CN113341078B - 对浮萍生长影响的快速检测方法及装置 - Google Patents
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Abstract
本申请技术方案提供一种对浮萍生长影响的快速检测方法及装置,所述方法包括提供浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组,其中:所述浓度试验组包括至少三组第一培养液,所述溶剂对照组包括至少一个第二培养液,所述空白对照组包括至少一个第三培养液;在24±2℃的温度条件下,向若干培养容器内分别注入所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液,并根据培养目标进行选择性灭菌;将接种后的培养容器随机摆放在光源下方,在特定光暗时间比的条件下,使浮萍生长特定时间,观测浮萍叶的生长状态;以浮萍的叶面积作为效应指标,检测外援物对浮萍生长的影响。本申请技术方案能够快速且准确的判定外援物对浮萍生长的影响。
Description
技术领域
本申请涉及生物检测领域,尤其涉及一种对浮萍生长影响的快速检测方法及装置。
背景技术
浮萍科(Lemnaceae)浮萍是高等水生浮萍的代表,它不仅是水中生产者,还是小型无脊椎动物的蔽护所和栖息地,在水生生态系统中有着重要的作用。国外毒理学家曾提出用浮萍进行浮萍毒性试验,与经常用作检测污染物毒性的藻类试验相比,浮萍试验的无菌操作要求相对较宽松,计数简单,操作较为简便,是一种较好的供试生物。
因此,浮萍生长抑制试验引起了广泛的重视,逐渐被应用于农药的急性毒性试验和环境监测中。
发明内容
本申请所要解决的技术问题是提供一种对浮萍生长影响的快速检测方法及装置,能够快速且准确的判定外援物对浮萍生长的影响。
本申请的一方面提供一种对浮萍生长影响的快速检测方法,包括:提供浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组,其中:所述浓度试验组包括至少三个第一培养液,所述至少三个第一培养液包括具有浓度梯度的苯酚和相同浓度的丙酮,所述溶剂对照组包括至少一个第二培养液,所述第二培养液包括丙酮而不包括苯酚,且所述第二培养液的丙酮浓度与所述第一培养液的丙酮浓度相等,所述空白对照组包括至少一个第三培养液,所述第三培养液不包括苯酚和丙酮;在24±2℃的温度条件下,向若干培养容器内分别注入所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液,并根据培养目标进行选择性灭菌;在无菌条件下,向每个所述培养容器中接种浮萍,在保证透气性的情况下封闭所述培养容器的开口;将接种后的培养容器随机摆放在光源下方,在特定光暗时间比的条件下,使浮萍生长特定时间,观测浮萍叶的生长状态;以浮萍的叶面积作为效应指标,检测外援物对浮萍生长的影响。
在本申请实施例中,向所述培养容器中接种的浮萍提前在浮萍生长培养基中培养至少8周,培养期间叶状体数量的倍增时间在60小时内。
在本申请实施例中,所述观测浮萍叶的生长状态包括:每隔一段时间测定所述浓度试验组的溶解氧、pH值、温度以及苯酚浓度,且保持温度为24±2℃,pH值为7.1±0.3,溶解氧的质量超过饱和溶解度的80%,苯酚浓度的波动幅度不超过±20%,并及时清理枯死叶状体,在试验开始和结束时观察并记录叶面积。
在本申请实施例中,以浮萍的叶面积作为效应指标,检测外援物对浮萍生长的影响,包括:以叶面积作为效应指标,通过图形分析分别计算初始叶面积和结束叶面积;通过所述初始叶面积和结束叶面积,获得所述浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的浮萍的生长率,所述生长率通过如下方式获得:
其中,Uz为实验容器z内的受试生物的生长率,单位为/天,Mz,1为实验容器z内实验开始时受试生物的计算生长率的效应指标,Mz,2为实验容器z内实验结束时受试生物的计算生长率的效应指标,tz为实验容器z实验开始与结束的间隔时间,单位为天,z为进行实验的某一实验容器,无量纲;
