CN113274399B - 制霉素及其质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及了一种制霉素以及包含制霉素的药物组合物，所述制霉素包括制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B，所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7％‑13％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为43％‑53％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为26％‑30％。本公开还涉及一种制霉素以及包含制霉素的药物组合物的质量检测方法。

Description

制霉素及其质量检测方法
技术领域
本公开涉及一种药物制剂，特别是涉及一种制霉素及其质量检测方法，属于医药领域。
背景技术
制霉素为多烯类抗真菌药，具广谱抗真菌作用，对念珠菌属的抗菌活性高，新型隐球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、荚膜组织浆胞菌、皮炎芽生菌及皮肤癣菌通常对本品亦敏感。制霉素属于中国特有品种，未在国外上市，为一种多组分抗生素。与国外制霉菌素以制霉菌素A1为主要成分不同，国内制霉素主要成分为：制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B，其中，不同厂家甚至同一厂家不同批次所生产的制霉素中制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B组分含量变化较大。据报道，制霉菌素A1含量变化范围2.12～15.56％、制霉菌素A3含量变化范围27.22～53.52％、多真菌素B含量变化范围19.13～39.83％(汪素岩，王健，孟铮.制霉素中制霉菌素A1、A3和多真菌素B含量比例的研究，中国药事[J]，1996(1)：41-42.)。国内至今尚未规定制霉素主要组分的含量比例，也尚未对制霉素用于硝呋太尔制霉素阴道软胶囊中的有效含量进行研究。
硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，适应症为细菌性阴道病、滴虫性阴道炎、念珠菌性外阴阴道炎、阴道混合感染。
由于不同制霉素产品组分含量变化较大，使得药物的质量控制和治疗活性存在较大的不稳定性。因此，需要对硝呋太尔制霉素阴道软胶囊中的制霉素进行质量控制，利用组分含量确定的制霉素得到质量可控、性质稳定的硝呋太尔制霉素阴道软胶囊。
发明内容
为了解决上述技术问题，本公开的目的在于提供一种质量可控、性质稳定且治疗活性显著提高的制霉素以及由该制霉素制备的药物组合物。本公开发明人通过稳定性、效价、药理毒理、安全性评价等研究，获得了组分含量确定的制霉素，使其用在硝呋太尔制霉素阴道软胶囊中药学稳定性最佳、毒副作用最小，对治疗混合感染效果最佳。
具体来讲，本公开提供了以下技术方案：
本公开提供一种制霉素，所述制霉素包括制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B，所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7％-13％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为43％-53％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为26％-30％。
优选地，所述制霉菌素A3和所述多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量之和高于70％，优选高于73％，更优选高于75％。
优选地，所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为12.08％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为43.99％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为29.25％；或者所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7.84％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为51.03％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为27.52％；或者所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7.09％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为52.55％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为26.01％。
