CN113219045B - 一种复合纳米材料、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合纳米材料、制备方法及其应用，属于质谱检测技术领域，所述复合纳米材料包括金胶体溶液和镍铁‑层状双氢氧化物，二者的体积比为(1‑3)：(1‑3)，所述制备方法利用改进的Frens法合成纳米金材料，NiFe‑LDHs和AuNPs自组装形成所述复合纳米材料，用于检测甲硝唑及其代谢物，检测结果重复性好，线性关系良好，可用于定量。

Description

一种复合纳米材料、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及质谱检测技术领域，特别是涉及一种复合纳米材料、制备方法及其应用。

背景技术

甲硝唑(Metronidazole，MNZ)是一种常用的抗原虫感染及抗厌氧菌抗生素，具有促生长作用，在临床及畜禽养殖中有广泛应用。但是甲硝唑及某些代谢物对人体和动物具有潜在危害(可能引起典型的恶心、荨麻疹、多发性神经病等不良反应)。然而非法或不合理使用会使甲硝唑及其抗生素以多种途径进入水、土壤以及动物源食品中(肉、蛋、奶、蜂蜜等)，并在周围生态系统中逐渐积累。此外，由于甲硝唑及其代谢物的不可降解性和高溶解度，使得这些物质很难被去除。目前甲硝唑的检测方法主要为高效液相色谱、高效液相-质谱联用和气相色谱，这些方法虽然可以准确测定甲硝唑及一些代谢物的含量，但也存在一些不可忽视的缺点，包括预处理复杂、耗时、仪器操作繁琐等。建立一种准确、快速的定量方法来监测实际样品(例如水样品)中的甲硝唑和代谢物仍然是一个巨大的挑战。

基质辅助激光解析离子化质谱是一种常规的软电离技术，目前已经被广泛应用到蛋白、多肽、核酸等大分子样品的分析。由于传统的有机小分子化合物基质多是酸性化合物，本身可以作为质子供体，在低分子量范围内(＜700Da)，对多组分中小分子[MNZ(171.1m/z)]及其代谢物[羟基甲硝唑(HMNZ，m/z 187.1)；乙酸甲硝唑(HAcMNZ，m/z213.1)；羟乙基甲硝唑(HEMNZ，m/z 215.1)]的检测会产生干扰；此外，由于基质干燥和样品复合物不均匀或结晶(例如“咖啡环效应”)，当激光照射到样品和基质时会产生不同强度的离子信号，即使在同一个靶点上的样品离子强度相差几个数量级。为了解决这些问题。近年来越来越多无机纳米材料，如碳(碳纳米管、石墨烯、氧化石墨烯)、贵金属(金、银、铂)、半导体(二氧化钛、硅、硫化镉)等开始用于小分子物质的分析。无机材料(例如金纳米颗粒，Goldnanoparticles，AuNPs)辅助LDI-MS的灵敏度与经典MALDI-MS相当，甚至更高。

AuNPs是LDI-TOF质谱分析低分子量样品的最有吸引力的纳米材料之一，目前有电离肽、碳水化合物、类固醇、三磷酸盐和谷胱甘肽等多种应用。研究报道，AuNPs靶板可以用于体外肝脏丙酮提取物中甲硝唑的检测，可检测到甲硝物质，但单独使用AuNPs检测物质会有很多内源性物质峰干扰质谱分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效辅助激光解吸/电离质谱(LDI-TOF MS)分析的复合纳米材料AuNPs/NiFe-LDHs的制备方法及其在甲硝唑及其代谢物检测中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，在检测甲硝唑及其代谢物过程中具有背景信号少、重现性好、成本低、预处理简单、分析快速等优势。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种复合纳米材料，包括金胶体溶液和镍铁-层状双氢氧化物，二者的体积比为(1-3)：(1-3)，优选二者的体积比为1：1。

