CN113262252B - 预防牛羊酒糟中毒的药物新组方、制备方法和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种预防牛羊酒糟中毒的药物新组方、制备方法和使用方法，由丙酸钙、氧化镁、陈皮、厚朴和枳实组成，并按以下重量份数组合：丙酸钙200g、氧化镁200g、陈皮35g、厚朴35g、枳实30g。使用时按重量份数将0.5％～1％剂量所述的药物添加到酒糟中进行饲喂。

Description

预防牛羊酒糟中毒的药物新组方、制备方法和使用方法

技术领域

本发明涉及反刍兽牛羊酒糟安全使用领域，具体涉及一种预防牛羊酒糟中毒的药物新组方、及其制备方法和使用方法。

背景技术

我国已是牛羊肉及产品的消费大国，也是牛羊生产大国。据记载，“十三五”以来，我国人群对牛羊肉的消费呈现需求刚性增加，经测算，2017年我国牛羊肉表观消费量分别为795.4万吨、492.4万吨；国家农业年鉴记载，2019年我国牛肉产量达667.3万吨、羊肉产量约487.5万吨，占各类肉产量总值的15.01％。已连续3年呈现较快增长。鉴于此，我国农业农村部于2016年制定了《全国草食畜牧业发展规划》(2016～2020)、2021年4月又下发了《推进肉牛肉羊生产发展五年行动方案》的通知等重要文件。然而，快速发展的牛羊养殖业势必带来牧草资源紧张或缺乏、饲料用粮不足等问题，酒糟、豆渣、农作物秸秆、植物饼粕等非常规饲料的安全高效利用已成为目前研究和应用的热点。其中，酒糟因其粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、灰分含量均较高，适口性较好，一直受到牛羊养殖者的青睐。我国各类酒糟产量较为丰富，据记载每年可产出约1亿吨以上的各类酒糟，初步的调查结果显示，我国部分地区(如重庆)肉牛生产中使用酒糟饲喂的牛只约为95％，酒糟在日采食量中达到了40％～60％，但长期的酒糟饲喂，可引起约19.55％的肉牛发生慢性中毒，而母牛的发病率可高达25.48％。因而，酒糟在牛羊生产中的安全有效利用已成为了目前生产中十分关注的焦点。

已有的报道和实际生产调查结果显示，在酒糟或精料中按1％～1.5％质量比添加小苏打(碳酸氢钠)，可部分解决酒糟长期饲喂出现的慢性中毒问题。但长期使用碳酸氢钠，可导致机体钠离子升高诱发心力衰竭、水肿、碱中毒及尿结石等疾病；同时，也无法解决因长期酒糟摄入导致的牛羊钙缺乏问题；酒糟中蛋白营养价值较高、有多种发酵菌、湿度大，较易霉败、腐败，目前使用小苏打添加的方法在防止酒糟霉败方面未有任何表现。经查阅我国公开的专利，尚未见与本申报内容一致或相似的专利发布。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种预防牛羊酒糟中毒的药物新组方。

为了达到上述目的，本发明是这样实现的：预防牛羊酒糟中毒的药物新组方，其特征在于：由丙酸钙、氧化镁、陈皮、厚朴和枳实组成，并按以下重量分数组合：丙酸钙200g、氧化镁200g、陈皮35g、厚朴35g、枳实30g。

本发明的第二目的在于提供上述预防牛羊酒糟中毒的药物新组方的制备方法，包括以下步骤：

步骤(1)：将陈皮35g、厚朴35g、枳实30g混合打成粉末，过100目筛；

步骤(2)：将氧化镁粉末200g加入步骤(1)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(3)：将丙酸钙粉末200g加入步骤(2)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(4)：将步骤(3)中得到的粉末真空密闭后包装成500g/袋，室温储存。

本发明的第三目的在于提供上述预防牛羊酒糟中毒的药物新组方的使用方法，具体的：按重量分数0.5％～1％剂量将所述的药物添加到酒糟中进行饲喂。即每袋制品可与50～100kg鲜酒糟(或储存7日以内湿酒糟)充分混合，按常规饲喂。

有益效果：

本发明的药物与酒糟混合后，可有效降低酒糟中的甲醛、乙醇等的检出量，有一定的防止酒糟霉败作用。在酒糟中添加本品饲喂后，可显著降低酒糟所致的肝、肾损伤，保护肝、肾功能；有利于机体对钙的吸收，减少骨钙动员和防止骨软病的发生；可以较好地稳定瘤胃内环境和维护瘤胃的微生物消化，有效防止酒糟对瘤胃代谢的不良影响，维护瘤胃的健康。

