CN113195473B - 三环化合物作为sting激动剂及其制备方法和医药用途 - Google Patents
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Abstract
公开了用作干扰素基因刺激因子(STING)的激动剂的式(I)化合物，其制备方法，包含该化合物的药物组合物以及用于治疗由STING介导的疾病或病症的药物用途。
Description
相关申请的交叉引用
根据35 U.S.C.§119(e)，本申请要求于2018年12月14日提交的美国临时专利申请第62/779,907号的优先权，其全部内容通过引用合并于本文中。
技术领域
本发明属于医学领域，特别涉及作为治疗由STING介导的疾病或病症的干扰素基因刺激因子(STING)的激动剂的新三环化合物及其制备方法。
背景技术
脊椎动物通过先天性和适应性免疫来防御抵抗微生物或对来自细胞或组织损伤的信号作出反应。先天性免疫不具有抗原特异性，且在抗原出现在体内后立即执行防御机制。适应性免疫需要时间来产生完全应答，但具有抗原特异性且持久。一旦抗原被加工和识别，适应性免疫系统就会利用专门设计的一组免疫细胞来攻击该抗原。在适应性免疫应答的过程中，会产生记忆免疫细胞，从而可以对抗原的再暴露作出更快更有效的应答。需要先天性免疫系统来激活我们的适应性免疫系统。大量分子和细胞协作地参与先天性免疫和适应性免疫功能(Shanker A.和Marincola F.,Cancer Immunol.Immunother.,2011,60:1061-1074)。
先天性免疫由存在于病原体中的病原体相关分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns，PAMP)被模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)识别时引发(Medzhitov,R.J.Immunol.2013,191,4473-4474)。包括各种肿瘤衍生的抗原的一些内源性损伤相关分子模式(damage-associated molecular pattern，DAMP)也可同样地由此类PRR识别(Matzinger,P.,Science 2002,296:301-305)。来自病原体和异常细胞的游离的胞质DNA可由DNA传感器识别。已证实环状GMP-AMP合成酶(cyclic GMP-AMP Synthase，cGAS)为重要的DNA传感器，其可将游离的胞质DNA催化成环二核苷酸(CDN)2'3'-GAMP(NgKW.等人，Trends in Immunology,2018,39:44-54)。
干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes，STING；也称为MITA和MPYS，由TMEM173编码)为与内质网(endoplasmic reticulum，ER)相关的信号传导分子。当结合至由cGAS产生的环二核苷酸(CDN)以及细胞质中的细菌环状二-AMP(c-di-AMP)或c-di-GMP后，STING发生构象变化，并与TBK1一起形成复合物。该复合物从ER转运至核周高尔基体，然后磷酸化IRF3，IRF3二聚并进入细胞核以启动I型干扰素(IFN)的转录。TBK1还使蛋白质IκB上的残基磷酸化，导致其降解，从而造成NF-κB激活和易位至细胞核，以及促炎性细胞因子(如TNFα、IL-6和IL-1β)的转录(Ahn J.和Barber G.,Current Opinion inImmunology 2014,31:121-126)。越来越多的证据表明，依赖STING的信号传导在增强抗肿瘤免疫力方面至关重要。与野生型小鼠相比，观察到STING缺陷型小鼠的肿瘤排斥反应降低(Woo S.等人，Immunity,2014,41:830-842)。STING的激活显著抑制了多种类型的小鼠肿瘤的生长(Corrales等人，Cell Reports,2015,11:1018-1030)。
由STING介导的抗肿瘤活性至少部分地是通过I型IFN(IFNα/β)介导的(CorralesL.和Gajewski F.,Clin.Cancer Res.,2015,21:4774-4779)。I型IFNs对免疫细胞的作用已得到充分证实。与IFNα/β结合后，IFNα/β受体激活一系列事件，并诱导由IFN刺激的响应元件(ISRE)调节的多种基因的转录，从而调节多种类型的免疫细胞。特别地，I型IFN促进交叉引发，增强效应子T细胞功能和扩增，介导记忆发育，由此使先天性免疫与适应性免疫偶合(Zitvogel L.等人，Nature Reviews Immunology,2015,15:405-414)。I型IFNs促进各种类型癌症的抗肿瘤免疫力(Parker B.等人，Nat Rev Cancer,2016,16:131-144)。TNFα可能是激活STING所观测到的治疗效果的另一重要贡献因素(Francica B.等人，Cancer ImmunolRes.,2018,6:1-12)。
总之，STING信号传导的抗肿瘤功能已经被很好地确立。本发明的化合物刺激STING的功能，因此可以对癌症治疗产生有益的影响。
发明内容
一方面，本发明提供了一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物：
其中：
G1、G2、G1a和G2a相同或不同，且各自独立地为N或CR6；
G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O、NRg或CR7R8；
L选自亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚烷基-Q-亚烷基、亚烷基-O-亚烷基、亚烷基-NH-亚烷基、亚烷基-S(O)m-亚烷基、亚烷基-C(O)-亚烷基、亚烷基-C(O)NH-亚烷基、亚烷基-NHC(O)-亚烷基和亚烷基-HNC(O)NH-亚烷基，其中所述亚烷基、亚烯基和亚炔基各自未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；
Rc选自氢、烷基、卤代烷基、烯基和炔基；
Rg选自氢、烷基、环烷基和烯基，其中所述烷基、环烷基或烯基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R1和R1a相同或不同，且各自独立地选自-C(O)NR9R10、-C(O)ORm、氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R2和R2a相同或不同，且各自独立地选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R3、R4、R3a和R4a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R5和R5a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基和氰基；
R6选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R7和R8相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R9和R10相同或不同，且各自独立地选自氢、烷基、卤代烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
Rm选自氢、烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
Q选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
m为0、1或2；
n为0、1、2或3；且
s是0、1、2或3。
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药以及药学上可接受的载体。
在另一方面，本发明提供了一种治疗由STING介导的疾病或病症的方法，其包含向对其有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药或包含式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的药物组合物。
在另一方面，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在制备用于治疗由STING介导的疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症选自癌症、癌前综合征和病毒感染，优选癌症和癌前综合征。
在另一方面，本发明提供了一种用于制备式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的方法，所述方法包括将式(IA)化合物与式(IB)化合物反应以获得所述式(I)化合物的步骤：
其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；和
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(I)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种用于制备式(IG)化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的方法，所述方法包括将式(IK)化合物与NHR9R10的化合物反应以获得式(IG)化合物的步骤：
将式(IK)化合物与NHR9R10的化合物反应以获得所述式(IG)化合物；
其中：
Rm为氢或烷基；
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、R9、R10、n和s各自如式(IG)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(IA)或(IB)化合物，用作制备式(I)化合物的中间体：
其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(I)中所定义。
通过以下详细描述、实验细节和权利要求将更好地了解本发明的其他方面和益处。
具体实施方式
本发明涉及用作STING激动剂的一类新的三环化合物，其制备方法以及它们作为用于治疗由STING介导的疾病或病症的治疗剂的用途。
一方面，本发明提供了一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及混合物：
其中：
G1、G2、G1a和G2a相同或不同，且各自独立地为N或CR6；
G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O、NRg或CR7R8；
L选自亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚烷基-Q-亚烷基、亚烷基-O-亚烷基、亚烷基-NH-亚烷基、亚烷基-S(O)m-亚烷基、亚烷基-C(O)-亚烷基、亚烷基-C(O)NH-亚烷基、亚烷基-NHC(O)-亚烷基和亚烷基-HNC(O)NH-亚烷基，其中所述亚烷基、亚烯基和亚炔基各自未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
Rc选自氢、烷基、卤代烷基、烯基和炔基；
Rg选自氢、烷基、环烷基和烯基，其中所述烷基、环烷基或烯基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R1和R1a相同或不同，且各自独立地选自-C(O)NR9R10、-C(O)ORm、氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R2和R2a相同或不同，且各自独立地选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
R3、R4、R3a和R4a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R5和R5a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基和氰基；
R6选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R7和R8相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R9和R10相同或不同，且各自独立地选自氢、烷基、卤代烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；
Rm选自氢、烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
Q选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
m为0、1或2；
n为0、1、2或3；且
s是0、1、2或3。
在本发明的一些实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚烷基-O-亚烷基、亚烷基-NH-亚烷基、亚烷基-S(O)m-亚烷基、亚烷基-C(O)-亚烷基、亚烷基-C(O)NH-亚烷基、亚烷基-NHC(O)-亚烷基和亚烷基-HNC(O)NH-亚烷基，其中所述亚烷基或亚炔基各自未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代。
在本发明的一些实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R1和R1a相同或不同，且各自独立地选自-C(O)NR9R10、-C(O)ORm、氢、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代；R9和R10如式(I)中所定义。
在本发明的一个实施方案中，式(I)化合物为式(IM)化合物，
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，当Rc为氢时，式(I)化合物是式(I’)化合物，
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R1至R5、R1a至R5a、G1至G3、G1a至G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，当Rc为氢时，式(I)化合物选自式(I”)化合物，
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R1至R5、R1a至R5a、G1至G3、G1a至G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，G1、G2、G1a和G2a相同或不同，且各自为CR6，其中R6如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R2和R2a相同或不同，且各自独立地选自芳基和杂芳基，其中所述芳基或杂芳基未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R5和R5a各自为氢。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物为式(II)化合物，
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
环A选自芳基和杂芳基；
各R11相同或不同，且各自独立地选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
t为0、1、2、3或4；且
R1、R1a、Rc、R3、R4、R3a、R4a、G3、G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R1和R1a相同或不同，且各自独立地为-C(O)NR9R10，其中R9和R10各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R1和R1a相同或不同，且各自独立地选自-C(O)NR9R10和-C(O)ORm，R9、R10和Rm各自如权利要求1中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，Rc为氢。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物为式(IG)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R2至R4、R2a至R4a、R9、R10、G3、G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物为式(IK)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
Rm为氢或烷基；
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物为式(III)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
环A选自芳基和杂芳基；
各R11相同或不同，且各自独立地选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
t为0、1、2、3或4；和
R3、R4、R3a、R4a、R9、R10、G3、G3a、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R3、R4、R3a和R4a各自为氢。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NH。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NRg；Rg各自相同或不同，且各自为氢或烷基，其中所述烷基未被取代或被一个或多个烷氧基取代。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，R9和R10各自为氢。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物为式(IV)的化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、 内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NRg；
R12和R13相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；且
Rg、L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，式(IV)化合物为式(IV’)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
G3、G3a、R12、R13、L、n和s各自如式(IV)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，式(IV)化合物为式(IV”)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
G3、G3a、R12、R13、L、n和s各自如式(IV)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，式(III)化合物为式(IVM)化合物：
包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中：
R12和R13相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
