CN113271983A - 治疗性的哺乳动物细胞的口服递送 - Google Patents

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Abstract

本文描述了用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道的口服递送系统。

Description

治疗性的哺乳动物细胞的口服递送
交叉引用
本申请要求于2018年10月30日提交的名称为“治疗性的哺乳动物细胞的口服递送”的美国专利申请号62/752,711的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
发明内容
本公开内容涉及开发针对多种适应症的用于口服递送哺乳动物活细胞的靶向递送系统，所述适应症包括但不限于与衰老相关或关联的疾病、急性和慢性炎症、自身免疫障碍、神经和神经退行性疾病、中风、疼痛和癌症。本公开内容详述了提供减轻以这些疾病等为特征的免疫和炎性障碍的方法，以及描述了用于将治疗性的哺乳动物活细胞定位释放递送至哺乳动物的胃肠道和/或人受试者的肠和结肠的细胞疗法平台。
在一个方面，本文描述了一种口服递送系统；该系统包括：(a)第一胶囊，所述第一胶囊包含第一多个哺乳动物活细胞和第一肠溶衣，其中所述第一肠溶衣在约6.2至约6.5的pH下释放所述第一多个哺乳动物活细胞；和(b)第二胶囊，所述第二胶囊包含第二多个哺乳动物活细胞和第二肠溶衣，其中所述第二肠溶衣在约7至8的pH下释放所述第二多个哺乳动物活细胞；其中所述第二胶囊被所述第一胶囊包围。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和第二多个哺乳动物活细胞是相同类型的细胞。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和第二多个哺乳动物活细胞是不同类型的细胞。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞靶向近侧结肠，且第二多个哺乳动物活细胞靶向回肠。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。在某些实施方案中，多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。在某些实施方案中，第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。在某些实施方案中，第一肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。在某些实施方案中，第二肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。在某些实施方案中，第一胶囊、第二胶囊或第一胶囊和第二胶囊包含凝胶、细胞外基质蛋白或赋形剂。在某些实施方案中，凝胶包括琼脂。在某些实施方案中，凝胶包括水凝胶。在某些实施方案中，细胞外基质蛋白包含胶原。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂在24℃下将第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约80％活力至少14天。在某些实施方案中，口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道。在某些实施方案中，口服递送系统用于治疗个体的疾病的方法中，该方法包括向个体口服施用口服递送系统。在某些实施方案中，口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道的方法中，包括向个体口服施用口服递送系统。在某些实施方案中，所述个体为人。
在一个方面，本文描述了一种口服递送系统；该系统包括：胶囊，所述胶囊包含多个哺乳动物活细胞和肠溶衣，其中所述肠溶衣在约6.0至约8.0的pH下释放多个哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞是相同类型的细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞是不同类型的细胞。在某些实施方案中，肠溶衣在约6.2至约6.5的pH下释放多个哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，肠溶衣在约7.0至约8.0的pH下释放多个哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。在某些实施方案中，多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。在某些实施方案中，肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。在某些实施方案中，第一胶囊、第二胶囊或第一胶囊和第二胶囊包含凝胶、细胞外基质蛋白或赋形剂。在某些实施方案中，凝胶包括琼脂。在某些实施方案中，凝胶包括水凝胶。在某些实施方案中，细胞外基质蛋白包括胶原。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂在24℃下将多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约80％活力至少14天。在某些实施方案中，口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道。在某些实施方案中，口服递送系统用于治疗个体的疾病的方法中，包括向个体口服施用口服递送系统。在某些实施方案中，口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道的方法中，包括向个体口服施用口服递送系统。在某些实施方案中，所述个体为人。
在另一个方面，本文描述了配制用于口服递送至个体的哺乳动物活细胞的组合物，所述组合物包含：(a)肠溶衣，(b)基质，所述基质包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶，以及(c)多个哺乳动物活细胞，其中所述多个哺乳动物活细胞悬浮在所述基质中，并且其中所述肠溶衣包围悬浮在基质中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，甲基纤维素和海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。在某些实施方案中，肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，肠溶衣基本上由甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)组成。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。在某些实施方案中，非人动物细胞选自犬细胞、牛细胞、猫细胞、猪细胞、马细胞或羊细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含至少两种类型的细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。在某些实施方案中，多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。在某些实施方案中，多能细胞包括间充质干细胞。在某些实施方案中，间充质干细胞是1型间充质干细胞。在某些实施方案中，间充质干细胞是2型间充质干细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。在某些实施方案中，所述组合物在24℃下将第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约80％活力至少14天。在某些实施方案中，基质还包含细胞外基质蛋白。在某些实施方案中，细胞外基质蛋白包含胶原。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于治疗人的炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，胃肠道炎性或自身免疫障碍包括炎性肠病或克罗恩氏病。在某些实施方案中，胃肠道炎性或自身免疫障碍包括克罗恩氏病。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于治疗动物的炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于动物，所述动物为狗、牛、猫、猪、马或绵羊中的任何一种或多种。本文还描述了一种治疗个体的炎性或自身免疫障碍的方法，其包括将一定剂量的细胞组合物施用至个体的消化道。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于个体，所述个体为人个体。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于个体，所述个体为狗、牛、猫、猪、马或绵羊。