CN113215126A

CN113215126A - 一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基及其应用

Info

Publication number: CN113215126A
Application number: CN202110539465.4A
Authority: CN
Inventors: 张绍铃; 王利斌; 谢智华; 汤超; 张苏玲; 马敏; 张臻
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2021-05-18
Filing date: 2021-05-18
Publication date: 2021-08-06

Abstract

本发明公开了一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基及其应用，该种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基PbrSnRK1β1是具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的蛋白质；本发明的PbrSnRK1β1具有减轻液泡酸性转化酶抑制因子的作用，转入植物中，可提高其对蔗糖利用效率。

Description

一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基及其应用

技术领域

本发明涉及一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基PbrSnRK1β1及其应用。

背景技术

甜度是果实风味品质的重要组成部分，其主要取决于果实糖分组成和含量¹。液泡转化酶(vacuolar invertase，VI)是一种水解酶，不可逆地催化液泡蔗糖转化为果糖和葡萄糖，在植物生长、繁殖、抗逆和风味品质形成过程中都起着重要的作用¹。VI酶活性受液泡转化酶抑制因子(vacuolar invertase inhibitor，VII)的调节。VII可与VI形成无活性的复合体，调节液泡蔗糖水解过程¹。前期研究我们发现，梨液泡转化酶PbrAc-Inv1可以与液泡转化酶抑制因子PbrII5互做，协同调控果实液泡蔗糖水解进程¹。进一步有研究发现，蔗糖非酵解型蛋白激酶1(SNF1-related kinase1，SnRK1)的β亚基(SnRK1β)可以与VII以及VI互做，调控VI酶活性，进而影响液泡蔗糖水解过程²。梨是一种重要的落叶果树，在全球范围内广泛种植。但梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β)的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基PbrSnRK1β1。

本发明的又一目的在于提供上述梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基PbrSnRK1β1的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基，具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明所提供的蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基来源于蔷薇科梨属的‘丰水’梨，名称为PbrSnRK1β1。

所述蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)的编码基因也属于本发明的保护范围。

所述梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)的编码基因，具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

含有上述蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)的编码基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。

上述的梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)或其编码基因在调节果树果实糖含量或/和果实风味中的应用。所述的果树优选为梨，但不限于此。

一种梨果实的转基因育种方法，以上述蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)的编码基因作为靶基因，通过调控其表达进而调节梨果实的糖含量或/和果实风味。

本发明的有益效果：

本发明的蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1β1)具有液泡酸性转化酶活性，转入植物或微生物中，可提高其对蔗糖利用效率，从而提高产量。

附图说明

图1梨果实贮藏期间糖含量变化图。

图2梨果实贮藏期间液泡酸性转化酶(VI)活性变化。

图3梨果实贮藏期间PbrII5、PbrAc-Inv1和4个梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1βs)基因表达量热图。

图4梨果实贮藏期间糖含量、VI酶活性、PbrII5、PbrAc-Inv1和4个梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基(PbrSnRK1βs)基因表达量热图。

图5PbrSnRK1βs与马铃薯SbSnRK1β1氨基酸序列比对。

图6PbrSnRK1βs与马铃薯SbSnRK1β1蛋白模块分析。

图7PbrSnRK1β1亚细胞定位。

图8瞬时表达PbrSnRK1β1后其基因表达量变化。

图9瞬时表达PbrSnRK1β1后VI活性变化。

图10瞬时表达PbrSnRK1β1后果实果糖、山梨醇、葡萄糖和蔗糖含量变化。

图11体外VI酶活性测定验证PbrSnRK1β1功能。

图12酵母双杂交实验验证PbrSnRK1β1与PbrII5/PbrAc-Inv1互作。

具体实施方式

下述实施例中所述的方法，若无特别说明，均为常规方法。

实施例1

实施梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β1亚基(PbrSnRK1β1)的筛选和鉴定，并进行功能验证及互作验证。

我们首次鉴定了蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β1亚基(PbrSnRK1β1)，进行了序列及表达分析，并进行了功能研究。

1.VI的筛选与鉴定

对‘丰水’梨不同贮藏时期样品进行转录组测序、糖含量和VI活性测定，结合转录组注释、相关性分析、生物信息学分析和亚细胞定位分析，筛选出关键蔗糖非酵解型蛋白激酶1β亚基(PbrSnRK1β)基因。进一步通过梨果实中的过表达，对筛选出的关键基因进行功能验证。具体实施方法如下：

(1)关键VI的筛选

在南京农业大学梨种质资源圃中采集长势相近、无明显机械伤的‘丰水’梨，随机分组后套袋，贮藏于25℃条件下，每6天进行一次取样，直至腐烂率超过20％。

果糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖四种糖的提取和测定参考Ma,Wang,Zhang,Guo,Zhang,Li,Sun and Zhang ¹的方法，使用美国沃特斯公司生产的超高效液相色谱仪(UPLC)进行含量测定，流动相为1％(v/v)乙腈：超纯水＝85:15(v:v)，流速为0.2mL·min^-1，30℃。结果表明，在梨果实贮藏过程中，总还原糖含量稳定积累，其中，果糖和葡萄糖稳定累积，而蔗糖和山梨醇趋势相反(图1)。

VI活性测定使用苏州科铭生物技术有限公司生产的可溶性酸性转化酶(S-AI)测试盒(货号SAI-1-Y)进行。结果表明，在贮藏过程的0至18天，VI活性逐渐上升，但在贮藏最后阶段下降(图2)。

使用Invitrogen公司生产的RNA提取试剂盒对样品进行RNA提取，并使用Qiagen公司生产的无RNA酶的DNA酶去除其中的DNA杂质，转录组测序由北京百迈客生物科技有限公司完成。根据转录组注释，共获得4个蔗糖非酵解型蛋白激酶1β亚基(PbrSnRK1β)基因，分别为PbrSnRK1β1、PbrSnRK1β2、PbrSnRK1β3-1和PbrSnRK1β3-2(SEQ ID NO.1-8)。这些基因在果实贮藏过程中的表达模式不尽相同；其中，PbrSnRK1β1与PbrII5基因在贮藏过程中的表达模式相同，但与PbrAc-Inv1基因相反(图3)。将上述4个基因的表达量与糖含量、VI活性、PbrII5和PbrAc-Inv1 mRNAs进行相关性分析发现，PbrSnRK1β1基因可能是参与蔗糖代谢的关键基因(图4)。利用MFGA软件进行序列比对发现，梨PbrSnRK1β1与马铃薯SbSnRK1β(SEQID NO.9)氨基酸序列相似性较高(图5)，并且两者所含的蛋白模块基本一致(图6)。

亚细胞定位分析参考Ma,Wang,Zhang,Guo,Zhang,Li,Sun and Zhang ¹的方法，PbrSnRK1β1编码序列使用东洋纺(上海)生物科技有限公司生产的高保真酶DNA聚合酶KOD-Plus-Ver.2进行扩增(引物序列见表1)，随后接入pCAMBIA 1302载体中，并与液泡标记(AtTPK-mkat)共转化入水稻原生质体中。使用德国蔡司公司生产的激光共聚焦扫描显微镜(LSM510 Meta)进行结果观察。如图7所示，PbrSnRK1β1-GFP融合蛋白定位于液泡膜。

