CN113337431B - 一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌nsl0501及其生物菌剂和应用 - Google Patents

一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌nsl0501及其生物菌剂和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂和应用。所述罗伊氏乳杆菌NSL0501的分类命名为罗伊氏乳杆菌Limosilactobacillus reuteri，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2021628，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了一种包含了菌含量不低于1×107 CFU/g的所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的生物菌剂。所述罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂均能够有效抑制幽门螺杆菌的生长，并降低幽门螺杆菌对细胞的粘附力，因此具有广泛的应用价值。

Description

一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂 和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂和应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)是一种呈S型或者弧形弯曲的革兰氏阴性细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功。幽门螺杆菌在全球范围内具有很强的感染性。而幽门螺杆菌感染是一个长期且慢性的过程，感染后人体一般难以自发清除而导致终身感染，除非进行根除治疗，或人体胃黏膜发生严重肠化生使得细菌难以定植，幽门螺杆菌才会在人体自动消失。研究表明，幽门螺杆菌长期感染会引起慢性胃炎的发生，并且，随着感染程度的加深和病情的恶化，部分患者会发展成十二指肠溃疡，甚至胃癌。而幽门螺杆菌在胃部的定殖量直接影响胃病的发展进程，一般情况下，患者体内幽门螺杆菌密度越高，其导致胃病的可能性及程度越高。
肠道作为人体微生物最为集中部位，生活着大量微生物，总重量约为1.5公斤，包含大约百万亿个细菌。口腔、胃肠道是微生物群落最主要的栖息地，胃肠道菌群不但维持着人体健康，同时也参与机体众多病理生理过程，与许多疾病的发病机制密切相关。益生菌可以修复胃粘膜的粘膜通透性，形成粘膜屏障，抑制病原菌的粘附。
幽门螺杆菌的治疗根据其有效成分大致分为抗生素、中药成分、各类生物活性物质、各类抑菌物质、微生物制或各类混合制剂。目前幽门螺杆菌的常规治疗以四联疗法(铋剂和质子泵抑制剂联合两种抗生素)为主，虽然能够短时间有效杀菌，但根除率逐渐降低，Hp抗药性持续增加，加之胃肠道正常菌群会受到破坏，外来致病菌会在肠道内定植，使患者饱受腹痛、腹泻、腹胀、便秘、恶心等消化道副反应。因此，通过益生菌来达到抑杀幽门螺杆菌的作用，对预防肠胃疾病意义重大。
发明内容
本发明的目的在于提供一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂和应用。所述罗伊氏乳杆菌NSL0501来源于食品乳扇，其具有明显地抑制幽门螺杆菌的作用。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明提供了一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501，其分类命名为罗伊氏乳杆菌Limosilactobacillus reuteri，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2021628。
进一步的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
进一步的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501的菌落为乳白色至淡黄色，呈圆形，直径1-3mm，表面光滑无光泽，中间凸起，不透明，边缘整齐，无晕环；菌体为革兰氏阳性菌，呈短杆状，表面较光滑，无芽孢。
本发明还提供了含有所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501的生物菌剂，所述生物菌剂中包含菌含量不低于1×107 CFU/g的罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
进一步的，所述生物菌剂中还包括食品载体和/食用辅料。