进一步地，所述金胶体溶液的浓度为0.10-1.00mM，镍铁-层状双氢氧化物的浓度为0.20-0.30mg/mL。

进一步地，所述金胶体溶液的浓度为0.20-0.50mM。所述金胶体溶液的浓度优选0.20mM，所述镍铁-层状双氢氧化物的浓度优选0.25mg/mL。

AuNPs靶板可以用于体外肝脏丙酮提取物中甲硝唑的检测，可检测到甲硝物质，但单独使用AuNPs检测物质会有很多内源性物质峰干扰质谱分析。镍铁-层状双氢氧化物(NiFe-LDHs)纳米片具有较大的表面积和丰富的暴露位点，具有吸附分析物质和增强紫外吸收的能力。结合这两种纳米材料的优势，本发明采用简易的自组装方法合成了AuNPs/NiFe-LDHs复合纳米材料，用于激光/解吸离子化(LDI)低分子量化合物和质谱检测甲硝唑及其代谢产物。由于表面对分析物的吸附表面积增加，AuNPs/NiFe-LDHs复合纳米材料作为LDI-MS基质用于实际样品的检测时，LDI-MS性能提高，所建立的AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF质谱可用于实际样品中甲硝唑及其3种代谢物的检测，具有背景信号少、重现性好、成本低、预处理简单、分析快速等优势。

本发明还提供一种所述的复合纳米材料的制备方法，包括以下步骤：

(1)合成AuNPs溶液：首先将柠檬酸三钠水溶液加热回流至沸腾，搅拌，再将氯金酸加入到沸腾的溶液中，加热回流反应，得到AuNPs溶液；

(2)将NiFe-LDHs分散于乙醇溶液中，100W超声10min，然后3000rpm离心5min，保留上清液；

(3)将AuNPs溶液与等体积的NiFe-LDHs上清液混合，室温超声处理(颜色：淡黄色→黑紫色→酒红色)，自组装得到AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料，即为所述复合纳米材料。

进一步地，所述步骤(1)柠檬酸三钠水溶液搅拌加入至沸腾，然后边加氯金酸边搅拌，加热回流反应3-10min。

进一步地，所述步骤(3)超声功率为150-250w，超声20-30min。

本发明提供所述的复合纳米材料在辅助激光解吸电离质谱分析中的应用。

本发明还提供所述的复合纳米材料在甲硝唑及其代谢物检测中的应用。

本发明公开了以下技术效果：

(1)本发明设计了一种新型AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料，并首次用于LDI-TOF质谱。

(2)与传统基质相比，本发明利用设计的新型AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料建立的LDI-TOF方法具有较高的峰值强度和较低的背景噪声。

(3)本发明可用于检测甲硝唑及其代谢物，检测结果重复性好，线性关系良好，可用于定量检测。

(4)本发明可用于实际样品中甲硝唑及其代谢物的检测，操作简单。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料制备过程及在LDI-TOF质谱应用的示意图；

图2为不同浓度的AuNPs/NiFe-LDHs的离子强度图；

图3为AuNPs/NiFe-LDHs，AuNPs和NiFe-LDHs的紫外-可见光谱图；

图4为AuNPs和NiFe-LDHs的透射电镜(TEM)图，左图为AuNPs的TEM图，右图为NiFe-LDHs的TEM图；

图5为AuNPs/NiFe-LDHs的TEM、HAADF-STEM和EDS mapping图；其中(A)TEM；(B)HAADF-STEM；(C)EDS mapping(Ni)；(D)EDS mapping(Fe)；(E)EDS mapping(Au)；(F)EDSmapping(O)；

图6为XPS和FTIR-ATR光谱图，其中(A)AuNPs/NiFe-LDHs的XPS全谱图；(B)XPS(Ni2p)；(C)XPS(Fe 2p)；(D)XPS(Au 4f)；(E)XPS(O 1s)；(F)AuNPs/NiFe-LDHs和NiFe-LDHs的FTIR-ATR图；

图7为MALDI-TOF MS色谱图和不同基质在LDI-TOF MS应用的离子强度图；其中(A)正离子模式下，五种不同基质检测甲硝唑及其代谢物混合样品的MALDI-TOF MS色谱图，(B)四种基质测定甲硝唑及其代谢物的LDI-TOF MS强度图每种分析物的浓度为50ng·μL^-1；