具体实施方式

下面就本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例：本实施例提供一种预防牛羊酒糟中毒的药物组方，由丙酸钙、氧化镁、陈皮、厚朴和枳实组成，并按以下重量分数组合：丙酸钙200g、氧化镁200g、陈皮35g、厚朴35g、枳实30g。

本实施例还提供上述预防牛羊酒糟中毒的药物配方的制备方法，包括以下步骤：

步骤(1)：将陈皮35g、厚朴35g、枳实30g混合打成粉末，过100目筛；

步骤(2)：将氧化镁粉末200g加入步骤(1)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(3)：将丙酸钙粉末200g加入步骤(2)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(4)：将步骤(3)中得到的粉末真空密闭后包装成500g/袋，室温储存。

本实施例还提供上述预防牛羊酒糟中毒的药物配方的使用方法，具体的：按重量分数0.5％～1％剂量将所述的药物添加到酒糟中进行饲喂。即每袋制品可与50～100kg鲜酒糟(或储存7日以内湿酒糟)充分混合，按常规饲喂。

根据本实施例提供的预防牛羊酒糟中毒的新组方以及使用方法，将由上述制备方法制得的药物加入到酒糟内，进行实验，分别为体外试验与体内试验，具体如下。

一、体外试验

1.1体外试验

1.1.1酒糟的处理：取储存7天未发霉符合质量要求的酒糟(湿，大厂)各500g/份，按照碳酸氢钠1.5％，“药物新组方”按0.1％、0.5％、1.0％、1.5％等的质量百分比添加到酒糟中，充分混匀，密封后室温放置2h；然后再按30g/份取样，每个物质每个添加比例均取10份，置洁净样品袋内，同时采集储存7天的酒糟对照样品，-80℃下保存备用。

1.1.2酒糟中乙醇、甲醛含量测定：精确称取酒糟样品10.0000g，加超纯水15mL，然后均质粉碎，振荡混匀后4℃下超声提取1h。再定容至20mL，密封，4℃下冷浸过夜萃取，最后10000rpm离心10min，取上清过0.45μm滤膜，滤液待测。

样品中乙醇、甲醛含量采用GC-6280气相色谱仪进行检测，检测器为FID，色谱柱为DB-FFAP(30m×0.25mm，膜厚0.25μm)。升温程序为：初始柱温35℃保持8min；8～12min，以5℃/min升至60℃；12～20.5min，以20℃/min升温至230℃；保持2min。进样口温度为230℃；检测器温度为250℃；载气为高纯氮气，流量为2.0mL/min；进样口分流比为15:1进样体积为1μL。

取乙醇标准品用超纯水进行稀释、定容至2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL浓度；甲醛标准品稀释定容至0.012μg/mL、0.06μg/mL、0.12μg/mL、0.24μg/mL、0.3μg/mL、0.6μg/mL浓度，上机检测，并以峰面积为横坐标、标准测定液的浓度为纵坐标绘制标准曲线，计算其相关系数。样品组分测定所得峰面积，代入标准曲线公式计算出待测液中相应组分的浓度。

1.1.3酒糟中乙酸、乳酸含量测定：精确称取酒糟样品10.0000g，均质机捣碎，转移至20mL容量瓶内，加入超纯水15mL，室温避光超声提取30min。取出，用超纯水定容至20mL，混匀，然后取上清液过0.45滤膜，滤液待测。

参照SN/T 2007－2007规定的高效液相色谱法，样品中乙酸、乳酸均采用Agilent-1100高效液相色谱分析仪进行检测。色谱柱为TSKgel ODS-100V(4.6mm×250mm×5.0μm)，流动相为0.1％的磷酸水溶液，流速1mL/min；紫外检测器，检测波长为210nm；柱温为40℃，进样体积20μL。

取乙酸、乳酸标准品均精确配制4μg/mL、20μg/mL、32μg/mL、40μg/mL、64μg/mL、80μg/mL浓度梯度，上机检测，并以峰面积为横坐标、标准测定液的浓度为纵坐标绘制标准曲线，计算其相关系数。样品组分测定所得峰面积，代入标准曲线公式计算出待测液中乙酸、乳酸的浓度。