L、n和s各自如式(I)中所定义。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自亚烷基、亚烯基和亚烷基-O-亚烷基，其中所述亚烷基或亚烯基各自未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基取代。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚烷基-Q-亚烷基和亚烷基-O-亚烷基，其中所述亚烷基、亚烯基和亚炔基各自未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基取代；Q选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自-(CH2)p-、-(CH2)p1-(CH＝CH)q-(CH2)p2-、-(CH2)p1-O-(CH2)p2-、-(CH2)p1-(CH(OH))t-(CH2)p2-；p为1至6的整数；p1为0、1、2或3；p2为0、1、2或3；q为0、1或2；且t为0、1、2或3。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自-(CH2)p-、-(CH2)p1-(CH＝CH)q-(CH2)p2-、-(CH2)p1-C≡C-(CH2)p2-、-(CH2)p1-环丙基-(CH2)p2-、-(CH2)p1-苯基-(CH2)p2-、-(CH2)p1-O-(CH2)p2-和-(CH2)p1-(CH(OH))t-(CH2)p2-；p为1至6的整数；p1为0、1、2或3；p2为0、1、2或3；q为0、1或2；且t为0、1、2或3。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自–CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2CH2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH2CH(OH)CH(OH)CH2-、–CH2-CH＝CH-和-CH2-O-CH2-。
在本发明的另一个实施方案中，在式(I)化合物包含其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药中，L选自–CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2CH2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH2CH(OH)CH(OH)CH2-、–CH2-CH＝CH-、–CH2-环丙基-CH2-、–CH2-苯基-CH2-、–CH2-C≡C-CH2-、–CH2-CH＝CH-CH2CH2-和-CH2-O-CH2-。
本发明代表性的化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物包括，但不限于下表1中列出的化合物。
表1、某些示例性化合物。
在另一方面，本发明提供了一种式(IA)或(IB)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，用作制备式(I)化合物的中间体，其中：
其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(I)中所定义。
本发明代表性的中间体包括，但不限于下表2中列出的化合物。
表2、某些示例性中间体化合物。
或其互变异构体、顺式或反式异构体、外消旋体、对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了一种式(I)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IA)化合物与式(IB)化合物反应以获得所述式(I)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(I)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(IM)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IAM)化合物与式(IBM)化合物反应以获得所述式(IM)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(IM)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(II)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIA)化合物与式(IIB)化合物反应以获得所述式(II)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；
环A、R1、R1a、Rc、R3、R4、R3a、R4a、R11、G3、G3a、t、n和s各自如式(II)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(III)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIIA)化合物与式(IIIB)化合物反应以获得所述式(III)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
环A、R3、R4、R3a、R4a、R9至R11、G3、G3a、t、n和s各自如式(III)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(IG)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IK)化合物与NHR9R10的化合物反应以获得所述式(IG)化合物，其中：
Rm为氢或烷基；
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、R9、R10、n和s各自如式(IG)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(III)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIIK)化合物与NHR9R10的化合物反应以获得所述式(III)化合物，其中：
Rm为氢或烷基；
环A、R3、R4、R3a、R4a、G3、G3a、R9至R11、t、n和s各自如式(III)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(IV)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IVA)化合物与式(IVB)化合物反应以获得所述式(IV)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R12、R13、G3、G3a、n和s各自如式(IV)中所定义。
在另一方面，本发明提供了一种式(IVM)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IVAM)化合物与式(IVBM)化合物反应以获得所述式(IVM)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R12、R13、G3a、n和s各自如式(IVM)中所定义。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的本文所公开的任何实施方案中的式(I)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，以及一或多种药学上可接受的载体、稀释剂和/或其他赋形剂。
本发明还涉及本文所公开的任何实施方案中的式(I)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在制备用作STING激动剂的药物中的用途。
本发明还涉及本文所公开的任何实施方案中的式(I)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，或包含其的药物组合物在制备用于治疗由STING介导的疾病或病症的药物中用途。
换言之，本发明涉及一种刺激STING的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的任何实施方案中的式(I)化合物，或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，或包含其的药物组合物。
本发明涉及一种治疗由STING介导的疾病或病症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物，或其互变异构体、顺式或反式异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，或包含其的药物组合物。
在一个实施方案中，所述疾病或病症选自癌症、癌前综合征和病毒感染，优选癌症和癌前综合征。
在一个实施方案中，所述疾病或病症为脑癌、白血病、皮肤癌(例如黑色素瘤)、前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌或肉瘤。在另一个实施方案中，所述癌症选自神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、副神经节瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤(suprantentorialprimordial neuroectodermal tumors)、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性骨髓性白血病(CML)、骨髓增殖性肿瘤(MPN)、血管免疫母细胞性淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌、中枢软骨肉瘤、中枢和骨膜软骨瘤、纤维肉瘤和胆管癌。
本文还公开了在本文公开的任何实施方案中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药与施用以下一种或多种其他活性剂组合用于治疗病毒感染或细胞增殖性疾病例如癌症中的用途，例如STING激动剂化合物、抗病毒剂、抗癌剂、抗原、佐剂、CTLA-4、LAG-3和PD-1通路拮抗剂、细胞毒剂、化学治疗剂、检查点抑制剂、血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂、烷化剂、抗肿瘤抗生素、类维生素A和免疫调节剂。
本发明的组合物可根据传统的方法使用一或多种药学上可接受的载体来配制。因此，本发明的活性化合物可配制为用于经口、经颊、经鼻、肠胃外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)、直肠施用、吸入或吹入施用的多种剂型。本发明的化合物也可配制为持续释放剂型。
口服组合物包括片剂、糖衣锭、口含锭、水性或油性混悬液、分散性粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊或糖浆或酏剂。口服组合物可根据本领域中用于制备药物组合物的任何已知方法制备。这种组合物可含有选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种添加剂，以便提供令人愉悦的可口的医药制剂。片剂含有活性成分和适用于制造片剂的药学上可接受的无毒赋形剂。此类赋形剂可为惰性赋形剂、成粒剂、崩解剂和润滑剂。片剂可未被包衣，或根据已知技术包衣以掩蔽药物的味道或推迟药物在胃肠道中的崩解和吸收，由此在所延长时段内提供持续释放。例如，可使用水溶性味道掩蔽材料。
口服制剂也可提供为软明胶胶囊，其中将活性成分与惰性固体稀释剂混合，或将活性成分与水溶性载体混合。
水性混悬液含有与适用于制造水性混悬液的赋形剂混合的活性成分。这种赋形剂为混悬剂、分散剂或保湿剂，且可为天然存在的磷脂。水性混悬液也可含有一或多种防腐剂、一或多种着色剂、一或多种调味剂和一或多种甜味剂。
油性混悬液可通过将活性成分悬浮于植物油中或矿物油中来配制。油性混悬液可含有增稠剂。可加入前述甜味剂和调味剂以提供可口的制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂来保存。
活性成分和分散剂或湿润剂、混悬剂或一或多种防腐剂可制备为适用于通过加入水来制备水性混悬液的分散性粉末或颗粒。适合的分散剂或湿润剂和混悬剂的示例为上文已提及的那些。也可加入额外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。这些组合物可通过加入例如抗坏血酸的抗氧化剂来保存。
本药物组合物也可呈水包油型乳液的形式。油相可为植物油或矿物油或其混合物。适合的乳化剂可为天然存在的磷脂。可使用甜味剂。这种制剂也可含有缓冲剂、防腐剂、着色剂和抗氧化剂。
药物组合物可呈无菌可注射水溶液形式。可采用的可接受的媒剂和溶剂为水、林格氏溶液(Ringer's solution)和等张氯化钠溶液。无菌可注射制剂也可为无菌可注射水包油型微乳液，其中活性成分溶解于油相中。可通过局部快速注射将可注射溶液或微乳液引入至个体的血流中。或者，以此方式对施用溶液或微乳液可以是有利的，以便维持此化合物的恒定循环浓度。为维持此恒定浓度，可利用连续静脉内递送装置。此装置的实例为Deltec CADD-PLUS.TM.5400静脉内注射泵。
药物组合物可以为用于瘤内、肌肉内和皮下施用的无菌可注射水性或油性混悬液的形式。此混悬液可根据已知技术用如上文所描述的适合分散剂或湿润剂和混悬剂来配制。无菌可注射制剂也可为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌可注射溶液或混悬液。此外，无菌非挥发性油可易于用作溶剂或混悬介质，且脂肪酸也可用于制备注射液。
本化合物可以用于直肠施用的栓剂形式施用。这些药物组合物可通过使药物与适合非刺激赋形剂混合来制备，该非刺激赋形剂在常温为固体，但在直肠中为液体，由此在直肠中熔融以释放药物。
对于经颊施用，组合物可通过常规手段配制为片剂或口含锭。
对于经鼻施用或通过吸入施用，本发明的活性化合物在使用适合的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合气体)的情况下，以由患者挤压或抽吸的泵喷雾容器所释放的溶液或混悬液的形式或以加压容器或喷雾器所释放的气溶胶喷雾的形式适宜地递送。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可由提供递送所计量的量的阀来测定。加压容器或喷雾器可含有活性化合物的溶液或混悬液。用于吸入器或吹入器的胶囊或药筒(例如，由明胶制成)可经配制含有本发明的粉末混合物和例如乳糖或淀粉的适合的粉末基质。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但不限于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、施用时间、施用方式、排泄的速率、药物的组合等。另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、式(I)化合物的日用量或其药学上可接受的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
除非特别定义，否则本申请中的任何术语将采用本领域技术人员所理解的一般含义。
除非另外说明，否则说明书和权利要求书中所使用的术语具有下面所描述的含义。
“烷基”指包括C1-C20直链和支链基团的饱和脂族烃基。优选地，烷基为具有1至12个，有时优选1至6个且有时更优选1至4个碳原子的烷基。代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基及其支链异构体。更优选地，烷基为具有1至6个碳原子的低级烷基。代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基可在任何可用的连接点处被取代，优选地，取代基为独立地选自烷基、卤素、烷氧基、烯基、炔基、烷基磺基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环基、环烷基硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基。
“烯基”指具有至少两个碳原子和至少一个碳碳双键的如上所定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等，优选为C2-20烯基，更优选为C2-12烯基，最优选为C2-6烯基。烯基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、卤素、烷氧基、烯基、炔基、烷基磺基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环基、环烷基硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“炔基”指具有至少两个碳原子和至少一个碳碳三键的如上所定义的烷基，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等，优选为C2-20炔基，更优选为C2-12炔基，最优选为C2-6炔基。炔基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基和杂环烷硫基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“亚烷基”指饱和的直链或支链脂族烃基团，其中具有通过从母烷烃的相同碳原子或两个不同碳原子移除两个氢原子而衍生的2个残基。含有1至20个碳原子的直链或支链基团优选地具有1至12个碳原子，更优选1至6个碳原子。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2-)、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基和杂环烷硫基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“亚烯基”指具有至少两个碳原子和至少一个碳碳双键的如上所定义的亚烷基，优选为C2-20亚烯基，更优选为C2-12亚烯基，最优选为C2-6亚烯基。亚烯基的非限制性实例包括但不限于-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH＝CHCH2CH2-、-CH2CH＝CHCH2-等。亚烯基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基和杂环烷硫基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“亚炔基”指具有至少两个碳原子和至少一个碳碳叁键的如上所定义的炔基，优选为C2-20亚炔基，更优选为C2-12亚炔基，最优选为C2-6亚炔基。亚烯基的非限制性实例包括但不限于-CH≡CH-、-CH≡CHCH2-、-CH≡CHCH2CH2-、-CH2CH≡CHCH2-等。亚炔基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基和杂环烷硫基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“环烷基”指具有3至20个碳原子，优选3至12个碳原子，更优选3至10个碳原子，最优选3至8个碳原子或3至6个碳原子的饱和和/或部分不饱和单环或多环烃基团。单环环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。多环环烷基包括具有螺环、稠环或桥环的环烷基。
“螺环烷基”指环经由一个共用碳原子(称为螺原子)连接的5至20元多环基团，其中一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π-电子系统。优选地，螺环烷基为6至14元，更优选为7至10元。根据共用螺原子的数目，将螺环烷基划分成单螺环烷基、二螺环烷基或多螺环烷基，优选地指单螺环烷基或二螺环烷基，更优选4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的代表性实例包括但不限于以下取代基：
