CN113194821A - 逆转替卡格雷活性的方法 - Google Patents

Abstract

本公开内容提供了通过施用与替卡格雷结合的抗体或其片段，来逆转患者中的替卡格雷相关出血的方法。

Description

逆转替卡格雷活性的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年9月20日提交的美国临时申请号62/733,892、于2019年2月15日提交的美国临时申请号62/806,225、以及于2019年4月19日提交的美国临时申请号62/836,373的权益，所述美国临时申请各自的内容整体引入作为参考用于所有目的。

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背景技术

急性冠状动脉综合征(ACS)描述了与对心脏的血流突然降低相关的一系列状况，包括不稳定型心绞痛和心肌梗塞或心脏病发作。ACS由冠状动脉中不适当的凝块形成引起。这些血凝块主要由血小板组成，所述血小板是血液中发现的小透镜状细胞，其通常在损伤部位处聚集以帮助止血。根据疾病预防控制中心，每年大约790,000美国人具有心脏病发作，并且心脏病发作是发达国家的首要死亡原因。

ACS的主要治疗是使用抗血小板药物，以阻止现有凝块的恶化或降低另外凝块的形成。这些凝块可以在心脏或支架中出现，所述支架放置在阻塞的冠状动脉中以保持血管开放、或放置在体内其它部位。如果没有抗血小板药物，患者处于显著增加的复发性心脏病发作、中风和死亡的风险中。ACS患者的标准护理是双重抗血小板疗法或DAPT，其是阿司匹林与血小板上发现的称为P2Y₁₂受体的特异性受体的抑制剂的组合。在患者经历心脏病发作或ACS的其它表现后起始的这种组合，已显示显著降低血小板聚集和凝块形成，并且降低复发性心脏病发作、中风和死亡的频率。

尽管DAPT疗法中使用的抗血小板药物已证明有效改善ACS患者中的总体结果，但其血液凝固的压制增加患者的大出血风险。可以自发地或者由于受伤或手术而出现的、处于抗血小板疗法下的患者中的出血事件分类为轻度或重度的。在通过AstraZeneca进行的18,000个患者的临床试验，血小板抑制和患者结果(Platelet Inhibition and PatientOutcomes)或PLATO中，替卡格雷(ticagrelor)显示在降低ACS患者中的复发性心脏病发作、中风和死亡方面，优于以商标名称Plavix出售的抗血小板药物氯吡格雷(clopidogrel)(Wallentin等人2009)。然而，在两个治疗组中，试验中11%至12%的患者经受大出血事件，而在5.8%的患者中，这些大出血事件是致命或危及生命的。出血的原因在试验群体中不同。在大约3%的用替卡格雷治疗的患者中，大出血事件是自发性的，并且与任何医疗程序无关，而大约9%的用替卡格雷治疗的患者发展大出血，其与程序如冠状动脉搭桥手术或CABG有关(Wallentin等人2009)。尽管试验方案推荐，需要CABG的患者在手术之前一到三天停止服用替卡格雷，但所有替卡格雷患者中的将近一半需要紧急手术，并且无法等待高达三天以使替卡格雷的效应消散，使得正常的血液凝固可以恢复。总体而言，在该试验中高达80%的CABG患者经受与手术有关的重大或危及生命的出血事件，并且对于需要紧急手术且无法等待三天用于替卡格雷洗出的患者，大约50%经历致命或危及生命的出血事件(Held等人，2011)。虽然这种风险中的一些很可能与患者的基础状况相关，但总体出血风险通过抗血小板药物显著增加，并且目前美国替卡格雷的处方信息建议在手术之前五天暂停替卡格雷治疗。

尽管出血风险增加，但抗血小板药物连同用于预防静脉中的凝块的抗凝药物，由于其救命效应而代表美国最广泛的处方药物中的一些。虽然这两类药物均增加了出血的风险，但已开发用于抗凝药物的逆转剂，但迄今为止，不存在用于抗血小板药物的逆转剂。在不存在逆转剂的情况下，医生具有有限的治疗选项，并且有时施用在这种背景下未证实的血小板输注。在大出血的情况下以及在其中紧急需要与出血相关的手术或其它医学干预的情形下，迅速逆转替卡格雷的抗血小板活性并恢复正常凝血的能力将增加其安全性。

在DAPT疗法中开出的三种经口抗血小板P2Y₁₂受体拮抗剂药物是以商品名称Plavix上市的氯吡格雷、以商品名称Effient上市的普拉格雷(prasugrel)、以及以商品名称Brilinta和Brilique上市的替卡格雷。与永久性地结合并抑制血小板上的靶受体的氯吡格雷和普拉格雷不同，替卡格雷以瞬时方式与P2Y₁₂受体结合，快速地循环结合且脱离受体。替卡格雷的这种瞬时结合呈现了开发用于替卡格雷的特异性逆转剂的独特机会，而其它药物与受体的永久结合妨碍了逆转剂的开发。

替卡格雷被视为同类最优的P2Y₁₂抗血小板剂，因为它已证实与氯吡格雷相比的优异功效。然而，替卡格雷治疗的副作用可能引起自发性出血。进一步地，由于其抗血小板活性，替卡格雷治疗在需要急诊手术的患者中可能是危险的，并且导致失血增加。

替卡格雷也可以用于不稳定型心绞痛患者、稳定型缺血性心脏病患者、镰状细胞疾病患者包括儿科患者、房颤患者、冠状动脉疾病患者、外周动脉疾病患者、缺血性中风患者、具有一个或多个冠状动脉支架的患者、具有颈动脉支架的患者、具有颅内动脉瘤之后的支架的患者、具有为血液透析而创建的动静脉瘘的患者中。替卡格雷也可以用于2型糖尿病患者中。

发明内容

本公开内容提供了使用人Fab片段来逆转替卡格雷活性的方法，所述人Fab片段以高亲和力和特异性与替卡格雷结合，以逆转替卡格雷的抗血小板活性。

在一些方面，本公开内容提供了逆转有需要的患者中的替卡格雷相关出血或所述出血的风险的方法，其包括向所述患者施用包含有效量的药物组合物的组合物，所述药物组合物包含与替卡格雷((1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊-1,2-二醇)、或者其代谢产物或衍生物结合的抗体或其片段。

在一些实施方案中，抗体或其片段包含选自以下的互补决定区(CDR)组合：

a) SEQ ID NO:53 (VH CDR1)、SEQ ID NO:54 (VH CDR2)、SEQ ID NO:55 (VHCDR3)、SEQ ID NO:58 (VL CDR1)、SEQ ID NO:59 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:60 (VL CDR3)；

b) SEQ ID NO:63 (VH CDR1)、SEQ ID NO:64 (VH CDR2)、SEQ ID NO:65 (VHCDR3)、SEQ ID NO:68 (VL CDR1)、SEQ ID NO:69 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:70 (VL CDR3)；和

c) SEQ ID NO:73 (VH CDR1)、SEQ ID NO:74 (VH CDR2)、SEQ ID NO:75 (VHCDR3)、SEQ ID NO:78 (VL CDR1)、SEQ ID NO:79 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:80 (VL CDR3)。

在一些实施方案中，抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列的组合。

在一些实施方案中，在抗替卡格雷抗体或其片段施用前，已向患者施用替卡格雷。

在一些实施方案中，抗体或其片段是Fab，并且向患者施用约1 g至约48 g的剂量。在一些实施方案中，剂量为约9 g至约18 g的Fab。在一些实施方案中，向患者施用约1 g、约3 g、约9 g、约18 g、约24 g、约30 g、约36 g或约48 g Fab的剂量。

在一些实施方案中，药物组合物静脉内施用于患者。在一些实施方案中，药物组合物经过约15分钟至约36小时静脉内施用。

在一些实施方案中，药物组合物以两个或更多个段施用。在一些实施方案中，第一段是推注。在一些实施方案中，每个段的施用速率不同。在一些实施方案中，对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。在一些实施方案中，药物组合物以三个或更多个段施用，其中对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。在一些实施方案中，药物组合物按下述时间表施用：经过10分钟输注12g，随后为经过6小时输注12g，随后为经过18小时输注12g。

在一些实施方案中，药物组合物包含约50 mg/mL至约200 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、约5 mM至约50 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约100 mM至约300 mM蔗糖和约0.01% (w/v)至约1.0% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 5.5至6.5。在一些实施方案中，药物制剂包含100 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、25 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、290 mM蔗糖和0.05% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0。在一些实施方案中，药物制剂在等渗盐水中进行稀释用于施用。

在一些实施方案中，替卡格雷相关出血是大出血。在一些实施方案中，大出血的特征在于危及生命，有可能导致临床上显著的残疾，需要手术来控制出血，需要用血液制品的治疗，或者是与临床上重要的血红蛋白下降相关的急性出血。在一些实施方案中，患者需要手术或干预。在一些实施方案中，患者需要紧急手术或干预。在一些实施方案中，紧急手术或干预已知与显著的出血风险相关例如冠状动脉搭桥手术，如果不小心控制出血，则具有神经、眼科或关节置换手术的不良手术结果，与经历围手术期事件的风险相关；或者在如果术前停用双重抗血小板疗法，则处于血栓形成的高风险的患者中。在一些实施方案中，患者需要已知与显著的出血风险相关的选择性手术或干预。在一些实施方案中，患者处于发展急性冠状动脉综合征(ACS)的风险中、或已被诊断有急性冠状动脉综合征(ACS)。在一些实施方案中，患者处于发展选自以下的疾病的风险中、或已被诊断有选自以下的疾病：心肌梗塞(MI)、不稳定型心绞痛、稳定型缺血性心脏病、镰状细胞疾病包括儿科患者、房颤、冠状动脉疾病、外周动脉疾病、缺血性中风、一个或多个冠状动脉支架、颈动脉支架、在颅内动脉瘤之后的支架以及为血液透析而创建的动静脉瘘。

在一些实施方案中，患者是儿科患者。在一些实施方案中，儿科患者小于18岁。在一些实施方案中，儿科患者小于2岁。

在一些实施方案中，患者是成年患者。在一些实施方案中，成年患者为18至64岁，包括端点在内。在一些实施方案中，患者超过64岁。在一些实施方案中，患者为65至80岁，包括端点在内。

在一些实施方案中，已向患者施用阿司匹林(乙酰水杨酸)。

在一些实施方案中，抗体或其片段的施用逆转替卡格雷活性。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用恢复血小板功能。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用恢复血小板聚集。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用将血小板聚集恢复到基线的至少80%。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用在施用的1分钟至60分钟内恢复血小板聚集。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用在施用的5分钟内恢复血小板聚集。在一些实施方案中，抗体或其片段的施用提供了血小板聚集的持续恢复。在一些实施方案中，血小板聚集的恢复在施用后持续至少12小时。在一些实施方案中，血小板聚集的恢复在施用后持续至少16小时。在一些实施方案中，血小板聚集的恢复在施用后持续至少24小时。

在一些实施方案中，已向患者施用替卡格雷以及影响患者中的替卡格雷暴露的一种或多种另外的药物。在一些实施方案中，已向患者施用替卡格雷和一种或多种另外的药物，所述药物抑制细胞色素P450同种型3A (CYP3A)活性，导致对替卡格雷的暴露增加。在一些实施方案中，已向患者施用替卡格雷和一种或多种另外的药物，所述药物诱导CYP3A活性，导致对替卡格雷的暴露降低。

在一些实施方案中，患者已服用过量的替卡格雷。

附图说明

图1显示了替卡格雷和替卡格雷的代谢产物的结构。

图2显示了组4中的平均血小板聚集抑制(IPA)。静脉内施用1g PB2452并不逆转替卡格雷的作用。

图3显示了组4和6中的平均血小板聚集抑制(IPA)。经过30分钟静脉内施用3 g或9g PB2452引起到30分钟的血小板功能的完全恢复。

图4显示了组7中的血小板聚集抑制(IPA)。PB2452的施用引起16小时的替卡格雷逆转。

图5显示了在组8、9和10中的血小板聚集抑制(IPA)。PB2452的施用引起约24小时的替卡格雷逆转。

图6A-B显示了示例性的入选和研究流程图。健康受试者根据所示流程图进行筛选并随机化。为了确保全部组对于每个剂量组进行随机化，在每个组入选之前对过量的受试者进行筛选(A)。受试者入住，随机化和出院时间表显示于(B)中。

图7A-B显示了替卡格雷逆转的起效和持续时间。显示的是在静脉内施用递增剂量的PB2452共30分钟的PB2452和安慰剂组(组4-6)中，观察到的通过LT245测量的血小板聚集增加(A)。分别向组7-10中的受试者施用固定的18 g剂量的PB2452，其输注持续时间在组7、8和9/10中分别为8、12和16小时(B)。-48小时的时间点显示了在替卡格雷的施用之前的血小板聚集。

图8A-B显示了通过VerifyNow和VASP ELISA的替卡格雷逆转的起效和持续时间。显示的是在PB2452 (或安慰剂)输注前后的多重时间点测量的，对于用PB2452 (空心标记物)或安慰剂(实心圆圈)治疗的组7-10受试者的平均血小板功能分析。时间0代表在用替卡格雷预治疗48小时后，但在PB2452输注之前的平均血小板功能。通过VerifyNow测量的平均血小板聚集(PRU)显示于(A)中。平均VASP ELISA PRI显示于(B)中。

图9A-C显示了通过LTA、VerifyNow和VASP ELISA测量的血小板功能测定法之间的相关性分析。在LTA测量的聚集和VerifyNow PRU之间(A)、在LTA测量的聚集和VASP ELISAPRI之间(B)、以及在VerifyNow PRU和VASP ELISA PRI之间(C)，执行皮尔森和斯皮尔曼相关性分析。所有时间点都包括在内。r值代表相关系数。对于所有分析，P < 0.0001。

