CN113164529A - 用于动物的微生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及直接饲喂的微生物，其用于改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善产奶动物的奶产量和/或奶品质、以及抑制产奶动物中选自以下的疾病或障碍：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。更具体地，本发明涉及分离的芽孢杆菌菌株(86、300、101、235、177和102)以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株，它们用于包括上述用途在内的用途。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年10月2日提交的美国临时申请系列号62/740,169在美国法典第35篇第119(e)条下的优先权，其整个公开内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及直接饲喂的微生物，其用于改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食(off-feed)事件、改善产奶动物的奶产量和/或奶品质、和抑制产奶动物中选自以下的疾病或障碍：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。更具体地，本发明涉及分离的芽孢杆菌（Bacillus）菌株86、300、101、235、177和102，以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株，其用于包括上述用途的用途。
背景和发明内容
本发明涉及直接饲喂的微生物（DFM）组合物。繁殖性能在所有家畜生产中都是非常重要的。在奶牛中，及时繁殖母牛对于确保母牛在终生奶产量中达到其潜力是至关重要的。受孕延迟、高流产率和低妊娠率可以对牛群的总产奶量产生负面影响，且繁殖困难的母牛通常需要从牛群中移出。繁殖性能的提高可通过多种方式为乳业创造价值：通过增加的奶产量，通过出生的额外牛犊，和通过后备母牛成本的节省。另外，繁殖的改善会节省与进行授精的额外人工和技术人员有关的费用、治疗药物、以及授精或排卵时间的同步化的人工和成本。
同样地，在饲养家畜方面需要大量的财政和劳力投资。饲料、淡水、住所、疫苗接种和医疗处理、操作和挤奶的成本是与管理家畜（包括奶牛）相关的几种重大费用。例如，饲养一只小母牛备用动物的成本可以超过1500美元。在奶业中，从经济和产奶动物福利的角度来看，控制母牛死亡率是至关重要的。在最近的几十年中，成年母牛死亡率一直在上升，并包括由产犊障碍、消化障碍、运动障碍、代谢障碍、乳房/乳头障碍、事故和未知原因造成的死亡损失。乳业和整个畜牧业都需要降低死亡损失率的新技术。
随着世界人口增加，对包括乳制品在内的高质量蛋白产品的需求不断增加，但是，通过减少土地和水资源的使用来减少农业对环境的影响的压力也在增加。每头牛的总奶产量以及包括脂肪和蛋白在内的奶组分的改善有助于满足这两种需求，从而满足在没有额外动物资源的情况下对更高奶产量的不断增长的需求。此外，有效的奶产量对于乳业的经济可行性而言是必要的。提高奶中的脂肪和蛋白百分比会导致更高质量的奶，从而为乳业带来更大的收益。
申请人已经开发了DFM组合物，其导致改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善产奶动物的奶产量和/或品质、以及抑制产奶动物的疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。本文描述的DFM组合物通过提供所有这些性能或其组合来提供商业益处。
提供了用于改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善产奶动物的奶产量和/或奶品质、以及抑制产奶动物中选自以下的疾病或障碍的方法和组合物：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。在不同的实施方案中，所述动物可以选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。在其中动物是猪物种的实施方案中，所述猪物种可以选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。在另一个实施方案中，所述动物可以是选自母牛、山羊、绵羊或水牛的产奶动物。
在不同的实施方案中，用于本文所述的方法中的组合物可以是商业包、动物饲料组合物的饲料添加剂、动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物(例如，完全饲料)，各自包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在另一个实施方案中，提供了一种改善动物的繁殖性能的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的繁殖性能。
在另一个实施方案中，提供了一种减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102(NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件。
在另一个实施方案中，提供了一种改善产奶动物的奶产量和/或奶品质的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的奶产量和/或奶品质。
在另一个示例性实施方案中，提供了一种抑制产奶动物的疾病或障碍的方法，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。当所述疾病是肺炎时，所述方法还可以用于其它类型的动物。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株抑制所述疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
以下条款及其组合提供了本文描述的本发明的各种另外的示例性方面。在本专利申请的任何其它部分（包括标题为“具体实施方式”的部分和实施例）中描述的各种实施方案适用于在以下编号的条款中描述的本发明的以下实施方案中的任一个。
1. 一种改善动物的繁殖性能的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的繁殖性能。
2. 一种减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件。
3. 条款1或2的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
4. 条款1-3中的任一条的方法，其中所述动物是猪物种，且所述猪物种选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。
5. 条款1或2的方法，其中所述动物是产奶动物。
6. 条款5的方法，其中所述产奶动物选自母牛、山羊、绵羊或水牛。
7. 条款1-6中的任一条的方法，其中所述芽孢杆菌菌株生产选自以下的酶：α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶和它们的组合。
8. 条款1-7中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。
9. 条款1-8中的任一条的方法，其中芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)都施用给所述动物。
10. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
11. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
12. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
13. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
14. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
15. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株。
16. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)。
17. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)。
18. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)。
19. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)。
20. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)。
21. 条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
22. 条款1-21中的任一条的方法，其中以约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 1012 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
23. 条款1-21中的任一条的方法，其中以约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 107 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
24. 条款1-21中的任一条的方法，其中以大于约5.0 x 106 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
25. 条款1-24中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用抗生素的步骤。
26. 条款25的方法，其中所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素。
27. 条款1-26中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用酶的步骤，所述酶选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
28. 条款27的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
29. 条款1或2的方法，其中所述动物是母牛且在哺乳期中施用所述芽孢杆菌菌株。
30. 条款1或2的方法，其中所述动物是母牛且在妊娠期中施用所述芽孢杆菌菌株。
31. 条款1-30中的任一条的方法，其中每天给所述动物施用所述饲料组合物。
32. 条款1或3-31中的任一条的方法，其中所述繁殖性能的改善选自受孕服务次数的减少、发情检出的增加、受孕率的增加、流产的减少和妊娠率的增加。
33. 一种改善产奶动物的奶产量和/或奶品质的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的奶产量和/或奶品质。
34. 一种抑制产奶动物中的疾病或障碍的方法，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株抑制所述产奶动物中的疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
35. 条款33或34的方法，其中所述产奶动物选自母牛、山羊、绵羊或水牛。