1.1.4数据处理：试验所得数据经Excel2016整理，计算平均值

和标准偏差SD，数据以

表示；用spss19.0软件下单因素方差分析、LSD多重比较法分析试验组间及组内不同物质间平均含量的差异。

1.2试验结果

1.2.1各标准物质检测的线性方程、相关系数、检测限和定量限

表1 4种标准物质检测的线性回归方程、相关系数、检测限和定量限

配制的4种标准物质的浓度梯度，上机检测后，以浓度为横坐标，标样峰面积为纵坐标，运用EXCEL中的LINEST函数计算其斜率、截距、相关系数、截距标准误，并利用公式“检测限(LOD)＝3.3δ/S、定量限(LOQ)＝10δ/S”计算各标准物质的LOD、LOQ。各标准物质的线性方程、相关系数、检测限、定量限见表1。表1显示，各种标准物质的相关系数均大于0.998，表明4种物质分别在其相应的检测方法下有良好的线性关系，可以很好地对乙醇、甲醛、乙酸、乳酸进行定量检测；检测限和定量限均能满足试验的要求。

1.2.2新组方药物对酒糟中4种主要毒性成分的影响

表2药物新组方对酒糟中4种主要有毒成分含量的影响

注：表中数据右肩上小写字母不同，示同列数据经单因素ANOVA检验、LSD多重比较差异显著(p<0.05)，大写字母不同示差异极显著(p<0.01)，字母相同示差异不显著(大写相同P>0.01，小写相同p>0.05)。

由表2可知，新组方药物可显著降低酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛的检出量，说明将其在体外与酒糟混合后可较好降低酒糟中主要有机酸的数量，减少乙醇、甲醛的含量，减轻酒糟中4种主要毒性成分对动物健康的损害。与当前通用的碳酸氢钠比较，0.5％、1％浓度的新组方药物在降低酒糟中乙醇、乳酸、甲醛含量方面显示出更加突出的优势。总之，在体外试验条件下，0.5％、1％的新组方药物能发挥很好的降低酒糟中乙醇等4种主要毒性成分含量的作用，综合效果比当前广泛使用的1.5％碳酸氢钠效果好。

二.体内试验

2.1试验方法

2.1.1动物分组及处理：选择年龄4月龄、体重23.72±1.61kg的健康本地杂交黑山羊30头，随机分为对照组、酒糟组、酒糟+阳性药物组、酒糟+0.5％新组方药物组、酒糟+1％新组方药物组、酒糟+1.5％新组方药物组等6个组，5只羊/组。参照NRC中25kg体重、平均日增重150g育肥羊营养需要量配制全混合日粮，用重庆荣昌区直升白酒厂的湿酒糟(经测定含水量69.9％，干物质中总能19.87MJ/kg，粗蛋白23.47％，粗脂肪5.98％，中性洗涤纤维58.91％，酸性纤维39.63％)替代稻草，试验组日粮添加比例为25％(干物质比例，湿重比为83％)。饲粮精粗比为60:40。参试组羊饲料组成、营养水平及毒性物质拮抗添加比例见表3。

表3羊饲粮组成、营养水平及毒性物质拮抗剂添加比例(单位：％)

阳性药物及新组方药物按表3中比例混于相应组别羊饲料中酒糟中进行饲喂，饲喂数量按体重10％计算，自由饮水；试验前2周对试验羊群分别进行口蹄疫、传染性胸膜肺炎、羊痘病、羊梭菌病等进行加强免疫1次；试验期为90天。

2.1.2样品采集、临床观察：试验期间，分别于试验第1天、试验90天试验各组采集一次血样，10mL/只，其中5mL置于促凝管内，另5mL置于抗凝管内，按常规分离血清和血浆后-20℃保存；同一时间采集一次瘤胃液，50mL/只，置于洁净三角烧瓶内，密封后4℃下保存备用。每天观察参试羊精神状态、饮食欲及粪便情况，每周测定体温、呼吸、脉搏数2次，对于慢性酒糟中毒按下列进行临床判断。