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于炎性或自身免疫障碍，所述炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于胃肠道炎性或自身免疫障碍，所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括炎性肠病或克罗恩氏病。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的组合物用于胃肠道炎性或自身免疫障碍，所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括克罗恩氏病。本文还描述了一种制备配制用于口服递送的哺乳动物活细胞的组合物的方法，其包括将多个哺乳动物活细胞与包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶的基质混合以提供细胞-基质，并将肠溶衣施用于细胞-基质。在某些实施方案中，基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，甲基纤维素和海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。在某些实施方案中，肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。
附图说明
图1图示了口服细胞递送胶囊的代表性方案。在上方的单胶囊单相递送方案中，适当地采购和制造治疗性的哺乳动物活细胞(包括但不限于干细胞)，装入基质或混合在基质中，包装到胶囊中，并且用肠溶衣最终包装。在另一个实施方案中，如前所述适当地采购和制造治疗性的哺乳动物活细胞(包括但不限于干细胞)，装入基质或混合在基质中，然后包装到一个胶囊中。随后，将第二剂量的活细胞混合在基质中并包装到胶囊中，然后将其装入第一胶囊中，如下方的胶囊包胶囊双相递送方案所示。
图2图示了口服递送装载有细胞的胶囊及其向回肠和结肠的建议部署的代表性非限制性方案。单胶囊单相递送方案中治疗性的哺乳动物活细胞(左)或胶囊包胶囊双相递送方案(右)中，治疗性的哺乳动物活细胞经口服摄取并前进通过口腔、食道，在十二指肠中脱除保护性肠溶衣，在靶向的回肠pH 7.3-8和其后的结肠pH 5.5-6.5下进行细胞部署，如图所示。
图3图示了用于口服细胞递送胶囊的可能设计的代表性方案。在左侧的单胶囊单相递送方案中，适当地采购和制造治疗性的哺乳动物活细胞(包括但不限于干细胞)，装入基质或混合在基质中，包装到胶囊中，并且用肠溶衣最终包装。可替代地，如前所述适当地采购和制造治疗性的哺乳动物活细胞(包括但不限于干细胞)，装入基质或混合在基质中，并包装到一个胶囊中。随后，将第二剂量的活细胞混合在基质中并包装到胶囊中，然后将其装入第一胶囊中，如右侧的胶囊包胶囊双相递送方案所示。
图4图示了间充质干细胞聚集体在基质中保持活力。如图所示，在整个实验中，包埋在基质中的MSC保持约95％的活力(条形)。在整个培养期间，在这些条件下，细胞密度大约增加了一倍(折线)。
图5示出了活细胞仅在暴露于小肠的pH后才从胶囊中释放。
图6示出了如图5中释放的间充质干细胞在pH调节释放后保持活力。
图7示出了在pH调节释放后，间充质干细胞保持免疫调节活性。根据先前的研究，基因活化大于2倍表示免疫调节活性通过，而小于2表示失败。
图8示出了口服递送的肠溶胶囊中的人间充质干细胞的生物分布可用于评估肠溶胶囊的细胞释放。左侧的条形图描绘了代表性的细胞数(x103)。右侧的条形图描绘了长达2小时下的代表性的曲线下面积(AUC)。
图9图示了在克罗恩氏样回肠炎小鼠模型中用口服MSC疗法治疗的小鼠的组织学评分。
图10示出了口服给药后，小鼠中通过未包衣和包衣的胶囊递送的活细胞的药代动力学参数的总结(n＝3/ea)。细胞的最大释放曲线表示为细胞的最大回收率所经过的小时数。通过台盼蓝排斥测定法评估细胞活力。通过在抗炎标记物CXCL9在回收细胞中的cDNA表达来评估细胞效力。
具体实施方式
本文描述了一种口服递送系统；该系统包括：(a)第一胶囊，所述第一胶囊包含第一多个哺乳动物活细胞和第一肠溶衣，其中所述第一肠溶衣在约6.2至约6.5的pH下释放所述第一多个哺乳动物活细胞；和(b)第二胶囊，所述第二胶囊包含第二多个哺乳动物活细胞和第二肠溶衣，其中所述第二肠溶衣在约7至8的pH下释放第二多个哺乳动物活细胞；其中所述第二胶囊被所述第一胶囊包围。
本文描述的另一个方面是一种口服递送系统；该系统包括：胶囊，所述胶囊包含多个哺乳动物活细胞和肠溶衣，其中所述肠溶衣在约6.0至约8.0的pH下释放多个哺乳动物活细胞。
本文描述的另一个方面是配制用于口服递送至个体的哺乳动物活细胞的组合物，所述组合物包含：(a)肠溶衣，(b)基质，所述基质包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶，和(c)多个哺乳动物活细胞，其中所述多个哺乳动物活细胞悬浮在基质中，并且其中所述肠溶衣包围悬浮在基质中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，甲基纤维素和海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。在某些实施方案中，肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，肠溶衣基本上由甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)组成。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。
本文描述的另一个方面是配制用于口服递送至个体的哺乳动物活细胞的组合物，所述组合物包含：(a)肠溶衣，(b)基质，所述基质包含约1.5％至约1.5％的甲基纤维素和约1.5％至约1.5％的海藻酸盐凝胶，和(c)多个哺乳动物活细胞，其中所述多个哺乳动物活细胞悬浮在基质中，并且其中所述肠溶衣包围悬浮在基质中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞是间充质干细胞。
本文描述的另一个方面是配制用于口服递送至个体的哺乳动物活细胞的组合物，所述组合物包含：(a)肠溶衣，(b)基质，所述基质包含约1.4％至约1.6％的甲基纤维素和约1.4％至约1.6％的海藻酸盐凝胶，和(c)多个哺乳动物活细胞，其中所述多个哺乳动物活细胞悬浮在基质中，并且其中所述肠溶衣包围悬浮在基质中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞是间充质干细胞。
某些定义
在下文的描述中，阐述了某些特定细节以便提供对各种实施方案的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可以在没有这些细节的情况下实践所提供的实施方案。除非上下文另有要求，否则在以下整个说明书和权利要求书中，词语“包括/包含(comprise)”及其变体(例如“包括/包含(comprises)”和“包括/包含(comprising)”)应以开放的、包容的意义解释，即“包括但不限于”。如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数形式，除非上下文中另有明确规定。还应留意，术语“或”通常以包括“和/或”的意义使用，除非上下文中另有明确规定。此外，本文提供的标题仅是为了方便起见，并不解释所要求保护的实施方案的范围或含义。
当用于限定组合物和方法时，“基本上由......组成”应意指排除对于所述目的而言对组合具有任何重要意义的其他要素。因此，基本上由本文定义的元素组成的组合物将不排除不会实质上影响所要求保护的发明的基本特征和新颖特征的其他物质或步骤。用于治疗或预防给定疾病的组合物可以基本上由所描述的活性成分组成，排除其他活性成分，但是包括其他非实质性组分，例如赋形剂、载体或稀释剂。“由......组成”应意指排除痕量的其他成分要素和实质性方法步骤要素。由这些过渡术语中的每一个限定的实施方案都在本公开内容的范围内。
如本文所用，术语“约”是指在所述量的10％附近。
如本文所用，术语“个体”、“患者”或“受试者”是指诊断患有、疑似患有至少一种疾病或有患上至少一种疾病的风险的个体，所述至少一种疾病是所述组合物和方法对其治疗有用的疾病。在某些实施方案中，个体是哺乳动物。在某些实施方案中，哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、狗、猫、马、奶牛、绵羊、猪、山羊、美洲驼、羊驼或牦牛。在某些实施方案中，所述个体为人。
如本文所用，术语“治疗”是指对个体的生理或疾病状态的干预，其设计成或旨在改善与所述生理或疾病状态相关的至少一种体征或症状。本领域技术人员将认识到，在患有疾病的个体的异质群体中，并非所有个体都会对给定的治疗产生同等的反应或根本没有反应。
术语“多能干细胞”意指能够产生多种不同类型细胞的细胞。术语“间充质干细胞”意指最初源自间充质的干细胞。该术语是指能够分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞或肌细胞中的至少两种或更多种的细胞。从任何类型的成体组织中分离间充质干细胞(MSC)。通常，间充质干细胞从骨髓、脂肪组织、脐带或外周血中分离。在一个优选的方面，MSC从骨髓或获自脂肪组织的脂肪组织提取物获得。术语“多能”或“多潜能”还涵盖诱导多能干细胞或诱导多潜能干细胞，或已经使用任何化学或遗传手段诱导到多潜能阶段的细胞。在某些实施方案中，本公开内容的多能或多潜能干细胞是间充质干细胞。