36. 条款33-35中的任一条的方法，其中所述芽孢杆菌菌株生产选自以下的酶：α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶和它们的组合。
37. 条款33-36中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。
38. 条款33-37中的任一条的方法，其中芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)都施用给所述动物。
39. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
40. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
41. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
42. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
43. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
44. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株。
45. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)。
46. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)。
47. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)。
48. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)。
49. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)。
50. 条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
51. 条款33-50中的任一条的方法，其中以约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 1012 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
52. 条款33-50中的任一条的方法，其中以约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 107 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
53. 条款33-50中的任一条的方法，其中以大于约5.0 x 106 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
54. 条款33-53中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用抗生素的步骤。
55. 条款54的方法，其中所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素。
56. 条款33-55中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用酶的步骤，所述酶选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
57. 条款56的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
58. 条款33-57中的任一条的方法，其中在哺乳期中施用所述芽孢杆菌菌株。
59. 条款33-57中的任一条的方法，其中在妊娠期中施用所述芽孢杆菌菌株。
60. 条款33-59中的任一条的方法，其中每天给所述动物施用所述饲料组合物。
61. 条款33或35-60中的任一条的方法，其中所述奶产量和/或奶品质的改善选自：增加奶产量、增加乳脂肪百分比、增加乳蛋白、增加总脂肪校正奶、增加能量校正的奶产量和减少体细胞计数。
62. 条款1、2或5-61中的任一条的方法，其中所述动物是母牛。
63. 一种用于动物应用的商业包，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
64. 一种用于动物饲料的饲料添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
65. 一种用于动物饮用水的添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
66. 一种动物饲料组合物，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
67. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于改善所述动物的繁殖性能。
68. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于减少动物的死亡损失和/或断食事件。
69. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于改善动物的奶产量和/或奶品质。
70. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于抑制动物中选自以下的疾病或障碍：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
71. 呈浓缩物形式的条款64或65的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
72. 呈超级浓缩物形式的条款64或65的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
73. 呈干燥形式的条款64-72中的任一条的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
74. 呈丸粒形式的条款73的饲料组合物。
75. 条款63-65或67-74中的任一条的商业包、饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其中所述菌株呈选自粉末、液体和丸粒形式的形式。
76. 条款63-75中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含所述芽孢杆菌菌株的载体。
77. 条款76的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述载体选自麸、稻壳、盐、糊精和它们的组合。
78. 在袋中的条款63-77中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物。
79. 条款78的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述袋是塑料袋。
80. 条款63-79中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
81. 在20-磅袋中的条款63-80中的任一条的商业包、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
82. 在50-磅袋中的条款63-80中的任一条的商业包、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
83. 呈粉末形式的条款64、65、67-73或75-82中的任一条的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
84. 呈液体形式的条款64、65、67-72、75或78-80中的任一条的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
85. 用于商业用途的在容器中的条款63-84中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物。
86. 条款85的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述容器包含塑料。
87. 条款85的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述容器包含纸。
88. 条款63-87中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述菌株进一步包含粘合剂。
89. 条款88的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述粘合剂选自粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝和葡聚糖或其组合。
附图说明
图1为以下图，其显示了(图A)肠病原性和肠出血性大肠杆菌的总大肠杆菌(16S)、热不稳定的肠毒素基因(LT)、紧密粘附素附着和消除基因(eaeA)的直肠量的减少，(图B)产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）α和β毒素基因(分别是cpa和cpb)的量的数字减少，和(图C)在芽孢杆菌补充过程中曲霉（Aspergillus）(18S)基因(p≤0.05)的减少。
图2显示了展示芽孢杆菌菌株86和300的RAPD PCR特性(引物1-6)的凝胶的照片。菌株86具有顶部特性，菌株300具有底部特性。最左和最右泳道具有标志物，且在标志物之间的每组2个连续泳道从左至右对应于引物1-6。
图3显示了展示芽孢杆菌菌株101的RAPD PCR特性(引物1-6)的凝胶的照片。对于引物1，模糊带出现在大约1000、1500和大于1600对碱基对。对于引物2，强烈带出现在650对碱基对，且模糊带出现在大约400对碱基对。对于引物3，模糊带出现在大约400对碱基对，模糊的双带出现在600和700对碱基对，且模糊带出现在1000和1400对碱基对。
图4显示了展示芽孢杆菌菌株102的RAPD PCR特性(引物1-3)的凝胶的照片。对于引物1，强烈带出现在900对碱基对，且模糊带出现在1200和1400对碱基对。对于引物2，强烈带出现在600、700和1000对碱基对。对于引物3，强烈带出现在600对碱基对，双带出现在700和750对碱基对，双带出现在900和1100对碱基对，且模糊带出现在400和大于1800对碱基对。
图5显示了展示芽孢杆菌菌株177的RAPD PCR特性(引物2和3)的凝胶的照片。对于引物2，强烈带出现在600、700和1000对碱基对。对于引物3，强烈带出现在600对碱基对，双带出现在700和750对碱基对，双带出现在900和1100对碱基对，且模糊带出现在400和大于1800对碱基对。
图6显示了展示芽孢杆菌菌株235的RAPD PCR特性(引物1-6)的凝胶的照片。对于引物1，模糊带出现在大约1000和大于1600对碱基对。对于引物2，强烈带出现在650对碱基对且模糊带出现在大约400对碱基对。对于引物3，模糊带出现在大约400、600、1000和1400对碱基对。
具体实施方式
提供了用于改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善产奶动物的奶产量和/或奶品质、以及抑制产奶动物中选自以下的疾病或障碍的方法和组合物：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。还提供了用于在除了产奶动物以外的本文所述动物中抑制肺炎的方法。在不同的实施方案中，所述动物可以选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。在其中所述动物是猪物种的实施方案中，所述猪物种可以选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。在另一个实施方案中，所述动物可以是选自母牛、山羊、绵羊或水牛的产奶动物。
