CN113180101B - 一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂及其制备方法和应用,属于火龙果保鲜技术领域,是利用植物精油和/或二氧化氯抑制火龙果病原菌病害;其中,所述植物精油为丁香精油、火龙果花精油、桂花精油任一种或以上的组合;并公开了一种保鲜剂,针对由病原菌为桃吉尔霉(Gilbertellapersicaria)和变红镰刀菌(Fusarium incarnatum)引起的火龙果皮病害,具有良好的抑制作用,能够用于特定贮运环境、不同流通方式的精准化保鲜处理技术。
Description
技术领域
本发明属于火龙果保鲜技术领域,尤其是一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂及其制备方法和应用。
背景技术
火龙果,仙人掌科、量天尺属植物,是近年兴起的热带亚热带水果,其果形优美,颜色鲜亮,风味细腻爽口,香气独特,含有丰富的糖、有机酸、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质及膳食纤维等营养物质,深受人们的喜爱。但火龙果采后短期内就会腐烂,鲜果供应期短,常温下,储藏3天左右鳞片就会出现黄化,萎靡现象。一般情况下8月采收的果实能储藏7天左右,11月采收的果实能储藏11天左右。在5℃的低温下,相对湿度90°的环境中可储藏一个月左右。由此可知,火龙果是难于保鲜的亚热带水果,特别是常温保鲜更难。水果保鲜是贮藏、运输和销售过程中一个非常重要的环节。采用科学、合理的贮藏保鲜技术,能有效延长新鲜水果的贮藏期,具有显著的经济效益和社会效益。
目前国内外水果保鲜的主要方法有物理保鲜和化学保鲜。物理保鲜包括低温冷藏保鲜法、气调保鲜法、减压保鲜法、辐射保鲜法;其中物理保鲜技术大量消耗能源且成本较高,限制了其应用。化学保鲜多采用防腐剂,如脱氧乙酸、二氧化硫、山梨酸等,对水果进行保鲜虽然能取得较好的效果,但是很多化学防腐剂的长期使用会产生抗药性,同时对人体的健康有一定的不利影响,甚至会出现致癌、致畸等情况。公布号为CN106615073A的中国发明专利公开了一种微胶囊蔬菜保鲜剂,采用丁香精油、花椒精油、大蒜精油和生姜精油的组合复合精油,能够抑制橘青霉、柑桔绿霉、苹果青霉引起的疾病。
因此,需要开发一种高效、安全、价格低廉、安全、无副作用的保鲜剂。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂及其制备方法和应用,是利用植物精油和/或二氧化氯抑制火龙果病原菌病害,针对由病原菌为桃吉尔霉(Gilbertellapersicaria)和变红镰刀菌(Fusarium incarnatum)引起的火龙果皮病害,具有良好的抑制作用,能够用于特定贮运环境、不同流通方式的精准化保鲜处理技术。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂,该保鲜剂包含植物精油和/或二氧化氯;其中,所述植物精油为丁香精油、火龙果花精油、桂花精油任一种或以上的组合。
进一步地,所述保鲜剂中植物精油的体积浓度为800-2000μL/L。
进一步地,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0008-0.0012%的丁香精油、0.0008-0.0012%的火龙果花精油或桂花精油、0-0.5%二氧化氯,其余为溶剂补足100%。
进一步地,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0008-0.0012%的丁香精油、0.0008-0.0012%的火龙果花精油、0.0008-0.0012%的桂花精油、0-0.5%二氧化氯,其余为溶剂补足100%。
本发明提供所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶混合搅拌,于8000-10000rpm转速下搅拌反应3-5小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油或桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
本发明提供抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶混合搅拌,于8000-10000rpm转速下搅拌反应3-5小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
进一步地,所述精油的总量与所述基材的质量比为1:14~16;所述明胶、阿拉伯胶的质量比为1-5:1。
进一步地,所述乳化剂的用量为基材质量的1-2%。
进一步地,所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂任两种以上的组合。
进一步地,所述火龙果花精油的制备方法是:将火龙果花粉碎至直径在2cm以下,再采用二氧化碳萃取法将粉碎后的火龙果花送入超临界萃取釜中,通入混有携带剂的二氧化碳气体,在压力为25-30Mpa,温度为42-45℃的超临界状态下,萃取2.5-3.5小时后,进行解析分离,得到粗精油;再经过蒸馏提纯1-2h,即得到所述火龙果花精油。所述携带剂是由无水乙醇和正己烷按照体积比1-5:1混合。所述携带剂的加入量为火龙果花质量的0.01-0.1%。
