA(地诺单抗)、PROVENGE(sipuleucel-t)、REVLIMID(来那度胺)、RUBIDOMYCIN(盐酸柔红霉素)、SPRYCEL(达沙替尼)、 STIVARGA(瑞戈非尼)、SUTENT(苹果酸舒尼替尼)、SYLATRON(聚乙二醇化干扰素α-2b)、SYLVANT(西妥昔单抗)、SYNOVIR(沙利度胺)、TAC、 TAFINLAR(达拉非尼)、TARABINE PFS(阿糖胞苷)、TARCEVA(盐酸埃罗替尼)、TASIGNA(尼罗替尼)、TAXOL(紫杉醇)、TAXOTERE(多西紫杉醇)、 TEMODAR(替莫唑胺)、THALOMID(沙利度胺)、TOPOSAR(依托泊苷)、 TORISEL(西罗莫司)、TPF、TRISENOX(三氧化二砷)、TYKERB(二甲苯磺酸拉帕替尼)、VECTIBIX(帕尼单抗)、VEIP、VELBAN(硫酸长春碱)、VELCADE(硼替佐米)、VELSAR(硫酸长春碱)、VEPESID(依托泊苷)、 VIADUR(乙酸亮丙瑞林)、VIDAZA(阿扎胞苷)、VINCASAR PFS(硫酸长春新碱)、VOTRIENT(盐酸帕唑帕尼)、WELLCOVORIN(亚叶酸钙)、XALKORI (克唑替尼)、XELODA(卡培他滨)、XELOX、XGEVA(地诺单抗)、XOFIGO (二氯化镭223)、XTANDI(恩扎鲁胺)、YERVOY(伊匹单抗)、ZALTRAP(zip- 阿柏西普)、ZELBORAF(威罗菲尼)、ZOLADEX(醋酸戈舍瑞林)、ZOMETA (唑来膦酸)、ZYKADIA(色瑞替尼)、ZYTIGA(乙酸阿比特龙)或其组合。在一些实施方案中，所述额外的药剂为HMT(例如，EZH1、EZH2、DOT1)的结合剂或抑制剂。在一些实施方案中，所述额外的药剂蛋白激酶抑制剂(例如，酪氨酸蛋白激酶抑制剂)。在一些实施方案中，所述额外的药剂选自外遗传或转录调节剂(例如，DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HDAC抑制剂)、赖氨酸甲基转移酶抑制剂)、抗有丝分裂药物(例如，紫杉烷类和长春花生物碱)、激素受体调节剂(例如，雌激素受体调节剂和雄激素受体调节剂)、细胞信号传导途径抑制剂(例如，酪氨酸蛋白激酶抑制剂)、蛋白稳定性的调节剂(例如，蛋白酶体抑制剂)、Hsp90抑制剂、糖皮质激素、全反式维甲酸，和其他促进分化的药物。在具体实施方案中，本发明化合物或药物组合物可以与抗癌治疗组合给药，所述抗癌治疗包括但不限于：手术、辐射治疗、移植(例如干细胞移植、骨髓移植)、免疫治疗和化疗。
本发明还包括试剂盒(例如，药物包装)。提供的试剂盒可包括本发明药物组合物或化合物，以及容器(例如，小瓶、安瓿瓶、瓶、注射器和/或分配包装，或其他合适的容器)。在一些实施方案中，提供的试剂盒还可任选包括第二容器，其包括用于稀释或悬浮本发明药物组合物或化合物的药物赋形剂。在一些实施方案中，本发明药物组合物或化合物提供在第一容器中，且组合第二容器以形成单位剂型。
因此，在一个方面中，本申请提供试剂盒，其包括装有本文所述的化合物或药物组合物的第一容器。在一些实施方案中，所述试剂盒用于在有需要的受试者中治疗疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)。在一些实施方案中、所述试剂盒用于在有需要的受试者中预防疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)。在一些实施方案中，所述试剂盒用于在受试者、生物样品、组织或细胞中抑制HMT的活性(例如，异常活性例如增加的活性)。在一些实施方案中，所述试剂盒用于在细胞中诱导凋亡。
在一些实施方案中，本申请描述的试剂盒进一步包括使用包括在所述试剂盒中的所述化合物或药物组合物的说明书。本申请描述的试剂盒也包括管理机构例如U.S.Foodand Drug Administration(FDA)要求的信息。在一些实施方案中，包括在试剂盒中的信息为处方信息。在一些实施方案中，所述试剂盒和说明书提供在有需要的受试者中治疗疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)。在一些实施方案中，所述试剂盒和说明书提供在有需要的受试者中预防疾病(例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱)。在一些实施方案中，所述试剂盒和说明书提供了在受试者、生物样品、组织或细胞中调节(例如，抑制)HMT的活性(例如，异常活性例如增加的活性)。在一些实施方案中，所述试剂盒和说明书提供诱导细胞凋亡。本文描述的试剂盒可以包括本文所述的一种或多种另外的药剂，其为单独的组合物。
治疗方法和用途
本文描述的化合物能够结合(例如，可逆结合或不可逆结合)HMT，并调节(例如，可逆调节或不可逆调节)HMT的活性。因此，本公开还提供了在受试者、生物样品、组织或细胞中调节(例如，抑制或增加)HMT的活性(例如，异常活性如增加或减少的活性)的方法。本公开进一步提供了用于在有需要的受试者中治疗宽范围的疾病的方法，例如与异常或增加的HMT活性相关的疾病、增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病以及代谢紊乱。
在另一个方面，本申请提供在有需要的受试者中调节(例如，抑制)HMT 的活性的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
在另一个方面，本申请提供在生物样品、组织或细胞中调节(例如抑制)HMT的活性的方法，所述方法包括使生物样品、组织或细胞与有效量的本申请描述的化合物或药物组合物接触。
在一些实施方案中，受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性被本申请描述的化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法抑制了至少1％、至少3％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在一些实施方案中，受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性被本申请描述的化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法抑制了不多于1％、不多于3％、不多于10％、不多于20％、不多于30％、不多于40％、不多于50％、不多于60％、不多于70％、不多于 80％或不多于90％。在一些实施方案中，受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性被所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法选择性抑制。在一些实施方案中，与不同的HMT(例如，EZH1)相比，在受试者、生物样品、组织或细胞中的EZH2的活性被所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法选择性抑制。在一些实施方案中，与不同的HMT(例如，EZH2) 相比，在受试者、生物样品、组织或细胞中的EZH1的活性被所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法选择性抑制。在一些实施方案中，本申请描述的在受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性被所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法可逆抑制。在一些实施方案中，本申请描述的在受试者、生物样品、组织或细胞中的HMT的活性被所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法不可逆抑制。在一些实施方案中，所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法抑制HMT的突变形式(例如，EZH1 的突变形式或EZH2的突变形式)的活性。在一些实施方案中，所述化合物、药物组合物、试剂盒、使用或方法减少了组蛋白的甲基化。
本公开的另一方面涉及在有需要的受试者中降低组蛋白的甲基化的方法，所述方法包括向所述受试者给予有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
本公开的另一方面涉及在生物样品、组织或细胞中降低组蛋白的甲基化的方法，所述方法包括使生物样品、组织或细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
本公开的另一方面涉及在有需要的受试者中调节(例如，下调或上调)基因表达的方法，所述方法包括向所述受试者给予有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
本公开的另一方面涉及在生物样品、组织或细胞中调节(例如，下调或上调)基因表达的方法，所述方法包括使生物样品、组织或细胞与有效量的本文所述的化合物或药物组合物接触。
在一些实施方案中，本文所述的基因是编码本文所述的HMT的基因(例如，编码EZH1、EZH2或DOT1的基因)。
本公开的另一方面涉及在有此需要的受试者中治疗疾病的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
HMT牵涉在多种疾病中。例如，EZH2基因的变化与各种类型的癌症有关。已在血液性恶性肿瘤(例如，淋巴瘤、白血病)中鉴定出该基因的突变。这些突变可能被描述为“功能获得型”，因为它们似乎增强了EZH2酶的活性和/或使酶获得新的非典型功能。此外，已在前列腺、乳腺和其他器官的癌性肿瘤中鉴定出EZH2基因的活性增加(过度表达)。涉及EZH2基因的变化可能会损害细胞分裂(增殖)的正常控制，使细胞生长和分裂得太快、或以不受控制方式生长和分裂并导致癌症的发展。此外，已在患有韦弗综合征的患者中鉴别出至少20个EZH2基因突变。这种病症的征兆和症状包括骨骼过度生长、独特的面部外观和关节问题。患有韦弗综合征的患者发生癌症的风险增加。EZH2基因突变可能会破坏甲基化，并损害了许多受试者的器官和组织中一些基因的调节，导致韦弗综合征的异常特征。韦弗综合征也与EZH1 的异常活性有关。还有报道称，DOT1牵涉在白血病(例如，AML、ALL)中。在患有白血病的患者中，DOT1可能错误地定位于染色质上，影响局部H3K79 甲基化状态。H3K79甲基化的总水平不受影响，但在特定区域的H3K79甲基化的局部水平被异常改变，导致可能成为白血病重要参与者的失调转录。
已经发现，EZH2的SET结构域中的酪氨酸641(例如，Y641F，Y641N， Y641S，Y641H)的突变与一些类型的癌症(例如，非霍奇金淋巴瘤)相关。已经证明，这些突变影响组蛋白H3上赖氨酸27的一些甲基化状态的EZH2的底物特异性。可以根据受试者中EZH2突变的存在或不存在来选择用EZH2 抑制剂治疗的受试者。例如，在一些实施方案中，如果受试者在EZH2的SET 结构域中的酪氨酸641处具有突变，则选择该受试者用EZH2抑制剂治疗。
在一些实施方案中，本文描述的疾病为与HMT相关的疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为与HMT的异常活性(例如，增加的活性)相关的疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为增殖性疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为癌症。在一些实施方案中，本文描述的疾病为增生 (例如，生发中心(GC)增生)。在一些实施方案中，本文描述的疾病为脑癌、乳腺癌或前列腺癌。在一些实施方案中，本文描述的疾病为良性肿瘤。在一些实施方案中，本文描述的疾病为病理性血管发生或其相关。在一些实施方案中，本文描述的疾病为炎性疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为自身免疫性疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为遗传疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为韦弗综合征。在一些实施方案中，本文描述的疾病为血液疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为淋巴瘤(例如，滤泡性大B-细胞淋巴瘤、弥散性大B-细胞淋巴瘤)。在一些实施方案中，本文描述的疾病为白血病(例如，CML)。在一些实施方案中，本文描述的疾病为神经系统疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为疼痛性病症。在一些实施方案中，本文描述的疾病为精神疾病。在一些实施方案中，本文描述的疾病为代谢紊乱。
在另一方面，本申请提供在有此需要的受试者中预防本文描述的疾病的方法，所述方法包括向受试者给予预防有效量的本文所述的化合物或药物组合物。
在另一个方面，本申请提供本文所述的化合物，其用于本文所述的方法 (例如，抑制HMT活性的方法，治疗疾病(例如增殖性疾病)的方法，预防疾病(例如增殖性疾病)的方法，诱导凋亡的方法，或筛选化合物库的方法)。
另一方面，本申请提供本文所述的药物组合物，其用于本文所述的方法 (例如，抑制HMT的活性的方法，治疗疾病(例如增殖性疾病)的方法，预防疾病(例如增殖性疾病)的方法，诱导凋亡的方法，或筛选化合物库的方法)。
筛选化合物库的方法
本发明的其他方面涉及筛选化合物及其药学上可接受的盐的库的方法，以鉴定可用于本发明方法的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述筛选库的方法包括获得至少两个不同的本申请所述的化合物；并使用所述不同的本申请的化合物进行至少一个测试。在一些实施方案中，至少一个测试可用于鉴定用于本发明方法的化合物。
通常，所述筛选化合物库的方法包括至少一个测试。在一些实施方案中，进行所述测试以检测一个或多个以下特征：与治疗和/或预防本发明所述的疾病有关的特征、或与调节(例如，抑制)HMT的活性相关的特征。所述特征可为所期望的特征(例如，疾病已被治疗、疾病已被预防、HMT的活性已被调节和/或凋亡已被诱导)。所述特征可为不期望的特征(例如，疾病未被治疗、疾病未被预防、HMT的活性未被调节和/或凋亡未被诱导)。所述测试可为免疫测试，例如夹心测试、竞争结合测试、一步直接测试、两步测试或蛋白印迹测试。进行至少一个测试的步骤可以自动或手动进行。在一些实施方案中，所述测试包括(a)使化合物库与HMT接触；和(b)检测化合物库和HMT的结合。在一些实施方案中，所述测试包括检测化合物库和HMT的特异性结合。在一些实施方案中，所检测的化合物库和HMT的结合用于鉴定可用于本发明方法的化合物。在一些实施方案中，检测结合的步骤包括使用差示扫描荧光测定法(DSF)、等温滴定量热法(ITC)和/或光激化学发光免疫分析 (amplifiedluminescence proximity homogeneous assay,ALPHA)。进行至少一个测试的步骤可以在体外或体内细胞中进行。
测定
zeste增强子同源物2(EZH2)是PRC2的核心组分，其催化组蛋白H3赖氨酸27的二-和三-甲基化(H3K27me2/3)。EZH2的SET结构域中的体细胞突变(例如，Y641N)导致酶的高活性，所述酶已经在大部分滤泡和弥漫性大B 细胞淋巴瘤中被鉴定出来，这意味着在癌症形成中EZH2的驱动子功能(Beguelin等人，2013；Morin等人，2010)。
本文描述的化合物是组蛋白甲基转移酶(HMT,，例如，zeste增强子同源物1(EZH1),)、zeste增强子同源物2(EZH2))的抑制剂。所述化合物用于在有需要的受试者中治疗和/或预防与HMT的异常活性或增加的活性相关的疾病,，例如，增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、遗传疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病或代谢紊乱。