“稠环烷基”指5至20元多环烃基，其中系统中的每个环与另一环共用相邻的一对碳原子，其中一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π-电子系统。优选地，稠环烷基为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目，将稠环烷基划分成双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选地指双环或三环稠环烷基，更优选5元/5元或5元/6元双环稠环烷基。稠环烷基的代表性实例包括但不限于以下取代基：
“桥环烷基”指5至20元多环烃基团，其中系统中的每两个环共用两个不相连的碳原子，环可具有一个或多个双键，但不具有完全共轭的π-电子系统。优选地，桥环烷基为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目，将桥环烷基划分成双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选地指双环、三环或四环桥环烷基，更优选双环或三环桥环烷基。桥环烷基的代表性实例包括但不限于以下取代基：
环烷基可与芳基、杂芳基或杂环烷基的环稠合，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。代表性实例包括但不限于茚满基乙酸(indanylacetic)、四氢萘、苯并环庚基等。环烷基任选地被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、卤素、烷氧基、烯基、炔基、烷基磺基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环基、环烷基硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基。
“杂环基”指3至20元饱和和/或部分不饱和的单环或多环烃基团，其具有选自N、O和S(O)m(其中m为0、1或2)中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个杂原子作为环原子，但环中不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-，其余环原子为C。优选地，杂环基为具有1至4个杂原子的3至12元杂环基；更优选地具有1至3个杂原子的3至10元杂环基；最优选地具有1至2个杂原子的5至6元杂环基。单环杂环基的代表性实例包括但不限于吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、磺基-吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括具有螺环、稠环或桥环的杂环基。
“螺杂环基”指环经由一个共用碳原子(称为螺原子)连接的5至20元多环杂环基，其中所述环具有选自N、O和S(O)m(其中m为0、1或2)的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个杂原子作为环原子，其余环原子为C，其中一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π-电子系统。优选地，螺杂环基为6至14元，更优选为7至10元。根据共用螺原子的数目，将螺杂环基划分成单螺杂环基、二螺杂环基或多螺杂环基，优选地指单螺杂环基或二螺杂环基，更优选4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的代表性实例包括但不限于以下取代基：
“稠杂环基”指5至20元多环杂环基，其中系统中的每个环与其他环共用相邻的一对碳原子，其中一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π-电子系统，且其中该环具有选自N、O和S(O)p(其中p为0、1或2)的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个杂原子作为环原子，其余环原子为C。优选地，稠杂环基为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目，将稠杂环基划分成双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选地指双环或三环稠杂环基，更优选5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的代表性实例包括但不限于以下取代基：
“桥杂环基”指5至14元多环杂环烷基，其中系统中的每两个环共用两个不相连的原子，环可具有一个或多个双键，但不具有完全共轭的π-电子系统，且环具有选自N、O和S(O)m(其中m为0、1或2)的一个或多个杂原子作为环原子，其余环原子为C。优选地，桥杂环基为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目，将桥杂环基划分成双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选地指双环、三环或四环桥杂环基，更优选双环或三环桥杂环基。桥杂环基的代表性实例包括但不限于以下基团：
所述杂环基的环可与芳基、杂芳基或环烷基的环稠合，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。代表性实例包括但不限于以下基团：
杂环基任选地被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基、杂环烷硫基和-NR9R10中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个基团。
“芳基”指6至14元全碳单环或多环稠环(“稠”环系统是指系统中的每个环与系统中的另一环共用相邻的一对碳原子)基团，且具有完全共轭的π-电子系统。优选地，芳基为6至10元，如苯基和萘基，最优选为苯基。芳基可与杂芳基、杂环基或环烷基的环稠合，其中与母体结构连接在一起的环为芳基。代表性实例包括但不限于以下取代基：
芳基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基、杂环烷硫基和-NR9R10中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基。
“杂芳基”指具有选自O、S和N的1至4个杂原子作为环原子且具有5至14个环原子的芳基系统。优选地，杂芳基为5至10元，更优选为5或6元，例如噻二唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。杂芳基可与芳基、杂环基或环烷基的环稠合，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基。代表性实例包括但不限于以下取代基：
杂芳基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基、杂环烷硫基和-NR9R10中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基。
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未被取代的环烷基)，其中烷基如上所定义。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。烷氧基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基优选为独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基磺基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基硫基和杂环烷硫基中的一个或多个，有时优选一个至五个，有时更优选一个至三个取代基。
“键”指使用标志“—”的共价键。
“羟烷基”指经羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘原子。
“氨基”指-NH2基团。
“氰基”指-CN基团。
“硝基”指-NO2基团。
“氧代基”指＝O基团。
“羧基”指-C(O)OH基团。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基和环烷基如上所定义。
“任选的”或“任选地”是指所描述事件或情形随后可出现但不必须出现，且描述包括其中事件或情形可能出现或可能不出现的实例。举例而言，“任选经烷基取代的杂环基”是指烷基可存在但不必须存在，且描述包括杂环基被烷基取代和杂环基未被烷基取代的情况。
“被取代”是指基团中的一个或多个氢原子，优选高达5个，更优选1至3个氢原子独立地被对应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和键(如烯属)的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”是指一种或多种根据本发明的化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前药和其他化学组分(如生理学上/药学上可接受的载体和赋形剂)的混合物。合适的药学上可接受的赋形剂包括但不限于稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、助流剂、制粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、遮味剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。
药物组合物的目的在于促进化合物对生物体的施用和活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，这种盐在用于哺乳动物中时为安全和有效的，且具有相应的生物活性。可在最终分离和纯化化合物期间或单独地通过使适合氮原子与适合酸反应来制备盐。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸，例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、二硫化氢；以及有机酸，例如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、双酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡糖酸、葡糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、丁二酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸，以及相关无机和有机酸。
碱加成盐可在最终分离和纯化化合物期间通过使羧基与适合碱例如氢氧化物、金属阳离子的碳酸盐或碳酸氢盐，或与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐的阳离子包括但不限于锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒性季胺阳离子，例如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶和N-甲基吗啉。
如本领域技术人员所熟知，本文中所公开的式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以前药或溶剂化物形式存在，其均由本发明所涵盖。
如本文中所使用的术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与一个或多个，优选一个至三个溶剂分子(无论是有机的还是无机的溶剂分子)的物理性结合。此物理性结合包括氢键。在某些情况下，例如在将一个或多个，优选一个至三个溶剂分子并入至结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够分离。例示性溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物和异丙醇化物。溶剂化的方法一般在本领域中已知。“前药”是指可以在生理条件下，例如通过在血液中水解，在体内被转化以产生活性母体化合物的化合物。常见示例包括但不限于带有羧酸部分的活性形式的化合物的酯和酰胺形式。本发明化合物的酰胺和酯可以按照常规方法制备。特别地，在本发明中，前药还可以通过杂环基环结构中的氨基或氮原子的酰化来形成，该酰基可以在体内水解。这样的酰基包括但不限于C1-C6酰基，优选C1-C4酰基，更优选C1-C2酰基(甲酰基或乙酰基)或苯甲酰基。
如本文中所使用的术语“药学上可接受的”是指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医学判断范围内适合与患者的组织接触而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他具有合理的受益/风险比的问题或并发症，并且对它们的预期用途有效。
如本文中所使用的术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者受益(例如，病毒载量的持续降低)的每种活性成分的总量。当应用于单独施用的单独活性成分时，该术语是指单独的该成分。当应用于组合时，该术语是指带来治疗作用的活性成分(无论是组合、连续或同时施用)的组合量。
术语“受试者”或“患者”包括人类和其他哺乳动物，尤其家畜，例如狗、猫、马等，有时优选人类。
如本文所用，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包括复数引用，除非上下文另外明确指出。
当将术语“约”应用于参数(例如pH值，浓度等)时，表示该参数可以变化±10％，有时更优选在±5％之内变化。如本领域技术人员将理解的，当参数不是关键时，通常仅出于说明目的，而不是限制，给出数字。
术语“治疗”是指：(i)抑制疾病、病症或病状，即阻止其发展；和(ii)缓解疾病、病症或病状，即引起疾病、病症和/或病状的消退。此外，本发明的化合物可因其预防作用而使用，以防止疾病、病症或病状出现于可能易患该疾病、病症和/或病状但尚未诊断出患有该疾病、病症和/或病状的受试者中。
合成方法
为了达到本发明的目的，本发明采用但不限于以下技术方案：
(A)一种式(I)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IA)化合物与式(IB)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(I)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(I)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
(B)一种式(IM)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IAM)化合物与式(IBM)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(IM)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如式(IM)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
(C)一种式(II)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIA)化合物与式(IIB)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(II)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；和
环A、R1、R1a、Rc、R3、R4、R3a、R4a、R11、G3、G3a、t、n和s各自如式(II)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
(D)一种式(IG)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IK)化合物与NHR9R10的化合物在碱性条件下反应以获得所述式(IG)化合物，其中：
Rm为氢或烷基；和
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、R9、R10、n和s各自如式(IG)中所定义。
提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱。有机碱包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双(三甲基甲硅烷基)氨基锂、乙酸钾、叔丁醇钠和叔丁醇钾。无机碱包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂。
(E)一种式(III)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIIA)化合物与式(IIIB)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(III)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；
环A、R3、R4、R3a、R4a、R9至R11、G3、G3a、t、n和s各自如式(III)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
(F)一种式(III)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IIIK)化合物与NHR9R10的化合物在碱性条件下反应以获得所述式(III)化合物，其中：
Rm为氢或烷基；和
环A、R3、R4、R3a、R4a、G3、G3a、R9至R11、t、n和s各自如式(III)中所定义。
提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱。有机碱包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双(三甲基甲硅烷基)氨基锂、乙酸钾、叔丁醇钠和叔丁醇钾。无机碱包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂。
(H)一种式(IV)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IVA)化合物与式(IVB)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(IV)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；
R12、R13、G3a、n和s各自如式(IV)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
(I)一种式(IVM)化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将式(IVAM)化合物与式(IVBM)化合物在催化剂存在下反应以获得所述式(IVM)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和烷基；
p1是0、1、2或3；
p2是0、1、2或3；且
R12、R13、G3a、n和s各自如式(IVM)中所定义。
催化剂包括但不限于Hoveyda-Grubbs第二代催化剂、Grubbs催化剂(第一代、第二代、第三代等)。
该反应优选在溶剂中进行，其中本文所用的溶剂包括但不限于乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
实施例
以下实施例用于说明本发明，但不应将这些实施例视为限制本发明的范围。如果本发明的实施例中没有规定实验方法的具体条件，则通常与原料和产品制造商的常规条件或推荐条件一致。未注明特定来源的试剂为市售常规试剂。
各化合物的结构通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)鉴别。NMR化学位移(δ)以10-6(ppm)给出。NMR通过Bruker AVANCE-300、AVANCE-400或AVANCE-500仪器来测定。溶剂为氘代二甲亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)和氘代甲醇(CD3OD)。