本发明提供所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的应用,所述的保鲜剂抑制火龙果病原菌为桃吉尔霉和变红镰刀菌。
本发明具有以下有益效果:
1.本发明研究确定了火龙果采后贮运过程中的生理特性及病害的发生发展规律,通过分离、纯化及致病性检测,得到了病原菌菌株2株,并以病原菌18S r DNA序列进行进化树分析,鉴定出火龙果主要病害的病原菌为桃吉尔霉(Gilbertellapersicaria)和变红镰刀菌(Fusarium incarnatum),并建立了有效的抑菌方法。
2.本发明用植物精油丁香精油、火龙果花精油、桂花精油、二氧化氯抑制火龙果病原菌病害,其中的火龙果花中含有芳香类物质,经过试验验证了其具有一定的灭菌、抑菌效果;本发明设计的保鲜剂针对由病原菌为桃吉尔霉和变红镰刀菌引起的火龙果皮病害,具有良好的抑制作用,抑制率最高可达100%,能够用于特定贮运环境、不同流通方式的精准化保鲜处理技术,同时不会对火龙果果实造成不利影响。
附图说明
图1为PS2接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态。
图2为PS2接种3d、7d火龙果表面病害症状。
图3为PS4接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态。
图4为PS4接种3d、7d火龙果表面病害症状。
图5为火龙果采后分离病原菌的rDNA-ITS区PCR扩增产物的电泳结果。
图6为病原菌PS2序列分析图。
图7为病原菌PS4序列分析图。
图8为基于ITS基因序列构建的火龙果病原菌PS2系统进化树。
图9为基于ITS基因序列构建的火龙果病原菌PS4系统进化树。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明,但不可以以任何方式限制本发明。本发明如下使用的原料均购自化学药品公司或市场。
实施例1分离火龙果病菌株
1.选取罹病火龙果为研究对象,根据分离获得的真菌形态特征和培养性状,在罹病火龙果上分离到6个真菌菌株,分别标记为PS1、PS2、PS3、PS4、PS5和PS6。将分离得到的6株菌株,依次照柯赫氏法则进行回接验证。验证结果显示,其中PS2和PS4菌株导致果实发病。
2.将所述PS2菌株进行重新接种分析,观察接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态,记录在图1。观察接种3d、7d的火龙果表面病害症状,记录在图2。
图1为PS2接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态。图2为PS2接种3d、7d火龙果表面病害症状。如图1、2所示,接种3d火龙果表面即出现深红色、水浸状小病斑,随即病斑不断扩大;接种7d整个果实腐烂,病斑上产生大量浅白色菌丝体和深褐色孢子囊。真菌PS2在PDA固体培养基上生长迅速,3d布满整个培养皿,菌落白色,但白色菌丝生长疏松,表面分布大量黑色点状孢子囊。显微观察该菌菌丝透明,无隔无分枝,在孢囊梗顶部产生圆形或椭圆形孢子囊,孢子囊破裂后散发大量黑色孢囊孢子。
3.将所述PS4菌株进行重新接种分析,观察接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态,记录在图3。观察接种3d、7d的火龙果表面病害症状,记录在图4。
图3为PS4接种3d火龙果表面分离菌株菌落特征和孢子形态。图4为PS4接种3d、7d火龙果表面病害症状。如图3、4所示,PS4接种3d后开始发病,产生黄褐色病斑、病斑凹陷且边缘清晰,果实褐变软腐,病部产生白色霉状物;7d后整个果实腐烂,黄褐色病斑布满果实表面,整体腐坏,白色霉状物扩大范围。真菌PS4初期菌丝体白色絮状,边缘具有丛卷状的气生菌丝,后变为浅黄色,培养基不变色。显微观察该菌大型分生孢子,镰刀形,无色,基孢有突起的足跟,具有3~7个隔膜,多数为3~5个。
根据图1-4的菌落特征和孢子形态,通过与真菌鉴定手册所描述的形态比对,可将编号为PS2的真菌菌株初步鉴定为桃吉尔霉,PS4为变红镰刀菌。通过图1-4的果皮发病情况可见,PS4致病力最强。
实施例2
鉴定实施例1分离到的病原菌PS2、PS4,对病原菌进行18S rDNA-ITS序列和系统发育树分析。
1.利用PCR方法对病原菌基因组DNA进行ITS鉴定。以病原菌基因组DNA为模板,采用rDNA的ITS区段通用引物进行PCR扩增。经回收、纯化及序列测定,扩增结果如图5所示。
图5为火龙果采后分离病原菌的rDNA-ITS区PCR扩增产物的电泳结果。由图5可见,病原菌PS2获得1条655bp的单一条带,将获得的序列在GeneBank中进行BLAST比对,菌株PS2与桃吉尔霉Gilbertellapersicaria(登录号:MK301174.1)同源性高达99%。病原菌PS4获得1条549bp的单一条带,将获得的序列在GeneBank中进行BLAST比对,菌株P4与变红镰刀菌Fusarium incarnatum(KM921663.1)同源性高达100%。
2.选取同源性高低不同的菌株进行多重序列比较和系统发育分析,使用MEGA5.1软件以Neighbor-Joining法构建进化树。病原菌PS2序列分析见图6,病原菌PS4序列分析见图7;PS2系统进化树见图8,PS4系统进化树见图9。
图6为病原菌PS2序列分析图。图7为病原菌PS4序列分析图。图8为基于ITS基因序列构建的火龙果病原菌PS2系统进化树,图9为基于ITS基因序列构建的火龙果病原菌PS4系统进化树。
