CN113337577A - 一种微流控芯片使用方法 - Google Patents

Abstract

一种微流控芯片使用方法，该方法包括：将待测样品加注到样品腔中，与裂解液和磁珠混合液混合；驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸；驱动吸附核酸后的磁珠通过裂解液上方的有机相层、经微通道进入洗涤腔的有机相层；驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质；驱动洗涤后的磁珠通过洗涤液上方的有机相层经微通道进入检测腔，驱动所述洗涤后的磁珠落入洗脱液，并且在洗脱液中运动以洗脱、扩增核酸并且检测。无接触的实现待测样本的核酸裂解、核酸洗涤、核酸分离，使整个核酸检测过程，安全可靠，避免了杂质混入，影响核酸检测结果，并且整个流程简单，使用极为方便，核酸检测的效率高和准确性好。

Description

一种微流控芯片使用方法

技术领域

本申请涉及核酸检测技术领域，更具体地，涉及一种微流控芯片使用方法。

背景技术

POC分子诊断作为一种不依赖专业实验室及人员的精准体外诊断技术具有广阔的应用前景。其核心在于对核酸样本进行样品裂解、核酸分离-富集-纯化-扩增、核酸检测等操作流程的集成化和自动化，现有一种POC分子诊断平台以微流控芯片为主要分析载体，在微流控芯片中以腔室间流体流动的形式，串联完成各个操作步骤。凭借微尺度下流体特性，以及对芯片上检测通道的大规模集成可以大幅降低试剂和样品的消耗，加快反应速率，易于实现高通量分析，利于分析系统的微型化和自动化。

现有的通过微流控芯片进行核酸检测的方案，通常是通过按一定的时序将在特定位置通过不同的反应试剂完成指定反应步骤，因此会涉及较复杂的通道流路设计以及泵阀操作。还有一些基于传统试管操作的微型化方案是通过微型机械臂带动磁棒进入不同的试管中完成磁珠与核酸的分离-转移并结合移液操作最终实现核酸分析全流程，其缺点在于：分析过程中的开管进行的加注和转运操作存在一定的污染风险，影响检测的效率。

发明内容

本申请的发明目的旨在提供一种检测效率高的微流控芯片使用方法。

为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种微流控芯片使用方法，采用了如下所述的技术方案：

一种微流控芯片使用方法，该方法包括：

将待测样品加注到样品腔中，与裂解液和磁珠混合液混合；

驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸；

驱动吸附核酸后的磁珠通过裂解液上方的有机相层、经微通道进入洗涤腔的有机相层；

驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质；

驱动洗涤后的磁珠通过洗涤液上方的有机相层经微通道进入检测腔，

驱动所述洗涤后的磁珠落入洗脱液，并且在洗脱液中运动以洗脱、扩增核酸并且检测。

进一步的，所述步骤驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸，具体包括：

振荡芯片裂解液使得磁珠和待测样品充分接触；

加载外部磁场，以驱动所述磁珠汇集并移动进入微通道。

进一步的，所述步骤驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸的步骤还包括：

加载所述外部磁场，吸附所述磁珠上升进入有机相层，

撤除所述外部磁场，以驱动所述磁珠沉降，吸附核酸样本。

进一步的，所述驱动磁珠汇聚，包括：对磁珠进行一次上下运动后，汇聚磁珠进入下一个区域，直至遍历裂解液中的所有区域，最终汇聚所述磁珠进入微通道。

进一步的，所述微通道内充满有机相溶液，所述汇聚的磁珠通过时与母液分离。

进一步的，还包括对所述连通样品腔、洗涤腔和检测腔的微通道加热，使所述微通道中的石蜡融化与所述微通道中的有机相液体融合。

进一步的，所述步骤驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质中，脱除杂质的方法具体包括:

