CN111635874A - 一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的脆弱拟杆菌 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的脆弱拟杆菌，属于微生物技术领域。本发明筛选出了一株脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)CCFM1123，此脆弱拟杆菌CCFM1123具有缓解炎症的作用，具体体现在：显著提高炎症小鼠肠道中乳酸杆菌属和阿克曼氏菌属的相对丰度；显著降低炎症小鼠血清中促炎因子TNF‑α和IL‑6的含量；显著减少炎症小鼠因炎症反应而引起的肠道炎性细胞浸润和粘膜出血；显著促进炎症小鼠肠道中短链脂肪酸的产生，因此，脆弱拟杆菌CCFM1123在制备预防和/或治疗炎症的产品(如食品或药品等)中，具有巨大的应用前景。

Description

一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的脆弱拟杆菌
技术领域
本发明涉及一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的脆弱拟杆菌，属于微生物技术领域。
背景技术
炎症是临床常见的一个病理过程，可以生于机体各部位的组织和各器官，例如毛囊炎、扁桃体炎、肺炎、肝炎、肾炎等。急性炎症平时具有红、肿、热、痛和功能障碍等变化，同随时常伴有炎症因子瀑布效应、肠道微生物失衡、发热、白细胞增多等全身反应。
其中，炎症因子瀑布效应表现为多种细胞因子在短时间内大量分泌，从而造成人体组织和器官的严重损伤。细胞因子瀑布效应一旦出现，会带来肺水肿、组织器官坏死、ARDS等多种并发症，是高致死因素。
肠道微生物失衡可导致肠道内有益菌减少，有害菌大量繁殖并产生致病毒素，肠道内环境稳态与肠道屏障被破坏，肠道渗透性变高，肠道内硫化氢、氨、酚、靛基质等有毒物质增多并被吸收入血液后，就会对心、脑、肝、肾等重要脏器造成危害，进而引发多种疾病。
发热主要由病原微生物感染引起。病原微生物及其产物均可做为发热激活物，作用于产EP细胞，产生EP，后者再作用于体温调节中枢，使其调定点上移，从而引起发热。
白细胞增多发生在急性炎症，尤其是细菌感染所致急性炎症时，末梢血白细胞计数可明显升高。在严重感染时，外周血液中常常出现幼稚的中性粒细胞比例增加的现象，即临床上所称的“核左移”。这反映了病人对感染的抵抗力较强和感染程度较重。在某些炎症性疾病过程中，例如伤寒、病毒性疾病(流感、病毒性肝炎和传染性非典型肺炎)、立克次体感染及某些自身免疫性疾病(如SLE)等，血中白细胞往往不增加，有时反而减少。支气管哮喘和寄生虫感染时，血中嗜酸性粒细胞计数增高。
目前，临床上主要通过抗生素、肾上皮质激素、非甾体类抗炎药等药物治疗炎症。这些药物能够抑制和清除炎症介质和细胞因子，从而达到治疗炎症的目的。但是，这些药物通常会引起患者呕吐、腹泻和过敏性反应等副作用。
因此，仍需找到一种药物，此药物可有效预防和/或治疗炎症，并且，安全无副作用。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一株能够预防和/或治疗炎症，并且，安全无副作用的脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)。
[技术方案]
为解决本发明的技术问题，本发明提供了一株脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)CCFM1123，所述脆弱拟杆菌CCFM1123已于2020年05月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61017，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述脆弱拟杆菌CCFM1123是从来源于中国广西地区的4岁幼儿粪便样本中分离得到的，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将测序得到的序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示菌株为脆弱拟杆菌，命名为脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)CCFM1123。
所述脆弱拟杆菌CCFM1123的菌体特征为：革兰氏染色阴性杆状细菌，菌体约0.9～1.2μm宽，3～8μm长，无芽孢形成。
所述脆弱拟杆菌CCFM1123的菌落特征：直径在0.3～2mm之间，正面形态圆形，侧面形态呈凸起状，边缘整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑。
所述脆弱拟杆菌CCFM1123的生长特性：严格厌氧，对氧气敏感，在温度30～37℃生长最佳，最高和最低初始生长pH为8.0和5.0，最适初始生长pH为7.0。
本发明还提供了上述脆弱拟杆菌CCFM1123在制备预防和/或治疗炎症、预防和/或治疗肥胖、预防和/或治疗免疫性疾病或预防和/或治疗病原菌感染的药品中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，上述脆弱拟杆菌CCFM1123的活菌数为不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g。
本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品或药品。
本发明的一种实施方式中，所述药品含有上述脆弱拟杆菌CCFM1123、药物载体和/或药用辅料。
本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂和/或矫味剂。
在本发明的一种实施方式中，所述填充剂为淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙和/或微晶纤维素。