在不同的实施方案中，用于本文所述的方法中的组合物可以是商业包、动物饲料组合物的饲料添加剂、动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物(例如，完全饲料)，各自包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在另一个实施方案中，提供了一种改善动物的繁殖性能的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的繁殖性能。
在又另一个实施方案中，提供了一种减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102(NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件。
在仍另一个实施方案中，提供了一种改善产奶动物的奶产量和/或奶品质的方法。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的奶产量和/或奶品质。
在另一个示例性实施方案中，提供了一种抑制产奶动物的疾病或障碍的方法，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株抑制产奶动物中的疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
以下条款及其组合提供了本文描述的本发明的各种另外的示例性方面。在本专利申请的任意其它部分（包括标题为“背景和发明内容”的部分和实施例）中描述的各种实施方案适用于在以下编号的条款中描述的本发明的以下实施方案中的任一个。
1. 一种改善动物的繁殖性能的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的繁殖性能。
2. 一种减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件。
3.条款1或2的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
4.条款1-3中的任一条的方法，其中所述动物是猪物种，且所述猪物种选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。
5.条款1或2的方法，其中所述动物是产奶动物。
6.条款5的方法，其中所述产奶动物选自母牛、山羊、绵羊或水牛。
7.条款1-6中的任一条的方法，其中所述芽孢杆菌菌株生产选自以下的酶：α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶和它们的组合。
8.条款1-7中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。
9.条款1-8中的任一条的方法，其中芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)都施用给所述动物。
10.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
11.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
12.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
13.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
14.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
15.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株。
16.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)。
17.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)。
18.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)。
19.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)。
20.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)。
21.条款1-8中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
22.条款1-21中的任一条的方法，其中以约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0x 1012 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
23.条款1-21中的任一条的方法，其中以约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0x 107 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
24.条款1-21中的任一条的方法，其中以大于约5.0 x 106 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
25.条款1-24中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用抗生素的步骤。
26.条款25的方法，其中所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素。
27.条款1-26中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用酶的步骤，所述酶选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
28.条款27的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
29.条款1或2的方法，其中所述动物是母牛且在哺乳期中施用所述芽孢杆菌菌株。
30.条款1或2的方法，其中所述动物是母牛且在妊娠期中施用所述芽孢杆菌菌株。
31.条款1-30中的任一条的方法，其中每天给所述动物施用所述饲料组合物。
32.条款1或3-31中的任一条的方法，其中所述繁殖性能的改善选自受孕服务次数的减少、发情检出的增加、受孕率的增加、流产的减少和妊娠率的增加。
33. 一种改善产奶动物的奶产量和/或奶品质的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的奶产量和/或奶品质。
34. 一种抑制产奶动物中的疾病或障碍的方法，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株抑制所述产奶动物中的疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
35.条款33或34的方法，其中所述产奶动物选自母牛、山羊、绵羊或水牛。
36.条款33-35中的任一条的方法，其中所述芽孢杆菌菌株生产选自以下的酶：α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶和它们的组合。
37.条款33-36中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。
38.条款33-37中的任一条的方法，其中芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)都施用给所述动物。
39.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
40.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
41.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
42.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
43.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
44.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株。
45.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)。
46.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)。
47.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)。
48.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)。
49.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)。
50.条款33-37中的任一条的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
51.条款33-50中的任一条的方法，其中以约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 1012 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
52.条款33-50中的任一条的方法，其中以约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 107 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
53.条款33-50中的任一条的方法，其中以大于约5.0 x 106 CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
54.条款33-53中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用抗生素的步骤。
55.条款54的方法，其中所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素。
56.条款33-55中的任一条的方法，所述方法另外包括给所述动物施用酶的步骤，所述酶选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
57.条款56的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
58.条款33-57中的任一条的方法，其中在哺乳期中施用所述芽孢杆菌菌株。
59.条款33-57中的任一条的方法，其中在妊娠期中施用所述芽孢杆菌菌株。
60.条款33-59中的任一条的方法，其中每天给所述动物施用所述饲料组合物。
61.条款33或35-60中的任一条的方法，其中所述奶产量和/或奶品质的改善选自：增加奶产量、增加乳脂肪百分比、增加乳蛋白、增加总脂肪校正奶、增加能量校正的奶产量和减少体细胞计数。
62.条款1、2或5-61中的任一条的方法，其中所述动物是母牛。
63. 一种用于动物应用的商业包，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
64. 一种用于动物饲料的饲料添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
