CN113186124B - 一株能够缓解由脂多糖引起的急性肠道损伤的普通拟杆菌 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种缓解脂多糖感染的普通拟杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明的普通拟杆菌CCFM1152能够降低脂多糖感染小鼠血液中促炎因子的含量，增加抑炎因子的浓度，上调Foxp3+调节性T细胞的数量，及稳定肠道菌群组成。所述的普通拟杆菌CCFM1152用于缓解脂多糖感染的药物组合物，具有广泛的应用前景。

Description

一株能够缓解由脂多糖引起的急性肠道损伤的普通拟杆菌

技术领域

本发明涉及一株能够缓解由脂多糖引起的急性肠道损伤的普通拟杆菌及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

拟杆菌属是人体肠道中优势细菌，并被认为在维持健康的肠道生态系统中发挥着重要作用。作为下一代益生菌的候选菌种，拟杆菌受到了人们的广泛关注。已有研究表明，某些拟杆菌种可以调节机体代谢，抑制病原菌定植，减轻肠道炎症和脂多糖诱导的全身性炎症等。例如，卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)ELH-B2和脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)HCK-B3被证明可以通过调节细胞因子的产生和恢复Treg/Th-17平衡来缓解脂多糖诱导的炎症，并且已经进行了专利申请(专利公开号分别为：CN108641980B和WO2019205505A1)。此外，另一项研究报道发现脆弱拟杆菌ZY-312在抗生素相关性腹泻(AAD)大鼠中可以帮助恢复肠道屏障功能，诱导肠上皮细胞再生。鉴于拟杆菌在缓解炎症上的独特优势，筛选更多益生型拟杆菌种是值得研究的课题。

其中，普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)是一种典型的与肠道炎症相关的拟杆菌。普通拟杆菌最初从人类粪便中分离出来，是健康人类结肠中最主要的拟杆菌种之一。一项研究表明，在克罗恩病患者肠道中，普通拟杆菌占肠道菌群的40％以上，但在健康人类肠道菌群中仅占6％。这可能与其粘附和侵袭CECs并诱导促炎细胞因子表达的能力有关。这一假设已在动物实验和人体实验中得到证实。研究发现，分离自结肠炎患者或者豚鼠的普通拟杆菌可能导致HLA-B27转基因大鼠结肠炎和胃炎。其他对人类的研究也报道了类似的结果，普通拟杆菌能够入侵CECs，诱导促炎细胞因子的表达，这一结果可能与溃疡性结肠炎患者的结肠组织粘连有关。此外，Steimle等人的一项研究表明，摄入普通拟杆菌提取的多糖可以通过肠固有层CD11c+细胞中的MD-2/TLR4受体复合物轴诱导一种特殊的脂多糖耐受，从而帮助重建肠道免疫稳态。至今为止，关于普通拟杆菌的研究和专利主要集中在缓解结肠炎方面。例如，最近的一篇专利发现了一株对动物无害，且具有改善调节肠道炎症的显著功效的普通拟杆菌(申请公布号：CN111269852A)。然而，目前还没有关于普通拟杆菌缓解由脂多糖引起的肠道损伤的研究和专利。

发明内容

[技术问题]

目前关于普通拟杆菌缓解由脂多糖感染引起的肠道损伤研究及应用仍处于空白状态，需筛选一株能够缓解由脂多糖感染引起的肠道损伤的普通拟杆菌(Bacteroidesvulgatus)。

[技术方案]

本发明总结现有技术的基础尝试，通过大量实验研究，筛选出了一种具有缓解脂多糖感染引起的急性肠道损伤的普通拟杆菌，并证明其在动物模型中可调节因脂多糖激活肠道免疫，缓解炎症，进而缓解脂多糖感染。进一步考察了其在药物组合物中的应用。

本发明的第一个目的是提供一种普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)，已于2020年11日9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:61279，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。所述的普通拟杆菌CCFM1152具有下列性质：