图10A-C显示了PB2452施用后的正常血小板功能的标准化。通过将在PB2452后的多重时间点的血小板功能，与替卡格雷预治疗之前(-48小时)所有受试者中评价的基线血小板功能进行比较，来评价通过PB2452递送的逆转程度。对于通过LTA评价的血小板聚集，逆转后的正常血小板功能被视为基线血小板聚集的≥ 80%，如通过虚线(A)所示。对于VerifyNow血小板反应性单位(PRU)，逆转后的正常血小板功能被视为≥180 PRU，如通过虚线(B)所示。对于通过VASP血小板反应性指数(PRI)测量的P2Y12受体信号传导，逆转后的正常血小板功能被视为基线PRI的≥ 80%，如通过虚线(C)所示。

图11A-D显示了PB2452和替卡格雷的药代动力学。显示的是组4、5和6中随着时间过去PB2452递增剂量的循环药物浓度(A)，组4、5和6中随着时间过去总替卡格雷的循环药物浓度(B)，组7-10中随着时间过去伴随延长输注时间的固定的18 g剂量PB2452的循环药物浓度(C)，以及组7-10中随着时间过去总替卡格雷的循环药物浓度(D)。

图12A-B显示了采用低剂量ADP的血小板聚集。显示的是使用5 µM ADP作为P2Y₁₂激动剂、通过LTA测量的组7-10的平均血小板聚集数据(A)，以及使用20 µM ADP作为P2Y₁₂激动剂的组7-10的平均血小板聚集数据(B)。

具体实施方式

替卡格雷通过与血小板上的P2Y₁₂受体结合而起作用，从而阻止二磷酸腺苷或ADP引起血小板聚集。替卡格雷与P2Y₁₂受体瞬时地结合，循环结合且脱离，允许抗替卡格雷剂例如PB2452(与替卡格雷结合的人Fab片段)与游离替卡格雷结合，从而阻止替卡格雷的受体活化并将替卡格雷从循环中去除。伴随替卡格雷与PB2452结合或被去除，ADP可以再一次结合P2Y₁₂受体并诱导血小板聚集。

抗替卡格雷剂

在一些方面，本公开内容提供了与替卡格雷((1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]-三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊-1,2-二醇)、或者其代谢产物或衍生物结合的药剂。

在一些实施方案中，替卡格雷和/或其代谢产物在图1中描绘。在一些实施方案中，替卡格雷代谢产物是活性代谢产物。

在一些方面，与替卡格雷和/或其代谢产物结合的药剂是抗体或其片段。在一些实施方案中，抗体或其片段选自但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、单链Fv (scFv)、单结构域抗体、Fab、F(ab')2、单链双抗体、抗体模拟物、抗体可变结构域、骆驼抗体(也称为V_HH或纳米抗体)。在一些实施方案中，抗体包含scFv。在一些实施方案中，抗体或其片段包含Fab。在一些实施方案中，抗体模拟物是adnectin分子、亲和体分子、affilin分子、affimer分子、affitin分子、alphabody分子、anticalin分子、适体分子、犰狳(armadillo)重复蛋白分子、atrimer分子、avimer分子、预设计锚蛋白重复蛋白分子(DARPin)分子、fynomer分子、knottin分子、knottin分子、Kunitz结构域抑制剂分子、单体、nanoCLAMP分子或nanofitin分子。

在上述方面和实施方案的进一步实施方案中，抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:62,和SEQ ID NO:72的重链可变区(VH)序列；以及选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:77的轻链可变区(VL)序列。在一些实施方案中，抗体包含选自以下的VH和VL序列的组合：SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:17；SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27；SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77。在进一步的实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ IDNO:72和SEQ ID NO:77的VH和VL的组合。

在上述方面和实施方案的进一步实施方案中，抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区的构架区(FR)，以及互补决定区(CDR) 1、2和3，其中所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列包含SEQ ID NO:3 (CDR1)、SEQ ID NO:4 (CDR2)和SEQ ID NO:5 (CDR3)；SEQID NO:13 (CDR1)、SEQ ID NO:14 (CDR2)和SEQ ID NO:15 (CDR3)；SEQ ID NO:23 (CDR1)、SEQ ID NO:24 (CDR2)和SEQ ID NO:25 (CDR3)；SEQ ID NO:33 (CDR1)、SEQ ID NO:34(CDR2)和SEQ ID NO:35 (CDR3)；SEQ ID NO:43 (CDR1)、SEQ ID NO:44 (CDR2)和SEQ IDNO:45 (CDR3)；SEQ ID NO:53 (CDR1)、SEQ ID NO:54 (CDR2)和SEQ ID NO:55 (CDR3)；SEQID NO:63 (CDR1)、SEQ ID NO:64 (CDR2)和SEQ ID NO:65 (CDR3)；或SEQ ID NO:73(CDR1)、SEQ ID NO:74 (CDR2)和SEQ ID NO:75 (CDR3)；并且其中所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列包含SEQ ID NO:8 (CDR1)、SEQ ID NO:9 (CDR2)和SEQ ID NO:10 (CDR3)；SEQ ID NO:18 (CDR1)、SEQ ID NO:19 (CDR2)和SEQ ID NO:20 (CDR3)；SEQ ID NO:28(CDR1)、SEQ ID NO:29 (CDR2)和SEQ ID NO:30 (CDR3)；SEQ ID NO:38 (CDR1)、SEQ IDNO:39 (CDR2)和SEQ ID NO:40 (CDR3)；SEQ ID NO:48 (CDR1)、SEQ ID NO:49 (CDR2)和SEQ ID NO:50 (CDR3)；SEQ ID NO:58 (CDR1)、SEQ ID NO:59 (CDR2)和SEQ ID NO:60(CDR3)；SEQ ID NO:68 (CDR1)、SEQ ID NO:69 (CDR2)和SEQ ID NO:70 (CDR3)；或SEQ IDNO:78 (CDR1)、SEQ ID NO:79 (CDR2)和SEQ ID NO:80 (CDR3)。在进一步的实施方案中，抗体包含选自以下的CDR区的组合：SEQ ID NO:53 (VH CDR1)、SEQ ID NO:54 (VH CDR2)、SEQID NO:55 (VH CDR3)、SEQ ID NO:58 (VL CDR1)、SEQ ID NO:59 (VL CDR2)和SEQ ID NO:60 (VL CDR3)；SEQ ID NO:63 (VH CDR1)、SEQ ID NO:64 (VH CDR2)、SEQ ID NO:65 (VHCDR3)、SEQ ID NO:68 (VL CDR1)、SEQ ID NO:69 (VL CDR2)和SEQ ID NO:70 (VL CDR3)；和SEQ ID NO:73 (VH CDR1)、SEQ ID NO:74 (VH CDR2)、SEQ ID NO:75 (VH CDR3)、SEQ IDNO:78 (VL CDR1)、SEQ ID NO:79 (VL CDR2)和SEQ ID NO:80 (VL CDR3)。

在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:73 (VH CDR1)、SEQ ID NO:74(VH CDR2)、SEQ ID NO:75 (VH CDR3)、SEQ ID NO:78 (VL CDR1)、SEQ ID NO:79 (VLCDR2)和SEQ ID NO:80 (VL CDR3)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:72和SEQID NO:77的氨基酸序列的抗体或其片段是PB2452 (MEDI2452)。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:81。在一些实施方案中，抗体或其片段包含VH区和CH区的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含VH区和CH1区的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:72和CH1区的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含由SEQ ID NO:84的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含VL和CL区的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:77和CL区的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其片段包含由SEQ ID NO:86的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，包含SEQ IDNO:83和SEQ ID NO:85的氨基酸序列的抗体或其片段是PB2452 (MEDI2452)。

在一些实施方案中，本公开内容的抗体或其片段包括来自天然突变或人为操纵的一种或多种氨基酸取代、缺失或添加。如所指示的，变化优选具有次要性质，例如并不显著影响抗体或其片段的折叠或活性的保守氨基酸取代。

本公开内容提供了抗体或其片段，其包含本文所述的VH结构域、VH CDR、VL结构域和VL CDR的变体(包括衍生物)，或可替代地由其组成，所述抗体与替卡格雷或者其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合。本领域技术人员已知的标准技术可以用于在编码本发明分子的核苷酸序列中引入突变，包括例如导致氨基酸取代的定点诱变和PCR介导的诱变。优选地，相对于参考VH结构域、VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VL结构域、VLCDR1、VLCDR2或VLCDR3，变体(包括衍生物)编码少于50个氨基酸取代、少于40个氨基酸取代、少于30个氨基酸取代、少于25个氨基酸取代、少于20个氨基酸取代、少于15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在具体实施方案中，变体编码VHCDR3的取代。在一个优选实施方案中，变体具有在一个或多个预测的非必需氨基酸残基处的保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被替换为具有类似电荷的侧链的氨基酸残基的氨基酸取代。具有类似电荷的侧链的氨基酸残基家族已在本领域中进行定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。可替代地，可以例如通过饱和诱变沿着编码序列的全部或部分随机引入突变，并且可以筛选所得突变体的生物活性，以鉴定保留活性的突变体(例如，结合替卡格雷或者其衍生物或代谢产物的能力)。在诱变之后，编码的蛋白质可以照常规表达，并且可以使用本文所述的技术或通过本领域已知的常规修饰技术，来确定编码的蛋白质的功能和/或生物活性(例如，与替卡格雷或者其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的能力)。

在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体或其片段包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VL结构域至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VL CDR至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VL CDR3至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。编码这些抗体的核酸分子也由本公开内容涵盖。

在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体或其片段包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VH结构域至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VH CDR至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，与替卡格雷、其衍生物或代谢产物免疫特异性地结合的本公开内容的抗体包含多肽或可替代地由多肽组成，所述多肽具有与任何一个VH CDR3至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%等同的氨基酸序列。编码这些抗体的核酸分子也由本公开内容涵盖。

PB2452是重组人IgG1λ单克隆Fab抗体片段，其与替卡格雷和TAM特异性地结合。PB2452通过使用噬菌体展示优化人抗替卡格雷抗体而从文库获得，所述文库通过将可变重链或可变轻链互补决定区3中的氨基酸随机化，随后为亲和力选择和筛选而生成。参见整体引入本文作为参考用于所有目的的US 2016/0130366。PB2452在大肠杆菌(E. coli)细胞中产生，并且使用4步层析方法进行纯化。

在一些实施方案中，抗体或其片段与替卡格雷结合，并且中和替卡格雷和TAM的抗血小板聚集活性，因此在替卡格雷和TAM的存在下，恢复ADP诱导的血小板聚集。

在一些实施方案中，抗体或其片段在受试者中的终末半衰期与替卡格雷和TAM的终末半衰期大致相同。在一些实施方案中，抗体终末半衰期为约4-24小时(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时)。在一些实施方案中，终末半衰期为约4-12小时(例如4、5、6、7、8、9、10、11或12小时)。在一些实施方案中，受试者中的终末半衰期为约6-9小时。在一些实施方案中，受试者中的终末半衰期为约6-7小时。在一些实施方案中，终末半衰期为约6.9小时。

在一些实施方案中，抗体或其片段在受试者中的分布半衰期与替卡格雷和TAM的分布半衰期大致相同。在一些实施方案中，分布半衰期为约0.1至2小时(例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2小时)。在一些实施方案中，分布半衰期为约0.1至1小时(例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0小时)。在一些实施方案中，分布半衰期为约0.89小时。

在一些实施方案中，抗体或其片段提供了活性的快速起效。例如，在实施方案中，抗体的起效时间或中和替卡格雷和TAM介导的血小板抑制的时间为约5-120分钟或约5-60分钟。在一些实施方案中，起效时间小于60分钟。在一些实施方案中，起效时间为约30分钟。在一些实施方案中，起效时间小于约30分钟。在一些实施方案中，起效时间小于约10分钟。在一些实施方案中，起效时间小于约5分钟。

在一些实施方案中，抗体或其片段提供了替卡格雷和TAM活性的持续抑制。在一些实施方案中，通过抗体或其片段的替卡格雷和TAM活性抑制持续约2至约48小时(例如2、3、4、5、6、7、8、9 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48小时)。在一些实施方案中，替卡格雷和TAM活性的持续抑制是剂量依赖性的。在一些实施方案中，替卡格雷和TAM活性的持续抑制取决于在IV输注前以推注施用的剂量。在一些实施方案中，替卡格雷和TAM活性的持续抑制取决于经由IV输注施用的剂量。

在一些实施方案中，本公开内容的抗体或其片段显示出替卡格雷和TAM活性的快速(例如在施用的5分钟内)和持续(例如高达24或48小时)抑制两者。

在一些实施方案中，在最后一次替卡格雷施用后，立即将抗体或其片段施用于有此需要的受试者。在一些实施方案中，在最后一次替卡格雷施用后约1小时至120小时内，将抗体或其片段施用于有此需要的受试者。在一些实施方案中，在最后一次替卡格雷施用后约1小时至72小时内，将抗体或其片段施用于有此需要的受试者。在一些实施方案中，在约1小时至24小时 (例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时)内，将抗体或其片段施用于有此需要的受试者。

在一些实施方案中，抗体或其片段具有这样的PK/PD概况，其提供了活性的快速终止(offset)，使得例如已施用抗体的受试者可以重新开始处方的替卡格雷疗法。在一些实施方案中，已接受本文公开的抗体(例如，通过i.v.输注)的受试者，可以在抗体施用之后的六小时内接受或重新起始替卡格雷疗法。在一些实施方案中，已接受本文公开的抗体或其片段(例如，通过i.v.输注)的受试者，可以在抗体施用之后的十二小时内接受或重新起始替卡格雷疗法。在一些实施方案中，已接受本文公开的抗体(例如，通过i.v.输注)的受试者，可以在抗体施用之后的二十四小时内接受或重新起始替卡格雷疗法。

PB2452活性

不受理论的束缚，PB2452与替卡格雷结合，其亲和力是替卡格雷对于P2Y₁₂受体的亲和力的100倍。这种高亲和力使得PB2452能够与游离替卡格雷结合，导致替卡格雷的效应的快速逆转和血小板活性的恢复。