进一步的，所述食用辅料包含赋形剂和/或添加剂。
进一步的，所述添加剂包含果蔬粉、调味剂和/或防腐剂。
进一步的，所述赋形剂包含填充剂、崩解剂、粘合剂和/或润滑剂。
进一步的，所述食用载体包含晶球、微胶囊、微颗粒。
进一步的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的制备方法，包括以下具体的步骤：
（1）将罗伊氏乳杆菌NSL0501活化后，以2%-5%(v/v)的接种量接种于发酵培养基中，37℃下，培养7-10 h，得到发酵液；
（2）所述发酵液经低温离心后，利用厌氧培养液清洗3-5次，离心后得到菌泥；
（3）将所述菌泥中以1:1.7的质量体积比加入冻干保护剂，混匀充分乳化后，得到乳化液；
（4）将所述乳化液经真空冷冻干燥，经80-100目过筛，得到罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
优选的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的制备方法，包括以下具体的步骤：
（1）将罗伊氏乳杆菌NSL0501活化后，以3%(v/v)的接种量接种于发酵培养基中，37℃下，30~50rpm培养9 h，得到发酵液；
（2）所述发酵液经4℃，12000rpm离心至上清液的OD值＜0.3后，利用4℃的厌氧培养液清洗3-5次，12000rpm、4℃离心至上清液的OD值＜0.3，得到菌泥；
（3）将所述菌泥中以1:1.7的质量体积比加入冻干保护剂，利用搅拌器混匀充分乳化后，得到乳化液；
（4）将所述乳化液经真空冷冻干燥，经80目筛网进行摇摆式粉碎，得到罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
进一步的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的活菌数≥5×1011CFU/g。
进一步的，以质量比算，所述发酵培养基包括麦芽糖浆2.5%，胰蛋白胨0.9%，牛肉浸粉0.6%，酵母浸粉1.4%，磷酸氢二钾0.2%，柠檬酸氢二铵0.2%，无水乙酸钠0.4%，硫酸镁0.025%，硫酸锰0.005%，吐温80 0.1%，10%麦芽浸出液 1%。
进一步的，以质量比算，所述冻干保护剂包含3%海藻糖，1%脱脂乳粉，0.7%菊粉、0.05%低聚异麦芽糖，0.02%甘氨酸，0.1%吐温80。
本发明还提供了所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者所述的生物菌剂在用于制备幽门螺杆菌抑制剂中的应用。
本发明还提供了所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者所述的生物菌剂在用于制备细菌抗粘附剂中的应用。
进一步的，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501能够降低幽门螺杆菌对细胞的粘附性。
本发明还提供了所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者所述的生物菌剂在用于制备防治胃炎或胃癌的保健品或药物中的应用。
进一步的，所述保健品或药物的剂型粉剂、颗粒剂、晶球、片剂或液体剂。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和技术效果：
1、本发明从传统食品乳扇中分离到了一株具有更好抑制幽门螺杆菌效果的罗伊氏乳杆菌NSL0501，该菌对幽门螺杆菌的抑菌圈大小可达14.78mm。本发明利用罗伊氏乳杆菌NSL0501经发酵、干燥、过筛等步骤制备得到了罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉，并利用该原菌粉与其他载体混合成生物菌剂。
2、本发明还经过实验证实，含有罗伊氏乳杆菌NSL0501的生物菌剂能够有效降低降低幽门螺杆菌对AGS细胞的粘附力，进而减轻由幽门螺杆菌引起的胃癌细胞的扩散和增殖，以及降低幽门螺杆菌感染患者体内幽门螺杆菌定殖量，不仅能够降低幽门螺杆菌感染患者体内幽门螺杆菌的感染程度，还能够起到防治由幽门螺杆菌感染引起的胃癌或胃炎的作用，同时罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂也能够作为一种新的细菌抗粘附剂，对预防肠胃部疾病意义重大。
3、本发明所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂不会使得幽门螺杆菌产生耐药性，同时在服用过程中不会致使患者产生不良反应，使用安全可靠，效果好，具有广泛的应用价值。
附图说明
图1是罗伊氏乳杆菌NSL0501的平板培养照片。
图2是罗伊氏乳杆菌NSL0501的菌体镜检照片。
图3为罗伊氏乳杆菌NSL0501乳化液真空冷冻干燥的工艺条件。
具体实施方式