羊慢性中毒表现：食欲减退或废绝，便秘或腹泻，黏膜发黄；时发血尿、结膜炎，视力减退，皮疹、皮炎；行动不便或跛行。

2.1.3指标测定：利用mindray-BS280型全自动生化分析仪测定血浆样品中总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮及血清天冬氨酸转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)等的含量，用骨钙素ELISA检测试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)、羟脯氨酸ELISA检测试剂盒(合肥市莱尔生物科技有限公司)、血清钙测试盒(微板法，南京建成生物工程研究所)分别检测样品中骨钙素、羟脯氨酸、钙离子的含量。用电子pH计(MettlerToledo产品)测定参试羊瘤胃液pH，用显微镜检法测定瘤胃液中纤毛虫的活力(计算中等以上活力纤毛虫的百分比值)和数量。用GC-6280气相色谱仪测定瘤胃液中挥发性脂肪酸(VFA)含量，检测器为FID，色谱柱为DB-FFAP(30m×0.25mm，膜厚0.25μm)，测定条件为：进样口、检测器温度240℃，氮气、空气、氢气流率分别为25、350、35mL/min，升温程序是初始温度50℃，按25℃/min升高到190℃，保留2min，再以10℃/min升高到200℃，保留5min，最后按10℃/min升高到220℃，保留5min；进样量1μL，分离比50:1。

2.2试验结果

2.2.1临床观察结果

由表4可知，试验期间，单独饲喂白酒糟组羊有80％的羊发生了酒糟慢性中毒而表现临床症状；酒糟+碳酸氢钠组有40％的羊发病，酒糟+1.5％新组方组有20％的羊发病，但酒糟+0.5％新组方、酒糟+1％新组方两组无羊发病，说明新组方按0.5％、1％添加可较好预防羊的慢性酒糟中毒。

表4试验各组羊酒糟中毒临床观察情况(单位：头)

2.2.2血液生化指标变化

表5参试羊血液生化指标变化

注：表中数据右肩上大写字母不同示同行数据间经单因素ANOVA检验、LSD多重比较差异极显著(p<0.01)，小写字母不同示差异显著(p<0.05)，大小写字母相同示差异不显著(分别p>0.01、p>0.05)。

由表5可知，与酒糟组及酒糟+碳酸氢钠组比较，新组方药物在酒糟中的添加使用，可较好地提高试验组羊血清白蛋白含量，降低AST、GGT、LDH酶的活性，减少肝损伤的风险；使血清肌酐、尿素氮含量下降，并接近健康对照组羊相应指标数值，表明可减轻肾功能障碍的发生；使血清羟脯氨酸含量下降至接近健康组羊，揭示可减少骨骼钙的动员，降低骨质疏松症的发生。其中，以酒糟中添加0.5％、1％的新组方药物效果较好。

2.2.3瘤胃代谢变化

由表6可知道，与酒糟组、酒糟+碳酸氢钠组羊比较，酒糟+新组方药物试验各组瘤胃pH、纤毛数量和活力率、乙酸、丙酸、丁酸及总挥发性脂肪酸(T-VFA)等瘤胃代谢主要指标均呈增加趋势，数据值表现向健康组羊测定的瘤胃代谢指标值方向靠近，说明在酒糟饲喂条件下添加新组方药物可以较好地稳定瘤胃内环境和维护瘤胃的微生物消化，其中，添加0.5％、1％的新组方药物可显著提高酒糟饲喂羊瘤胃纤毛虫活力率。试验结果表明，在长期饲喂酒糟条件下，添加0.5％、1％的新组方药物可以有效防止酒糟中有毒物质对瘤胃代谢的不良影响，进而维护瘤胃的健康。

表6参试羊瘤胃代谢指标变化

注：表中数据右肩上大写字母不同示同行数据间经单因素ANOVA检验、LSD多重比较差异极显著(p<0.01)，小写字母不同示差异显著(p<0.05)，大小写字母相同示差异不显著(分别p>0.01、p>0.05)。

Claims (2)

1.预防牛羊酒糟中毒的药物新组方，其特征在于：由丙酸钙、氧化镁、陈皮、厚朴和枳实组成，并按以下重量份数组合：丙酸钙200g、氧化镁200g、陈皮35g、厚朴35g、枳实30g。

2.如权利要求1所述的预防牛羊酒糟中毒的药物新组方的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：将陈皮35g、厚朴35g、枳实30g混合打成粉末，过100目筛；

步骤(2)：将氧化镁粉末200g加入步骤(1)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(3)：将丙酸钙粉末200g加入步骤(2)中所得粉末混合并充分搅拌混匀；

步骤(4)：将步骤(3)中得到的粉末真空密闭后包装成500g/袋，室温储存。