1)能够调节脂多糖感染小鼠肠系膜淋巴结中Foxp3+调节性T细胞的数量；

2)能够保护由于脂多糖引起的结肠损伤并显著降低病理评分；

3)能够降低脂多糖感染小鼠结肠组织中促炎因子的含量，增加抑炎因子的浓度。

所述普通拟杆菌CCFM1152的菌体特征：革兰氏染色阴性杆状细菌，菌体约0.9-1.2μm宽，3-8μm长，无芽孢形成。

所述普通拟杆菌CCFM1152的菌落特征：在培养基上形成明显地菌落，直径在0.3-2mm之间，正面形态圆形，侧面形态呈凸起状，边缘整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑。

所述普通拟杆菌CCFM1152的生长特性：该菌株为严格厌氧菌，对氧气敏感，在温度37℃生长最佳，最适初始生长pH为7.0。

本发明的第二个目的是提供一种菌剂，含有所述的普通拟杆菌CCFM1152。

在本发明的一种实施方式中，所述菌剂中普通拟杆菌CCFM1152活菌数不低于1×10⁶CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

在本发明的一种实施方式中，所述菌剂是将含有所述普通拟杆菌CCFM1152的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备或其他工艺制备所得到的粉剂。

本发明的第三个目的是提供上述普通拟杆菌CCFM1152或上述菌剂在制备用于缓解脂多糖感染的药物组合物方面的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述的药物组合物是由上述普通拟杆菌CCFM1152或上述菌剂与在药学上可接受的载体组成的。

在本发明的一种实施方式中，在所述的药物组合物中所述普通拟杆菌CCFM1152是所述药物组合物重量的15-35％，或20-30％。

在本发明的一种实施方式中，在药学上可接受的载体是一种或多种选自药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂及矫味剂的载体。

在本发明的一种实施方式中，所述的药物组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。

在本发明的一种实施方式中，所述的填充剂应该理解为用于增加片剂重量和体积而便于压片的辅料稀释剂，或以吸收原料中多余液体成分的辅料吸收剂。所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙或微晶纤维素。

在本发明的一种实施方式中，所述粘合剂应该理解为原料药物本身无粘性或粘性不足，需加入粘性物质以便于制粒。所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮。

在本发明的一种实施方式中，所述润湿剂应该理解为原料药物本身无粘性，但可润湿其药物原辅料并诱发其粘性而制成颗粒的液体。所述润湿剂选自水、乙醇、淀粉或糖浆。

在本发明的一种实施方式中，所述崩解剂应该理解为一种能够加入片剂中而促进其片剂在胃肠液中快速崩解成细小粒子的辅料。所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠。

在本发明的一种实施方式中，所述润滑剂应该理解为一种有利于提高片剂在制粒过程中的流动性，有利于片剂脱模的化学物质。所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

在本发明的一种实施方式中，所述矫味剂应该理解为在药品中用以改善或屏蔽药物不良气味和味道的药用辅料。所述的矫味剂选自如单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆或樱桃糖浆的甜味剂；柠檬、茴香或薄荷油的芳香剂；海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素或羧甲基纤维素钠的胶浆剂；柠檬酸、酒石酸或碳酸氢钠混合物的泡腾剂。

本发明的第四个目的是提供一种普通拟杆菌冻存剂，含有活菌数不少于10¹⁰CFU/mL的普通拟杆菌CCFM1152。

在本发明的一种实施方式中，所述冻存剂是将上述普通拟杆菌CCFM1152接种至培养基中，培养至16-18h，用pH 7.0～7.2的磷酸盐缓冲液清洗2次后，加入保护剂，于-80℃保存备用。