在本发明的一种实施方式中，所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明的一种实施方式中，所述润湿剂为水、乙醇、淀粉和/或糖浆。
在本发明的一种实施方式中，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠。
在本发明的一种实施方式中，所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶和/或聚乙二醇。
在本发明的一种实施方式中，所述矫味剂为单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸和/或碳酸氢钠。
本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明的一种实施方式中，所述食品为保健食品、饮料或零食。
本发明还提供了一种用于预防和/或治疗炎症的产品，所述产品含有上述脆弱拟杆菌CCFM1123。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，上述脆弱拟杆菌CCFM1123的活菌数为不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品或药品。
本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品或药品。
本发明的一种实施方式中，所述药品含有上述脆弱拟杆菌CCFM1123、药物载体和/或药用辅料。
本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂和/或矫味剂。
在本发明的一种实施方式中，所述填充剂为淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙和/或微晶纤维素。
在本发明的一种实施方式中，所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明的一种实施方式中，所述润湿剂为水、乙醇、淀粉和/或糖浆。
在本发明的一种实施方式中，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠。
在本发明的一种实施方式中，所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶和/或聚乙二醇。
在本发明的一种实施方式中，所述矫味剂为单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸和/或碳酸氢钠。
本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明的一种实施方式中，所述食品为保健食品、饮料或零食。
[有益效果]
1、本发明筛选出了一株脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)CCFM1123，此脆弱拟杆菌CCFM1123具有缓解炎症的作用，具体体现在：
(1)显著提高炎症小鼠肠道中乳酸杆菌属和阿克曼氏菌属的相对丰度；
(2)显著降低炎症小鼠血清中促炎因子TNF-α和IL-6的含量；
(3)显著减少炎症小鼠因炎症反应而引起的肠道炎性细胞浸润和粘膜出血；
(4)显著促进炎症小鼠肠道中短链脂肪酸的产生，
因此，脆弱拟杆菌CCFM1123在制备预防和/或治疗炎症的产品(如食品或药品等)中，具有巨大的应用前景。
2、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)是益生菌的一种，可见，本发明的脆弱拟杆菌CCFM1123以及有效成分为脆弱拟杆菌CCFM1123的产品长期使用不会导致患者产生副作用，安全性较高。
生物材料保藏
一株脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)CCFM1123，分类学命名为Bacteroidesfragilis，已于2020年05月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.61017，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠肠道中乳酸杆菌属相对丰度的影响。
图2：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠肠道中阿克曼氏菌属相对丰度的影响。
图3：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠血清中促炎因子TNF-α含量的影响。
图4：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠血清中促炎因子IL-6含量的影响。
图5：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠肠道病理状态的影响。
图6：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中乙酸含量的影响。
图7：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中丙酸含量的影响。
图8：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中戊酸含量的影响。
图9：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中异戊酸含量的影响。
图10：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中丁酸含量的影响。
图11：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中异丁酸含量的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的检测TNF-α(货号：DY410-05)和IL-6(货号：DY406-05)的ELISA试剂盒购自Sigma-Aldrich公司；下述实施例中涉及的脑心浸液购自青岛海博生物技术有限公司；下述实施例中涉及的Fast DNA Spin Kit for Feces试剂盒购自MPBiomedicals公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
