CN113397034B - 一种芝麻肽-钙螯合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种芝麻肽‑钙螯合物及其制备方法与应用,该方法包括以下步骤:(1)制备亚临界芝麻粕:将压榨处理得到芝麻饼粕进行初粉碎处理后,进行亚临界萃取处理,获得亚临界芝麻粕;(2)制备芝麻蛋白肽:将亚临界芝麻粕和水混合制成亚临界芝麻粕浆液,调节pH,加入碱性蛋白酶进行酶解反应,获得SSM多肽;(3)超滤膜分离组分处理;(4)制备芝麻肽‑钙螯合物。本公开提供了一种芝麻多肽‑钙矿物元素螯合物,可丰富营养食品补充剂市场,进一步增加经济价值。其中,获得的SSMP‑2含有较多可以与Ca2+结合的基团,并且在水溶液中的分散程度最好,表面的负电荷数量最多,与钙的鳌合能力最高,鳌合率高达72%以上。
Description
技术领域
本公开涉及一种芝麻肽-钙螯合物及其制备方法与应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的一些理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
目前我国芝麻产业正逐步进行制油、售油、对加工副产物综合利用的产业模式转变,合理充分利用芝麻,创造更大价值。芝麻粕是芝麻经过制油加工产生的加工副产物,先前都是将其作为农机肥料、动物饲料,造成副产物附加值低、资源浪费的局面。
芝麻粕中富含蛋白质、油脂、芝麻素等营养、功能组分,在植物基蛋白肽的功能研究取得大量成果的今天,对芝麻粕中蛋白质的合理利用也成为关注焦点。芝麻分离蛋白、芝麻生物活性肽的研发可提高其附加值,有利于芝麻产业的增值高效发展。目前对冷榨芝麻粕及亚临界萃取后的芝麻粕的研究较少,冷榨和亚临界萃取会最大限度保护芝麻粕。
对低温芝麻粕中的蛋白质资源,经过一定制备方式得到芝麻蛋白肽可增加芝麻产业链发展。制备芝麻多肽-矿物元素螯合物,可丰富营养食品补充剂市场,进一步增加经济价值。近年相关研究也报道了芝麻粕高内相乳液、芝麻粕植酸等方面的研究,芝麻粕中蕴藏较高的经济商业价值。因而深入对芝麻粕高效利用进行应用研究,可丰富食品市场,具有良好的经济与的社会效益。
发明内容
针对以上背景技术,本公开提供一种芝麻肽-钙螯合物及其制备方法与应用。
具体的,本公开采用以下技术方案:
在本公开的第一个方面,提供一种芝麻肽-钙螯合物的制备方法,该方法包括以下步骤:
(1)制备亚临界芝麻粕:将压榨处理得到芝麻饼粕进行初粉碎处理后,进行亚临界萃取处理,获得亚临界芝麻粕(Subcritical sesame meal,简称SSM);
(2)制备芝麻蛋白肽:将亚临界芝麻粕和水混合制成亚临界芝麻粕浆液,调节pH,加入碱性蛋白酶进行酶解反应;反应结束后,灭酶,分离,将上清液干燥,获得SSM多肽(Subcritical sesame meal peptides,简称SSMP);
(3)超滤膜分离组分处理:采用超滤膜过滤获得含有特定分子质量范围的SSM多肽;
(4)制备芝麻肽-钙螯合物:将设定比例的步骤(3)中含有特定分子质量范围的SSM多肽与Ca2+混合后反应,获得芝麻肽-钙螯合物。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(1)中,所述压榨处理得到芝麻饼粕是通过液压压榨处理方法制备得到的。
具体的,所述液压压榨处理方法包括以下步骤:将芝麻置于液压压榨机中,在40~50MPa压力下,进行压榨处理,获得冷榨芝麻粕(Cold pressed sesame meal,简称CPSM)。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(1)中,所述亚临界萃取处理条件为:萃取剂为丁烷,萃取温度40~50℃,压力0.40~0.50MPa,萃取时间30~60min,反复2~4次。
优选的,萃取温度45℃,压力0.45MPa,萃取时间40min,反复4次。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(2)中,酶解反应的条件为:SSM粒度35~45目、底物浓度1.5~2.5w/w%、pH 10~11、蛋白酶添加量9500~10000U/g底物、温度50~55℃、反应时间1.5~2.5h。