表1为上述实验中涉及的相关引物

(2)关键VI基因的功能验证

将PbrSnRK1β1基因在梨果实中瞬时表达进行其功能验证。

瞬时表达验证方法参考Ma,Wang,Zhang,Guo,Zhang,Li,Sun and Zhang ¹的方法，PbrSnRK1β1的开放阅读框序列使用东洋纺(上海)生物科技有限公司生产的高保真酶DNA聚合酶KOD-Plus-Ver.2进行扩增(引物序列见表1)，随后接入pCAMBIA 1300载体并转入农杆菌(A.tumefaciens)中，菌株为EHA105。在28℃条件下震荡培养直至OD₆₆₀为1.0，将菌液离心去除上清液后再悬浮于缓冲液中。选取成熟期大小一致、无明显机械损伤的梨果实，在每个梨中部选取5个点，用注射器将农杆菌液缓慢注入靠近表皮的果肉组织中。注射完毕的梨果实在25℃条件下放置5d，随后进行取样测定其糖含量及基因表达量。基因表达量使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行测定¹(引物序列见表1)，相对表达量使用2^-△△Ct法进行计算。

结果表明过表达PbrSnRK1β1基因后，基因表达量明显上升(图8)，VI活性也明显上升(图9)，同时果实中蔗糖含量减少，而果糖和山梨醇含量增加(图10)。

2.PbrSnRK1β与PbrII5/PbrAc-Inv1互作验证

在获得梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β1亚基(PbrSnRK1β1)后，通过体外酶活测定以及酵母双杂交实验对两者的互作进行验证。具体实施方法如下：

(1)体外VI酶活性测定验证PbrSnRK1β1功能

将PbrII5和PbrSnRK1β1基因cDNA序列加入His标签后进行扩增(引物序列见表1)，插入pET30a载体，转入大肠杆菌中，同时加入1mM IPTG使其大量表达。将提取蛋白后，使用默克公司生产的Ni-NTA His-Bind树脂将目标蛋白进行分离纯化。

体外酶活测定方法参考Ma,Wang,Zhang,Guo,Zhang,Li,Sun and Zhang¹的方法，将PbrSnRK1β1或PbrII5与VI酶粗提取液在37℃条件下孵育30min后测定VI酶活性。结果显示，与对照相比，加入PbrII5后VI酶活性被显著抑制，而PbrSnRK1β1可减轻这种抑制效果(图11)。

(2)酵母双杂交实验(Y2H)验证PbrSnRK1β1与PbrII5/PbrAc-Inv1互作

方法参考Qin等人，将PbrSnRK1β1、PbrII5与PbrAc-Inv1的cDNA序列克隆后接入美国Clontech公司生产的pGBKT7(BD)或pGADT7(AD)载体中，引物序列见表1，将其共转化入酵母菌株S.cerevisiae AH109中，并设置阳性对照和阴性对照，使其在SD-LT(SD/-Leu/-Trp)和SD-LTHA(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)培养基上生长并观察。

结果表明，共转化AD-PbrSnRK1β1和BD-PbrII5/PbrAc-Inv1的酵母在SD-LTHA培养基上能够正常生长，而相应的对照组中没有生长，因此可推断PbrSnRK1β1和PbrII5/PbrAc-Inv1存在互作(图12)。

3.结论

我们首次鉴定了一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β1亚基PbrSnRK1β1，表达分析及理化性质分析显示了其功能，并通过梨果实中的瞬时表达进行了验证。此外，通过体外酶活测定和酵母双杂交实验对PbrSnRK1β1与PbrII5/PbrAc-Inv1的互作进行了验证。

PbrSnRK1β1基因可作为梨果实转基因育种的重要靶基因，可通过调控其表达调节进而梨果实的糖含量，并改变其风味。此外，PbrSnRK1β1基因还可作为重要基因资源，在梨果实以外的其他果树树种的糖含量及风味调节中得到应用。

参考文献

1.Ma,M.；Wang,L.；Zhang,S.；Guo,L.；Zhang,Z.；Li,J.；Sun,L.；Zhang,S.,Acidvacuolar invertase 1(PbrAc-Inv1)and invertase inhibitor 5(PbrII5)wereinvolved in sucrose hydrolysis during postharvest pear storage.Food Chemistry2020,320.

2.Lin,Y.；Liu,T.；Liu,J.；Liu,X.；Ou,Y.；Zhang,H.；Li,M.；Sonnewald,U.；Song,B.；Xie,C.,Subtle Regulation of Potato Acid Invertase Activity by a ProteinComplex of Invertase,Invertase Inhibitor,and SUCROSE NONFERMENTING1-RELATEDPROTEIN KINASE.Plant Physiology 2015,168,1807-1819.

序列表

SEQ ID NO.1

PbrSnRK1β1PRT

梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

MGNVNGREDGGGSPSAAEEDSGAVGILQEGPAHGGRLVHGSAELMGQSPPHSPRATHSPLMFTPQVPVVPLQRPDEIQIPNNSWMQTSGFEDMCCEQGIPTMITWSYGGKDVAVEGSWDNWKTRWALQRSGKDFTIMKVLPSGVYQYRFIVDGQWRCSPDLPLAQDDAGNSYNLLDLQDYVPEDIGSISGFEPPQSPDSSYNNLQLGSEDFAKEPPSVPPHLQMTLLNAPSSYMEMPPPLSRPQHVVLNHLYMQRGKSGPSVVALGTTERFIAKYVTVVLYKSLQR