在Agilent 1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)上测定高效液相色谱(HPLC)。
在LC-10A vp(Shimadzu)或SFC-analytical(Berger Instruments Inc.)上测定手性高效液相色谱(HPLC)。
通过SHIMADZU(ESI)液相色谱-质谱仪(制造商：Shimadzu，型号：LC-20AD，LCMS-2020)来测定MS。
通过酶标仪(BMG公司，德国)来测定激酶抑制的平均比率和IC50值。
用于薄层色谱的薄层硅胶板为烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板。用于TLC中的板的规格为0.15mm至0.2mm，且用于产品纯化的薄层色谱中的板的尺规格为0.4mm至0.5mm。
柱色谱法一般使用烟台黄海200至300目的硅胶作为载体。
本发明的已知起始材料可由现有技术中的常规合成方法来制备，或可购自ABCRGmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich化学品公司、韶远化学科技有限公司或达瑞化学品公司等。
除非实施例中另外说明，否则将下面的反应置放于氩气氛围或氮气氛围下。
术语“氩气氛围”或“氮气氛围”是指反应烧瓶装配有具有1L氩气或氮气的气球。
术语“氢气氛围”是指反应烧瓶装配有具有1L氢气的气球。
用Parr 3916EKX氢化设备和透明蓝色QL-500氢气产生器或HC2-SS氢化设备进行高压氢化反应。
在氢化反应中，反应系统通常抽真空并填充氢气，并且将上述操作重复三次。
通过CEM Discover-S 908860微波反应器进行微波反应。
除非实施例中另外说明，否则下面反应中所使用的溶液指水溶液。
除非实施例中另外说明，否则下面反应的反应温度为室温。
室温为最适当的反应温度，其为20℃至30℃。
通过薄层色谱(TLC)来监测反应过程，且展开溶剂系统包括：A：二氯甲烷和甲醇，B：己烷和乙酸乙酯。可根据化合物的极性来调节溶剂的体积的比。用于通过柱色谱、薄层色谱和CombiFlash快速制备仪器纯化化合物的洗脱剂系统包括：A：二氯甲烷和甲醇，B：己烷和乙酸乙酯。可根据化合物的极性来调节溶剂的体积比，且有时可加入少量碱性反应剂(例如氨)或酸性反应剂(例如乙酸)。
通过Shimadzu(LC-20AD，SPD20A)制备型HPLC(Phenomenex Gemini-NX 5μM C1821.2×100mm柱)用水/MeOH或水/CH3CN洗脱系统与任选的添加剂(例如HCOOH和TFA)来纯化最终化合物。
使用以下缩写：
Hoveyda-Grubbs第二代催化剂为(1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)钌(Sigma-Aldrich)，
Grubb's第二代(Grubb's(II))催化剂为(1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦)钌，
TEA为三乙胺，
HATU为1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸盐，
HBTU为O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐，
DCM为二氯甲烷，
DMF为N,N-二甲基甲酰胺，
DMSO为二甲亚砜，
DEAD为偶氮二甲酸二乙酯，
DIAD是偶氮二甲酸二异丙酯，
EDCI是N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，
EtOAc为乙酸乙酯，
Prep HPLC为制备型高效液相色谱。
NMR为质子核磁共振，且
MS为质谱，其中(+)表示正模式，通常给出M+1(或M+H)吸收，其中M＝分子量。
实施例1和2
(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)1
(3S,3”S)-3,3”-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)2
方法A：
第一步(S)-3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯1c
向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯1a(205mg,0.885mmol,1.0当量)和(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯1b(250mg 1.24mmol,1.4当量)的二氯甲烷溶液(～15mL)中加入PPh3(350mg,1.33mmol,1.5当量)，然后加入DEAD(210uL,1.33mmol,1.5当量)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物在真空下浓缩并通过硅胶柱(40g ISCO筒柱，20％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化，得到标题化合物1c(S)-3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯(280mg,76％)。
第二步(S)-3-((2-氨基戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯1d
向(S)-3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯1c(280mg,0.675mmol,1当量)的二氯甲烷溶液(～10mL)中加入4N HCl的二氧六环溶液(6mL,24mmol,35.6当量)，将反应混合物在室温搅拌3小时。将挥发物真空蒸发，得到标题化合物1d(S)-3-((2-氨基戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯(230mg,97％)。MSm/z(ESI):315[M+1]。
第三步(S)-3-烯丙基-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯1e
向(S)-3-((2-氨基戊-4-烯-1-基)氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酸甲酯1d(230mg,0.655mmol,1当量)的DMSO溶液(～7mL)中加入三乙胺(140uL,0.98mmol,1.5当量)，然后加入K2CO3(270mg,1.96mmol,3当量)，将反应混合物在100℃加热3小时。将混合物冷却至室温，加入水(～30mL)。过滤收集沉淀物，得到标题化合物1e(S)-3-烯丙基-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯(120mg,66％)。MS m/z(ESI):279[M+1]。
第四步(S)-3-烯丙基-5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯1f
向(S)-3-烯丙基-5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯1e(120mg,0.431mmol,1当量)的MeOH溶液(～15mL)中加入Na2S2O4(751mg,4.31mmol,10当量)水溶液(5mL)，然后加入浓NH4OH(0.78mL,10.8mmol,25当量)，将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物用水稀释(20mL)，用EtOAc萃取(30mL×3)。将有机层合并，用盐水洗涤(20mL×1)，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗的标题化合物1f(S)-3-烯丙基-5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯(118mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS m/z(ESI):249[M+1]。
第五步(S)-3-烯丙基-2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯1g
向(S)-3-烯丙基-5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸甲酯1f(120mg,0.475mmol,1当量)的MeOH溶液(～20mL)中加入BrCN(76mg,0.713mmol,1.5eq)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩，得到粗的标题化合物1g(S)-3-烯丙基-2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯(160mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS m/z(ESI):274[M+1]。
第六步(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯1i
向(S)-3-烯丙基-2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯1g(160mg,0.463mmol,1当量)的DCM(～15mL)和DMF(～3mL)的溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸1h(107mg,0.694mmol,1.5当量)、HATU(264mg,0.694mmol,1.5当量)和TEA(325uL,2.32mmol,5当量)，将反应混合物在室温搅拌过夜。LC-MS显示存在～25％的起始原料1g，加入另外的0.5eq(36mg,0.232mmol)1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸1h和HATU(88mg,0.232mmol,0.5当量)，并将混合物在室温搅拌过夜。将混合物用DCM(30mL)稀释，用水洗涤(10mL×1)，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱(24gISCO筒柱，10％EtOH和30％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到标题化合物1i(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯(150mg,80％)。MS m/z(ESI):410[M+1]。
第七步(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸1j
向(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯1i(10mg,0.024mmol,1当量)的MeOH溶液(1.5mL)中加入5NKOH水溶液(1.5mL)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物用6N HCl酸化至pH<5，用水稀释(10mL)，用EtOAc萃取(10mL×3)。将有机层合并，用盐水洗涤(10mL×1)，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗的标题化合物1j(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸(12mg)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS m/z(ESI):396[M+1]。
第八步(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺1k
向(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸1j(12mg,0.03mmol,1当量)的DMF溶液(～1mL)中加入7N氨的MeOH溶液(50uL,0.35mmol,12当量)、HATU(17.3mg,0.046mmol,1.5当量)和TEA(12.6uL,0.09mmol,3当量)，将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物通过反相HPLC纯化，用AcCN/H2O/HCOOH洗脱，得到标题化合物1k(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺(2.2mg,23％)。MS m/z(ESI):395[M+1]。
第九步
向1k(42mg,0.11mmol,1当量)的DCM(1.5mL)/MeOH(1.5mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(27mg的1.5mL MeOH溶液,0.14mmol,1.27当量)。将所得混合物在室温搅拌15分钟并除去溶剂。将残余物溶于DCM(2mL)中，并转移至密封管中。加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(15.5mg,0.025mmol,0.23当量)。将密封管用N2脱气并在80℃下搅拌18小时。加入少量的MeOH，5分钟后，真空除去溶剂，将残余物通过反相HPLC纯化，用AcCN/H2O/TFA洗脱，得到标题化合物1(7mg)和2(11mg)。
实施例1(在反相HPLC上保留时间较短)(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)MS m/z(ESI):761[M+1]；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ7.60(d,2H),7.31(d,2H),6.62(s,2H),5.63-5.69(m,2H),4.73–4.49(m,6H),4.44(d,2H),4.24–4.13(m,2H),2.54-2.64(m,4H),2.21(s,6H),1.35(t,6H)。
实施例2(在反相HPLC上保留时间较长)(3S,3”S)-3,3”-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)MS m/z(ESI):761[M+1]；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ7.52(d,2H),7.28(d,2H),6.45(s,2H),5.85-5.91(m,2H),4.67–4.52(m,6H),4.21(m,2H),2.89-2.99(m,2H),2.34(s,2H),1.88(s,6H),1.43(t,6H),1.31(s,2H)。
实施例3
(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)3
第一步(2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯3b
向(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-烯酸甲酯3a(25g,109mmol)的二氯甲烷(500mL)溶液中加入Grubb's第二代催化剂(1g)。加入后，将反应回流16小时。TLC显示单体已完全转化。将其浓缩，并在硅胶柱上纯化，用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯3b(22.1g,94％产率)。MS m/z(ESI):431[M+1]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ5.43(bs,2H),5.12(bs,2H),4.37(m,2H),3.77(s,6H),2.49,m,4H),1.47(s,18H)。还分离出次要异构体(顺式)(极性更大)(2.1g,5％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,):δ5.48(m,2H),5.18(m,2H),4.38(m,2H),3.77(s,6H),2.49(m,4H),1.47(s,18H)。
第二步((2S,7S,E)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯3c
在0℃向(2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯3b(24g,55.74mmol)的无水MeOH(300mL)溶液中缓慢加入硼氢化钠(8.4g,223mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时。加入乙酸以将pH值调节至约5。将其浓缩，并将残余物溶解于DCM(200mL)中。将其过滤。将滤液浓缩并在硅胶柱上纯化，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物((2S,7S,E)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯3c(20.1g,96.3％产率)。MS m/z(ESI):375[M+1]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ5.53(m,2H),3.54(m,2H),3.49(m,4H),2.32-2.11(m,4H),1.46(s,18H)。
第三步 二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3d
在0℃向DIAD(10.8g,53.4mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中加入三苯基膦(14.0g,53.4mmol)。将其在0℃搅拌10分钟，然后加入4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯1a(3.1g,13.4mmol)，接着加入((2S,7S,E)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯3c(5.0g,13.4mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌10小时。将其浓缩。将粗物质在硅胶柱上纯化，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3d(9.0g,84.1％)。MS m/z(ESI):801[M+1]；1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.05(d,0.5Hz,2H),7.84(d,0.5Hz,2H),5.67(m,2H),4.20(m,4H),4.13(m,4H),3.98(m,2H),3.96(s,6H),2.50(m,2H),1.45(s,18H)。
第四步 二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3e
在室温向二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3d(9.0g,11.2mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入三氟乙酸(25mL)。然后，将反应在环境温度搅拌14小时。将其浓缩，用二氯甲烷和乙醚洗涤，得到标题化合物二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3e(5.9g,88％)。其无需进一步纯化即可用于下一步。MS m/z(ESI):601[M+1]。
第五步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3f