优选的,酶解反应的条件为:SSM粒度40目、底物浓度2%、pH 10.9、蛋白酶添加量9700U/g底物、温度51℃、反应时间2h。此时SSMP得率为12.38±0.13%。
在在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(2)中,灭酶的步骤为:沸水浴10~15min。
分离的步骤为:6000~8000r/min、4℃条件下离心20~40min。
在在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(3)中,对含有特定组分的SSM多肽进行纳滤脱盐处理。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(3)中,依次采用不同分子量的有机超滤膜元件对SSMP进行透过截留后,得到5个组分,分别为SSMP-1(8≤r≤10KDa)、SSMP-2(5≤r<8KDa)、SSMP-3(3≤r<5KDa)、SSMP-4(1≤r<3KDa)、SSMP-5(<1KDa);利用150Da的有机纳滤膜元件对每一组分进行纳滤脱盐处理,并可起到浓缩的作用。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(4)中,所述步骤(3)中含有特定分子质量范围的SSM多肽包括SSMP-1(8≤r≤10KDa)、SSMP-2(5≤r<8KDa)、SSMP-3(3≤r<5KDa)、SSMP-4(1≤r<3KDa)和SSMP-5(r<1KDa)。
从螯合物具有较高的螯合率的角度来讲,优选的,所述步骤(3)中含有特定分子质量范围的SSM多肽包括SSMP-1(8≤r≤10KDa)、SSMP-2(5≤r<8KDa)、SSMP-3(3≤r<5KDa)。
从螯合物具有较高的螯合率的角度来讲,进一步优选的,所述步骤(3)中含有特定分子质量范围的SSM多肽为SSMP-2(5≤r<8KDa),分子量约为5-8ku的SSMP-2对Ca2+的螯合率最高。
在本公开的一个或多个实施方式中,步骤(4)中,具体步骤为:将步骤(3)中含有特定分子质量范围的SSM多肽配制成1.5~2w/w%的多肽溶液;然后按照质量比12~18:1(SSM多肽:添加物)加入CaCl2,置于25~35℃水浴振荡40~60min进行螯合物制备,螯合结束后离心,获得的上清液即为SSM多肽-钙螯合物。
在本公开的第二个方面,提供采用所述第一个方面的制备方法获得的芝麻肽-钙螯合物,该螯合物的微观形貌呈多孔珊瑚状结构;多数呈现肽分子将Ca2+包裹的状态,少数呈现附着态。
在本公开的第三个方面,提供所述芝麻肽-钙螯合物在制备钙补充剂中的应用。
与本发明人知晓的相关技术相比,本公开其中的一个技术方案具有如下有益效果:
本公开以副产物芝麻粕为主要原料制备了芝麻肽-钙螯合物,提高了副产物的附加值,避免了资源浪费的局面。
本公开提供了一种芝麻多肽-钙矿物元素螯合物,可丰富营养食品补充剂市场,进一步增加经济价值。
本公开首先选择采用亚临界萃取技术处理后获得的芝麻粕,该技术能最大限度保护芝麻粕中蛋白质不变性,而且蛋白含量较高,脂肪含量较低。然后选择碱性蛋白酶酶解制备芝麻粕多肽,肽得率较高。再采用超滤膜分离组分,获得含有特定分子质量范围的SSM多肽,获得的各组分多肽的生物活性能力(PTIO、DPPH、·O2-自由基的清除能力)较强,其中,获得的SSMP-2(5-8KDa)含有较多可以与Ca2+结合的基团,并且在水溶液中的分散程度最好,表面的负电荷数量最多,与钙的鳌合能力最高,鳌合率高达72%以上。此外,超滤膜分离法具有低成本、操作简便等优点,适合工业化大规模生产。
附图说明
构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解,本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开,并不构成对本公开的不当限定。
图1是米曲霉发酵法与碱性蛋白酶酶解法制备芝麻蛋白肽的对比。
图2是SSMP及其不同组分的PDI测定结果。
图3是SSMP及其不同组分的Zeta电位测定结果。
图4是芝麻肽-钙螯合物荧光光谱图。