根据所述浮萍的生长率,分析外援物对浮萍生长的影响。
在本申请实施例中,所述检测外援物对浮萍生长的影响包括:根据所述浮萍的生长率获得平均生长率抑制率,所述生长率抑制率通过如下方式获得:
根据所述生长率抑制率获得平均生长率抑制率,所述平均生长率抑制率通过如下方式获得:
对所述平均生长率抑制率进行显著性差异分析。
在本申请实施例中,所述光源的辐射波长为400nm-700nm,辐射光强度为6500lx-10000lx,所述光暗时间比为16:8。
本申请另一方面还提供一种对浮萍生长影响的快速检测装置,采用上述的对浮萍生长影响的快速检测方法,包括:培养容器组,所述培养容器组包括作为浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的若干培养容器,所述培养容器包括透明本体和用于覆盖所述透明本体的顶部开口的盖板,所述盖板至少包括两个贯穿所述盖板的透气通孔;光源加载装置,所述光源加载装置包括至少一组支撑架和顶部架板,所述支撑架位于所述若干培养容器的相对两侧,所述顶部架板与所述支撑架相应配置,且所述顶部架板横跨所述培养容器上方且连接所述支撑架;光源组件,所述光源组件包括发光光源和反光罩,所述反光罩顶部悬挂于所述顶部架板上并位于所述培养容器上方,所述反光罩底部具有开口,所述发光光源配置于所述反光罩中,所述反光罩的内壁还包括“Z”形褶皱;定时开关装置,所述定时开关装置控制所述发光光源的运行状态。
在本申请实施例中,所述发光光源与所述培养容器之间的距离为50cm-100cm,所述“Z”形褶皱的顶角大小为130°-140°。
在本申请实施例中,所述透气通孔的直径为3mm-5mm,所述透气通孔在所述盖板上的密度为0.2个/cm2-0.3个/cm2。
在本申请实施例中,所述的对浮萍生长影响的快速检测装置还包括接种环,所述接种环用于将浮萍接种至所述透明本体中,所述接种环包括相连的接种环圈和接种环把。
本申请技术方案的对浮萍生长影响的快速检测方法及装置,完全满足浮萍生长的要求,所述快速检测方法易于观察到外援物加入培养液中后对浮萍产生的影响,所产生的影响既可以定性观察到,也可以定量测出,同时符合国家相关环境安全性评价试验准则及水质监测的要求。
本申请技术方案的对浮萍生长影响的快速检测方法打破了业界采用叶状体作为测试指标的定势思维,创新性地选用叶面积作为浮萍生长影响的测试指标,克服了目前的检测方法需要跨世代的缺陷,将浮萍生长抑制试验的检测时间大幅度缩短至48小时,较现有技术相比,节省了5天时间,故打破了技术壁垒,同时还为进一步探讨其他外援物对浮萍的影响奠定了基础。
本申请技术方案的对浮萍生长影响的快速检测装置,结构简单、易于操作,可以在人工控制条件下使浮萍稳定生长,为快速检测浮萍生长提供了基础。
附图说明
以下附图详细描述了本申请中披露的示例性实施例。其中相同的附图标记在附图的若干视图中表示类似的结构。本领域的一般技术人员将理解这些实施例是非限制性的、示例性的实施例,附图仅用于说明和描述的目的,并不旨在限制本申请的范围,其他方式的实施例也可能同样的完成本申请中的发明意图。应当理解,附图未按比例绘制。其中:
图1为本申请实施例的对浮萍生长影响的快速检测装置的结构示意图;
图2为本申请实施例的培养容器的结构示意图;
图3为本申请实施例的光源加载装置的结构示意图;
图4为本申请实施例的光源组件的结构示意图;
图5为沿图4的P方向观察到的光源组件的结构示意图;
图6为本申请实施例的接种环的结构示意图。
具体实施方式
以下描述提供了本申请的特定应用场景和要求,目的是使本领域技术人员能够制造和使用本申请中的内容。对于本领域技术人员来说,对所公开的实施例的各种局部修改是显而易见的,并且在不脱离本申请的精神和范围的情况下,可以将这里定义的一般原理应用于其他实施例和应用。因此,本申请不限于所示的实施例,而是与权利要求一致的最宽范围。