SEQ ID NO.2

PbrSnRK1β1DNA

梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

ATTTATATTAAACGGGGGGGTTCTCTTTGCTGGGCTCTTTCTTTTCGTTTTGACGCCCAATCAATCTAAATTCGTGAGCTTTGTGGGATTTAAGGTTGCATCGTATGAGATTGGATTCCAACTCTGCAAAGTGGGTATTTATTATGCATCTGTAGTTTTATTTTCTTGGCTTGGTGCTTGGTGCTTGGTGCTTGTTGCTAGCAGAGGTCATATCCAAGCAATTGGGATGGGGAATGTGAATGGGAGAGAAGATGGTGGTGGAAGCCCCTCTGCGGCCGAGGAAGACAGCGGTGCCGTCGGCATCTTGCAGGAGGGCCCTGCCCACGGCGGCCGTCTTGTTCATGGCTCCGCTGAGTTGATGGGTCAATCACCTCCTCATAGCCCTAGGGCCACTCACTCCCCTTTGATGTTCACTCCCCAAGTCAGTTCCTTTTTCTCTCCTCATCTTACTTGTTTTCAAGGTTTTTGCTTTTCTTAATTTTTCCACCGAGATTCAATTTTACCCAACTGCCATCGAATTGCTTTTTTTTCCTAGAATTGGGGGCTTTTGTGATTCAGCTTAGAACTGGCTCTGTGAATTATGCTGTCCAATTCTTCATTCCTTTTTATTGATAACTTGCTAAGAGGCGGCCCAAATCATACAATTTCTTGTTTCTTTGTGACAAGTCTGTATTTTGGATCATTGTTGTAGCAGAAACTGAAACATGAGTGGTTAATCGTTGGGGAACTGATTGCGCGAACCAAGTAATAATTTTGATACCAACATCCTTCCTCCTCCTCCAGTTCTGAATTGGAATATCCGTTTTACATGAATCTGTCTCTTGGTGCACTACCAGATACTAACACTAAAAGTTTTTAATGCTAAGATCCTTTAGAAATACCATTGGTAATCTGCTTCTGCTCCAGTATATATGATACTCTCAGTCAATGCCCTGAAATATGTTTATCTTACTTGTACCCTTGCCTGTTACTCACACTGATGTATTTGATCTACGGCGATCCATGATATTTTTCCTCTTGTTCAATTATTATTATTATTATTATTCTTTTTCCAGGTCCCTGTGGTTCCCTTACAAAGACCAGATGAGATACAAATCCCAAACAACTCGTGGATGCAAACGTCGGGGTTTGAAGACATGTGCTGTGAGCAAGGAATTCCGACTATGATTACATGGAGCTATGGTGGGAAGGATGTAGCTGTGGAGGGATCATGGGATAATTGGAAGACAAGGTTTTCGAAAATAATAGAAAGAATAATAAGTGGTTTAGATTGTGAATATAGTTTTTGCACTATGTGAACTCTTACTTGAGTTCTTTATTCTATCTTGGTTTTCAGATGGGCTTTACAGAGATCAGGGAAGGACTTCACTATTATGAAAGTACTGCCATCCGGTGTTTACCAATATAGGTTTATTGTTGATGGGCAGTGGAGGTGTTCCCCTGACTTGCCCTTGGCCCAAGATGATGCTGGGAATTCTTACAACCTTTTGGACTTGCAGGTAATGGTTGTCATCTCTTCTTAGGTTGATACGTGTTTTGGATGAGTGTAACAACCCCATTATAATTGCTTATAACTGTTCATAATCTAAACCAGATAAAGGAAACTCCTAGTCAGATCTTATAAGTAGTGTAACCTTCTTGTAGGATTGAATAAGGGAATAATGAGTATAACCTTTTTTTGAAATGTCCTCTATTCTTTAGCAGGGAAAAGCTCATTTCAGAGTTAGGGATTGCTTGATGTTTATTGTAATATCATCATTCAGAAACTGCATTCATACGAATTTGTTAAAGCATTCAAGTACCCCTTTTTTAGCTTAATCTATTTATGTTTTTTTTTTTCCAGTCTCAACTTAATTCTGTTTATGCAAATCCTACTTTTCAGGATTTTGATTTCCTTTAACTATTCAATGATGATATTAGGCTGTATGGACTAGGGAATATCAGTTATATTGTGTTGACGATATTTCTCATATTCATACAACCGATATATCATATACCATAGTCCATAGTCCATAGTCCATGCATATAAACTTTCCTTTTATACGTTCCATTCAAGTTTCACGTCATTAGAGTCTAATTTCTTTAGTAACGATTTGTGTTGTTATATATGTGCTTTGAAAGCCTCAATAATTAATACCTTCAACATAGCTTAGCTGTTAAATTCATGTTTACCTTTTAAGTAGACTGCTTTTTCGCCACCATTGTGTATCTACTTTCTGTTCGTAAAGCTCTCTATCCAAATTTCTGTTTTTAAGCCTGCACAAAGCTGTCTGCAAAAGAGGAAAATCACGTTGAGCCCAATTAAGTAGATCAGGTTGGACTTGGGGTTGGCTTCTAACTTGAAACACATTGATACAAGACAAACACCAGGGATTTCCTATATCTTGTATAACTCCTACCAAATTGTTAAAACGTCCTGAAACTTATTTTCAACTCTACTCGAGATGGGGAAGACTAGGTCTCTGTCAAACGACAAAATGATATTTCATATGGTCCTGTTCATGGAAATCTTTGTCTTTTCCGGTGAGCTGTAATTATCCCTTTCTTTCATGTGTTCGTTTGGATATTACATAGAGAGTAGGTGACACGCCCCCATCCCGATGTCCCGAGGACATCAGGATTGGGGATCCCGTGTCAGTTGGTAGTTATAGCTTTCGTCTACAGGACTAATAAGAGAAGGATCAAATTACAGCCGATTAAAACTTCTTTCTGTTGCACCGCTCTACTTTTAGTCAAACTTGGAGATGATGAGAAATTTATATGCCGTGATTAAAAAAAAGTGCTTGAAATGATAATTTTGTTATTGTTTAAATGTTGGCGAAGAGCGCGAGCTTATGGATCAGACAAAATGACATTCAGTTGATGTAATTTAGCACTTTTTCATTATGTGTGTGTGTGTGATTTTTGAAATTGCACATTTTTTATGAGGATTTTTAATCAATATGTTGTGTTACCCTTTTCTTTTATATTTTCTAAATTACTGCCATCAGTTCTAAATCTCTATAGTGGCATGACAGATGTAAACAGAATGCACTCGTATTTTCTCATTTATTGGTTGCCTGGGTCTTGACCTATAGTTTTAAGTATTAGTGTTGAAATTGTTTGAAAACTGGGCTTGGATGCGCAAGTTCTGTAAGCTGTTTGATATTGTTGGTTCTTCTGCAGGATTATGTTCCAGAAGACATCGGAAGCATTTCCGGCTTTGAACCTCCCCAGTCGCCGGACTCAAGTTACAACAACCTGCAGCTTGGATCTGAAGATTTTGCGAAGGAGCCCCCATCGGTTCCTCCACACCTACAAATGACACTGTTGAATGCACCTTCATCTTACATGGAGATGCCGCCTCCTTTGTCAAGACCTCAACATGTGGTACTCAACCATCTTTACATGCAGAGAGGGAAGAGTGGACCATCTGTGGTGGCACTCGGGACAACAGAGAGGTTTATAGCGAAGTATGTTACAGTGGTTCTCTACAAGTCCTTGCAGAGATAAAAGAGAAAAAAAACATACACTAAGTGTCTGCCTGGACTCCACGGATCCCATTATGTAGTTAGCTTTATATGAATTTCAAAGTCAAATGCCATTTTCGTGGCATCGGTTATGTTGAGGAAGGATTTGTATTTTCACACAATTCCATTGCTTAATGACCATTGATCCATCTTCTTTTGCATACTTAATTCTTTCACTCGCGCTTATTGGCTGTTTGTTTCTCTTCAGTTGTACAAGAAAAAGGGTGAAAGAATGAATTTTGTTGACTACCCTTATCACCCTATCTGCATTCTCTTCAAATTTTCTACTTCCAC

SEQ ID NO.3

PbrSnRK1β2PRT

梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

>PbrSnRK1β2

MGNVNGREDEDGSPSAAEEDSGAAGSLQEGPAHGARLVDGSAELMGQSPPHSPRATHSPLMFTPQVPVVPLQRPDEIQIPNSSWMQTSGFEDMCCEQGIPTMITWSYGGKDVAVEGSWDNWKTRLALQRSGKDFTIMKVLPSGVYQYRFIVDGQWRCSPDLPLTQDDAGNSYNLLDLQDYVPEDIGSISGFEPPQSPDSSYNNLQLGSEDFAKEPPLVPPHLQMTLLNAPSSYMEMPPPLSRPQHVVLNHLYMQRGKSGPSVVALGTTERFIAKYVTVVLYKSLQR