在一些实施方案中，本发明化合物或通过本发明方法和系统鉴别的那些化合物包括以下那些化合物：
表现出抑制EZH1结合和/或活性的能力，
表现出抑制EZH2结合和/或活性的能力，
表现出与已知结合EZH1的化合物竞争结合EZH1的能力，
表现出与已知结合EZH2的化合物竞争结合EZH2的能力，
表现出结合PRC2并破坏EZH1结合位点的结合的能力，
表现出结合PRC2并破坏EZH2结合位点的结合的能力，
表现出结合PRC2并置换已知与细胞内的EZH1结合的化合物的能力，例如，将化合物从核定位置换，或
表现出结合PRC2并置换已知结合细胞内的EZH2的化合物的能力，例如，将化合物从核定位置换。
根据本发明的一个方面，其提供了用于鉴定EZH1和/或EZH2结合化合物的方法。在一些实施方案中，该方法包括ALPHA测定。该方法基于对 EZH1和/或EZH2-化合物复合物形成的检测，其通过用发光探针(包括荧光团)和化学发光底物标记EZH1和/或EZH2和所述化合物来实现。蛋白-化合物复合物中EZH1和/或EZH2与经标记的化合物之间的物理邻近性提供了荧光信号的改变、或与蛋白标记的化合物复合物形成相关的化学发光产物的形成，特别是EZH1和/或EZH2与经标记化合物的邻近性。在与EZH1和/或 EZH2结合的竞争剂化合物的存在下，蛋白标记的化合物复合物形成被破坏，导致预期发光检测信号的相应降低。
该方法通常包括提供用荧光供体标记的EZH1和/或EZH2结合化合物和用荧光受体标记的EZH1和/或EZH2，其中通过基于邻近性的发光检测法检测经标记化合物与EZH1和/或EZH2的结合；在测试化合物的存在下将经标记的化合物与EZH1和/或EZH2结合；并且当相对于在不存在测试化合物的信号时，在测试化合物的存在下，基于邻近性的发光检测信号降低时，将测试化合物鉴定为EZH1和/或EZH2抑制剂。待测化合物被鉴定为EZH1和 /或EZH2抑制剂所需的测量检测信号的减少量取决于所使用的基于邻近性的发光检测测定法的类型。通常，相对于在不存在测试化合物的情况下进行的测定，5％或更大的降低表明测试化合物是EZH1和/或EZH2抑制剂。在一些实施方案中，检测化合物刺激检测信号降低了至少10％，25％，50％， 75％或100％。
任何基于邻近性的发光检测法可用在本发明中。基于邻近性的发光检测法的实施方案包括但不限于：荧光共振能量转移(“FRET”)(Stryer,L.Ann.Rev. Biochem.47,819-846,1978)、荧发光共振能量转移(“LRET”)(Mathis,G.Clin.Chem.41,1391-1397,1995)、荧光相关光谱(“FCCS”)(Maiti等人Proc.Nat’l Acad Sci USA 94,11753-11757,1997)、闪烁迫近分析法(“SPA”)(Hart and Greenwald,Molecular Immunology 16：265-267,1979；美国专利号4,658,649)、直接淬灭(Tyagi等人，Nature Biotechnology 16,49-53,1998)、化学发光能量转移(“CRET”)(Campbell,A.K.,and Patel,A.Biochem.J.216,185-194,1983)、生物发光能量转移(“BRET”)(Xu,Y.,Piston,D.W.,Johnson,Proc.Natl.Acad.Sci.,96,151-156,1999)和准分子形成(excimer formation)(Lakowicz,J.R. Principles ofFluorescence Spectroscopy,Kluwer Academic/Plenum Press,New York,1999)。应当理解，本领域技术人员将认识到可应用于本发明并且可用于本发明的替代的基于邻近性的发光检测方法。
术语“发光”或“发光的”是指任何光发射方法包括荧光、磷光、闪烁、化学发光和生物发光。
术语荧光的供体或荧光供体是指发射光被荧光受体吸收的发光分子。术语荧光的受体或荧光受体是指第二发光分子或吸收由荧光供体发射的光的淬灭分子。第二荧光团吸收从荧光供体发射的光并发射与所述荧光供体发射的光不同波长的光。淬灭分子吸收由荧光供体发射的光。可以设想，在本发明的实践中可以使用任何发光分子。
荧光团和淬灭剂的实例包括但不限于：Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680、 7-二乙基氨基香豆素-3-羧酸、荧光素、俄勒冈绿(Oregon Green)488、俄勒冈绿(Oregon Green)514、四甲基罗丹明、罗丹明X、德克萨斯红染料、QSY 7、 QSY33、Dabcyl、BODIPY FL、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665、BODIPY TMR-X、BODIPY TR-X、二烷基氨基香豆素、Cy5.5、Cy5、Cy3.5、Cy3、DTPA (Eu3+)-AMCA和TTHA(Eu3+)-AMCA。
术语“化学发光”，“化学发光的”或“化学发光底物”是指由于化学反应而产生光的化学物质。常用的化学发光底物包括但不限于鲁米诺(5-氨基 -2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮)、洛酚(2,4,5-三苯基咪唑)、光泽精(双-N-甲基吖啶鎓) 其他吖啶酯、荧光素-荧光素酶和二甲基噻吩衍生物。例如，在本领域公知的Amersham的ECLTM检测系统中，吖啶鎓底物被辣根过氧化物酶氧化以产生吖啶酯，其在碱性pH下与过量的过氧化物反应以产生在430nm处可见的化学发光。
在一些实施方案中，使用本领域公知的PerkinElmer的AlphaLISA TruHits试剂盒。该试剂盒包括AlphaLISA BSA-生物素受体珠和链亲和素α供体珠，其一起相互作用以产生AlphaLISA信号。激发供体珠引起单峰氧分子的释放，其触发在受体珠中的能量转移级联，导致在615nm处发光的尖峰。
应当理解，本领域技术人员将认识到，任何相容的荧光供体-受体对将在本发明中起作用，并且上述荧光团和淬灭剂是示例性的而不是限制性的。
在一个实施方案中，经标记的化合物和/或EZH1和/或EZH2处于溶液中，并且在所有方向上自由扩散。在另一个实施方案中，将经标记的化合物和/或EZH1和/或EZH2固定于固相底物上，例如微量滴定板、微阵列载玻片、膜或微球。在一些实施方案中，经标记的化合物和/或EZH1和/或EZH2 通过共价或非共价相互作用与固体底物连接，例如生物素/抗生物素蛋白相互作用。
在一些实施方案中，所述方法包括荧光偏振(FP)测定。荧光偏振(FP)测定可用于研究分子的相互作用(例如，Lea,W.A.,Simeonov,A.Expert Opin. Drug Discov.,6,17-32,2011)。通常，在FP测定中，当被平面偏振光激发时，荧光标记的分子将发射具有与其旋转速率成反比关系的偏振角度的荧光。在溶液中，许多现象(例如，阻力、扩散、布朗运动)使较小的粒子具有比较大的粒子更大的旋转速度。因此，当包含蛋白(例如EZH1和/或EZH2)和荧光标记的化合物(例如，本文描述的化合物)的复合物被平面偏振光激发时，发射的光保持高度偏振，这是因为荧光团在光被吸收和发射的时间内被限制旋转。当未结合的荧光标记的化合物被平面偏振光激发时，其旋转速度比相应复合物的旋转速度快。结果，从未结合的荧光标记的化合物发射的光相比于通过络合被约束的相同分子被更大程度地去极化。在小分子化合物筛选的背景下，荧光标签可以连接到已知与蛋白(例如，EZH1和/或EZH2)形成结合相互作用的化合物上。可以通过FP监测经标记的化合物与蛋白的结合。在与蛋白结合的未标记化合物的存在下，包含经标记化合物和蛋白的复合物被置换。结果，未结合的标记化合物的浓度增加，并且FP信号反映随后的去极化光的增加。
在一些实施方案中，所述方法包括细胞内竞争结合测定，例如细胞内竞争性EZH2结合测定。例如，培养物中的细胞可以与标记的EZH2结合化合物孵育，其可以定位于细胞核以结合内源性EZH2。可以在未标记的测试化合物(例如，候选EZH2抑制剂化合物)的存在下孵育细胞。如果测试化合物与外源性EZH2结合，则可以与标记的EZH2结合化合物竞争结合，从而使标记的EZH2结合化合物定位于细胞核以外的位置。可以通过检测所述标签来检测这种结合和定位。因此，在与EZH2结合的未标记化合物的存在下，包含标记化合物和内源性EZH2的复合物被置换。结果，与没有未标记的化合物存在的情况下标记化合物的定位相比，所述标记的化合物以较低水平定位于细胞核。
用于本发明的候选测试化合物包括许多化学类别，但通常它们是小的有机化合物。术语“小分子”用于指具有相对较低分子量的天然存在或人工产生(例如通过化学合成)的分子。通常，小分子是有机化合物(即它含有碳)。小分子可以含有多个碳-碳键、立体中心和其它官能团(例如胺、羟基、羰基、杂环等)。在一些实施方案中，小分子是单体的，分子量小于约1500g/mol。在一些实施方案中，小分子的分子量小于约1000g/mol或小于约500g/mol。在一些实施方案中，小分子具有生物活性，因为它们在动物，优选哺乳动物，更优选人类中产生生物学效应。小分子包括但不限于放射性核素和成像剂。在一些实施方案中，小分子是一种药物。优选地但不是必须的，该药物已被适当的政府机构或管理部门认为安全且有效地用于人或动物。例如，人用药物由FDA根据21C.F.R.§§330.5,331至361，和440至460列出，将其引入作为参考；兽用药物由FDA根据21C.F.R.§§500至589列出，将其引入作为参考。根据本发明，所有列举的药物都被认为是可接受的。
候选测试化合物包含与蛋白和/或核酸的结构相互作用所必需的功能性化学基团，并且通常包括至少胺、羰基、羟基或羧基基团，优选至少两个功能性化学基团，更优选至少三个功能性化学基团。候选测试化合物可以包含被一个或多个上述官能团取代的环状碳或杂环结构和/或芳族或多芳族结构。候选测试化合物还可以是生物分子，例如肽类、糖类、脂肪酸类、甾醇类、类异戊二烯类、嘌呤类、嘧啶类以及上述衍生物或结构类似物或它们的组合等。
候选测试化合物从多种来源获得，包括合成或天然化合物库(例如但不限于商业库、历史库/集合)。例如，许多方法可用于随机和定向合成多种有机化合物和生物分子，包括随机寡核苷酸的表达，合成有机组合库，随机肽的噬菌体展示库等。或者，可以获得或容易地生产细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物库。此外，天然和合成产生的库和化合物可以通过常规的化学、物理和生化手段容易地进行修饰。此外，已知的药理学试剂可以经历定向或随机的化学修饰，例如酰基化，烷基化、酯化、酰胺化等，以产生所述试剂的结构类似物。
反应混合物中还可以包含多种其他试剂。这些包括诸如盐、缓冲液、蛋白(例如白蛋白)、洗涤剂和聚合物的试剂，其可用于促进最佳蛋白-蛋白和/ 或蛋白-核酸结合。这样的试剂也可以降低反应组分的非特异性或背景相互作用。还可以使用提高测定效率的其它试剂，例如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、抗微生物剂等。
组分的添加顺序、孵育温度、孵育时间和测定的其它参数可由本领域技术人员确定。这种实验通常涉及测定参数的优化，而不是测定的基本组成。孵化温度通常在4℃至40℃之间。孵育时间优选最小化以促进快速、高通量筛选，并且可以在0.1至10小时之间。
本发明还涉及试剂盒和包含标记化合物和/或EZH1和/或EZH2的组合物。试剂盒可以含有其他化合物，如酶和/或缓冲液，用于进行本发明的方法。该试剂盒还可以包括执行本发明方法以鉴定如本文所述的EZH1和/或EZH2 抑制剂的说明书。试剂盒还可以包括容纳一个或多个容器的包装，所述容器装有一种或多种用于执行本发明的方法的试剂。
在一些实施方案中，鉴定EZH1和/或EZH2抑制剂的方法包括进行高通量基于邻近性的发光检测测定以鉴定具有潜在的EZH1和/或EZH2抑制活性的化合物；通过基于邻近性的发光检测测定使用不同浓度的潜在EZH1和 /或EZH2抑制剂来重新测试所鉴定的潜在的EZH1和/或EZH2抑制剂化合物，从而鉴定至少一小组具有潜在的EZH1和/或EZH2抑制活性的化合物；并进行二次和三次测定以确认鉴定的化合物抑制EZH1和/或EZH2的能力，并任选地确定鉴定的化合物的作用模式。在一些实施方案中，二次测定是基于细胞的和/或生物化学测定。
实施例
为了更全面地了解本公开的内容，阐述了以下实施例。本申请中描述的合成和生物实例用于说明本文提供的化合物，药物组合物和方法，并不以任何方式被解释为限制其范围。
制备本文所述的化合物
本文提供的化合物可以使用以下一般方法和操作由容易获得的原料制备。例如，式(I)化合物可以根据方案1至3中的任一个来制备，并且式(II) 化合物可以根据与方案1至3中任一个所示方法类似的方法制备。可选择地，本文所述的化合物可使用与美国专利申请公开文本US 2013/0040906和国际 PCT申请公开WO 2013/067302、WO 2013/039988、WO2012/118812、WO 2012/005805、WO 2014/100665、WO 2013/138361、WO 2013/067300、WO2013/067296、WO 2013/049770和WO 2011/140324中描述的方法类似的方法来制备。在给出典型或优选的工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)的情况下，除非另有说明，否则也可以使用其它工艺条件。最佳反应条件可以随所用的特定反应物或溶剂而变化，但是这些条件可由本领域技术人员通过常规优化方法确定。
方案1.化合物EZ-005的示例性制备
方案2.化合物JQEZ6和AVC-1-018的示例性制备
方案3.本文所述的其他化合物的示例性制备
在一些实施方案中，本文描述的酰肼是根据国际PCT申请 PCT/US2015/044303中描述的方法制备的，其并入本文作为参考。在一些实施方案中，本文描述的酰肼是根据方案4或5所示的方法制备的。
方案4.本文描述的为酰肼的化合物的示例性制备
方案5.本文描述的为酰肼的化合物的示例性制备
在一些实施方案中，为图21中所示的醛或酮。
GSK126和UNC1999直接从Sigma-Aldrich，Inc购买。通过NMR和 LCMS进一步证实了这两种化合物的结构和纯度。化合物JQEZ5和JQEZ23 的详细合成详细描述如下。反应如在各操作中所述进行，使用标准双歧管和注射器技术；玻璃器皿通过在烘箱中在130℃下烘烤12小时来干燥，然后使用。用于反应的溶剂从Sigma-Aldrich无水购得并按原样使用；唯一的例外是EtOH，其存储在分子筛上。HPLC级溶剂用于水性处理和色谱法。试剂按原样使用。通过使用EMD硅胶60F254(250微米)玻璃板(通过UV荧光淬灭和用KMnO4染色来显现)的薄层色谱法监测反应，和通过LCMS使用 Waters Aquity BEH C18 2×50mm 1.7μm颗粒柱(50℃)，使用H2O/乙腈[添加 0.2％v/v的甲酸或浓NH4OH(水溶液)溶液，95：5(0min)→1：99(3.60min)→1： 99(4.00min)]以1mL/min洗脱；使用交替的正/负电喷雾电离(125-1000amu)和UV检测(210-350nm)进行。快速柱色谱法使用Merck级9385硅胶/>孔径(230-400目)进行。使用毛细管熔点仪获得熔点，未校正。在Bruker光谱仪上在400MHz下记录1H NMR谱，并使用残留溶剂信号(二甲基亚砜-d6 ＝2.50ppm；氯仿-d＝7.27ppm；甲醇-d4＝3.31ppm；二氯甲烷-d2＝5.32ppm) 作为内部标准以ppm报告。数据被报道为：{(δ位移),[(s＝单峰,d＝双峰, dd,双二重峰,ddd＝双双二重峰,t＝三重峰,quin＝五重峰,sept＝七重峰, br＝宽峰,ap＝明显的),(J＝耦合常数，单位为Hz)和(积分)]}。在Bruker光谱仪上以100MHz记录质子-去耦13C NMR谱，并使用残留溶剂信号(氯仿 -d＝77.0ppm；二甲基亚砜-d6＝39.51ppm；甲醇-d4＝49.15ppm)作为内部标准。使用ATR-FTIR仪器记录红外光谱。通过流式注射在具有分辨率/>的 ES+电离的qTOF Premiere质谱仪上获得高分辨率质谱。/>
方案6.中间体4的合成.