术语“自身免疫障碍”是指受试者的病况，其特征在于由受试者的免疫反应对其自身的细胞、组织和/或器官引起细胞、组织和/或器官损伤。
术语“炎性疾病”是指以免疫细胞活化增加、细胞因子、炎症趋化因子或导致免疫细胞活化或募集的其他因子分泌增加为特征的病况。
口服递送系统
如图1所示的递送系统的一个方面是单相递送系统。单相递送系统包含多个细胞和pH敏感的肠溶衣。如图1所示的递送系统的另一个方面为双相递送系统。双相递送系统包括被包裹在肠溶衣中的第一多个细胞和在肠溶衣中的第二多个细胞。所述第一多个细胞围绕所述第二多个细胞，使得所述第一多个细胞在第一pH下释放，而使所述第二多个细胞在第二pH下释放。因此，双相递送系统可以将两种不同的多个细胞递送至个体消化道中的两个不同位置，如图2所示。在某些实施方案中，第一多个细胞和第二多个细胞包含相同类型的细胞。在某些实施方案中，第一多个细胞和第二多个细胞包含不同类型的细胞。在某些实施方案中，细胞包埋在基质中，然后被肠溶衣包围。基质用于在预期的递送部位释放之前保护细胞免于渗透应力、pH胁迫和机械破坏，所述递送部位可包括回肠、空肠、十二指肠或结肠中的任何一个或多个。诸如此类的系统可用于通过口服途径将治疗性的细胞递送至个体。图3提供了用于制备和分配本文所述的口服活细胞组合物的方法的概述。
用途
本文描述了用于将活细胞口服递送至受试者的消化道、淋巴结或循环的系统。该系统可用于通过口服途径将细胞穿过肠屏障递送到血液或淋巴系统中。本文所述的系统可用于将治疗剂量的哺乳动物细胞递送至受试者。在某些实施方案中，该系统用于将治疗剂量的人细胞递送至人受试者。在某些实施方案中，该系统用于将治疗剂量的人细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的人受试者。
在某些实施方案中，所述系统和哺乳动物活细胞的组合物将治疗剂量的细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的个体的结肠(例如大肠)。在某些实施方案中，所述系统将治疗剂量的细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的个体的小肠。在某些实施方案中，所述系统将治疗剂量的细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的个体的回肠。在某些实施方案中，所述系统将治疗剂量的细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的个体的十二指肠。在某些实施方案中，所述系统将治疗剂量的细胞递送至诊断患有、疑似患有疾病或障碍或有患上疾病或障碍的风险的个体的空肠。在某些实施方案中，所述个体为人个体，并且所述细胞为人细胞。
本文所用的口服系统可用于兽医用途将治疗剂量的哺乳动物活细胞递送至家养动物。在某些实施方案中，该系统将治疗剂量的犬细胞递送至狗。在某些实施方案中，该系统将治疗剂量的犬细胞递送至患有炎性肠病的狗。在某些实施方案中，该系统将治疗剂量的猫细胞递送至猫。在某些实施方案中，该系统将治疗剂量的牛细胞递送至牛物种。本文所述的口服系统还可与食物或营养饲料混合以口服施用给动物。在某些实施方案中，含有犬细胞的系统可与食物混合以递送至狗。在某些实施方案中，含有猫细胞的系统可与食物混合以递送至猫。在某些实施方案中，含有牛细胞的系统可与食物或营养饲料混合以递送至牛物种。
在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的递送系统和组合物用于治疗人的炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，胃肠道炎性或自身免疫障碍包括炎性肠病或克罗恩氏病。在某些实施方案中，胃肠道炎性或自身免疫障碍包括克罗恩氏病。
在某些实施方案中，哺乳动物活细胞的递送系统和组合物用于治疗动物的炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。在某些实施方案中，动物是狗、牛、猫、猪、马或绵羊中的任何一种或多种。
细胞
本文描述的哺乳动物活细胞的递送系统和组合物可用于将活细胞递送至受试者的消化道。在某些实施方案中，细胞包含真核细胞。在某些实施方案中，细胞包含缺少细胞壁的真核细胞。在某些实施方案中，细胞包含哺乳动物细胞。在某些实施方案中，细胞包含人细胞。
在某些实施方案中，细胞包含选自猫、狗、猪、绵羊、马、奶牛、山羊、牦牛及其任何组合的家养动物的细胞。口服递送系统中所包括的细胞是可提供治疗作用并且停止、减轻或改善与受试者相关的至少一种疾病的症状的那些细胞，其中所述受试者已诊断患有或疑似患有所述至少一种疾病。在某些实施方案中，疾病是选自克罗恩氏病或炎性肠病的消化道疾病。在某些实施方案中，细胞不包含原核细胞。
干细胞包括一种可用于包含在本文所述的口服递送系统中的细胞。在某些实施方案中，口服递送系统包含多个干细胞。在某些实施方案中，干细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、成体干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞或其混合物。在某些实施方案中，细胞包括胚胎干细胞。在某些实施方案中，细胞包括间充质干细胞。在某些实施方案中，细胞包含I型(促炎性)间充质干细胞。在某些实施方案中，细胞包含II型(抗炎性)间充质干细胞。在某些实施方案中，细胞包含多潜能或诱导多潜能干细胞。1型或2型间充质干细胞可以分别使用TLR4或TLR3激动剂制备。制备1型或2型间充质干细胞的方法记载在US2014/0017787或WO2016053758A1中，其通过引用整体并入本文。在某些实施方案中，2型MSC比未使用TLR3诱导的MSC2表达更高水平的CXCL9。
免疫细胞是另一种可用于包含在本文所述的口服递送系统中的细胞。在某些实施方案中，口服递送系统包含多个免疫细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括B细胞(例如CD19+细胞)、T细胞(例如CD3+细胞)、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括T细胞。在某些实施方案中，T细胞包括具有表达和分泌IL-10、表达和分泌TGF-β或表达转录因子FoxP3的调节性T细胞表型的T细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括NK细胞。在某些实施方案中，免疫细胞包括巨噬细胞。在某些实施方案中，巨噬细胞包括M1型(促炎性)巨噬细胞。在某些实施方案中，巨噬细胞包括M2型(抑制子)巨噬细胞。
在某些实施方案中，本文所述的哺乳动物活细胞的口服递送系统和组合物包含不同细胞类型的混合物。在某些实施方案中，混合物包含2、3、4、5、6、7、8、9或更多种不同的细胞类型。在某些实施方案中，混合物包含干细胞和免疫细胞。在某些实施方案中，混合物包含不同的干细胞类型。在某些实施方案中，混合物包含不同的免疫细胞类型。在某些实施方案中，混合物包含干细胞和免疫细胞。混合物可为对于治疗性治疗有吸引力的任何比例。在某些实施例中，包括两种不同的细胞类型，并且第一类型与第二类型的比值为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8或1:9。
本文所述的哺乳动物活细胞的口服递送系统和组合物包含治疗量的细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含约1x104至约1x108个细胞、约1x104至约1x107个细胞、约1x105至约1x108个细胞、约1x105至约1x107个细胞或约1x106至约1x108个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含至少约1x104、2x104、3x104、4x104、5x104、6x104、7x1045、8x104或9x104个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含至少约1x105、2x105、3x105、4x105、5x105、6x105、7x105、8x105或9x105个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含至少约1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含至少约1x107、2x107、3x107、4x107、5x107、6x107、7x107、8x107、9x107个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含不大于约2x104、3x104、4x104、5x104、6x104、7x1045、8x104或9x104个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含不大于约1x105、2x105、3x105、4x105、5x105、6x105、7x105、8x105或9x105个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含不大于约1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106个细胞。在某些实施方案中，治疗数量的细胞包含不大于约1x107、2x107、3x107、4x107、5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108个细胞。在某些实施方案中，细胞为至少约75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％活力的活细胞，如通过台盼蓝染色所测定的。