SEQ ID NO.4

PbrSnRK1β2DNA

梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

>PbrSnRK1β2

CTTCCATCTCTCTCTATATTATATATAAAAACGGGGTTGTCTTTCTGGGGCTCTTTTTTAGAGTTTTGACGCCCAATCAATCAAATTTGTGAGCTTTGTGGGATTTAAGGTTTCATCATATGAGATTGGATTCCAATTCTGCAAAGTGGGTATTATTATGCATCAGTAATTTCGTTCTCGTCGGTTGGTGCTTGTTGCTAGCGGAGGTCATATCCAAGCAATCAGGATGGGGAATGTGAATGGGAGAGAAGATGAGGATGGAAGCCCCTCAGCGGCCGAGGAAGATAGCGGTGCCGCCGGCAGCTTGCAGGAGGGCCCTGCCCACGGCGCCCGTCTTGTTGATGGGTCCGCTGAGTTGATGGGTCAATCGCCTCCTCATAGCCCTAGGGCCACTCACTCCCCTTTGATGTTCACTCCCCAAGTCAGTTCCTTTTTTCTCTCCTCATCTGTTTCCTCATGTCACTTGTTTTCAAGGTTTTTTGCTTTTCTTAATTTTTCCACGGAGATTCAGATTTTACCCAACTGCCATCGAATTGCATTTTTCGTAGAATTGGGGGCCTTTATGATTCAGCTTAGAATTGCTTGTGTGAATTATGCTGTGCAATTGTTCTTTCCTTTTTATTGATATCTTGCTGAGAGGCGGCCAAATCGTACAATTTCTAGTCTTTATTTTGGATCATTGTATTACCAAAAACAGAGATTTGACTTGTGGTTCTCCTTGAGGGTCTGAATTTCGGAGCGTTGTAGGGGCAGAAACTGAAAAATGAGTGGTCAATCGTTGGGAGACATTGAGCGAAACCAAGTAGTAAACTTTGATTCCGACATCCTTCCTCCTCCTCCAATTCTGAAATTGGGATATCAGGTTTACATGAATCTGTCTCTTGGTGCAATACAAACACTTAAACTTTTAATGCTAAGATCCTTTAGAAATACCATTGTGCACCAACCCATTGGTAATCTGCCTTCTGCTCAAGTATATATGATAAGCTCGGTCAACTCCCTGAAAACGTTTTCCTTGCTTGTAGCCTTGCCAGTTACCCAAGCTGATGTATTTTCTTATTTTTTGATCTACGGCGATCCATAAGTTTCTTCCTCTTGTTCAATTATTATTATCATCTTCTTTTTCCAGGTCCCTGTCGTCCCCTTACAAAGACCAGATGAGATACAAATTCCAAACAGCTCGTGGATGCAAACGTCAGGGTTTGAAGACATGTGCTGTGAGCAAGGAATTCCAACTATGATTACATGGAGCTATGGTGGGAAGGATGTAGCTGTGGAGGGATCATGGGATAATTGGAAGACAAGGTTCCTGAAAATAAAAGAAAGAATAATAAGTATTCTAGATTATGAATATAGTTTGCACTATGTGAACTCTTGCCTAAGTTCTTTATTCTATCTTGTTTTTCAGATTGGCCTTGCAGAGATCAGGGAAGGACTTCACTATTATGAAGGTACTGCCATCCGGTGTTTACCAATATAGGTTTATTGTTGATGGGCAGTGGAGATGTTCTCCTGACTTGCCCTTGACCCAAGATGATGCTGGCAATTCTTACAACCTTTTGGACTTGCAGGTAATGATTGTCATCTCTTCTTAGGTTGATACATGTTTTGAATGAGTGTGACAATCCCATTACAGTAGCTCATAACTGTTTATAATCCCAACCTGAAAGTAGTATAACCTTCTTTTAGGATTGAACAAGGGATTGTTTGGTGTTTATTATAATATCATCATTCAGGAACTGTATTCATCCGAATTTGTTAAAGCATTTGGATATCCTTTTTTAGCTTAATACTGTTTATGCTTTTTGTTCCAGTCTGAACTTAATTCTGTTTATGTAAGTCCTACTTTTCATGATTTTGATTTCCGTTAACTATTCAATGATGATAGTCGATTGTGTGGACTAGGGAATAACAGTTATATTGTGTTGATGATATTTCTCGTATTCATGCAACCGATATTTCATATTCAATAGTCCATAGTGCATACATATAAGCTTTCCTTTTATACGTACCATTCAAGTTGTCAGTCATTAGAGTCTAATTTCTTCAGTAACAATATTGTGTTGTTATATATGTGTTTTGAAAGCGTCTGTATTTAATACCTTCACCATGCTTAGCTGTTAAATTCATGTTTACATTTTAGGTAGACTGCTTTTTCACCTCCATTGCATATCTAATTTCTGTTCATAAAGCTCTCTATCTAAATTTCTGTTTTTAAGCCCGTGCAAAGCTGTCTGCAAAAGAGAAATTTGCATTGAGCCCAATTAAGTAGATCAGGTTGGACTTAAGGTCAGCCTCTAACTTGAAACACGTTGATACAAGACAAAAACCAGGGATTCCCTATATCTAGTATGACTCCGACCAAATTGTGAAAACCTCCTGAAACCTATATTCAACCCTAATCGAGATGGGGAAGACTAGGTCTCTGTTGAAAGACTAAATGATATTTCATAAGGTCCTGTTCAGGTAGCCTTTGTCTTTTCCAGTGAGCTGTAATGATCCCCTTCTTTCATGTGTTGGTTTGGATATTACATAGAGAGTGGGCAATTAAAGTTATTGTATATAGTACTAATAAGAGAAGGATCAAATTACAGCTGATTAAAACTTCTTTCTGTGCACCTCTCTACTTTGAGTCAAACTTGGGGACGATTAGAAATTTATATGCCGCAATTAAAAACGAAGTGCTCTAAATGATAATTTTGTTATTGTTTTAATGTTGGAAAAGAGCGTGAGTTTATTCATCAGACTAAAATGACATTTCAGTTGATGTAAATTTAGCACTTTTTTTCGTATGTGTGTGTATGAGAGATTATTGAAATTGCACATTTGTATGAGGATTTTTAATCAATAGGTTGTGTTAAACTTTTCTTATATATTTTTCTAAATTAGTGCCGTCAGTTGTAATTCTCTATAATGGCATAATGGATACATGTAACATGCAACAGAATGCGTCGTATTTTCTGGGTTGCCTGAGTCTTGACCTTTGGTTTTAAGTACGAGCGTATAGAATTGTTTGAAAACTGGGCTTGGATGTGTGAGTCCTATAAGCTGATTGATATTGTTGGATTCTTCTGCAGGATTACGTCCCAGAAGACATCGGAAGCATTTCTGGTTTTGAACCTCCCCAGTCGCCAGACTCAAGTTATAACAACCTGCAGCTTGGATCTGAAGATTTCGCGAAGGAGCCCCCATTGGTTCCTCCACACCTACAAATGACACTGCTGAATGCACCTTCATCTTACATGGAGATGCCGCCTCCTTTGTCGAGACCTCAACATGTGGTACTCAATCATCTGTACATGCAGAGAGGGAAGAGTGGTCCATCTGTGGTGGCACTTGGGACAACAGAGAGGTTTATAGCGAAGTATGTTACAGTGGTTCTCTACAAGTCTTTGCAGAGATAAGAAAACACACACACAAAGTGTCTGTCTGGACTCCACGGTTCCCATTATGTAGTTAGTTTTATATCAATTTCAAAGTCAAATGCCATTTCCATGGCGTCGGTTTATGTTCAGGAAGG