目前在研究浮萍生长抑制试验时,均选用浮萍的叶状体数或叶绿素作为试验测试指标,但是叶状体数在短期试验中极易受其他因素影响,变化较小,测试结果不明显,而叶绿素指标的测定程序复杂,无法快速获得检测结果。
本申请发明人对浮萍的抑制试验进行了深入的研究,发现将浮萍的叶面积作为试验测试指标时,能在很短的时间内获得浮萍的生长变化,进而快速准确的判定外援物对浮萍生长的影响,且本申请提供的对浮萍生长影响的快速检测装置可以在人工控制条件下使浮萍稳定生长,进一步提高了测试结果的准确性。
参考图1,本申请实施例的对浮萍生长影响的快速检测装置,包括:培养容器组100、光源加载装置200、光源组件300及定时开关装置(未示出)。所述培养容器组100位于所述光源组件300的下方,所述培养容器组100包括作为浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的若干培养容器110,所述培养容器110的数量根据试验需求确定,图1示出了其中3个培养容器110。所述光源加载装置200用于固定所述光源组件300,所述光源组件300为浮萍生长提供光源。
参考图2,为所述培养容器110的结构示意图。所述培养容器110包括透明本体111和盖板112。所述透明本体111可以是透明材质的容器,例如所述透明本体111可以是透明的玻璃容器,所述透明材质的容器便于观察外援物对浮萍叶面积产生的影响。所述透明本体111的外壁或内壁可以设置体积刻度,所述透明本体111的外壁可以安装电子温度计和电子湿度计。所述透明本体111的壁厚优选2mm。
所述盖板112用于覆盖所述透明本体111的顶部开口,所述盖板112至少包括两个贯穿所述盖板的透气通孔113。所述透气通孔113的直径以及所述透气通孔113在所述盖板112上的密度直接影响试验的进行,随着所述透气通孔113的直径或密度中至少一个参数减小,越有利于保持所述培养容器110内的无菌环境,但是却不利于浮萍生长所需的透气效果。在本申请实施例中,所述透气通孔113的直径为3mm-5mm,所述透气通孔113在所述盖板112上的密度为0.2个cm2-0.3个/cm2,使所述培养容器110既能够满足试验所需的无菌环境,又可以使浮萍正常生长。
参考图3,所述光源加载装置200包括至少一组支撑架210和顶部架板220,所述支撑架210配置于所述若干培养容器110的相对两侧,所述顶部架板220与所述支撑架210相应配置,且所述顶部架板220横跨所述培养容器110上方且连接所述支撑架210。
参考图4,所述光源组件300包括发光光源310和反光罩320,其中所述发光光源310配置于所述反光罩320中,所述发光光源310提供浮萍生长所必须的光源。所述反光罩320顶部悬挂于所述顶部架板220上并位于所述培养容器110上方,所述反光罩320底部具有开口。所述反光罩320可以将分散的光线进行反射,使光线集中射向所述培养容器110,充分利用所述发光光源310提供的光能。在本申请实施例中,所述反光罩320呈三棱柱状,聚光效果最佳。在其他实施例中,所述反光罩320的形状也可以呈其他形状,例如四棱柱状、半球状等。
如图5所示,沿图4的P方向观察(也即从所述反光罩320的底部开口向上观察)所述光源组件300的结构,所述反光罩320的内壁包括“Z”形褶皱321。在一些实施例中,所述“Z”形褶皱321位于长边所在平面的内壁。所述“Z”形褶皱321的顶角大小为130°-140°,聚光效果最佳。所述发光光源310与所述培养容器110之间的距离为50cm-100cm,所述发光光源310的辐射波长为400nm-700nm,辐射光强度为6500lx-10000lx。
所述定时开关装置用于控制所述发光光源310的运行状态,在本申请实施例中,所述定时开关装置控制所述发光光源310按照光暗时间比为16:8运行,即白天开启16小时,晚间关闭8小时。在一些实施例中,所述定时开关装置与所述发光光源310电连接或通讯连接。
参考图6,本申请实施例的快速检测装置还包括接种环400。所述接种环400用于将浮萍接种至所述透明本体111中,包括相连的接种环圈410和接种环把420。