65. 一种用于动物饮用水的添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
66. 一种动物饲料组合物，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
67. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于改善所述动物的繁殖性能。
68. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于减少动物的死亡损失和/或断食事件。
69. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于改善动物的奶产量和/或奶品质。
70. 条款63-66中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物，其用于抑制动物中选自以下的疾病或障碍：生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
71. 呈浓缩物形式的条款64或65的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
72. 呈超级浓缩物形式的条款64或65的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
73. 呈干燥形式的条款64-72中的任一条的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
74. 呈丸粒形式的条款73的饲料组合物。
75. 条款63-65或67-74中的任一条的商业包、饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其中所述菌株呈选自粉末、液体和丸粒形式的形式。
76. 条款63-75中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含所述芽孢杆菌菌株的载体。
77. 条款76的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述载体选自麸、稻壳、盐、糊精和它们的组合。
78. 在袋中的条款63-77中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物。
79. 条款78的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述袋是塑料袋。
80. 条款63-79中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
81. 在20-磅袋中的条款63-80中的任一条的商业包、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
82. 在50-磅袋中的条款63-80中的任一条的商业包、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂。
83. 呈粉末形式的条款64、65、67-73或75-82中的任一条的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
84. 呈液体形式的条款64、65、67-72、75或78-80中的任一条的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂。
85. 用于商业用途的在容器中的条款63-84中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物。
86. 条款85的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述容器包含塑料。
87. 条款85的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述容器包含纸。
88. 条款63-87中的任一条的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述菌株进一步包含粘合剂。
89. 条款88的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述粘合剂选自粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝和葡聚糖或其组合。
在不同的实施方案中，向其施用如本文中所述的饲料添加剂、饲料组合物或饮用水的动物可以选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。在其中所述动物是伴侣动物的实施方案中，所述伴侣动物可以是，例如，犬科动物物种或猫科动物物种。在其中所述动物是猪物种的实施方案中，所述猪物种可以选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。在不同的示例性实施方案中，所述动物可以选自鸡(例如，肉鸡或蛋鸡)、猪、马、矮马、母牛、水牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、雉鸡、鸵鸟、鸭子和它们的组合。在一个示例性实施方案中，所述动物可以是母牛。
在除了需要组合施用所有菌株的那些以外的本文描述的任何实施方案中，可以单独地或以任意组合施用所述菌株。在一个实施方案中，可以将有效量的芽孢杆菌菌株施用给动物。“有效量”是指能够如下所述通过任何机制改善动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善产奶动物的奶产量和/或奶品质和/或抑制产奶动物的疾病或障碍的芽孢杆菌菌株(例如，菌株86、300、101或235、177或102，或具有所有它们的鉴定特征的菌株)的量，所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。在一个方面，繁殖性能的改善选自受孕服务次数的减少、发情检出率的增加、受孕率的增加、流产的减少和妊娠率的增加(例如，21-天妊娠率)。在另一个示例性的方面，奶产量和/或奶品质的改善选自：增加奶产量、增加乳脂肪百分比、增加乳蛋白、增加总脂肪校正奶、增加能量校正的奶产量和减少体细胞计数(例如，减少体细胞计数的对数平均值)。
本文中使用的“抑制疾病或障碍”可以指减少具有疾病或障碍的动物的数目、预防疾病或障碍、减轻动物中疾病或障碍的症状、或其组合，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。本文中使用的“减少动物的死亡损失”可以指减少由死亡引起的动物损失的数目，或预防由死亡引起的动物损失。本文中使用的“减少动物的断食事件”可以指减少动物的断食事件的数目，或预防动物的任何断食事件，或例如，增加每日反刍(例如，每天反刍的时间)。本文中使用的术语“抑制”、“减少”、“增加”、“改善”或“降低”，例如，都是相对于在给动物施用一种或多种菌株之前(在实施例中命名为“芽孢杆菌前”)动物（例如，产奶动物）的状况，或例如，相对于没有饲喂芽孢杆菌菌株的动物。如本文中所述，本文中使用的“改善奶品质”可以指增加乳脂肪百分比(或，例如，乳脂肪的磅数)、增加乳蛋白(例如，以百分比或磅计)、增加总脂肪校正奶、增加能量校正的奶产量和/或减少体细胞计数。本文中使用的“能量校正的奶”(ECM)是基于奶体积、脂肪和蛋白对奶中能量的量的计算。能量校正的奶决定了生产的奶的量，其调节至3.5%的脂肪和3.2%的蛋白。能量校正的奶是跟踪牛群生产力的比简单的产奶体积更有用的测量，因为它将所有动物置于平等基础上用于随时间的对比目的。
在本文描述的其中将包含芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的本发明的组合物施用给动物的实施方案中，所述组合物优选地在饲料组合物中或在饮用水中口服地施用给动物，但是可以利用本领域技术人员已知的任何其它有效的施用方法。在一个示例性实施方案中，以用于加入至动物饮用水中的添加剂的形式提供芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株。
在另一个示例性实施方案中，以用于加入至饲料组合物的饲料添加剂的形式提供芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株。所述饲料组合物可以含有芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株，其与动物饲料掺合物混合，所述动物饲料掺合物包括任何本领域公知的动物饲料掺合物或本文描述的任何动物饲料掺合物。本文中使用的“饲料组合物”或“动物饲料组合物”是指包含芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的饲料组合物，所述菌株与动物饲料掺合物混合，并任选地与可以用在饲料组合物中的任意其它组分混合，所述其它组分包括其它细菌菌株，诸如其它芽孢杆菌菌株或乳杆菌(Lactobacillus)菌株。
根据在本专利申请中描述的方法和组合物，可以使用任何动物饲料掺合物，包括本领域已知的那些和本文描述的那些，诸如菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、玉米粕、大麦、小麦、青贮饲料和窖藏半干草饲料。在不同的实施方案中，可以使用基于玉米青贮饲料和苜蓿干草的全混合日粮，或可以使用玉米青贮饲料混合日粮。在不同的实施方案中，可以给动物饲料掺合物补充芽孢杆菌菌株86、和/或芽孢杆菌菌株300、和/或芽孢杆菌菌株101、和/或芽孢杆菌菌株235、和/或芽孢杆菌菌株177、和/或芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株，但是可以将其它成分任选地加入至动物饲料掺合物，包括其它不同的细菌菌株，诸如其它芽孢杆菌菌株或乳杆菌菌株。
在不同的示例性实施方案中，动物饲料掺合物的任选成分包括糖和复合糖诸如水溶性的和不溶于水的单糖、二糖和多糖。其它任选成分包括干酒糟、谷物可溶物、脂肪（例如，粗脂肪）、磷、碳酸氢钠、石灰石、盐、植酸盐、钙、钠、硫、镁、钾、铜、铁、锰、锌、灰、鱼油、从鱼粉衍生出的油、原始种子（例如，亚麻籽）、抗氧化剂和淀粉。在另一个实施方案中，可以以矿物质预混合物的形式添加矿物质。
可以加入动物饲料掺合物中的任选氨基酸成分是精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸乙酯盐酸盐、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、半胱氨酸乙酯盐酸盐和类似物、及其盐。可以任选地加入的维生素是盐酸硫胺素、核黄素、盐酸吡多辛、烟酸、烟酰胺、肌醇、氯化胆碱、泛酸钙、生物素、叶酸、抗坏血酸和维生素A、B、K、D、E等。在另一个实施方案中，可以以维生素预混合物的形式加入维生素。在又另一个实施方案中，可以将蛋白成分加入至动物饲料掺合物中，且包括从肉粉、骨粉或鱼粉得到的蛋白、液体或粉末状蛋、鱼可溶物、粗制蛋白等。
在另一个示例性的方面，可以将本领域已知的任何药物成分加入至动物饲料掺合物中或加入至用于动物饮用水的添加剂中，诸如抗生素。在不同的实施方案中，所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素和它们的组合。在另一个实施方案中，动物饲料掺合物、饲料组合物、饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂可以含有抗生素或可以不含有抗生素。
在另一个示例性实施方案中，可以将一种或多种酶加入至动物饲料掺合物中。在不同的实施方案中，可以加入的酶包括半乳糖苷酶、植酸酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、它们的组合、以及改善饲料组合物对于本文所述用途的有效性的任意其它酶。在又另一个实施方案中，可以将酵母、真菌(例如，曲霉或木霉（Trichoderma）)或微量营养物加入至动物饲料中。适合用于加入至用于动物饮用水的添加剂的任何上述成分可以作为如本文中所述的用于动物饮用水的添加剂的组分而加入。