将叔丁醇钾(BuOK,4g,35.7mmol)、2-氰基乙酰胺(1)(3.3g,39.2mmol) 和3-庚烯-2-酮(2)(4g,35.7mmol)于DMSO(60mL)中的混合物在室温搅拌 30min。然后加入更多的t-BuOK(12g,107mmol)，并将反应混合物在氧气环境中搅拌1h。将反应混合物用氮气吹洗，并用水(250mL)和HCl水溶液(4 N,300mL)缓慢稀释。过滤反应混合物以收集黄色沉淀物，将其用水洗涤并干燥，得到1.5g的3(24％收率)，其为黄色固体。MS：m/z 177(M+H)+。
向上述3(1.5g)于THF(20mL)中的混合物中加入Pd/C(10％,1.5g)和浓 HCl(1mL)。将混合物在氢气气氛中在室温搅拌过夜。将混合物用Celite过滤并真空浓缩滤液，将残余物用PE/EA(v/v＝10)重结晶，得到1.4g的4(91％收率)，其为黄褐色固体。MS：m/z 181.1(M+H)+；164.1(M-NH3+H)+；1H NMR (500MHz,DMSOd6)δ11.87(br s,1H),8.12(s,3H),6.49(br s,1H),6.00(s,1H), 3.78(m,2H),2.18(s,3H),1.50(m,2H),0.92(t,J＝7.0Hz,3H)ppm.
方案7.合成中间体12
使(乙氧基亚甲基)氰基乙酸乙基酯(5)(5g,29.6mmol)、异丙基肼盐酸盐(6)(3.9g,35.5mmol)和碳酸钾(8.2g,59.2mmol)于乙醇(100mL)中的混合物回流16h。真空除去挥发物得到粗制7，其为含有无机盐的黄色固体，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS：m/z 198.1(M+H)+。
将上面粗制7于氢氧化钠水溶液(4N,50mL)中的悬浮液回流16h。冷却混合物并用浓HCl酸化至pH～3.5。向反应混合物中加入HCl/二噁烷(4N, 2mL至pH<1)并回流16h。分离除去有机层，水溶液用氢氧化钠水溶液(4N, 至pH>10)中和。然后将混合物用二氯甲烷萃取。合并的有机层溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩得到约2g的8，其为橙色油状物(3步的收率为 54％)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS：m/z 126.1(M+H)+。
将8(1.00g,7.99mmol)和草酰乙酸二乙酯(9)(2.26g,12.0mmol)于甲苯(20mL)中的混合物回流16h。真空除去挥发物，将残余物溶解在乙酸(10 mL)中并回流4小时。然后将混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机溶液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物用二氯甲烷重结晶，得到0.9g的10(45％收率)，其为白色固体。MS：m/z 250 (M+H)+。
向10(0.90g,3.61mmol)于THF(10mL)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(4N,5mL)，并在室温搅拌过夜。然后将所得混合物用浓HCl酸化至pH～ 2并用二氯甲烷萃取。将有机溶液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗制产物用二氯甲烷重结晶，得到0.7g的11(88％收率)，其为黄色固体。 MS：m/z 222(M+H)+。
11(600mg,2.71mmol)于三氯氧磷(15mL)中的混合物在密封管中在 120℃搅拌过夜。真空除去大部分三氯氧磷，并将残余物在0℃用水淬灭。将混合物用二氯甲烷萃取。将合并的有机溶液用水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(PE/EA,v/v＝1)来纯化，得到110mg 的12(17％收率)，其为白色固体。MS：m/z 240(M+H)+.MS：m/z240.0 (M+H)+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.83(s,1H),5.34(m,1H),1.64(d,J＝6.5Hz,6H)ppm.
方案8.合成化合物JQEZ5
将12(70mg,0.29mmol)、HATU(277mg,0.73mmol)和二乙基丙基乙基胺(DIPEA)(1mL)在二氯甲烷(10mL)中的混合物搅拌10min，然后加入4 (127mg,0.58mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。将混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，并用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(50％EA/PE)来纯化，得到60mg的13(51％收率)，其为白色固体。MS：m/z 402.1(M+H)+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.91(br s, 1H),8.38(s,1H),8.24(t,J＝5.0Hz,1H),7.43(s,1H),6.00(s,1H),5.26(m,1H),4.65(d,J＝5.5Hz,2H),2.69(t,J＝7.5Hz,2H),2.28(s,3H),1.64(m,2H), 1.55(d,J＝6.5Hz,6H),1.02(t,J＝7.0Hz,3H)ppm.
将14(2.37g,10mmol)和N-甲基哌嗪(4g,40mmol)在n-BuOH(25mL) 中的混合物回流96h。真空除去挥发物，并将粗制产物通过硅胶柱色谱法 (PE/EA,v/v＝3至EA)来纯化，得到1.8g的15(70％收率)，其为黄色半固体。 MS：m/z 256.0(M+H)+,258.0(M+H,Br)+。
将15(1.5g,5.9mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.6g,6.5mmol)、醋酸钾(1.8 g,18mmol)和Pd(dppf)2Cl2[CH2Cl2](0.73g,0.89mmol)在DMSO(20mL)中的混合物用氮气保护并在80℃搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EA萃取。真空浓缩有机溶液并将残余物通过硅胶柱色谱法(PE/EA,v/v＝3至EA)来纯化，得到1.0g的16(56％收率)，其为棕色固体。MS：m/z304(M+H)+.
将13(133mg,0.33mmol)、16(200mg,0.66mmol)、Pd(dppf)2Cl2[CH2Cl]2(41mg,0.050mmol)和Cs2CO3(215mg,0.66mmol)在DMF(5mL)中的混合物用氩气保护，并在140℃用微波照射30分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用Celite过滤。浓缩滤液并将残余物通过快速色谱法和制备性-HPLC (HCOOH系统)纯化，得到55mg的JQEZ5(31％收率)，其为黑色固体。MS： m/z 543.4(M+H)+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.00(d,J＝2.5Hz,1H),8.33(s,1H),8.31(dd,J＝9.0和2.5Hz,1H),8.14(t,J＝6.0Hz,1H),7.87(s,1H), 6.75(d,J＝9.0Hz,1H),6.02(s,1H),5.38(m,1H),4.69(d,J＝6.0Hz,2H),3.88(m,4H),2.92(m,4H),2.75(m,2H),2.62(s,3H),2.27(s,3H),1.67(m,2H), 1.62(d,J＝6.5Hz,6H),1.05(t,J＝7.0Hz,3H)ppm.
本文所述化合物的生物测定
实施例1.化合物5对所选择的HMT的抑制活性
将化合物5用一组22个HMT(列于表1中的甲基转移酶)来描述性质，并且显示化合物5不仅针对EZH2具有活性，而且对EZH2相对EZH1或 DOT1具有10倍选择性(表1)。化合物5在72小时处理后以1μM抑制EZH2，这导致在EZH2突变系中，在1μM下H3K27的三甲基化降低。
表1.化合物5对所选择的HMT的抑制活性.