本申请实施例还提供一种对浮萍生长影响的快速检测方法,采用上述的快速检测装置,包括:
步骤S1:提供浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组,其中:所述浓度试验组包括至少三个第一培养液,所述至少三个第一培养液包括具有浓度梯度的苯酚和相同浓度的丙酮,所述溶剂对照组包括至少一个第二培养液,所述第二培养液包括丙酮而不包括苯酚且所述第二培养液的丙酮浓度与所述第一培养液的丙酮浓度相等,所述空白对照组包括至少一个第三培养液,所述第三培养液不包括苯酚和丙酮;
步骤S2:在24±2℃的温度条件下,向若干培养容器内分别注入所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液,并根据培养目标进行选择性灭菌;
步骤S3:在无菌条件下,向每个所述培养容器中接种浮萍,在保证透气性的情况下封闭所述培养容器的开口;
步骤S4:将接种后的培养容器随机摆放在光源下方,在特定光暗时间比的条件下,使浮萍生长特定时间,观测浮萍叶的生长状态;
步骤S5:以浮萍的叶面积作为效应指标,检测外援物对浮萍生长的影响。
在步骤S2中,向所述培养容器中接种的浮萍提前在浮萍生长培养基中培养至少8周,培养期间叶状体数量的倍增时间在60小时内。
在步骤S4中,所述光源的辐射波长为400nm-700nm,辐射光强度为6500lx-10000lx,并控制所述光暗时间比为16:8。所述观测浮萍叶的生长状态包括:每隔一段时间测定所述浓度试验组的溶解氧、pH值、温度以及苯酚浓度,且保持温度为24±2℃,pH值为7.1±0.3,溶解氧的质量超过饱和溶解度的80%,苯酚浓度的波动幅度不超过±20%,并及时清理枯死叶状体,在试验开始和结束时观察并记录叶面积。
在步骤S5中,以浮萍的叶面积作为效应指标,检测外援物对浮萍生长的影响,包括:
步骤S51:以叶面积作为效应指标,通过图形分析分别计算初始叶面积和结束叶面积;
步骤S52:通过所述初始叶面积和结束叶面积,获得所述浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的浮萍的生长率,所述生长率通过如下方式获得:
其中,Uz为实验容器z内的受试生物的生长率,单位为/天,Mz,1为实验容器z内实验开始时受试生物的计算生长率的效应指标,Mz,2为实验容器z内实验结束时受试生物的计算生长率的效应指标,tz为实验容器z实验开始与结束的间隔时间,单位为天,z为进行实验的某一实验容器,无量纲;
步骤S53:根据所述浮萍的生长率,分析外援物对浮萍生长的影响。
在本申请实施例中,所述分析外援物对浮萍生长的影响包括:
根据所述浮萍的生长率获得生长率抑制率,所述生长率抑制率通过如下方式获得:
根据所述生长率抑制率获得平均生长率抑制率,所述平均生长率抑制率通过如下方式获得:
对所述平均生长率抑制率进行显著性差异分析。
以下通过具体实例详细介绍本申请实施例的快速检测方法。
选择的受试物为苯酚(分析纯),受试浮萍为紫背浮萍(Spirodelapolyrrhiza),所述紫背浮萍有12个叶状体,且初始总面积为85±5mm2。
在试验开始前,将浮萍植株在试验用浮萍生长培养基中培养至少8周,培养期间叶状体数量的倍增时间约为60小时。
在120℃下对试验用水进行灭菌15min,作为培养基。提供浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组,其中所述浓度试验组包括5组第一培养液,所述第一培养液均包括丙酮和苯酚,且丙酮的浓度均为0.1mg/L,苯酚的浓度分别为400.0mg/L、800.0mg/L、1600.0mg/L、3200.0mg/L和6400.0mg/L。所述溶剂对照组包括1组第二培养液,所述第二培养液包括0.0mg/L的苯酚和0.1mg/L的丙酮。所述空白对照组包括第三培养液,所述第三培养液中不存在苯酚和丙酮。上述的每种培养液均设置3个重复试验,随机编号为#1、#2和#3,相同编号的重复试验组成一个平行组,共3个平行组,依次编号为平行组A、平行组B和平行组C。