用于替卡格雷开发的化学起点是三磷酸腺苷(ATP)，而替卡格雷保留了腺苷样核心。为了确认PB2452对于替卡格雷和替卡格雷活性代谢产物(TAM)的特异性，评估了其与ATP、ADP和腺苷的结合。为了进一步确认PB2452的特异性，在上市药物的结构数据库中查询与替卡格雷具有任何结构相似性的分子。根据这种计算机模拟(in silico)分析，选择了12种化合物的组(非诺贝特、尼伐地平、西洛他唑、布拉地新、瑞加德松、环噻嗪、氟氯氰菊酯、洛伐他汀、利奈唑胺、辛伐他汀、坎格雷洛和泮托拉唑)。PB2452的选择性通过PB2452与生物素化的替卡格雷的竞争结合来确定。对于ATP、ADP、腺苷或12种结构上有关的化合物，未发现PB2452与生物素化的替卡格雷结合的抑制。因此，PB2452以高亲和力和选择性与替卡格雷和TAM结合。

在一些实施方案中，抗替卡格雷抗体或其片段逆转、阻止、抑制或降低替卡格雷或TAM活性。在一些实施方案中，这种替卡格雷或TAM活性选自但不限于减少ADP诱导的血小板聚集和/或与P2Y₁₂受体的结合。在一些实施方案中，抗替卡格雷抗体或其片段的施用恢复ADP诱导的血小板聚集和/或与P2Y₁₂受体的结合。在一些实施方案中，恢复ADP诱导的血小板聚集和/或与P2Y₁₂受体结合的抗替卡格雷抗体是PB2452。参见整体引入本文作为参考用于所有目的的US 2016/0130366。

治疗方法

在一些方面，本公开内容提供了逆转、抑制、减少或阻止替卡格雷或TAM活性的方法，其包括向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物。替卡格雷或TAM活性的逆转、抑制、减少或阻止可以通过本领域已知的任何手段来测量，包括例如通过测量血液样品中的游离或总替卡格雷。

在一些实施方案中，包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物的施用恢复血小板聚集。在一些实施方案中，包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物的施用抑制替卡格雷或TAM与P2Y₁₂受体的结合。在一些实施方案中，抗替卡格雷抗体或其片段是PB2452。

在一些方面，本公开内容提供了恢复血小板聚集的方法，其包括向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物。在一些方面，本公开内容提供了减少接受替卡格雷的患者中的失血的方法，其包括向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物。在一些实施方案中，本公开内容的药物组合物的施用抑制患者中的替卡格雷相关出血。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，从患者的体内清除替卡格雷和/或TAM。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，降低患者的血液中的替卡格雷和/或TAM的量。在一些实施方案中，与替卡格雷和/或TAM的基线量相比，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的替卡格雷量降低约100%至约5%。在一些实施方案中，与替卡格雷和/或TAM的基线量相比，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血清中的替卡格雷量降低约90%、约80%、约70%、约60%、约50%、约40%、约30%、约20%、约10%或约5%。

在一些实施方案中，向受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，降低患者的体内的游离替卡格雷和/或TAM的量。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，降低患者的血液中的游离替卡格雷和/或TAM的量。在一些实施方案中，与替卡格雷和/或TAM的基线量相比，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的游离替卡格雷和/或TAM量降低约100%至约15%。在一些实施方案中，与替卡格雷和/或TAM的基线量相比，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的游离替卡格雷和/或TAM量降低约99.9%、约99.8%、约99.7%、约99.6%、约99.5%、约99.4%、约99.3%、约99.2%、约99.1%、约99%、约98%、约97%、约96%、约95%、约94%、约93%、约92%、约91%、约90%、约80%、约70%、约60%、约50%、约40%、约30%、约20%、约10%或约5%。在一些实施方案中，替卡格雷或TAM活性被逆转、抑制、减少或阻止约1小时至约2天。在一些实施方案中，替卡格雷或TAM活性被逆转、抑制、减少或阻止约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约36小时或约48小时。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到这种逆转、抑制、减少或阻止。

在一些实施方案中，与未治疗的受试者相比，本文公开的药物组合物的施用逆转、抑制、减少或阻止受试者中的替卡格雷或TAM活性。在一些实施方案中，与未治疗的受试者的活性相比，替卡格雷或TAM活性被逆转、抑制、减少或阻止约1%、约5%、约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、或约90%或约100%。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到这种逆转、抑制、减少或阻止。

在一些实施方案中，与未用替卡格雷治疗的受试者相比，本文公开的药物组合物的施用逆转受试者中的血小板聚集抑制。在一些实施方案中，与未用替卡格雷治疗的受试者中的血小板聚集抑制相比，血小板聚集的抑制被逆转约1%、约5%、约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、或约90%或约100%。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到血小板聚集抑制的这种逆转。

在一些实施方案中，向受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，恢复患者的血液中的血小板聚集。在一些实施方案中，与正常血小板聚集的基线水平相比，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到约100%至约15%。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到正常血小板聚集的基线水平的约100%、约90%、约80%、约70%、约60%、约50%、约40%、约30%、约20%、约10%或约5%。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到正常血小板聚集的基线水平的约80%或更高。在一些实施方案中，在施用后约1小时至约2天内，血小板聚集恢复到正常血小板聚集的基线水平的至少80%。在一些实施方案中，在约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约36小时或约48小时，血小板聚集恢复。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到这种恢复。

在一些实施方案中，如通过VerifyNow P2Y₁₂ (也称为VerifyNow PRUTest)测定方法(Accriva/Instrumentation Laboratory，San Diego CA)测量的，向受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，恢复患者的血液中的血小板聚集。在一些实施方案中，如通过VerifyNow测量的，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到约50至约250血小板反应性单位(PRU)。在一些实施方案中，如通过VerifyNow测量的，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到约250血小板反应性单位(PRU)、约240 PRU、约230 PRU、约220 PRU、约210 PRU 约200 PRU、约190 PRU、约180 PRU、约170PRU、约160 PRU、约150 PRU、约140 PUR、约130 PRU、约120 PRU、约110 PRU、约100 PRU、约90 PRU、约80 PRU、约70 PRU、约60 PRU、约50 PRU。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到至少180 PRU。在一些实施方案中，在施用后约1小时至约2天内，血小板聚集恢复到至少180PRU。在一些实施方案中，在约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约36小时或约48小时，血小板聚集恢复到至少180 PRU。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到这种恢复。

在一些实施方案中，如通过血管扩张剂刺激磷蛋白(VASP)方法测量的，向受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，恢复患者的血液中的血小板聚集。在一些实施方案中，如通过VASP测量的，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到约50%至约150%基线血小板反应性指数(PRI)。在一些实施方案中，如通过VASP测量的，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到约150%基线血小板反应性指数(PRI)、约140%基线PRI、约130%基线PRI、约120%基线PRI、约110%基线PRI、约100%基线PRI、约90%基线PRI、约80%基线PRI、约70%基线PRI、约60%基线PRI、约50%基线PRI。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用包含抗替卡格雷抗体或其片段的药物组合物，使患者的血液中的血小板聚集恢复到至少100%基线PRI。在一些实施方案中，在施用后约1小时至约2天内，血小板聚集恢复到至少100%基线PRI。在一些实施方案中，在约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约36小时或约48小时，血小板聚集恢复到至少100%基线PRI。在一些实施方案中，在本文公开的时间点观察到这种恢复。

患者群体

本公开内容的抗替卡格雷抗体或其片段可以施用于有需要的任何患者。在一些实施方案中，患者处于急性冠状动脉综合征(ACS)的风险中、或已被诊断有急性冠状动脉综合征(ACS)。在一些实施方案中，患者处于心肌梗塞(MI)的风险中、或已被诊断有心肌梗塞(MI)。在一些实施方案中，患者具有MI史。在一些实施方案中，患者正在接受或已接受替卡格雷。在一些实施方案中，患者正在接受或已接受替卡格雷，连同另一种抗血小板疗法例如阿司匹林。

在一些实施方案中，患者具有不稳定型心绞痛、稳定型缺血性心脏病、镰状细胞疾病包括儿科患者、房颤、冠状动脉疾病、外周动脉疾病、缺血性中风、一个或多个冠状动脉支架、颈动脉支架、在颅内动脉瘤之后的支架或为血液透析而创建的动静脉瘘。

在一些实施方案中，患者患有2型糖尿病。在一些实施方案中，患者患有2型糖尿病和冠心病。在一些实施方案中，患者患有2型糖尿病伴有经皮冠状动脉介入史。

在一些实施方案中，患者处于与替卡格雷治疗相关的出血的更高风险中、或与替卡格雷治疗相关的出血率增加。在一些实施方案中，这种替卡格雷相关出血是胃肠道出血。在一些实施方案中，这种替卡格雷相关出血是颅内的出血或颅内出血(ICH)。在一些实施方案中，这种替卡格雷相关出血是创伤性损伤例如道路交通事故的结果。在一些实施方案中，替卡格雷相关出血被分类为大出血。大出血包括由治疗医生判断为需要逆转的任何出血事件。这包括但不限于危及生命，有可能导致临床上显著的残疾，需要手术来控制出血，需要用血液制品的治疗，或者是与临床上重要的血红蛋白水平下降相关的急性出血的出血事件。

在一些实施方案中，患者需要紧急手术或干预。紧急手术或干预定义为在其中医学上不建议停用替卡格雷5天的情形下需要与围手术期出血风险相关的手术操作或医疗程序。关于紧急手术的需要可能包括但不限于下述临床情形中的任一种中的患者：经历已知与显著的出血风险相关的手术或程序(例如冠状动脉搭桥手术)；经历如果不小心控制出血，则可能具有不良手术结果的手术或程序(例如神经、眼科或关节置换手术)；如果发生显著的围手术期出血(尤其是在老年患者或具有共病的患者中)，则处于经历围手术期事件例如休克、心肌梗塞或中风的风险中；如果术前停用双重抗血小板疗法，则处于血栓形成的高风险中(例如具有近期冠状动脉支架放置的患者)。

在一些实施方案中，患者在抗替卡格雷抗体或其片段施用前已开始经历出血。在一些实施方案中，患者在抗替卡格雷抗体或其片段施用前尚未开始经历出血。在一些实施方案中，患者需要手术，并且因此具有由于替卡格雷治疗的出血风险增加。在一些实施方案中，手术是紧急手术。在一些实施方案中，手术是急诊手术。

在一些实施方案中，患者是成人。在一些实施方案中，成年患者为30至100岁或更大。在一些实施方案中，成年患者超过40岁、超过50岁、超过60岁、超过70岁、超过80岁或超过90岁。在一些实施方案中，成年患者为50-64岁。在一些实施方案中，成年患者为65-75岁。在一些实施方案中，患者定义为年长的(例如，50至64岁，包括端点在内)。在一些实施方案中，患者定义为老年的(例如超过65岁或65至80岁，包括端点在内)。在一些实施方案中，年长或老年患者已用替卡格雷和阿司匹林进行预治疗。在一些实施方案中，与年轻受试者相比，年长或老年患者经历对替卡格雷的更高暴露和/或对替卡格雷的更低响应。

在一些实施方案中，患者是年轻成人。在一些实施方案中，年轻成年患者为18至30岁或更大。在一些实施方案中，患者是小于18岁的儿科患者。在一些实施方案中，患者是小于2岁的儿科患者。在一些实施方案中，儿科患者或年轻成年患者患有镰状细胞疾病。

药物组合物和施用

本公开内容提供了药物组合物，其包括抗替卡格雷抗体或其片段以及一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。在一些实施方案中，抗替卡格雷抗体或其片段是PB2452。

本公开内容的制剂可以包括本领域已知的任何适当的赋形剂。示例性的赋形剂包括但不限于氨基酸，例如组氨酸、甘氨酸或精氨酸；甘油；糖，例如蔗糖；表面活性试剂，例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80；柠檬酸；柠檬酸钠；抗氧化剂；盐包括碱土金属盐，例如钠、钾和钙；抗衡离子，例如氯离子和磷酸根；糖醇(例如甘露糖醇)；防腐剂；糖醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇)；和缓冲试剂。示例性的盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠和磷酸钾。

在某些实施方案中，制剂可以包括约5 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液至约100mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液。在一些实施方案中，制剂包括约50 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约40 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约30 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约25 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约20 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、或约15 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液。

在某些实施方案中，制剂可以包括约100 mM蔗糖至约1M蔗糖。在一些实施方案中，制剂可以包括约150 mM蔗糖、约200 mM蔗糖、约250 mM蔗糖、约290 mM蔗糖、约300 mM蔗糖、约350 mM蔗糖、约400 mM蔗糖或约500 mM蔗糖。。

在某些实施方案中，制剂可以包括表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是非离子型表面活性剂。在一些实施方案中，非离子型表面活性剂是聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，制剂可以包括约0.01% w/v聚山梨醇酯80至约1.00% w/v聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，制剂可以包括约0.01% w/v、约0.02% w/v、约0.03% w/v、约0.05% w/v、约0.06% w/v、约0.07% w/v、约0.08% w/v、约0.09% w/v、或约0.1% w/v聚山梨醇酯80。

在某些实施方案中，制剂可以包括约10 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段至约200mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段。在一些实施方案中，制剂可以包括约10 mg/mL、约20 mg/mL、约30 mg/mL、约40 mg/mL、约50 mg/mL、约60 mg/mL、约70 mg/mL、约80 mg/mL、约90 mg/ml、约100 mg/mL、约110 mg/mL、约120 mg/mL、约130 mg/mL、约140 mg/mL、或约150 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段。

在一些实施方案中，制剂包括100 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、25 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、290 mM蔗糖和0.05% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0。

制剂可以冷冻、冷藏或在室温下贮存。贮存条件可能低于冰点，例如低于约–10℃、或低于约–20℃、或低于约–40℃、或低于约–70℃。贮存条件一般小于室温，例如小于约32℃、或小于约30℃、或小于约27℃、或小于约25℃、或小于约20℃、或小于约15℃。在一些实施方案中，制剂贮存于2℃-8℃下。例如，制剂可以与血液等渗或具有模拟生理条件的离子强度。