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实施例2.化合物JQEZ6的表面等离子体共振实验，用于鉴定化合物与 PRC2的结合
化合物EZ06通过生物素-链亲和素相互作用固定在SPR芯片上。然后使PRC2五组分复合物溶液缓慢流过芯片，接着通过SPR检测EZ06和5组分复合物之间的结合。示例性结果如图6所示。数据显示，化合物JQEZ6 与PRC2复合物结合。还使用化合物JQEZ6开发用于评估EZH2的小分子抑制剂的活性的ALPHA测定。该ALPHA测定相对于针对HMT的已知测定是有利的，因为该ALPHA测定是非辐射测定法，而已知的HMT测定法是辐射测定法，其需要特殊的放射性试剂并导致低通量。本文描述的ALPHA 测定允许高通量筛选。对于ALPHA测定，将JQEZ6固定在供体珠的表面上，并将与Flag标记物复合的PRC2 5组分通过Flag抗-Flag标记物相互作用固定在受体珠上。这两个珠的混合物在激发时产生信号。有效的抑制剂会破坏该相互作用，并引起信号降低，这用于评估所有化合物。
实施例3.作为肺癌靶向治疗的机会的EZH2的致癌失调
概述
作为染色质结构和功能的主要调节物，EZH2赖氨酸甲基转移酶引发发育基因网络的转录沉默。EZH2的过度表达通常在人类上皮癌症例如非小细胞肺癌(NSCLC)中观察到，但对于由于失调的EZH2导致恶性转化还缺少明确证据。EZH2过表达在NSCLC中的因果关系在本文中用新的基因工程的肺腺癌小鼠模型进行证明。失调的EZH2使导致表观遗传转化的正常发育途径沉默，独立于经典生长因子通路活化。因此，肿瘤的特征为具有不同于 KRAS和EGFR突变小鼠肺癌的转录程序，但与表现出高EZH2表达的人肺腺癌共享。为了靶向EZH2依赖性癌症，开发了一种新的且有效的EZH2抑制剂，其由简单的合成得到并具有改善的药理学性质。JQEZ5促进体内EZH2 驱动的肿瘤的消退，证实在已确诊肿瘤中对EZH2的癌基因成瘾，并为肺癌的确定亚组(defined subset)提供表观遗传治疗的理论依据。
用于治疗肺癌的靶向疗法具有确定的患者亚群中明显改善的总存活率；然而，肺癌的许多致癌驱动因素仍然是未知的。染色质相关酶的失调在许多癌症中是致病性的，并且由于它们是可逆的，因此代表潜在的治疗靶标。在这里，已显示EZH2的过表达可以在与具有高EZH2表达的人肺癌表型相似的小鼠中诱导肺癌。具有EZH2过表达的鼠和人肺癌显示低水平的磷酸化 AKT和ERK，表明可能有对EZH2抑制剂敏感的肿瘤的其他生物标志物。最后，开发了一种新的小分子抑制剂JQEZ5，其选择性抑制EZH2并促进这些肿瘤的消退，揭示了在肺癌中抗EZH2治疗的潜在作用。
介绍
肺癌是世界上最常见的和最致命的癌症之一(Jemal等人，2011)。非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常见的类型，包括异质性疾病组(Chen等人， 2014)。对许多潜在可靶向致癌基因中复发突变和扩增的鉴定已显著改善了 NSCLC患者亚群的总存活率。BRAF、KRAS和表皮生长因子受体(EGFR) 中的激活突变以及涉及间变性淋巴瘤激酶(ALK)的融合与对激酶抑制的应答有关(Lynch等人，2004；Paez等人，2004；Pao等人，2004；Soda等人， 2007)。此外，随着改良的基因组分析和下一代测序的出现，已经在HER2、 MET、成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)和FGFR2、ROS1受体酪氨酸激酶、神经调节蛋白1(NRG1)、神经营养性酪氨酸激酶受体1型(NTRK1)和 RET中鉴定出复发性突变和扩增，其综述参见(Chen等人，2014)。虽然对于大多数肺腺癌病例集合考虑了这些改变，但相当多的NSCLC患者在治疗性易处理靶标中缺少可识别的遗传性病变。
除了生长因子信号传导通路之外，最近已经鉴定出染色质相关复合物在 NSCLC中复发性改变或转录失调，包括TET甲基胞嘧啶二氧酶(TET2)、DNA 甲基转移酶3A(DNMT3A)和zeste增强子的同源物2(EZH2)(Kandoth等人， 2013)。值得注意的是，这些因素中的每一个都影响着异质染色质结构，并且每个都与正常发育转录途径的协调调节有关(Chen andChan,2014； Hamidi等人，2015；Simon and Kingston,2009；Wu and Zhang,2011)。这些数据表明，染色质结构的破坏是肺癌发病机制中常见的事件，其与致癌信号传导途径相容或截然不同，功能是使与细胞分化相关的转录程序失调。
染色质的动态结构受到DNA的翻译后修饰(PTM)和核蛋白颗粒内组蛋白的非结构化氨基末端尾部的影响。通过DNA结合的转录激活因子和抑制因子控制基因表达途径来影响赋予染色质共价PTM的染色质相关酶复合物的募集。通常，组蛋白尾部的赖氨酸残基的侧链乙酰化与活性常染色质相关，特别是组蛋白3赖氨酸27，其与活性顺式调控增强子元件(H3K27ac)相关 (Zhou等人，2011)。H3K27的修饰呈现出开关样行为，因为H3K27的单-、二-、三-甲基化(H3K27me1，-me2，-me3)与抑制性、兼性异染色质相关 (Margueron andReinberg,2011)。H3K27甲基化主要由多梳组抑制复合物 2(PRC2)介导，PRC2是多蛋白组装体，其具有激活并指导核心催化酶(EZH2) 的功能，该酶介导S-腺苷甲硫氨酸依赖性赖氨酸甲基化。
在实体瘤和血液恶性肿瘤中观察到EZH2的复发性变化，强调了染色质结构在癌症发病机制中的意想不到的中心性。已经表征了EZH2的活化(复发突变)和灭活(缺失，失活突变)，其支持EZH2作为致癌基因或肿瘤抑制基因的组织特异性作用。已在B细胞淋巴瘤中表征了激活突变促进有效H3K27 三甲基化(Morin等人，2010；Sneeringer等人，2010)。已经在T细胞急性淋巴细胞性白血病和恶性骨髓疾病中确定了失活的改变(Ernst等人，2010；Nikoloski等人，2010；Ntziachristos等人，2012)。比这些关注的遗传事件更广泛的是，已在多种癌症中发现EZH2的过度表达(Bracken等人，2003； Simon and Lange,2008；Varambally等人，2002)。像增益功能突变一样，过表达与增加的总H3K27me3有关，促使肿瘤抑制因子和发育调节物质沉默，并且往往赋予不良预后(Alford等人，2012；Bachmann等人，2006；Gong 等人，2011；Kleer等人，2003；Varambally等人，2002)。与肺腺癌相关的是，最近几项研究重复证明EZH2表达增加与不良结局之间的相关性 (Behrens等人，2013；Kikuchi等人，2010；Lv等人，2012)。
EZH2因此已成为癌症治疗开发的迫切目标。已经采取了策略来开发复杂组装体的破坏物(Kim等人，2013),以及典型的SET赖氨酸甲基转移酶结构域的SAM竞争性抑制剂(Knutson等人，2012；McCabe等人，2012；Qi 等人，2012)。使用这些化学探针的选择性EZH2抑制已经将EZH2确立为上下文特异性肿瘤依赖性，同时在B细胞淋巴瘤中(Knutson等人，2012；McCabe 等人，2012；Qi等人，2012；Zhao等人，2013)和确定的软组织肉瘤中(Ciarapica 等人，2014；Knutson等人，2013；Li等人，2013)提供药理学靶标验证。因此，已经开始使用通过口服和静脉内给药施用的药物样EZH2抑制剂进行人类临床研究(ClinicalTrial.gov identifier：NCT01897571,NCT02082977,NCT02395601)。
肺腺癌中EZH2的明显过表达和临床研究的可行性促使本发明努力表征EZH2的转录失调对肺癌发病的效果。使用遗传和化学遗传学方法，证明野生型EZH2过表达在肺癌中的致癌作用和表观遗传学治疗在该疾病中的机会。具体来说，生成了在全身和特别是在肺中过表达野生型EZH2的基因工程小鼠模型(GEMM)。全身和肺特异性EZH2过表达促进肺肿瘤的形成，其表现出与表达高水平EZH2的人类肿瘤亚型相似的生物化学和转录特征。对 EZH2过表达的肺肿瘤中染色质状态的分析揭示了H3K27me3的异常扩散，特别是在发育调节物基因位点，其中的许多是已知的肺癌中的肿瘤抑制因子。为了克服现有的EZH2抑制剂在效力、利用度和体内效力的限制，已开发并表征了一种新型和开源的EZH2化学探针JQEZ5。在GEMM和人类 NSCLC模型中，JQEZ5表现出优异的暴露和药效学靶标调节。用JQEZ5长期治疗EZH2成瘾的具有肿瘤的小鼠一致地导致肿瘤负荷降低。这些研究共同揭示了EZH2作为NSCLC驱动基因的作用和靶向表观基因治疗的机会。
EZH2过表达导致鼠肺癌
为了研究EZH2过表达在癌症中的因果关系，普遍地使用两种不同的策略来加强人EZH2在小鼠中的表达以控制时间特异性，因为EZH2对胚胎发生和早期发育至关重要。将所有小鼠进行工程改造以携带一份表达全长鼠 EZH2的转基因，其含有在CAG启动子和EZH2基因(LSL-Ezh2)之间侧接有loxP位点的STOP盒(图15A-15C)。使用两种不同的策略来诱导使用Cre重组酶的EZH2过表达(图9A)。首先，使用肌动蛋白-Cre在小鼠的所有组织中组成型过表达EZH2(肌动蛋白-Cre：LSL-EZH2)。其次，使用泛素 -Cre-ERT2(UBC：LSL-EZH2)普遍过表达Ezh2，在6周龄时用他莫昔芬治疗后。这种方法被设计为规避在胚胎发生和早期发育的关键阶段由于过表达 EZH2导致的任何致死性。
肌动蛋白-Cre：LSL-Ezh2小鼠过表达EZH2，这通过免疫组织化学(IHC) 和Western印迹得以证明(图15D和15E)。所述动物是能存活的、能生育的、发育正常的，并且与成年期没有表达Cre重组酶的同窝动物无法区分。这些结果表明EZH2的过表达在胚胎和发育生长期间是可耐受的。随着肌动蛋白 -Cre：LSL-EZH2小鼠进入成年期，观察到多种肿瘤类型，包括淋巴瘤和肝脏的组织细胞肉瘤。然而，大多数小鼠(6/11小鼠；55％)发展成肺腺瘤/腺癌，在平均64.8±3.3的周龄没有明显的转移(表2和图9B)。另外，在6周龄时被施用他莫昔芬的UBC：LSL-Ezh2小鼠也在平均84.8±10.1周时发展成具有 40％外显率(4/10小鼠)的肺腺癌。与之相反，野生型小鼠没有明显的表型，所有收获的肺在80周均正常，这表明EZH2过表达在肺肿瘤发生中的因果关系(表3和图9B)。
表2：LSL-EZH2小鼠模型的总结
a一只小鼠在肝脏中既具有肺腺癌又具有组织细胞肉瘤。
b两只小鼠在肝脏中既具有肺腺癌又具有组织细胞肉瘤。
表3：LSL-EZH2小鼠模型中肺腺癌的总结
为了扩展这些发现，使用吸入的Adeno-Cre病毒将EZH2过表达仅限于第三GEMM中的肺，以将Cre表达引导至LSL-EZH2小鼠的肺上皮(图9A) (DuPage等人，2009)。将病毒Adeno-Cre通过吸入给予至6周龄的动物，并且这些动物中的42％(5/12)在88.2±14.6周时发展成肺腺癌，表明EZH2在肺上皮细胞中的过表达足以诱导癌症。总之，数据表明，45％的过表达EZH2 的小鼠发展成肺腺癌，平均存活时间为73.6周龄(图9B)。
所有生成的小鼠肺肿瘤的组织学显示人类1-2级肺腺瘤/腺癌的特征。与正常小鼠肺的染色相比(图9C，顶部图)，EZH2过表达的肺腺癌显示高细胞密度和较少的分化，均与低级和中级腺癌一致。与正常肺组织相比，Ezh2 过表达引起的肿瘤的免疫组织化学(IHC)分析显示出增殖标志物Ki67的增加 (图9C)。与通过Kras表达驱动的鼠肺癌相比，EZH2驱动的肺肿瘤中Ezh2 表达显著较高(图9D)。分析通常在Kras驱动的肺癌中鉴定的途径标志物(例如磷酸化AKT(p-AKT)和磷酸化ERK(p-ERK))的表达，结果显示EZH2诱导的小鼠肺肿瘤中具有低p-AKT和p-ERK表达(图9D)。Western印迹分析进一步证实，EZH2小鼠肺肿瘤比KRAS诱导的小鼠肺肿瘤和正常小鼠肺具有显著减少的p-AKT和p-ERK(图9E)。总之，这些数据表明，由EZH2介导的表观遗传失调驱动的肺肿瘤在组织学上是相似的，但在分子上与KRAS依赖性致癌信号传导驱动的肺肿瘤不同。
作为分子上不同的实体的EZH2-驱动的肺癌
为了确定EZH2诱导的小鼠肺癌是否反映人类疾病的分子特征，进行鼠肺，GEMM肿瘤和人类癌症的无监督比较基因表达谱。首先，进行RNA测序(RNA-seq)以比较来自小鼠的EZH2过表达的癌前正常肺组织和EZH2过表达的肺腺癌肿瘤的基因表达谱。使用无监督的层次聚类分析，将来自这些样品的基因表达谱与EGFR突变和KRAS突变的肺腺癌小鼠肿瘤的表达谱进行比较(图10A)。分离出EZH2过表达的肿瘤，其在转录上与EZH2过表达正常肺，EGFR和KRAS突变的肺肿瘤不同。这些数据表明，染色质的EZH2 调节导致转录途径的激活/抑制，其不同于由EGFR和KRAS超激活突变所驱动的典型的肺腺癌，其为不同的上游信号通路激活状态的上述测量提供了进一步的转录证据。
在鼠肺腺癌中定义了EZH2依赖性和肿瘤特异性转录状态，接下来评估是否存在相当的人类NSCLC亚组。使用来自癌症基因组图谱(TCGA)的公开数据，确定了具有升高的肿瘤EZH2表达的肺腺癌患者组(图10B)。发现人肺癌中EZH2的表达广泛分布>50倍范围，并且高EZH2水平与KRAS或 EGFR突变不相互排斥。进一步选择具有野生型KRAS和EGFR的高度EZH2过表达的肿瘤(前20％)以模拟鼠模型的遗传学。通过基因集富集分析(GSEA) 评估通路富集(Subramanian等人，2005)。与具有低EZH2表达的肿瘤相比，与MEK和mTOR激活相关的转录特征在EZH2过表达的肿瘤中被抑制，无论是否存在或不存在致癌性KRAS或EGFR突变(图10C)，再次证实EZH2 驱动的肿瘤在分子上不同于由典型信号通路驱动的肿瘤。
EZH2过表达对肺癌的染色质结构的影响
多梳抑制复合物对顺式调节性染色质结构域产生广泛的影响，从而影响表观基因组细胞状态(Ku等人，2008)。H3K27乙酰化和三甲基化是相互排斥的生物化学事件，与在发育转变中观察到的转录激活(H3K27ac)和抑制 (H3K27me3)的支点一致(Riising等人，2014)。通过使用大规模并行DNA 测序(ChIP-seq)的H3K27ac染色质免疫沉淀测定的增强子启动子活性的全基因组评估已被用于比较研究恶性和炎症细胞状态(Brown等人，2014；Chapuy 等人，2013)。大规模H3K27ac富集区域的聚焦表观遗传学分析，所谓的超增强子(SE)，已经为致癌信号传导(Hnisz等人，2015)和人类肿瘤的亚分类 (Chapuy等人，2013)提供了推论。据认为，随着时间的推移，肺上皮中的 EZH2过表达导致稳定的三甲基化和发育转录因子的沉默。