图5是SSMP及各组分与钙离子螯合SEM外貌结构图。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是示例性的,旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是,这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式,而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的,除非上下文另外明确指出,否则单数形式也意图包括复数形式,此外,还应当理解的是,当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时,其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案,以下将结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。
实施例1制备亚临界芝麻粕(SSM)
1材料
“中芝34号”芝麻:取自中国农科院油料所山东省无棣县十里香公司芝麻联合种植基地。
2原料处理
利用2019年秋季收获的“中芝34号”芝麻,经扬尘、清洗、沥干处理,得到本公开使用的实验原料。
液压压榨处理:将一定量芝麻置于液压压榨机中,在45MPa压力下,进行压榨处理,反复两次,获得本公开所需的冷榨芝麻粕(CPSM)。
亚临界萃取处理:将上述液压压榨处理得到芝麻饼粕进行初粉碎处理后,置于亚临界萃取设备中,在萃取温度45℃、压力0.45MPa条件下萃取40min,反复4次,获得本公开所需的亚临界芝麻粕(SSM)。
测定CPSM、SSM样品粗蛋白含量分别为28.80±0.17%、37.22±0.21%;粗脂肪含量分别为22.19±0.06%、6.12±0.05%。二者皆为低温粕,但冷榨芝麻粕残油量较高,亚临界萃取芝麻粕由于去除了粕中残余油脂,进一步富集了其蛋白质含量。
实施例2米曲霉制备芝麻蛋白肽与蛋白酶酶解法制备芝麻蛋白肽的比较
1米曲霉制备芝麻蛋白肽:
称取烘干恒重后的实施例1中的两种芝麻粕,按比例(以粗蛋白计)将SSM、CPSM与米曲霉孢子粉(1g/20g,以粗蛋白计)混合、加入适量水在一定温度下振荡发酵后,取样测定肽得率。
其中,米曲霉发酵条件为温度30℃、培养基含水量40%、米曲霉孢子粉添加量1g/20g、发酵时间72h。
2蛋白酶酶解法制备芝麻蛋白肽:
称取烘干恒重后实施例1中的两种芝麻粕,加入适量水配制成2%(以粗蛋白计)的SSM、CPSM浆液,pH调至10,加入碱性蛋白酶10000U/g底物,50℃反应1h。然后置于沸水浴10min,于8000r/min、4℃条件下离心30min,取上清液测定肽得率。
3结果与分析
如图1所示,当米曲霉发酵条件为温度30℃、培养基含水量40%、米曲霉孢子粉添加量1g/20g、发酵时间72h,SSM、CPSM多肽得率分别为6.43±0.06%、5.92±0.15%。
当碱性蛋白酶酶解条件为底物浓度2%、pH 10、碱性蛋白酶添加量10000U/g底物、温度50℃、时间1h,SSM、CPSM多肽得率分别为8.53±0.07%、6.41±0.13%。对于同种芝麻粕而言,优化后的米曲霉发酵法与未优化的碱性蛋白酶酶解法制备芝麻蛋白肽得率之间存在显著性差异(p<0.05)。对于碱性蛋白酶酶解法而言,SSM多肽得率与CPSM多肽得率存在显著性差异(p<0.05);对于米曲霉发酵法而言,SSM多肽得率与CPSM多肽得率差异不显著。为最大限度的获得芝麻蛋白肽,本公开确定采用碱性蛋白酶酶解SSM制备芝麻蛋白肽进行后续研究。
实施例3蛋白酶酶解法制备芝麻蛋白肽
将实施例1中的SSM于50℃烘干至恒重,进行粉碎处理后,保存备用。
准确称取一定量的SSM,加入适量水配制成SSM浆液。调节反应体系的pH值,然后加入适量碱性蛋白酶,置于一定温度下反应。反应结束后置于沸水浴10min,取出冷却至室温。然后于8000r/min、4℃条件下离心30min,将上清液置于-50℃进行真空冷冻干燥处理,即得SSM多肽(SSMP)。
其中,所述碱性蛋白酶酶解SSM制备芝麻蛋白肽的最佳工艺条件为SSM粒度40目、底物浓度2%、pH 10.9、蛋白酶添加量9700U/g底物、温度51℃、反应时间2h。此时SSMP得率为12.38±0.13%。