本公开还提供一种制霉素的质量检测方法，包括下列步骤：
(1)溶液配制：
供试品溶液：取制霉素，用二甲基亚砜配置成0.3-0.5mg/ml的供试品溶液；优选配置成0.4mg/ml的供试品溶液；
(2)高效液相色谱条件：以乙腈和磷酸二氢铵为流动相；检测波长为205nm；
(3)含量检测：吸取供试品溶液20μl，注入色谱仪，记录色谱图，其中，所述色谱图至少具有保留时间为19.3min、27.6min、32.7min的色谱峰，分别对应于制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B；
(4)质量控制：采用面积归一化法计算制霉菌素A1、制霉菌素A3、多真菌素B含量，所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量分别在7-13％、43-53％和26-30％范围内，优选地，所述制霉菌素A3和所述多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量之和高于70％，优选高于73％，更优选高于75％。
优选地，所述步骤(3)所得色谱图至少还具有保留时间为16.1min、33.0min的色谱峰。
优选地，所述步骤(2)的所述色谱条件为：以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝29：71为流动相A；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝60：40为流动相B；检测波长为205nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；优选地，所述使用流动相A和流动相B进行洗脱的洗脱条件为：
时间(min) 流动相A 流动相B
0 100 0
25 100 0
35 0 100
45 0 100
50 100 0
55 100 0
本公开还提供一种制霉素，其特征在于，所述制霉素经前述质量检测方法检测。
本公开还提供一种包含前述制霉素的药物组合物。
优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料，优选地，所述药物组合物的制剂包括片剂、胶囊剂、栓剂、凝胶剂，优选胶囊剂，更优选软胶囊剂。
优选地，其中，所述药物组合物为硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，所述硝呋太尔制霉素阴道软胶囊包括制霉素和硝呋太尔。
本公开还提供一种对药物组合物的质量检测方法，所述药物组合物包含制霉素，所述质量检测方法包括前述制霉素的质量检测方法。
与现有技术相比，本公开提供了一种组分含量确定、质量可控的制霉素以及由该制霉素制备得到的药物组合物。本公开通过测定、控制制霉素中有效组分制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B的含量，特别是制霉菌素A3和多真菌素B含量之和，提供了一种性质稳定的制霉素，并制备得到了治疗活性显著提高的制剂，对妇科外阴阴道感染的治疗效果肯定，对细菌性阴道病、滴虫性阴道炎及外阴阴道念珠菌病有效率均达到90％以上，且不良反应轻微。
附图说明
图1本公开的质量控制方法对制霉素样品I进行高效液相色谱(HPLC)分析图谱图2本公开的质量控制方法对制霉素样品II进行高效液相色谱(HPLC)分析图谱图3本公开的质量控制方法对制霉素样品III进行高效液相色谱(HPLC)分析图谱
具体实施方式
根据本公开的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本公开上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
I.定义
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
术语“药物”或“药物组合物”被设计用于在动物和人中的用途并可以经所有给药途径施用。优选的给药途径是注射途径、口服途径、肺途径、鼻途径、直肠途径、肠胃外途径。此种药物组合物及其单位剂型可以常规或特别的比例包含常规的或新的成分，具有或不具有另外的活性化合物或成分，并且此种单位剂型可包含与目的日剂量范围相称的待采用的任何适宜有效量的活性成分。
术语“药学上可接受的”、“食品学上可接受的”是指在合理判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
应用于本公开的药物组合物的术语“载体”涉及与活性化合物一起施用的稀释剂、辅料或赋形剂。