图8显示,菌株PS2与桃吉尔霉Gilbertellapersicaria(登录号:MK301174.1)具有很近的遗传关系;图9显示,菌株PS4与变红镰刀菌Fusarium incarnatum(KM921663.1)具有很近的遗传关系。因此,通过病原菌的形态鉴定、rDNA-ITS序列分析和系统发育树,确定引起红肉火龙果果实采后病害的主要病原菌为桃吉尔霉和变红镰刀菌。
如下火龙果花精油的制备方法是:将火龙果花粉碎至直径在2cm以下,再采用二氧化碳萃取法将粉碎后的火龙果花送入超临界萃取釜中,通入由无水乙醇和正己烷按照体积比1-5:1混合的携带剂的二氧化碳气体,携带剂的加入量为火龙果花质量的0.01-0.1%,在压力为25-30Mpa,温度为42-45℃的超临界状态下,萃取2.5-3.5小时后,进行解析分离,得到粗精油;再经过蒸馏提纯1-2h,即得到所述火龙果花精油。
实施例3
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0008%的丁香精油、0.0008%的火龙果花精油,其余为溶剂补足100%;
本发明提供所述火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为1:1混合搅拌,于8000rpm转速下搅拌反应3小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为单油酸甘油酯、大豆卵磷脂按照质量比4:1的组合;所述乳化剂的用量为基材质量的1%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:14;
(2)保鲜剂制备:向水中加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
实施例4
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0012%的丁香精油、0.0012%的桂花精油、0.5%二氧化氯,其余为溶剂补足100%;
本发明提供所述火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为5:1混合搅拌,于10000rpm转速下搅拌反应5小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂按照质量比1:2组合;所述乳化剂的用量为基材质量的2%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:16;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
实施例5
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.001%的丁香精油、0.001%的火龙果花精油、0.3%二氧化氯,其余为溶剂补足100%;
本发明提供所述火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为3:1混合搅拌,于9000rpm转速下搅拌反应4小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠按照质量比5:1的组合;所述乳化剂的用量为基材质量的1.5%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:15;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
实施例6
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0008%的丁香精油、0.0008%的火龙果花精油、0.0008%的桂花精油,其余为溶剂补足100%;
本发明提供火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为2:1混合搅拌,于8500rpm转速下搅拌反应4小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂按照质量比1:6:2的组合;所述乳化剂的用量为基材质量的1.2%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:14.5;
(2)保鲜剂制备:向水中加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
实施例7
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0012%的丁香精油、0.0012%的火龙果花精油、0.0012%的桂花精油、0.5%二氧化氯,其余为溶剂补足100%;
本发明提供火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为4:1混合搅拌,于10000rpm转速下搅拌反应3-5小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂按照质量比1:1:10的组合;所述乳化剂的用量为基材质量的1.7%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:15.5;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
实施例8