在本发明的一种实施方式中，所述保护剂含有半胱氨酸盐酸盐1g/L，甘油200g/L。

本发明的第五个目的是提供所述普通拟杆菌CCFM1152的培养方法，所述方法为将所述脆普通拟杆菌CCFM1152接种至培养基中，于37℃厌氧培养。

在本发明的一种实施方式中，培养16-18h菌株达稳定期。

在本发明的一种实施方式中，应用BHI培养基进行培养。

在本发明的一种实施方式中，所述BHI培养基中还加入半胱氨酸盐酸盐1g/L，氯化血红素0.01g/L，维生素K10.002g/L。

有益效果：

本发明的普通拟杆菌CCFM1152可显著将因脂多糖感染而造成的小鼠结肠组织病理损伤、炎症因子的含量以及肠系膜淋巴结中Foxp3⁺调节性T细胞的数量恢复至接近正常小鼠水平。所述的普通拟杆菌CCFM1152可用于制备能够缓解脂多糖感染的药物组合物，具有广泛的应用前景。

生物材料保藏

一种普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)CCFM1152，分类学命名为Bacteroidesvulgatus，已于2020年11日9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61279，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。

附图说明

图1为不同拟杆菌普通拟杆菌CCFM1152对脂多糖感染小鼠肠系膜淋巴结内调节性T细胞含量的调节作用；

*表示P<0.05；**表示P<0.01；***表示P<0.001；****表示P<0.0001；N.S.表示没有显著性差异。

图2为小鼠灌胃普通拟杆菌CCFM1152后小鼠肠道病理状态。

图3为普通拟杆菌CCFM1152对脂多糖感染小鼠结肠内免疫因子水平的调节作用。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。

下述实施例中涉及的脑心浸液购自青岛海博生物技术有限公司。

下述实施例中涉及的培养基如下：

拟杆菌特异性筛选培养基：43.1g布氏培养基粉末均匀溶于1L水后，加入0.01‰的氯化血红素及0.01‰的维生素K1，121℃灭菌15min。待降温至50℃时，加0.1‰的卡那霉素、0.0075‰的万古霉素及5％的绵羊血后，混匀倒入无菌的培养皿中。

BHI液体培养基：脑心浸液中加入半胱氨酸盐酸盐1g/L、氯化血红素0.01g/L和维生素K10.002g/L，pH为7.0。

BHI固体培养基：脑心浸液中加入半胱氨酸盐酸盐1g/L、氯化血红素0.01g/L和维生素K10.002g/L、琼脂20g/L，pH为7.0。

下述实施例中涉及的普通拟杆菌菌悬液的制备方法如下：

将普通拟杆菌划线于BHI固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到普通拟杆菌菌体；将普通拟杆菌菌体经生理盐水洗涤后重悬于浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)中至菌浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液，将菌悬液于-80℃下保存待用。

病理评分方法：见文章Synbiotic supplementation with prebiotic greenbanana resistant starch and probiotic Bacillus coagulans spores amelioratesgut inflammation in mouse model of inflammatorybowel diseases(https://doi.org/10.1007/s00394-020-02200-9)。

实施例1：普通拟杆菌CCFM1152的分离筛选

1、样品采集

采集天津市河东区蝶桥公寓一位50岁中年男子粪便样本，样本置于装有30％甘油的大便管中，保存于装有冰袋的保温盒中，带回实验室后迅速置于-80℃冰箱待分离筛选。

2、菌株的分离纯化

(1)稀释涂布：取0.5g左右的保存于30％甘油的内容物在无菌环境下加入装有4.5mL生理盐水的10mL离心管中，得到10^-1稀释液，重复上述稀释步骤，依次得到10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6稀释液；

(2)涂布培养：分别吸取100μL步骤(1)中10^-4、10^-5、10^-6三个梯度稀释液于拟杆菌特异性筛选培养基上，用涂布棒涂布均匀，至37℃厌氧条件下培养48h，得到稀释涂布平板；