在不同的示例性实施方案中，芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)或在这些芽孢杆菌菌株之外加入的任意其它不同的细菌菌株可以在饲料组合物中施用，每种菌株在约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 1012 CFU/磅饲料组合物的剂量，每种菌株在约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 107 CFU/磅饲料组合物的剂量，或在大于约5.0x 106 CFU/磅饲料组合物的剂量。在其它实施方案中，每种芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)可以在饲料组合物中施用，其剂量大于约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.1 x 103 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.25 x 103 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.5 x 103 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.75 x 103 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约2.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约3.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约4.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约5.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约6.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约7.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约8.0 x 104 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 105 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约2.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约3.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约4.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约5.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约6.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约7.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约8.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约9.0 x 106 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 107 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约2.0 x 107 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约3.0 x 107 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约4.0 x 107 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约5.0 x 107 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 108 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 109 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 1010 CFU/磅饲料组合物，其剂量大于约1.0 x 1011 CFU/磅饲料组合物，或其剂量大于约1.0 x 1012 CFU/磅饲料组合物。在本段落描述的所有实施方案中，每天可以给动物饲喂或动物可以消耗约30磅、约35磅、约40磅、约45磅、约50磅、约55磅、约60磅、约65磅或约70磅的饲料组合物。
在其它实施方案中，通过将约15克饲料添加剂加入至完全饲料组合物中，可以在饲料组合物中施用芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、300、101、235、177和102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)，其中所述15克添加剂包含所有菌株以提供在15克添加剂中每天要饲喂给动物的约1.0 x 109 CFU、约2.0 x 109 CFU、约3.0 x 109 CFU、约4.0 x109 CFU、约5.0 x 109 CFU、约6.0 x 109 CFU、约7.0 x 109 CFU、约8.0 x 109 CFU、约9.0 x109 CFU或约1.0 x 1010 CFU的总合并菌株。在本段落描述的所有实施方案中，每天可以给动物饲喂或动物可以消耗约30磅、约35磅、约40磅、约45磅、约50磅、约55磅、约60磅、约65磅或约70磅的完全饲料组合物，且可以将15克饲料添加剂加入至饲料组合物的这些量中的任一种中。
在另一个实施方案中，通过将约15克包含总计约7.0 x 109 CFU合并菌株(例如，总计约7.35 x 109 CFU)的饲料添加剂加入至每只动物每天要饲喂或消耗的例如约30磅、约35磅、约40磅、约45磅、约50磅、约55磅、约60磅、约65磅或约70磅的完全饲料组合物中，可以在饲料组合物中施用芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、300、101、235、177和102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)。
在上述芽孢杆菌菌株86、300、101、235、177和102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的任何剂量实施方案中，在用于加入至饲料组合物的饲料添加剂中可以以选自下述任何比例的示例性比例包括芽孢杆菌菌株(芽孢杆菌菌株86、300、101、235、177和102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)，其中所述比例按照该顺序是指芽孢杆菌菌株86、300、101、235、177和102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株。
1:1:1:1:1:1
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0.2:1:1:1:0.8:0.5。
在不同的实施方案中，用于根据本文描述的方法和组合物使用的芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、和/或300、和/或101、和/或235、和/或177、和/或102)可以选自芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株和具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株。芽孢杆菌菌株MDG 101和芽孢杆菌菌株MDG 235于2016年1月4日保藏在农业研究机构培养物保藏中心(Agricultural Research Service Culture Collection) (NRRL), National Centerfor Agricultural Utilization Research, Agricultural Research Service, USDA,1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604-3999，并分别给予登录号B-67218和B-67219。芽孢杆菌菌株MGL177和芽孢杆菌菌株MGL102于2016年6月7日保藏在农业研究机构培养物保藏中心(NRRL), National Center for Agricultural UtilizationResearch, Agricultural Research Service, USDA, 1815 North University Street,Peoria, Illinois 61604-3999，并分别给予登录号B-67275和B-67276。芽孢杆菌菌株MDG86和芽孢杆菌菌株MDG300于2014年3月14日保藏在农业研究机构培养物保藏中心(NRRL), National Center for Agricultural Utilization Research, AgriculturalResearch Service, USDA, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604-3999，并分别给予登录号B-50944和B-50943。NRRL菌株命名MDG86和MDG300分别等同于芽孢杆菌菌株86和300，如在本申请中提及的。NRRL菌株命名MDG 101、MDG 235、MGL177和MGL102分别等同于芽孢杆菌菌株101、235、177和102，如在本申请中提及的。所述保藏在国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约（Budapest Treaty on the InternationalRecognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of PatentProcedure）的规定下做出。本文描述的菌株可以被称作芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102或菌株86、菌株300、菌株101、菌株235、菌株177或菌株102。
芽孢杆菌菌株102和177是短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）菌株，芽孢杆菌菌株77是地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）菌株，且在本申请中描述的所有其它菌株是枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilus）菌株。
这些菌株中的任一种可以以用于动物的饲料组合物(例如，包含动物饲料掺合物的完全饲料)或饮用水的形式单独或组合施用。在一个实施方案中，将多种菌株在单一组合物中组合施用。在另一个实施方案中，将多种菌株在分开的组合物中施用。