准备21个培养容器,每个体积250mL,分别加入150mL配好的培养液。在无菌条件下,采用接种环向培养容器的透明本体中接入叶状体12片(3个克隆体),并将接种好的培养容器随机放置于光源组件下方。采用定时开关装置控制光源组件按照光暗时间比为16:8运行,且发光光源的辐射波长为400nm-700nm,辐射光强度为6500lx-10000lx。
试验过程中每隔24小时分别测定各浓度试验组的溶解氧、pH值、温度以及苯酚浓度,且保持溶液温度为24±2℃,pH值为7.1±0.3,溶解氧的质量超过饱和溶解度的80%,苯酚浓度波动幅度不超过±20%,并及时清理枯死叶状体,在试验开始和结束时观察并记录叶面积,试验暴露48小时。
以叶面积作为效应指标,利用计算机软件通过图形分析分别计算初始叶面积和结束叶面积,通过所述初始叶面积和结束叶面积,获得所述浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的浮萍的生长率,根据所述浮萍的生长率,分析外援物对浮萍生长的影响。
表1为苯酚对紫背浮萍48小时急性毒性结果,表2为苯酚对紫背浮萍48小时的生长率急性毒性实验数据分布检验结果。结合表1和表2,3个平行组的紫背浮萍48小时的生长率符合正态分布、满足方差齐性且平行组间无显著性差异,满足对紫背浮萍48小时的苯酚急性毒性数据进行线性拟合的条件。
表1 苯酚对紫背浮萍的急性毒性实验结果
表2 苯酚对紫背浮萍生长率的急性毒性实验数据分布检验结果
对空白对照组与溶剂对照组的生长率进行方差分析,无显著性差异(α=0.05,p=0.911),苯酚对紫背浮萍48小时的急性毒性实验的EC50计算采用空白对照组,EC50结果见表3。
表3 苯酚对紫背浮萍的急性毒性结果
在有效试验条件下,苯酚各浓度试验组与对照组相比,在0.05水平上对浮萍的叶面积P值均大于0.05,表明各浓度试验组与对照组间无显著性差异,苯酚对紫背浮萍48h-EC50为1.247×106μg/L,95%CI为7.205×106~2.383×106μg/L,试验过程中各浓度试验组与对照组无其它异常。
综上所述,在阅读本详细公开内容之后,本领域技术人员可以明白,前述详细公开内容可以仅以示例的方式呈现,并且可以不是限制性的。尽管这里没有明确说明,本领域技术人员可以理解本说明书意图囊括对实施例的各种合理改变,改进和修改。这些改变,改进和修改旨在由本说明书提出,并且在本申请的示例性实施例的精神和范围内。
此外,本申请中的某些术语已被用于描述本申请的实施例。例如,“一个实施例”,“实施例”和/或“一些实施例”意味着结合该实施例描述的特定特征,结构或特性可以包括在本申请的至少一个实施例中。因此,可以强调并且应当理解,在本申请的各个部分中对“实施例”或“一个实施例”或“替代实施例”的两个或更多个引用不一定都指代相同的实施例。此外,特定特征,结构或特性可以在本说明书的一个或多个实施例中适当地组合。
应当理解,在本申请的实施例的前述描述中,为了帮助理解一个特征,出于简化本申请的目的,本申请将各种特征组合在单个实施例、附图或其描述中。然而,这并不是说这些特征的组合是必须的,本领域技术人员在阅读本说明书的时候完全有可能将其中一部分特征提取出来作为单独的实施例来理解。也就是说,本申请中的实施例也可以理解为多个次级实施例的整合。而每个次级实施例的内容在于少于单个前述公开实施例的所有特征的时候也是成立的。
本文引用的每个专利,专利申请,专利申请的出版物和其他材料,例如文章,书籍,说明书,出版物,文件,物品等,可以通过引用结合于此。用于所有目的的全部内容,除了与其相关的任何起诉文件历史,可能与本文件不一致或相冲突的任何相同的,或者任何可能对权利要求的最宽范围具有限制性影响的任何相同的起诉文件历史。现在或以后与本文件相关联。举例来说,如果在与任何所包含的材料相关联的术语的描述、定义和/或使用与本文档相关的术语、描述、定义和/或之间存在任何不一致或冲突时,使用本文件中的术语为准。