SEQ ID NO.5

PbrSnRK1β3-1 PRT

>PbrSnRK1β3-1

MNNSFGDDYDEATVAGFEVLRSPDASYNNVYPGNEDEAQDPPLVPPQLQQTLLSYPASADTTGTLPLPQNLTLNHLYIEKQETPQSVVALGFTHRFRSKFVTVVLYKPVQRRGTTSS

SEQ ID NO.6

PbrSnRK1β3-1 DNA

>PbrSnRK1β3-1

ATGAACAACTCATTTGGTGATGATTATGTAAGTCTTTGGAACATTAGTGATTTTATTGTCTACACAAACAAAATAGGGCAACCTTAACACTTTGTGTGCAGGATGAAGCAACTGTTGCAGGATTTGAAGTTTTAAGATCACCCGATGCAAGTTACAACAATGTGTACCCAGGGAATGAAGACGAGGCCCAGGATCCACCTCTTGTCCCTCCACAGCTACAACAGACGTTACTTAGTTACCCAGCAAGTGCAGACACTACTGGAACTCTTCCCTTACCGCAAAACTTGACACTCAACCATCTTTACATTGAGAAACAGGAGACCCCACAATCTGTGGTCGCACTTGGGTTCACTCATCGCTTTCGTTCAAAATTTGTTACAGTTGTGCTTTACAAACCAGTTCAAAGAAGGGGCACTACCAGCAGTTAG

SEQ ID NO.7

PbrSnRK1β3-2 PRT

>PbrSnRK1β3-2(Pbr030333.1)

MNNSFGDDYDEATVAGFEVLRSPDASYNNVYPGNEDEARDPPLAPPHLQQTLLSYPASADTAGTLPAPQNVTLNHLYIENRETPRSVVALGFTHRFRSKFVSVVLYKPVQRSGTNSS

SEQ ID NO.8

PbrSnRK1β3-2 DNA

>PbrSnRK1β3-2

ATGAACAACTCATTTGGTGATGATTATGTAAGCCTTCGGAACCTTAATGTTTTTATTTTCCACTCAAATAAAATAGGGCAACCTTAAAACTTTATGTGCAGGATGAAGCAACTGTTGCAGGATTTGAAGTTTTAAGATCACCCGATGCAAGTTACAATAACGTGTACCCTGGGAATGAAGACGAGGCACGGGATCCACCTCTTGCCCCTCCACATCTGCAACAGACATTACTTAGTTACCCAGCAAGCGCAGACACTGCGGGAACCCTTCCAGCACCGCAAAACGTGACACTCAACCATCTTTACATTGAGAACCGGGAGACCCCACGCTCTGTGGTCGCACTTGGCTTCACTCATCGCTTTCGTTCAAAATTTGTTTCAGTTGTGCTTTACAAACCAGTTCAAAGAAGTGGGACTAACAGCAGTTAG

SEQ ID NO.9

SbSnRK1βPRT

>SbSnRK1β

MGNANAREDGAAVDGDGDGEVSGRRSNVESGIVEDHHALTSRVPSVDLMVNSPPQSPHRSASPLLFGPQVPVVPLQGGDGNPVSNQMWGNECQDASDHSLEGGIPTLITWSYGGNNVAIQGSWDNWTSRKILQRSGKDYTVLLVLPSGIYHYKFIVDGEVRYIPELPCVADETGIVFNLLDVNDNVPENLESVAEFEAPPSPDSSYAQTLLGDEDFAKEPVAVPPQLHLTVLGSENSEEAPSSPKPQHVVLNHLFIEKGWASQSVVALGLTHRFQSKYVTVVLYKPLKR

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基及其应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 286

<212> PRT

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 1

Met Gly Asn Val Asn Gly Arg Glu Asp Gly Gly Gly Ser Pro Ser Ala

1 5 10 15

Ala Glu Glu Asp Ser Gly Ala Val Gly Ile Leu Gln Glu Gly Pro Ala

20 25 30

His Gly Gly Arg Leu Val His Gly Ser Ala Glu Leu Met Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Pro His Ser Pro Arg Ala Thr His Ser Pro Leu Met Phe Thr Pro