在一些实施方案中，制剂在生理pH下配制。在一些实施方案中，制剂在约5.5至约8.5范围内的pH下配制。在一些实施方案中，制剂在约6.0至约8.0范围内的pH下配制。在一些实施方案中，制剂在约6.5至约7.5范围内的pH下配制。在一些实施方案中，制剂在7.5的pH下配制。在一些实施方案中，与以较高pH的制剂相比，具有较低pH的制剂证实改善的制剂稳定性。在一些实施方案中，与以较低pH的制剂相比，具有较高pH的制剂证实改善的制剂稳定性。

在一些实施方案中，制剂在贮存条件下是稳定的。可以使用本领域的任何适当手段来测量稳定性。一般地，稳定的制剂是显示降解产物或杂质的少于5%增加的制剂。在一些实施方案中，制剂在贮存条件下稳定至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约一年、或至少约2年或更久。在一些实施方案中，制剂在25°C下稳定至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、或至少约一年或更久。

在一些方面，制剂是冻干产品。在一些实施方案中，制剂是冻干产品，其含有约1 g至约36 g的抗替卡格雷抗体或其片段。在一些实施方案中，制剂是冻干产品，其含有约6 g抗替卡格雷抗体或其片段。在一些方面，在用注射用水重构之后，产品进一步可以稀释到0.9%盐水内，用于静脉内(iv)输注。在一些实施方案中，产品并非冻干的，并且进一步稀释到0.9%盐水内，用于静脉内(iv)输注。

在一个方面，本公开内容的制剂是无热原的制剂，其基本上不含内毒素和/或有关的致热物质。内毒素包括被约束在微生物内部，并且仅在微生物分解或死亡时才释放的毒素。致热物质还包括来自细菌和其它微生物外膜的诱导发热的热稳定物质(糖蛋白)。如果施用于人，则这两种物质均可以引起发烧、低血压和休克。由于潜在的有害效应，即使少量的内毒素也必须从静脉内施用的药用药物溶液中去除。美国食品药品监督管理局(Food &Drug Administration) (“FDA”)已对于静脉内药物应用设定了，在一小时时期内5内毒素单位(EU)/剂量/千克体重的上限(The United States Pharmacopeial Convention，Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000))。在某些具体方面，组合物中的内毒素和热原水平小于约1 EU/mg、或小于约0.1 EU/mg、或小于约0.01 EU/mg、或小于约0.001 EU/mg。在一些实施方案中，组合物中的内毒素和热原水平为0.0138 EU/mg或更少。

当用于体内施用时，本公开内容的制剂应该是无菌的。本公开内容的制剂可以通过各种灭菌方法包括无菌过滤、辐射等进行灭菌。在一个方面，制剂用预灭菌的0.22微米过滤器进行过滤灭菌。如“Remington: The Science & Practice of Pharmacy”，第21版，Lippincott Williams & Wilkins，(2005)中所述，可以根据常规药学实践配制用于注射的无菌组合物。

在一些实施方案中，药物组合物被配制用于静脉内施用。在一些实施方案中，制剂经过约5分钟至48小时内静脉内施用。在一些实施方案中，制剂以任何适当的体积施用。在一些实施方案中，制剂以约30 mL至约2L的总体积施用。在一些实施方案中，制剂以约30mL、约40 mL、约50 mL、约100 mL、约125 mL、约150 mL、约175 mL、约200 mL、约225 mL、约250 mL、约275 mL、约300 mL、约400 mL、约500 mL、约1L、约1.5 L或约2L的总体积施用。在一些实施方案中，制剂经过约30分钟以约250 mL的总体积静脉内施用。在一些实施方案中，制剂首先作为推注进行施用，随后为较长的输注。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约4小时。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约8小时。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约12小时。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约18小时。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约24小时。在一些实施方案中，在推注之后的较长输注为约36小时。

在一些实施方案中，制剂中的抗替卡格雷抗体或其片段的浓度在单次IV输注中在0.4 mg/mL直到72mg/mL之间不等，待经过30分钟至12小时递送250 mL，其剂量为0.1 g、0.3g、1.0 g、3 g、9 g、180 g、24 g、30 g、36 g或48 g或者9至48 g之间的中间剂量。在一些情况下，治疗性组合物的一部分(最多约12 g)对于输注的前5-20分钟，以更快的速率(等价于推注)进行输注。

在一些实施方案中，将抗替卡格雷抗体或其片段贮存于一个或多个玻璃小瓶中，并且随后转移至输液袋中用于施用。在一些实施方案中，将抗替卡格雷抗体或其片段贮存于一个或多个玻璃小瓶中，并且随后转移至注射器用于使用注射泵施用。在一些实施方案中，将抗替卡格雷抗体或其片段贮存于预填充式注射器中，用于使用注射泵施用。在一些实施方案中，将抗替卡格雷抗体或其片段贮存于IV容器，例如Baxter Galaxy Liquid PremixSystem或Baxter Galaxy Frozen Premix System中。

在一些实施方案中，施用抗体或其片段以实现替卡格雷活性的快速和延长的逆转。在一些实施方案中，输注速率在整个输注过程中保持恒定。在一些实施方案中，输注速率随着输注时间过去而变。在一些实施方案中，首先在输注中施用较大量的药物组合物，并且该量在输注的剩余部分过程中逐渐减少。

在一些实施方案中，输注持续时间持续约5分钟至约36小时。在一些实施方案中，输注方案选自(但不限于)经过约1小时至约24小时以恒定输注速率输注约3 g至约36 g、经过约5分钟输注约3 g，随后为经过约8小时输注约15克、经过约15分钟输注约6 g，随后为经过约3小时输注约6克，随后为经过约8.75小时输注约6 g，经过约15分钟输注约6 g，随后为经过约4小时输注约6克，随后为经过约12小时输注约6 g，经过约10分钟输注约6 g，随后为经过约3小时输注约6克，随后为经过约13小时输注约6 g，经过约10分钟输注约12 g，随后为经过约6小时输注约12克，随后为经过约18小时输注约12 g。

在一些实施方案中，如果需要替卡格雷活性的快速逆转(例如在患者中的活动性出血期间)，则可以根据下文施用本公开内容的抗体或其片段：

1. 经过约5至约15分钟输注约3 g至约6 g，随后为经过约1至约3小时输注约3 g至约6 g，随后为经过约3至约8小时输注约3 g至约6 g。

2. 经过约5至约15分钟输注约3 g至约6 g，随后为经过约1至约3小时输注约6 g至约12 g，随后为经过约3至8小时输注约6 g至约12 g。

3. 经过约5至约15分钟输注约3 g至约6 g，随后为经过约1至约3小时输注约6 g至约12 g，随后为经过最多约24至约48小时输注约1 g /小时。

4. 经过约5至约30分钟输注约9 g，随后为经过约3至约8小时输注约1 g/小时至约3 g/小时。

5. 经过约1至约4小时输注约9 g至约24 g。

在一些实施方案中，如果患者将要经历手术，则可以根据下文施用本公开内容的抗体或其片段：

1. 经过约5至约30分钟输注约3至约6 g，随后为经过约3至约6小时输注约3至约6g，随后为经过最多约12至约24小时输注约1 g/小时；

2. 经过约5至约15分钟输注约3至约6 g，随后为经过约1至约3小时输注约3至约6g，随后为经过约12至约24小时输注约1g/小时。

3. 经过约1至约4小时输注约9 g至约24 g。

在一些实施方案中，如果患者正在服用影响替卡格雷暴露的一种或多种另外的药物，例如抑制细胞色素P450同种型3A (CYP3A)活性的药物，导致对替卡格雷的暴露增加，或者患者已服用过量的替卡格雷，则可以根据下文施用本公开内容的抗体或其片段：

1. 经过约5至约30分钟输注约6至约12 g，随后为经过约3至约6小时输注约6至约12 g，随后为经过最多约12至约24小时输注约6至约12 g；

2. 经过约5至约15分钟输注约6至约12 g，随后为经过约1至约3小时输注约6至约12 g，随后为经过约12至约24小时输注约0.5 – 1 g/小时。

3. 经过约3至约6小时输注约18 g至约36 g。

制剂可以方便地以单位剂型呈现，并且可以通过药学领域已知的任何方法来制备。可以改变本公开内容的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，以便获得一定量的活性成分，所述量对于特定患者、组合物和施用模式有效实现所需的治疗应答，而对患者无毒(例如“治疗有效量”)。所选择的剂量水平取决于各种药代动力学因素，包括所采用的特定组合物的活性，施用途径，施用时间，待采用的特定化合物的排泄速率，治疗持续时间，与所采用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料，待治疗患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和既往病史，以及医学领域众所周知的类似因素。

合适的剂量范围可以为约1000 mg至约36 g、或约9 g至约24 g、或约9 g至约15g、或约1 g至约3 g。在一些实施方案中，剂量可以为约1000 mg、约3 g、约9 g、约18 g、约24g、约30 g、约36 g或约48 g。在一些实施方案中，施用于患者的抗替卡格雷抗体或其片段的量取决于患者已接受的替卡格雷量。在一些实施方案中，向患者施用的抗替卡格雷抗体或其片段的量取决于患者的体重。

所施用的抗替卡格雷抗体或其片段的剂量将是在95%的模拟患者群体中引起替卡格雷诱导的血小板解聚逆转的剂量，其中逆转被视为血小板解聚逆转至小于10%的基线。

在一些实施方案中，已向患者施用至少180 mg替卡格雷。在一些实施方案中，已向患者施用至少180 mg替卡格雷的负荷剂量，随后每天施用两次90 mg替卡格雷。在一些实施方案中，在抗替卡格雷抗体或其片段施用之前至少三天，已向患者施用替卡格雷。在一些实施方案中，与抗替卡格雷抗体或其片段的施用同时，向患者施用替卡格雷。在一些实施方案中，已向患者施用过量的替卡格雷。

应注意，本公开内容类似地考虑到也可以制备适合于诊断和研究用途的制剂。此类制剂中的活性剂浓度以及赋形剂和/或热原的存在或不存在，可以基于特定应用和预期用途加以选择。

应该理解，为了方便起见，在本申请中自始至终使用单数形式，例如“一个”、“一种”和“该/所述”，然而，除非上下文或明确的陈述指示并非如此，否则单数形式预期包括复数。所有数值范围都应该理解为包括在数值范围内的每个和每一个数值点，并且应该解释为个别地叙述每个和每一个数值点。指向相同组分或性质的所有范围的端点都包括在内，并且预期可独立地组合。

当与参考数字指示结合使用时，术语“约”意指参考数字指示加上或减去该参考数字指示的至多10%。例如，语言“约50”覆盖了45至55的范围。

如本文使用的，词语“包括”及其变体预期是非限制性的，使得列表中的项目叙述并不排除在这种技术的材料、组合物、装置和方法中也可能有用的其它相似项目。类似地，术语“可以”和“可能”及其变体预期是非限制性的，使得实施方案可以或可能包含某些要素或特征的陈述，并不排除不含那些要素或特征的本技术的其它实施方案。尽管作为术语如包括、含有或具有的同义词的开放式术语“包含”，在本文中用于描述且请求保护本公开内容，但本技术或其实施方案可以可替代地使用更限制性术语如“由所述成分组成”或“基本上由所述成分组成” 进行描述。

除非另有定义，否则本文的所有技术和科学术语都具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管本文描述了优选的方法和材料，但类似于或等价于本文描述的任何方法和材料都可以用于本公开内容的实践或测试中。

本公开内容的非限制性实施方案的实例

本文公开的本主题的实施方案可以单独地或者与一个或多个其它实施方案组合是有益的。并不限制前述描述，下文提供了编号1-42的本公开内容的某些非限制性实施方案。如在阅读本公开内容后，对于本领域技术人员将是显而易见的，每个个别编号的实施方案可以与任何之前或之后的个别编号的实施方案组合使用。这预期为实施方案的所有此类组合提供支持，并不限于下文明确提供的实施方案的组合。

实施方案1. 一种逆转有需要的患者中的替卡格雷相关出血或所述出血的风险的方法，其包括向所述患者施用包含有效量的药物组合物的组合物，所述药物组合物包含与替卡格雷((1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊-1,2-二醇)、或者其代谢产物或衍生物结合的抗体或其片段。

实施方案2. 实施方案1的方法，其中所述抗体或其片段包含选自以下的互补决定区(CDR)组合：

a) SEQ ID NO:53 (VH CDR1)、SEQ ID NO:54 (VH CDR2)、SEQ ID NO:55 (VHCDR3)、SEQ ID NO:58 (VL CDR1)、SEQ ID NO:59 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:60 (VL CDR3)；

b) SEQ ID NO:63 (VH CDR1)、SEQ ID NO:64 (VH CDR2)、SEQ ID NO:65 (VHCDR3)、SEQ ID NO:68 (VL CDR1)、SEQ ID NO:69 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:70 (VL CDR3)；和

c) SEQ ID NO:73 (VH CDR1)、SEQ ID NO:74 (VH CDR2)、SEQ ID NO:75 (VHCDR3)、SEQ ID NO:78 (VL CDR1)、SEQ ID NO:79 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:80 (VL CDR3)。

实施方案3. 实施方案1或2的方法，其中所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列的组合。

实施方案4. 实施方案1-4中任一项的方法，其中在抗替卡格雷抗体或其片段施用前，已向所述患者施用替卡格雷。

实施方案5. 实施方案1-5中任一项的方法，其中所述抗体或其片段是Fab，并且向所述患者施用约1 g至约48 g的剂量。

实施方案6. 实施方案5的方法，其中所述剂量为约9 g至约18 g的Fab。

实施方案7. 实施方案5或6的方法，其中向所述患者施用约1 g、约3 g、约9 g、约18 g、约24 g、约30 g、约36 g或约48 g Fab的剂量。

实施方案8. 实施方案1-7中任一项的方法，其中所述药物组合物静脉内施用于所述患者。

实施方案9. 实施方案8的方法，其中所述药物组合物经过约15分钟至约36小时静脉内施用。

实施方案10. 实施方案1-9中任一项的方法，其中所述药物组合物以两个或更多个段施用。

实施方案11. 实施方案10的方法，其中所述第一段是推注。

实施方案12. 实施方案10或11的方法，其中每个段的施用速率不同。

实施方案13. 实施方案10-12中任一项的方法，其中对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。