结合以下具体实例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。
实施例1：罗伊氏乳杆菌NSL0501的分离、筛选与鉴定
1、菌株的分离与筛选
菌株分离自四川省甘孜藏族自治州甘孜县牧民传统发酵乳扇样品。将样品转入灭菌处理的研钵中研磨，加入无菌水稀释成10 ml的样品液，然后再次用无菌水按照10-3-10-4的比例稀释后，分别取200 μl涂于改良MRS固定培养基上，37 ℃条件下静置培养16h。挑取平板上的单菌落，并将该单菌落接种于改良MRS液体培养基中，36℃下静置培养16 h，采用划线法将培养的菌液重复划线于改良MRS固体平板上，进行纯化，重复纯化3次。纯化三代后，得到的单菌落编号为NSL0501。
如图1所示，所述菌株NSL0501在改良MRS固定平板上的菌落为乳白色至淡黄色，呈圆形，直径1-3 mm，表面光滑无光泽，中间凸起，不透明，边缘整齐，无晕环；如图2所示，所述菌株NSL0501的菌体为革兰氏阳性菌，呈短杆状，表面较光滑，无芽孢。
挑取上述的单菌落接种于改良MRS液体培养基中，36℃下静置培养16 h，然后将菌液于4 ℃，12,000 rpm条件下离心，取菌泥与30%甘油1:1混合后保存于-70℃冰箱，进行后续的实验。
2、菌株的16S rRNA鉴定
提取菌株NSL0501的DNA作为模板，利用细菌16S rRNA通用引物27F (5’-GAG AGTTTG ATC CTG GCT CAG-3’)和1492R (5’-ACG GAT ACC TTG TTA CGA CTT-3’)进行扩增，扩增片段送至生物公司进行序列测定，测序结果如SEQ ID No.1所示。BLAST比对结果表明，菌株NSL0501与Limosilactobacillus reuteri的序列相似性为99.60%，因此判断菌株NSL0501为罗伊氏乳杆菌。
将筛选到的菌株NSL0501进行菌种保藏，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501的保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC）；地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山；保藏日期：2021年5月31日；罗伊氏乳杆菌Limosilactobacillus reuteri的保藏编号为CCTCC M2021628。
实施例2：罗伊氏乳杆菌NSL0501的生理生化性质
1、罗伊氏乳杆菌NSL0501的产酸特性和生长曲线
将保存的罗伊氏乳杆菌NSL0501划线于改良MRS固体培养基上，37℃条件下培养16h，挑取得到的单菌落接种于改良MRS液体培养基中，37℃条件下培养16h，得到NSL0501菌液，其中每1.0 h取样一次，测定菌液的pH值以及在OD600 nm下测定吸光值，并绘制生长曲线图。结果如表1所示，罗伊氏乳杆菌NSL0501在培养的前3h为生长迟缓期，随后进入对数生长期，待培养至5-8 h时进入对数生长末期，9-12h为生长稳定期，接着进入衰亡期，从而完成整个生长周期。且随着NSL0501的生长，菌液的pH逐渐下降，在生长6小时后，pH趋向于稳定，说明NSL0501具有产酸特性。
表1：罗伊氏乳杆菌NSL0501的产酸特性和生长曲线OD值
培养时间 pH OD
0h 5.77 0.315
1h 5.65 0.359
2h 5.13 0.907
3h 4.70 2.74
4h 4.48 5.728
5h 4.17 7.456
6h 4.00 7.26
7h 3.98 7.15
8h 3.95 7.41
9h 3.94 7.05
10h 3.95 7.18
11h 3.97 7.00
12h 3.94 7.41
2、罗伊氏乳杆菌NSL0501的乳酸杆菌属特性检测
菌株纯化后进行氧化酶实验、接触酶实验、吲哚实验、明胶液化、硝酸盐还原实验、硫化氢实验。结果见表2，上述实验结果均呈阴性，证明该菌不产硝酸盐还原酶，不能将硝酸盐还原为有害的亚硝酸盐；不能产生氧化酶和接触酶、硫化氢和吲哚，符合乳酸杆菌属的特性。
表2：实验结果
项目 氧化酶 接触酶 硝酸盐还原 明胶液化 硫化氢产生 吲哚实验
NSL0501 - - - - - -
3、传代稳定性
将罗伊氏乳杆菌NSL0501发酵液按照3%的比例接种于改良MRS液体培养基中，连续传代十次，记录每一代的pH、OD600，并采用倾注法活菌计数。根据结果判定菌种传代过程是否稳定。
结果见表3，活菌数从第4代明显下降，但在第6代呈现小范围的增强后，从第7代又再次下降后呈逐渐降低趋势，说明罗伊氏乳杆菌NSL0501有一定的传代稳定性，在前4代具有很好的传代效果，但随着传代代数的增加，传代效果开始减弱，因此罗伊氏乳杆菌NSL0501在培养时，纯化传代代数为3次最佳。
表3：传代稳定性结果
代数 pH OD600 活菌数/亿
2 3.91 5.27 19.1