对于包含不同的多个细胞的双相胶囊，每种多个细胞包含约1x104至约1x108个细胞、约1x104至约1x107个细胞、约1x105至约1x108个细胞、约1x105至约1x107个细胞或约1x106至约1x108个细胞。在某些实施方案中，治疗量的细胞包含至少约1x104、2x104、3x104、4x104、5x104、6x104、7x1045、8x104或9x104个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含至少约1x105、2x105、3x105、4x105、5x105、6x105、7x105、8x105或9x105个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含至少约1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含至少约1x107、2x107、3x107、4x107、5x107、6x107、7x107、8x107、9x107个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含不大于约2x104、3x104、4x104、5x104、6x104、7x1045、8x104或9x104个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含不大于约1x105、2x105、3x105、4x105、5x105、6x105、7x105、8x105或9x105个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含不大于约1x106、2x106、3x106、4x106、5x106、6x106、7x106、8x106、9x106个细胞。在某些实施方案中，每种多个细胞包含不大于约1x107、2x107、3x107、4x107、5x107、6x107、7x107、8x107、9x107、1x108个细胞。在某些实施方案中，双相制剂中的细胞是至少约75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％活力的活细胞，如通过台盼蓝染色所测定的。
基质
当前描述的口服递送系统的细胞和哺乳动物活细胞的组合物包含或包埋在基质、凝胶或赋形剂中。所述基质用于保护活细胞免于脱水、渗透应力、pH胁迫、蛋白酶降解和GI系统中存在的其他胁迫。在某些实施方案中，细胞包埋在或悬浮在基质中。在某些实施方案中，基质包含琼脂。在某些实施方案中，基质包含甲基纤维素。在某些实施方案中，基质包含海藻酸盐。在某些实施方案中，基质包含甲基纤维素和海藻酸盐。在某些实施方案中，基质包含大约相等量的甲基纤维素和海藻酸盐。在某些实施方案中，基质包含水凝胶。合适的水凝胶包括衍生自胶原、透明质酸盐、透明质酸、纤维蛋白、海藻酸盐、琼脂糖、壳聚糖及其组合的那些。在其他实施方案中，合适的水凝胶为合成聚合物。在另外的实施方案中，用于包埋活细胞的合适基质包括衍生自以下物质的那些：聚丙烯酸及其衍生物、聚环氧乙烷及其共聚物、聚乙烯醇、聚磷腈及其组合。在各个具体的实施方案中，隔离材料选自：水凝胶、NovoGelTM、琼脂糖、海藻酸盐、明胶、MatrigelTM、透明质酸、泊洛沙姆、肽水凝胶、聚(异丙基正聚丙烯酰胺)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEG-DA)、甲基丙烯酸羟乙酯、聚二甲基硅氧烷、聚丙烯酰胺、聚乳酸或其组合。
在某些实施方案中，基质包含大约相等量的海藻酸盐凝胶和甲基纤维素。
在某些实施方案中，基质包含与给定比值的海藻酸盐凝胶和甲基纤维素混合的活细胞。在某些实施方案中，基质中海藻酸盐凝胶和甲基纤维素的比值为约1:0.1、约1:0.2、约1:0.3约1:0.4、约1:0.5、约1:0.6、约1:0.7、约1:0.8、约1:0.9、约1:1、约1:1.1、约1:1.2、约1:1.3、约1:1.4、约1:1.5、约1:1.6、约1:1.7、约1:1.8、约1:1.9或约1:2。在某些实施方案中，基质中甲基纤维素和海藻酸盐凝胶的比值为约1:0.1、约1:0.2、约1:0.3约1:0.4、约1:0.5、约1:0.6、约1:0.7、约1:0.8、约1:0.9、约1:1、约1:1.1、约1:1.2、约1:1.3、约1:1.4、约1:1.5、约1:1.6、约1:1.7、约1:1.8、约1:1.9或约1:2。
可替代地，在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶和甲基纤维素的该混合物可含有不同浓度的甲基纤维素。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为约0.5％至约3.0％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为至少约0.5％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为至多约3.0％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2.0％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％或约3.0％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为至少约0.5％、至少约0.6％、至少约0.7％、至少约0.8％、至少约0.9％、至少约1.0％、至少约1.1％、至少约1.2％、至少约1.3％或至少约1.4％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为至多约3.0％、至多约2.9％、至多约2.8％、至多约2.7％、至多约2.6％、至多约2.5％、至多约2.4％、至多约2.3％、至多约2.2％、至多约2.1％、至多约2.0％、至多约1.9％、至多约1.8％、至多约1.7％、至多约1.6％或至多约1.5％。在某些实施方案中，海藻酸盐凝胶的浓度为约0.5％至约0.7％、约0.5％至约0.9％、约0.5％至约1.1％、约0.5％至约1.3％、约0.5％至约1.5％、约0.5％至约1.7％、约0.5％至约1.9％、约0.5％至约2.1％、约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2.7％、约0.5％至约2.9％、约0.7％至约0.9％、约0.7％至约1.1％、约0.7％至约1.3％、约0.7％至约1.5％、约0.7％至约1.7％、约0.7％至约1.9％、约0.7％至约2.1％、约0.7％至约2.5％、约0.7％至约2.7％、约0.7％至约2.9％、约0.9％至约1.1％、约0.9％至约1.3％、约0.9％至约1.5％、约0.9％至约1.7％、约0.9％至约1.9％、约0.9％至约2.1％、约0.9％至约2.5％、约0.9％至约2.7％、约0.9％至约2.9％、约1.1％至约1.3％、约1.1％至约1.5％、约1.1％至约1.7％、约1.1％至约1.9％、约1.1％至约2.1％、约1.1％至约2.5％、约1.1％至约2.7％、约1.1％至约2.9％、约1.3％至约1.5％、约1.3％至约1.7％、约1.3％至约1.9％、约1.3％至约2.1％、约1.3％至约2.5％、约1.3％至约2.7％、约1.3％至约2.9％、约1.5％至约1.7％、约1.5％至约1.9％、约1.5％至约2.1％、约1.5％至约2.5％、约1.5％至约2.7％、约1.5％至约2.9％、约1.7％至约1.9％、约1.7％至约2.1％、约1.7％至约2.5％、约1.7％至约2.7％、约1.7％至约2.9％、约1.9％至约2.1％、约1.9％至约2.5％、约1.9％至约2.7％、约1.9％至约2.9％、约2.1％至约2.5％、约2.1％至约2.7％、约2.1％至约2.9％、约2.5％至约2.7％、约2.5％至约2.9％或约2.7％至约2.9％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为约0.5％至约3.0％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为至少约0.5％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为至多约3.0％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2.0％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％或约3.0％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为至少约0.5％、至少约0.6％、至少约0.7％、至少约0.8％、至少约0.9％、至少约1.0％、至少约1.1％、至少约1.2％、至少约1.3％或至少约1.4％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为至多约3.0％、至多约2.9％、至多约2.8％、至多约2.7％、至多约2.6％、至多约2.5％、至多约2.4％、至多约2.3％、至多约2.2％、至多约2.1％、至多约2.0％、至多约1.9％、至多约1.8％、至多约1.7％、至多约1.6％或至多约1.5％。