图8为四种标准品(MNZ、HMNZ、HAcMNZ和HEMNZ)与不同盐或蛋白质混合后的质谱图，其中(A)加入0.5M NaCl的样品；(B)加入0.5M KCl的样品；(C)加入5mg·mL^-1BSA；

图9为四种标准品(MNZ、HMNZ、HAcMNZ和HEMNZ)的强度图；

图10为甲硝唑及其代谢物在1-50ng·μL^-1的标准曲线图，其中(A)MNZ；(B)HMNZ；(C)HAcMNZ；(D)HEMNZ；

图11为AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF质谱法在水样品中的应用，其中，(A)W-1，添加量为15ng·μL^-1；(B)W-1，添加量为30ng·μL^-1；(C)W-2，添加量为15ng·μL^-1；(D)W-2，添加量为30ng·μL^-1。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

本发明AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料制备过程及在LDI-TOF质谱应用的示意图见图1。

本发明采用自组装法合成了AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料，并对其进行了TEM、SEM、XPS、UV-Vis和FTIR-ATR表征。与传统有机基质相比，AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF质谱具有更高的峰值强度和更低的背景噪声。在1～50ng·μL^-1(R²>0.98)范围内，MNZ及其代谢物的检测具有良好的耐盐性和蛋白性，重复性好，线性关系良好，LODs和LOQs分别为0.5ng·μL^-1和1ng·μL^-1。该方法可用于实际样品中锰锌及其代谢物的快速、准确分析。具体操作界面为：

(1)依据Frens法合成了纳米金材料，并稍作修改。调整了柠檬酸三钠(Mw258)和氯金酸溶液的加入顺序。首先将柠檬酸三钠水溶液加热回流至沸腾搅拌(约140℃)，再将氯金酸加入到沸腾的溶液中，加热回流3min，即得(颜色：淡黄色→黑紫色→酒红色)，根据质谱图结果筛选胶体溶液浓度。图2为不同浓度的AuNPs/NiFe-LDHs的离子强度图，由图2可以看出在1、0.5、0.2和0.1mM浓度下，均可以检出甲硝唑及其代谢物，其中0.2mM和1mM的效果最好，考虑到成本及强度问题，以下实施例采用0.2mM的浓度。

(2)将NiFe-LDHs分散于乙醇溶液中。

(3)将等体积的AuNPs溶液与NiFe-LDH上清液混合，室温超声处理，AuNPs和NiFe-LDHs自组装完全。

实施例1

(1)复合纳米材料AuNPs/NiFe-LDHs的制备

1)依据Frens法合成了纳米金材料，并稍作修改，调整了柠檬酸三钠(Mw258)和氯金酸溶液的加入顺序：首先将4mM的柠檬酸三钠(Mw 258)水溶液50mL加热回流至沸腾搅拌(约140℃)，将0.25mL 200mM的氯金酸加入到沸腾的溶液中，加热回流3min，即得(颜色：淡黄色→黑紫色→酒红色)粒径11-16nm，pH5.5的金纳米溶液(AuNPs溶液)，将获得的AuNPs溶液(Au浓度为1±0.001mM)用去离子水稀释4倍。

2)将25mg的NiFe-LDHs分散于100mL乙醇溶液中。

3)将等体积的AuNPs溶液与NiFe-LDH上清液(1:1，v/v)混合，在200W下室温超声处理30min。AuNPs和NiFe-LDHs自组装完全后，用于进一步分析。

(2)复合纳米材料AuNPs/NiFe-LDHs的表征

①利用紫外-可见光谱确定本发明的材料是否具有紫外吸收(有紫外吸收是应用于LDI-TOF MS的必备条件)，结果如图3所示。从图3可以看出AuNPs/NiFe-LDHs在355nm(MALDI使用的激光波长)处有紫外吸收，表明该材料具有应用于LDI-TOF质谱的潜力。此外，AuNPs/NiFe-LDHs在517nm处有一个特征峰(吸收强度为0.4-0.6)，这与AuNPs的局域表面等离子体共振(LSPR)理论增强的消光峰相对应。