为了了解EZH2过表达在恶性转化背景下对染色质结构的动态影响，对 EZH2过表达的正常和恶性肺组织进行比较性表观遗传学分析。首先，通过 H3K27ac ChIP-seq确定两组肿瘤-正常对中的活性增强子的位置，并确定了不对称超乙酰化(SE)的区域，如之前所报道(Chapuy等人，2013；Loven 等人，2013)。无监督的层次聚类分析分离的EZH2过表达的肿瘤和肺上皮细胞(WT)呈明显不同的常染色质表观基因组结构(图11A，11B)。EZH2过表达的肿瘤和正常肺中高度占据的H3K27ac区域的示差分析揭示了H3K27ac的全局再分布，其中1244个单独位点在H3K27ac方面表现出大于log2的1.5 倍变化(432个丢失，812个增益，图11C)。SE处H3K27ac的变化导致相邻表达的基因的基因表达的相互变化(通过RNA-seq测量)，表明染色质的调节影响这些肿瘤中的基因表达(图11D)。在肿瘤中对邻近缺失H3K27ac的区域的基因的无偏差前沿分析鉴定了多梳蛋白抑制性靶基因标签，暗示PRC2介导的这些调控元件的抑制(图11E，11F)。
为了将EZH2功能与缺失的SE相关联，下一步对所有样品进行 H3K27me3 ChIP-seq。在缺失H3K27ac SE的区域中，确定了33个顺式调节性区域的不同亚组，其中H3K27ac的缺失伴随着多梳蛋白H3K27me3标记物的强增加(图11G)。在功能上，与这些33个调节性区域相关的基因显示由 RNA-seq导致的肿瘤中基因表达的减少(图11H)，并且由多种发育转录调节物质组成，包括Foxf1a，Irf8，Hoxa9和Meis1，以及其他染色质因子如Aff3(图 S2A)。已经在NSCLC中观察到Hoxa9，Meis1，Irf8和Foxf1的抑制，并且它们的活性已经功能上与减少的肿瘤发生相关，表明这些基因调节物质的肿瘤抑制作用(Hwang等人，2014；Li等人，2014；Suzuki等人，2014)。对在肿瘤样本中抑制的主要发育型TF的目视检查证实了，从大型超乙酰化增强子元件到宽的H3K27三甲基化区域的表观基因组转换(图16B-16D)。
在肿瘤样本中获得的SE相关区域中，引人注意地为编码MAPK-ERK 通路的良好表征的阴性调节物质的基因：Dusp4、Spry1、Spry2和Errfi1(图 11C)。目视检查证实，所有四个基因的特征在于在顺式调控元件中H3K27ac 具有强大的增益(图16E，16F)，并且RNA-seq证实了肿瘤中升高的表达。这些数据确定进展成肺腺癌的过程中归因于过表达的EZH2的增强子重塑，使正常分化基因特异性沉默并激活MAPK-ERK信号传导的负调节物质，与 EZH2驱动的GEMM的信号转导免疫表型一致。
为了探讨这些发现与人类肺癌病理生理学的相关性，我们接下来询问在 EZH2过表达的人肺腺癌中是否观察到在鼠肿瘤中鉴定的PRC2超甲基化的 SE相关基因的下调。在具有EZH2表达最高(前20％)的人肺癌中观察到功能性32个基因组的强下调(图11I)。总之，综合表观遗传学分析认为，人肺癌有一个独特亚群，其特征在于1)高水平的EZH2，2)Ras效应物的低活化，以及3)抑制EZH2靶基因的独特组。
EZH2过表达促进人类细胞的细胞转化
为了检查人类细胞中EZH2的致癌潜力，使EZH2在永生化的正常人肺上皮细胞系(人气道支气管上皮(hTBE)细胞)中过表达，并监测它们的致癌潜能(图12A)。为了监测转化，我们进行了软琼脂集落形成测定。与表达对照载体(hTBE-ct1)的细胞相比，EZH2过表达的hTBE细胞(hTBE-EZH2)在接种四周后在软琼脂上形成菌落(图12B)。由于许多转化的细胞系可以在延迟较短的软琼脂平板上形成菌落，并且考虑到EZH2驱动的转化的表观遗传学机制，认为hTBE-EZH2细胞可能随时间获得更高的转化能力。因此，在接种到软琼脂上之前，hTBE-EZH2细胞连续传代20次(p20)。在p20的 hTBE-oeEZH2细胞在两周内形成菌落，并且比在p10的细胞具有更大的转化潜力(图12C)。另外，传代10或20次的hTBE-ctl细胞不能在软琼脂上形成菌落(图12C)。因此，数据表明EZH2的组成型过表达促进人类细胞随时间的细胞转化，这与EZH2转基因小鼠中肺癌形成的长潜伏期一致(图9C)。
具有高EZH2表达的人NSCLC对EZH2缺失敏感
观察到EZH2过表达在小鼠中产生肺癌并使正常人肺上皮细胞转化，这表明，EZH2可能在人类NSCLC的亚型中起重要作用。使用两个先前验证的EZH2 shRNA(shEZH2-A和shEZH2-B)，EZH2表达在表达高水平EZH2 的人类NSCLC细胞中被敲除，没有其他已知的致癌突变(H661)(Fillmore等人，2015；Tzatsos等人，2013；Xu等人，2012)。与具有非靶向shRNA(shNT) 对照的细胞相比，两个shRNA显示对EZH2蛋白表达几乎完全抑制(图12D)。细胞增殖试验表明，与对照细胞相比，响应于shEZH2敲除H661细胞显示超过50％的生长抑制(图12E)。最后，测试了人类NSCLC的小鼠异种移植模型中肿瘤形成是否需要EZH2表达。将表达对照或shEZH2载体的H661 细胞皮下注射到小鼠中，并且每两周监测肿瘤形成。EZH2敲除显著抑制体内H661肿瘤的生长(图12F，12G)。与表达高水平EZH2蛋白的H661细胞相比，人类H292肺癌细胞表达较低水平的EZH2(图17A)。与此一致，H292 细胞生长不受EZH2敲除的影响(图12D和17B)。同样地，EZH2敲除也不影响这些细胞在小鼠异种移植模型中的生长(图12G)。
EZH2过表达肺癌对催化活性EZH2的依赖性
为了评估EZH2过表达肺肿瘤对持续EZH2酶活性的依赖性，采用化学遗传学方法。最近报道了几种基于吡啶酮的小分子EZH2抑制剂作为化学探针(例如，GSK-126和UNC1999；图18A)(Konze等人，2013；McCabe等人， 2012)。这些近似结构的类似物都是EZH2的有效和选择性抑制剂，然而这些探针在体内生物研究中的广泛应用可能受到低效力(高剂量给药)、有限生物利用度(每日两次给药)和不确定利用度(合成、药物材料转移的成本)的限制。开发了一种新型的EZH2抑制剂作为科学界的开源化学探针。缺乏结晶学数据的指导，从迭代模拟合成和生化测试经验推导结构-活性关系。
从后续化学发现的是JQEZ5，其特征为显示6-取代的增溶特征的吡唑并吡啶核和保留的吡啶酮弹头。JQEZ5的合成是九个线性步骤，高收率并且可放大规模，以支持广泛的分布。作为配对对照，JQEZ23用预测的无活性吡啶鎓环代替活性吡啶酮(以灰色高亮显示；图13A)。这两种化合物都在使用了具有放射性标记的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的五组分PRC2复合物的酶测定中进行评估。JQEZ5抑制了PRC2的酶促功能，其生化IC 50为80nM，类似于GSK-126和UNC1999，而JQEZ23对纯化的PRC2几乎没有抑制活性(图 13B，18B)。JQEZ5表现出对PRC2的SAM竞争性抑制，其通过在渐增的未标记的SAM辅因子浓度的存在下评估生化抑制来测定(图13C，18C)。为了了解抑制剂对EZH2分子识别的推定方式，使用最近报道的计算模型对JQEZ5与EZH2的结合进行了建模(图13D)(Kalinic等人，2014)。我们建立的结合模型表明，JQEZ5的吡啶酮环与EZH2上的Asn78结合，吡唑并吡啶环也深埋在EZH2的SAM结合口袋中。JQEZ5和EZH2的配体相互作用图 (LID)也预测JQEZ5上的哌嗪环延伸出EZH2的SAM结合口袋，因此可以根据需要进一步修饰(图13E)。通过平行研究一组重组的纯化赖氨酸甲基转移酶来评估和证实JQEZ5对EZH2的特异性(图18D)(Horiuchi等人，2013)。
在生物化学验证JQEZ5的特异性和效力后，将人类NSCLC细胞在按剂量变化的生物化学和细胞研究中进行处理(H661)。用增加浓度的JQEZ5处理的细胞证明H3K27me3水平的急剧下降，而不影响H3K27的单-或二-甲基化，这通过Western印迹法评估(图14A)。用阴性对照化合物JQEZ23处理对 H3K27甲基化状态没有任何影响(图14B)。H3K27me3的降低与化合物浓度以及处理时间的长短相关(图14C)。类似于EZH2 shRNA研究，在处理4天后，JQEZ5抑制EZH2过表达的H661细胞的增殖，而不影响以较低EZH2 表达为特征的H292细胞的增殖(图14D-14E)。
为了探讨本研究的翻译相关性，在具有肿瘤的GEMM中进行了JQEZ5 的治疗试验。将JQEZ5配制为用于腹膜内(IP)给药，重复给药研究确立每日 75mg/kg IP为耐受剂量和给药方案。药代动力学研究证实了JQEZ5的极好暴露，无需每周两次给药(图19A)。为了准备治疗研究，每周监测肌动蛋白 -Cre：LSL-EZH2小鼠和UBC：LSL-Ezh2小鼠(在6周龄用他莫昔芬治疗)，以监测肺腺癌的症状(呼吸困难)的发作。此时(t＝0)，通过MRI使肺癌可视并确诊(图19B-19C)。然后用JQEZ5处理具有肿瘤的小鼠三周(每日75mg/kg IP)，并通过MRI使肿瘤相对可视。使用JQEZ5处理的动物在三周治疗过程中显示出快速和显著的肿瘤消退，其通过二维MRI和体积测量所证明(图 14F-14G，19B-19C)。
讨论
作为癌症的主要死亡原因，肺癌存在远未满足的医疗需求。在过去十年，一小部分肺癌患者受益于靶向治疗，但大多数患者没有从这些方法中受益，所有转移性疾病仍然是无法治愈的。存在大量由于缺乏可药用致癌驱动子 (例如KRAS)而无法被有效治疗的患者。因此，在这些剩余的肿瘤中发现新的可作用(actionable)驱动子和肿瘤依赖性是一项紧迫而重要的工作。
虽然不受体细胞改变的影响，但是在人类肺癌的一个子集中观察到 EZH2的失调性过表达(Behrens等人，2013；Kikuchi等人，2010；Lv等人， 2012)。迄今为止，尚未确定肺肿瘤发展中的因果关系。以上，通过产生具有条件性EZH2过表达的一系列遗传工程小鼠模型(GEMM)，探究了EZH2 失调的致癌潜力。三种GEMM确立了EZH2在NSCLC形成中的强致癌活性。实际上，45％的小鼠被工程化以过表达EZH2发展的肺腺癌。这些数据与之前的研究相呼应，之前的研究举例说明了突变EZH2在B细胞淋巴瘤中的转化活性(Morin等人，2010；Sneeringer等人，2010)。之前的研究表明，EZH2 在髓室中的过表达阐明了骨髓增生性疾病，但迄今为止还缺少EZH2过表达导致致瘤性转化的坚实证据(Herrera-Merchan等人，2012)。这项工作是体内野生型EZH2过表达引起癌症的证明。EZH2的过表达是众多实体瘤的常见特征，本研究中产生的试剂将有助于进一步更宽泛定义EZH2在癌症发病机制中的作用。
所得的EZH2驱动的鼠肿瘤的细胞生物学研究和综合表观基因组分析效法了一确定亚群的人类疾病的胞质和转录信号传导。由EZH2过表达诱导的肺腺癌显示低水平的p-AKT和p-ERK，其伴随着MAPK-ERK通路的已知的负调节物质的表达升高，如双特异性蛋白磷酸酶4(DUSP4)和萌芽同源物 (sprouty homologs)1和2(SPRY1&SPRY2)。与这些发现一致，与MEK和 mTOR活化相关的转录特征在表达高水平EZH2的人类肿瘤中被抑制。鉴于肺癌中许多已知致癌基因激活这些途径，EZH2似乎通过不涉及这些典型途径的机制促进肿瘤发生，这具有重要的机理和治疗意义。然而，一些EGFR 和KRAS突变的人类癌症也表达高水平的EZH2，表明在某些情况下，这些途径可能会互相配合。与此概念相一致的是，DUSP4被认为是EGFR突变型肺腺癌中的生长抑制因子(Chitale等人，2009)并且是EGFR突变型肺癌细胞系中ERK的阳性激活子(Britson等人，2009)。基于这些发现的EZH2 介导的恶性转化的统一模型可为将染色质结构重组为去分化的细胞状态，其通过额外的遗传驱动子促进增殖转化。
使用功能性遗传(shRNA)和化学遗传方法，证明EZH2过表达的人和鼠肺癌模型对EZH2的依赖性。针对药理学靶标验证，创建了一种新型SAM 竞争性抑制剂，其建立了明显治疗指标用于体内靶向过表达EZH2的肿瘤。通过基因组或免疫组织化学生物标志物促进了靶向肺癌的疗法的成功临床翻译。在这里，显示EZH2对于表达高水平的EZH2的人肺癌细胞系的生长是重要的，同时对于具有较低水平的EZH2的细胞系不是必需的。因此，EZH2 表达可为下游临床试验中患者选择或计划分层有用的生物标志物。这些发现支持前列腺癌的之前的工作，其中EZH2被发现对于具有较高EZH2水平的 LNCaP-abl细胞中的细胞生长是不可或缺的，但在具有较低EZH2水平的 LNCaP细胞中不是必需的(Xu等人，2012)。
以前已经提出将EZH2抑制作为在BRG1或EGFR突变的背景下的 NSCLC的治疗策略(Fillmore等人，2015)。本研究发现，EZH2抑制剂可以使具有EGFR或BRG1突变的NSCLC细胞对化疗敏感，并提出EZH2抑制与Topo II抑制的组合。在这里，确定EZH2抑制在确定的NSCLC亚组中是有效的单药治疗，所述NSCLC亚组过表达EZH2而没有其他已知的并发致癌突变。总之，这项工作确立了EZH2失调在肺腺癌中的致癌作用，创建了一亚组人类疾病的可靠模型，描述并表征一种用于研究体内EZH2功能的新型化学探针，并为人类临床调查提供理论依据。
实验操作
将小鼠饲养在无病原体动物设施中，所有实验均经哈佛医学院和 Dana-Farber癌症研究所动物护理和使用委员会的批准。
将人EZH2 cDNA克隆到转基因靶向载体中，并共电穿孔至V6.5 C57BL/6(F)×129/sv(M)胚胎干细胞中(Open Biosystems,#MES 1402)，所述胚胎干细胞具有表达所述FLP重组酶的质粒(Beard等人，2006)。筛选胚胎干细胞，用于通过PCR整合转基因。将正确靶向的胚胎干细胞注射到黑色6 胚泡中，并用BALB/c株野生型小鼠繁殖所得嵌合体，用于转基因的种系传递。将EZH2转基因小鼠与ubiquitin-Cre-ERT2(Ruzankina等人，2007)或肌动蛋白-Cre小鼠(Jackson Laboratories)杂交。将小鼠保持在混合背景菌株中，向6周龄的双转基因小鼠给予2mg 4-羟基他莫昔芬(4-OHT)(Sigma，# 1054029-01)，连续4天。
免疫组织化学
将组织在10％缓冲福尔马林中固定过夜，并石蜡包埋(FFPE)过夜，保持两天。如前所述进行染色(Xu等人，2014).