在某些实施方案中，甲基纤维素的浓度为约0.5％至约0.7％、约0.5％至约0.9％、约0.5％至约1.1％、约0.5％至约1.3％、约0.5％至约1.5％、约0.5％至约1.7％、约0.5％至约1.9％、约0.5％至约2.1％、约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2.7％、约0.5％至约2.9％、约0.7％至约0.9％、约0.7％至约1.1％、约0.7％至约1.3％、约0.7％至约1.5％、约0.7％至约1.7％、约0.7％至约1.9％、约0.7％至约2.1％、约0.7％至约2.5％、约0.7％至约2.7％、约0.7％至约2.9％、约0.9％至约1.1％、约0.9％至约1.3％、约0.9％至约1.5％、约0.9％至约1.7％、约0.9％至约1.9％、约0.9％至约2.1％、约0.9％至约2.5％、约0.9％至约2.7％、约0.9％至约2.9％、约1.1％至约1.3％、约1.1％至约1.5％、约1.1％至约1.7％、约1.1％至约1.9％、约1.1％至约2.1％、约1.1％至约2.5％、约1.1％至约2.7％、约1.1％至约2.9％、约1.3％至约1.5％、约1.3％至约1.7％、约1.3％至约1.9％、约1.3％至约2.1％、约1.3％至约2.5％、约1.3％至约2.7％、约1.3％至约2.9％、约1.5％至约1.7％、约1.5％至约1.9％、约1.5％至约2.1％、约1.5％至约2.5％、约1.5％至约2.7％、约1.5％至约2.9％、约1.7％至约1.9％、约1.7％至约2.1％、约1.7％至约2.5％、约1.7％至约2.7％、约1.7％至约2.9％、约1.9％至约2.1％、约1.9％至约2.5％、约1.9％至约2.7％、约1.9％至约2.9％、约2.1％至约2.5％、约2.1％至约2.7％、约2.1％至约2.9％、约2.5％至约2.7％、约2.5％至约2.9％或约2.7％至约2.9％。
在一些实施方案中，基质包含与约0.5％至约3.0％的海藻酸盐凝胶和约0.5％至约3.0％的甲基纤维素的基质混合的活细胞。然后将细胞凝胶混合物转移至肠溶胶囊中。在某些实施方案中，胶囊包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，基质包含与约1.5％的海藻酸盐凝胶和约1.5％的甲基纤维素的基质混合的哺乳动物活细胞。然后将细胞凝胶混合物转移至肠溶胶囊中。在某些实施方案中，胶囊包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约0.5％至约3.0％的海藻酸盐凝胶和约0.5％至约3.0％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约1.0％至约2.5％的海藻酸盐凝胶和约1.0％至约2.5％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶和约1.0％至约2.0％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约1.2％至约1.8％的海藻酸盐凝胶和约1.2％至约1.8％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约1.4％至约1.6％的海藻酸盐凝胶和约1.4％至约1.6％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在一些实施方案中，在包衣有甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)的胶囊中，基质包含悬浮在约1.5％的海藻酸盐凝胶和约1.5％的甲基纤维素的混合物中的哺乳动物活细胞。在某些实施方案中，哺乳动物活细胞包含间充质干细胞。
在某些实施方案中，基质包含活细胞和给定浓度的琼脂。在某些实施方案中，基质中琼脂的浓度为约0.1％w/v至约10％w/v、约0.1％w/v至约8％w/v、约0.1％w/v至约5％w/v、约0.1％w/v至约4％w/v、约0.1％w/v至约3％w/v、约0.1％w/v至约2％w/v、约0.1％w/v至约1％w/v、约0.2％w/v至约10％w/v、约0.2％w/v至约8％w/v、约0.2％w/v至约5％w/v、约0.2％w/v至约4％w/v、约0.2％w/v至约3％w/v、约0.2％w/v至约2％w/v、约0.2％w/v至约1％w/v、约0.4％w/v至约10％w/v、约0.4％w/v至约8％w/v、约0.4％w/v至约5％w/v、约0.4％w/v至约4％w/v、约0.4％w/v至约3％w/v、约0.4％w/v至约2％w/v、约0.4％w/v至约1％w/v、约0.5％w/v至约10％w/v、约0.5％w/v至约8％w/v、约0.5％w/v至约5％w/v、约0.5％w/v至约4％w/v、约0.5％w/v至约3％w/v、约0.5％w/v至约2％w/v、约0.5％w/v至约1％w/v。在某些实施方案中，基质中琼脂的浓度为约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％。在某些实施方案中，基质中琼脂的浓度为约1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％、9.0％或10％。
本文所述的基质具有给定的粘度。在另外的实施方案中，包含细胞的基质的特征在于粘度为约500至1,000,000厘泊；约1000至1,000,000厘泊；约1,000至500,000厘泊；约10,000至500,000厘泊；约10,000至400,000厘泊；约10,000至3000,000厘泊；约100,000至1,000,000厘泊；或约500,000至1,000,000厘泊。
在某些实施方案中，基质包含另外的分子，例如细胞外基质蛋白，例如胶原或纤维蛋白；碳水化合物，例如葡萄糖、右旋糖或蔗糖；纤维，例如纤维素；维生素或矿物质；缓冲液，等渗溶液或氨基酸。
包衣
本文的口服递送系统包含配制为在一定pH下溶解的包衣。对于双相递送，口服递送系统包含配制为在不同pH下溶解的两种包衣。在某些实施方案中，将包衣配制为在约5.5至约6.0的pH下溶解，以靶向十二指肠；在约7.3至约8.0的pH下溶解，以靶向回肠；或在约5.5至约6.5pH下溶解，以靶向结肠。在某些实施方案中，将包衣配制为在约5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的pH下溶解。在某些实施方案中，对于双相递送，一种包衣在约7.3至约8.0的pH下配制，以靶向回肠，并且一种包衣在约5.5至约6.5的pH下配制，以靶向结肠。在某些实施方案中，对于双相递送，一种包衣在约5.5至约6.0的pH下配制，以靶向十二指肠，并且一种包衣在约5.5至约6.5的pH下配制，以靶向结肠。在某些实施方案中，对于双相递送，一种包衣在约5.5至约6.0的pH下配制，以靶向十二指肠，并且一种包衣在约7.3至约8.0的pH下配制，以靶向回肠。
还考虑了肠细胞制剂，其包括所公开的细胞或细胞群和肠溶物质；及其药学上可接受的载体或赋形剂。肠溶物质是指在胃的酸性环境中基本上不溶并且在肠液中的特定pH下大量溶解的聚合物。小肠是胃和大肠之间的胃肠道的一部分，包括十二指肠、空肠和回肠。十二指肠的pH为约5.5，空肠的pH为约6.5，且回肠末端的pH为约7.5。因此，肠溶物质是不可溶的，例如直到pH为约5.0、约5.2、约5.4、约5.6、约5.8、约6.0、约6.2、约6.4、约6.6、约6.8、约7.0、约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.2、约8.4、约8.6、约8.8、约9.0、约9.2、约9.4、约9.6、约9.8或约10.0。可以包括在本文所述的口服递送系统和哺乳动物活细胞的组合物中的示例性肠溶物质包括醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、醋酸琥珀酸纤维素、醋酸六氢邻苯二甲酸纤维素、丙酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸马来酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸丙酸纤维素、甲基甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物，丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物，甲基乙烯基醚和马来酸酐的共聚物(Gantrez ES系列)、甲基丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-氯三甲基铵丙烯酸乙酯共聚物、天然树脂(例如玉米醇溶蛋白、虫胶和柯巴脂(copal collophorium))以及几种市售的肠溶分散系统(例如，EudragitL30D55、Eudragit FS30D、Eudragit L100、Eudragit S100、Kollicoat EMM30D、Estacryl30D、Coateric和Aquateric)。以上物质各自的溶解度是已知的或容易体外测得的。