②利用透射电镜(TEM)、高角环形暗场像-扫描透射电镜(HAADF-STEM)和能量分散X射线光谱图(EDS mapping)直观观察两种纳米材料的透射形貌(图4)和确定本发明的自组装方法是否可以组装完全以及金胶体颗粒是否均匀分散在NiFe-LDHs的表面(图5)。由图4可知AuNPs呈现球形，大约在11-16nm；NiFe-LDHs为片层状。由图5可知在AuNPs/NiFe-LDHs复合材料中，所有的纳米粒子都被修饰在NiFe-LDHs纳米片上未见到单一的金纳米粒子，说明金纳米颗粒全部与NiFe-LDHs复合；从EDS-mapping原位表征了Au、Ni、Fe等元素，表明Au均匀地分散在NiFe-LDHs纳米片表面。

③利用X射线光电子能谱(XPS)确定AuNPs/NiFe-LDHs纳米复合材料的元素组成和元素价态，结果如图6(A，B，C，D，和E)所示。

④利用红外光谱(FTIR-ATR)光谱进一步确认AuNPs与NiFe-LDHs之间的相互作用，结果如图6(F)所示。图6(A)XPS全谱看出该纳米复合材料中含有Ni、Fe、Au、O元素，如图6B所示，Ni的2p能级由Ni(OH)2p_1/2、NiO 2p_1/2、Ni(OH)2p_3/2、NiO 2p3/2和四个卫星峰组成。高分辨率XPS光谱中Ni 2p分别位于874.5、873.0、856.5和855.5eV。在高分辨率Fe 2p XPS光谱中，Fe 2p_3/2和Fe 2p_1/2分别出现了725.8eV和712.0eV的两个峰(图6C)。)这两个峰进一步分为两个峰(Fe³⁺2p_1/2和Fe³⁺2p_3/2，分别为725.0eV和711.4eV)和两个卫星峰。此外，Ni俄歇峰与Fe 2p峰重合，位于713.8eV(Ni LM5)。从图6D可以看出，还原形式Au 4f的峰值分别为87.2eV(Au 4f_5/2)和83.5eV(Au 4f_5/2)，结合能差为3.7eV。此外，在88.1eV和84.2eV处(结合能差3.9eV)出现了Au⁺的4f_5/2和4f_7/2峰。如图6E所示，在532.5eV，531.3eV和530.0eV处的O1s峰分别对应W为C-O，O-H和金氧化物区带。傅里叶变换红外衰减全反射(FTIR-ATR，图6F)光谱进一步证实了AuNPs和NiFe-LDHs之间的相互作用。NiFe-LDHs在3415、2980、1635、1335、618和417cm^-1处分别有吸收峰。其中，在3415cm^-1处的宽峰被认为是O-H基团的伸缩和弯曲振动，在1335cm^-1处的吸收带被认为是反对称CO₃ ^2-伸缩振动。与AuNPs自组装后，AuNPs/NiFe-LDHs纳米复合材料的主要吸收峰位于3396、2940、1582、1389、1280、1080和626cm^-1。在1582cm^-1和1389cm^-1处的特征带是由于COO-的反对称拉伸和对称拉伸造成的，与柠檬酸钠相似。带负电荷的柠檬酸离子的斥力使柠檬酸离子在松散分布在AuNPs/NiFe-LDHs表面上。因此，FTIR-ATR光谱表明成功制备了AuNPs/NiFe-LDHs。

(3)复合纳米材料AuNPs/NiFe-LDHs的性能评价

①利用设计的新型AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料建立的LDI-TOF方法，与传统基质及单独使用纳米材料的色谱比较，结果如图7所示；MNZ(m/z 172.1，[M+H]⁺；m/z 194.1，[M+Na]⁺)，HMNZ(m/z 188.1，[M+H]⁺；m/z 210.1，[M+Na]⁺)，HAcMNZ(m/z 214.1，[M+H]⁺；m/z236.1，[M+Na]⁺)和HEMNZ(m/z 216.1，[M+H]⁺；m/z 238.1，[M+Na]⁺)。从图7可以看出使用AuNPs/NiFe-LDHs检测MNZ及其代谢物，并与纳米材料(AuNPs和NiFe-LDHs)和传统有机基质(DHB和HCCA)进行比较。AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF质谱背景中没有目标信号峰，而HCCA引起的背景信号在m/z 172.1([M–H₂O]⁺)处与MNZ重合。尽管所有五个材料(AuNPs/NiFe-LDHs AuNPs，NiFe-LDHs，DHB和HCCA)可以用来找到目标底物峰，DHB和HCCA在低分子量范围165-245m/z内有很多干扰峰(图7)。这些干扰峰会影响水样的检测。