在另一个实施方案中，在上述段落中描述的一种或多种芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、和/或芽孢杆菌菌株300、和/或芽孢杆菌菌株101、和/或芽孢杆菌菌株235、和/或芽孢杆菌菌株177、和/或芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)可以与另一种不同的细菌菌株一起施用给动物，所述另一种不同的细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。在又另一个实施方案中，在上述段落中描述的一种或多种芽孢杆菌菌株(例如，芽孢杆菌菌株86、和/或芽孢杆菌菌株300、和/或芽孢杆菌菌株101、和/或芽孢杆菌菌株235、和/或芽孢杆菌菌株177、和/或芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株)可以与对于本文描述的用途而言有效的任意其它不同的细菌菌株一起施用给动物。
本文中使用的“具有芽孢杆菌属芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的所有鉴定特征的菌株”可以是具有芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的所有鉴定特征的突变株(例如，具有基于DNA分析与芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的DNA指纹对应的DNA指纹，与芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102对应的酶活性，与芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102对应的抗微生物活性，与芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102对应的抗生素敏感性和耐受性谱)。在替代实施方案中，所述突变可以是天然的突变，或遗传工程改造的突变。在另一个实施方案中，“具有芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的所有鉴定特征的菌株”可以是例如通过如下生产的菌株：从芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102分离一个或多个质粒，并将所述一个或多个质粒引入另一种细菌，诸如另一种芽孢杆菌菌株，只要所述一个或多个质粒含有提供芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的鉴定特征(例如，基于DNA分析与芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102的DNA指纹对应的DNA指纹)的DNA。
可以将包含芽孢杆菌菌株86、和/或芽孢杆菌菌株300、和/或芽孢杆菌菌株101、和/或芽孢杆菌菌株235、和/或芽孢杆菌菌株177、和/或芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的饲料组合物或饮用水施用给动物达对于本文描述的用途而言有效的任何时间段或其组合。例如，在一个实施方案中，可以每天将饲料组合物或饮用水提供给动物。在一个替代实施方案中，可以将饲料组合物或饮用水施用给在哺乳期间和/或在妊娠期间的动物。上述饲料组合物或饮用水的施用时间段是非限制性例子，且应当理解，可以使用经确定对于本文描述的用途而言有效的任何时间段或施用计划或其组合。
在本发明的另外实施方案中，提供了包含芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的组合物。在一个实施方案中，提供了用于动物应用的商业包，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在另一个实施方案中，提供了用于动物饲料的饲料添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在又另一个实施方案中，提供了用于动物饮用水的添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在仍另一个实施方案中，提供了动物饲料组合物，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
在一个实施方案中，用于加入至动物饲料掺合物中以产生完全饲料组合物的饲料添加剂可以与动物饲料掺合物混合，例如，用自动化的微营养物递送系统，或，例如，通过手工称量和添加以实现用于以完全饲料组合物的形式施用给动物的本文描述的芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的剂量中的任一种。所述混合还可以通过本领域已知的任意其它合适的将直接饲喂的微生物与动物饲料掺合物组合以得到均匀混合物的方法完成。在不同的实施方案中，所述混合可以进行任意合适的时间段(例如，约1至约4分钟)。在其中芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株呈用于动物饮用水的添加剂的形式的实施方案中，芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株可以呈例如粉末、液体或丸粒的形式，且可以使用本领域已知的任意合适方法与饮用水混合以实现用于在动物饮用水中施用给动物的本文描述的芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177或芽孢杆菌菌株102和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的剂量中的任一种。芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株还可以以粉末、液体、胶囊、顶饰物（top-dressing）、凝胶或丸粒的形式口服地(即，通过口腔插入)直接饲喂给动物。
在本文描述的任何组合物实施方案中，芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株可以造成选自改善所述动物的繁殖性能、减少动物的死亡损失和/或断食事件、改善动物的奶产量和/或奶品质和/或抑制动物中选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位的疾病或障碍的效应。
在一个示例性的方面，饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以呈商业包的形式。在另一个示例性实施方案中，在商业包中的包含芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂可以呈包含例如约1 x 108至约7 x 1010 CFU/g的组合菌株的浓缩物或超级浓缩物(例如，约8 x 1010至约5 x 1012 CFU/g的组合菌株)的形式。在另一个实施方案中，饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂、或芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株是在商业包中的组合物中，且可以呈干燥形式(例如，粉末)、丸粒形式、液体形式、呈顶饰物形式或呈凝胶形式、呈胶囊形式、或任意其它适合形式。
在又另一个实施方案中，呈商业包形式的菌株可以例如呈干燥形式(例如，粉末或冷冻干燥形式)、呈丸粒形式或呈液体形式。
在另一个示例性实施方案中，商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以进一步包含芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的载体。所述载体可以选自麸、稻壳、盐、矿物油、糊精(例如，麦芽糊精)、乳清、糖、石灰石、干燥的淀粉、硅铝酸钠、植物油和它们的组合。在另一个实施方案中，所述载体可以是本领域已知的用于直接饲喂的微生物的任意合适的载体。在另一个实施方案中，所述商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以进一步包含粘合剂诸如粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝、葡聚糖或其它已知的粘合剂。在另一个实施方案中，所述商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以进一步包含无机/有机粘合剂、精油和/或有机酸。任何粘合剂或载体组分可以外源加入(即，并非天然地与芽孢杆菌菌株组合存在)，且本文描述的任何组合物可以存在于饮食营养组合物(例如，益生菌组合物)中。
在又其它实施方案中，包含芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物是在用于商业用途的容器中。在不同的实施方案中，所述容器可以是例如袋(例如，20-磅袋、50-磅袋、2-盎司袋、1-磅袋或1-千克袋)、囊袋、圆筒、瓶子或盒子。在示例性方面，包含芽孢杆菌菌株86、芽孢杆菌菌株300、芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株177和芽孢杆菌菌株102、和/或具有所有它们的鉴定特征的菌株的商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物的容器可以包含塑料、金属、箔、纸、纤维或卡纸板(例如，塑料桶、纸袋、箔袋、纤维圆筒等)。商业包、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以进一步包含一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
在一个方面，本文描述的任何组合物可以进一步包含外源添加的(即，并非天然地与芽孢杆菌菌株一起存在的)营养组分，其选自维生素、抗生素、酶、水溶性的或不溶于水的单糖、二糖或多糖、脂肪、磷、碳酸氢钠、石灰石、钙、钠、硫、镁、钾、铜、铁、锰、锌、鱼油、原始种子、抗氧化剂和淀粉。在一个实施方案中，所述外源添加的营养组分可以是酶，且所述酶可以选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
下述实施例仅用于示例性目的。所述实施例是非限制性的，并且无意以任何方式限制本发明。
实施例1
现场试验
现场试验的目的是，在具有高于消化问题的平均发生率的700-母牛上中西部Holstein牛奶农场，确定用芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)进行的补充对母牛健康、奶产量和繁殖参数的影响。
试验设计和方法
以芽孢杆菌补充前3个月的时期充当基线，通过Dairy Comp 305 (ValleyAgricultural Software, Tulare, CA)监测整个牛群的生产、繁殖和健康指标。然后关于奶产量、奶组分、健康和繁殖性能监测整个牛群10个月，在这期间母牛每天接受芽孢杆菌补充，测量每周单头母牛奶产量、每月DHIA奶组分和每月健康事件。在芽孢杆菌补充期间，母牛每天接受15克芽孢杆菌产品以提供在标准的基于玉米青贮饲料和苜蓿干草的全混合日粮内的每天每头7.35 x 109菌落形成单位(CFU)的活芽孢杆菌。在连续年中在6个月时期中评价繁殖指标，在这期间将芽孢杆菌补充前与芽孢杆菌补充后对比以控制季节性变化。
统计分析
通过SAS的MIXED程序（版本9.2 SAS Institute, Cary N.C.）分析生产和组分数据，以产奶天数（DIM）作为协变量，寻找处理的固定效果以及处理*月*年的相互作用。通过SAS的GLIMMIX程序评价健康和繁殖指标。以p≤0.05定义均值之间的显著性，并且当p≤0.1时指示趋势。
结果
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)降低了皱胃异位、酮病和子宫炎疾病在产后母牛中的发生率。
表1. 处理对经历疾病的产后母牛的平均百分比的影响.