(3)一级纯化培养：取步骤(2)中菌落数在30～300区间的稀释涂布平板，每个样本随机挑选10个乳白色或白色，表面光滑，边缘整齐，大小不一的单菌落在BHI固体培养基上划线，放至37℃厌氧条件下培养48h，得到单菌落；

(4)二级纯化培养：取步骤(3)划线平板上单菌落分别接种于BHI液体培养基中，至37℃厌氧条件下培养20h，得到二级纯化培养液。

3、菌种保藏与鉴定

(1)菌种保藏：

将步骤2(4)获得的二级纯化培养液混匀，分别取菌体至2mL干净的菌种保藏管，平行5份，其中4份加入750μL菌液和750μL 60％甘油重悬，静止30分钟后放入-80℃冰箱；1份加入1mL菌液用于菌种鉴定，6000r/min离心3min，弃上清得菌体。

(2)菌种鉴定：

步骤3(1)用于菌种鉴定的保藏管中加入1mL无菌水吹打洗菌体后，10000r/min离心1min，弃上清得菌体，加入500μL无菌水重悬，作为菌液模板；

其中，16S rDNAPCR的体系和引物分别见表1和表2；

16S rDNAPCR的条件：第一步：94℃，5min第二步：94℃，30s第三步：55℃，30s，第四步：72℃，2min，第五步：72℃，10min，第二到四步进行30个循环。

表1细菌菌种鉴定25μL 16S rDNAPCR反应体系

表2引物名称

PCR产物经核酸电泳分析确认后，送华大基因测序；将测序返回的27F和1492R拼接序列上传到NCBI的BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)进行种属确认；比对结果发现编号为CCFM1152菌株为普通拟杆菌株(Bacteroides vulgatus)，其16S rDNA扩增序列如SEQ ID NO.1所示。

实施例2：普通拟杆菌CCFM1152对脂多糖感染小鼠肠系膜淋巴结中调节性T细胞含量的调节

具体步骤如下：

1、普通拟杆菌CCFM1152灌胃液的制备

将实施例1步骤2获得的普通拟杆菌CCFM1152划线于BHI固体培养基中，37℃厌氧条件下培养48h，得到单菌落；挑取BHI固体培养基上的单菌落接种于BHI液体培养基中，37℃厌氧条件下富集培养18～20h进行活化，连续活化两代，得到活化培养物；将活化培养物按2％～5％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，37℃厌氧条件下富集培养18～20h得到菌液，经8000g离心10min得到菌泥，用无菌生理盐水洗涤3次后收集菌泥，将收集得到的上述菌泥用无菌30％甘油溶液重悬得到普通拟杆菌CCFM1152悬浮液，用作工作发酵剂，放置于-20％保藏。实验之前取普通拟杆菌CCFM1152悬浮液离心，用0.85％无菌生理盐水(不含半胱氨酸盐酸盐)洗涤重悬，得到普通拟杆菌CCFM1152灌胃液(1×10¹⁰CFU/mL)。参照同样的方法获得同批次筛选到的普通拟杆菌CCFM1153、FSDLZ51K1和FSDTA11B14灌胃液。

2、实验动物

SPF级8周龄雄性BALB/C小鼠，购于上海斯莱克有限公司；饲养于25±2℃、相对湿50±5％、12h光照12h黑暗的标准化实验室中，适应性喂养一周后开始实验。

3、实验方法

取6-8周龄健康雌性C57小鼠72只，随机分为6组，每组12只，6组分别为：造模组、空白组和分别灌胃普通拟杆菌CCFM1152、CCFM1153、FSDLZ51K1和FSDTA11B14干预组。

实验过程为：造模组、空白组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次无菌生理盐水(不含半胱氨酸盐酸盐)，CCFM1152、CCFM1153、FSDLZ51K1和FSDTA11B14干预组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次菌悬液，共灌胃5天；实验第6天，按照200μL的剂量给造模组和干预组小鼠腹腔注射由生理盐水稀释的脂多糖溶液(10μg/200μL)(空白组不做处理)，注射24h后，处死小鼠并取它们的肠系膜淋巴结。采用小鼠调节性T细胞染色试剂盒(eBioscience公司产品)标记CD4、CD25及表面分子Foxp3⁺后，通过流式细胞仪(FACSCalibur，BD公司)检测调节性T细胞的含量变化。