制备保鲜剂,所述保鲜剂包括如下体积百分数的原料:0.0011%的丁香精油、0.0011%的火龙果花精油、0.0011%的桂花精油、0.2%二氧化氯,其余为溶剂补足100%;
本发明提供火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶按照质量比为3:1混合搅拌,于9000rpm转速下搅拌反应4小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂按照质量比5:3:1的组合;所述乳化剂的用量为基材质量的1.6%;所述精油的总量与所述基材的质量比为1:15;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
对比例1
与实施例8的区别在于,除去丁香精油、火龙果花精油、桂花精油,替换为等量的薄荷精油。
对比例2
与实施例8的区别在于,除去丁香精油、火龙果花精油、桂花精油,替换为等量的香茅精油。
对比例3
与实施例8的区别在于,除去丁香精油、火龙果花精油、桂花精油,替换为等量的百里香精油。
应用实施例
1.研究实施例3-8、对比例1-3的保鲜剂对桃吉尔霉和变红镰刀菌在体外直接接触抑制效果,采用体外直接接触法,研究他们对红龙果桃吉尔霉和变红镰刀菌抑菌效果。结果如表1所示。
表1不同保鲜剂对火龙果采后主要病原菌的抑制效果
注:所有数据在25℃培养5d后测得,培养基均为PDA培养基;不同字母表示差异显著(p≤0.05)。
由表1数据可见,本发明实施例3-8的保鲜剂对桃吉尔霉和变红镰刀菌在体外直接接触抑制率最高能够达到100%。对比例1-3中使用了薄荷精油、香茅精油、百里香精油对两种病原菌生长的抑制率较低。本发明还进行了显著性差异分析,由表1数据可见,本发明实施例3-8的数据之间差异不显著,而对比例1-3与本发明各个实施例的数据之间均具有显著差异,进一步说明了本发明各实施例的抑菌剂具有良好重现性,而对比例的抑菌效果与本发明相差较大。
2.研究实施例3-8、对比例1-3的保鲜剂的活体抑菌效果,采用人工接种的方法探讨保鲜剂对火龙果实致病菌的控制。具体是:在火龙果表皮接种桃吉尔霉和变红镰刀菌的将保鲜剂处理染菌火龙果,并以未经过保鲜剂处理的染菌火龙果为对照组,统计其在低温贮藏25d时的腐烂率。结果如表2所示。
表2不同保鲜剂对染菌火龙果的保鲜效果
由表2数据可见,本发明实施例3-8的保鲜剂对感染桃吉尔霉和变红镰刀菌的染菌火龙果的保鲜效果良好,远远好于对比例1-3。综合体外直接接触及活体抑菌试验的结果,本发明实施例的保鲜剂对火龙果采后主要致病菌桃吉尔霉和变红镰刀菌的抑制效果较好。
上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述,但并非对发明保护范围的限制,所属领域技术人员应该明白,在本发明的技术方案的基础上,本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。
Claims (8)
1.一种抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂,其特征在于,该保鲜剂由丁香精油、火龙果花精油、桂花精油、二氧化氯和溶剂组成;所述保鲜剂抑制的火龙果病原菌为桃吉尔霉和变红镰刀菌。
2.根据权利要求1所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂,其特征在于,所述保鲜剂为如下体积百分数的原料:0.0012%的丁香精油、0.0012%的火龙果花精油、0.0012%的桂花精油、0.5%二氧化氯,其余为溶剂补足100%。
3.根据权利要求1所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂,其特征在于,所述保鲜剂为如下体积百分数的原料:0.0011%的丁香精油、0.0011%的火龙果花精油、0.0011%的桂花精油、0.2%二氧化氯,其余为溶剂补足100%。
4.一种如权利要求1-3任一项所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)精油的预处理:
①取明胶、阿拉伯胶混合搅拌,于8000-10000rpm转速下搅拌反应3-5小时,即得基材;
②向所述基材中加入丁香精油、火龙果花精油、桂花精油进行搅拌,然后加入乳化剂在常温条件下搅拌进行乳化,得到乳化精油;
(2)保鲜剂制备:将二氧化氯融入水中,然后加入乳化精油,混合均匀即得到成品保鲜剂。
5.根据权利要求4所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,其特征在于,所述精油的总量与所述基材的质量比为1:14~16;所述明胶、阿拉伯胶的质量比为1-5:1。
6.根据权利要求4所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,其特征在于,所述乳化剂的用量为基材质量的1-2%。
7.根据权利要求4所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的制备方法,其特征在于,所述乳化剂为单油酸甘油酯、烷基酚醚羧酸钠、大豆卵磷脂任两种以上的组合。
8.一种如权利要求1-3任一项所述抑制火龙果病原菌病害的保鲜剂的应用,其特征在于,所述的保鲜剂用于抑制火龙果病原菌桃吉尔霉和变红镰刀菌。
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