本公开所述制霉素，与一种或多种辅料如佐剂、载体或稀释剂一起，可以置入药物组合物、单位剂量(unit dosages)或剂型(dosage forms)的形式中。所述药物组合物可以固体剂型(如粉剂、颗粒剂、丸粒剂、包衣或未包衣的片剂或经填充的胶囊)或液体的剂型(如溶液、混悬液、乳液或填充其的胶囊)或半固体剂型(如凝胶、霜剂和软膏)采用。药物剂型的一种或多种活性成分的溶解和释放特性可以在数秒至数月的范围内变化。
无论通过口服、注射、直肠或肠胃外(包括静脉内的和皮下)或在某些情况下的局部途径，可以将本公开的制霉素或与一种或多种药物-可接受的辅料、载体或稀释剂，特别是和优选地以它们的药物组合物的形式，以有效量施用给需要其的对象，例如活动物(包括人)体，用于治疗、减轻或改善、缓解或消除对其敏感的适应症或病症或者阐述于本申请其它处的适应症或病症。
本文中使用的术语“治疗”意味减轻或缓解对象中的疾病的至少一种症状，在本公开的含义范围内，术语“治疗”还指抑制、延迟发作(即，疾病临床表现的前期)和/或减小发展或恶化疾病的风险。
本公开的药物或药物组合物可以经口地、局部地、肠胃外地或粘膜地(例如，含服地、通过吸入或直肠地)以包含常规的药学可接受的载体的剂量单位配制剂施用。通常希望使用口服途径。所述可以经口地以胶囊、片剂、栓剂等形式(参见Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy，20th Edition)施用。
对于以片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可以与药学可接受的辅料如粘结剂(例如，预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(例如，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇和其它还原性和非还原性糖类、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石粉或硅土、硬脂酸、硬脂基富马酸酯钠、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸钙等)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)、着色剂和调味剂、明胶、甜味剂、天然和合成的胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻朊酸盐)、缓冲盐、羧甲纤维素、聚乙二醇、蜡、等。对于以液体形式的口服给药，所述药物组分可以与药学可接受的惰性载体(例如，乙醇、甘油、水)、防沉降剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性载体(例如，扁桃油、油酯类、乙醇或经分馏的植物油)、保藏剂(例如，p-羟基苯甲酸甲酯或p-羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)等组合。还可以加入稳定剂如抗氧化剂(BHA、BHT、桔酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)以稳定所述剂型。
本公开的药物或药物组合物还可以配制用于阴道给药，包括但不限于阴道胶囊(例如，包含常规栓剂基质如可可油或其它甘油酯)或片剂或栓剂等。
“滴虫性阴道炎”、“细菌性阴道病(简称BV)”、“外阴阴道念珠菌病”为生育年龄妇女最常见的阴道感染性疾病，系由阴道毛滴虫和白色念珠菌感染引起的阴道炎症，BV系由多种病原体(主要为厌氧菌)引起的无阴道粘膜炎症表现的综合征。滴虫性阴道炎、BV及外阴阴道念珠菌病可以导致上生殖道感染及许多并发症如羊膜绒毛膜炎、胎膜早破、早产、产后子宫内膜炎、剖宫产后及子宫全切术后感染等。因此应重视对滴虫性阴道炎、BV及外阴阴道念珠菌病的诊断和治疗。
“硝呋太尔”为5-[(甲硫基)甲基]-3-[[(5-硝基-2-呋喃亚甲基]氨基]-2-恶唑烷酮，属于硝基呋喃衍生物，是一种广谱抗菌素。对导致妇女生殖系统感染的细菌、滴虫和念珠菌有效。本品主要通过干扰其酶系统抑制细菌的生长，很难透过胎盘，无致畸作用。“制霉素”为多烯类抗真菌药，具广谱抗真菌作用，对念珠菌属的抗菌活性高，新型隐球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、荚膜组织浆胞菌、皮炎芽生菌及皮肤癣菌通常对本品亦敏感。
II.具体实施方式
本公开的第一个方面，涉及一种制霉素，所述制霉素包括制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B，所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7％-13％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为43％-53％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为26％-30％。