如图1所示，与空白组相比，脂多糖刺激后的小鼠Treg细胞含量显著增加。而普通拟杆菌CCFM1152、CCFM1153和FSDTA11B14的干预可以显著降低由于脂多糖刺激引起的Treg细胞数量上调，较造模组Treg细胞含量降低约1.5～2倍。

实施例3：普通拟杆菌CCFM1152对炎症小鼠肠道病理状态的影响

具体步骤如下：

具体实施方法同实施例2，处死小鼠并取部分它们的结肠组织置于4％多聚甲醛溶液中用于组织切片观察。采用苏木精-伊红染色法对脂多糖刺激引起的小鼠结肠组织损伤以及普通拟杆菌干预对于结肠组织的保护作用进行评价。

实验结果如图2所示，造模组小鼠结肠组织切片存在炎症浸润区域及杯状细胞凋亡现象；普通拟杆菌CCFM1152干预后，炎症小鼠肠道肠道状态显著改善，几乎无炎症浸润与粘膜出血状况(图2A)，并且显著降低小鼠结肠组织的病理评分，由图2B可以看出普通拟杆菌CCFM1152干预组的病理评分约是造模组的0.5倍。而其他的菌株对于结肠组织并没有显著的保护作用。可见，普通拟杆菌CCFM1152能够缓解由于脂多糖引起的急性肠道损伤。

实施例4：普通拟杆菌CCFM1152对脂多糖感染小鼠结肠细胞因子含量的影响

具体实施方法同实施例2，处死小鼠并取它们的结肠组织并迅速保存在液氮中提取结肠组织的RNA并进行反转录，对于结肠组织的细胞因子表达含量进行测定。

实验结果如附图3所示，脂多糖感染显著提高了促炎因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量以及降低抑炎因子白细胞介素10(IL-10)的含量。而普通拟杆菌CCFM1152干预后可以有效调节由于脂多糖刺激引起的细胞因子含量变化，主要表现在促炎因子IL-6和TNF-α含量的下降以及抑炎因子IL-10含量的增加，恢复到与空白组相似的表达水平。

实施例5：制备含有本发明普通拟杆菌CCFM1152的胶囊制品

将本发明的普通拟杆菌CCFM1152在BHI培养基中于37℃厌氧培养24小时，在4℃于5000rpm条件下离心15min，用无菌的磷酸盐缓冲液(pH 7.2)冲洗1-2次，使用保护剂重悬菌体使菌体终浓度达到10¹⁰CFU/mL。将菌悬液加入浓度为3％的海藻酸钠溶液中，使菌体浓度不小于1×10⁶CFU/mL充分搅拌使得普通拟杆菌CCFM1152的细胞均匀分散于海藻酸钠溶液中得到混合液，然后将此混合液挤压到浓度为2％的氯化钙溶液中形成胶粒，待形成的胶粒静止固化30min后，过滤收集胶粒，将收集得到的胶粒进行冷冻干燥48小时，得到含普通拟杆CCFM1152粉剂，将该粉剂装入市售的药用胶囊，即得胶囊制品。

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

实施例6：利用本发明普通拟杆菌CCFM1152制备片剂

分别称取采用冷冻干燥方法制备的普通拟杆菌CCFM1152菌粉制剂25.7重量份、粉55.0重量份、纤维素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉钠12.0重量份、滑石粉0.8重量份、蔗糖1.0重量份与水1.0重量份，混合，采用常规方法制成湿颗粒，然后使用中南制药机械厂生产的压片机进行压片，使用青州市益康中药机械有限公司生产的小型药物干燥机进行干燥，再包装得到本发明的片剂。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 江南大学