3 3.91 5.31 20.7
4 3.95 5.27 13.8
5 3.93 4.75 13
6 3.96 5.63 16.8
7 3.99 5.14 13.3
8 3.98 5.03 12.8
9 3.94 5.55 11
10 3.95 5.24 10.5
4、耐酸实验
吸取100 μl活化后的菌液，在50ml pH=2、3、4的MRS液体培养基中依次接种，并记录1h, 2h, 3h, 24h的活菌数。结果见表4，随着培养时间的增加，pH2和3的活菌数不断的增加，说明罗伊氏乳杆菌NSL0501能够耐受强酸。
表4：耐酸实验结果
pH 2 pH 3 pH 4
1h 2.56×10<sup>6</sup> 3.93×10<sup>6</sup> 4.13×10<sup>6</sup>
4h 2.68×10<sup>6</sup> 4.13×10<sup>6</sup> 8.53×10<sup>6</sup>
8h 1.42×10<sup>6</sup> 4.55×10<sup>7</sup> 3.56×10<sup>7</sup>
12h 8.95×10<sup>5</sup> 6.13×10<sup>7</sup> 1.25×10<sup>8</sup>
24h 7.21×10<sup>4</sup> 8.34×10<sup>7</sup> 1.5×10<sup>8</sup>
实施例3：罗伊氏乳杆菌NSL0501的抑菌特性
将保存的罗伊氏乳杆菌NSL0501划线于改良MRS固体培养基上，37℃条件下培养16h，挑取得到的单菌落接种于改良MRS液体培养基中，37℃条件下培养16h进行活化，连续活化三代得到种子液；将种子液按照3%(v/v)的接种量接种于L1液体培养基（配方为麦芽糖浆25g，胰蛋白胨9g，牛肉浸粉6g，酵母浸粉14g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，无水乙酸钠4g，硫酸镁0.25g，硫酸锰0.05g，吐温80 1g，10%麦芽浸出液 10g，纯水1000 mL）中，37℃条件下培养9h得到发酵液；将发酵液经12000rpm，4℃离心20min，过0.22μm无菌滤膜，得到上清液。以未接种任何菌株的改良MRS液体培养基为空白对照，利用牛津杯法分别测定发酵液和上清液对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）生长的抑制效果，测定结果见表5。结果显示，NSL0501发酵液和上清液与空白组相比，pH明显下降，且对幽门螺杆菌具有显著的抑制作用，并且经过过滤的上清液对幽门螺杆菌的抑制作用更强。
表5：罗伊氏乳杆菌NSL0501
组别 pH OD 抑菌圈大小（mm）
空白对照 5.87 0.35 0
发酵液 3.92 7.55 13.89±1.12
上清液 3.93 0.26 14.78±0.89
实施例4：罗伊氏乳杆菌NSL0501的原菌粉制备
1、将罗伊氏乳杆菌NSL0501划线于改良MRS固体培养基上，37℃培养16h；
2、挑取得到的单菌落接种于改良MRS液体培养基中，37℃培养16h进行活化，连续活化三代，得到种子液；
3、将种子液按3%(v/v)的接种量接种于L1液体培养基中，37℃条件下，30~50rpm的转速培养9h，得到发酵液；将发酵液经12000rpm，4℃离心，离心至上清液的OD值＜0.3；
4、离心后得到的菌泥重悬于灭菌后且温度为4℃的厌氧培养液中，将菌泥悬浮液经12000rpm、4℃离心，离心至上清液的OD值＜0.3，重复该清洗过程3-5次，得到清洗后的菌泥；
5、将清洗后的菌泥加入灭菌后的冻干保护剂（配方为30g海藻糖，10g脱脂乳粉，7g菊粉、0.5g低聚异麦芽糖，0.2g甘氨酸，1g吐温80，1000mL纯水）中，其中保护剂与菌泥的体积质量比为1.7:1；混合后用搅拌器搅拌10min使其充分混合充分乳化后，得到乳化液；
6、将乳化液经过真空冷冻干燥，真空冷冻干燥的条件见图3，得到冻干菌粉，再经80目筛网进行摇摆式粉碎，最终得到罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的活菌数≥5×1011CFU/g。
实施例5：含罗伊氏乳杆菌NSL0501的活菌制剂对幽门螺杆菌诱导的AGS细胞粘附力的影响
将幽门螺杆菌菌体重悬至浓度为1×107 CFU/mL，得到幽门螺杆菌重悬液。将乳双歧杆菌BB-12、嗜酸乳杆菌NCFM和罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉分别用F12培养基重悬至浓度为1×107 CFU/mL，得到三种菌株重悬液。