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)在整个牛群中增加了乳脂肪百分比和总能量校正的奶。
表2. 处理对平均奶组分百分比和每天能量校正的奶产量的影响.
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)改善了牛群中的繁殖指标，如每次受孕更少的服务、更高的发情检出、受孕率和21-天妊娠率所证实的。
表3. 处理对繁殖效率指标的影响.
实施例2
现场试验
现场试验的目的是，在具有高于消化问题的平均发生率和空肠出血性综合征病史的美国西部山区（Mountain-West）区域的14,000-母牛牛奶场，确定用芽孢杆菌菌株86(NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)进行的补充对直肠微生物群体、母牛健康和奶产量的影响。
试验设计和方法
将直接饲喂的芽孢杆菌微生物补充给在爱达荷州（Idaho）牛奶场的母牛6个月的时期。在芽孢杆菌补充时期中，母牛每天接受15克芽孢杆菌产品以提供在标准的基于玉米青贮饲料和苜蓿-窖藏半干草饲料的全混合日粮内的每天每头7.35 x 109菌落形成单位(CFU)的活芽孢杆菌。在DFM补充之前，通过直肠刮拭对40头随机选择的母牛取样以建立胃肠相关的细菌和真菌标志物和毒力基因的基线量。跟踪相同的宿主动物(n=37)，在芽孢杆菌补充实施后60天重复取样。从新鲜直肠拭子分离基因组DNA，定量，并使用在表4中提及的引物和qPCR条件进行qPCR用于定量靶基因。
表4. 通过定量PCR (qPCR)测量的微生物和相关基因靶标.
以芽孢杆菌补充前6个月的时期充当基线，通过Dairy Comp 305 (ValleyAgricultural Software, Tulare, CA)对整个牛群监测生产和健康指标。然后，对于接下来的6个月，整个牛群接受每天芽孢杆菌补充，并使用每周单头母牛奶产量和每月健康事件对其监测奶产量和健康事件。在相同的时间段中对母牛的子集(n = 1055)每月评价乳脂肪和蛋白。
统计分析
在Minitab v.17 (State College, PA)中使用单因素方差分析和Tukey成对比较，对微生物基因量进行log10转化并分析芽孢杆菌处理的显著影响。以p≤0.05定义均值之间的显著性，并在p≤0.1时指示趋势。通过SAS的MIXED程序（版本9.2 SAS Institute,Cary N.C.)分析生产和组分数据，以产奶天数（DIM）作为协变量，寻找处理的固定效果以及处理*月*年的相互作用。通过SAS的GLIMMIX程序评价健康和繁殖指标。以p≤0.05定义均值之间的显著性，并在p≤0.1时指示趋势。
结果
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)减少了不希望的微生物群体的胃肠携带。具体地，单头母牛的纵向跟踪揭示，在60天的芽孢杆菌补充以后，肠病原性和肠出血性大肠杆菌的总大肠杆菌(16S)、热不稳定的肠毒素基因(LT)以及紧密粘附素附着和消除基因(eaeA)的直肠量显著减少。真菌曲霉(18S)基因的量在补充后也减少(p<0.05)，且产气荚膜梭菌α和β毒素基因(分别cpa和cpb)的量在芽孢杆菌补充过程中在数值上减小(图1)。饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRLB-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)导致在产后母牛中降低的生乳热(低血钙症)发生率(表5)以及整个牛群断食中的母牛数目的减少(表5)。
表5. 处理对经历疾病的母牛的平均百分比的影响.
与芽孢杆菌补充前6个月相比，饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)导致显著增加的乳脂肪和蛋白百分比(表6)，其进而改善能量校正的奶产量(表6)。
表6. 处理对平均奶组分百分比和每天能量校正的奶产量的影响.
实施例3
5个现场试验的元分析
该研究的目的是确定芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300(NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)向5个美国奶牛群的补充对围产期母牛健康、牛群死亡损失、流产率、奶品质、奶组分和奶产量的影响。
试验设计和方法
以芽孢杆菌补充前3个月的时期充当基线，通过Dairy Comp 305 (ValleyAgricultural Software, Tulare, CA)或PCDART (DRMS, Raleigh, NC)软件，对代表20,000头母牛的5个牛群监测生产、繁殖和健康指标。然后监测牛群3个月，在这期间母牛接受每天芽孢杆菌补充，测量每周单头母牛奶产量、每月DHIA奶组分和每月健康事件。在芽孢杆菌补充时期中，母牛每天接受15克芽孢杆菌产品以提供在基于玉米青贮饲料的全混合日粮内的每天每头7.35 x 109菌落形成单位(CFU)的活芽孢杆菌。
统计分析
使用产奶天数和农场作为协变量，以处理的固定效果以及处理*月*年的相互作用，通过SAS的MIXED程序分析奶产量和组分数据。通过SAS的GLIMMIX程序评价健康和繁殖指标。
结果
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)导致显著降低的胎盘滞留和酮病的发生率，所述胎盘滞留和酮病是在围产期奶牛中的重要健康挑战(表7)。总牛群死亡损失在芽孢杆菌补充期间中也较低。
表7. 处理对围产期母牛疾病事件和总牛群死亡损失的平均百分比的影响.
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)导致显著增加的乳脂肪和蛋白百分比(表8)。在芽孢杆菌消耗过程中，能量校正的奶产量增加了2.47磅/母牛/天。另外，在芽孢杆菌补充期间，体细胞计数、乳腺的细菌感染指标和奶品质的度量也下降(表8)。
表8. 处理对平均奶体细胞计数、奶组分百分比和每天能量校正的奶产量的影响.
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)改善了牛群中的繁殖指标，如更少的流产所证实的（表9）。
表9. 处理对流产的平均百分比的影响.
