CN118102881A - 治疗足皮炎的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于动物的肠球菌物种抑制的直接饲喂的微生物。更特别地，本发明涉及分离的芽孢杆菌菌株A12、681、101、235、177、86和300，以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株，其用于包括上述提及的用途的用途。本发明还涉及使用分离的芽孢杆菌菌株A12、681、101、235、177、86和300，以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株来预防或减少或控制动物的足皮炎(足垫病)。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35USC§119(e)要求2021年7月29日提交的美国临时申请序列号63/227,069的权益，其全部公开内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及用于动物的肠球菌(Enterococcus)物种抑制的直接饲喂的微生物。更特别地，本发明涉及分离的芽孢杆菌(Bacillus)菌株A12、681、101、235、177、86和300，以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株，其用于包括上述提及的用途的用途。本发明还涉及使用分离的芽孢杆菌菌株A12、681、101、235、177、86和300，以及具有这些菌株的所有鉴定特征的菌株来预防或减少或控制动物的足皮炎(足垫病)。
背景技术
动物的爪上的足皮炎或坏死性病变的发展会影响动物的福利，并可能影响动物生产力和动物肉的质量，造成重要的经济损失。此外，因为动物爪作为一种传统美食而广受欢迎，因此在国际市场上是一种重要商品，足皮炎的存在阻碍了受影响动物的出口，因为进口国不接受脚部受伤的动物。足皮炎被认为是由包括饮水器设计或管理不佳、饮食组成、房屋温度和湿度水平、垫料类型、质量和数量以及肠道健康在内的因素的组合引起的。垫料中高水平的水分也被认为是至关重要的，并且最近有证据表明细菌参与足皮炎。在家禽中，爪病变与革兰氏阳性球菌，特别是肠球菌和葡萄球菌(Staphylococcus)物种的全身感染相关联。尽管已经报道了若干种在预防或治疗足垫病变方面提供一定效果的措施(酶、生物素、锌和甲硫氨酸)，但这些措施缺乏充分的有效性，致使畜牧业寻找替代品。
肠球菌是革兰氏阳性细菌，其通常栖息在动物(比如家禽)的胃肠道。肠球菌的传播是经由口腔和/或气溶胶途径以及从皮肤伤口传播，并且发现粪肠球菌(E.faecalis)天然具有高水平的抗生素抗性，且其有助于粪肠球菌的致病性。在肉种鸡中，爪病变与包括粪肠球菌在内的革兰氏阳性球菌的全身感染相关联。粪肠球菌还与肉鸡的心内膜炎特别相关，而其他肠球菌与肉鸡和肉种鸡群的关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死有关。减少胃肠道或垫料中肠球菌的数量是减少传播的起点。本发明人已经证明，特定的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRL No.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)可抑制来自垫料(比如家禽垫料)的粪肠球菌分离株的生长。
申请人已开发出产生肠球菌抑制的直接饲喂的微生物。本文所述的直接饲喂的微生物和包含直接饲喂的微生物的组合物通过提供动物(比如农业动物)的肠球菌抑制而提供商业益处。此外，本文所述的直接饲喂的微生物组合物导致抗生素使用的减少或消除，这降低了动物饲料的总成本并减少了抗生素抗性的发展。申请人还开发了用于减少或预防动物(比如农业动物)的足皮炎的直接饲喂的微生物。
提供了用于抑制动物的肠球菌的方法和组合物。在各种实施方案中，动物可选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。在动物是家禽物种的实施方案中，家禽物种可选自肉鸡、鸡、蛋鸡、种鸡、火鸡、火鸡雏、幼鹅、鸭雏、珍珠鸡、青年母鸡、母鸡、公鸡、青年公鸡和阉鸡。在动物是猪物种的实施方案中，猪物种可选自生长肥育猪、保育猪、母猪和种猪。
在各种实施方案中，用于本文所述方法的组合物可以是用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的商业包装、用于动物饲料组合物的饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物(例如全价饲料)，其每种均包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRLNo.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
在一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRLNo.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株引起动物的肠球菌抑制。
在另一个实施方案中，提供了一种控制肠球菌的有害影响的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
在又一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRLNo.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株预防或减少动物的足皮炎。
在又一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
以下条款及其组合提供了本文所述的本发明的各种另外的说明性方面。本专利申请的任何其他部分(包括标题为“具体实施方式”的部分和实施例)中描述的各种实施方案可应用于以下编号条款中描述的本发明的任何以下实施方案。
1.一种饲喂动物的方法，该方法包括向所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株引起动物的肠球菌抑制。
2.根据条款1的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
3.根据条款2的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
4.根据条款1至3中任一项的方法，其中肠球菌抑制预防动物的肠球菌疾病。
5.根据条款1至3中任一项的方法，其中肠球菌抑制减少动物的肠球菌疾病。
6.根据条款1至5中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
7.根据条款1至6中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
8.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
9.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
10.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
11.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
12.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
13.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
14.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
15.根据条款1至14中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
16.根据条款1至14中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
17.根据条款1至16中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
18.根据条款1至17中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
19.根据条款18的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
20.根据条款1至19中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
21.根据条款1的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
22.根据条款1至7或15至21中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
23.一种控制肠球菌的有害影响的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
24.根据条款23的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
25.根据条款24的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
26.根据条款23至25中任一项的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括预防动物的肠球菌疾病。
27.根据条款23至25中任一项的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括减少动物的肠球菌疾病。
28.根据条款23至27中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
29.根据条款23至28中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
30.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
31.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
32.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
33.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
34.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
35.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
36.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
37.根据条款23至36中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
38.根据条款23至36中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
39.根据条款23至38中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
40.根据条款23至39中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
41.根据条款40的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
42.根据条款23至41中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
43.根据条款23的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
44.根据条款23至29或37至43中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
45.一种饲喂动物的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包括选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株预防或减少动物的足皮炎。
46.根据条款45的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
47.根据条款46的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
