CN113336871A - 一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法 - Google Patents

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Abstract

一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法，属于一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出技术领域；本发明将交联透明质酸钠凝胶放入AmiconUltra‑15管，AmiconUltra‑15管依次通过恒温振荡器和离心机的工序方法，即实现交联透明质酸钠凝胶在体外溶出得到上清液，实现离心过后AmiconUltra‑15管下层的液体均匀的效果。

Description

一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法
技术领域
本发明属于一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出技术领域，具体是涉及一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法。
背景技术
交联透明质酸钠是一种具有良好生物相容性的多糖类生物材料，并且在医学美容和生物医疗技术领域有着广泛的应用。
现有交联透明质酸钠凝胶在体内只能被透明质酸酶降解，降解后的交联透明质酸钠由一开始的网状结构慢慢断链，完全降解交联透明质酸钠凝胶时间较长。现有交联透明质酸钠凝胶的体外溶出方法通过用0.45μm微孔滤膜过滤，能将大颗粒的交联透明质酸钠凝胶过滤掉，但是这种方法取离心后的上清液，很容易取到下层大颗粒的凝胶，使上清液不均匀，导致后续就没法继续酶解。
发明内容
本发明主要是解决上述现有技术所存在的技术问题，提供一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法。
本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法，所述体外溶出方法包括以下步骤：
步骤A、准备交联透明质酸钠凝胶、Amicon Ultra-15管、恒温振荡器和离心机；
步骤B、称取适量交联透明质酸钠凝胶，打开Amicon Ultra-15管的盖子，将称取后的交联透明质酸钠凝胶放入Amicon Ultra-15管的内层滤管中，在内层滤管中放入共振器，将盖子拧紧后放入恒温振荡器中，设置温度为36.0℃，速度为150r/min，24h后停止振荡；
步骤C、对经步骤B后将Amicon Ultra-15管从温振荡器中取出，随即放入37℃恒温水中；
步骤D、对经步骤C后将Amicon Ultra-15管放入离心机中，离心机设置5000r/min，离心30min；
步骤E、对经步骤D后将Amicon Ultra-15管从离心机中取出，打开Amicon Ultra-15管的盖子，将Amicon Ultra-15管中的内层滤管取出，Amicon Ultra-15管外管内的底部所得到的即得到体外溶出液。
作为优选，所述步骤C中Amicon Ultra-15管在37℃恒温水中静置30min。
作为优选，所述步骤B中共振器的结构包括左V形夹角弹簧、右V形夹角弹簧和共振球组，所述左V形夹角弹簧上侧的两端与右V形夹角弹簧上侧的两端之间对应固定连接有上横向支撑杆，所述左V形夹角弹簧的下端与右V形夹角弹簧的下端之间设有下横向支撑杆，两根上横向支撑杆与下横向支撑杆是用于支撑左V形夹角弹簧与右V形夹角弹簧之间的固定距离，所述左V形夹角弹簧前侧弹簧脚的中部与右V形夹角弹簧后侧弹簧脚的中部之间设有一根细钢丝，所述共振球组包括大号共振球和小号共振球，所述大号共振球的一端呈圆体状，另一端呈尖锥状，所述大号共振球与小号共振球的形状结构相同，所述大号共振球设置于细钢丝的左端部，所述小号共振球设置于细钢丝的右端部，所述大号共振球的尖锥端与小号共振球的尖锥端相对设置。
本发明具有的有益效果：
本发明将交联透明质酸钠凝胶放入Amicon Ultra-15管，Amicon Ultra-15管依次通过恒温振荡器和离心机的工序方法，即实现交联透明质酸钠凝胶在体外溶出得到上清液，实现离心过后Amicon Ultra-15管下层的液体均匀的效果。
附图说明
图1是本发明Amicon Ultra-15管的一种结构示意图；
图2是本发明共振器的一种立体结构示意图；
图3是本发明共振器的一种前视结构示意图。
图中：1、Amicon Ultra-15管外管；2、Amicon Ultra-15管内层滤管；3、AmiconUltra-15管盖子；4、共振器；5、左V形夹角弹簧；6、右V形夹角弹簧；7、上横向支撑杆；8、下横向支撑杆；9、细钢丝；10、大号共振球；11、小号共振球；12、交联透明质酸钠凝胶。
具体实施方式
下面通过实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
实施例：一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法，如图1-图3所示，所述体外溶出方法包括以下步骤：
步骤A、准备交联透明质酸钠凝胶、Amicon Ultra-15管、恒温振荡器和离心机；
步骤B、称取5g交联透明质酸钠凝胶，打开Amicon Ultra-15管的盖子，将5g交联透明质酸钠凝胶放入Amicon Ultra-15管的内层滤管中，在内层滤管中放入共振器，共振器的放入位置为Amicon Ultra-15管内层滤管的底部，将盖子拧紧后放入恒温振荡器中，设置温度为36.0℃，速度为150r/min，24h后停止振荡；