在一个具体实施例中，所述制霉菌素A3和所述多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量之和高于70％，优选高于73％，更优选高于75％。
在一个具体实施例中，所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为12.08％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为43.99％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为29.25％；
或者所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7.84％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为51.03％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为27.52％；
或者所述制霉菌素A1在所述制霉素中的质量百分含量为7.09％，所述制霉菌素A3在所述制霉素中的质量百分含量为52.55％，所述制霉菌素B在所述制霉素中的质量百分含量为26.01％。
本公开的第二个方面，涉及一种制霉素的质量检测方法，包括下列步骤：
(1)溶液配制：
空白溶剂：取二甲基亚砜适量即得；
供试品溶液：取制霉素，用二甲基亚砜配置成0.3-0.5mg/ml的溶液；优选配置成0.4mg/ml的溶液；
(2)高效液相色谱条件：以乙腈和磷酸二氢铵为流动相；检测波长为205nm；
(3)含量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图，其中，所述色谱图至少具有保留时间为19.3min、27.6min、32.7min的色谱峰，分别对应于制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B；
(4)质量控制：采用面积归一化法计算制霉菌素A1、制霉菌素A3、多真菌素B含量，所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素样品总量的质量百分比应分别在7-13％、43-53％和26-30％范围内，优选地，所述制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素的质量百分比之和应高于70％，优选高于73％，更优选高于75％。
在一个具体实施例中，所述步骤(3)所得色谱图至少还具有保留时间为16.1min、33.0min的色谱峰。
在一个具体实施例中，所述步骤(2)的所述色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，例如Agilent Zorbax EP C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝29：71为流动相A；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝60：40为流动相B；检测波长为205nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；优选地，所述使用流动相A和流动相B进行洗脱的洗脱条件为：
Figure BDA0003070322090000051
Figure BDA0003070322090000061
本公开的第三个方面，涉及一种制霉素，所述制霉素采用以下质量检测方法测定所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B含量：
(1)溶液配制：
空白溶剂：取二甲基亚砜适量即得；
供试品溶液：用二甲基亚砜配置成0.3-0.5mg/ml的溶液；优选配置成0.4mg/ml的溶液；
(2)高效液相色谱条件：以乙腈和磷酸二氢铵为流动相；检测波长为205nm；
(3)含量检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图，其中，所述色谱图至少具有保留时间为19.3、27.6、32.7的色谱峰，分别对应于制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B；
(4)质量控制：采用面积归一化法计算制霉菌素A1、制霉菌素A3、多真菌素B含量，
在一个具体实施例中，所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素样品总量的质量百分比应分别在7-12％、43-53％和26-30％范围内；
在一个具体实施例中，所述制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素的质量百分比之和应高于70％，优选高于73％，更优选高于75％，