实施例4芝麻蛋白肽分离组分
1材料
SSM多肽(SSMP)冻干粉末:实施例3中制得芝麻蛋白肽,经冷冻干燥后所得。
2芝麻蛋白肽超滤膜分离组分处理
将制备的SSMP配制成2%的溶液,用0.45μm的水膜过滤。在操作温度为25℃下,利用1000Da、3000Da、5000Da、8000Da、10000Da分子量的有机超滤膜元件,采用错流过滤原理,对SSMP进行超滤,进而达到分离不同组分的效果。
(1)实验前冲洗。向物料罐中添加超纯水,启动电源,调节入膜压力至0.4-0.7MPa,循环3-5min后记录膜通量。冲洗完毕后,将压力调节阀开度调节到最大,把循环水放净。
(2)分离组分。向机器物料罐中加入2%SSMP溶液。启动电源,启动辅泵,系统运行平稳后再接通主泵电源、启动主泵,平稳运行2min后,控制辅泵压力为0.3MPa,提高主泵压力至实验压力为0.4MPa,按工艺要求收集透过液或收集截留液,以达到相应的实验目的。为提高通量一般要调整调压阀的开度,在过滤速度能够满足的条件下,选用较小的过滤压力,减缓膜元件的污染速度。随着实验的进行,物料罐内液位会下降,当物料罐内液面低于最低刻度100mL时,向其中加入超纯水至最大限度,反复3次,保证对原料液中不同组分分离完全。
(3)实验后清洗。向物料罐内加超纯水,循环清洗5min冲洗膜面。然后向物料罐中加入0.5‰的氢氧化钠溶液,先冲洗膜面15-30min,再调节至实验压力冲洗膜孔。最后再用超纯水清洗数次后,记录膜通量。
对依次采用不同分子量的有机超滤膜元件对SSMP进行透过截留后,得到5个组分,分别为SSMP-1(8-10KDa)、SSMP-2(5-8KDa)、SSMP-3(3-5KDa)、SSMP-4(1-3KDa)、SSMP-5(<1KDa)。将其置于-50℃下冷冻干燥后,保存备用。
3芝麻蛋白肽纳滤脱盐处理
利用150Da的有机纳滤膜元件对每一组分进行纳滤脱盐处理,并可起到浓缩的作用。将得到的SSMP-1、SSMP-2、SSMP-3、SSMP-4、SSMP-5分别配制成2%的溶液分别置于物料罐中。调节辅泵压力为0.2-0.3MPa、主泵压力为2.5-4MPa,按照2中操作流程操作,进行纳滤脱盐处理。
4结果与分析:Zeta电位及多分散系数测定结果分析
SSMP及其不同组分的Zeta电位及PDI测定结果见图2。
PDI(多分散系数)是评价分子聚合物分散性的重要理化指标,当目标物的PDI值越低,则可证明其在水中的分散程度越高。由图2可以看出SSMP及各组分之间的PDI差异。它们的PDI值由高到低依次为:SSMP(0.64±0.06)>SSMP-1(0.50±0.04)>SSMP-3(0.44±0.10)>SSMP-4(0.44±0.01)>SSMP-5(0.38±0.07)>SSMP-2(0.26±0.01)。由此可看出在水溶液中的分散程度最好的是SSMP-2,分散性最差的是SSMP。
由图3可知,SSMP及其各组分均显示负电位,表明其表面电荷带有较多的负电荷,它们的电位值分别为:SSMP(-11.93±0.21mV)、SSMP-1(-18.13±2.44mV)、SSMP-2(-20.00±0.87mV)、SSMP-3(-18.20±0.56mV)、SSMP-4(-17.13±1.70mV)、SSMP(-15.53±1.65mV)。由此可看出,组分SSMP-2较其他组分而言,其表面的负电荷数量是最多的。
5结论
(1)利用不同分子量超滤膜对SSMP进行截留分离,得到不同的分离组分分别为SSMP-1(8-10KDa)、SSMP-2(5-8KDa)、SSMP-3(3-5KDa)、SSMP-4(1-3KDa)、SSMP-5(<1KDa),其回收率基本维持在90%以上,纳滤脱盐率在85%以上。
(2)对SMM多肽及各分离组分进行Zeta电位和PDI测定表明:PDI值由高到低依次为:SSMP(0.64±0.06)>SSMP-1(0.50±0.04)>SSMP-3(0.44±0.10)>SSMP-4(0.44±0.01)>SSMP-5(0.38±0.07)>SSMP-2(0.26±0.01),在水溶液中的分散程度最好的是SSMP-2,分散性最差的是SSMP。