加载外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠移动至洗涤液的上部；

撤除所述外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质；

循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到完成了核酸上的杂质的滤除。

进一步的，所述洗脱核酸的步骤，具体包括：

加载外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠移动至洗脱液的上部；

撤除所述外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质；

循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到核酸和磁珠完全洗脱。

进一步的，所述扩增核酸的步骤，具体包括：

加载外部磁场，吸附磁珠上升进入有机相，并通过微通道移除；

对检测腔加热，使得核酸解链，并且使检测腔中的蜡封融化，蜡封中的扩增试剂与所述洗脱后的核酸均匀混合；

维持检测腔中扩增所需的温度下，直至对洗脱后的核酸完成扩增。

进一步的，所述核酸反应的步骤，具体包括：

循环加热、冷却所述洗脱后的核酸，以进行PCR反应，并采集洗所述脱后的核酸在PCR反应下的荧光扩增曲线。

有益效果：

一种微流控芯片使用方法，该方法包括：将待测样品加注到样品腔中，与裂解液和磁珠混合液混合；驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸；驱动吸附核酸后的磁珠通过裂解液上方的有机相层、经微通道进入洗涤腔的有机相层；驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质；驱动洗涤后的磁珠通过洗涤液上方的有机相层经微通道进入检测腔，驱动所述洗涤后的磁珠落入洗脱液，并且在洗脱液中运动以洗脱、扩增核酸并且检测。

待测样品加样品仓内，与裂解液混合，裂解液分离出待测样品中的核酸及其他产物，通过磁珠吸附裂解液中的核酸样本，控制磁珠进入有机相层；之后克服微通道中有机相的表面张力通过微通道，并在有机相在微通道结构的辅助下，突破有机相与水相的待测样品母液之间的界面，使得磁珠带动核酸与待测样品母液分离，然后驱动磁珠进入洗涤腔，洗除磁珠上附带的蛋白、细胞碎片等杂质，提高磁珠附着的核酸纯度，完成洗涤磁珠的进入洗脱液进行洗脱，分离核酸与磁珠，然后对分离的核酸进行扩增，并采集荧光扩增曲线，该方案能够无接触的实现待测样本的核酸裂解、核酸洗涤、核酸分离，使整个核酸检测过程，安全可靠，避免了杂质混入，影响核酸检测结果，并且整个流程简单，使用极为方便，核酸检测的效率高和准确性好。

附图说明

为了更清楚地说明本申请的方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一个简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本实施例一种微流控芯片使用方法的流程图；

图2为本实施例图1中步骤S200的流程图；

图3为本实施例图1中步骤S400的流程图；

图4为本实施例图1中步骤S600的流程图；

具体实施方式

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中在申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请；本申请的说明书和权利要求书及上述附图说明中的术语“包括”和“具有”以及它们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。本申请的说明书和权利要求书或上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。

在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

一种微流控芯片使用方法，该方法包括：

步骤S100：将待测样品加注到样品腔中，与裂解液和磁珠混合液混合。

具体的裂解液和磁珠预装在微流控芯片的样品腔中，通过将待测样品加注到样品腔中，使得待测样品与裂解液及磁珠混合。

磁珠混合液中包括能够使得磁珠悬浮的液相，预制的能够吸附核酸的磁珠，以及促进磁珠和核酸吸附的试剂成分。

步骤S200：驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸。

具体的，待测样品通常是血液、尿液、唾液等人体体液，成分通常复杂，包括蛋白质、细胞膜、细胞质、糖、脂质等有机杂质，以及盐等无机杂质，在加热状态下，待测样品中的物质裂解，絮状的核酸和其他杂质在待测样品母液中呈现游离状态存在。通过外力的驱动带动磁珠在裂解液中运动，能够吸附待测样品母液中核酸，通常磁珠经预处理，能够对待测样品中的核酸进行聚集和纯化。

步骤S300驱动吸附核酸后的磁珠通过裂解液上方的有机相层、经微通道进入洗涤腔的有机相层。

待测样品的母液，以及微流控芯片中使用的裂解液、洗涤液、洗脱液均可以是水相液体。通过外力驱动磁珠带动核酸向上方运动，进入有机相层，因为有机相层和水相的待测样品母液是互斥的，磁珠带动核酸以及少量的杂质进入有机相层中，而几乎不会带动水相液体进入有机相层。

步骤S400：驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质。

在驱动磁珠通过有机相层进入洗涤液的过程中，有机杂质与有机相层之间的亲和力要明显大于其与水相的洗涤液之间的亲和力，故，大量随磁珠运动的有机相杂质停留在了有机相层中，而在洗涤液中，磁珠在外力的驱动下连续运动，滤除携带的其他有机杂质和无机杂质，使得磁珠所携带的核酸洁净。