向上一步得到的二甲基5,5'-(((2S,7S,E)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)3e的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入三乙胺(4.6g,45mmol)和碳酸钾(9.3g,67.4mmol)。加入后，将反应在100℃搅拌2小时。LCMS显示原料已完全转化。将其浓缩并吸收到硅胶上。将其用20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3f(7.00g,98％产率)。MS m/z(ESI):529[M+1]。
第六步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3g
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3f(3.7g,6.2mmol)的甲醇(150mL)溶液中加入亚硫酸氢钠(30.5g,175mmol)的水溶液(40mL)，然后加入浓氢氧化铵(40mL)。将反应在环境温度搅拌4小时。LCMS显示反应已完成。将其用乙酸乙酯萃取几次。将合并的有机层浓缩，干燥装载至硅胶柱上，并用20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3g(2.0g,69％)。MS m/z(ESI):469[M+1]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6,):δ6.89(s,2H),6.69(s,2H),5.64(m,2H),5.43(m,2H),4.81(m,4H),4.10(m,2H),3.75(s,4H),3.72(s,6H)。
第七步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3h
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)3g(2.0g,4.27mmol)的无水甲醇(100mL)混悬液中加入溴化氰(1.81g,17.1mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时，得到澄清溶液。LCMS显示反应完成。将其浓缩。将粗产物在硅胶柱上纯化，用20％甲醇(含7N氨)的二氯甲烷溶液洗脱，得到(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3h(1.95g,88.1％产率)。MS m/z(ESI):519[M+1]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4,):δ7.59(s,2H),7.22(s,2H),5.55(s,2H),4.61(s,2H),4.45(s,2H),4.31(d,J＝12Hz,2H),4.07(d,12Hz,2H),3.90(s,6H),3.37(s,2H),2.44(宽s,4H)。13C NMR(400MHz,甲醇-d4):δ168.3,154.3,140.9,140.7,129.2,124.7,123.6,110.1,106.2,68.0,51.6,51.1,34.5。
第八步1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸特戊酸酐3j
在0℃向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸3i(4.7g,30.5mmol)和三乙胺(3.5g,34.8mmol)的THF(50mL)溶液中加入特戊酰氯(3.5g,29mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌1小时。将其过滤，并将滤液浓缩，得到1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸特戊酸酐3j(6.9g,100％产率)，无需进一步纯化即可用于下一步。
第九步(3S,3”S)-二甲基3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3k；
(S)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3-((E)-4-((S)-7-(甲氧基羰基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯3l；
(3S,3”S)-二甲基3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3m
在0℃向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3h(1,62g,3.12mmol)和DIPEA(4.0g,31.2mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸特戊酸酐3j(6.0g,25mmol)。加入后，将反应在0℃搅拌20分钟，升温至环境温度，并搅拌16小时。将其浓缩，并在硅胶柱上纯化，得到产物。极性最大的产物由1H NMR、13C NMR和LCMS鉴定为(3S,3”S)-二甲基3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3k(0.58g,24％产率)。MS m/z(ESI):791[M+1]；1HNMR(400MHz,CD3OD):δ7.69(s,2H),7.51(s,2H),6.73(s,2H),5.67(s,2H),4.67(m,6H),4.42(d,11.2Hz,2H),4.17(d,11.2Hz,2H),3.97(s,6H),2.65(m,4H),2.31(s,6H),1.27(m,6H)；13C NMR(400MHz,CD3OD):δ182.5；166.4；146.4；141.5；129.0；127.3；126.8；120.2；110.8；110.2；106.8；68.8；53.4；52.5；46.7；38.4；34.9；27.1；16.2；13.2。
极性第二的产物由1H NMR、13C NMR和LCMS鉴定为(S)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3-((E)-4-((S)-7-(甲氧基羰基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯3l(1.01g,44％产率)。MS m/z(ESI):739[M+1]；1H NMR(400MHz,CD3OD:δ7.85(s,1H),7.73(s,1H),7.58(s,1H),7.52(s,1H),7.28(s,1H),6.67(s,1H),6.45(s,1H),5.64-5.46(m,6H),4.90(m,2H),4.73-4.44(m,10H),3.98(s,3H),2.30(m,2H),1.54(m,3H),1.25(s,9H)。
极性最小的产物由1H NMR、13C NMR和LCMS鉴定为(3S,3”S)-二甲基3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3m(0.56g,37％产率)。MS m/z(ESI):687[M+1]；1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ7.76(s,2H),7.50(s,2H),5.72(宽s,2H),5.54(s,2H),4.40(d,11.2Hz,2H),4.23(d,11.2Hz,2H),3.96(s,6H),2.53(m,4H),1.25(s,18H)。
第十步(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)3
在0℃向(3S,3”S)-二甲基3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)3k(570mg,0.72mmol)的二氧六环(8mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(182mg,4.3mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时。将其浓缩，并加入浓盐酸使pH值达到4，然后再次浓缩。然后，加入氢氧化铵以将pH值改变为9。将粗混合物浓缩，并在反相柱上纯化，得到(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)3(534mg,97.2％产率)。MS m/z(ESI):763[M+1]；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.72(s,2H),7.61(s,2H),6.71(s,2H),5.55(s,2H),4.60(m,6H),4.32(d,11.2Hz,2H),4.25(d,11.2Hz,2H),2.65(m,4H),2.31(s,6H),1.17(m,6H)。
实施例4
(S)-3-((E)-4-((S)-7-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺4
第一步(S)-3-((E)-4-((S)-7-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸4a
在0℃向(S)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3-((E)-4-((S)-7-(甲氧基羰基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸甲酯3l(0.85g,1.15mmol)的二氧六环(15mL)和水(3mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(145mg,43.45mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时。将其浓缩，并加入浓盐酸以使pH值达到4，然后再次浓缩。然后，加入氢氧化铵以将pH值改变为9。将粗混合物浓缩，并在反相柱上纯化，得到(S)-3-((E)-4-((S)-7-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸4a(801mg,97.8％产率)。MS m/z(ESI):711[M+1]。
第二步(S)-3-((E)-4-((S)-7-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺4
向(S)-3-((E)-4-((S)-7-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中加入HATU(1.75g,4.6mmol)和EDCI(0.88g,4.6mmol)。加入后，将其在环境温度搅拌30分钟，并向其中鼓入氨气1分钟。然后，将其吸收到硅胶上，并用20％甲醇(含7N氨)的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(S)-3-((E)-4-((S)-7-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-2-特戊酰胺基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺4(693mg,2步85％产率)。MS m/z(ESI):709[M+1]；1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.77(s,1H),7.64(d,1H),7.40(s,1H),7.35(d,1H),6.64(s,1H),5.60-5.50(m,2H),5.01-4.90(m,7H),4.71(m,2H),4.60(m,1H),4.50(m,2H),4.26(m,2H),2.66(m,1H),2.57(m,1H),2.46(m,2H),2.24(s,3H),1.39(t,3H),1.28(s,9H)。
实施例1(方法B)
(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)1
可以通过与实施例4中的第二步相同的方法来制备标题化合物。
实施例2(方法C)
(3S,3”S)-3,3”-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)2
方法C:
第一步(Z)-1,4-双((2S,5R)-5-异丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氢吡嗪-2-基)丁-2-烯2b
在-78℃向(R)-2-异丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氢吡嗪2a(26.5g,144mmol)的THF(300mL)溶液中加入正丁基锂(1.6M的THF溶液,252mL,403mmol)。将反应在-78℃下搅拌30分钟，并滴加入顺式-1,4-二氯-2-丁烯(6.0g,48mmoL)的THF(20mL)溶液。加入后，将反应缓慢升温至环境温度，并搅拌10小时。将反应用饱和NaHCO3处理，并用乙醚萃取。将有机相浓缩，并在硅胶柱上纯化，用40％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到所需产物(Z)-1,4-双((2S,5R)-5-异丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氢吡嗪-2-基)丁-2-烯2b(21.2g,97.5％产率)。MS m/z(ESI):421[M+1]；1HNMR(400MHz,CDCl3,):δ5.40(t,4.68Hz,2H),4.11(m,2H),3.93(t,3.36Hz,2H),3.70(s,6H),3.68(s,6H),2.58(m,4H),2.27(m,2H),1.05(d,6.88Hz,6H),0.69(d,6.88Hz,6H)。C13NMR(CDCl3,400mHz):164.3520,155.5372,155.2789,149.3704,133.4904,129.8941,121.0590,118.8352,117.8400,116.0490,79.9376,70.9526,53.0272,49.1954,35.9561,28.3666
第二步(2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯二酸二甲酯2c
在环境温度向(Z)-1,4-双((2S,5R)-5-异丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氢吡嗪-2-基)丁-2-烯2b(10g,19.21mmol)的1,4-二氧六环(200mL)溶液中加入0.3M盐酸(200mL)。将反应在环境温度搅拌16小时。TLC显示起始原料已完全转化。将其用压缩空气冲洗20分钟，并在室温浓缩以使pH值达到约7。然后，加入7N氨的甲醇溶液以使pH值达到约9。将其再次浓缩以除去多余的甲醇。将残余物冻干，得到(2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯二酸二甲酯2c(4.2g,95％产率)。MS m/z(ESI):231[M+1]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.56(m,2H),3.72(s,6H),3.56(dd,5.20Hz,7.28Hz,2H),2.58-2.39(m,2H),1.64(宽s,4H)；13CNMR(400MHz,CDCl3):175.7336,128.0116,54.1739,52.1016,32.5440。
第三步(2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯2d
在环境温度向(2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯二酸二甲酯2c(6.9g,30mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中加入DMAP(3.7g,30mmol)。将其冷却至0℃，并加入Boc酸酐(19.7g,90mmol)。将反应在0℃下搅拌过夜，然后缓慢升温至环境温度。加入Hunig’s碱(3.9g,30mmol)，并将其搅拌1小时。将其浓缩并在硅胶柱上纯化，用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到所需的产物(2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯2d(7.8g,60％产率)。MS m/z(ESI):431[M+1]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.49(dd,5.2Hz,4.8Hz,2H),5.19(d,7.8Hz,2H),4.43(m,2H),3.76(s,6H),2.62-2.57(m,2H),2.49-2.44(m,2H),1.50(s,18H)；13CNMR(400MHz,CDCl3):172.4101,155.1458,127.3543,80.1546,52,8811,52.4108,30.4195,28.2974。
第四步((2S,7S,Z)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯2e
在0℃向(2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯二酸二甲酯2d(5.6g,13mmol)的无水甲醇(100mL)溶液中分批加入硼氢化钠(2.0g,54mmol)。加入后，将反应升温并在环境温度搅拌16小时。加入乙酸以将pH值调节至约5，并将其浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(100mL)中。将其过滤。将滤液浓缩并在硅胶柱上纯化，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到((2S,7S,Z)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯2e(3.1g,63.7％产率)。MS m/z(ESI):375[M+1]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.51(m,2H),5.32(宽s,2H),3.65(m,6H),2.37-2.42(m,4H),1.46(s,18H)；13C NMR(400MHz,CDCl3,):156.1859；156.0863,128.1596,128.1019,79.7261,63.8966,52.1977,29.0973,28.4069。
第五步 二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2f
在0℃将偶氮二甲酸二异丙酯(9.73g,48.1mmol)和三苯基膦的THF(100mL)溶液搅拌10分钟，形成白色蜡状沉淀。然后，加入4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯1a(11.14g,48.1mmoL)，接着加入((2S,7S,Z)-1,8-二羟基辛-4-烯-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯2e(6.0g,16.02mmol)。将反应在0℃下搅拌10小时，然后缓慢升温至环境温度，并搅拌2小时。将其浓缩。将粗物质在硅胶柱上纯化，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2f(8.1g,21％产率)。MS m/z(ESI):823[M+Na]。
第六步 二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2g