AuNPs/NiFe-LDHs、AuNPs和NiFe-LDHs均能检测到MNZ及其代谢产物(HMNZ；HAcMNZ；HEMNZ)和洛达硝唑(RDZ)。显然，自组装AuNPs/NiFe-LDHs材料MNZ、HMNZ、HAcMNZ和HEMNZ的强度显著高于NiFe-LDHs和AuNPs，的强度显著高于NiFe-LDHs(P<0.05)。AuNPs/NiFe-LDHs材料165～245m/z的干扰较小。

因此，它具有优越的性能。AuNPs/NiFe-LDHs材料具有强吸收的原因可能是可见光区表面等离子体共振和UV的单电子带间跃迁。由于其特有的理化性质，AuNPs/NiFe-LDHs具有较高的灵敏度和选择性，可以作为一种优良的纳米材料辅助LDI-TOF MS来检测MNZ及其代谢物。

②模拟复杂的实际样品环境，检验在样品中加入无机盐(NaCl、KCl)和蛋白质(牛血清蛋白，BSA)是否可以检测出实际样品，结果如图8所示，MNZ(m/z 172.1，[M+H]⁺；m/z194.1，[M+Na]⁺；m/z 210.1，[M+K]⁺)，HMNZ(m/z 188.1，[M+H]⁺；m/z 210.1，[M+Na]⁺；m/z226.1，[M+K]⁺)，HAcMNZ(m/z 214.1，[M+H]⁺；m/z 236.1，[M+Na]⁺；m/z 252.1，[M+K]⁺)，andHEMNZ(m/z 216.1，[M+H]⁺；m/z 238.1，[M+Na]⁺；m/z 254.1，[M+K]⁺)。从图8可以看出盐(NaCl和KCl，1M)和蛋白质(BSA，10mg·mL^-1)溶液与混合标准溶液(100ng·μL^-1)按1：1(v/v)的比例混合。如图8A所示，当NaCl浓度为0.5M时，MNZ的Na⁺加合信号为m/z 194.1[M+Na]⁺，HMNZ的m/z 210.1[M+Na]⁺，HAcMNZ的m/z 236.1[M+Na]+，HEMNZ的m/z 238.1[M+Na]⁺。添加0.5M KCl的样品，在质谱中存在一些离子加合信号，MNZ有m/z 172.1[M+H]⁺、m/z194.1[M+Na]⁺和m/z 210.1[M+K]⁺；HMNZ有188.1[M+H]⁺、m/z 210.1[M+Na]⁺和m/z 226.1[M+K]⁺；HAcMNZ有m/z 214.1[M+H]⁺，m/z 236.1[M+Na]⁺和m/z 252.1[M+K]⁺；HEMNZ有m/z 216.1[M+H]⁺，m/z 238.1[M+Na]⁺和m/z 254.1[M+K]⁺(图8B)。同样，当加入5mg·mL^-1BSA时，出现Na⁺加合信号，MNZ出现m/z 194.1[M+Na]⁺，HMNZ出现m/z 210.1[M+Na]⁺，HAcMNZ出现m/z 236.1[M+Na]⁺，HEMNZ出现m/z 238.1[M+Na]⁺(图8C)。因此，无需其他的前处理，AuNPs/NiFe-LDHs可以辅助MALDI检测富含盐和蛋白质的样品中的MNZ和代谢物。

③通过测定标准品(10ng·μL^-1和50ng·μL^-1)在同一点内(intra-spot)和不同点间(inter-spot)分别测定10次，评价AuNPs/NiFe-LDHs的重复性，结果如图9所示。从图9可以看出内和点间的10个重复的强度无显著变化，相对标准偏差(RSD)<20％，表明所建立的方法稳定。