步骤C、对经步骤B后将Amicon Ultra-15管从温振荡器中取出，随即放入37℃恒温水中；
步骤D、对经步骤C后将Amicon Ultra-15管放入离心机中，离心机设置5000r/min，离心30min；
步骤E、对经步骤D后将Amicon Ultra-15管从离心机中取出，打开Amicon Ultra-15管的盖子，将Amicon Ultra-15管中的内层滤管取出，Amicon Ultra-15管外管内的底部所得到的即得到体外溶出液。
所述步骤C中Amicon Ultra-15管在37℃恒温水中静置30min，37℃恒温水使交联透明质酸钠凝胶能够保持最好的活性，静置30min的目的为将交联透明质酸钠凝胶大颗粒物质能够在37℃的环境中相互聚集，对后续离心起到至关重要的一步。
所述步骤B中共振器的结构包括左V形夹角弹簧、右V形夹角弹簧和共振球组，所述左V形夹角弹簧上侧的两端与右V形夹角弹簧上侧的两端之间对应固定连接有上横向支撑杆，所述左V形夹角弹簧的下端与右V形夹角弹簧的下端之间设有下横向支撑杆，两根上横向支撑杆与下横向支撑杆是用于支撑左V形夹角弹簧与右V形夹角弹簧之间的固定距离，所述左V形夹角弹簧前侧弹簧脚的中部与右V形夹角弹簧后侧弹簧脚的中部之间设有一根细钢丝，所述共振球组包括大号共振球和小号共振球，所述大号共振球的一端呈圆体状，另一端呈尖锥状，所述大号共振球与小号共振球的形状结构相同，所述大号共振球设置于细钢丝的左端部，所述小号共振球设置于细钢丝的右端部，所述大号共振球的尖锥端与小号共振球的尖锥端相对设置，大号共振球和小号共振球的设置实现在细钢丝上受到振动时，两者之间的振动频率不一，使交联透明质酸钠凝胶体在Amicon Ultra-15管的内层滤管中得到震荡。
共振器的放入位置为Amicon Ultra-15管内层滤管的底部，Amicon Ultra-15管内层滤管的底部层V型状，共振器的整体结构也呈V型状，左V形夹角弹簧和右V形夹角弹簧的前后两侧置于Amicon Ultra-15管内层滤管底部层的V型口中，使其被限位，当本发明使用的Amicon Ultra-15管放入恒温振荡器和离心机中时，恒温振荡器和离心机开启时共振球组会起到相同振幅的跳动，实现Amicon Ultra-15管的交联透明质酸钠凝胶能够充分的活跃起来，帮组其实现提高过滤效果，当Amicon Ultra-15管置于离心机中时，大颗粒物质会因离心作用堵塞在过滤层上，通过共振球组使交联透明质酸钠凝胶不断的流动，实现大颗粒物质难以堵塞在过滤层上。
本发明的应用通过步骤E后得到体外溶出液，称重离心后液体，用纯化水稀释20倍后，采用改良咔唑显色法(参考文献：Bitter T.,and Muir H.M.(1962)A modified uronicacid carbarbazole reation.Anal.Biochem.4,330-333.)测定葡萄糖醛酸含量，折算为透明质酸钠含量。酶解后透明质酸钠浓度/酶解前透明质酸钠含量*100％＝降解率。
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明不限于上述实施例，还可以有许多变形。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均应认为属于本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法，其特征在于所述体外溶出方法包括以下步骤：
步骤A、准备交联透明质酸钠凝胶、AmiconUltra-15管、恒温振荡器和离心机；
步骤B、称取适量交联透明质酸钠凝胶，打开AmiconUltra-15管的盖子，将称取后的交联透明质酸钠凝胶放入AmiconUltra-15管的内层滤管中，在内层滤管中放入共振器，将盖子拧紧后放入恒温振荡器中，设置温度为36.0℃，速度为150r/min，24h后停止振荡；
步骤C、对经步骤B后将AmiconUltra-15管从温振荡器中取出，随即放入37℃恒温水中；
步骤D、对经步骤C后将AmiconUltra-15管放入离心机中，离心机设置5000r/min，离心30min；
步骤E、对经步骤D后将AmiconUltra-15管从离心机中取出，打开AmiconUltra-15管的盖子，将AmiconUltra-15管中的内层滤管取出，AmiconUltra-15管外管内的底部所得到的即得到体外溶出液。
2.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法门，其特征在于所述步骤C中AmiconUltra-15管在37℃恒温水中静置30min。
3.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸钠凝胶体外溶出方法门，其特征在于所述步骤B中共振器的结构包括左V形夹角弹簧、右V形夹角弹簧和共振球组，所述左V形夹角弹簧上侧的两端与右V形夹角弹簧上侧的两端之间对应固定连接有上横向支撑杆，所述左V形夹角弹簧的下端与右V形夹角弹簧的下端之间设有下横向支撑杆，两根上横向支撑杆与下横向支撑杆是用于支撑左V形夹角弹簧与右V形夹角弹簧之间的固定距离，所述左V形夹角弹簧前侧弹簧脚的中部与右V形夹角弹簧后侧弹簧脚的中部之间设有一根细钢丝，所述共振球组包括大号共振球和小号共振球，所述大号共振球的一端呈圆体状，另一端呈尖锥状，所述大号共振球与小号共振球的形状结构相同，所述大号共振球设置于细钢丝的左端部，所述小号共振球设置于细钢丝的右端部，所述大号共振球的尖锥端与小号共振球的尖锥端相对设置。
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