50 55 60

Gln Val Pro Val Val Pro Leu Gln Arg Pro Asp Glu Ile Gln Ile Pro

65 70 75 80

Asn Asn Ser Trp Met Gln Thr Ser Gly Phe Glu Asp Met Cys Cys Glu

85 90 95

Gln Gly Ile Pro Thr Met Ile Thr Trp Ser Tyr Gly Gly Lys Asp Val

100 105 110

Ala Val Glu Gly Ser Trp Asp Asn Trp Lys Thr Arg Trp Ala Leu Gln

115 120 125

Arg Ser Gly Lys Asp Phe Thr Ile Met Lys Val Leu Pro Ser Gly Val

130 135 140

Tyr Gln Tyr Arg Phe Ile Val Asp Gly Gln Trp Arg Cys Ser Pro Asp

145 150 155 160

Leu Pro Leu Ala Gln Asp Asp Ala Gly Asn Ser Tyr Asn Leu Leu Asp

165 170 175

Leu Gln Asp Tyr Val Pro Glu Asp Ile Gly Ser Ile Ser Gly Phe Glu

180 185 190

Pro Pro Gln Ser Pro Asp Ser Ser Tyr Asn Asn Leu Gln Leu Gly Ser

195 200 205

Glu Asp Phe Ala Lys Glu Pro Pro Ser Val Pro Pro His Leu Gln Met

210 215 220

Thr Leu Leu Asn Ala Pro Ser Ser Tyr Met Glu Met Pro Pro Pro Leu

225 230 235 240

Ser Arg Pro Gln His Val Val Leu Asn His Leu Tyr Met Gln Arg Gly

245 250 255

Lys Ser Gly Pro Ser Val Val Ala Leu Gly Thr Thr Glu Arg Phe Ile

260 265 270

Ala Lys Tyr Val Thr Val Val Leu Tyr Lys Ser Leu Gln Arg

275 280 285

<210> 2

<211> 3803

<212> DNA

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 2

atttatatta aacggggggg ttctctttgc tgggctcttt cttttcgttt tgacgcccaa 60

tcaatctaaa ttcgtgagct ttgtgggatt taaggttgca tcgtatgaga ttggattcca 120

actctgcaaa gtgggtattt attatgcatc tgtagtttta ttttcttggc ttggtgcttg 180

gtgcttggtg cttgttgcta gcagaggtca tatccaagca attgggatgg ggaatgtgaa 240

tgggagagaa gatggtggtg gaagcccctc tgcggccgag gaagacagcg gtgccgtcgg 300

catcttgcag gagggccctg cccacggcgg ccgtcttgtt catggctccg ctgagttgat 360

gggtcaatca cctcctcata gccctagggc cactcactcc cctttgatgt tcactcccca 420

agtcagttcc tttttctctc ctcatcttac ttgttttcaa ggtttttgct tttcttaatt 480

tttccaccga gattcaattt tacccaactg ccatcgaatt gctttttttt cctagaattg 540

ggggcttttg tgattcagct tagaactggc tctgtgaatt atgctgtcca attcttcatt 600

cctttttatt gataacttgc taagaggcgg cccaaatcat acaatttctt gtttctttgt 660

gacaagtctg tattttggat cattgttgta gcagaaactg aaacatgagt ggttaatcgt 720

tggggaactg attgcgcgaa ccaagtaata attttgatac caacatcctt cctcctcctc 780

cagttctgaa ttggaatatc cgttttacat gaatctgtct cttggtgcac taccagatac 840

taacactaaa agtttttaat gctaagatcc tttagaaata ccattggtaa tctgcttctg 900

ctccagtata tatgatactc tcagtcaatg ccctgaaata tgtttatctt acttgtaccc 960

ttgcctgtta ctcacactga tgtatttgat ctacggcgat ccatgatatt tttcctcttg 1020

ttcaattatt attattatta ttattctttt tccaggtccc tgtggttccc ttacaaagac 1080

cagatgagat acaaatccca aacaactcgt ggatgcaaac gtcggggttt gaagacatgt 1140

gctgtgagca aggaattccg actatgatta catggagcta tggtgggaag gatgtagctg 1200

tggagggatc atgggataat tggaagacaa ggttttcgaa aataatagaa agaataataa 1260

gtggtttaga ttgtgaatat agtttttgca ctatgtgaac tcttacttga gttctttatt 1320

ctatcttggt tttcagatgg gctttacaga gatcagggaa ggacttcact attatgaaag 1380

tactgccatc cggtgtttac caatataggt ttattgttga tgggcagtgg aggtgttccc 1440

ctgacttgcc cttggcccaa gatgatgctg ggaattctta caaccttttg gacttgcagg 1500

taatggttgt catctcttct taggttgata cgtgttttgg atgagtgtaa caaccccatt 1560

ataattgctt ataactgttc ataatctaaa ccagataaag gaaactccta gtcagatctt 1620

ataagtagtg taaccttctt gtaggattga ataagggaat aatgagtata accttttttt 1680

gaaatgtcct ctattcttta gcagggaaaa gctcatttca gagttaggga ttgcttgatg 1740

tttattgtaa tatcatcatt cagaaactgc attcatacga atttgttaaa gcattcaagt 1800

accccttttt tagcttaatc tatttatgtt tttttttttc cagtctcaac ttaattctgt 1860

ttatgcaaat cctacttttc aggattttga tttcctttaa ctattcaatg atgatattag 1920

gctgtatgga ctagggaata tcagttatat tgtgttgacg atatttctca tattcataca 1980

accgatatat catataccat agtccatagt ccatagtcca tgcatataaa ctttcctttt 2040

atacgttcca ttcaagtttc acgtcattag agtctaattt ctttagtaac gatttgtgtt 2100

gttatatatg tgctttgaaa gcctcaataa ttaatacctt caacatagct tagctgttaa 2160

attcatgttt accttttaag tagactgctt tttcgccacc attgtgtatc tactttctgt 2220

tcgtaaagct ctctatccaa atttctgttt ttaagcctgc acaaagctgt ctgcaaaaga 2280

ggaaaatcac gttgagccca attaagtaga tcaggttgga cttggggttg gcttctaact 2340

tgaaacacat tgatacaaga caaacaccag ggatttccta tatcttgtat aactcctacc 2400

aaattgttaa aacgtcctga aacttatttt caactctact cgagatgggg aagactaggt 2460

ctctgtcaaa cgacaaaatg atatttcata tggtcctgtt catggaaatc tttgtctttt 2520

ccggtgagct gtaattatcc ctttctttca tgtgttcgtt tggatattac atagagagta 2580

ggtgacacgc ccccatcccg atgtcccgag gacatcagga ttggggatcc cgtgtcagtt 2640

ggtagttata gctttcgtct acaggactaa taagagaagg atcaaattac agccgattaa 2700

aacttctttc tgttgcaccg ctctactttt agtcaaactt ggagatgatg agaaatttat 2760

atgccgtgat taaaaaaaag tgcttgaaat gataattttg ttattgttta aatgttggcg 2820

aagagcgcga gcttatggat cagacaaaat gacattcagt tgatgtaatt tagcactttt 2880

tcattatgtg tgtgtgtgtg atttttgaaa ttgcacattt tttatgagga tttttaatca 2940

atatgttgtg ttaccctttt cttttatatt ttctaaatta ctgccatcag ttctaaatct 3000

ctatagtggc atgacagatg taaacagaat gcactcgtat tttctcattt attggttgcc 3060

tgggtcttga cctatagttt taagtattag tgttgaaatt gtttgaaaac tgggcttgga 3120

tgcgcaagtt ctgtaagctg tttgatattg ttggttcttc tgcaggatta tgttccagaa 3180

gacatcggaa gcatttccgg ctttgaacct ccccagtcgc cggactcaag ttacaacaac 3240

ctgcagcttg gatctgaaga ttttgcgaag gagcccccat cggttcctcc acacctacaa 3300

atgacactgt tgaatgcacc ttcatcttac atggagatgc cgcctccttt gtcaagacct 3360

caacatgtgg tactcaacca tctttacatg cagagaggga agagtggacc atctgtggtg 3420

gcactcggga caacagagag gtttatagcg aagtatgtta cagtggttct ctacaagtcc 3480

ttgcagagat aaaagagaaa aaaaacatac actaagtgtc tgcctggact ccacggatcc 3540

cattatgtag ttagctttat atgaatttca aagtcaaatg ccattttcgt ggcatcggtt 3600

atgttgagga aggatttgta ttttcacaca attccattgc ttaatgacca ttgatccatc 3660

ttcttttgca tacttaattc tttcactcgc gcttattggc tgtttgtttc tcttcagttg 3720

tacaagaaaa agggtgaaag aatgaatttt gttgactacc cttatcaccc tatctgcatt 3780

ctcttcaaat tttctacttc cac 3803

<210> 3

<211> 286

<212> PRT

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 3

Met Gly Asn Val Asn Gly Arg Glu Asp Glu Asp Gly Ser Pro Ser Ala

1 5 10 15

Ala Glu Glu Asp Ser Gly Ala Ala Gly Ser Leu Gln Glu Gly Pro Ala

20 25 30

His Gly Ala Arg Leu Val Asp Gly Ser Ala Glu Leu Met Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Pro His Ser Pro Arg Ala Thr His Ser Pro Leu Met Phe Thr Pro