向二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2f(8.1g,10.1mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入三氟乙酸(40mL)。加入后，将反应在环境温度搅拌12小时。LCMS显示反应已完成。将其浓缩。将粗残余物溶于MeOH(100mL)，并加入碳酸氢钠使其呈碱性(pH 8)。将其再次浓缩并吸收到硅胶上，并在硅胶柱上纯化，用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2g(5.83g,96％产率)。1H NMR(400mHz,CD3OD):δ8.11(d,1.72Hz,2H),7.88(d,1.72Hz,2H),5.82(t,4.96Hz,2H),4.47-4.33(m,4H),3.98(s,6H),3.73(m,2H),2.88-2.66(m,4H)。
第七步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2h
向二甲基5,5'-(((2S,7S,Z)-2,7-二氨基辛-4-烯-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)2g(5.8g,9.62mmol)的DMF(60mL)溶液中加入三乙胺(6.1g,60mmol)和碳酸钾(12.5g,90mmol)。加入后，将反应在100℃搅拌2小时。LCMS显示反应已完成。将其浓缩并吸收到硅胶上，用20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2h(3.00g,59％产率)。MS m/z(ESI):529[M+1]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.77(d,3.32Hz,2H),8.22(d,3.32Hz,2H),5.67(m,2H),4.07(m,4H),3.78(s,6H),3.70(m,2H),2.32(m,4H)。
第八步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2i
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2g(2.7g,4.5mmol)的无水甲醇(40mL)溶液中加入Na2S2O4(19.5g,112mmoL)的水(40mL)溶液，然后加浓氢氧化铵溶液(40mL)。加入后，将反应在环境温度搅拌4小时。LCMS显示反应已完成。将其用乙酸乙酯萃取。将有机层浓缩，并在硅胶柱上纯化，用20％乙酸乙酯的DCM溶液洗脱，得到标题化合物(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2i(2.0g,69％)。MSm/z(ESI):469[M+1]。
第九步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2j
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)2i(2.0g,4.27mmol)的DMF(100mL)混悬液中加入溴化氰(4.8g,45mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时以得到澄清溶液。LCMS显示原料已完全转化。将其浓缩。将粗残余物在硅胶柱上纯化，用20％甲醇(含7N氨)的二氯甲烷溶液洗脱，得到(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2j(2.0g,90％产率)；MS m/z(ESI):519[M+1]。
第十步(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2k
向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸1h(2.4g,15.4mmoL)的DMF(50mL)溶液中加入EDCI(3.7g,19.3mmoL)和HATU(7.3g,19.3mmoL)和DMAP(1.9g,15.4mmoL)。将反应在环境温度搅拌20分钟，观察到酸被转化为HATU络合物(MW＝272)。然后，加入(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2j(2.0g,3.85mmol)。将反应在室温搅拌2小时。LCMS显示反应已完成。将其吸收到硅胶上，并在硅胶柱上纯化，用100％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脱，得到(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2k(1.3g,43％产率)。MS m/z(ESI):791[M+1]
第十一步(3S,3'S)-3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)2l
在0℃向(3S,3'S)-二甲基3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)2k(1.2g,1.52mmol)的1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂水合物(320mg,7.6mmol)。加入后，将反应在环境温度搅拌16小时。将其浓缩，并加入浓盐酸使pH值达到约4。然后，加入氢氧化铵使pH值达到9。将粗混合物浓缩，并将粗的(3S,3'S)-3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)2l不经进一步纯化即用于下一步。少量在反相柱上纯化。MS m/z(ESI):763[M+1]。
第十二步(3S,3”S)-3,3”-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)2
向(3S,3'S)-3,3'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)2l(直接来自上一步)的DMF(20mL)溶液中加入EDCI(1.02g,5.32mmol)和HATU(2.01g,5.32mmoL)。加入后，将反应在环境温度搅拌1小时，观察到HATU络合物的形成。此时，鼓入氨气1分钟，观察到经LCMS监测的完全转化。将其浓缩，并吸收到硅胶上，并用15％甲醇(含7N氨)的二氯甲烷溶液洗脱，得到(3S,3”S)-3,3”-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)2(470mg,2步产率40.5％)。
实施例5
(3S,3”S)-3,3”-(丁烷-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)5
向化合物(3S,3”S)-3,3”-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)1(7mg,0.0092mmol)的MeOH(0.4mL)/THF(0.4mL)溶液中加入10重量％的Pd/C(8mg)。将混合物在H2气球下搅拌4小时。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM系统洗脱，得到标题化合物5(3S,3”S)-3,3”-(丁烷-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)(3mg)。MS m/z(ESI):763[M+1]；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ7.45-7.40(m,2H),7.18(d,J＝1.1Hz,2H),6.35(s,2H),4.65(dd,J＝13.6,7.0Hz,2H),4.52(t,J＝9.2Hz,4H),4.43(dq,J＝14.1,7.2Hz,2H),4.09(dd,J＝11.9,2.6Hz,2H),2.12-1.97(m,2H),1.81(s,8H),1.67-1.47(m,4H),1.28(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例6
(3S,3”S)-3,3”-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)6
第一步(S)-5-溴-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-炔酸甲酯6b
在氩气下将N-溴代琥珀酰亚胺(1.2g,7mmol)和AgNO3(100mg,0.60mmol)加入到(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-炔酸甲酯6a(2.2g,4mmol)的丙酮(15mL)搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌7小时。之后，加入水(50mL)，并将混悬液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。然后将合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(9：1己烷：乙酸乙酯)纯化，得到(S)-5-溴-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-炔酸甲酯6b(670mg)。
第二步(2S,7S)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-炔二酸二甲酯6c
将锌粉(662mg,10.1mmol)称量到圆底烧瓶中。加入碘(24mg,0.1mmol)，并用加热枪在真空下将烧瓶加热十分钟，然后用氩气冲洗。将烧瓶抽真空，再用氩气冲洗3次，冷却至0℃。将(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-碘丙酸甲酯(1.1g,3mmol,购自Combi-Blocks)溶于无水DMF(1.5mL)中，并在0℃通过注射器滴加到活化的锌中。然后将反应混合物升至室温，并搅拌90分钟，得到相应的有机锌中间体(TLC分析用于确认原料完全消耗)。在另一个烧瓶中，在氩气下将CuCN(236mg,2.6mmol)和LiCl(224mg,5.2mmol)加热至150℃持续2小时，然后冷却至室温。加入DMF(4mL)，并将溶液搅拌5分钟，形成可溶性CuCN·2LiCl络合物。然后将铜络合物冷却至-15℃。一旦判断出锌插入过程已经完成，就停止搅拌以使锌粉沉降到烧瓶底部。在氩气下通过注射器除去上清液(注意避免锌的转移)，并在-15℃下滴加到铜络合物中。然后将(S)-5-溴-2-((叔丁氧羰基)氨基)戊-4-炔酸甲酯6b(0.67g,2.01mmol)溶于DMF(1.5mL)中，并在-15℃滴加到铜络合物中。移走冷却浴，并在氩气下将反应混合物在室温搅拌16小时。之后，加入水(50mL)，并将混悬液用乙醚(3×100mL)萃取，用盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(5：1己烷：乙酸乙酯)纯化，得到(2S,7S)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-炔二酸二甲酯6c(670mg,53％)。
第三步((2S,7S)-1,8-二羟基辛-4-炔-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯6d
在0℃向(2S,7S)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-炔二酸二甲酯6c(670mg,2.55mmol)的THF(15mL)溶液中加入NaBH4(290mg,7.66mmol,3当量)的2mL MeOH溶液。将混合物在0℃搅拌30分钟。加入1M HCl以将pH值调节至～5并浓缩。将残余物溶于DCM中，过滤并真空浓缩，得到粗化合物，将其通过柱(己烷：EA＝40％：60％)纯化，得到所需产物((2S,7S)-1,8-二羟基辛-4-炔-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯6d(540mg)。
第四步 二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6e
向THF溶液(～10mL)加入PPh3(428mg,3当量)，然后加入DEAD(257uL,3当量)，将反应混合物在0℃搅拌10分钟。然后将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(379mg,3eq)的2mlTHF溶液加入反应中，然后加入((2S,7S)-1,8-二羟基辛-4-炔-2,7-二基)二氨基甲酸二叔丁酯6d(540mg)。将反应在室温搅拌过夜。真空下除去混合物中的溶剂，并通过硅胶柱(24gISCO筒柱，40％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化，得到标题化合物二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-双((叔丁氧羰基)氨基)辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6e(498mg,52％)。
第五步 二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-二氨基辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6f
向二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-二氨基辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6e(180mg,)的二氯甲烷溶液(～10mL)中加入4N HCl的二氧六环(3mL,15mmol)溶液，将反应混合物在室温搅拌3小时。将挥发物在真空下蒸发，得到标题化合物二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-二氨基辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6f(125mg,96％)。MS m/z(ESI):600[M+1]
第六步(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6g
向二甲基5,5'-(((2S,7S)-2,7-二氨基辛-4-炔-1,8-二基)双(氧基))双(4-氯-3-硝基苯甲酸酯)6f(125mg)的DMF溶液(～4mL)中加入三乙胺(150uL,1.0mmol)，然后加入K2CO3(280mg,2.0mmol)，将反应混合物在100℃加热3小时。将混合物冷却至室温，加入水(50mL)，并将混悬液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。然后将合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(9：1DCM：甲醇)纯化，得到(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6g(80mg)。MS m/z(ESI):527[M+1]
第七步(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6h
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6g的MeOH溶液(～15mL)中加入Na2S2O4(630mg,3.62mmol,10当量)的水(5mL)溶液，然后加入浓NH4OH(0.78mL,10.8mmol)，将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物用水稀释(20mL)，用EtOAc萃取(30mLX3)。将有机层合并，用盐水(20mL X 1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到粗产物，其通过硅胶柱(12g筒柱，10％甲醇的DCM溶液洗脱)纯化，得到标题化合物(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6h(60mg)。MS m/z(ESI):467[M+1]
第八步(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)6i
向(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-7-甲酸酯)6h(62mg)的MeOH溶液(～20mL)中加入BrCN(140mg,1.5mmol)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩，得到粗的二甲基(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)6i(65mg,80％)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS m/z(ESI):517[M+1]
第九步(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)6j
向6i(65mg)的DCM(～15mL)和DMF(～3mL)溶液中加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸3i(44mg,0.28mmol)、HATU(136mg,3当量)和TEA(155uL,5当量)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物用DCM(30mL)稀释，用水洗涤(10mL)，经Na2SO4干燥，过滤，并将滤液在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(10-100％水:ACN(1％TFA))纯化，得到二甲基(3S,3'S)-二甲基3,3'-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸酯)6j(20mg,40％)。MS m/z(ESI):789[M+1]。
第十步(3S,3”S)-3,3”-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)6k
向6j的MeOH溶液(～1.5mL)中加入5N KOH水溶液(1.5mL,7.5mmol,30当量)，将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物用6N HCl酸化至pH<5，并在真空下浓缩滤液，得到粗化合物，然后通过制备型HPLC(10-100％水:ACN(1％TFA))纯化，得到(3S,3”S)-3,3”-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酸)6k(7mg)。MS m/z(ESI):761[M+1]
第十一步(3S,3”S)-3,3”-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)6
向6k(9mg,0.022mmol)的DMF(～1mL)溶液中加入氯化铵(17.49mg,0.33mmol,15当量)、HATU(12.67mg,0.033mmol,1.5当量)和TEA(9.24μL,0.066mmol,3当量)，将反应混合物在室温搅拌2小时。将混合物通过反相HPLC纯化，用AcCN/H2O/HCOOH洗脱，得到(3S,3”S)-3,3”-(丁-2-炔-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)6(2.5mg)。MS m/z(ESI):759[M+1]。
实施例7
10,10”-(丁-2-烯-1,4-二基)双(1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺)7
实施例8
10-(4-((S)-7-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺8