包含哺乳动物活细胞的双相胶囊包含第一肠溶衣和第二肠溶衣。在某些实施方案中，第一肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。在某些实施方案中，第二肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。在某些实施方案中，第一肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物。在某些实施方案中，第二肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物。
在某些实施方案中，本文所述的哺乳动物活细胞组合物的肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。
在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂与肠溶衣一起将第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞的活力保持在约80-85％的活力。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂在24℃下将第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约50％、60％、70％或80％的活力至少2、3、4、5、6、7、8、9、10天。
在某些实施方案中，凝胶、基质与肠溶衣或赋形剂一起提供约0.4至0.6小时的Tmax。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂提供约0.4小时、约0.41小时、约0.42小时、约0.43小时、约0.44小时、约0.45小时、约0.46小时、约0.47小时、约0.48小时、约0.49小时、约0.50小时、约0.51小时、约0.52小时、约0.53小时、约0.54小时、约0.55小时、约0.56小时、约0.57小时、约0.58小时、约0.59小时或约0.60小时的Tmax。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂提供至少约0.4小时、至少约0.4小时、至少约0.42小时、至少约0.43小时、至少约0.44小时或至少约0.45小时的Tmax。在某些实施方案中，凝胶、基质或赋形剂提供至多约0.46小时、至多约0.47小时、至多约0.48小时、至多约0.49小时、至多约0.50小时、至多约0.51小时、至多约0.52小时、至多约0.53小时、至多约0.54小时、至多约0.55小时、至多约0.56小时、至多约0.57小时、至多约0.58小时、至多约0.59小时或至多约0.60小时的Tmax。
制备口服递送系统的方法
在某些实施方案中，本文还描述了制备口服递送系统的方法，该方法包括将活细胞群与本文所述的基质混合，并使基质：活细胞群组合物与肠溶衣接触。在某些实施方案中，在肠溶衣之前，将基质：活细胞组合物加入至胶囊。在某些实施方案中，本文还描述了制备口服递送系统的方法，该方法包括将活细胞群与本文所述的包含琼脂的基质混合，并使基质：活细胞群组合物与包含甲基丙烯酸的共聚物的肠溶衣接触。
在另一方面，制备配制用于口服递送的哺乳动物活细胞的组合物的方法包括：将多个哺乳动物活细胞与基质混合以提供细胞-基质，所述基质包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶，并将肠溶衣施用于细胞-基质。在某些实施方案中，基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。在某些实施方案中，甲基纤维素和海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。在某些实施方案中，肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含人细胞。在某些实施方案中，多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。
其他实施方案
在本文中考虑了其他具体编号的实施方案：
1.一种口服递送系统；所述系统包括：
a)第一胶囊，所述第一胶囊包含第一多个哺乳动物活细胞和第一肠溶衣，其中所述第一肠溶衣在约6.2至约6.5的pH下释放所述第一多个哺乳动物活细胞；和
b)第二胶囊，所述第二胶囊包含第二多个哺乳动物活细胞和第二肠溶衣，其中所述第二肠溶衣在约7至约8的pH下释放所述第二多个哺乳动物活细胞；
其中所述第二胶囊被所述第一胶囊包围。
2.根据实施方案1所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和所述第二多个哺乳动物活细胞是相同类型的细胞。
3.根据实施方案1所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和所述第二多个哺乳动物活细胞是不同类型的细胞。
4.根据实施方案1至3中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞靶向近侧结肠，所述第二多个哺乳动物活细胞靶向回肠。
5.根据实施方案1至4中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和/或所述第二多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。
6.根据实施方案1至5中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和/或所述第二多个哺乳动物活细胞包含人细胞。
7.根据实施方案1至6中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和/或所述第二多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。
8.根据实施方案7所述的口服递送系统，其中所述多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。
9.根据实施方案1至6中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一多个哺乳动物活细胞和/或所述第二多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。
10.根据实施方9所述的口服递送系统，其中所述免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。
11.根据实施方案1至10中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。
12.根据实施方案1至11中任一项所述的口服递送系统，其中所述第二肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。
13.根据实施方案1至12中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一胶囊、第二胶囊或第一胶囊和第二胶囊包含凝胶、基质、细胞外基质蛋白或赋形剂。
14.根据实施方案13所述的口服递送系统，其中所述凝胶包括琼脂。
15.根据实施方案13所述的口服递送系统，其中所述凝胶包括水凝胶。
16.根据实施方案13所述的口服递送系统，其中所述细胞外基质蛋白包含胶原。
17.根据实施方案1至16中任一项所述的口服递送系统，其中所述凝胶、基质或赋形剂在24℃下将第一多个哺乳动物活细胞和/或第二多个哺乳动物活细胞的活力保持高于约80％活力至少14天。
18.根据实施方案1至17中任一项所述的口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道。
19.根据实施方案1至17中任一项所述的口服递送系统用于兽医用途将哺乳动物活细胞递送至家养动物。
20.一种将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道的方法，其包括将实施方案1至17中任一项所述的口服递送系统口服施用至个体。
21.根据实施方案20所述的方法，其中所述个体为人。
22.根据实施方案20所述的方法，其中所述个体为家养动物。
23.一种口服递送系统；所述系统包括：
a)胶囊，所述胶囊包含多个哺乳动物活细胞和肠溶衣，其中所述肠溶衣在约6.0至约8.0的pH下释放所述多个哺乳动物活细胞。
24.根据实施方案23所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞是相同类型的细胞。