步骤S500：驱动洗涤后的磁珠通过洗涤液上方的有机相层经微通道进入检测腔。

通过外力驱动磁珠从洗涤液转运到洗脱液中的具体步骤与前述驱动磁珠从裂解液到洗涤液中的过程基本相同。在此过程中能够第二次通过有机相液体除去部分残留的有机杂质。

步骤S600：驱动所述洗涤后的磁珠落入洗脱液，并且在洗脱液中运动以洗脱、扩增核酸并且检测。

核酸聚集吸附在磁珠上的时候，难以与引物探针混合配对，同时也难以进行观测。洗脱液能够去除核酸与磁珠之间的连接使得核酸与磁珠分离，游离在洗脱液中，以备后续扩增和检测。在洗脱液中加入扩增和核酸标记用的引物探针以及扩增液剂进行核酸的扩增。启动热循环程序，对检测腔进行快速升降温，达到PCR热循环所需的温度，进行PCR反应，在每个热循环到达引物延伸所需的温度时，在检测腔斜面上方激发采集荧光信号，观测荧光信号强度随循环数的变化曲线，最终形成实时荧光扩增曲线。

本实施例通过磁珠吸附裂解液中的核酸，之后在外力的驱动下，控制磁珠向裂解液的上方移动，带动核酸进入有机相层；之后克服微通道中有机相的表面张力通过微通道，并在有机相在微通道结构的辅助下，突破有机相与水相的待测样品母液之间的界面，使得磁珠带动核酸与待测样品母液分离。之后驱动磁珠带动核酸进入洗涤液中洗涤。完成洗涤核酸在磁珠的带动下进入洗脱液进行洗脱和扩增，并采集荧光扩增曲线。其中有机相层同样设置在洗脱液和洗涤液的上层。磁珠在裂解液、洗涤液和洗脱液上方的有机相层中移动，有机相比水相质轻，将有机相层设置在水相的裂解液、洗涤液和洗脱液的上层能够有效防止相邻的水相液体和有机相层之间的相互扩散，防止有机相层进入水相液体中，影响核酸进行裂解、与磁珠吸附、洗涤、洗脱以及扩增和光学检测的效率。该方案提升了通过微流控芯片进行核酸检测的效率和准确性。

该方案的另一项优势在于：提供一种封闭体系中全程以非接触式操作完成目标分析物的裂解、富集、纯化、洗脱、扩增检测的方法，同时有效隔离不同水相液体使得芯片可长时间预装载除待测样品之外的核酸分析所需的试剂，最终提高核酸分析操作效率并降低所需外部操作的复杂性。

进一步的，所述步骤S200：驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸，具体包括：

步骤S201：振荡芯片裂解液使得磁珠和待测样品充分接触。

步骤S202：加载外部磁场，以驱动所述磁珠汇集移动进入微通道。

具体的，振荡混合了磁珠、游离核酸样本的裂解液，使得裂解液中的磁珠和核酸充分分布，之后通过在外部加载磁场，吸引磁珠运动以吸附核酸，并且在有机相层中聚集，通过磁场的牵引带动聚集的磁珠运动，并且进入微通道中，通过聚集的磁珠克服微通道中有机相的的表面张力，进入微通道，该方案通过外部磁场的控制能够在非接触的条件下，通过磁珠吸附样品腔中的核酸并且带离样品腔，该方案通过微流控芯片吸附核酸的效率高。

进一步的，所述步骤驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸的步骤还包括：

步骤S203：加载所述外部磁场，吸附所述磁珠上升进入有机相层，

步骤S204：撤除所述外部磁场，以驱动所述磁珠沉降，吸附核酸样本。

在裂解液的上方加载外部磁场，使得磁珠在磁力的吸引之下，向上方移动以转运到裂解液的顶部。之后撤除外部磁场，磁珠在重力的作用下下落，在下落的过程中实现了裂解液中的区域的遍历，并吸附区域中核酸。在一种实施例中，为了增强对磁珠控制的精度，磁场并不能覆盖整个裂解液所在的区域，而是覆盖了裂解液的一个分段，通过依次在裂解液的不同分段加载和撤除磁场，控制一个分段大小影响范围内的磁珠上升或下降以遍历这一分段内的裂解液，并且通过多次加载和撤除磁场，对每个分段执行驱动磁珠上升及下降的操作，以吸附裂解液中的所有核酸。该方案能够利用重力，驱动磁珠在裂解液的所有区域移动以吸附在裂解液中游离的所有核酸，并且避免了有机相和裂解液之间的相互渗透，该方案对核酸的吸附率高。

进一步的，所述驱动磁珠汇聚，包括：步骤S2021：所述汇集所述磁珠包括，对磁珠进行一次上下运动后，汇聚磁珠进入下一个区域，直至遍历裂解液中的所有区域，最终汇聚所述磁珠进入微通道。