实施例4
DFM菌株的RAPD (随机扩增多态性DNA)分析
为了获得本文所述的芽孢杆菌菌株的遗传条形码或“指纹”，对每种菌株进行RAPD(随机扩增多态性DNA)分析。将每种分离物在10 ml胰蛋白酶大豆液体培养基中在32℃培养过夜。此后，按照针对革兰氏阳性细菌提供的方案，使用Qiagen的DNeasy Mini试剂盒从这些培养物中提取DNA。使用GE Healthcare Illustra Ready-To Go RAPD试剂盒对每个DNA样品进行RAPD-PCR以扩增任意长度的基因片段。用于RAPD-PCR分析的RAPD引物包括以下：引物1 (5'-GGTGCGGGAA-3)；引物2 (5'-GTTTCGCTCC3')；和引物3 (5'-GTAGACCCGT-3)。通过凝胶电泳分离PCR产物，并使用BioNumerics软件检测并匹配条带模式。如在图2-6中所示，在DFM菌株之间未观察到共同的DNA指纹。因此，图2-6证实，本文所述的DFM菌株是不同的菌株，每个菌株具有独特的DNA指纹。
实施例5
现场试验
该现场试验的目的是，在具有平均繁殖效率指标的870-母牛中央Texas Holstein牛奶农场，确定用芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)进行的补充对母牛繁殖参数的影响。
试验设计和方法
通过Dairy Comp 305 (Valley Agricultural Software, Tulare, CA)监测整个牛群的繁殖指标。母牛以7.5克芽孢杆菌产品的比率接受每天芽孢杆菌补充，以提供在标准的基于玉米青贮饲料、干草和窖藏半干草饲料的全混合日粮内的每天每头3.68 x 109菌落形成单位(CFU)的活芽孢杆菌。在开始芽孢杆菌补充后，在6个月时期(11月至4月)中计算和测量受孕率、每次受孕的服务、21-天妊娠率和发情检出率。来自前一年的相同的6个月时间段(11月至4月)用作基线(芽孢杆菌补充前)以控制季节性变化。
统计分析
通过SAS的PROC MIXED程序（版本9.2 SAS Institute, Cary N.C.)评价繁殖指标。以p≤0.05定义均值之间的显著性，并在p≤0.1时指示趋势。
结果
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)改善了牛群中的繁殖度量，如每次受孕更少的服务、更高的受孕和21-天妊娠率所证实的。
表10. 处理对繁殖效率指标的影响
实施例6
现场试验
现场试验的目的是，在具有出血性肠综合征(HBS)的几个散发病例的370-母牛上中西部健康Holstein牛奶农场，确定用芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)进行的补充对母牛健康和奶产量参数的影响。
试验设计和方法
母牛以15克芽孢杆菌产品的比率接受每天芽孢杆菌补充，这对应于在标准的基于玉米青贮饲料和苜蓿干草的全混合日粮内的每天每头7.35 x 109菌落形成单位(CFU)的活芽孢杆菌。通过Dairy Comp 305 (Valley Agricultural Software, Tulare, CA)对整个牛群监测生产和健康指标。在芽孢杆菌补充前4个月（充当基线）和开始芽孢杆菌补充后4个月，收集奶产量、奶组分和健康事件数据。在开始芽孢杆菌补充前5个月收集反刍数据以充当基线，并与芽孢杆菌补充后5个月进行对比。
统计分析
以处理*月*年和处理作为主效果，使用产奶天数(DIM)作为协变量，使用统计分析系统(Statistical Analysis System，SAS)软件的PROC MIXED分析奶产量和奶组分数据。以处理的主效果，使用SAS的PROC GLIMMIX分析健康事件数据。使用处理作为主效果和用N作为协变量，通过PROC MIXED分析反刍数据。以p≤0.05定义均值之间的显著性，并当p≤0.1时指示趋势。
结果
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219) 4个月降低了整个牛群中肺炎的发生率。
表11. 处理对经历肺炎的产后母牛或整个牛群的平均百分比的影响
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)增加了整个牛群中的每日反刍。
表12. 处理对平均反刍的影响
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)增加了奶产量、乳脂肪百分比以及乳脂肪和乳蛋白的磅数，从而导致整个牛群中增加的总脂肪校正的奶以及能量校正的奶。
表13. 处理对平均奶产量、奶组分百分比和每天能量校正的奶产量的影响
饲喂芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、芽孢杆菌菌株177(NRRL B-67275)和芽孢杆菌菌株235 (NRRL B-67219)降低了在奶中存在的体细胞计数对数。
表14. 处理对平均体细胞计数对数的影响。
Claims (24)
1.一种改善动物的繁殖性能的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的繁殖性能。
2.一种减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株减少动物的死亡损失和/或减少动物的断食事件。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物是猪物种，且所述猪物种选自生长完成猪、保育猪、母猪和种畜猪。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物是产奶动物。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述产奶动物选自母牛、山羊、绵羊或水牛。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述芽孢杆菌菌株生产选自以下的酶：α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶和它们的组合。
8.根据权利要求1所述的方法，所述方法另外包括给所述动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株和它们的组合。
9.根据权利要求1所述的方法，其中以约1.0 x 103 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 1012CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
10.根据权利要求1所述的方法，其中以约0.5 x 107 CFU/磅饲料组合物至约5.0 x 107CFU/磅饲料组合物的剂量在所述饲料组合物中施用每种芽孢杆菌菌株。
11.根据权利要求1所述的方法，所述方法另外包括给所述动物施用抗生素的步骤。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗生素选自红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、达托霉素、利福平、泰洛星、替米考星、万古霉素、莫能星、拉沙洛西和丙酸来洛霉素。
13.根据权利要求1所述的方法，所述方法另外包括给所述动物施用酶的步骤，所述酶选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶和它们的组合。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物是母牛且在哺乳期中施用所述芽孢杆菌菌株。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物是母牛且在妊娠期中施用所述芽孢杆菌菌株。
17.根据权利要求1所述的方法，其中每天给所述动物施用所述芽孢杆菌菌株。
18.根据权利要求1所述的方法，其中所述繁殖性能的改善选自受孕服务次数的减少、发情检出的增加、受孕率的增加、流产的减少和妊娠率的增加。
19.一种改善产奶动物的奶产量和/或奶品质的方法，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177(NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株改善所述动物的奶产量和/或奶品质。
20.一种抑制产奶动物中的疾病或障碍的方法，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位，所述方法包括给所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)、具有芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)的所有鉴定特征的菌株和它们的组合，其中所述芽孢杆菌菌株抑制所述产奶动物中的疾病或障碍，其中所述疾病或障碍选自生乳热、酮病、胎盘滞留、子宫炎、肺炎和皱胃异位。
21.一种用于动物应用的商业包，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
22.一种用于动物饲料的饲料添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
23.一种用于动物饮用水的添加剂，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101(NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
24.一种动物饲料组合物，其包含所有分离的菌株，所述分离的菌株包括芽孢杆菌菌株86 (NRRL号B-50944)、芽孢杆菌菌株300 (NRRL号B-50943)、芽孢杆菌菌株101 (NRRL号B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL号B-67219)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL号B-67275)和芽孢杆菌菌株102 (NRRL号B-67276)。
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