第一步4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇7b
在室温向叔丁基丁烷-1,4-二醇7a(10g,111mmol)和DIPEA(21.3mL,122mmol,1,1当量)的二氯甲烷溶液(600mL)中加入TBDPSCl(31.6mL,122mmol,1.1当量)。将得到的溶液在室温搅拌72小时。将混合物在真空下浓缩，并通过硅胶柱纯化(330g ISCO筒柱，0-40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇7b(36g,98％)。
第二步4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁醛7c
氮气氛下在室温向4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇7b(23.5g,71.6mmol)的二氯甲烷溶液(300mL)中加入DMP(45.6g,107mmol,1.5当量)。将所得溶液在室温搅拌2小时，然后用饱和NaCl溶液处理。用EtOAc(500mLX3)萃取后，合并有机层，经Na2SO4干燥并过滤。真空下浓缩溶剂，得到标题化合物4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁醛7c，无需进一步纯化即可用于下一步。
第三步N-(4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)亚丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7d
氮气氛下在室温向4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丁醛7c(粗品,71.6mmol)和2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(9.5g,78.8mmol,1.1当量)的THF溶液(500mL)中加入Ti(OEt)4(27mL,128mmol,1.8当量)。将所得溶液在室温搅拌1小时，然后用饱和NaHCO3溶液处理。用EtOAc(500mLX3)萃取后，合并有机层，经Na2SO4干燥并过滤。真空下浓缩溶剂，得到标题化合物N-(4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)亚丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7d，无需进一步纯化即可用于下一步。
第四步N-(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7e
氮气氛下在-78℃向N-(4-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)亚丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7d(粗品,71.6mmol)的THF溶液(600mL)中加入烯丙基溴化镁(143mL,143mmol,2当量)。将所得溶液在-78℃搅拌1小时，然后用饱和NH4Cl溶液处理。用EtOAc(500mLX3)萃取后，合并有机层，经Na2SO4干燥并过滤。真空下浓缩溶剂。将所得混合物通过硅胶柱纯化(2*330g ISCO筒柱，0-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物N-(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7e(8.2g，三步24％)。
第五步7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-胺7f
在室温向N-(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7e(8.2g,17.4mmol)的DCM溶液(600mL)中加入4N HCl的二氧六环溶液(13mL,52.2mmol,3当量)。将所得溶液在室温搅拌过夜。真空下浓缩溶剂，得到标题化合物7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-胺7f，无需进一步纯化即可用于下一步。
第六步(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)氮烷甲酸叔丁酯7g
在室温向7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-胺7f(粗品,17.4mmol)的DCM:THF溶液(1:1,300mL)中加入NEt3(8.23mL,87mmol,5当量)和Boc2O(7.59g,34.8mmol,2当量)。将所得溶液在室温搅拌48小时。真空下浓缩溶剂。所得混合物通过硅胶柱纯化(120gISCO筒柱，0-25％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)-氮烷甲酸叔丁酯7g(8.14g,98％两步)。
第七步(7-羟基庚-1-烯-4-基)氮烷甲酸叔丁酯7h
在室温向7(7-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)庚-1-烯-4-基)氮烷甲酸叔丁酯7g(8.14g,17.5mmol)的THF溶液(300mL)中加入TBAF(18.34mL,18.3mmol,1.05当量)。将所得溶液在室温搅拌6小时。真空下浓缩溶剂。所得混合物通过硅胶柱纯化(80g ISCO筒柱，0-100％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物(7-羟基庚-1-烯-4-基)氮烷甲酸叔丁酯7h(1.8g,45％)。
实施例7的第八至十五步的制备程序与实施例1相似
将混合物通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/TFA洗脱，得到标题化合物10-烯丙基-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺7p。MS m/z(ESI):423[M+1]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ7.82(s,1H),7.57(s,1H),6.78(s,1H),5.71-5.61(m,2H),4.83-4.64(m,3H),3.78(m,1H),3.01-2.72(m,3H),2.34-2.09(m,7H),1.74(m,1H),1.48(t,J＝6.4Hz,3H)。
第十六步
在室温向10-烯丙基-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺7p(10mg)和(S)-3-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺1k(7mg)的二氯甲烷/MeOH溶液(1:1,2mL)中加入TsOH.H2O(15mg)的MeOH(0.5mL)溶液。将所得溶液在室温搅拌15分钟，然后真空下浓缩。在N2下，向残余物重新溶解的DCM(2mL)溶液中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(15mg)。将所得溶液在80℃下搅拌3小时。将混合物浓缩，然后通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/NH4HCO3洗脱，得到标题化合物：
实施例7(在反相HPLC上保留时间较短),10,10”-(丁-2-烯-1,4-二基)双(1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺)7(1.8mg,12％)，MS m/z(ESI):817[M+1],815[M-1]。
实施例8(在反相HPLC上保留时间较长),10-(4-((S)-7-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-3-基)丁-2-烯-1-基)-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7,8,9,10-四氢-6-氧杂-2,10a-二氮杂环辛[cd]茚-4-甲酰胺8(1.4mg,10％)，MS m/z(ESI):789[M+1],787[M-1]。
实施例9
(4S,4'S)-4,4'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)9
实施例10
(4S,4'S)-4,4'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)10
第一步(S)-2-氨基戊-4-烯-1-醇9b
氮气氛下在室温向(S)-2-氨基戊-4-烯酸9a(10g,86.7mmol)的THF溶液(300mL)中加入LiAlH4(108mL,1M的THF溶液)。将所得溶液在室温搅拌过夜，然后通过在0℃加入MeOH淬灭。将混合物用盐水(500mL)稀释，用EtOAc萃取(500mLX3)。将有机相合并，经Na2SO4干燥并过滤。真空下浓缩溶剂，得到(S)-2-氨基戊-4-烯-1-醇9b，无需进一步纯化即可用于下一步。
第二步(S)-4-((1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基)-3,5-二硝基苯甲酸9d
在75℃向甲基(S)-2-氨基戊-4-烯-1-醇9b(来自上一步的粗品,86.9mmol)和Na2CO3(13.6g,129mmol)的水溶液(100mL)中加入4-氯-3,5-二硝基苯甲酸9c(21g,86.9mmol)。在75℃将所得溶液搅拌2小时。冷却后，将混合物浓缩。将所得混合物通过硅胶柱纯化(2*330g ISCO筒柱，0-100％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物(S)-4-((1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基)-3,5-二硝基苯甲酸9d(>100％,含有硅胶)。
第三步(S)-4-((1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基)-3,5-二硝基苯甲酸甲酯9e
在0℃向化合物9d(粗品,86.7mmol,1当量)的MeOH溶液(800mL)中加入SOCl2(10mL,催化量)。将所得溶液缓慢升温至75℃并搅拌2小时。将混合物冷却至室温，然后真空浓缩，并通过硅胶柱纯化(2*330g ISCO筒柱，0-100％己烷:EtOAc)，得到标题化合物(S)-4-((1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基)-3,5-二硝基苯甲酸甲酯9e(9.2g，三步32％)。
实施例9的第四步的制备程序与实施例1相似。
第五步和第六步(S)-2-烯丙基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9h
氮气氛下在室温向(S)-3-氨基-4-((1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯9f(1.2g,4.06mmol)和PPh3(2.34g,8.95mmol,2.2当量)的MeCN溶液(40mL)中加入CBr4(3g,8.95mmol,2.2当量)的MeCN(10mL)溶液。将所得溶液在室温搅拌15分钟，然后加入NEt3(1.7mL,17.8mmol,4.4当量)。在室温搅拌30分钟后，将混合物浓缩。将所得混合物通过硅胶柱纯化(40g ISCO筒柱，0-100％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物(S)-2-烯丙基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9h(872mg,77％)。
第七步(S)-2-烯丙基-4-甲基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9i
氮气氛下在60℃向(S)-2-烯丙基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9h(340mg,1.23mmol)和K2CO3(338mg,2.45mmol,2当量)的DMF溶液(10mL)中加入MeI(1.5mL)。将所得溶液在60℃搅拌45分钟，然后加入更多MeI(1mL)。将混合物再搅拌30分钟，然后冷却并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(20g ISCO筒柱，0-100％EtOAc的DCM溶液洗脱)，得到标题化合物(S)-2-烯丙基-4-甲基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9i及其异构体(300mg,84％)。
实施例9的第八至十二步的制备程序与实施例1相似。
在第十二步，将混合物通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/甲酸洗脱，得到标题化合物(S)-4-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺9n。MS m/z(ESI):408[M+1]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ7.42(s,1H),7.12(s,1H),6.71(s,1H),6.05-5.96(m,1H),5.15-5.12(m,2H),4.76-4.68(m,3H),3.56-3.37(m,1H),3.36-3.33(m,1H),3.33(s,3H),2.70-2.61(m,2H),2.27(s,3H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例9和10的第十三步的制备程序与实施例7和8相似。
在室温向(S)-4-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺9n(15mg)的二氯甲烷/MeOH溶液(1:1,2mL)中加入TsOH.H2O(12mg)的MeOH(0.5mL)溶液。将所得溶液在室温搅拌15分钟，然后真空下浓缩。在N2下，向残余物重新溶解的DCM(2mL)溶液中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(15mg)。将所得溶液在80℃下搅拌1小时。反应完成后，将混合物浓缩，然后通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/TFA洗脱。第一个洗脱物为标题化合物(4S,4'S)-4,4'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)9(1.8mg,12％)。MS m/z(ESI):787[M+1]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ7.31(m,2H),6.98(m,2H),6.48(m,2H),6.60-5.48(m,2H),5.15-5.12(m,4H),4.67-4.64(m,2H),4.54-4.47(m,2H),4.41-4.33(m,2H),2.89(s,6H),2.45-2.37(m,4H),2.18(s,6H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H)。
第二个洗脱物为标题化合物(4S,4'S)-4,4'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)10(2.5mg,17％)。MS m/z(ESI):787[M+1]785[M-1]。1H NMR(400MHz,甲醇-d4):δ7.20(m,2H),6.92(m,2H),6.33(m,2H),5.73-5.71(m,2H),5.15-5.12(m,4H),4.74-4.67(m,2H),4.49-4.39(m,4H),2.61(s,6H),2.58-2.38(m,2H),2.19-2.16(m,2H),1.69(s,6H),1.30(t,J＝7.1Hz,6H)。
实施例11
(4S,4'S)-4,4'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)11
实施例12
(4S,4'S)-4,4'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)12
第一步(S)-2-烯丙基-4-(3-甲氧基丙基)-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯11a
氮气氛下在100℃向(S)-2-烯丙基-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸甲酯9h(97mg,0.35mmol)和K2CO3(97mg,0.70mmol,2当量)的DMF溶液(5mL)中加入1-溴-3-甲氧基丙烷(2mL)。将所得溶液在100℃搅拌过夜。将混合物真空下浓缩并通过硅胶柱纯化(20g ISCO筒柱，0-100％EtOAc的己烷溶液洗脱)，得到标题化合物(S)-2-烯丙基-4-(3-甲氧基丙基)-8-硝基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-甲酸酯11a及其区域异构体(100mg,81％)。
实施例11和12的第二至六步的制备程序与实施例1相似。
第七步(4S,4'S)-4,4'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)11
(4S,4'S)-4,4'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)12
在室温向(S)-4-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺11f(15mg)的二氯甲烷/MeOH溶液(1:1,2mL)中加入TsOH.H2O(17mg)的MeOH(1mL)溶液。将所得溶液在室温搅拌20分钟，然后真空下浓缩。在N2下，向残余物重新溶解的DCM(2mL)溶液中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(15mg)。将所得溶液在80℃下搅拌2小时。反应完成后，将混合物浓缩，然后通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/甲酸洗脱。第一个洗脱物为标题化合物(4S,4'S)-4,4'-((E)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)11(1.3mg,产率9％)。MS m/z(ESI):903[M+1]901[M-1]。
第二个洗脱物为标题化合物(4S,4'S)-4,4'-((Z)-丁-2-烯-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺)12(2.1mg,产率15％)。MS m/z(ESI):903[M+1]901[M-1]。
实施例13
(S)-4-((E)-4-((S)-8-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-4-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺13
实施例14
(S)-4-((Z)-4-((S)-8-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-4-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺14
实施例13和14的第一步的制备程序与实施例7和8相似