50 55 60

Gln Val Pro Val Val Pro Leu Gln Arg Pro Asp Glu Ile Gln Ile Pro

65 70 75 80

Asn Ser Ser Trp Met Gln Thr Ser Gly Phe Glu Asp Met Cys Cys Glu

85 90 95

Gln Gly Ile Pro Thr Met Ile Thr Trp Ser Tyr Gly Gly Lys Asp Val

100 105 110

Ala Val Glu Gly Ser Trp Asp Asn Trp Lys Thr Arg Leu Ala Leu Gln

115 120 125

Arg Ser Gly Lys Asp Phe Thr Ile Met Lys Val Leu Pro Ser Gly Val

130 135 140

Tyr Gln Tyr Arg Phe Ile Val Asp Gly Gln Trp Arg Cys Ser Pro Asp

145 150 155 160

Leu Pro Leu Thr Gln Asp Asp Ala Gly Asn Ser Tyr Asn Leu Leu Asp

165 170 175

Leu Gln Asp Tyr Val Pro Glu Asp Ile Gly Ser Ile Ser Gly Phe Glu

180 185 190

Pro Pro Gln Ser Pro Asp Ser Ser Tyr Asn Asn Leu Gln Leu Gly Ser

195 200 205

Glu Asp Phe Ala Lys Glu Pro Pro Leu Val Pro Pro His Leu Gln Met

210 215 220

Thr Leu Leu Asn Ala Pro Ser Ser Tyr Met Glu Met Pro Pro Pro Leu

225 230 235 240

Ser Arg Pro Gln His Val Val Leu Asn His Leu Tyr Met Gln Arg Gly

245 250 255

Lys Ser Gly Pro Ser Val Val Ala Leu Gly Thr Thr Glu Arg Phe Ile

260 265 270

Ala Lys Tyr Val Thr Val Val Leu Tyr Lys Ser Leu Gln Arg

275 280 285

<210> 4

<211> 3520

<212> DNA

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 4

cttccatctc tctctatatt atatataaaa acggggttgt ctttctgggg ctctttttta 60

gagttttgac gcccaatcaa tcaaatttgt gagctttgtg ggatttaagg tttcatcata 120

tgagattgga ttccaattct gcaaagtggg tattattatg catcagtaat ttcgttctcg 180

tcggttggtg cttgttgcta gcggaggtca tatccaagca atcaggatgg ggaatgtgaa 240

tgggagagaa gatgaggatg gaagcccctc agcggccgag gaagatagcg gtgccgccgg 300

cagcttgcag gagggccctg cccacggcgc ccgtcttgtt gatgggtccg ctgagttgat 360

gggtcaatcg cctcctcata gccctagggc cactcactcc cctttgatgt tcactcccca 420

agtcagttcc ttttttctct cctcatctgt ttcctcatgt cacttgtttt caaggttttt 480

tgcttttctt aatttttcca cggagattca gattttaccc aactgccatc gaattgcatt 540

tttcgtagaa ttgggggcct ttatgattca gcttagaatt gcttgtgtga attatgctgt 600

gcaattgttc tttccttttt attgatatct tgctgagagg cggccaaatc gtacaatttc 660

tagtctttat tttggatcat tgtattacca aaaacagaga tttgacttgt ggttctcctt 720

gagggtctga atttcggagc gttgtagggg cagaaactga aaaatgagtg gtcaatcgtt 780

gggagacatt gagcgaaacc aagtagtaaa ctttgattcc gacatccttc ctcctcctcc 840

aattctgaaa ttgggatatc aggtttacat gaatctgtct cttggtgcaa tacaaacact 900

taaactttta atgctaagat cctttagaaa taccattgtg caccaaccca ttggtaatct 960

gccttctgct caagtatata tgataagctc ggtcaactcc ctgaaaacgt tttccttgct 1020

tgtagccttg ccagttaccc aagctgatgt attttcttat tttttgatct acggcgatcc 1080

ataagtttct tcctcttgtt caattattat tatcatcttc tttttccagg tccctgtcgt 1140

ccccttacaa agaccagatg agatacaaat tccaaacagc tcgtggatgc aaacgtcagg 1200

gtttgaagac atgtgctgtg agcaaggaat tccaactatg attacatgga gctatggtgg 1260

gaaggatgta gctgtggagg gatcatggga taattggaag acaaggttcc tgaaaataaa 1320

agaaagaata ataagtattc tagattatga atatagtttg cactatgtga actcttgcct 1380

aagttcttta ttctatcttg tttttcagat tggccttgca gagatcaggg aaggacttca 1440

ctattatgaa ggtactgcca tccggtgttt accaatatag gtttattgtt gatgggcagt 1500

ggagatgttc tcctgacttg cccttgaccc aagatgatgc tggcaattct tacaaccttt 1560

tggacttgca ggtaatgatt gtcatctctt cttaggttga tacatgtttt gaatgagtgt 1620

gacaatccca ttacagtagc tcataactgt ttataatccc aacctgaaag tagtataacc 1680

ttcttttagg attgaacaag ggattgtttg gtgtttatta taatatcatc attcaggaac 1740

tgtattcatc cgaatttgtt aaagcatttg gatatccttt tttagcttaa tactgtttat 1800

gctttttgtt ccagtctgaa cttaattctg tttatgtaag tcctactttt catgattttg 1860

atttccgtta actattcaat gatgatagtc gattgtgtgg actagggaat aacagttata 1920

ttgtgttgat gatatttctc gtattcatgc aaccgatatt tcatattcaa tagtccatag 1980

tgcatacata taagctttcc ttttatacgt accattcaag ttgtcagtca ttagagtcta 2040

atttcttcag taacaatatt gtgttgttat atatgtgttt tgaaagcgtc tgtatttaat 2100

accttcacca tgcttagctg ttaaattcat gtttacattt taggtagact gctttttcac 2160

ctccattgca tatctaattt ctgttcataa agctctctat ctaaatttct gtttttaagc 2220

ccgtgcaaag ctgtctgcaa aagagaaatt tgcattgagc ccaattaagt agatcaggtt 2280

ggacttaagg tcagcctcta acttgaaaca cgttgataca agacaaaaac cagggattcc 2340

ctatatctag tatgactccg accaaattgt gaaaacctcc tgaaacctat attcaaccct 2400

aatcgagatg gggaagacta ggtctctgtt gaaagactaa atgatatttc ataaggtcct 2460

gttcaggtag cctttgtctt ttccagtgag ctgtaatgat ccccttcttt catgtgttgg 2520

tttggatatt acatagagag tgggcaatta aagttattgt atatagtact aataagagaa 2580

ggatcaaatt acagctgatt aaaacttctt tctgtgcacc tctctacttt gagtcaaact 2640

tggggacgat tagaaattta tatgccgcaa ttaaaaacga agtgctctaa atgataattt 2700

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ctaaattagt gccgtcagtt gtaattctct ataatggcat aatggataca tgtaacatgc 2940