在一个具体实施例中，所述步骤(3)所得色谱图至少还具有保留时间为16.1、33.0的色谱峰；
在一个具体实施例中，所述步骤(2)的所述色谱条件为：色谱柱为Agilent ZorbaxEP C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝29：71为流动相A；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝60：40为流动相B；检测波长为205nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。
在一个具体实施例中，其中所述使用流动相A和流动相B进行洗脱的洗脱条件为：
时间(min) 流动相A 流动相B
0 100 0
25 100 0
35 0 100
45 0 100
50 100 0
55 100 0
在一个具体实施例中，所述制霉素各组分相对于制霉素的质量百分比为12.08％的制霉菌素A1、43.99％制霉菌素A3和29.25％的多真菌素B。
在一个具体实施例中，所述制霉素各组分相对于制霉素的质量百分比为7.84％的制霉菌素A1、51.03％制霉菌素A3和27.52％的多真菌素B。
在一个具体实施例中，所述制霉素各组分相对于制霉素的质量百分比为7.90％的制霉菌素A1、52.55％制霉菌素A3和26.01％的多真菌素B。
本公开的第四个方面，涉及一种包含权利要求7或8的制霉素的药物组合物。
在一个具体实施例中，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
在一个具体实施例中，所述药物组合物的制剂包括片剂、胶囊剂、栓剂、凝胶剂等，优选胶囊剂，更优选阴道软胶囊。
在一个具体实施例中，所述药物组合物为硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，所述硝呋太尔制霉素阴道软胶囊包括制霉素和硝呋太尔，其中每丸硝呋太尔制霉素阴道软胶囊中含硝呋太尔300-600mg，制霉素10-40万单位。
III.实施例
实施例1：通过高相液相色谱(HPLC)法测定制霉素活性组分的含量
1.1实验材料：
实验仪器
Figure BDA0003070322090000071
实验试剂
Figure BDA0003070322090000072
1.2色谱条件：
色谱柱：Agilent Zorbax EP C18(250mm×4.6mm，5μm)
流动相A：乙腈-0.01M磷酸二氢铵(29:71)
流动相B：乙腈-0.01M磷酸二氢铵(60:40)
流速：1.0ml/min
波长：205nm
柱温：30℃
进样量：20μl
时间(min) 流动相A 流动相B
0 100 0
25 100 0
35 0 100
45 0 100
50 100 0
55 100 0
1.3溶液配制：
空白溶剂：取二甲基亚砜适量即得。
供试品溶液：取制霉素约20mg，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，临用现配。
1.4含量检测和质量控制：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图，其中，所述色谱图具有保留时间为19.3min、27.6min、32.7min的色谱峰，分别对应于制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B，所述色谱图还具有保留时间为16.1min、33.0min的色谱峰，共测定3批样品，分别为制霉素样品I、制霉素样品II和制霉素样品III(图1-3)。
采用面积归一化法计算制霉菌素A1、制霉菌素A3、多真菌素B含量(表1)，所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素样品总量的质量百分比应分别在7-13％、43-53％和20-30％范围内，所述制霉菌素A3和多真菌素B含量相对于制霉素的质量百分比之和应高于73％。
表1、采用HPLC法测定制霉素样品相关组分含量
Figure BDA0003070322090000081
实施例2：硝呋太尔制霉素阴道软胶囊的制备
制备处方：
内容物
Figure BDA0003070322090000082
囊皮
Figure BDA0003070322090000083
Figure BDA0003070322090000091
制备方法：
(1)将大豆油和硝呋太尔进行湿法研磨，研磨转速10-25m/s，研磨时间1-5h，期间控制研磨浆料温度在45℃以下，最终研磨至硝呋太尔的粒径控制在100nm-100μm，得到研磨液；
(2)将热熔后的凡士林，降温至60-65℃后，添加到研磨液中，研磨转速10-25m/s,研磨过程中控制浆料温度在45℃以下，研磨0.5-1h，得预制品；