25.根据实施方案23所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞是不同类型的细胞。
26.根据实施方案23所述的口服递送系统，其中所述肠溶衣在约6.2至约6.5的pH下释放所述多个哺乳动物活细胞。
27.根据实施方案23所述的口服递送系统，其中所述肠溶衣在约7.0至约8.0的pH下释放所述多个哺乳动物活细胞。
28.根据实施方案23至27中任一项所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。
29.根据实施方案23至28中任一项所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞包含人细胞。
30.根据实施方案23至29中任一项所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。
31.根据实施方案23至30中任一项所述的口服递送系统，其中所述多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。
32.根据实施方案23至31中任一项所述的口服递送系统，其中所述多个哺乳动物活细胞和/或所述第二多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。
33.根据实施方案32所述的口服递送系统，其中所述免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。
34.根据实施方案23至33中任一项所述的口服递送系统，其中所述肠溶衣包含甲基丙烯酸的共聚物，甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯的共聚物，醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸-1,2,4-苯三酸纤维素、海藻酸钠或玉米醇溶蛋白。
35.根据实施方案23至34中任一项所述的口服递送系统，其中所述第一胶囊、所述第二胶囊或所述第一胶囊和所述第二胶囊包含凝胶、细胞外基质蛋白或赋形剂。
36.根据实施方案35所述的口服递送系统，其中所述凝胶包括琼脂。
37.根据实施方案35所述的口服递送系统，其中所述凝胶包括水凝胶。
38.根据实施方案35所述的口服递送系统，其中所述细胞外基质蛋白包含胶原。
39.根据实施方案23至38中任一项所述的口服递送系统，其中所述凝胶、基质或赋形剂在24℃下将多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约80％活力至少14天。
40.根据实施方案23至39中任一项所述的口服递送系统用于将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道。
41.一种治疗个体的疾病的方法，其包括将实施方案23至40中任一项所述的口服递送系统口服施用至所述个体。
42.一种治疗家养动物的疾病的方法，其包括将实施方案23至41中任一项所述的口服递送系统口服施用至所述家养动物。
43.一种将哺乳动物活细胞递送至个体的肠道的方法，其包括将实施方案23至39中任一项所述的口服递送系统口服施用至所述个体。
44.根据实施方案43所述的方法，其中所述个体为人。
45.根据实施方案43所述的方法，其中所述个体为家养动物。
46.一种形成基质、凝胶或赋形剂以包埋间充质干细胞的方法，其中所述基质由琼脂或水凝胶组成。
47.根据实施方案46所述的方法，其中所述水凝胶由海藻酸盐和甲基纤维素的混合物组成。
实施例
以下说明性实施例是本文所述的组合物和方法的代表性实施方案，并不意味着以任何方式进行限制。
实施例1–制备用于口服递送的活的干细胞组合物
首先，将活的干细胞包装到配制的单相肠溶胶囊或胶囊包胶囊双相媒介物中，然后进行评估。简言之，胶囊的制备如下：向明胶胶囊(000和00号)中填充250mg的结晶紫和不锈钢棒(6.3mm°-12mm)。然后，将已装载的胶囊布置在浸渍盘中，并在预先制备的
Figure BDA0003140521800000281
L100-55(例如，甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯)混合物(
Figure BDA0003140521800000282
L100-55，9.0g；聚乙二醇400，1.4g；Tween 80，0.1g；丙酮，38ml；异丙醇，57ml；以及水，5ml)中悬浮15s，使2/3的胶囊表面包衣，然后干燥30min。然后将胶囊倒置，然后重新插入浸渍盘中，然后将剩余的1/3胶囊表面包衣。随后将胶囊在环境温度下放置在实验室工作台上，并使其完全干燥72h。没有进行特定的残留溶剂分析；然而，干燥72h后，所有包衣胶囊均无丙酮气味。对于单相胶囊，使000层铺活细胞[共500万个活细胞]，而对于胶囊包胶囊，使包衣的00胶囊上层铺细胞[250万个]，然后将其放置在层铺有细胞的000胶囊[250万个]中。在一系列实验中，随后对
Figure BDA0003140521800000283
(例如，羟丙基甲基纤维素(HPMC))和
Figure BDA0003140521800000291
L100-55包被的明胶胶囊进行一次、两次、三次或四次体外肠溶保护能力测试。将未包衣的明胶胶囊或用于对照的市售
Figure BDA0003140521800000292
胶囊中装入结晶紫和不锈钢棒，但不进行
Figure BDA0003140521800000293
L100-55包被。最后，胶囊中还装入500万个人MSC聚集体。随后，根据药典标准使用桨系统溶解装置。在这些实验中，组装溶解槽(USP 23type II Apparatus VankelVK6010,Varian Inc.,Palo Alto,CA,USA)，并预热至37℃。将400ml体积的0.1mol/L HCl(pH 1.0)放入3℃溶解杯中，并将旋转速度设置为100r/min。在60、90和120min时评估肠溶保护/胶囊完整性，如通过结晶蓝染料释放后以及在平行的未染色细胞中的目视检测所测量的。在120min的标记处，将200ml无血清MSC生长培养基(pH 7.5)加入杯中，将pH有效地调节至7.0——代表人肠道和细胞的生长条件并且还符合U.S.Food and DrugAdministration Guidance for Industry接受的pH范围(6.8-8.0)(www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm070237.pdf)。再次监测完整性，直到胶囊崩解(对于各种不同的胶囊包衣类型，n≥3)>4小时。
实施例2–干细胞在基质中的活力
图4图示了间充质干细胞聚集体在基质中保持活力。在圆底96孔板的每孔约5×106个聚集细胞悬浮于0.4％w/v琼脂-琼脂的包埋条件下，设计实验以评估30天孵育期间的细胞活力。如图所示，将包埋在基质中的细胞培养1、7、14、21和30天。解离细胞并在血细胞计数器上计数后，通过台盼蓝排斥测定法确定细胞数(折线)和活力(条形)。如图所示，在整个实验中，包埋在基质中的MSC保持约95％的活力(条形)。在整个培养期间，在这些条件下，细胞密度大约增加了一倍(折线)。
图5至图8示出了来自评估含有活细胞的胶囊的特性的实验数据。由于活细胞仅在pH调节的细胞释放后才从胶囊中释放，因此这些实验模拟了当胶囊沿口腔向下行进至回肠和结肠时其所接触的pH值变化。在这些实验中，如图所示，将装载有活细胞[5x106个细胞/ea]的肠溶胶囊与从口腔向下行进至回肠和结肠的胶囊的预期pH值变化进行相似的处理。因此，在2小时pH＝1孵育之后，进行>2小时pH＝7.5中和，其中如先前所述回收细胞并分析功能性标记物cxcl9。参见Waterman R.S.等人,“New mesenchymal stem cell(MSC)paradigm:polarization into a pro-inflammatory MSC1 or an immunosuppressiveMSC2 phenotype.”PLoS One.010Apr 26；5(4)。肠溶胶囊直到达到中和的pH后才释放其有效负载。该图示出了通过台盼蓝测定法测定的从各个样品中回收的细胞的细胞数。低pH溶解后，未包衣的胶囊释放细胞内容物，而肠溶衣包衣的胶囊保留细胞直至中性pH。
除细胞释放和活力之外，还监测细胞免疫调节能力。如前所述(Waterman等人,2010)，通过台盼蓝排斥测定法测量细胞计数，并通过cxcl9基因表达qPCR测定法测量免疫调节。图5示出了通过台盼蓝测定法测定的从各个样品中回收的细胞的细胞数。肠溶胶囊直到达到中和的pH后才释放其有效负载。相反，未包衣的胶囊在低pH溶解后释放其细胞内容物。图6图示了通过台盼蓝排斥测定法测量细胞计数和活力的结果。通过使用0.4％的台盼蓝溶液制备1:1细胞悬浮液稀释液，在台盼蓝染料的酸性偶氮排斥培养基中处理样品。蓝色细胞被评定为没有活力的细胞，未染色的细胞被评定为有活力的细胞。
此外，图7示出了如前所述的通过cxcl9基因表达qPCR测定法评估的免疫调节。细胞活力和免疫调节活性分别保持在89％和85％胶囊包胶囊水平。因此，在pH调节释放后，间充质干细胞保持活力并保持免疫调节活性。
实施例3–口服递送哺乳动物活细胞改善克罗恩氏病小鼠模型的症状