将购买的AGS细胞用含5%(v/v)胎牛血清的F12培养基重悬后，添加至96孔板中(2×104个/孔)，于37℃，含5% CO2的培养箱中培养12～16h，待AGS细胞处于贴壁状态后，用PBS洗涤AGS细胞3次去除死细胞。将AGS细胞平均分为5组：空白组为未接种乳双歧杆菌BB-12、嗜酸乳杆菌NCFM和罗伊氏乳杆菌NSL0501且未感染幽门螺杆菌的AGS细胞；模型组为只感染幽门螺杆菌的AGS细胞；乳双歧杆菌组为接种乳双歧杆菌BB-12且感染幽门螺杆菌的AGS细胞；嗜酸乳杆菌组为接种嗜酸乳杆菌NCFM且感染幽门螺杆菌的AGS细胞；罗伊氏乳杆菌组为接种罗伊氏乳杆菌NSL0501且感染幽门螺杆菌的AGS细胞。
先将幽门螺杆菌重悬液添加至洗涤后的AGS细胞中，于37℃、含5% CO2的培养箱中培养2h后，用PBS液洗涤3次，除去未吸附的幽门螺杆菌，得到幽门螺杆菌感染的AGS细胞。在其中一部分的幽门螺杆菌感染的AGS细胞中分别加入0.2 mL上述三种菌株重悬液，于37℃培养2h，得到分别经乳双歧杆菌BB-12、嗜酸乳杆菌NCFM和罗伊氏乳杆菌NSL0501处理的幽门螺杆菌感染AGS细胞。将上述细胞用PBS液洗涤5次后，分别加入200 μL尿素酶试剂(9g/LNaCl、14μg/mL苯酚红、20mM尿素，pH 6.8)，于37℃培养2h，得到的培养液利用酶标仪测定其在波长550nm处的吸光度。最后，计算各组的相对粘附率。以模型组吸光度减去空白组吸光度测得的粘附率为100%。相对粘附率的计算公式为：相对粘附率=（OD菌株组-OD空白组）/（OD模型组-OD空白组）×100%
相对粘附率的测定结果见表6，三个菌株组的粘附率均明显小于模型组的粘附率，且以罗伊氏乳杆菌组的粘附率最低，说明罗伊氏乳杆菌NSL0501能够有效地抑制幽门螺杆菌粘附在胃癌细胞，进而减轻由幽门螺杆菌引起的胃癌细胞的扩散和增殖，可能达到防治胃癌的作用。所以，罗伊氏乳杆菌NSL0501具有良好的抗粘附作用，可以作为一种抗粘附剂，并且其具有防治胃癌的潜力。
表6：各菌株的相对粘附率结果
组别 粘附率（%）
模型组 98.75
乳双歧杆菌组 88.23
嗜酸乳杆菌组 84.55
罗伊氏乳杆菌组 74.21
由于罗伊氏乳杆菌NSL0501无毒性，安全可靠，因此其可以与食品载体（晶球、微胶囊、微颗粒）和/或食用辅料，比如赋形剂（填充剂、崩解剂、粘合剂和/或润滑剂）、添加剂（果蔬粉、调味剂和/或防腐剂）等制备成粉剂、颗粒剂、晶球、片剂或液体剂的保健食品或者药物，用来有效抑制人体内的幽门螺杆菌，并起到抗粘附的作用。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 青岛诺森生物技术有限责任公司
<120> 一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501及其生物菌剂和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1506
<212> DNA
<213> 罗伊氏乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)
<400> 1
ggggcctgcg ctataatgca gtcgtacgca ctggcccaac tgattgatgg tgcttgcacc 60
tgattgacga tggatcacca gtgagtggcg gacgggtgag taacacgtag gtaacctgcc 120
ccggagcggg ggataacatt tggaaacaga tgctaatacc gcataacaac aaaagccgca 180
tggcttttgt ttgaaagatg gctttggcta tcactctggg atggacctgc ggtgcattag 240
ctagttggta aggtaacggc ttaccaaggc gatgatgcat agccgagttg agagactgat 300
cggccacaat ggaactgaga cacggtccat actcctacgg gaggcagcag tagggaatct 360
tccacaatgg gcgcaagcct gatggagcaa caccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc 420
gtaaagctct gttgttggag aagaacgtgc gtgagagtaa ctgttcacgc agtgacggta 480
tccaaccaga aagtcacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa 540
gcgttatccg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg gttgcttagg tctgatgtga 600
aagccttcgg cttaaccgaa gaagtgcatc ggaaaccggg cgacttgagt gcagaagagg 660
acagtggaac tccatgtgta gcggtggaat gcgtagatat atggaagaac accagtggcg 720