电位值分别为:SSMP(-11.93±0.21mV)、SSMP-1(-18.13±2.44mV)、SSMP-2(-20.00±0.87mV)、SSMP-3(-18.20±0.56mV)、SSMP-4(-17.13±1.70mV)、SSMP(-15.53±1.65mV),组分SSMP-2较其他组分而言,其表面的负电荷数量最多。
实施例5芝麻蛋白肽螯合物制备
1材料
SSM多肽(SSMP)由实施例3制得;SSMP-1(8-10KDa)、SSMP-2(5-8KDa)、SSMP-3(3-5KDa)、SSMP-4(1-3KDa)、SSMP-5(<1KDa)由实施例4制得。
2螯合物制备
准确称取分离的不同组分的SSM多肽,配制成2%的多肽溶液。然后按照质量比15:1(SSM多肽:添加物)加入CaCl2,置于30℃水浴振荡60min进行螯合物制备。螯合结束后于10000r/min、4℃条件下离心20min,取得上清液即为SSM多肽螯合物,计为SSMP-Ca2+。
3结果与分析
(1)通过EDTA络合滴定测定,SSMP及各分离组分对Ca2+的螯合率如下表1所示。
表1 SSMP及各分离组分对Ca2+的螯合率
注:字母表示5%显著水平差异。
如表1所示,SSMP及各分离组分在相同的条件下,对Ca2+有较好的螯合能力,螯合率都在50%以上。其中分子量约为5-8ku的SSMP-2对Ca2的螯合率最高,与其他组分有相比有显著差异。这是因为SSMP-2组分中的多肽含有较多可以与Ca2+结合的基团,并且该组分的表面负电荷较多以及能够较好的在水溶液中分散,因此增加了与离子的接触面积,进而导致螯合率高。此外,对于分子量较小的SSMP-4、SSMP-5对Ca2+的螯合率较弱,可能是因为分子量小导致多肽分子中可与离子结合的残基位点较少所导致。
(2)芝麻蛋白肽-矿物离子螯合物荧光光谱结果分析
由图4可看出,SSM多肽与Ca2+进行螯合,所得螯合物的荧光光谱曲线与未螯合的产生较为明显的差别。由图4可明显看出,当SSM多肽与Ca2+发生反应之后,所得螯合物的荧光强度大幅度下降。这是因为,当SSM多肽与Ca2+形成螯合物之后,所得产物中Ca2+含量较高,导致荧光淬灭,进而使荧光强度降低,对于各组分而言,其荧光强度减弱幅度并不明显,但是荧光最大吸收峰均从350nm向长波长方向移动,发生红移。
(3)芝麻蛋白肽-矿物离子螯合物红外光谱结果分析
SSMP及各分离组分与Ca2进行螯合,所得螯合物的红外光谱特征振动吸收峰波长如下。
表2 SSMP及各分离组分与金属离子螯合物的红外光谱特征振动吸收峰
由表2可知,SSMP及各分离组分与钙离子制备的螯合物,在红外光谱鉴定下,其-NH2伸缩振动吸收波长、COO-对称伸缩振动吸收波长均向长波长方向移动,发生红移现象;其红移波长范围分别为:SSMP-Ca2+(-NH2红移25.49、COO-红移6.85)、SSMP-1-Ca2+(-NH2红移46.28、COO-红移9.72)、SSMP-2-Ca2+(-NH2红移42.38、COO-红移7.36)、SSMP-3-Ca2+(-NH2红移38.82、COO-红移9.00)、SSMP-4-Ca2+(-NH2红移10.00、COO-红移9.94)、SSMP-5-Ca2+(-NH2红移23.57、COO-红移11.40),但C=O伸缩振动吸收波长规律不明显。
这种红外特征峰的振动吸收波长的变化也能侧面的反映出各组分之间对某种离子螯合率的变化。综上所述,SSMP及各组分能与Ca2+进行螯合,并且-NH2、COO-、C=O三种特征峰振动吸收波长发生一定规律性变化,说明多肽中的氨基和羧基均参与了螯合过程,具有一定的实际生产参考价值。
(4)芝麻蛋白肽-矿物离子螯合物微观形貌结果分析
由图5可见,是SSMP及各分离组分与Ca2+形成的螯合物的微观结构图。从图中可明显看出SSMP-Ca2+与其它明显不同,对比发现Ca2+的加入令SSMP结构发生变化,从平滑块状变成珊瑚状,可能是由于其表面的多孔性导致。并且在相同视野范围内,Ca2+的数量较少。对于其他组分与Ca2+形成螯合物的方式,多数呈现肽分子将其包裹的状态,少数呈现附着态;并且SSMP-4-Ca2+与原结构相比,结构破坏严重,并有较多碎片,而且Ca2+数量在视野范围内较少。
4结论