基因表达谱
使用Trizol(Invitrogen)提取总RNA，然后进行RNA清除(Qiagen, #74204)。由于平台差异(EZH2-OE肿瘤和对照肺的基因表达水平来自 RNA-seq，而KRAS突变型肿瘤和EGFR突变型肿瘤中的基因表达水平来源于微阵列(Carretero等人，2010)),使用肿瘤的表达值除以相应的正常值的平均表达值计算基因表达的log2倍数变化。在所有样品中选择前500个最可变基因进行聚类。
单样本基因集富集分析
TCGA肺腺癌肿瘤和正常肺的表达谱用于进行ssGSEA (cancergenome.nih.gov/)。对于每种肿瘤，基于TCGA突变分析确定驱动子突变。从分析中除去所有ALK和NF1突变体肿瘤。EZH2高肿瘤定义为具有最高EZH2表达且在KRAS、EGFR、ALK或NF1中缺少任何突变的前20％肿瘤。KRAS和EGFR突变体类别被定义为在KRAS或EGFR中的突变体，并具有低EZH2表达(具有20％最低EZH2表达的肿瘤)。用MEK (MEK_UP.V1_UP)和mTOR(mTOR_UP.N4.V1_DN)基因列表和我们自己的 H3K27Me3结合基因的基因列表进行分析。
染色质免疫沉淀法(ChIP)
根据ThruPLEX-FD Prep试剂盒(Rubicon#R40048)，用10-20ng的Input 或ChIP'dDNA制备染色质库，并用SE75 Next-Seq测序。
制备染色质：使用Covaris Tissue Smasher模型CP02按照CryoPrepPulverizatin Manuel粉碎小鼠肺组织。将肺组织在组织TUBE(Covaris# 520071)中在设置4粉碎1-2次。将约50mg粉碎的肺组织与预热的1％甲醛(ThermoScientific#28906，在PBS中稀释)在37℃下交联20分钟。将组织以 1000rpm离心2分钟，并在室温下使用在PBS+0.5％BSA中的0.125M甘氨酸淬灭20分钟，以1,000rpm离心2分钟，并用PBS+2x蛋白酶抑制剂混合物(PIC)(Roche#11873580001)+5mM丁酸钠(Millipore#19-137)洗涤，然后以1,000rpm离心2分钟。然后在冰上将交联的组织用390μL ChIP裂解缓冲液(1％SDS、10mM EDTA pH8.0、50mM Tris-HCl pH8.0、2×PIC和5mM丁酸钠)裂解1小时。将裂解物分装到3个微试管(Covaris#520045)中，并在 Covaris E210系列上以5％的占空比、5强度、每个突发(burst)200个周期剪切，共持续27分钟。将剪切的染色质在4℃下以14,000rpm离心15分钟。将加入的等分试样保存，而剩余的染色质被快速冷冻并储存在-80℃。用TE 将加入物增加至100μl，加入10μg RNAseA(Roche)，在37℃孵育30分钟，然后加入100μg蛋白酶K(Roche)，在65℃孵育过夜。用Qiagen PCR纯化试剂盒(#28104)纯化加入物并定量。
库的制备和CHIP：将制备的染色质在冰上解冻，同时将10μg抗 H3K27ac(Abcam#Ab4729)或H3K27me3(Cell Signaling#CS9733S)的抗体与磁性蛋白A和蛋白G偶联珠(分别为Invitrogen#100.02D和#100.04D)的混合物在0.5％BSA的PBS溶液的存在下共轭结合，同时在4℃下旋转2小时。将该珠用于PBS中的0.5％BSA洗涤3次，并将5μg染色质加入到H3K27ac ChIP中，或将10μg染色质加入到H3K27me3 ChIP中，并在4℃下旋转过夜。将该珠用Tris基RIPA缓冲液(0.1％SDS，1％Triton X-100，10mM Tris-HCl pH7.4，1mM EDTA pH8.0，0.1％脱氧胆酸钠)洗涤2次，用0.3M NaCl RIPA(0.1％SDS，1％Triton X-100，10mM Tris-HCl pH7.4，1mM EDTA pH8.0， 0.1％脱氧胆酸钠，0.3M NaCl)洗涤2次，用LiCl缓冲液(250mM LiCl，0.5％ NP-40,0.5％脱氧胆酸盐，1mM EDTA pH8.0,10mM Tris-HCl pH8.0)洗涤2 次和用TE缓冲液pH7.6(Fisher Scientific目录号BP2474-1)洗涤2次。将该珠再悬浮于100μL TE和RNAseA中，并如染色质制备中所述进行PK消化/反向交联和纯化。
对接和配体相互作用测定
所有结构建模都是使用Schrodinger计算软件通过SBgrid进行的。将感兴趣的配体输入到Maestro中，并使用MM5力场通过Monte-Carlo模拟进行详尽的构象搜索。所得到的构象由3D相似性聚类，并且从每个结构中选择样本结构用于随后的对接。在先前报道的已公开的结合模型上进行对接，其中配体结合位点用于定义受体网格(Kalinic等人，2014)。该蛋白用Maestro 进行预处理，并使用标准输入参数用Glide进行网格生成和对接。所有对接使用XP级别的精度执行，结果使用Glide Score进行排名。配体相互作用图由Maestro生成，用于顶部对接姿势。
一般合成操作和生化测定的测量结果
所有反应在烘干或火焰干燥的圆底烧瓶中进行。烧瓶配有橡胶隔片，反应在正压氮气下进行。如Still等所述使用硅胶进行快速柱色谱法(孔径， 40-63μm，4-6％H2O含量，Zeochem)。使用玻璃板进行分析薄层色谱，所述玻璃板预涂覆有用荧光指示剂浸渍的0.25mm 230-400目的硅胶(254 nm)。通过暴露于碘蒸气来观察薄层色谱板。所有的中间体和最终产物都用质子和碳-13核磁共振(1H NMR和13C NMR)光谱和质谱(MS)完全表征的。
PRC2甲基转移酶测定：重组五组分PRC2
将(EZH2/EED/SUZ12/RBBP4/AEBP2)如所述的那样在Sf9中共表达和纯化(Cao和Zhang,2004)。PRC2活性使用在384孔OptiPlates(Perkin Elmer) 中进行的放射性闪烁接近测定(SPA)进行测量。对于IC50的确定，将2.3nM PRC2与于20μL含有化合物或DMSO的反应缓冲液(50mM Tris pH 8.5, 5mM DTT和0.01％Tween-20)中的1μM组蛋白H3(21-44)-lys(生物素)(Anaspec)、1.5μMSAM(NEB))和500nM 3H-SAM在室温下一起孵育90 分钟。用TCA淬灭反应，然后加入PVT抗生蛋白链菌素-包被的SPA珠(Perkin Elmer；40μL在PBS中稀释的140ng)，在室温下孵育1小时。使用TopCount NXT读板器测量CPM值。通过将平均背景(无酶孔)设置为0％，将平均 DMSO孔设置为100％活性来计算百分比活性值。由每个化合物浓度的四个重复测量确定标准偏差。使用GraphPad PRISM v6分析数据并绘图，使用‘log(抑制剂)vs.相对于归一化应答-变量斜率’分析模块来计算IC50。
为了确定JQEZ5作用机理和Ki值，如上所述在具有固定浓度为1μM 组蛋白H3肽的各种浓度的SAM/3H-SAM(1：20比例)存在下进行反应。使用GraphPad PRISM v6中的“酶动力学-抑制”和“酶动力学-底物相对于速度”分析模块对数据进行分析和绘图。
关于本文所选择的化合物的EZH2相对于EZH1的生物化学选择性的示例性结果如图22所示。化合物EZH2-16，EZ-27和EZ-005对EZH2的选择性是对EZH1的约10倍。化合物EZ-26和EZ-20对EZH2的选择性是对EZH1 的约20至约40倍。
使用化合物EZ-41和EZH2进行对接实验。参见，McCabe等,Nature,492, 108–112(2012)。对接结果显示EZ-41和EZH2可形成共价键。
EZH1/2发射性甲基转移酶测定
如(Cao和Zhang,2004)中所述，在Sf9中共表达重组五组分PRC2-EZH2 (EZH2/EED/SUZ12/RBBP4/AEBP2)和PRC2-EZH1复合物(EZH1/EED/SUZ12/RBBP4/AEBP2)并纯化。使用在384孔OptiPlates(Perkin Elmer)中进行的放射性闪烁接近测定(SPA)测量甲基转移酶活性。为了测定 IC50，将2.3nM PRC2-EZH1/2与于20μL含有化合物或DMSO的反应缓冲液(50mMTris pH 8.5,5mM DTT和0.01％Tween-20)中的1μM组蛋白H3 (21-44)-lys(生物素)(Anaspec),1.5μM SAM(NEB)和500nM 3H-SAM一起在室温孵育90分钟。用TCA淬灭反应，加入PVT抗生蛋白链菌素包被的SPA 珠(Perkin Elmer；40μL在PBS中稀释的140ng)，在室温下孵育1小时。使用TopCount NXT读板器测量CPM值。通过将平均背景(无酶孔)设置为0％，将平均DMSO孔设置为100％活性来计算百分比活性值。由每个化合物浓度的四个重复测量确定标准偏差。使用GraphPad PRISM v6分析数据并绘图，使用‘log(抑制剂)相对于归一化应答-变量斜率’分析模块以计算IC50(图32和图33)。
为了确定MOA和Ki值，如上所述在具有固定浓度为1μM组蛋白H3 肽的各种浓度的SAM/3H-SAM(1：20比例)存在下进行反应。使用GraphPad PRISM v6中的“酶动力学-抑制”分析模块对数据进行分析和绘图。
EZH2配体-置换AlphaScreen测定
我们采用新的配体竞争AlphaScreen测定来评估SAM对EZH2的结合亲和力，并以非放射形式确定化合物IC50(图31和图32)。在384孔 AlphaPlates(Perkin Elmer)中，将61.5nM PRC2-EZH2和62.5nM EZ-06在含有竞争剂化合物或DMSO的20μL反应缓冲液(50mMTris pH 8.5，5mM DTT 和0.01％Tween-20)中稀释。孵育30分钟后，向每个孔中加入在1x表观遗传学缓冲液(Perkin Elmer)中稀释至20ng/μL的含有抗生蛋白链菌素供体珠和抗FLAG受体珠的20μl检测溶液。在室温下孵育1小时后，在 Envision 2104读板器上测量发光。通过将平均背景(无酶孔)设置为0％和将平均DMSO孔设置为100％活性来计算百分比活性值。由化合物浓度的四个重复测量确定标准偏差(图32)。使用GraphPadPRISM v6分析数据并绘图，使用‘log(抑制剂)相对于归一化应答-变量斜率’分析模块来计算IC50(图32)。
EZH2配体-置换FP测定
在384孔黑板(Nunc)中，将43nM PRC2-EZH2和32nM EZ05-FITC在含有竞争剂化合物或DMSO的20μL反应缓冲液(50mM Tris pH8.5，5mM DTT 和0.01％Tween-20)中稀释。孵育30分钟后，使用Wallac Envision 2104 Multilabel Reader(FP FITC双光模块；激发：480nm，S和P通道的发射：535nm) 测量荧光偏振(mP)(图34)。通过将平均背景(无酶孔)设置为0％和将平均 DMSO孔设置为100％活性来计算归一化的mP值。由化合物浓度的四个重复测量确定标准偏差(图35，图36，图33)。使用GraphPad PRISM v6分析数据并绘图，使用‘log(抑制剂)相对于归一化应答-变量斜率’分析模块来计算 IC50(图37和图33)。
细胞内EZH2结合测定
将MDA-MB-231细胞(ATCC)在补充有10％(v/v)FBS和100UmL-1青霉素-链霉素的Ham's F12K培养基中培养。细胞以1e5细胞/mL在培养基中稀释，并以40μL/孔接种在黑色透明底384孔板(Aurora IQ-EB 384)中，在37℃/ 5％CO2下孵育24小时。为了评估内源性EZH2的总体参与，用4％多聚甲醛固定细胞10分钟，用0.3％Triton X-100的PBS溶液透化20分钟。然后将细胞与40μL的1nM Hoechst 33342(Life Technologies)、5μM TAMRA-EZ05 和不同浓度的竞争剂化合物一起孵育。在室温下孵育1小时后，用40μL PBS 洗涤细胞4X，随后成像。为了评估内源性EZH2的细胞渗透性和参与，将 TAMRA-EZ05和竞争剂化合物针转移到培养基中，并使其在37℃/5％CO2下与细胞孵育2小时，然后固定和复染(图38，图39，图40)。所有板在 ImageXpress Micro自动显微镜(Molecular Devices)上使用具有基于激光聚焦的10X物镜进行成像。使用MetaXpress(Molecular Devices)中的细胞分类(Cell Scoring)模块进行图像分析，以确定每孔的平均核荧光和核计数。对每个测定板中的所有DMSO孔计算平均值和标准偏差(STDEV)。使用GraphPad PRISM v6分析数据并绘图，使用'log(抑制剂)相对于归一化应答-变量斜率' 分析模块来测定IC50值。
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等同方案和范围
在权利要求中，例如“一个”、“该”和“所述”可能是指一个或一个以上，除非上下文中有相反的指示或其他明确指示。对于在一或多个组成员之间包含“或”的权利要求或说明书，如果所述组的一个、一个以上或全部成员均存在、采用或与给定产物或过程在其他方面相关，则被认为是满足要求的，除非上下文中有相反的指示或其他明确指示。本发明包括实施方案，其中该组中仅有一个成员存在、采用或与给定产物或过程在其他方面相关。本发明包括实施方案，其中该组中一个以上或全部成员存在、采用或与给定产物或过程在其他方面相关。
此外，本发明包括所有的变化、组合和排列，其中一个或多个所列权利要求中的一个或多个限制、要素、字句和描述性术语被引入到另一权利要求中。例如，从属于另一权利要求的任意权利要求可被修改以包括从属于同一基础权利要求的任意其他权利要求中的一种或多种限定。当要素以列表呈现，例如，以马库什组形式，该要素的各子集也均被公开，且任意要素可从该组中除去。应理解，在一般情况下，当本发明或本发明的各方面被指定包括具体要素和/或特征时，本发明的一些实施方案或本发明的各方面由这种要素和/或特征组成，或基本上由这种要素和/或特征组成。出于简明的目的，那些实施方案在本文中并没有用文字具体提及。还应注意，术语“包括”和“包含”旨在是开放性的且允许包括其他要素或步骤。当给出范围时，包括端点。此外，除非另外提及或在上下文和本领域技术人员的理解中有其他明确指示，用范围表达的值可采用在本发明不同实施方案中所陈述的范围内的任意具体值或子范围，至该范围的下限单位的十分之一，除非上下文中另有明确说明。
本申请是指各种出版的专利、公开的专利申请、期刊和其他出版物，将其全部引入本文作为参考。如果在所引用的任意参考文献和本申请之间存在冲突，应以本说明书为准。此外，落入现有技术中的本发明的任意具体实施方案可从任一项或多项权利要求中明确排除。因为这种实施方案被认为是本领域技术人员已知的，即使该排除在本文中未明确提及，它们也可被排除。本发明的任意具体实施方案可出于任意原因从任意权利要求中排除，无论是否涉及现有技术的存在。
本领域技术人员将理解或能够通过使用不超出常规的实验确定出许多与本文所述具体实施方案相当的内容。本文所述的具体实施方案的范围不旨在被上述说明书所限定，而是在所附权利要求中提及。那些本领域技术人员将理解，在不背离如权利要求所限定的本发明的精神或范围内的情况下，可对本说明书进行各种变化和修饰。
本发明包括以下内容：
1.式(I)化合物、或其药学上可接受的盐：
其中：
RA1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORa、–N(Ra)2、–SRa、–CN、–SCN、–C(＝NRa)Ra、–C(＝NRa)ORa、–C(＝NRa)N(Ra)2、–C(＝O)Ra、–C(＝O)ORa、–C(＝O)N(Ra)2、–NO2、–NRaC(＝O)Ra、–NRaC(＝O)ORa、–NRaC(＝O)N(Ra)2、–OC(＝O)Ra、–OC(＝O)ORa、–OC(＝O)N(Ra)2、标记物或
每个Ra独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基、或连于硫原子时的硫保护基，或两个Ra连接形成取代或未取代的杂环或取代或未取代的杂芳环；
RA为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基；
RB为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基；
或RA和RB连接形成取代或未取代的碳环或取代或未取代的杂环；
RC为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
RA2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、氮保护基、标记物或弹头；
RA3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa、–N(Ra)2或弹头；
RA4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RA5为下式： 其中：
RA6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
RA10为–ORa、–N(Ra)2或弹头；
每个RA11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
n为0、1、2、3或4；
RA12为氢、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头；
每个RA13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；
m为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RA14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORa或–N(Ra)2；
RA16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORa或–N(Ra)2；和