实施方案14. 实施方案10-13中任一项的方法，其中所述药物组合物以三个或更多个段施用，其中对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。

实施方案15. 实施方案5-14中任一项的方法，其中所述药物组合物按下述时间表施用：经过10分钟输注12g，随后为经过6小时输注12g，随后为经过18小时输注12g。

实施方案16. 实施方案1-15中任一项的方法，其中所述药物组合物包含约50 mg/mL至约200 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、约5 mM至约50 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约100 mM至约300 mM蔗糖和约0.01% (w/v)至约1.0% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 5.5至6.5。

实施方案17. 实施方案16的方法，其中所述药物制剂包含100 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、25 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、290 mM蔗糖和0.05% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0。

实施方案18. 实施方案16或17的方法，其中所述药物制剂在盐水中进行稀释用于施用。

实施方案19. 实施方案1-18中任一项的方法，其中所述替卡格雷相关出血是大出血。

实施方案20. 实施方案19的方法，其中所述大出血的特征在于危及生命，有可能导致临床上显著的残疾，需要手术来控制出血，需要用血液制品的治疗，或者是与临床上重要的血红蛋白下降相关的急性出血。

实施方案21. 实施方案1-20中任一项的方法，其中所述患者需要紧急手术或干预。

实施方案22. 实施方案21的方法，其中所述紧急手术或干预已知与显著的出血风险相关例如冠状动脉搭桥手术，如果不小心控制出血，则具有神经、眼科或关节置换手术的不良手术结果，与经历围手术期事件的风险相关；或者在如果术前停用双重抗血小板疗法，则处于血栓形成的高风险的患者中。

实施方案23. 实施方案1-22中任一项的方法，其中所述患者处于发展急性冠状动脉综合征(ACS)的风险中、或已被诊断有急性冠状动脉综合征(ACS)。

实施方案24. 实施方案1-23中任一项的方法，其中所述患者处于发展选自以下的疾病的风险中、或已被诊断有选自以下的疾病：心肌梗塞(MI)、不稳定型心绞痛、稳定型缺血性心脏病、镰状细胞疾病包括儿科患者、房颤、冠状动脉疾病、外周动脉疾病、缺血性中风、一个或多个冠状动脉支架、颈动脉支架、在颅内动脉瘤之后的支架以及为血液透析而创建的动静脉瘘。

实施方案25. 实施方案1-24中任一项的方法，其中所述患者是儿科患者。

实施方案26. 实施方案25的方法，其中所述儿科患者小于18岁。

实施方案27. 实施方案26的方法，其中所述儿科患者小于2岁。

实施方案28. 实施方案1-24中任一项的方法，其中所述患者是成年患者。

实施方案29. 实施方案28的方法，其中所述成年患者为18至64岁，包括端点在内。

实施方案30. 实施方案28的方法，其中所述患者超过65岁。

实施方案31. 实施方案30的方法，其中所述患者为65至80岁，包括端点在内。

实施方案32. 实施方案1-31中任一项的方法，其中已向所述患者施用阿司匹林(乙酰水杨酸)。

实施方案33. 实施方案1-32中任一项的方法，其中所述抗体或其片段的施用逆转替卡格雷活性。

实施方案34. 实施方案33的方法，其中所述抗体或其片段的施用恢复血小板功能。

实施方案35. 实施方案34的方法，其中所述抗体或其片段的施用恢复血小板聚集。

实施方案36. 实施方案35的方法，其中所述抗体或其片段的施用将血小板聚集恢复到基线的至少80%。

实施方案37. 实施方案35或36的方法，其中所述抗体或其片段的施用在施用的1分钟至60分钟内恢复血小板聚集。

实施方案38. 实施方案37的方法，其中所述抗体或其片段的施用在施用的5分钟内恢复血小板聚集。

实施方案39. 实施方案35至38中任一项的方法，其中所述抗体或其片段的施用提供了血小板聚集的持续恢复。

实施方案40. 实施方案39的方法，其中所述血小板聚集的恢复在施用后持续至少12小时。

实施方案41. 实施方案40的方法，其中所述血小板聚集的恢复在施用后持续至少16小时。

实施方案42. 实施方案41的方法，其中所述血小板聚集的恢复在施用后持续至少24小时。

通过以下非限制性实施例进一步说明本公开内容。

实施例

实施例1 - 1期、随机化、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量研究，以评估在健康志 愿者中，PB2452连同和不连同替卡格雷预治疗的安全性、耐受性、药代动力学和药效学

主要目标：1)评估单次递增静脉内(IV)剂量的PB2452连同或不连同经口替卡格雷的安全性和耐受性；2)使用光透射聚集测定法(LTA)，评估单次递增剂量的PB2452对替卡格雷抗血小板活性的作用。

次要目标：1)在替卡格雷的存在和不存在下，确定IV PB2452的递增剂量的药代动力学；2)在PB2452的存在和不存在下，确定替卡格雷及其活性代谢产物TAM的药代动力学；3)通过用VerifyNow™ P2Y₁₂测定法测量P2Y₁₂反应单位(PRU)，并且通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)，用血管扩张剂刺激磷蛋白(VASP)磷酸化测定法，测量血小板反应性指数(PRI)，来评价单个IV PB2452剂量在逆转替卡格雷抗血小板活性中的有效性；3)如果给予替卡格雷的第6个剂量，则评估在IV PB2452施用后24小时，重新起始单个剂量的经口替卡格雷的药代动力学和药效学；4)评估PB2452的免疫原性潜力。

探索性目标：评估PB2452对未结合的替卡格雷和未结合的TAM的血浆浓度的药代动力学(PK)概况的作用。

研究设计和方法：这是1期、首次在人中、随机化、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量、序贯组研究，以评估当施用于健康的男性和女性受试者时，PB2452连同或不连同替卡格雷预治疗的安全性、耐受性、药代动力学和药效学。在方案的内容内对研究药物的所有提及都适用于PB2452或匹配的安慰剂。

这项研究具有最多10个组以及最多总共大约80个受试者。PB2452的起始剂量为100 mg，且关于后续组的计划剂量为300、1000、3,000、9,000和18,000 mg。其它剂量也可以进行测试，且可能超过18,000 mg。

该研究由以下组成：筛选期(第–45至–4天)、入住/预治疗(第-3至-1天)、内部治疗期(第1到3天)、以及随访就诊(第4、7和28天[+2天])。受试者在第1天时接受研究药物的IV剂量。在第1天时，符合所有纳入标准且没有任何一个淘汰标准的受试者，在所有治疗组中以3:1的比率随机分配为接受PB2452或安慰剂：

组1至3：对于最初的组(组1)，4个健康受试者以积极治疗/安慰剂的3:1比率(3A:1P)随机分配，以经过30分钟接受研究药物的单次100 mg IV剂量。对于第二组(组2)，4个健康受试者随机分配(3A:1P)，以经过30分钟接受研究药物的单次300 mg IV剂量。对于第三组(组3)，4个健康受试者随机分配(3A:1P)，以经过30分钟接受研究药物的1,000 mg IV剂量。

组4至6：如果在先前给药的组中没有安全性关注，则组4到6各自中的8个受试者以3:1的比率(6A:2P)随机分配，以在第5个剂量的替卡格雷预治疗后大约2小时内，接受研究药物的单次IV剂量。对于替卡格雷预治疗，受试者在早晨(第-2天)接受180 mg替卡格雷的经口负荷剂量，随后为每12小时经口的90 mg替卡格雷，共4个另外剂量，然后在第5个替卡格雷剂量(第1天)后大约2小时内，施用研究药物的单次IV剂量。组4到6各自中的受试者将接受如上所述的替卡格雷预治疗，并且经过30分钟，分别接受1,000、3,000、或9,000，或18,000 mg研究药物的单次IV剂量。在每个先前剂量组的安全性和剂量扩大评价之后，组4到6将进行序贯给药。

组7至10：对于组7，在替卡格雷预治疗之后，受试者以3:1的比率(6A:2P)随机分配，以接受研究药物的单次IV剂量。静脉注射输注在第5个替卡格雷剂量后2小时启动，并且将连续施用PB2452，但在输注期过程中以如下的不同速率：经过5分钟输注3,000 mg，随后为7小时55分钟输注15,000 mg。

对于组8，在输注期过程中的输注速率如下：经过15分钟输注6,000 mg，随后为3小时输注6,000 mg，随后为8.75小时输注6,000 mg。对于组9，在输注期过程中的输注速率如下：经过15分钟输注6,000 mg，随后为4小时输注6,000 mg，随后为12小时输注6,000 mg。对于组10，在输注期过程中的输注速率如下：经过10分钟输注6,000 mg，随后为3小时输注6,000 mg，随后为13小时输注6,000 mg。

组1到3中的受试者在第-1天时入住临床场所。在第1天时，受试者在早晨接受研究药物的单次IV剂量。受试者在第3天时从临床场所出院，并且在第4、7和28天(+2天)时返回用于随访就诊。

组4到10中的受试者在第-3天时入住临床场所。在第-2天的早晨，受试者开始用替卡格雷的预治疗。在第1天时，受试者在早晨接受研究药物的单次IV剂量。组4到8中的受试者(如果组9没有接受替卡格雷的第6个剂量，则以及组9)在第3天时从临床场所出院，并且在第4、7和28天(+2天)时返回用于随访就诊。组10在第7天时从临床场所出院，并且在第28天(+2天)时返回用于其最后的随访就诊。

在第2天时，在研究药物输注启动后24小时的早晨，组9中的受试者可能接受另外剂量的替卡格雷。在这种情况下，受试者在第4天时从临床场所出院，并且在第7和28天(+2天)时返回用于随访就诊。如果未给予第6个替卡格雷剂量，则他们在第3天时从单元病房出院，并且在第4、7和28天时返回用于随访就诊。基于来自先前组的数据审查而做出关于是否施用替卡格雷的第6个剂量的决定。

以给药后最多28天的指定间隔收集血浆样品用于PB2452、替卡格雷及其活性代谢产物TAM的PK和药效学(PD)分析，并且收集尿样品用于替卡格雷和TAM的PK分析。0小时是所有组的研究药物输注的启动。

在研究自始至终小心地监测安全性和耐受性。在基线时以及研究药物施用之后最多28天，在所有受试者中确定免疫原性。

前哨给药(Sentinel Dosing)：组1的给药(PB2452在人中的首次暴露)用最初随机分配为接受研究药物的单次IV剂量的两个前哨受试者进行。在研究药物输注之后最多24小时，来自前哨受试者的盲法安全性数据由研究者进行审查，然后向组1中的剩余2个受试者给药。在前哨受试者后至少24小时，向剩余的受试者给药。另外，组4的给药(PB2452与替卡格雷组合在人中的首次暴露)由用替卡格雷预治疗的2个前哨受试者进行，然后接受以活性剂/安慰剂的1:1比率随机化的PB2452或安慰剂的单次IV剂量。在替卡格雷和研究药物施用之后最多24小时，来自前哨受试者的盲法安全性数据由研究者进行审查，然后向组4中的剩余6个受试者给药。在前哨受试者后至少24小时，向剩余的受试者给药。

剂量扩大：将成立安全审查委员会(SRC)，用于每个剂量组的到第4天的安全性(例如，临床实验室结果、不良事件[AE]、12导联心电图[ECG]、生命体征)以及可用PK数据的盲法审查。剂量扩大至后续组将基于先前组的安全性。研究者做出关于以下的建议：是否进行至下一个预定剂量水平，暂停给药用于审查另外的安全性和/或PK数据，或调整下一个剂量组的剂量。通过SRC做出调整或暂停剂量或进行至下一个组的决定。安全性数据以盲法方式进行审查，并且必须在下一个更高剂量组的给药之前被SRC视为可接受的。

基于安全性和PK数据(如果可用的话)的审查，SRC可以选择重复剂量水平，施用小于先前剂量的剂量，或扩大至低于下一计划剂量的剂量。在审查有关任何DLT的可用安全性数据后，SRC有权做出进行剂量扩大的决定。

停止标准：在关于每个剂量组的第4天完成后，SRC审查且评价所有可用的安全性(例如，临床实验室结果、AE、ECG、生命体征)、耐受性和可用的PK数据，以做出关于下一个剂量组的剂量扩大决定。如果在确认接受PB2452并由SRC审查后出现下述情形中的任一种，则剂量扩大被暂停：

在SRC看来，禁止用PB2452对另外受试者进一步给药的任何临床前或临床事件；

剂量组中的任何严重不良事件(SAE)；

来自先前剂量组的数据指示了待以更高水平给药的下一个组的安全性问题，例如未预料到的应答(例如，临床实验室数据、ECG、心脏遥测、生命体征或身体检查中的临床显著变化)；

剂量组中的两个或更多个受试者经历了任何DLT，或1个受试者经历了2级或更高级别的AE (DLT)，其在SRC看来是暂停剂量扩大的正当理由。

两个或更多个受试者具有丙氨酸氨基转移酶(ALT)或天冬氨酸氨基转移酶(AST)的>3×正常上限(ULN)，或者胆红素或碱性磷酸酶的> 2 × ULN，其中没有发现其它原因可以解释这种增加；或

尽管已对于输液相关反应进行前驱用药，但一个或多个受试者仍经历了2级或更高级别的输液相关反应。

如果在SRC或申办者看来，在可用数据的全面审查中鉴定了任何其它重大安全性或耐受性问题，所述问题是在向另外受试者给药前的进一步评估的正当理由，则剂量扩大也可能暂停。这可能包括新出现的非临床数据、临床上有关的AE、或来自其它来源的指示安全性关注的有关数据，即使事件本身并未达到方案规定的剂量限制性毒性定义。在审查有关SAE和其它停止标准的可用安全性数据后，SRC有权做出进行剂量扩大的决定。