aaggcggctg tctggtctgc aactgacgct gaggctcgaa agcatgggta gcgaacagga 780
ttagataccc tggtagtcca tgccgtaaac gatgagtgct aggtgttgga gggtttccgc 840
ccttcagtgc cggagctaac gcattaagca ctccgcctgg ggagtacgac cgcaaggttg 900
aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag 960
ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcttgcgcta accttagaga taaggcgttc 1020
ccttcgggga cgcaatgaca ggtggtgcat ggtcgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1080
gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gttactagtt gccagcattg agttgggcac 1140
tctagtgaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg acgacgtcag atcatcatgc 1200
cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggacggt acaacgagtc gcaaactcgc 1260
gagagtaagc taatctctta aagccgttct cagttcggac tgtaggctgc aactcgccta 1320
cacgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg 1380
ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtttgtaac gcccaaagtc ggtggcctaa 1440
cctttatgga gggagccgcc taaggcggga cagatgactg ggggaagtcg aacaagattg 1500
ccccct 1506

Claims (7)

1.一株抑制幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌NSL0501，其特征在于，其分类命名为罗伊氏乳杆菌Limosilactobacillus reuteri，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM 2021628。
2.含有权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501的生物菌剂，其特征在于，所述生物菌剂中包含菌含量不低于1×107 CFU/g的罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
3.根据权利要求2所述的生物菌剂，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉的制备方法，包括以下具体的步骤：
（1）将罗伊氏乳杆菌NSL0501活化后，以2%-5%体积比的接种量接种于发酵培养基中，37℃下，培养7-10h，得到发酵液；
（2）所述发酵液经低温离心后，利用厌氧培养液清洗3-5次，离心后得到菌泥；
（3）将所述菌泥中以1:1.7的质量体积比加入冻干保护剂，混匀充分乳化后，得到乳化液；
（4）将所述乳化液经真空冷冻干燥，经80-100目过筛，得到罗伊氏乳杆菌NSL0501原菌粉。
4.根据权利权利要求3所述的生物菌剂，其特征在于，以质量比算，所述发酵培养基包括麦芽糖浆2.5%，胰蛋白胨0.9%，牛肉浸粉0.6%，酵母浸粉1.4%，磷酸氢二钾0.2%，柠檬酸氢二铵0.2%，无水乙酸钠0.4%，硫酸镁0.025%，硫酸锰0.005%，吐温80 0.1%，10%麦芽浸出液1%。
5.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者权利要求2所述的生物菌剂在制备幽门螺杆菌抑制剂中的应用。
6.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者权利要求2所述的生物菌剂在制备细菌抗粘附剂中的应用，其特征在于，所述细菌为幽门螺杆菌。
7.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌NSL0501或者权利要求2所述的生物菌剂在制备防治胃炎或胃癌的药物中的应用。
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