(3)在25-45℃温度下，将羟苯乙酯和制霉素依次添加到预制品中，研磨转速10-25m/s,研磨过程中控制浆料温度在45℃以下，研磨1-2h，最终研磨至制霉素的粒径控制在100nm-50μ，得到内容物；
(4)囊皮配制，按上述配比取囊皮原料，按常规方法制得囊皮；
(5)压丸。
实施例3：硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗滴虫性阴道炎、细菌性阴道病、外阴阴道念珠菌病的治疗效果
3.1研究目的：观察硝呋太尔制霉素阴道软胶囊治疗妇女滴虫性阴道炎、细菌性阴道病(简称BV)、外阴阴道念珠菌病的临床疗效和安全性。
3.2受试对象：滴虫性阴道炎、细菌性阴道病、外阴阴道念珠菌病患者
3.3病例数目分配(表2)：
表2、滴虫性阴道炎、细菌性阴道病、外阴阴道念珠菌病患者病例数目分配
Figure BDA0003070322090000092
3.4药物及用药方法：
硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，按本公开实施例2制备得到。
药物用法：晚上睡前由受试者用手指将药栓送入阴道深部，每日1次，连用6天为一疗程。
3.5试验过程
每例受试者在入选试验前都要按照入选标准和排除标准进行筛查。给受试者发放试验药物和日记卡。受试者在入选当天(第1天)晚上开始用药，每日1粒，连续应用6天。安排受试者在停药3-7天来院进行回访。回访时由研究者给受试者进行妇科检查和实验室检查。
3.6合并用药
在试验期间禁止使用下面药物：(1)全身抗感染药、(2)外阴阴道治疗用药，包括阴道或宫颈避孕工具、阴道润滑剂、泡沫、胶冻、膏、喷剂以及所有阴道冲洗液。在试验期间所有的合并用药必须记录。
3.7临床观察指标及评分
由研究者对受试者入选和回访当天的临床观察指标进行评分。采用0-3分的四级评分标准，即0＝正常/无，1＝轻度，2＝中度，3＝重度。
临床观察指标：包括3项症状指标和3项体征指标，分别为：
(1)症状：①外阴阴道瘙痒；
②阴道分泌物增多；
③阴道分泌物均质状/脓性/豆腐渣样；
(2)体征：①阴道潮红；
②阴道分泌物量；
③阴道分泌物性状；
症状评分(外阴阴道瘙痒)定义如下(表3)：
表3、临床观察指标及评分定义
严重程度 评分 描述
正常 0 无
轻度 1 很轻，对日常生活无影响
中度 2 较重，影响日常生活，但不影响睡眠
重 3 难忍，严重影响日常生活和睡眠
3.8疗效评价
(一)判定时间随访时评定一次
(二)疗效判定标准
在回访时，对受试者的临床和实验室检查两个方面进行综合评定，分为四级：1＝痊愈、2＝显效、3＝有效、4＝无效。
3.8.1滴虫性阴道炎
(1)痊愈
①症状和体征完全消失
②镜检滴虫阴性
(2)显效
①症状和体征未完全消失
②镜检滴虫阴性
(3)有效
①症状和体征减轻
②镜检滴虫阴性
(4)无效
①症状和体征无改善
②镜检滴虫阳性
3.8.2细菌性阴道病
(1)痊愈
①症状完全消失，白带外观正常，无鱼腥臭味
②线索细胞少于20％
③加上以下二项指标中至少符合一项：①阴道PH值<4.5；②胺试验阴性；
(2)显效
①症状和体征未完全消失
②线索细胞少于20％
③加上以下二项指标中至少符合一项：①阴道PH值<4.5；②胺试验阴性；
(3)有效
①症状和体征减轻
②线索细胞仍多于20％以上
③以下二项指标中符合一项：①阴道PH值<4.5；②胺试验阴性；
(4)无效
①症状和体征无改善
②线索细胞仍多于20％以上
③以下二项指标中无一项符合：①阴道PH值<4.5；②氨试验阴性
3.8.3外阴阴道念珠菌病
(1)痊愈
①症状和体征完全消失
②镜检菌丝阴性，念珠菌培养阴性
(2)显效
①症状和体征未完全消失，有明显改善
②镜检菌丝阴性，念珠菌培养阴性或症状和体征完全消失，镜检菌丝阴性，念珠菌培养阳
性(带菌)。
(3)有效
①症状和体征减轻
②镜检菌丝阴性，念珠菌培养阳性
(4)无效
①症状和体征无改善
②镜检菌丝阳性，念珠菌培养阳性
临床痊愈、显效、有效三组合计为总有效率。
3.9结果
本试验共入组106例(滴虫性阴道炎34例，细菌性阴道病36例，外阴阴道念珠菌病36例)，其中失访3例(2.8％)，违反试验方案4例(3.8％)，故实际完成99例有效病例。
其中，滴虫性阴道炎共入组34例，其中失访0例，违反试验方案2例(5.88％)，有效病例数为32例，疗效分析对象为符合入选标准且完成试验并提供了疗效资料的32例。
细菌性阴道病，共入组36例，其中失访3例(8.33％)，违反试验方案1例(2.78％)，有效病例数为32例，疗效分析对象为符合入选标准且完成试验并提供了疗效资料的32例。
外阴阴道念珠菌病，共入组36例，其中失访0例，违反试验方案1例(2.78％)，有效病例数为35例，疗效分析对象为符合入选标准且完成试验并提供了疗效资料的35例。
所有受试者均为妇科门诊病人。试验组和对照组在年龄、初潮年龄、孕产次方面无统计学差异(P>0.05)，故两组间具有可比性。
3.9.1治疗效果
疗效评价对象分别为：滴虫性阴道炎，符合入选标准且完成试验的32例受试者；细菌性阴道病，符合入选标准且完成试验的32受试者；外阴阴道念珠菌病，符合入选标准且完成试验的35例受试者。各试验组和对照区治疗后疗效比较结果见表4。