最后,应理解,本文公开的申请的实施方案是对本申请的实施方案的原理的说明。其他修改后的实施例也在本申请的范围内。因此,本申请披露的实施例仅仅作为示例而非限制。本领域技术人员可以根据本申请中的实施例采取替代配置来实现本申请的技术方案。因此,本申请的实施例不限于申请中被精确地描述过的实施例。
Claims (4)
1.一种对浮萍生长影响的快速检测方法,其特征在于,用于获取浮萍的有效急性毒性数据,且所述方法包括:
提供浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组,其中:所述浓度试验组包括至少三个第一培养液,所述至少三个第一培养液包括具有浓度梯度的苯酚和相同浓度的丙酮,所述溶剂对照组包括至少一个第二培养液,所述第二培养液包括丙酮而不包括苯酚,且所述第二培养液的丙酮浓度与所述第一培养液的丙酮浓度相等,所述空白对照组包括至少一个第三培养液,所述第三培养液不包括苯酚和丙酮;
在24±2℃的温度条件下,向若干培养容器内分别注入所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液,并根据培养目标进行选择性灭菌;
在无菌条件下,向每个所述培养容器中接种浮萍,在保证透气性的情况下封闭所述培养容器的开口,其中所述浮萍提前在浮萍生长培养基中培养至少8周,培养期间叶状体数量的倍增时间在60小时内;
将接种后的培养容器随机摆放在光源下方,在特定光暗时间比的条件下,使浮萍生长48小时,且每隔一段时间测定所述浓度试验组的溶解氧、pH值、温度以及苯酚浓度,且保持温度为24±2℃,pH值为7.1±0.3,溶解氧的质量超过饱和溶解度的80%,苯酚浓度的波动幅度不超过±20%,并及时清理枯死叶状体,在试验开始和结束时观察并记录叶面积;
以浮萍的叶面积作为效应指标,获得急性毒性数据,并对所述急性毒性数据进行正态性分布、平行组间方差齐性及平行组间显著性差异分析,确保所述急性毒性数据为满足正态性分布、平行组间方差齐性及平行组间无显著性差异的有效急性毒性数据。
2.根据权利要求1所述的对浮萍生长影响的快速检测方法,其特征在于,以浮萍的叶面积作为效应指标,所述获得急性毒性数据包括:
以叶面积作为效应指标,通过图形分析分别计算初始叶面积和结束叶面积;
通过所述初始叶面积和结束叶面积,获得所述浓度试验组、溶剂对照组及空白对照组的浮萍的生长率,所述生长率通过如下方式获得:
其中,Uz为实验容器z内的受试生物的生长率,单位为/天,Mz,1为实验容器z内实验开始时受试生物的计算生长率的效应指标,Mz,2为实验容器z内实验结束时受试生物的计算生长率的效应指标,tz为实验容器z实验开始与结束的间隔时间,单位为天,z为进行实验的某一实验容器,无量纲;
对所述浮萍的生长率进行正态性分布和平行组间显著性差异分析,确保所述浮萍的生长率满足正态性分布且平行组间无显著性差异。
3.根据权利要求2所述的对浮萍生长影响的快速检测方法,其特征在于,所述获得急性毒性数据还包括:
根据所述浮萍的生长率获得生长率抑制率,所述生长率抑制率通过如下方式获得:
根据所述生长率抑制率获得平均生长率抑制率,所述平均生长率抑制率通过如下方式获得:
根据所述平均生长率抑制率,获得苯酚对浮萍的急性毒性值EC50。
4.根据权利要求1所述的对浮萍生长影响的快速检测方法,其特征在于,所述光源的辐射波长为400nm-700nm,辐射光强度为6500lx-10000lx,所述光暗时间比为16:8。
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氯酚类化合物对紫背浮萍生长及叶绿素含量的影响;金小伟 等;《中国环境科学》;20131231;第33卷(第12期);第1.1,1.2部分 * |
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