纳入标准：

1)对于组1-10的男性或女性受试者，受试者为18至50岁的男性或女性，包括端点在内。

2)受试者在筛选时具有18至35 kg/m²的体重指数以及≥50 kg但≤120 kg的重量，包括端点在内。

3)如通过医疗史、临床实验室测试结果、生命体征测量、12导联ECG结果以及在筛选时的身体检查发现确定的，受试者被研究者视为处于良好的一般健康下。

4)具有分娩潜力的女性受试者在研究药物的最后一个剂量后的3个月内不得怀孕、哺乳或计划怀孕，并且在筛选和入住时具有阴性血清妊娠测试。从研究药物施用前30天到研究结束，具有分娩潜力的女性受试者必须使用两种有效的节育方法(即与避孕套组合的经口、可植入、贴剂或可注射的避孕药，与避孕套组合的含激素的宫内避孕器(其已在筛选之前放置至少2个月)，双重屏障方法[即避孕套、避孕海绵、避孕隔膜或者具有杀精子凝胶或乳膏的宫颈帽]，或者对于男性受试者或女性受试者的男性伴侣的输精管切除术)。如果女性已满足下述条件之一，则她们被视为没有分娩潜力：不可逆的手术绝育(即，子宫切除术或双侧卵巢切除术[非输卵管结扎术])的记录、或绝经后(定义为在所有外源激素治疗中止之后连续12个月的停经，并且记录血浆卵泡刺激素水平>40 IU/mL，或连续24个月停经)。具有分娩潜力的伴侣的男性受试者必须同意在研究期间以及研究药物的最后一个剂量后的30天内，使用适当且有效的避孕措施(例如，避孕套加上具有杀精子剂的避孕隔膜；避孕套加上杀精子剂)，并且在研究药物的剂量之前至少7天以及直到研究药物的最后一个剂量之后至少90天，避免捐赠精子。

5)受试者同意遵守所有方案要求。

6)受试者能够提供书面知情同意。

排除标准

1. 任何临床上重大的急性或慢性疾病或医学病症史。

2. 胃肠道、肝(除吉尔伯特综合征之外)、或肾疾病或肾功能不全(即，估计的肾小球滤过率<60 ml/分钟/1.73 m²)，或者已知干扰药物的吸收、分布、代谢或排泄的任何其它状况的历史或存在。

3. 在研究药物施用的4周内的任何临床上重大的病患、医学/手术操作或创伤，或将在研究期间(从筛选到第28天随访就诊)发生的任何计划的手术操作。

4. 在筛选或入住过程中鉴定的身体检查、生命体征、实验室评价和ECG参数中的任何临床上重大的异常发现。注意：异常测试结果可能重复一次用于确认。

在仰卧休息10分钟后出现的具体生命体征排除标准为下述任一种：

收缩压> 150 mm Hg；

舒张压> 90 mm Hg；或

心率<50或> 100次/分钟。

在筛选或入住时ECG参数的具体排除标准为下述任一种：

Fridericia校正的QT间隔延长(QTcF) >450毫秒(msec)，QTcF缩短<340 ms或停顿> 3秒，或长QT综合征的家族史；

PR (PQ)间隔延长>240 msec，间歇性的二度或三度房室(AV)阻滞或AV分离，或PR间隔缩短<120 msec；

如果不存在左心室肥大的证据，则不完整、完全或间歇性束支传导阻滞(QRS <110msec，伴有正常QRS和T波形态)是可接受的；

5. 任何动脉或静脉血栓形成史，包括下述任一种：

短暂性脑缺血发作、心血管意外、中风(缺血性或出血性)、不稳定型心绞痛、心肌梗塞或外周动脉疾病史；或

深静脉血栓形成、肺栓塞、血栓性静脉炎或海绵状畸形史。

6. 任何增加的出血风险，包括下述：

近期胃肠道出血史(在研究药物的第一个剂量之前30天内)；

任何严重头部创伤、颅内出血、颅内赘生物、动静脉畸形、动脉瘤或增生性视网膜病变史；

任何颅内、眼内、腹膜后或脊柱出血史；

任何近期(在研究药物的第一个剂量之前30天内)重大创伤；

可能增加出血风险的出血性病症(例如，血友病、血管性血友病)史；

接受用非甾体抗炎药(包括阿司匹林[每天大于100 mg])、抗凝剂或无法停药的其它抗血小板剂(包括氯吡格雷、普拉格雷、噻氯匹定、双嘧达莫或西洛他唑)的长期治疗。

在筛选的30天内已服用任何经口或肠胃外抗凝剂，包括低分子量肝素；

在筛选的14天内已服用非甾体抗炎用药，包括阿司匹林；

7. 受试者在筛选时对于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、或者人免疫缺陷病毒1型或2型抗体具有阳性测试结果。

8. 如通过研究者判断的，可能干扰研究数据解释或被视为不太可能遵守研究程序、限制和要求的任何正在进行的或近期的(即，在筛选期过程中)轻微的医疗主诉。

9. 任何心动过缓事件的风险(例如，已知的病窦综合征、房颤、或者二度或三度AV阻滞)。

10. 用强CYP3A抑制剂、具有较窄治疗指数的CYP3A底物、或强CYP3A诱导剂的伴随经口或IV疗法，其不能在随机化前至少5个半衰期但不短于10天内停止(实例列表可以在节段6.2中找到)。

11. 在研究药物的第一个剂量前的14天内，任何处方药(排除激素避孕药)或非处方药(排除对乙酰氨基酚[每天最多2 g]治疗，包括草药或营养补充剂。

12. 受试者在用研究药物给药前的48小时内，已食用了西柚或西柚汁、塞维利亚橙或含塞维利亚橙的产品(例如柑橘果酱)、或者含酒精或黄嘌呤的产品。

13. 受试者正在参与任何其它研究或正在参加非用药研究，所述研究在研究者看来将干扰该研究的结果。

14. 受试者在这项研究中的研究药物施用的30天内，已接受了另一种新的化学实体(定义为尚未批准上市的化合物)或者任何上市或研究性的生物制剂。排除期在实验用药的最后一个剂量或5个半衰期已过去后的30天(以时间较长者为准)开始。

15. 受试者与任何申办者或研究场所雇员或其近亲(例如，配偶、父母、兄弟姐妹或孩子，无论是生物学上的还是合法收养的)有关系。

16. 受试者先前已接受PB2452或已在这项研究的较早组中被随机化为接受研究药物。

17. 受试者是吸烟者，或在研究药物的输注前的3个月内，已使用尼古丁或含尼古丁的产品(例如鼻烟、尼古丁贴片、尼古丁口香糖、模拟香烟或吸入器)。

18. 受试者在筛选或入住时具有已知或怀疑的药物滥用(包括酒精)史，或者对于滥用药物、酒精或可替宁(尼古丁水平高于300 ng/mL)具有阳性测试结果。

19. 受试者在研究药物输注前的24小时内，以及在约束于临床场所的同时，已从事剧烈活动或接触运动。

20. 受试者已在筛选的1个月内捐献血液或血浆，或者在研究药物输注前的3个月过程中，具有多于500 mL的任何献血/失血。

21. 如通过研究者判断的，受试者具有严重的过敏/超敏反应史或进行中的过敏/超敏，或对具有与替卡格雷类似的化学结构或类别的药物、任何生物治疗剂的超敏反应史、或可能妨碍在临床场所的标准饮食的任何严重的食物过敏史。

22. 关于受试者不能遵守研究程序和/或随访的关注，或者在研究者看来，受试者并不适合于进入研究。

评估标准：

安全性评价：安全性和耐受性将通过监测和记录AE、临床实验室测试结果(血液学、凝血、血清化学和尿分析)、生命体征测量(收缩压和舒张压、口腔体温、呼吸频率和心率)、12导联ECG结果、心脏遥测监测、免疫原性和身体检查发现进行评价。

药代动力学评价

血浆收集：在下述时间点，从所有受试者中收集血液样品用于血浆中的PB2452的PK分析：在给药前(在研究药物输注启动之前的10分钟内)，以及在研究药物输注启动后的最多28天。下表中列出了关于每个组的具体收集时间：

在给药前(在研究药物输注启动之前的10分钟内[时间0])，以及在研究药物输注启动之后的最多48小时，从组4到10的受试者中收集血浆样品，用于确定替卡格雷及其活性代谢产物TAM (或ARC-124910XX)的总浓度。下表中列出了关于每个组的具体收集时间：

如果在组9中，在研究药物输注后24小时施用替卡格雷的第6个剂量，则如下表中注明的，在第6个替卡格雷剂量施用之后最多24小时，收集另外的PK样品：

在给药前(在研究药物输注启动之前的10分钟内[时间0]，以及在研究药物输注启动之后的最多48小时)，从组4到10的受试者中收集血浆样品，用于确定未结合的替卡格雷和TAM浓度。下表中列出了关于每个组的具体收集时间：

计算关于PB2452的下述血浆PK参数：

从时间0到最后可定量浓度的时间的血浆浓度相对于时间曲线下面积(AUC)(AUC0-t)；

观察到的最大血浆浓度(Cmax)；

达到所观察到的最大血浆浓度的时间(Tmax)；

从时间0外推到无穷大的AUC (AUC0-inf) (如果数据允许的话)；

终末消除半衰期(t½) (如果数据允许的话)；

表观清除率(CL) (如果数据允许的话)；

计算关于替卡格雷和TAM的下述血浆PK参数：

Cmax；

Tmax；

从时间0到给药后12小时的AUC (AUC0-12)；

从时间0到给药后24小时的AUC (AUC0-24)；

从时间0到给药后48小时的AUC (AUC0-48)；

从时间0到最后可定量浓度的时间(Clast)的AUC (AUC0-t)；

AUC0-inf (如果数据允许的话)；

t½ (如果数据允许的话)；

对于在研究药物之后24小时接受替卡格雷的第6个剂量的组，仅计算PK参数AUC0-24和AUC 0-inf (如果数据允许的话)。可能包括另外的PK参数。

药效学评价：

下述PD数据和参数由LTA、P2Y₁₂反应单位(pRU)和血小板反应性指数(PRI)测定法生成。

记录在每个评价点下，关于最多四种血小板激动剂[(20 μM二磷酸腺苷(ADP)、5 μM二磷酸腺苷(ADP)、1.6 mM花生四烯酸(AA)和15 μM凝血酶受体活化肽(TRAP)]的最大、最终聚集程度和曲线下面积。

基线血小板聚集的百分比；

最大血小板聚集；

到最大血小板聚集的时间；

到基线血小板聚集的60%、80%、90%的时间。

VerifyNow™ P2Y₁₂：1)在每个评价点下的PRU；2) PRU中的基线百分比；3)最大PRU；4)到最大PRU的时间；5)到基线PRU的60%、80%、90%的时间

通过ELISA的VASP：1)在每个评价点下的PRU；2) PRU中的基线百分比；3)最大PRU；4)到最大PRU的时间；5)到基线PRU的60%、80%、90%的时间

研究药物、剂量和施用途径：

PB2452：

所有组：PB2452 (浓度在0.4 mg/mL直到72 mg/mL之间不等)单次IV输注，待经过30分钟至12小时递送250 mL，以100、300、1,000、3,000、9,000、18,000 mg、24,000或36,000mg的递增剂量，或者9,000至36,000 mg的中间剂量。在一些情况下，申办者可以选择对于输注的前5-20分钟，以更快的速率(等价于推注)输注一部分研究药物(最多6 g)。

匹配的安慰剂：

所有组：0.9%氯化钠单次IV输注，待以与定义的主动输注持续时间相匹配的速率递送250 mL。

替卡格雷：

组4到10：替卡格雷90 mg经口片剂(立即释放)；作为180 mg (2 × 90 m片剂)负荷剂量加上另外4次的每12小时90 mg进行施用

组9：在研究药物输注启动后24小时，可能具有作为180 mg ([2 × 90 mg)经口片剂(立即释放)]施用的另外一个剂量。

实施例2 - 人临床试验数据 – PB2452逆转替卡格雷活性

替卡格雷是与阿司匹林一起使用的经口P2Y₁₂抑制剂，以降低急性冠脉综合征患者中的缺血性事件的风险。与其它抗血小板药物一样，自发性大出血以及与紧急侵入性操作相关的出血也值得关注。替卡格雷的抗血小板效应不能用血小板输注来逆转。速效逆转剂将是有用的。

在首次在人中的随机化、双盲、安慰剂对照的健康志愿者研究中，静脉内(IV)PB2452 (以高亲和力结合替卡格雷的单克隆抗体片段)作为替卡格雷逆转剂进行评估。在替卡格雷施用48小时之前和之后，使用光透射聚集测定法(LTA)、VerifyNow和血管扩张剂刺激磷蛋白(VASP)测定法，来评价血小板功能。

在随机化的64个受试者中，48个接受PB2452，而16个接受安慰剂。在替卡格雷48小时后，血小板聚集被压制~80%。与安慰剂相比较，PB2452作为10分钟静脉内推注进行施用，随后为16小时输注，通过多重测定法测量的显著恢复血小板功能。逆转起效在5分钟内发生，并且持续超过20小时(对于所有测定法，跨越所有时间点，Bonferroni校正的P <0.0001)。在药物中止后不存在血小板活性反弹的证据。不存在药物有关的不良事件。

PB2452是替卡格雷的特异性逆转剂，提供了安全有效地立即和持续的替卡格雷的抗血小板效应逆转(使用多重测定法)。PB2452可能代表治疗或预防替卡格雷相关出血并发症的有用方法。