BHI液体培养基：脑心浸液中加入半胱氨酸盐酸盐1g/L、氯化血红素0.01g/L、维生素K1 0.002g/L，pH为7.0。
BHI固体培养基：脑心浸液中加入半胱氨酸盐酸盐1g/L、氯化血红素0.01g/L、维生素K1 0.002g/L、琼脂20g/L，pH为7.0。
下述实施例中涉及的脆弱拟杆菌菌悬液的制备方法如下：
将脆弱拟杆菌划线于BHI固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到脆弱拟杆菌菌体；将脆弱拟杆菌菌体经生理盐水洗涤后重悬于浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)中至菌浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液，将菌悬液于-80℃下保存待用。
实施例1：脆弱拟杆菌的获取
具体步骤如下：
以来源于中国广西地区的4岁幼儿粪便为样本，吸取0.5mL样本添加至5mL的BHI液体培养基中，37℃培养18～24h，进行富集，得到富集后的样品；吸取0.5mL富集后的样品添加至4.5mL无菌生理盐水中获得10-1稀释液，然后吸取0.5mL10-1稀释液于4.5mL生理盐水中，得到10-2稀释液，按此操作，依次得到10-3，10-4，10-5，10-6稀释液；吸取100μL梯度稀释液涂布于BHI固体培养基上，10-4，10-5，10-6每个梯度1个板，37℃培养48h，得到菌落；根据菌落形状、大小、边缘、透明度等选择BHI固体培养基上具有脆弱拟杆菌典型特征的菌落，用接种环挑取菌落在BHI固体培养基上进行划线，37℃培养48h，得到纯化的单菌落；挑取纯化的单菌落分别接种至5mL的BHI液体培养基中，37℃培养18～24h，得到菌液；将各菌液所对应的各菌株编号后，参照教科书《微生物生物技术》中所记载的步骤进行菌株鉴定、革兰氏染色、生理生化等实验，选取具有脆弱拟杆菌典型特征的菌株，经实验共获得三株菌株，三株菌株分别命名为CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5；
其中，菌株鉴定过程如下：
提取CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5的基因组，将CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5的16SrDNA进行扩增和测序(由上海生工生物工程股份有限公司完成)，将测序分析得到的CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5的16SrDNA序列(CCFM1123的16S rDNA序列如SEQID NO.1所示)在GenBank中进行比对，结果显示五株菌株均为脆弱拟杆菌，分别命名为脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)CCFM1123、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)FAHBZ17K2、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)FFJLY17K5；
其中，脆弱拟杆菌CCFM1123的菌体特征为：革兰氏染色阴性杆状细菌，菌体约0.9～1.2μm宽，3～8μm长，无芽孢形成。
脆弱拟杆菌CCFM1123的菌落特征：直径在0.3～2mm之间，正面形态圆形，侧面形态呈凸起状，边缘整齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑。
脆弱拟杆菌CCFM1123的生长特性：严格厌氧，对氧气敏感，在温度30-37℃生长最佳，最高和最低初始生长pH为8.0和5.0，最适初始生长pH为7.0。
脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)CCFM1123的生理生化特征为：耐受胆汁、耐受胃酸。
实施例2：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠肠道菌群组成的影响
具体步骤如下：
取6-8周龄健康雌性C57小鼠48只，随机分为4组，每组12只，4组分别为：造模空白组和分别灌胃脆弱拟杆菌CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5菌悬液的CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组。
实验过程为：造模空白组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)，CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次菌悬液，共灌胃7天；实验第8天，按照200μL的剂量给造模空白组和CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠腹腔注射由生理盐水稀释的内毒素溶液(10μg/200μL)，注射2h后，取血并处死每组一半的小鼠(6只)，注射24h后，收集每组另一半小鼠的粪便，处死每组另一半的小鼠(6只)，并取每组另一半的小鼠的结肠组织进行病理切片制作。
采用Fast DNA Spin Kit for Feces试剂盒提取每组小鼠粪便细菌宏基因组后，对16s V3-V4区序列进行PCR扩增后，通过二代测序仪粪便样品中肠道菌群的组成差异，各组小鼠肠道内主要菌群的相对丰度(大于1％)见表1和图1～2。
如表1和图1～2所示，乳酸杆菌属与阿克曼菌属均被认为是与免疫调节相关的有益菌，造模空白组小鼠肠道中乳酸杆菌属的丰度为1.58％，阿克曼菌属的丰度为6.59％，经过脆弱拟杆菌CCFM1123干预的炎症小鼠肠道中乳酸杆菌属的丰度7.42％，阿克曼菌属的丰度为19.63％。