在对步骤S200所述方案的另一种实施方式是通过外部磁场驱动磁珠在分段中向上方移动之后带动磁珠移动到下一个分段，之后撤除外部磁场，磁珠在重力的驱动下向下方移动，遍历分段所在区域，与吸附分段中的核酸，循环加载磁场以吸附磁珠，移动磁珠到相邻分段，释放磁珠遍历分段所在区域，吸附分段中核酸，直到遍历裂解液中的所有区域并对裂解液中的核酸实现吸附，此时所有磁珠聚集在一个分段中，能够通过外部磁场同时驱动，该方案有利于后续通过磁场带动所有磁珠通过微通道，能够提升核酸检测的效率。

进一步的，所述微通道内充满有机相溶液，所述汇聚的磁珠通过时与母液分离。

具体的，待测样品包括核酸以及保存核酸的母液，母液中存在有蛋白等物质，裂解液将母液裂解，释放出核酸，使用磁珠吸附核酸，在微通道中填充的有机相溶液所提供的表面张力仅仅允许磁珠带动核酸和少量液体通过，在外部磁场的驱动下，裂解液中的磁珠向上方移动，进入有机层，移动磁场，在磁吸力的驱动下，磁珠向微通道的端口移动并且聚集，聚集在微通道端口的磁珠能够克服微通道中的有机液所产生的表面张力，

通过多次的上下移动使磁珠充分得与核酸接触，捕获核酸，然后通过微通道，并且进入洗涤液上方的有机层，该方案能够通过微通道的阻隔，阻挡待测样品的母液以及裂解液，以及部分磁珠携带的有机物杂质，使得磁珠和核酸更为纯净，该方案能够提升核酸检测的准确度。

进一步的，一种微流控芯片使用方法的步骤：还包括对所述连通样品腔、洗涤腔和检测腔的微通道加热，使所述微通道中的石蜡融化与所述微通道中的有机相液体融合。通过石蜡封堵微通道，防止裂解液和洗涤液之间的互串，并且在驱动磁珠在裂解液和洗涤液之间转运核酸之前将微通道疏通，同时通过溶解的石蜡和有机相之间的相似相容将浸润微通道，保证微通道的通过性能，该方案能够提升检测的准确度。

进一步的，所述步骤步骤S400：驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质中，脱除杂质的方法具体包括:

步骤S401：加载外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠移动至洗涤液的上部。

步骤S402：撤除所述外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质。

步骤S403：循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到完成了核酸上的杂质的滤除。

具体的，在洗涤液中通过加载外部磁场，驱动磁珠带动核酸向上方移动以移动至洗涤液的顶部，之后撤除外部磁场，使得磁珠在重力的驱动下下落，与洗涤液接触实现清洗，之后循环驱动磁珠在洗涤液中上下移动，以实现对核酸携带的蛋白、细胞碎片等杂质以及无机杂质的滤除。该方案无需搅动洗涤液，防止有机相层和洗涤液之间的相互扩散，该方案对核酸滤除杂质的滤除率更高。

进一步的，所述洗脱核酸的步骤，具体包括：

步骤S601：加载外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠移动至洗脱液的上部。

步骤S602：撤除所述外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质。

步骤S603：循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到核酸和磁珠完全洗脱。

具体的，在洗脱液中通过加载外部磁场，驱动磁珠带动核酸向上方移动以移动至洗脱液的顶部，之后撤除外部磁场，使得磁珠在重力的驱动下下落，与洗脱液接触，之后循环驱动磁珠在洗脱液中上下移动，以实实现磁珠和核酸的分离。该方案无需搅动洗脱液，防止有机相层和洗脱液之间的相互扩散，该方案对核酸的洗脱效率更高。

进一步的，所述扩增核酸的步骤，具体包括：

步骤S604：加载外部磁场，吸附磁珠上升进入有机相，并通过微通道移除。

步骤S605：对检测腔加热，使得核酸解链，并且使检测腔中的蜡封融化，蜡封中的扩增试剂与所述洗脱后的核酸均匀混合。

步骤S606：维持检测腔中扩增所需的温度下，直至对洗脱后的核酸完成扩增。

具体的，在实现了洗脱之后，磁珠与纯净的核酸分离，通过加载外部磁场，将磁珠移动至洗脱液顶部的有机相层中，此时纯净的核酸留存在洗脱液中，之后加热洗脱液，使得洗脱液中的核酸解链，并且洗脱液中的蜡封融化，从而使核酸扩增试剂暴露出来与检测腔核酸洗脱液体接触溶解释放出组分，而融化的石蜡在与洗脱液之间的密度差产生的浮力作用下上升到洗脱液上方的有机相层中，通过溶解石蜡释放的组分在水相中溶解，结合解链的核酸，形成核酸扩增反应体系。其中上述溶解石蜡所释放的组分，包括作为引物探针的核酸片段以及扩增试剂。