背景

抗血小板疗法是心血管事件的二级预防的必要部分。(Bhatt (2014)。特别地，双重抗血小板疗法 - 阿司匹林与经口P2Y12拮抗剂的组合 - 是急性冠状动脉综合征、冠状动脉支架置入和先前的心肌梗塞患者中的占优势方法。(Yusuf 92001)；Mehta (2001)；Bhatt (2006)；Bhatt (2007)；Chen (2005)；Wiviott (2007)；Prasugrel (2012)；Wiviott(2013)。使用的三种经口P2Y12受体拮抗剂是氯吡格雷、普拉格雷和替卡格雷。(Koski(2018))。随机化试验已发现，跨越急性冠脉综合征的整个范围，替卡格雷优于氯吡格雷(Wallentin (2009)；Cannon (2010)；James (2011)。

所有三种经口P2Y₁₂拮抗剂的局限性在于它们增加出血风险，所述风险在停药后持续数天。(Plavix处方信息；Brilinta处方信息；Effient处方信息)。这在具有大出血如颅内或胃肠道出血的患者中造成挑战。(Ducrocq (2013)；Bhatt (2007))。另外，需要紧急且尤其是紧急侵入性操作的患者也处于围手术期出血并发症的增加风险中。如果需要紧急操作，则操作者(proceduralist)必须接受经常在凭经验提供血小板输注后增加的出血风险。如果紧急的话，则操作员或继续并预料增加出血的危险，或将操作推迟几天，具有延迟临床指示操作的伴随风险。学会指南建议在手术之前至少五天中止经口P2Y₁₂受体拮抗剂。(Capodanno (2013)；Douketis (2012))。

当前，不存在P2Y₁₂受体拮抗剂的逆转剂。与其它P2Y₁₂拮抗剂不同，替卡格雷是可逆抑制剂。因而，替卡格雷与输液的血小板上的P2Y₁₂结合，从而致使其无效。因此，替卡格雷的特异性逆转剂将是期望的。

试验设计

这项研究是单中心、随机化、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量研究，以在给予或未给予替卡格雷预治疗的18至50岁的健康受试者中，评估PB2452的安全性、功效和药代动力学。如表1中所示，评估了十个序贯的剂量组。

表1 – 最终研究设计

缩写：BID，每天两次

组1-3各自入选了4个受试者，并且评价了在不存在替卡格雷预治疗的情况下，输注30分钟的0.1、0.3和1.0克PB2452的静脉内剂量。

组4至10中的受试者用180 mg经口替卡格雷负荷剂量，随后为每天两次90 mg共48小时进行预治疗，然后评估以1.0至18克剂量的PB2452。组4、5和6各自由8个受试者组成，所述受试者被随机分配，以在替卡格雷预治疗后接受1.0、3.0和9.0克的PB2452或安慰剂。组7至10接受了经由各种输注方案的18克固定剂量的PB2452或安慰剂。在最后一次替卡格雷预治疗剂量后2小时，启动这些组中的PB2452输注，以与替卡格雷的峰值浓度相一致。(Gurbel(2009)。所有组中的受试者都以3:1的比率随机化，以接受PB2452或安慰剂。

受试者合格性：合格的受试者是18至50岁的健康男性和女性，其体重指数为18至35 kg/m²且重量为≥50 kg至≤120 kg。排除具有替卡格雷的任何禁忌症、暗示出血风险增加的医疗史、或估计的肾小球滤过率低于60 mL/分钟/1.73m²的受试者。从所有受试者获得书面知情同意。

结果

主要功效结果是在替卡格雷预治疗的受试者中，在PB2452或安慰剂施用之前和之后的多重时间点，通过使用光透射聚集测定法分析血小板聚集，PB2452在逆转替卡格雷的抗血小板效应中的有效性。次要功效结果是使用VerifyNow和血管扩张剂刺激磷蛋白磷酸化免疫测定法(VASP)评价的替卡格雷逆转的有效性。

主要的安全性结果是连同或不连同经口替卡格雷预治疗，与PB2452相关的治疗出现的不良事件(AE)的频率和严重性。还在从筛选到28天安全性随访期结束的多重时间点，评价了临床实验室测试结果、生命体征测量、12导联ECG和连续遥测结果、以及身体检查发现。在PB2452施用之前以及之后的第7和28天，评价免疫原性。

其它次要结果包括在输注后第7和28天，评价PB2452和替卡格雷的药代动力学概况以及评估PB2452的免疫原性。

统计分析

样品大小64是基于临床和实践考虑，而不是基于正式的统计功效计算。该样品大小被视为足以充分评价PB2452的安全性、功效和药代动力学概况，以及替卡格雷的药代动力学和药效学概况。通过使用Wilcoxon秩和检验比较PB2452和安慰剂之间的基线血小板聚集的平均百分比，来评估抗血小板效应的逆转。使用Bonferroni方法调整多重性。使用皮尔森相关性和斯皮尔曼等级相关系数，来评估每对血小板功能测试之间的相关性。对于所有呈现，合并各组中接受安慰剂的受试者的平均数据。分类变量通过其频率和百分比进行概括，并且连续变量与具有无数据丢失的受试者数目、平均值、标准差、中值、最小值和最大值一起呈现。呈现了关于每个组的描述性统计学，以及合并的安慰剂和PB2452数据。对于药效学数据，比较每个组和合并的安慰剂数据之间的血小板聚集结果(分别合并组4至6和组7至10)。所有分析都用SAS软件，版本9.4 (SAS Institute)来执行。

结果

研究群体：总共64个受试者被随机化。其中48个接受PB2452，而16个接受安慰剂。在接受PB2452的48个中，21个接受18克的最高剂量，而39个接受替卡格雷预治疗。最终研究设计和受试者流程图分别显示于表1和图6中。表2中提供了受试者的基线特性。

表2 – 基线特性

安全性：总的来说，PB2452被视为安全且良好耐受的。在64个受试者的19个(29.7%)中，报告了总共30次治疗出现的不良事件。在给予PB2452的48个受试者中，17个(35.4%)报告了27次不良事件，而给予安慰剂的16个受试者中的2个(12.5%)报告了3次不良事件(表3)。不良事件无一被视为与研究药物有关。不存在研究药物有关的严重不良事件、剂量限制性毒性或输注有关反应。不存在死亡或导致研究药物停药的不良事件。一个受试者从临床场所出院后经历了2次严重不良事件(酒精中毒和急性呼吸衰竭)，这两者均被视为与研究药物无关。除组3中的1个受试者之外，所有具有不良事件的受试者都已接受了替卡格雷预治疗。在各治疗组中并且当与安慰剂相比较时，平均临床实验室结果、生命体征测量值和ECG值的变化是相似的。

表3 – 治疗出现的不良事件，安全性群体

注意：治疗出现的AE (TEAE)定义为在暴露于研究药物前不存在的任何事件，或者在暴露后强度或频率恶化的任何已经存在的事件。为了分析目的，TEAE是在研究药物启动时或启动后开始的事件。在受试者概括的每个水平下，如果受试者报告了1次或多次事件，则该受试者被计数一次。百分比基于每个治疗组和总体的安全性群体中的受试者数目。不良事件使用MedDRA版本21.0进行编码。

替卡格雷的逆转

在组4至10中评价了替卡格雷的逆转。在接受PB2452或安慰剂之前，受试者用替卡格雷预治疗48小时。在接受安慰剂的受试者中，在替卡格雷预治疗48小时后，血小板聚集被压制80-85%，并且在替卡格雷停止后的另外24小时，保持被压制。血小板功能在24至48小时之间逐渐增加(图3-5；图7A和7B)，并且对于1g PB2452的施用并未观察到逆转(图2)。对于PB2452，在组5和6中，分别在3.0和9.0克的剂量水平下，观察到替卡格雷的首次显著逆转(图7A和7B)。紧在30分钟输注完成后的第一个时间点30分钟，观察到平均血小板聚集的显著但瞬时的增加。逆转的持续时间是剂量依赖性的，并且持续1至3小时(图7A)。

为了实现更快速持久的逆转，总PB2452剂量在组7至10中增加至18克，以适应PB2452的初始推注，以及8、12或16小时的较长输注。在组7中，3.0克的PB2452推注随后为8小时输注，使平均血小板聚集显著增加了2个小时，具有大约12个小时的持续时间(图7B)。在组8至10中，推注增加至6.0克，随后为12或16小时的输注。随着较大的推注，逆转在输注启动的5分钟内实现，并且持续16至24小时(图7B)。

用VerifyNow和VASP确认了，使用聚集测量法的主要功效评价所测量的统计学显著的立即和持续的逆转(图8A和8B)。三种血小板功能测试结果各自之间的相关性分析证实了，关于所有比较的高度显著相关性，其中皮尔森和斯皮尔曼分析的r值分别为≥0.81和≥0.91(关于所有比较的P < 0.0001，图9)。

为了评价正常血小板功能恢复的程度，使用所有三种测定法，将PB2452后的血小板功能与替卡格雷前的基线血小板功能进行比较。在最多20小时的所有治疗后时间点，PB2452都将平均血小板聚集恢复到基线的80%内(图10A)。平均VerifyNow血小板反应性揭示了，对于24小时PRU ≥180的血小板功能的快速持续正常化(图10B)。当用VASP评价P2Y12受体信号传导的恢复时，PRI在5分钟内恢复到基线的接近100%，并且持续20-24小时(图10C)。

为了确定急性替卡格雷逆转是否引起血小板聚集中潜在的促血栓反弹增加，确定了响应低浓度ADP (5 µM而不是通常的20 µM)的血小板聚集。另外，还测试了响应其它激动剂包括花生四烯酸和凝血酶受体活化肽的血小板聚集。如预计的，5 µM ADP引发的应答低于20 µM ADP (图12A和12B)，并且在逆转后对花生四烯酸和凝血酶受体活化肽的应答类似于在替卡格雷或PB2425施用前的基线(数据未显示)。

药代动力学

PB2425的药代动力学分析证实了，跨越0.1至9.0克的剂量范围，平均暴露的剂量线性增加(图11A)。估计的分布半衰期和终末半衰期分别为0.86小时和6.9小时，伴随1.88L/分钟的估计清除率和大约2.9 L的分布体积，提示了PB2452局限于血管区室。在单独接受替卡格雷的受试者中，在经口剂量后大约2小时，总替卡格雷浓度达到900 ng/mL的峰值。在PB2452的存在下，循环替卡格雷的平均浓度增加到大约2 – 5.6倍(图11B)。在18克剂量水平伴随8至16小时输注下，PB2452暴露延长了12-24小时(图11C)，并且与单独给予替卡格雷的受试者相比，平均替卡格雷浓度增加到5.6倍(图11D)。替卡格雷暴露的这些增加看起来取决于PB2452剂量，并且很可能反映了PB2452与替卡格雷之间的紧密结合、以及血管外替卡格雷的后续重新分布到血管区室内。

免疫原性

在给予PB2452的48个受试者中，21个(43.8%)具有可检测的抗药物抗体，其中15个(31.3%)具有预先存在的(给药前)抗体，而6个(12.5%)在给药后呈阳性，尽管处于40 (n=5)或160 (n=1)的低滴度下。在分配至安慰剂的受试者中，16个中的3个(18.8%)测试呈阳性，其中2个具有预先存在的抗体。所有抗体滴度都很低，并且对PB2452的安全性或功效没有观察到的作用。

讨论

这项研究证实了，单克隆抗体片段PB2452的静脉内输注显著逆转替卡格雷的抗血小板效应，如使用血小板功能的多重灵敏测定法所测量的。在研究的健康群体内，不存在与PB2452相关的严重不良事件或输液反应。因此，PB2452代表了在侵入性操作过程中具有出血或急需止血的患者中，逆转替卡格雷的抗血小板效应的有效手段。

逆转新型经口抗凝药作用的能力是抗血栓治疗中的重大进展。当前，除停止药物并等待3至5天使其效应消散外，不存在逆转经口P2Y₁₂拮抗剂如替卡格雷的抗血小板效应的有效方法，这在危及生命的出血或处于血栓形成的高风险中的患者中是成问题的。治疗指南和替卡格雷的处方信息陈述在手术操作之前等待至少5天。在需要紧急手术的患者中等待这么久是不可能的，并且在需要紧急手术的患者中可能是不可取的。不幸的是，血小板输注对于服用替卡格雷的患者是没有用的，因为该药物与新鲜的血小板结合。(Godier(2015)；Teng (2016))。因此，存在替卡格雷逆转剂的需要。

PB2452是重组人IgG1单克隆抗体抗原结合片段，其以高特异性与替卡格雷或其活性代谢产物AR-C124910XX结合。(Buchanan (2015))。凭借其高亲和力，PB2452可以中和游离的替卡格雷以及与P2Y12受体结合的药物，不受理论的束缚，其解释了用PB2452观察到的快速逆转。作用机制仅对于替卡格雷是特异性的，而不适用于其为不可逆的P2Y₁₂受体拮抗剂的氯吡格雷或普拉格雷，也无法预料任何其它脱靶结合。

结论

静脉内PB2452逆转替卡格雷的抗血小板效应。在具有严重出血或者需要紧急手术或其它侵入性操作的患者中，PB2452的施用可以是用于替卡格雷逆转的有用策略。

实施例3 - 在用替卡格雷和乙酰水杨酸预给药的年长和老年受试者中，评估 PB2452的安全性、耐受性、PK和PD的研究

在2A期、随机化、双盲、安慰剂对照、单剂量、序贯组研究中，在具有替卡格雷和乙酰水杨酸(ASA)预治疗的年长和老年患者中，将PB2452的安全性、耐受性、药代动力学和药效学与匹配的安慰剂进行比较。各种剂量水平和施用方案将施用于年长(50至64岁)和老年(65至80岁)男性和女性受试者。

在最多5个组中评估最多5个剂量水平和/或施用方案。每个组包括以3:1的比率(PB2452:安慰剂)随机化的8至12个受试者。

最初的组(组1)包括用ASA + 替卡格雷预治疗的年龄50至64岁的大约8个受试者，其随机化以接受18克(g) PB2452或匹配的安慰剂，其作为经过10分钟输注的最初6 g推注，随后为经过接下来的15小时50分钟输注的12 g进行施用，以完成16小时的方案。在先前的1期研究中，该初始方案在健康的年轻成人(18至50岁)中显示为安全和良好耐受的，并且提供替卡格雷的抗血小板效应的立即和持续逆转。