(1)SSMP及各分离组分在相同的条件下,对Ca2+有较好的螯合能力,螯合率都在50%以上,分子量约为5-8ku的SSMP-2对Ca2+的螯合率最高。
(2)荧光光谱分析表明,SSM多肽与Ca2+发生螯合反应后,荧光强度下降、最大吸收峰均从350nm向长波长方向移动,发生红移。
(3)红外光谱分析表明,SSMP及各组分中的氨基和羧基均参与了与Ca2+发生螯合反应。对于芝麻肽与Ca2+形成的螯合物而言,-NH2、COO-特征峰振动吸收波长均发生红移,C=O伸缩振动吸收波长规律不明显。
(4)SEM分析表明,SSM多肽与Ca2+可形成具有一定稳定性的螯合物,其微观结构大都呈现包裹状,互相黏连,形成“搭桥作用”,并呈聚集状出现;分子量较小的多肽分子在形成螯合物时,会令其结构产生明显变化。
上述实施例为本公开较佳的实施方式,但本公开的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本公开的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本公开的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种芝麻肽-钙螯合物的制备方法,其特征是,该方法包括以下步骤:
(1)制备亚临界芝麻粕:将压榨处理得到芝麻饼粕进行初粉碎处理后,进行亚临界萃取处理,获得亚临界芝麻粕SSM;
所述亚临界萃取处理条件为:萃取剂为丁烷,萃取温度40~50℃,压力 0.40~0.50MPa,萃取时间30~60min,反复2~4次;
(2)制备芝麻蛋白肽:将亚临界芝麻粕和水混合制成亚临界芝麻粕浆液,调节pH,加入碱性蛋白酶进行酶解反应;反应结束后,灭酶,分离,将上清液干燥,获得多肽SSMP;
酶解反应的条件为:SSM粒度35~45目、底物浓度1.5~2.5w/w%、pH 10~11、蛋白酶添加量9500~10000 U/g底物、温度50~55 ℃、反应时间1.5~2.5h;
(3)超滤膜分离组分处理:采用超滤膜过滤获得含有特定分子质量范围的SSM多肽;
依次采用不同分子量的有机超滤膜元件对SSMP进行透过截留后,得到5个组分,分别为SSMP-1、SSMP-2、SSMP-3、SSMP-4、SSMP-5,其中SSMP-1的分子质量为8≤r≤10 KDa,SSMP-2的分子质量为5≤r< 8 KDa,SSMP-3的分子质量为3≤r< 5 KDa,SSMP-4的分子质量为1≤r<3 KDa,SSMP-5的分子质量为r < 1 KDa;利用150 Da的有机纳滤膜元件对每一组分进行纳滤脱盐处理;
(4)制备芝麻肽-钙螯合物:将步骤(3)中SSMP-2配制成1.5~2w/w %的多肽溶液;然后按照质量比12~18:1加入CaCl2,置于25~35 ℃水浴振荡40~60 min进行螯合物制备,螯合结束后离心,获得的上清液即为SSM多肽-钙螯合物;该螯合物的微观形貌呈多孔珊瑚状结构。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,步骤(1)中,所述压榨处理得到芝麻饼粕是通过液压压榨处理方法制备得到的;
所述液压压榨处理方法包括以下步骤:将芝麻置于液压压榨机中,在 40~50MPa 压力下,进行压榨处理,获得冷榨芝麻粕。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,步骤(1)中,
所述亚临界萃取处理条件为:萃取温度45℃,压力 0.45MPa,萃取时间40min,反复4次。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征是,步骤(2)中,酶解反应的条件为: SSM粒度40目、底物浓度2%、pH 10.9、蛋白酶添加量 9700 U/g底物、温度51℃、反应时间 2 h;
灭酶的步骤为:沸水浴10~15min;
分离的步骤为:6000~8000 r/min、4℃条件下离心20~40 min。
5.采用权利要求1~4中任一项所述的方法制备获得的芝麻肽-钙螯合物,其特征是,该螯合物的微观形貌呈多孔珊瑚状结构。
6.权利要求5所述的芝麻肽-钙螯合物在制备钙补充剂中的应用。
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