进一步的，所述核酸反应的步骤，具体包括：

步骤S607：循环加热、冷却所述洗脱后的核酸，以进行PCR反应，并采集洗所述脱后的核酸在PCR反应下的荧光扩增曲线。

在核酸扩增的过程当中，根据PCR热循环所需的温度，循环的对检测腔进行快速升降温，以实现PCR反应，在每个热循环到达引物延伸所需的温度时，在检测腔斜面上部激发采集荧光信号，观测荧光信号强度随循环数的变化曲线，最终形成实时荧光扩增曲线。该方案能够保证核酸的扩增是在纯净的环境下产生，不受磁珠的干扰，该方案提升核酸检测的准确性。

显然，以上所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例，附图中给出了本申请的较佳实施例，但并不限制本申请的专利范围。本申请可以以许多不同的形式来实现，相反地，提供这些实施例的目的是使对本申请的公开内容的理解更加透彻全面。尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来而言，其依然可以对前述各具体实施方式所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等效替换。凡是利用本申请说明书及附图内容所做的等效结构，直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理在本申请专利保护范围之内。

Claims (10)

1.一种微流控芯片使用方法，其特征在于，该方法包括：

将待测样品加注到样品腔中，与裂解液和磁珠混合液混合；

驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸；

驱动吸附核酸后的磁珠通过裂解液上方的有机相层、经微通道进入洗涤腔的有机相层；

驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质；

驱动洗涤后的磁珠通过洗涤液上方的有机相层经微通道进入检测腔，

驱动所述洗涤后的磁珠落入洗脱液，并且在洗脱液中运动以洗脱、扩增核酸并且检测。

2.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述步骤驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸，具体包括：

振荡芯片裂解液使得磁珠和待测样品充分接触；

加载外部磁场，以驱动所述磁珠汇集并移动进入微通道。

3.根据权利要求2所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述步骤驱动磁珠在裂解液中运动以吸附核酸的步骤还包括：

加载所述外部磁场，吸附所述磁珠上升进入有机相层，

撤除所述外部磁场，以驱动所述磁珠沉降，吸附核酸样本。

4.根据权利要求3所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述驱动磁珠汇聚，包括：对磁珠进行一次上下运动后，汇聚磁珠进入下一个区域，直至遍历裂解液中的所有区域，最终汇聚所述磁珠进入微通道。

5.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述微通道内充满有机相溶液，所述汇聚的磁珠通过时与母液分离。

6.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：还包括对所述连通样品腔、洗涤腔和检测腔的微通道加热，使所述微通道中的石蜡融化与所述微通道中的有机相液体融合。

7.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述步骤驱动所述吸附核酸的磁珠落入洗涤液，并且在洗涤液层、有机相层中运动以脱除杂质中，脱除杂质的方法具体包括:

加载外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠移动至洗涤液的上部；

撤除所述外部磁场，以驱动所述吸附核酸的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质；循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到完成了核酸上的杂质的滤除。

8.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述洗脱核酸的步骤，具体包括：

加载外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠移动至洗脱液的上部；

撤除所述外部磁场，以驱动所述洗涤后的磁珠沉降，滤除核酸上的杂质；

循环加载外部磁场、撤除所述外部磁场，直到核酸和磁珠完全洗脱。

9.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述扩增核酸的步骤，具体包括：

加载外部磁场，吸附磁珠上升进入有机相，并通过微通道移除；

对检测腔加热，使得核酸解链，并且使检测腔中的蜡封融化，蜡封中的扩增试剂与所述洗脱后的核酸均匀混合；

维持检测腔中扩增所需的温度下，直至对洗脱后的核酸完成扩增。

10.根据权利要求1所述的一种微流控芯片使用方法，其特征在于：所述核酸反应的步骤，具体包括：

循环加热、冷却所述洗脱后的核酸，以进行PCR反应，并采集洗所述脱后的核酸在PCR反应下的荧光扩增曲线。

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