在组1完成之后，后续组可以在与组1相同的群体或不同的群体例如老年受试者(65至80岁)中，测试相同、更高或更低的剂量水平和/或不同输注方案的PB2452或匹配的安慰剂。

研究由以下组成：筛选期(第–45至–4天)、入住日(第-3天)和预治疗期、现场随机化/治疗日(第1天)、3天的现场治疗和安全性监测、随访就诊(第7天)和最终的随访就诊(第28天[±2天])。在随机化之前的7天(第-7天)，每天一次(QD)向受试者经口施用81 mg ASA，直到在接受研究药物前的第1天早晨时的最终剂量。替卡格雷180 mg经口负荷剂量在第-2天的早晨时施用，随后为每12小时90 mg，直到在第1天的早晨时已施用第5个剂量。在后续组中的研究药物启动后24小时，可以施用替卡格雷的第6个剂量。

在第-2天的早晨，受试者如先前段落中所述开始用替卡格雷的预治疗。在第1天时，受试者以3:1 (PB2452:安慰剂)的比率进行随机化，以在第5个替卡格雷剂量之后2小时接受PB2452或安慰剂的IV剂量。受试者可能在第3至7天之间(包括端点在内)从临床场所出院，并且如果已经出院，则在第7天和第28天(±2天)时返回用于随访就诊。

研究药物、剂量和施用途径：

PB2452：PB2452 IV输注在第1天时施用最多48小时。每个受试者的总剂量不超过30 g。输注速率经过30分钟不超过18 g，并且浓度不超过250mL中的24 g。在任何1小时时期内，受试者不接受多于250 mL的研究药物输注。

匹配的安慰剂：0.9%氯化钠单次IV输注，待以与主动输注相匹配的速率和体积递送。

替卡格雷：替卡格雷90 mg经口片剂(立即释放)作为180 mg (2 × 90 m片剂)负荷剂量加上对于另外4个剂量的每12小时90 mg进行施用。在组1之后的一个或多个后续组中，受试者也可以在研究药物输注启动后24小时接受90 mg替卡格雷的另外单次经口剂量(第6个替卡格雷剂量)。

阿司匹林(乙酰水杨酸；ASA)：在第-7天至第1天时接受研究用药前的早晨之间，每天施用阿司匹林(ASA) 81 mg经口片剂(肠溶衣)。受试者可以在从研究出院后重新开始ASA。已经每天服用ASA的进入研究的受试者，必须愿意在第-7天至第1天之间记录每天81mg剂量，并且必须暂停进一步的ASA剂量直到从临床设施出院。

评估标准：

安全性评价：安全性和耐受性将通过监测和记录AE、临床实验室测试结果(血液学、凝血、血清化学和尿分析)、生命体征测量(SBP和DBP、口腔体温、呼吸频率[RR]和HR)、12导联ECG、免疫原性、生物标记物和身体检查发现进行评价。

免疫原性：在入住以及第1、7和28天(±2天)时，在血液/血清样品中筛选结合的抗药物抗体(ADA)的存在。

药效学评价：

PD数据和参数由PRU、LTA和PRI测定法生成：

VerifyNow®P2Y₁₂：

• 在每个评价点下的PRU

• 在每个评价点下，根据PRU的替卡格雷抗血小板活性的逆转百分比

• 最大PRU

• 到最大PRU的时间

• 在4小时内的最大PRU

• 到≥180 PRU的时间

• 到≥200 PRU的时间

• 到≥220 PRU的时间

• 在30分钟或4小时内，到PRU的60%、80%和90%逆转的时间

LTA：

• 在每个评价点下，记录关于最多4种血小板激动剂(20μM二磷酸腺苷[ADP]、5µMADP、1.6 mM花生四烯酸[AA]和15μM凝血酶受体活化肽[TRAP])的最大和最终聚集程度。

• 待在每个评价点下记录。

• 替卡格雷抗血小板聚集的逆转百分比

• 最大血小板聚集

• 到最大血小板聚集的时间

• 在4小时内的最大血小板聚集

• 到血小板聚集的60%、80%和90%逆转的时间

• 在30分钟或4小时内，达到血小板聚集的60%、80%和90%逆转的受试者数目和百分比。

通过ELISA的VASP：

• 在每个评价点下的PRI；

• 在每个评价点下的PRI的逆转百分比；

• 最大PRI；

• 到最大PRI的时间；

• 在4小时内的最大PRI；

• 到PRI的60%、80%和90%逆转的时间；

• 在30分钟或4小时内，达到PRI的60%、80%和90%逆转的受试者数目和百分比。

对于在研究药物之后24小时接受替卡格雷的第6个剂量的组，分别对于第1天和第2天计算PD参数。

药代动力学评价：

用于血浆的血液收集：在适当的时间点抽取血液样品，并且在每个采样时间点评价PB2452的血浆浓度。计算下述PK参数：

• 从时间零到最后可定量浓度的时间(AUC^0-τ)的血浆浓度相对于时间曲线下面积(AUC)

• 观察到的最大血浆浓度(C_max)

• 达到所观察到的最大血浆浓度的时间(T_max)

• 从时间零到给药后24小时的AUC (AUC_0-24)

• 从时间零到给药后48小时的AUC (AUC_0-48)

• 从时间零外推到无穷大的AUC (AUC_0-∞；如果数据允许的话)

• 终末消除半衰期(t_½；如果数据允许的话)

• 清除率(CL；如果数据允许的话)

在每个采样时间点，评价关于替卡格雷和代谢产物TAM的血浆PK浓度。计算下述PK参数：

• C_max

• T_max

• AUC_0-τ

• 从时间零到给药后12小时的AUC (AUC_0-12)

• AUC_0-24

• AUC_0-48

• AUC_0-∞；如果数据允许的话

• t_½；如果数据允许的话

对于在研究药物启动之后24小时接受替卡格雷的第6个剂量的组，对于血浆PB2452和替卡格雷/TAM均不计算AUC_0-48。可以分别对于第1天和第2天计算剩余的PK参数。

尿收集：经过以下这些间隔收集合并的尿样品，以评价PB2452、替卡格雷和TAM的尿浓度：在给药前(在第-2天时的第一个替卡格雷剂量之前的60分钟内)，以及0至6、6至12和12至24小时。在接受替卡格雷的第6个剂量的患者中，从第6个替卡格雷剂量开始，经过以下这些间隔收集合并的尿样品，以评价替卡格雷和TAM的尿浓度：0至6、6至12、12至24小时。

对于PK群体中的所有受试者，待计算的在尿中的PB2452、替卡格雷和TAM浓度的药代动力学参数为：

• 在给药后的24小时(Ae₂₄)以及给药后的48小时(Ae₄₈)，在尿中排泄的药物总量

• 当t1至t2的值为0至6、6至12、12至24和24至48小时时，从时间t1到t2 (Ae_t1-t2)小时，在尿中排泄的药物总量

• 在给药后的1至24小时(Fe₂₄)以及给药后的1至48小时(Fe₄₈)，在尿中排泄的级分

• 在给药后24小时的肾清除率(CLr)

对于在研究药物启动之后24小时接受替卡格雷的第6个剂量的组，不计算Fe₄₈和Ae_24-48。可以分别对于第1天和第2天计算其它尿PK参数。

实施例4 - 在健康受试者中，评估连同高剂量替卡格雷预治疗的PB2452的安全 性、耐受性、药代动力学和药效学的研究

每天两次用180 mg经口替卡格雷预治疗48小时的健康受试者组，以3:1的比率(PB2452:安慰剂)随机化至PB2452或安慰剂的剂量和方案。PB2452的剂量方案是经过10分钟输注12 g，随后为经过6小时输注12 g，随后为经过18小时输注12 g。如上所述确定血小板功能。

引入作为参考

所引用的所有出版物、专利和专利出版物整体引入本文作为参考用于所有目的。

本申请将下述出版物整体引入作为参考用于所有目的：US 2016/0130366。

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Claims (42)

1.一种逆转有需要的患者中的替卡格雷相关出血或所述出血的风险的方法，其包括向所述患者施用包含有效量的药物组合物的组合物，所述药物组合物包含与替卡格雷((1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙基硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟乙氧基)环戊-1,2-二醇)、或者其代谢产物或衍生物结合的抗体或其片段。

2.权利要求1的方法，其中所述抗体或其片段包含选自以下的互补决定区(CDR)组合：

a) SEQ ID NO:53 (VH CDR1)、SEQ ID NO:54 (VH CDR2)、SEQ ID NO:55 (VH CDR3)、SEQ ID NO:58 (VL CDR1)、SEQ ID NO:59 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:60 (VL CDR3)；

b) SEQ ID NO:63 (VH CDR1)、SEQ ID NO:64 (VH CDR2)、SEQ ID NO:65 (VH CDR3)、SEQ ID NO:68 (VL CDR1)、SEQ ID NO:69 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:70 (VL CDR3)；和

c) SEQ ID NO:73 (VH CDR1)、SEQ ID NO:74 (VH CDR2)、SEQ ID NO:75 (VH CDR3)、SEQ ID NO:78 (VL CDR1)、SEQ ID NO:79 (VL CDR2)、和SEQ ID NO:80 (VL CDR3)。

3. 权利要求1的方法，其中所述抗体或其片段包含选自SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列的组合。

4.权利要求1的方法，其中在抗替卡格雷抗体或其片段施用前，已向所述患者施用替卡格雷。

5. 权利要求1的方法，其中所述抗体或其片段是Fab，并且向所述患者施用约1 g至约48 g的剂量。

6. 权利要求5的方法，其中所述剂量为约9 g至约18 g的Fab。

7. 权利要求5的方法，其中向所述患者施用约1 g、约3 g、约9 g、约18 g、约24 g、约30g、约36 g或约48 g Fab的剂量。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述药物组合物静脉内施用于所述患者。

9.权利要求8的方法，其中所述药物组合物经过约15分钟至约36小时静脉内施用。

10.权利要求8或9的方法，其中所述药物组合物以两个或更多个段施用。

11.权利要求10的方法，其中第一段是推注。

12.权利要求10或11的方法，其中每个段的施用速率不同。

13.权利要求12的方法，其中对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。

14.权利要求10-13中任一项的方法，其中所述药物组合物以三个或更多个段施用，其中对于相继的输注段，每个段的施用速率不同。

15.权利要求5-14中任一项的方法，其中所述药物组合物按下述时间表施用：经过10分钟输注12g，随后为经过6小时输注12g，随后为经过18小时输注12g。

16. 权利要求1的方法，其中所述药物组合物包含约50 mg/mL至约200 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、约5 mM至约50 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、约100 mM至约300 mM蔗糖和约0.01% (w/v)至约1.0% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 5.5至6.5。

17. 权利要求16的方法，其中所述药物制剂包含100 mg/mL抗替卡格雷抗体或其片段、25 mM组氨酸/组氨酸盐酸盐缓冲液、290 mM蔗糖和0.05% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0。

18.权利要求16或17的方法，其中所述药物制剂在盐水中进行稀释用于施用。

19.权利要求1的方法，其中所述替卡格雷相关出血是大出血。

20.权利要求19的方法，其中所述大出血的特征在于危及生命，有可能导致临床上显著的残疾，需要手术来控制出血，需要用血液制品的治疗，或者是与临床上重要的血红蛋白下降相关的急性出血。

21.权利要求1的方法，其中所述患者需要紧急手术或干预。

22.权利要求21的方法，其中所述紧急手术或干预已知与显著的出血风险相关例如冠状动脉搭桥手术，如果不小心控制出血，则具有神经、眼科或关节置换手术的不良手术结果，与经历围手术期事件的风险相关；或者在如果术前停用双重抗血小板疗法，则处于血栓形成的高风险的患者中。

23.权利要求1的方法，其中所述患者处于发展急性冠状动脉综合征(ACS)的风险中、或已被诊断有急性冠状动脉综合征(ACS)。

24.权利要求1的方法，其中所述患者处于发展选自以下的疾病的风险中、或已被诊断有选自以下的疾病：心肌梗塞(MI)、不稳定型心绞痛、稳定型缺血性心脏病、镰状细胞疾病包括儿科患者、房颤、冠状动脉疾病、外周动脉疾病、缺血性中风、一个或多个冠状动脉支架、颈动脉支架、在颅内动脉瘤之后的支架以及为血液透析而创建的动静脉瘘。

25.权利要求1的方法，其中所述患者是儿科患者。

26.权利要求25的方法，其中所述儿科患者小于18岁。

27.权利要求26的方法，其中所述儿科患者小于2岁。

28.权利要求1的方法，其中所述患者是成年患者。

29.权利要求28的方法，其中所述成年患者为18至64岁，包括端点在内。

30.权利要求28的方法，其中所述患者超过65岁。

31.权利要求30的方法，其中所述患者为65至80岁，包括端点在内。

32.权利要求4的方法，其中已向所述患者施用阿司匹林(乙酰水杨酸)。

33.权利要求1-32中任一项的方法，其中所述抗体或其片段的施用逆转替卡格雷活性。

34.权利要求33的方法，其中所述抗体或其片段的施用恢复血小板功能。

35.权利要求34的方法，其中所述抗体或其片段的施用恢复血小板聚集。

36.权利要求35的方法，其中所述抗体或其片段的施用将血小板聚集恢复到基线的至少80%。

37.权利要求35或36的方法，其中所述抗体或其片段的施用在施用的1分钟至60分钟内恢复血小板聚集。

38.权利要求37的方法，其中所述抗体或其片段的施用在施用的5分钟内恢复血小板聚集。

39.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述抗体或其片段的施用提供了血小板聚集的持续恢复。

40.权利要求39的方法，其中血小板聚集的恢复在施用后持续至少12小时。

41.权利要求40的方法，其中血小板聚集的恢复在施用后持续至少16小时。

42.权利要求41的方法，其中血小板聚集的恢复在施用后持续至少24小时。

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