进行临床前研究，以测试活细胞口服胶囊的剂量和给药方案。使用患有克罗恩氏样病的小鼠模型。参见Pizzaro等人,“Mouse models for the study of Crohn'sdisease”Trends Mol Med.2003年5月；9(5):218-22。这是公认的患有类似于人的克罗恩氏样病的小鼠模型。
对口服递送的肠溶胶囊中的人间充质干细胞的生物分布进行定量。向BALB/c小鼠经口施用装载有MSC的肠溶胶囊。随后在15分钟、30分钟、1小时和2小时后采集消化道。如前所述(Bartosh等人,2010)，从组织中提取RNA，并通过鼠GAPDH进行人基因组GADPH的RT-qPCR分析。图8(底部)描绘了代表性的细胞数。图8(顶部)描绘了长达2小时的曲线下面积(AUC)。
加利福尼亚大学圣迭戈分校(University of California,San Diego)(UCSD)的病理学家还对固定在10％福尔马林中的H&E染色切片进行了组织学评估。在盲法研究中使用有效的评分系统进行肠道病变的量化：0表示正常组织学，而3表示最大程度的组织学变化。该研究还考虑了这些组织的三个不同组成：活性的(具有中性粒细胞浸润物)、慢性的(具有单核细胞、B细胞和T细胞计数)和绒毛变形(表现出绒毛结构)。所有3个单独组成的总和表示为总分。总之，组织学评分显示，MSC疗法减轻了克罗恩氏样回肠炎小鼠模型的疾病。
图9(顶部)描绘了经处理的与媒介物处理的小鼠的定量组织学评分。图9(底部)描绘了如上量化的肠切片的示例性显微照片。
在小鼠口服施用未包衣和包衣的胶囊后，测量了活细胞的药代动力学参数。细胞的最大释放曲线表示为细胞的最大回收率所经过的小时数，并且通过台盼蓝排斥测定法评估细胞活力。最后，通过抗炎标记物cxcl9在回收细胞中的cDNA表达来评估细胞效力。这些结果的总结描绘在图10中。
活细胞以类似于其在细胞的鼻内递送中穿过类似粘膜层的方式穿过肠屏障。MSC使用称为angiopellosis的机制进入循环。随后，活细胞追踪到靶位点，从而通过细胞间相互作用和生物活性因子分泌而提供其治疗益处。这些包括减轻炎症(免疫调节-募集稳态免疫细胞、减少促炎因子和增加抗炎因子)、提供抗氧化剂(增加GSH、降低转铁蛋白、脂质过氧化作用)和恢复衰老组织(募集其他干细胞和组织愈合细胞)。
尽管本文已经示出和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现在会想到许多变化、改变和替换。应理解，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可用于实施本发明。

Claims (42)

1.一种哺乳动物活细胞的组合物，其配制用于口服递送至个体，所述组合物包含：(a)肠溶衣，(b)基质，所述基质包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶，以及(c)多个哺乳动物活细胞，其中所述多个哺乳动物活细胞悬浮在所述基质中，并且其中所述肠溶衣包围悬浮在基质中的哺乳动物活细胞。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述甲基纤维素和所述海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。
6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述肠溶衣基本上由甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)组成。
7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。
8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含人细胞。
9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述非人动物细胞选自犬细胞、牛细胞、猫细胞、猪细胞、马细胞或羊细胞。
11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含至少两种类型的细胞。
12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含多能细胞。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述多能细胞包括胚胎干细胞、多潜能干细胞、诱导多潜能干细胞、间充质干细胞、造血干细胞、成肌细胞、成纤维细胞、肝干细胞、肾干细胞、心脏干细胞或肠干细胞。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述多能细胞包括间充质干细胞。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述间充质干细胞是1型间充质干细胞。
16.根据权利要求14所述的组合物，其中所述间充质干细胞是2型间充质干细胞。
17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多个哺乳动物活细胞包含免疫细胞。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述免疫细胞包括B细胞、T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突细胞或巨噬细胞。
19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物在24℃下将多个哺乳动物活细胞的活力保持在高于约80％活力至少14天。
20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述基质还包含细胞外基质蛋白。
21.根据权利要求17所述的组合物，其中细胞外基质蛋白包含胶原。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物用于治疗人的炎性或自身免疫障碍。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。
24.根据权利要求23所述的用途，其中所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括炎性肠病或克罗恩氏病。
25.根据权利要求23所述的用途，其中所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括克罗恩氏病。
26.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物用于治疗动物的炎性或自身免疫障碍。
27.根据权利要求26所述的用途，其中所述炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。
28.根据权利要求26所述的用途，其中所述动物是狗、牛、猫、猪、马或绵羊中的任何一种或多种。
29.一种治疗个体的炎性或自身免疫障碍的方法，其包括将一定剂量的权利要求1至21中任一项所述的组合物施用至个体的消化道。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述个体为人个体。
31.根据权利要求29所述的方法，其中所述个体为狗、牛、猫、猪、马或绵羊。
32.根据权利要求29所述的方法，其中所述炎性或自身免疫障碍为胃肠道炎性或自身免疫障碍。
33.根据权利要求29所述的方法，其中所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括炎性肠病或克罗恩氏病。
34.根据权利要求29所述的方法，其中所述胃肠道炎性或自身免疫障碍包括克罗恩氏病。
35.一种制备配制用于口服递送的哺乳动物活细胞的组合物的方法，其包括将多个哺乳动物活细胞与包含约1.0％至约2.0％的甲基纤维素和约1.0％至约2.0％的海藻酸盐凝胶的基质混合以提供细胞-基质，并将肠溶衣施用于细胞-基质。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述基质包含约1.3％至约1.8％的甲基纤维素和约1.3％至约1.8％的海藻酸盐凝胶。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述基质包含约1.5％的甲基纤维素和约1.5％的海藻酸盐凝胶。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述甲基纤维素和所述海藻酸盐凝胶的比值为约1:1。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述肠溶衣包含甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物(1:1)。
40.根据权利要求35所述的方法，其中所述多个哺乳动物活细胞包含约10,000个至约1,000万个活细胞。
41.根据权利要求35所述的方法，其中所述多个哺乳动物活细胞包含人细胞。
42.根据权利要求35所述的方法，其中所述多个哺乳动物活细胞包含非人细胞。
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