可见，明脆弱拟杆菌CCFM1123能够改善肠道菌群结构，增加肠道中有益菌乳酸杆菌属和阿克曼菌属的相对丰度。
表1各组小鼠肠道内主要菌群的相对丰度(％)
Figure BDA0002527054410000071
实施例3：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠血清中促炎因子TNF-α和IL-6含量的影响
具体步骤如下：
取6-8周龄健康雌性C57小鼠48只，随机分为4组，每组12只，4组分别为：造模空白组和分别灌胃脆弱拟杆菌CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5菌悬液的CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组。
实验过程为：造模空白组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)，CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次菌悬液，共灌胃7天；实验第8天，按照200μL的剂量给造模空白组和CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠腹腔注射由生理盐水稀释的内毒素溶液(10μg/200μL)，注射2h后，取血并处死每组一半的小鼠(6只)，注射24h后，收集每组另一半小鼠的粪便，处死每组另一半的小鼠(6只)，并取每组另一半的小鼠的结肠组织进行病理切片制作。
通过ELISA试剂盒测定每组小鼠血清中促炎因子TNF-α和IL-6的含量，检测结果见图3～4。
如图3～4所示，内毒素感染2h后，小鼠血清中促炎因子TNF-α含量从1.37pg/mL上升至467.17pg/mL，促炎因子IL-6的含量从1517.17pg/mL上升至127321.60pg/mL；脆弱拟杆菌CCFM1123的干预可显著性降低炎症小鼠血液中促炎因子TNF-α和IL-6的含量，将炎症小鼠血液中促炎因子TNF-α和IL-6的含量分别降低至258.97pg/mL(p<0.01)和77448.97pg/mL(p<0.01)。
可见，脆弱拟杆菌CCFM1123能够缓解系统性炎症。
实施例4：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠肠道病理状态的影响
具体步骤如下：
取6-8周龄健康雌性C57小鼠48只，随机分为4组，每组12只，4组分别为：造模空白组和分别灌胃脆弱拟杆菌CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5菌悬液的CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组。
实验过程为：造模空白组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)，CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次菌悬液，共灌胃7天；实验第8天，按照200μL的剂量给造模空白组和CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠腹腔注射由生理盐水稀释的内毒素溶液(10μg/200μL)，注射2h后，取血并处死每组一半的小鼠(6只)，注射24h后，收集每组另一半小鼠的粪便，处死每组另一半的小鼠(6只)，并取每组另一半的小鼠的结肠组织进行病理切片制作。
对每组小鼠的结肠组织切片进行苏木精-伊红染色后进行组织病理学分析，检测结果见图5。
如图5所示，造模空白组小鼠结肠组织切片存在炎症浸润区域及粘膜出血现象；经脆弱拟杆菌CCFM1123干预后，炎症小鼠肠道肠道状态显著改善，几乎无炎症浸润与粘膜出血状况。
可见，脆弱拟杆菌CCFM1123能够缓解系统性炎症。
实施例5：脆弱拟杆菌CCFM1123对炎症小鼠粪便中短链脂肪酸含量的影响
具体步骤如下：
取6-8周龄健康雌性C57小鼠48只，随机分为4组，每组12只，4组分别为：造模空白组和分别灌胃脆弱拟杆菌CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5菌悬液的CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组。
实验过程为：造模空白组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次浓度为200g/L的甘油溶液(含1g/L半胱氨酸盐酸盐)，CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠按照0.1mL的剂量每天灌胃一次菌悬液，共灌胃7天；实验第8天，按照200μL的剂量给造模空白组和CCFM1123、FAHBZ17K2、FFJLY17K5干预组小鼠腹腔注射由生理盐水稀释的内毒素溶液(10μg/200μL)，注射2h后，取血并处死每组一半的小鼠(6只)，注射24h后，收集每组另一半小鼠的粪便，处死每组另一半的小鼠(6只)，并取每组另一半的小鼠的结肠组织进行病理切片制作。
将收集得到的粪便置于液氮中，后转移至-80℃冰箱，在进行短链脂肪酸含量的检测前取出，进行真空冷冻干燥，准确称取0.05g冻干后的粪便样品溶解于0.5mL饱和氯化钠溶液中，浸泡30min，组织匀浆机匀浆，加入0.02mL浓度为10％的硫酸，震荡30s，在通风橱内向粪便溶液中准确加入0.8mL乙醚溶液，震荡30s后离心15min(8000g、4℃)，移取上清液至含有0.3g无水硫酸钠的离心管中，震荡均匀，离心15min(8000g、4℃)，取上清至气质容量瓶中，通过GC-MS检测短链脂肪酸含量，检测结果见图6～11。