表4、各试验组和对照组治疗后疗效比较
Figure BDA0003070322090000121
滴虫性阴道炎试验组试验组痊愈+显效+有效共29例，总有效率90.6％，细菌性阴道病试验组痊愈+显效+有效共32例，总有效率96.88％，外阴阴道念珠菌试验组痊愈+显效+有效共32例，总有效率91.4％。
从临床表现及实验室检查方面评价治疗效果，对试验组进行了治疗前、后各项观察指标的比较。统计结果显示，各适应症试验组受试者的临床症状、体征及实验检查在用药前、后均有明显改善，各项观察指标P值均小于0.0001，差别有统计学意义。结果见表5-7。
表5、滴虫性阴道炎试验组治疗前、后临床表现及实验室检查
Figure BDA0003070322090000122
Figure BDA0003070322090000131
表6、细菌性阴道病试验组治疗前、后临床表现及实验室检查
Figure BDA0003070322090000132
Figure BDA0003070322090000141
在细菌性阴道病治疗受试者中，试验组用药前阴道PH值5.05±0.48，用药后阴道PH值4.16±0.44，组间比较差异有统计学意义(P<0.0001)。
表7、外阴阴道念珠菌性阴道病试验组治疗前、后临床表现及实验室检查
Figure BDA0003070322090000142
Figure BDA0003070322090000151
3.9.2安全性评价
在103例提供了安全性资料的病例中，没有严重不良事件发生，共观察到医生评价的轻度不良反应2例，其中细菌性阴道病试验组阴道灼热1例、滴虫性阴道炎试验组恶心1例。试验组不良反应的发生率分别为1.94％(2/103)，均为一过性不适，对病人影响不大。
由本公开的制霉素制备的硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，是硝呋太尔与制霉素的复方制剂。从本试验的结果看来，它对妇科外阴阴道感染的治疗效果肯定，对不同的适应症(细菌性阴道病、滴虫性阴道炎及外阴阴道念珠菌病)有效率均达到90％以上。不良反应方面，与所有的阴道用药相似，主要是外阴阴道局部刺激症状，一般比较轻，对受试者影响不大，在停药后可自行恢复。

Claims (5)

1.一种制霉素的质量检测方法，包括下列步骤：
(1)溶液配制：
供试品溶液：取制霉素，用二甲基亚砜配置成0.3-0.5mg/ml的供试品溶液；
(2)高效液相色谱条件：以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝29：71为流动相A；以乙腈：0.01M磷酸二氢铵＝60：40为流动相B；检测波长为205nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；所述使用流动相A和流动相B进行洗脱的洗脱条件为：
时间(min) 流动相A 流动相B 0 100 0 25 100 0 35 0 100 45 0 100 50 100 0 55 100 0
(3)含量检测：吸取供试品溶液20μl，注入色谱仪，记录色谱图，其中，所述色谱图至少具有保留时间为19.3min、27.6min、32.7min的色谱峰，分别对应于制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B；
(4)质量控制：采用面积归一化法计算制霉菌素A1、制霉菌素A3、多真菌素B含量，所述制霉菌素A1、制霉菌素A3和多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量分别在7-13％、43-53％和26-30％范围内，所述制霉菌素A3和所述多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量之和高于73％；
所述制霉素用于制备药物组合物，所述药物组合物为硝呋太尔制霉素阴道软胶囊，所述硝呋太尔制霉素阴道软胶囊包括制霉素和硝呋太尔，所述每丸硝呋太尔制霉素阴道软胶囊中含硝呋太尔300-600mg，制霉素10-40万单位。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，配置成0.4mg/ml的供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述制霉菌素A3和所述多真菌素B在所述制霉素中的质量百分含量之和高于75％。
4.根据权利要求1的质量检测方法，其中，所述步骤(3)所得色谱图至少还具有保留时间为16.1min、33.0min的色谱峰。
5.一种对药物组合物的质量检测方法，所述药物组合物包含制霉素，其特征在于，所述质量检测方法包括权利要求1-4任一项所述的制霉素的质量检测方法。
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