在室温向(S)-4-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺9n(25mg)和(S)-4-烯丙基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺11f(29mg)的二氯甲烷/MeOH溶液(1:1,4mL)中加入TsOH.H2O(60mg)的MeOH(2mL)溶液。将所得溶液在室温搅拌20分钟，然后真空下浓缩。在N2下，向残余物重新溶解的DCM(4mL)溶液中加入Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(25mg)。反应完成后，将混合物浓缩，然后通过制备型HPLC纯化，用ACN/H2O/甲酸洗脱。第一个洗脱物为标题化合物(S)-4-((E)-4-((S)-8-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-4-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺13(1.9mg,4％)。MSm/z(ESI):845[M+1]843[M-1]。
第二个洗脱物为标题化合物(S)-4-((Z)-4-((S)-8-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-(3-甲氧基丙基)-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-4-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-咪唑并[1,5,4-de]喹喔啉-8-甲酰胺14(4.4mg,8％)。MS m/z(ESI):845[M+1]843[M-1]。
化合物15-20可以按照实施例1-14中所示的相似程序制备。
实施例15
(3S,3”S)-3,3”-(环丙烷-1,2-二基双(亚甲基))双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)15
实施例16
(3S,3”S)-3,3”-(2,3-二羟基丁烷-1,4-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)16
实施例17
3,3”-(丙-1-烯-1,3-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)17
实施例18
3,3”-(丙烷-1,3-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)18
实施例19
(3S,3”S)-3,3”-(戊-2-烯-1,5-二基)双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)19
实施例20
(3S,3”S)-3,3”-(1,2-亚苯基双(亚甲基))双(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺)20
生物学分析
测试例1、用于测量与hSTING R232 c端结构域的相对结合亲和力的热偏移分析。
材料和试剂
1、SYPRO橙色染色剂(Thermo Fisher Scientific)
2、缓冲液-20mM HEPES pH 7.2，150mM NaCl(Sigma)
3、DMSO(Thermo Fisher Scientific)
4、纯化的hSTING R232(aa154-342)
5、化合物-DMSO中的10mM储备液
6、cGAMP-DMSO中的10mM储备液(Sigma)
7、Light Cycler 480II(Roche)
8、Light Cycler 480多孔板，384孔白色板(Roche)
实验程序
利用每个化合物在DMSO中的10mM的储备溶液，制得稀释液以得到具有三种浓度10mM、5mM和2.5mM的样品。利用这些稀释液，进行最终50倍稀释以制成分析缓冲液，得到200μM、100μM和50μM的浓度。利用各缓冲稀释液，将5μL加入至384孔分析板中。使用与配体相同的稀释流程用cGAMP设定阳性对照。使用缓冲液和2％DMSO测定阴性对照的基线热偏移。
在冰上解冻蛋白质的等分试样，且使SYPRO橙色试剂达到室温。用分析缓冲液将5000X SYPRO橙色储备液稀释成10X的浓度。将蛋白质在所制备的缓冲液/染色溶液中稀释成10μM的浓度。将五微升蛋白质/缓冲液/染色溶液加入至样品和对照孔中的每一个，且用提供的膜密封板。将板以1000rpm在20℃下离心5分钟。
在Light Cycler仪器上，以0.07℃/s在20℃至99℃的温度梯度内进行测量，且以8/℃的速率收集的数据采集用于测量随温度而变化的荧光变化。使用Roche Light Cycler软件进行数据分析，以测定各样品的熔融温度(Tm℃)。计算阴性对照的平均Tm℃，且与样品中的每一个相减，以获得配体中的每一个的ΔTm℃值。
本发明化合物对hSTING c端结构域的相对结合亲和力通过上述分析来测定，且ΔTm℃值显示于下表3中。
表3、本发明中的化合物的热偏移ΔTm℃值。
| 实施例编号 | 100μM时的热偏移ΔTm(℃) |
| 1 | 14.6 |
| 2 | 12.2 |
| 3 | 5.9 |
| 4 | 7.5 |
| 5 | 9.1 |
| 7 | 6.2 |
结论：本发明化合物表现出对人类STING蛋白的结合亲和力。
测试例2、人类THP1报告细胞(reporter cell)分析
材料和试剂
1、人类THP1-Dual KI-hSTING-R232细胞(InvivoGen，目录号thpd-r232)
2、QUANTI-LUC(InvivoGen，目录号rep-qlc2)
3、用于细胞培养和化合物稀释的培养基：具有高葡萄糖和谷氨酰胺(Genesee，目录号25-506)、10％胎牛血清(Life Technologies，目录号10082147)、25mM HEPES(Genesee，目录号25-534)、100μg/ml Normocin(InvivoGen，目录号ant-nr-2)、10μg/ml杀稻瘟菌素(blasticidin，InvivoGen，目录号ant-bl-05)、100μg/ml博来霉素(Zeocin，InvivoGen，目录号ant-zn-5p)和青霉素-链霉素(100×)(Life Technologies，目录号15140122)的RPMI
4、Infinite M1000酶标仪(TECAN)
实验程序
通过测量由IRF荧光素酶报告基因的表达产生的发光信号来测定STING于THP1-Dual KI-hSTING-R232细胞中的激活。根据由InvivoGen提供的方案来进行全部试剂制备和分析程序。简言之，将测试化合物和细胞(1×105细胞/孔)分配至96孔板中，最终体积为150μl/孔。在潮湿的5％CO2培育箱中，将板在37℃下培育24小时。通过将20μl上清液转移至不透明96孔板(其中50μl QUANTI-LUC分配至各孔中)来测量报告基因的表达水平。使用TECAN酶标仪立即读取所得发光信号。减去来自培养基的背景发光信号。相对于缺乏化合物处理的对照，测定在各化合物浓度的发光信号的倍数诱导效应。在GraphPad Prism中利用4参数浓度反应方程式拟合倍数诱导效应相比于化合物浓度的对数的曲线，以计算EC50和Emax。
通过上述分析来测定本发明化合物于THP1中STING的激活，且EC50值显示于表4中。
表4、人类THP1报告细胞分析
| 实施例编号 | EC<sub>50</sub>(THP1 R232,μM) |
| 1 | 0.2 |
| 2 | 0.006 |
| 4 | 11.5 |
| 5 | 0.43 |
| 8 | 6.4 |
| 9 | 0.054 |
| 10 | 0.012 |
| 11 | 0.15 |
| 12 | 0.14 |
| 13 | 0.18 |
| 14 | 0.06 |
结论：本发明化合物对人类STING具有显著刺激活性。
测试例3、人类PBMC中的IFNβ分泌
材料和试剂
1、人类PBMC细胞(STEMCELL Technologies)
2、淋巴球培养基(Zenbio)
3、培养和化合物稀释培养基：具有高葡萄糖和谷氨酰胺(Genesee，目录号25-506)、10％胎牛血清(Life Technologies，目录号10082147)、100μg/ml Normocin(InvivoGen，目录号ant-nr-2)和青霉素-链霉素(100×)(Life Technologies，目录号15140122)的RPMI
4、人类IFNβQuantikine ELISA试剂盒(R&D系统)
5、Infinite M1000酶标仪(TECAN)
实验程序
快速解冻经冷冻保存的外周血液人类单核细胞(PBMC)，且再悬浮于淋巴球培养基中，并且以500x g离心5分钟。移除上清液，且将细胞沉淀平缓地再悬浮于细胞培养和化合物稀释培养基中。以1.5x105个细胞/孔的浓度将细胞涂覆于96孔板中。将测试化合物(呈变化的浓度)或媒剂对照(<0.3％DMSO)与细胞混合，得到150μl/孔的最终体积。在潮湿的5％CO2培育箱中，将板在37℃下培育5小时。在培育后，根据制造商的方案使用人类IFNβQuantikine ELISA试剂盒来测量上清液中的人类IFNβ和IFNβ标准对照。用Infinite M1000酶标仪测量450nm处的吸收，且通过540nm处的各孔的背景读数进行校正。基于标准曲线来计算分泌的IFNβ的浓度。在GraphPad Prism中利用4参数浓度反应方程式拟合IFNβ浓度相比于化合物浓度的对数的曲线，以计算EC50和Emax(见表5)。
表5、人类PBMC中的IFNβ分泌
| 实施例编号 | EC<sub>50</sub>(μM) |
| 1 | 0.22 |
| 2 | 0.026 |
| 9 | 0.14 |
| 10 | 0.05 |
| 11 | 0.19 |
| 12 | 0.058 |
结论：本发明化合物显示对STING-特异性IFNβ产生的显著活性。
提供前述实施方案和实施例仅用于举例说明，而无意限制本发明的范围。基于本公开，对所公开的实施方案的各种改变和修改对本领域技术人员将是显而易见的，并且可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行这种改变和修改。所引用的所有文献均通过引用整体并入本文，而不承认其为现有技术。
Claims (28)
1.一种式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
G1、G2、G1a和G2a各自独立地为CR6；
G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NRg；
L选自亚烷基、亚烯基、亚炔基和亚烷基-Q-亚烷基，其中在各出现处的所述亚烷基、亚烯基和亚炔基独立地未被取代或被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、羟基、羟烷基和氰基中的一个或多个取代基取代；
Rc选自氢、烷基和卤代烷基；
Rg为氢或烷基，其中所述烷基未被取代或被选自卤素、烷氧基、氨基、氰基、羟基和羟烷基中的一个或多个取代基取代；
R1和R1a相同或不同，且各自独立地为-C(O)NR9R10或-C(O)ORm；
R2和R2a相同或不同，且各自独立地选自烷基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基未被取代或被独立地选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基和羟烷基中的一个或多个取代基取代；
R3、R4、R3a和R4a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基和卤代烷基；
R5和R5a相同或不同，且各自独立地选自氢、卤素、烷基和卤代烷基；
R6选自氢、卤素、烷基和卤代烷基；
R9和R10相同或不同，且各自独立地选自氢、烷基和卤代烷基；
Rm选自氢、烷基、卤代烷基和羟烷基；
Q为环烷基或芳基；
n为1或3；
s为1或3；
其中所述的烷基为C1-6烷基；
所述的亚烷基为C1-6亚烷基；
所述的亚烯基为C2-6亚烯基；
所述的亚炔基为C2-6亚炔基；
所述的烷氧基为C1-6烷氧基；
所述的卤代烷基为C1-6卤代烷基；
所述的羟烷基为C1-6羟烷基；
所述的环烷基为3至6元环烷基；
所述的芳基为6至10元芳基；
所述的杂芳基为5至10元杂芳基；且
条件是通式(I)不为如下化合物：
2.根据权利要求1所述的化合物，其为式(IM)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2和R2a相同或不同，且各自独立地为6至10元芳基或5至10元杂芳基，其中所述6至10元芳基或5至10元杂芳基未被取代或被独立地选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基和C1-6羟烷基中的一个或多个取代基取代。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5和R5a各自为氢。
5.根据权利要求1所述的化合物，其为式(II)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自6至10元芳基和5至10元杂芳基；
各R11相同或不同，且各自独立地选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基和C1-6羟烷基；
t为0、1、2、3或4；且
R1、R1a、Rc、R3、R4、R3a、R4a、G3、G3a、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Rc为氢。
7.根据权利要求1所述的化合物，其为式(IG)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R2至R4、R2a至R4a、R9、R10、G3、G3a、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
8.根据权利要求1所述的化合物，其为式(IK)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Rm为氢或C1-6烷基；
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
9.根据权利要求1所述的化合物，其为式(III)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自6至10元芳基和5至10元杂芳基；
R9和R10相同或不同，且各自独立地选自氢和C1-6烷基；
各R11相同或不同，且各自独立地选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、氨基、硝基、氰基、羟基和C1-6羟烷基；
t为0、1、2、3或4；
R3、R4、R3a、R4a、G3、G3a、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
10.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3、R4、R3a和R4a为氢。
11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NRg；Rg为氢或C1-6烷基，其中所述C1-6烷基未被取代或被一个或多个C1-6烷氧基取代。
12.根据权利要求7或9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9和R10各自为氢。
13.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A为吡唑环。
14.根据权利要求1所述的化合物，其为式(IV)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
G3和G3a相同或不同，且各自独立地为O或NRg；
R12和R13相同或不同，且各自独立地选自氢和C1-6烷基；
Rg、L、n和s各自如权利要求1中所定义。
15.根据权利要求1所述的化合物，其为式(IVM)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R12和R13相同或不同，且各自独立地选自氢和C1-6烷基；
L、n和s各自如权利要求1中所定义。
16.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中G3和G3a相同或不同，且各自独立地为NRg；Rg如权利要求1中所定义。
17.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自-(CH2)p-、-(CH2)p1-(CH＝CH)q-(CH2)p2-、-(CH2)p1-C≡C-(CH2)p2-、-(CH2)p1-环丙基-(CH2)p2-、-(CH2)p1-苯基-(CH2)p2-和-(CH2)p1-(CH(OH))t-(CH2)p2-；p为1至6的整数；p1为1或2；p2为1或2；q为1；且t为1或2。
18.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自-CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2CH2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-CH2CH(OH)CH(OH)CH2-、-CH2-CH＝CH-、-CH2-环丙基-CH2-、-CH2-苯基-CH2-、-CH2-C≡C-CH2-和-CH2-CH＝CH-CH2CH2-。
19.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
20.一种式(IA)或(IB)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和C1-6烷基；
p1是0、1或2；
p2是0、1或2；
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如权利要求1中所定义；且
条件是通式(IA)或(IB)不为如下化合物：
21.根据权利要求20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物为：
22.一种制备根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，其包括以下步骤：
将式(IA)化合物与式(IB)化合物反应以获得所述式(I)化合物，其中：
Rb为–(CH2)p1-CH＝CReRf；
Rd为–(CH2)p2-CH＝CReRf；
L为-(CH2)p1-CH＝CH-(CH2)p2-；
Re和Rf相同或不同，且各自独立地选自氢和C1-6烷基；
p1是0、1或2；
p2是0、1或2；
R1至R5、R1a至R5a、Rc、G1至G3、G1a至G3a、n和s各自如权利要求1中所定义。
23.一种制备根据权利要求7所述的式(IG)化合物或其药学上可接受的盐的方法，其包括以下步骤：
将式(IK)化合物与NHR9R10的化合物反应以获得所述式(IG)化合物，其中：
Rm为氢或C1-6烷基；
R2至R4、R2a至R4a、G3、G3a、R9、R10、n和s各自如权利要求7中所定义。
24.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
25.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求24所述的药物组合物在制备用于治疗由STING介导的疾病或病症的药物中的用途。
26.根据权利要求25所述的用途，其中所述疾病或病症选自癌症、癌前综合征和病毒感染。
27.根据权利要求25所述的用途，其中所述疾病或病症选自癌症和癌前综合征。
28.根据权利要求25所述的用途，其中所述疾病或病症选自脑癌、白血病、皮肤癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤；或者所述疾病或病症选自神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤、血管免疫母细胞性淋巴瘤、中枢和骨膜软骨瘤和胆管癌。
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