RA17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头。
2.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
3.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
4.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
5.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
6.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
/>
7.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
其中RA14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。
8.实施方案7的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
9.实施方案7的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
10.实施方案7的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
11.实施方案7的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
12.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
13.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
14.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
15.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
16.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
17.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
18.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
19.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
20.实施方案1-6和12-19中任一项的化合物，其中RA1为在杂环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫。
21.实施方案20的化合物，其中RA1为取代或未取代的哌嗪基。
22.实施方案20的化合物，其中RA1为下式：
23.实施方案20的化合物，其中RA1为下式：其中：
LA为键或取代或未取代的C1–100烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个链原子独立地被–O–、–S–或–NRa–替换；和
XA为小分子、肽、蛋白或多核苷酸。
24.实施方案23的化合物，其中RA1为下式：
其中：
r为0或1；
k为0至11的整数，包括端点值；
p为0至10的整数，包括端点值；和
q为0至10的整数，包括端点值。
25.实施方案23或24的化合物，其中XA为下式的小分子：
其中ZA为–O–或–NH–。
26.实施方案20的化合物，其中RA1为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、取代或未取代的氮杂环庚烷基、或取代或未取代的二氮杂环庚烷基。
27.实施方案1-6和12-19中任一项的化合物，其中RA1为–CN。
28.实施方案1-6和12-19中任一项的化合物，其中RA1为–C(＝O)N(Ra)2。
29.实施方案28的化合物，其中RA1为–C(＝O)NH2。
30.实施方案1-6和12-19中任一项的化合物，其中RA1为取代或未取代的烷基、–ORa、–N(Ra)2、–C(＝O)ORa或–NRaC(＝O)Ra。
31.实施方案30的化合物，其中RA1为未取代的C1-6烷基、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe或–NHC(＝O)Me。
32.实施方案1-5、7-10和12-31中任一项的化合物，其中RA2为取代或未取代的酰基。
33.实施方案32的化合物，其中RA2为–C(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。
34.实施方案1-5、7-10和12-31中任一项的化合物，其中RA2为取代或未取代的烷基。
35.实施方案34的化合物，其中RA2为取代或未取代的C1-6烷基。
36.实施方案34的化合物，其中RA2为i-Pr。
37.实施方案34的化合物，其中RA2为sec-Bu、t-Bu或未取代的3-戊基。
38.实施方案34的化合物，其中RA2为–CH2C(＝O)–NH–N＝C(Ra)2。
39.实施方案1-5、7-10和12-31中任一项的化合物，其中RA2为取代或未取代的碳环基。
40.实施方案39的化合物，其中RA2为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。
41.实施方案39的化合物，其中RA2为未取代的环丙基、未取代的环丁基或未取代的环戊基。
42.实施方案1-5、7-10和12-31中任一项的化合物，其中RA2为取代或未取代的杂环基。
43.实施方案42的化合物，其中RA2为在杂环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3 个原子独立地为氮、氧或硫。
44.实施方案42的化合物，其中RA2为取代或未取代的四氢吡喃基。
45.实施方案42的化合物，其中RA2为下式：
46.实施方案42的化合物，其中RA2为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、或取代或未取代的哌嗪基。
47.实施方案1-46中任一项的化合物，其中RA3为氢。
48.实施方案1-3、7-8、12、14、16、18和20-47中任一项的化合物，其中RA3为取代或未取代的C1-6烷基。
49.实施方案48的化合物，其中RA3为Me。
50.实施方案1-3、7-8、12、14、16、18和20-47中任一项的化合物，其中RA3为卤素。
51.实施方案1-3、7-8、12、14、16、18和20-47中任一项的化合物，其中RA3为–N(Ra)2。
52.实施方案51的化合物，其中RA3为–N(Ra)C(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。
53.实施方案1-52中任一项的化合物，其中RA4为氢。
54.实施方案1和20-53中任一项的化合物，其中RA5为下式：
55.实施方案54的化合物，其中RA5为下式：
56.实施方案1-4、7-9和20-54中任一项的化合物，其中RA6为取代或未取代的C1-6烷基。
57.实施方案56的化合物，其中RA6为Me。
58.实施方案1-4、7-9和20-54中任一项的化合物，其中RA6为–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
59.实施方案1-4、7-9、20-54和56-58中任一项的化合物，其中RA7为取代或未取代的C2-6烷基。
60.实施方案59的化合物，其中RA7为n-Pr。
61.实施方案1-4、7-9、20-54和56-58中任一项的化合物，其中RA7为取代或未取代的环丙基或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的 C1-6烷基或氮保护基。
62.实施方案1和20-53中任一项的化合物，其中RA5为下式：
63.实施方案62的化合物，其中RA5为下式：
64.实施方案1、12-13和20-53中任一项的化合物，其中RA8为取代或未取代的C1-6烷基。
65.实施方案64的化合物，其中RA8为Me。
66.实施方案1、12-13和20-53中任一项的化合物，其中RA8为–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
67.实施方案1、12-13、20-53、62和64-66中任一项的化合物，其中RA9为取代或未取代的C1-6烷基。
68.实施方案67的化合物，其中RA9为Me、Et或n-Pr。
69.实施方案1、12-13、20-53、62和64-66中任一项的化合物，其中RA9为取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
70.实施方案1和20-53中任一项的化合物，其中RA5为下式：
71.实施方案70的化合物，其中RA5为下式：
72.实施方案70的化合物，其中RA5为下式：
73.实施方案70的化合物，其中RA5为下式：
74.实施方案1、14-15、20-53、70-71和73中任一项的化合物，其中RA10为–ORa。
75.实施方案74的化合物，其中RA10为–OH。
76.实施方案1、14-15、20-53、70-71和73中任一项的化合物，其中RA10为–N(Ra)2。
77.实施方案76的化合物，其中RA10为–NHC(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。
78.实施方案1、14-15、20-53、70-71和73-77中任一项的化合物，其中至少一个RA11为卤素。
79.实施方案1、14-15、20-53、70-71和73-77中任一项的化合物，其中至少一个RA11为取代或未取代的C1-6烷基。
80.实施方案1、14-15、20-53、70-71和73-77中任一项的化合物，其中至少一个RA11为取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
81.实施方案1和20-53中任一项的化合物，其中RA5为下式：
82.实施方案81的化合物，其中RA5为下式：
83.实施方案81的化合物，其中RA5为下式：
84.实施方案1、16-17、20-53和81-82中任一项的化合物，其中RA12为氢。
85.实施方案1、16-17、20-53、81-82和84中任一项的化合物，其中至少一个RA13为取代或未取代的C1-6烷基。
86.实施方案1、16-17、20-53、81-82和84中任一项的化合物，其中至少一个RA13为卤素、取代或未取代的环丙基、–ORa或–N(Ra)2，其中每个Ra独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
87.实施方案1和20-53中任一项的化合物，其中RA5为下式：
88.实施方案87的化合物，其中RA5为下式：
89.实施方案1、18-53和87中任一项的化合物，其中RA14为H。
90.实施方案1、18-53、87和89中任一项的化合物，其中RA15为取代或未取代的C1-6烷基。
91.实施方案90的化合物，其中RA15为Me。
92.实施方案1、18-53、87和89-91中任一项的化合物，其中RA16为取代或未取代的C2-6烷基。
93.实施方案92的化合物，其中RA16为n-Pr。
94.实施方案1、18-53、87和89-93中任一项的化合物，其中RA17为H。
95.实施方案1、18-53、87和89-93中任一项的化合物，其中RA17为–C(＝O)Ra，其中Ra为取代或未取代的乙烯基。
96.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
/>
97.实施方案1的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
/>
/>
98.式(II)化合物、或其药学上可接受的盐：
其中：
RB1为卤素、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、–ORb、–N(Rb)2、–SRb、–CN、–SCN、–C(＝NRb)Rb、–C(＝NRb)ORb、–C(＝NRb)N(Rb)2、–C(＝O)Rb、–C(＝O)ORb、–C(＝O)N(Rb)2、–NO2、–NRbC(＝O)Rb、–NRbC(＝O)ORb、–NRbC(＝O)N(Rb)2、–OC(＝O)Rb、–OC(＝O)ORb、–OC(＝O)N(Rb)2、标记物或
每个Rb独立地为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、连于氮原子时的氮保护基、连于氧原子时的氧保护基、或连于硫原子时的硫保护基，或两个Rb连接形成取代或未取代的杂环、或取代或未取代的杂芳环；
RA为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基；
RB为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂芳基；
或RA和RB连接形成取代或未取代的碳环或取代或未取代的杂环；
RC为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；
RB2为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、氮保护基、标记物或弹头；和
RB3为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB4为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基；和
RB5为下式：
其中：
RB6为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB7为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基或在碳环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB8为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基或–N(Rb)2；
RB9为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、或在碳环系统中包含0、1 或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基；
RB10为–ORb、–N(Rb)2或弹头；
每个RB11独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
u为0、1、2、3或4；
RB12为氢、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头；
每个RB13独立地为卤素、取代或未取代的C1-6烷基、在碳环系统中包含0、 1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、或–N(Rb)2；
v为0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；
RB14为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB15为氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、–ORb或–N(Rb)2；
RB16为氢、卤素、取代或未取代的C2-6烷基、在碳环系统中包含0、1或2 个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基、–ORb或–N(Rb)2；和
RB17为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的C1-6烷基、氮保护基或弹头；
条件是当RB2为i-Pr，RB3为氢和RB5为式(ii-1)时，则RB1不是Me、 –OMe或–NH(＝O)Me；和
条件是当RB2为未取代的C3-5烷基，RB3为Me或卤素，RB5为式(ii-1)时，则RB1不是Me、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe或–NH(＝O)Me。
99.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
100.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
101.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
102.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
103.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
104.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
其中RB14为氢、取代或未取代的酰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的碳环基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或氮保护基。
105.实施方案104的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
106.实施方案104的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
107.实施方案104的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