④在信噪比分别为3和10的条件下，根据分析物的质量确定检测限和定量限，经水校正后，MNZ、HMNZ、HAcMNZ和HEMNZ的LODs和LOQs分别为0.5ng·μL^-1和1ng·μL^-1。

(4)复合纳米材料AuNPs/NiFe-LDHs在实际样品中的应用

①甲硝唑及其代谢物内标定量标准曲线的绘制。

为了解决传统的LDI-TOF质谱在定性或半定量分析中存在的随机分析依赖于电离的问题，我们开发了甲硝唑内标定量方法。将4种样品(1～50ng·μL^-1)和1种内标物(RDZ，20ng·μL^-1)溶于超纯水中，用AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF质谱法检测1μL样品。结果发现，以被测标准品与内标品的峰面积比为纵坐标，以被测标准品的浓度为横坐标，峰面积比与浓度之间有较好的线性回归关系，R²均大于0.98，说明内标定可成功应用于AuNPs/NiFe-LDHs辅助LDI-TOF MS检测甲硝唑及其代谢物质。MNZ、HMNZ、HAcMNZ、HEMNZ的标准曲线和色谱峰图结果，如图10所示。MNZ、HMNZ、HAcMNZ、HEMNZ的标准曲线和相关系数分别为:Y＝0.0065X+0.0438(R²＝0.9942)，Y＝0.0467X+0.0151(R²＝0.9958)，Y＝0.0135X+0.0206(R²＝0.9844)和Y＝0.0467X+0.0151(R²＝0.9958)。所建立的标准曲线适用于水样中不含223.1(m/z)，并利用内标RDZ(浓度调整到20ng·μL^-1)进行检测。

②在实际水样中的检测

AuNPs/NiFe-LDHs复合物适用于复杂环境样品的检测，由于本发明的材料，不会由于惯性和生物相容性而干扰待测物质的稳定性，检测了来自不同地方的两个水样中MNZ及其代谢物的含量，以评价该方法的实用性(W-1为山东新时代药业有限公司地表水；W-2为青岛宅科村粪水)。回收率计算公式为：

其中，A₁是检测实际样品中的面积，A₂是实际样品和加入标准物质的检测面积，A₃是添加标准物质的面积。

图11显示了在两个实际水样中的四种分析物的质谱。结果表明，MNZ的回收率为87.86～101.89％，RSD<16.99％。HAcMNZ、HAcMNZ和HEMNZ的回收率分别为98.99～102.55％、96.10～106.11％和99.06～122.04％，RSD值均小于20％(HMNZ为13.09％、HAcMNZ为18.81％、HEMNZ为15.62％)。详细资料见表1。

表1实际样品中MNZ、HMNZ、HAcMNZ、HEMNZ的分析结果。

注:ND表示‘未检出’

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (6)

1.一种复合纳米材料在辅助激光解吸电离质谱分析中的应用，其特征在于，所述复合纳米材料用于甲硝唑及其代谢物检测；

所述复合纳米材料包括金胶体溶液和镍铁-层状双氢氧化物，二者的体积比为(1-3)：(1-3)。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金胶体溶液的浓度为0.10-1.00mM，镍铁-层状双氢氧化物的浓度为0.20-0.30mg/mL。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金胶体溶液的浓度为0.20-0.50mM。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述复合纳米材料的制备方法，包括以下步骤：

(1)合成AuNPs溶液：首先将柠檬酸三钠水溶液加热回流至沸腾，搅拌，再将氯金酸加入到沸腾的溶液中，加热回流反应，得到AuNPs溶液；

(2)将NiFe-LDHs分散于乙醇溶液中，100W超声10min，然后3000rpm离心5min，保留上清液；

(3)将AuNPs溶液与等体积的NiFe-LDHs上清液混合，室温超声处理，得到AuNPs/NiFe-LDHs纳米材料，即为所述复合纳米材料。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)边加氯金酸边搅拌，加热回流反应3-10min。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)超声功率为150-250W，超声20-30min。

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