aacagaatgc gtcgtatttt ctgggttgcc tgagtcttga cctttggttt taagtacgag 3000

cgtatagaat tgtttgaaaa ctgggcttgg atgtgtgagt cctataagct gattgatatt 3060

gttggattct tctgcaggat tacgtcccag aagacatcgg aagcatttct ggttttgaac 3120

ctccccagtc gccagactca agttataaca acctgcagct tggatctgaa gatttcgcga 3180

aggagccccc attggttcct ccacacctac aaatgacact gctgaatgca ccttcatctt 3240

acatggagat gccgcctcct ttgtcgagac ctcaacatgt ggtactcaat catctgtaca 3300

tgcagagagg gaagagtggt ccatctgtgg tggcacttgg gacaacagag aggtttatag 3360

cgaagtatgt tacagtggtt ctctacaagt ctttgcagag ataagaaaac acacacacaa 3420

agtgtctgtc tggactccac ggttcccatt atgtagttag ttttatatca atttcaaagt 3480

caaatgccat ttccatggcg tcggtttatg ttcaggaagg 3520

<210> 5

<211> 117

<212> PRT

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 5

Met Asn Asn Ser Phe Gly Asp Asp Tyr Asp Glu Ala Thr Val Ala Gly

1 5 10 15

Phe Glu Val Leu Arg Ser Pro Asp Ala Ser Tyr Asn Asn Val Tyr Pro

20 25 30

Gly Asn Glu Asp Glu Ala Gln Asp Pro Pro Leu Val Pro Pro Gln Leu

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Gln Gln Thr Leu Leu Ser Tyr Pro Ala Ser Ala Asp Thr Thr Gly Thr

50 55 60

Leu Pro Leu Pro Gln Asn Leu Thr Leu Asn His Leu Tyr Ile Glu Lys

65 70 75 80

Gln Glu Thr Pro Gln Ser Val Val Ala Leu Gly Phe Thr His Arg Phe

85 90 95

Arg Ser Lys Phe Val Thr Val Val Leu Tyr Lys Pro Val Gln Arg Arg

100 105 110

Gly Thr Thr Ser Ser

115

<210> 6

<211> 428

<212> DNA

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 6

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tacacaaaca aaatagggca accttaacac tttgtgtgca ggatgaagca actgttgcag 120

gatttgaagt tttaagatca cccgatgcaa gttacaacaa tgtgtaccca gggaatgaag 180

acgaggccca ggatccacct cttgtccctc cacagctaca acagacgtta cttagttacc 240

cagcaagtgc agacactact ggaactcttc ccttaccgca aaacttgaca ctcaaccatc 300

tttacattga gaaacaggag accccacaat ctgtggtcgc acttgggttc actcatcgct 360

ttcgttcaaa atttgttaca gttgtgcttt acaaaccagt tcaaagaagg ggcactacca 420

gcagttag 428

<210> 7

<211> 117

<212> PRT

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 7

Met Asn Asn Ser Phe Gly Asp Asp Tyr Asp Glu Ala Thr Val Ala Gly

1 5 10 15

Phe Glu Val Leu Arg Ser Pro Asp Ala Ser Tyr Asn Asn Val Tyr Pro

20 25 30

Gly Asn Glu Asp Glu Ala Arg Asp Pro Pro Leu Ala Pro Pro His Leu

35 40 45

Gln Gln Thr Leu Leu Ser Tyr Pro Ala Ser Ala Asp Thr Ala Gly Thr

50 55 60

Leu Pro Ala Pro Gln Asn Val Thr Leu Asn His Leu Tyr Ile Glu Asn

65 70 75 80

Arg Glu Thr Pro Arg Ser Val Val Ala Leu Gly Phe Thr His Arg Phe

85 90 95

Arg Ser Lys Phe Val Ser Val Val Leu Tyr Lys Pro Val Gln Arg Ser

100 105 110

Gly Thr Asn Ser Ser

115

<210> 8

<211> 428

<212> DNA

<213> 梨属梨(Rosaceae Pyrus L.)

<400> 8

atgaacaact catttggtga tgattatgta agccttcgga accttaatgt ttttattttc 60

cactcaaata aaatagggca accttaaaac tttatgtgca ggatgaagca actgttgcag 120

gatttgaagt tttaagatca cccgatgcaa gttacaataa cgtgtaccct gggaatgaag 180

acgaggcacg ggatccacct cttgcccctc cacatctgca acagacatta cttagttacc 240

cagcaagcgc agacactgcg ggaacccttc cagcaccgca aaacgtgaca ctcaaccatc 300

tttacattga gaaccgggag accccacgct ctgtggtcgc acttggcttc actcatcgct 360

ttcgttcaaa atttgtttca gttgtgcttt acaaaccagt tcaaagaagt gggactaaca 420

gcagttag 428

<210> 9

<211> 289

<212> PRT

<213> Solanum tuberosum

<400> 9

Met Gly Asn Ala Asn Ala Arg Glu Asp Gly Ala Ala Val Asp Gly Asp

1 5 10 15

Gly Asp Gly Glu Val Ser Gly Arg Arg Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile

20 25 30

Val Glu Asp His His Ala Leu Thr Ser Arg Val Pro Ser Val Asp Leu

35 40 45

Met Val Asn Ser Pro Pro Gln Ser Pro His Arg Ser Ala Ser Pro Leu

50 55 60

Leu Phe Gly Pro Gln Val Pro Val Val Pro Leu Gln Gly Gly Asp Gly

65 70 75 80

Asn Pro Val Ser Asn Gln Met Trp Gly Asn Glu Cys Gln Asp Ala Ser

85 90 95

Asp His Ser Leu Glu Gly Gly Ile Pro Thr Leu Ile Thr Trp Ser Tyr

100 105 110

Gly Gly Asn Asn Val Ala Ile Gln Gly Ser Trp Asp Asn Trp Thr Ser

115 120 125

Arg Lys Ile Leu Gln Arg Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Val Leu Leu Val

130 135 140

Leu Pro Ser Gly Ile Tyr His Tyr Lys Phe Ile Val Asp Gly Glu Val

145 150 155 160

Arg Tyr Ile Pro Glu Leu Pro Cys Val Ala Asp Glu Thr Gly Ile Val

165 170 175

Phe Asn Leu Leu Asp Val Asn Asp Asn Val Pro Glu Asn Leu Glu Ser

180 185 190

Val Ala Glu Phe Glu Ala Pro Pro Ser Pro Asp Ser Ser Tyr Ala Gln

195 200 205

Thr Leu Leu Gly Asp Glu Asp Phe Ala Lys Glu Pro Val Ala Val Pro

210 215 220

Pro Gln Leu His Leu Thr Val Leu Gly Ser Glu Asn Ser Glu Glu Ala

225 230 235 240

Pro Ser Ser Pro Lys Pro Gln His Val Val Leu Asn His Leu Phe Ile

245 250 255

Glu Lys Gly Trp Ala Ser Gln Ser Val Val Ala Leu Gly Leu Thr His

260 265 270

Arg Phe Gln Ser Lys Tyr Val Thr Val Val Leu Tyr Lys Pro Leu Lys

275 280 285

Arg

Claims

1.一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基，其特征在于，该种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基是具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的蛋白质。

2.权利要求1所述蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基的编码基因，其特征在于，该编码基因具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

4.权利要求1中所述的梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基或权利要求2中所述的编码基因在调节果树果实糖含量或/和果实风味中的应用。

5.一种梨果实的转基因育种方法，其特征在于，以权利要求2所述的编码基因作为靶基因，通过调控其表达调节梨果实的糖含量或/和果实风味。