<120> 一株能够缓解由脂多糖引起的急性肠道损伤的普通拟杆菌

<130> BAA210323A

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1355

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gttacgcact tcaggtaccc ccggctccca tggcttgacg ggcggtgtgt acaaggcccg 60

ggaacgtatt caccgcgccg tggctgatgc gcgattacta gcgaatccag cttcgtggag 120

tcgggttgca gactccagtc cgaactgaga gaggtttttg ggattggcat ccactcgcgt 180

ggtagcggcc ctctgtaccc cccattgtaa cacgtgtgta gccccggacg taagggccgt 240

gctgatttga cgtcatcccc accttcctca catcttacga tggcagtctt gtcagagtcc 300

tcagcggaac ctgttagtaa ctgacaacaa gggttgcgct cgttatggca cttaagccga 360

cacctcacgg cacgagctga cgacaaccat gcagcacctt cacagatgcc ttgcggctta 420

cggctttcac cgtaattcat ctgcaattta agcccgggta aggttcctcg cgtatcatcg 480

aattaaacca catgttcctc cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcaccg 540

ttgccggcgt actccccagg tggaatactt aacgctttcg cttggccgct tgcagtatat 600

cgcaaacagc gagtattcat cgtttaccgt gtggactacc agggtatcta atcctgtttg 660

atacccacac tttcgagcct caatgtcagt tgcagcttag caggctgcct tcgcaatcgg 720

agttcttcgt gatatctaag catttcaccg ctacaccacg aattccgcct gcctcaactg 780

cactcaagat atccagtatc aactgcaatt ttacggttga gccgcaaact ttcacaactg 840

acttaaacat ccatctacgc tccctttaaa cccaataaat ccggataacg ctcggatcct 900

ccgtattacc gcggctgctg gcacggagtt agccgatcct tattcataaa gtacatgcaa 960

acgggtatgc atacccgact ttattccttt ataaaagaag tttacaaccc atagggcagt 1020

catccttcac gctacttggc tggttcaggc ctgcgcccat tgaccaatat tcctcactgc 1080

tgcctcccgt aggagtttgg accgtgtctc agttccaatg tgggggacct tcctctcaga 1140

acccctatcc atcgaagact aggtgggccg ttaccccgcc tactatctaa tggaacgcat 1200

ccccatcgtc taccggaata cctttaatca tgtgaacatg tggactcatg atgccatctt 1260

gtattaatct tcctttcaga aggctgtcca agagtagacg gcaggttgga tacgtgttac 1320

tcacccgtgc gccggtcgcc atcggcctta gcaag 1355

Claims (10)

1.一种普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)CCFM1152，已于2020年11日9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No:61279。

2.权利要求1所述的普通拟杆菌CCFM1152在制备用于缓解脂多糖感染引起的急性肠道损伤的药物组合物方面的应用。

3.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述普通拟杆菌CCFM1152；所述菌剂中普通拟杆菌CCFM1152活菌数不低于1×10⁶ CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

4.一种药物组合物，其特征在于，由权利要求1所述的普通拟杆菌CCFM1152或权利要求3所述的菌剂与在药学上可接受的载体组成。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，权利要求1所述的普通拟杆菌CCFM1152或权利要求3所述的菌剂占药物组合物重量的15-35％。

6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于，所述在药学上可接受的载体是一种或多种选自药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂及矫味剂。

7.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。

8.一种冻存剂，其特征在于，含有权利要求1所述的普通拟杆菌CCFM1152；所述冻存剂中，权利要求1所述普通拟杆菌CCFM1152的活菌数为10¹⁰CFU/ml。

9.根据权利要求8所述的冻存剂，其特征在于，还含有保护剂。

10.根据权利要求9所述的冻存剂，其特征在于，所述保护剂含有半胱氨酸盐酸盐和甘油。

Images