如图6～11所示，造模空白组小鼠肠道中乙酸的含量为23.02μmol/g、丙酸的含量为4.40μmol/g、戊酸的含量为0.28μmol/g、异戊酸的含量为0.17μmol/g、丁酸的含量为1.39μmol/g、异丁酸的含量为0.19μmol/g；经过脆弱拟杆菌CCFM1123干预的炎症小鼠，其肠道中短链脂肪酸的含量显著高于造模空白组，其中，经过脆弱拟杆菌CCFM1123干预的炎症小鼠肠道中乙酸的含量为82.41μmol/g、丙酸的含量为16.23μmol/g、戊酸的含量为0.98μmol/g、异戊酸的含量为0.52μmol/g、丁酸的含量为3.77μmol/g、异丁酸的含量为0.72μmol/g。
可见，脆弱拟杆菌CCFM1123能够促进宿主肠道产生大量短链脂肪酸以缓解炎症。
实施例6：脆弱拟杆菌CCFM1123的应用
脆弱拟杆菌CCFM1123可用于制备胶囊制品，胶囊制品的具体制备过程如下：
脆弱拟杆菌CCFM1123划线于BHI固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；菌悬液添加至浓度为30g/L的海藻酸钠溶液中至浓度为2×109CFU/mL后，充分搅拌，使得脆弱拟杆菌CCFM1123的细胞均匀地分散于海藻酸钠溶液中，得到混合液；将混合液挤压到浓度为20g/L的氯化钙溶液中形成胶粒；待形成的胶粒静止固化30min后，过滤收集胶粒；将收集得到的胶粒进行冷冻干燥48h，得到粉剂；将粉剂装入到药用胶囊中，得到胶囊制品。
实施例7：脆弱拟杆菌CCFM1123的应用
脆弱拟杆菌CCFM1123可用于制备片剂，片剂的具体制备过程如下：
脆弱拟杆菌CCFM1123划线于BHI固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于BHI液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经8000g离心10min，得到菌泥；将菌泥用生理盐水清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到脆弱拟杆菌CCFM1123菌粉；
其中，所述保护剂为浓度为130g/L的脱脂奶粉溶液。
称取脆弱拟杆菌CCFM1123菌粉25.7重量份、淀粉55.0重量份、纤维素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉钠12.0重量份、滑石粉0.8重量份、蔗糖1.0重量份与水1.0重量份，得到原材料；将原材料混合，得到湿颗粒；将湿颗粒用中南制药机械厂的压片机进行压片后使用青州市益康中药机械有限公司的小型药物干燥机进行干燥，得到片剂。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 江南大学
<120> 一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的脆弱拟杆菌
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 985
<212> DNA
<213> 脆弱拟杆菌
<400> 1
atccttgcgg ttacgtactt caggtacccc cggctcccat ggcttgacgg gcggtgtgta 60
caaggcccgg gaacgtattc accgcgccgt ggctgatgcg cgattactag cgaatccagc 120
ttcacgaagt cgggttgcag acttcgatcc gaactgagag aggcttttgg gattagcata 180
cggtcacccg ctagctgcct tctgtacccc ccattgtaac acgtgtgtag ccccggacgt 240
aagggccgtg ctgatttgac gtcatcccca ccttcctcac atcttacgac ggcagtctct 300
ctagagtcct cagcatgacc tgttagtaac taaagataag ggttgcgctc gttatggcac 360
ttaagccgac acctcacggc acgagctgac gacaaccatg cagcaccttc acagcggtga 420
ttgctcactg acatgtttcc acatcattcc actgcaattt aagcccgggt aaggttcctc 480
gcgtatcatc gaattaaacc acatgttcct ccgcttgtgc gggcccccgt caattccttt 540
gagtttcacc gttgccggcg tactccccag gtggaatact taatgctttc gcttggccgc 600
ttactgtata tcgcaaacag cgagtattca tcgtttactg tgtggactac cagggtatct 660
aatcctgttt gatacccaca ctttcgagca tcagtgtcag ttgcagtcca gtgagctgcc 720
ttcgcaatcg gagttcttcg tgatatctaa gcatttcacc gctacaccac gaattccgcc 780
cacctctact gtactcaaga ctgacagtat caactgcaat tttacggttg agccgcaaac 840
tttcacaact gacttaccag tccacctacg ctccctttaa acccaataaa tccggataac 900
gctcggatcc tccgtattac cgcggctgct gggcacggag ttagccgatc cttattccta 960
taatacatac aaaccagtta accta 985

Claims (10)

1.一株脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)，其特征在于，所述脆弱拟杆菌已于2020年05月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61017。
2.权利要求1所述脆弱拟杆菌在制备预防和/或治疗炎症、预防和/或治疗肥胖、预防和/或治疗免疫性疾病或预防和/或治疗病原菌感染的药品中的应用。