108.实施方案104的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
109.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
110.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
111.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
112.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
113.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
114.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
115.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
116.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
117.实施方案98-103和109-116中任一项的化合物，其中RB1为在杂环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3个原子独立地为氮、氧或硫。
118.实施方案117的化合物，其中RB1为取代或未取代的哌嗪基。
119.实施方案117的化合物，其中RB1为下式：
120.实施方案117的化合物，其中RB1为下式：其中：
LB为键或取代或未取代的C1–100烃链，任选地其中所述烃链中的一个或多个链原子独立地被–O–、–S–或–NRb–替换；和
XB为小分子、肽、蛋白或多核苷酸。
121.实施方案120的化合物，其中RB1为下式：
其中：
z为0或1；
w为0至11的整数，包括端点值；
x为0至10的整数，包括端点值；和
y为0至10的整数，包括端点值。
122.实施方案120或121的化合物，其中XB为下式的小分子：
其中ZB为–O–或–NH–。
123.实施方案117的化合物，其中RB1为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的四氢吡喃基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、取代或未取代的氮杂环庚烷基、或取代或未取代的二氮杂环庚烷基。
124.实施方案98-103和109-116中任一项的化合物，其中RB1为–CN。
125.实施方案98-103和109-116中任一项的化合物，其中RB1为–C(＝O)N(Rb)2。
126.实施方案125的化合物，其中RB1为–C(＝O)NH2。
127.实施方案98-103和109-116中任一项的化合物，其中RB1为取代或未取代的烷基、–ORb、–N(Rb)2、–C(＝O)ORb或–NRbC(＝O)Rb。
128.实施方案127的化合物，其中RB1为未取代的C1-6烷基、–OMe、–NH2、–N(Me)2、–C(＝O)OH、–C(＝O)OMe或–NHC(＝O)Me。
129.实施方案98-102、104-107和109-128中任一项的化合物，其中RB2为取代或未取代的酰基。
130.实施方案129的化合物，其中RB2为–C(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。
131.实施方案98-102、104-107和109-128中任一项的化合物，其中RB2为取代或未取代的烷基。
132.实施方案131的化合物，其中RB2为取代或未取代的C1-6烷基。
133.实施方案131的化合物，其中RB2为i-Pr。
134.实施方案131的化合物，其中RB2为未取代的sec-Bu、t-Bu或未取代的3-戊基。
135.实施方案131的化合物，其中RB2为–CH2C(＝O)–NH–N＝C(Rb)2。
136.实施方案98-102、104-107和109-128中任一项的化合物，其中RB2为取代或未取代的碳环基。
137.实施方案136的化合物，其中RB2为在碳环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环碳环基。
138.实施方案136的化合物，其中RB2为未取代的环丙基、未取代的环丁基或未取代的环戊基。
139.实施方案98-102、104-107和109-128中任一项的化合物，其中RB2为取代或未取代的杂环基。
140.实施方案139的化合物，其中RB2为在杂环系统中包含0、1或2个双键的取代或未取代的3-至7-元单环杂环基，其中在所述杂环系统中的1、2或3 个原子独立地为氮、氧或硫。
141.实施方案139的化合物，其中RB2为取代或未取代的四氢吡喃基。
142.实施方案139的化合物，其中RB2为下式：
143.实施方案139的化合物，其中RB2为取代或未取代的氧杂环丁烷基、取代或未取代的四氢呋喃基、取代或未取代的吡咯烷基、取代或未取代的哌啶基、取代或未取代的吗啉基、或取代或未取代的哌嗪基。
144.实施方案98-143中任一项的化合物，其中RB3为氢。
145.实施方案98-100、104-105、109、111、113、115和117-144中任一项的化合物，其中RB3为取代或未取代的C1-6烷基。
146.实施方案145的化合物，其中RB3为Me。
147.实施方案98-100、104-105、109、111、113、115和117-144中任一项的化合物，其中RB3为卤素。
148.实施方案98-100、104-105、109、111、113、115和117-144中任一项的化合物，其中RB3为–N(Rb)2。
149.实施方案148的化合物，其中RB3为–N(Rb)C(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。
150.实施方案98-149中任一项的化合物，其中RB4为氢。
151.实施方案98和117-150中任一项的化合物，其中RB5为下式：
152.实施方案151的化合物，其中RB5为下式：
153.实施方案98-101、104-106和117-151中任一项的化合物，其中RB6为取代或未取代的C1-6烷基。
154.实施方案153的化合物，其中RB6为Me。
155.实施方案98-101、104-106和117-151中任一项的化合物，其中RB6为–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
156.实施方案98-101、104-106和117-155中任一项的化合物，其中RB7为取代或未取代的C2-6烷基。
157.实施方案156的化合物，其中RB7为n-Pr。
158.实施方案98-101、104-106、117-151和153-155中任一项的化合物，其中RB7为取代或未取代的环丙基或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
159.实施方案98和117-150中任一项的化合物，其中RB5为下式：
160.实施方案159的化合物，其中RB5为下式：
161.实施方案98、109-110和117-150中任一项的化合物，其中RB8为取代或未取代的C1-6烷基。
162.实施方案161的化合物，其中RB8为Me。
163.实施方案98、109-110和117-150中任一项的化合物，其中RB8为–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基或氮保护基。
164.实施方案98、109-110、117-150、159和161-163中任一项的化合物，其中RB9为取代或未取代的C1-6烷基。
165.实施方案164的化合物，其中RB9为Me、Et或n-Pr。
166.实施方案98、109-110、117-150、159和161-163中任一项的化合物，其中RB9为取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
167.实施方案98和117-150中任一项的化合物，其中RB5为下式：
168.实施方案167的化合物，其中RB5为下式：
169.实施方案167的化合物，其中RB5为下式：
170.实施方案167中任一项的化合物，其中RB5为下式：
171.实施方案98、111-112、117-150、167-168和170中任一项的化合物，其中RB10为–ORb。
172.实施方案171的化合物，其中RB10为–OH。
173.实施方案98、111-112、117-150、167-168和170中任一项的化合物，其中RB10为–N(Rb)2。
174.实施方案173的化合物，其中RB10为–NHC(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。
175.实施方案98、111-112、117-150、167-168和170-174中任一项的化合物，其中至少一个RB11为卤素。
176.实施方案98、111-112、117-150、167-168和170-174中任一项的化合物，其中至少一个RB11为取代或未取代的C1-6烷基。
177.实施方案98、111-112、117-150、167-168和170-174中任一项的化合物，其中至少一个RB11为取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
178.实施方案98和117-150中任一项的化合物，其中RB5为下式：/>
179.实施方案178的化合物，其中RB5为下式：
180.实施方案178的化合物，其中RB5为下式：
181.实施方案98、113-114、117-150和178-179中任一项的化合物，其中RB12为氢。
182.实施方案98、113-114、117-150、178-179和181中任一项的化合物，其中至少一个RB13为取代或未取代的C1-6烷基。
183.实施方案98、113-114、117-150、178-179和181中任一项的化合物，其中至少一个RB13为卤素、取代或未取代的环丙基、–ORb或–N(Rb)2，其中每个Rb独立地为氢、取代或未取代的C1-6烷基、连于氧原子时的氧保护基、或连于氮原子时的氮保护基。
184.实施方案98和117-150中任一项的化合物，其中RB5为下式：
185.实施方案184的化合物，其中RB5为下式：
186.实施方案98、115-150和184中任一项的化合物，其中RB14为H。
187.实施方案98、115-150、184和186中任一项的化合物，其中RB15为取代或未取代的C1-6烷基。
188.实施方案187的化合物，其中RB15为Me。
189.实施方案98、115-150、184和186-188中任一项的化合物，其中RB16为取代或未取代的C2-6烷基。
190.实施方案189的化合物，其中RB16为n-Pr。
191.实施方案98、115-150、184和186-190中任一项的化合物，其中RB17为H。
192.实施方案98、115-150、184和186-190中任一项的化合物，其中RB17为–C(＝O)Rb，其中Rb为取代或未取代的乙烯基。
193.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
/>
/>
194.实施方案98的化合物，其中所述化合物为下式化合物、或其药学上可接受的盐：
195.药物组合物，其包含实施方案1-194中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和任选地药学上可接受的赋形剂。
196.实施方案195的药物组合物，进一步包含额外的药物。
197.在有需要的受试者中治疗疾病的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效量的实施方案1-194中任一项的化合物或实施方案195或 196的药物组合物。
198.实施方案197的方法，其中所述疾病为与组蛋白甲基转移酶的异常活性相关的疾病。
199.实施方案197的方法，其中所述疾病为遗传疾病。
200.实施方案197的方法，其中所述疾病为增殖性疾病。
201.实施方案197的方法，其中所述疾病为癌症。
202.实施方案201的方法，其中所述癌症为肺癌。
203.实施方案202的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
204.实施方案197的方法，其中所述疾病为良性肿瘤。
205.实施方案197的方法，其中所述疾病为病理性血管发生。
206.实施方案197的方法，其中所述疾病为炎性疾病。
207.实施方案197的方法，其中所述疾病为自身免疫性疾病。
208.实施方案197的方法，其中所述疾病为血液疾病。
209.实施方案197的方法，其中所述疾病为神经系统疾病。
210.实施方案197的方法，其中所述疾病为疼痛性病症。
211.实施方案197的方法，其中所述疾病为精神疾病。
212.实施方案197的方法，其中所述疾病为代谢紊乱。
213.实施方案197的方法，其中所述疾病为增生、脑癌、乳癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病或韦弗综合征。
214.在有需要的受试者中抑制组蛋白甲基转移酶的活性的方法，所述方法包括给予所述受试者有效量的实施方案1-194中任一项的化合物或实施方案195或196的药物组合物。
215.实施方案197-214中任一项的方法，其中所述受试者为人。
216.在细胞中抑制组蛋白甲基转移酶的活性的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的实施方案1-194中任一项的化合物或实施方案195或196 的药物组合物接触。
217.实施方案198和214-216中任一项的方法，其中所述组蛋白甲基转移酶为zeste增强子同源物1(EZH1)。
218.实施方案198和214-216中任一项的方法，其中所述组蛋白甲基转移酶为zeste增强子同源物2(EZH2)。
219.在细胞中诱导凋亡的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的实施方案1-194中任一项的化合物或实施方案195或196的药物组合物接触。
220.实施方案216-219中任一项的方法，其中所述细胞在体外。
221.实施方案216-219中任一项的方法，其中所述细胞在体内。
222.试剂盒，包括：
实施方案1-194中任一项的化合物或实施方案195或196的药物组合物；和
使用所述化合物或药物组合物的说明书。
223.鉴别EZH1和/或EZH2抑制剂的方法，所述方法包括：
(a)向培养物中的细胞提供用可检测标签标记的EZH1和/或EZH2结合化合物，其中所述细胞表达内源性EZH1和/或EZH2,
(b)向培养物中的所述细胞提供未经标记的测试化合物，和
(c)当在测试化合物存在时来自所述细胞的细胞核中的可检测标签的信号相对于不存在所述测试化合物时的信号降低时，则将所述测试化合物鉴别为EZH1和/或EZH2抑制剂。
224.实施方案223的方法，其进一步包括检测所述细胞中标签的水平。
225.实施方案223或224的方法，其进一步包括检测所述细胞的细胞核中标签的水平。
226.实施方案223-225中任一项的方法，其中在检测所述细胞中的标签之前将所述细胞固定。
227.实施方案223-226中任一项的方法，其中所述可检测标签为荧光标签。
228.实施方案223-227中任一项的方法，其中所述测试化合物为小分子。
229.实施方案223-228中任一项的方法，其中所述方法为高通量测定。
序列表
<110> 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司(DANA-FARBER CANCER INSTITUTE,INC.)
<120> Ezh2抑制剂及其用途
<130> D0504.70080WO00
<140> PCT/US2015/059622
<141> 2015-11-06
<150> US 62/076,410
<151> 2014-11-06
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 1
His His His His His His
1 5
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Synthetic Polypeptide
<400> 2
His His His His
1
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 3
Leu Leu Leu Leu
1
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是epsilon质子化中性组氨酸
<400> 4
Arg Phe Ala Asn Xaa Ser Val
1 5

Claims (7)

1.具有下式的化合物或其药学上可接受的盐：
2.药物组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与组蛋白甲基转移酶的异常或增加活性相关的疾病的药物中的用途。
4.权利要求3的用途，其中所述疾病为遗传疾病、增殖性疾病、良性肿瘤、病理性血管发生、炎性疾病、自身免疫性疾病、血液疾病、神经系统疾病、疼痛性病症、精神疾病、代谢紊乱、增生、脑癌、乳癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病、韦弗综合征和/或肺癌。
5.权利要求4的用途，其中所述疾病为非小细胞肺癌。
6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制组蛋白甲基转移酶的活性的药物中的用途。
7.在细胞中抑制组蛋白甲基转移酶的活性的体外方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐接触。
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