3.一种产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1所述的脆弱拟杆菌。
4.如权利要求3所述的一种产品，其特征在于，所述产品包含食品或药品。
5.如权利要求4所述的一种产品，其特征在于，所述药品含有权利要求1所述脆弱拟杆菌、药物载体和/或药用辅料。
6.如权利要求5所述的一种产品，其特征在于，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
7.如权利要求5或6所述的一种产品，其特征在于，所述药用辅料包含填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂和/或矫味剂。
8.如权利要求7所述的一种产品，其特征在于，所述填充剂为淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙和/或微晶纤维素；所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮；所述润湿剂为水、乙醇、淀粉和/或糖浆；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠；所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶和/或聚乙二醇；所述矫味剂为单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸和/或碳酸氢钠。
9.如权利要求5-8任一项所述的一种产品，其特征在于，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
10.如权利要求4所述的一种产品，其特征在于，所述食品为保健食品、饮料或零食。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113005049A (zh) * 2020-12-30 2021-06-22 江南大学 一株可缓解腹泻的短双歧杆菌及其应用
CN113186123A (zh) * 2021-04-08 2021-07-30 江南大学 一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的普通拟杆菌

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103146620A (zh) * 2013-03-25 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 具有益生菌特性的脆弱拟杆菌
US9057070B2 (en) * 2011-10-03 2015-06-16 California Institute Of Technology Generation of Bacteriodes fragilis capsular polysaccharide A-only producing mutant strain
CN106399141A (zh) * 2015-07-31 2017-02-15 广州知易生物科技有限公司 一种脆弱拟杆菌及其应用
CN108611295A (zh) * 2018-04-28 2018-10-02 江南大学 一种缓解内毒素感染的脆弱拟杆菌及其应用
CN108778309A (zh) * 2016-01-26 2018-11-09 防御素治疗学公司 调节肠道微生物群的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9057070B2 (en) * 2011-10-03 2015-06-16 California Institute Of Technology Generation of Bacteriodes fragilis capsular polysaccharide A-only producing mutant strain
CN103146620A (zh) * 2013-03-25 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 具有益生菌特性的脆弱拟杆菌
CN106399141A (zh) * 2015-07-31 2017-02-15 广州知易生物科技有限公司 一种脆弱拟杆菌及其应用
CN108778309A (zh) * 2016-01-26 2018-11-09 防御素治疗学公司 调节肠道微生物群的方法
CN108611295A (zh) * 2018-04-28 2018-10-02 江南大学 一种缓解内毒素感染的脆弱拟杆菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ÖZKUL CEREN 等: "Islamic fasting leads to an increased abundance of Akkermansia muciniphila and Bacteroides fragilis group: A preliminary study on intermittent fasting", 《THE TURKISH JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY》 *
周莉: "脆弱拟杆菌对结直肠疾病的作用以及菌群治疗的展望", 《胃肠病学》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113005049A (zh) * 2020-12-30 2021-06-22 江南大学 一株可缓解腹泻的短双歧杆菌及其应用
CN113005049B (zh) * 2020-12-30 2022-11-01 江南大学 一株可缓解腹泻的短双歧杆菌及其应用
CN113186123A (zh) * 2021-04-08 2021-07-30 江南大学 一株能够调控肠道阿克曼菌属相对丰度的普通拟杆菌

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