48.根据条款45至47中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到预防。
49.根据条款45至47中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到减少。
50.根据条款45至49中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
51.根据条款45至50中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
52.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
53.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
54.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
55.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
56.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
57.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
58.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
59.根据条款45至58中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
60.根据条款45至58中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
61.根据条款45至60中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
62.根据条款45至61中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
63.根据条款62的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
64.根据条款45至63中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
65.根据条款45的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
66.根据条款45至51或59至65中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
67.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的商业包装，其中商业包装包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRLNo.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
68.一种用于动物饲料的饲料添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
69.一种用于动物饮用水的饲料添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
70.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的动物饲料组合物，其中饲料组合物包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
71.根据条款68或69的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为浓缩物的形式。
72.根据条款68或69的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为超浓缩物形式。
73.根据条款68至72中任一项的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其为干燥形式。
74.根据条款70的饲料组合物，其为丸粒形式。
75.根据条款67的商业包装，其中菌株的形式选自粉末、液体和丸粒形式。
76.根据条款67至75中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含芽孢杆菌菌株的载体。
77.根据条款76的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中载体选自麸、稻壳、盐、糊精及其组合。
78.根据条款67至77中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在袋中。
79.根据条款78的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中袋是塑料袋。
80.根据条款67至79中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
81.根据条款67至80中任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其在20磅袋中。
82.根据条款67至80中任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其在50磅袋中。
83.根据条款68、69、71至73或76至82中任一项的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为粉末形式。
84.根据条款68、69、71至72或76至82中任一项的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂其为液体形式。
85.根据条款67至84中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在用于商业用途的容器中。
86.根据条款85的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中容器包含塑料。
87.根据条款85的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中容器包含纸。
88.根据条款67至87中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含粘合剂。
89.根据条款88的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中粘合剂选自粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝和葡聚糖或其组合。
90.一种饲喂动物的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包括分离的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
91.根据条款90的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
92.根据条款91的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
93.根据条款90至92中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到预防。
94.根据条款90至92中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到减少。
95.根据条款90至94中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
96.根据条款90至95中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
97.根据条款90至96中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
98.根据条款90至96中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
99.根据条款90至98中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
100.根据条款90至99中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
101.根据条款100的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
102.根据条款90至101中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
103.根据条款90的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
附图说明
图1显示了肉鸡在42日龄时的足垫病变评分(P<0.05)。
图2显示了肉鸡在42日龄时的足垫病变评分分布。
图3显示了肉鸡在41日龄时的足垫病变评分(P<0.05)。
图4显示了肉鸡在41日龄时的足垫病变评分分布。
图5A显示了681和721菌株的RAPD测试结果。图5B显示了A12和54菌株的RAPD测试结果。在图5A中，第一泳道具有分子量梯状标志，且每个泳道子集代表所使用的六个不同引物集，并且在每个子集中，泳道A代表专利菌株，泳道B代表菌株681，且泳道C代表菌株721。在图5B中，每个泳道子集代表两个菌株，A12和54，并且在每个子集中，泳道P1-P6代表所使用的六个不同的引物集和一个分子梯状标志。
图6显示了展示芽孢杆菌菌株86和300的RAPD PCR图像(引物1至6)的凝胶照片。顶部的图像为菌株86，而底部的图像为菌株300。最左边和最右边的泳道具有标记，并且标记之间的每两个连续泳道的集合从左到右对应于引物1至6。
图7显示了展示芽孢杆菌菌株101的RAPD PCR图像(引物1至6)的凝胶照片。对于引物1，在大约1000、1500和大于1600个碱基对处出现模糊条带。对于引物2，在650个碱基对处出现强条带，并且在大约400个碱基对处出现模糊条带。对于引物3，在大约400个碱基对处出现模糊条带，在600和700个碱基对处出现模糊双条带，并且在1000和1400个碱基对处出现模糊条带。
图8显示了展示芽孢杆菌菌株177的RAPD PCR图像(引物2和3)的凝胶照片。对于引物2，在600、700和1000个碱基对处出现强条带。对于引物3，在600个碱基对处出现强条带，在700和750个碱基对处出现双条带，在900和1100个碱基对处出现双条带，并且在400和大于1800个碱基对处出现模糊条带。
图9显示了展示芽孢杆菌菌株235的RAPD PCR图像(引物1至6)的凝胶照片。对于引物1，在大约1000和大于1600个碱基对处出现模糊条带。对于引物2，在650个碱基对处出现强条带，且在大约400个碱基对出现模糊条带。对于引物3，在大约400、600、1000和1400个碱基对处出现模糊条带。
具体实施方式
提供了用于抑制动物(例如农业动物)的肠球菌的方法和组合物。在各种实施方案中，用于本文所述方法的组合物可以是用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的商业包装、用于动物饲料组合物的饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或动物饲料组合物(例如全价饲料)，其每种均包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
在一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRLNo.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株引起动物的肠球菌抑制。
在另一个实施方案中，提供了一种控制肠球菌的有害影响的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
在又一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRLNo.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株预防或减少动物的足皮炎。
在又一个实施方案中，提供了一种饲喂动物的方法。该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
以下条款及其组合提供了本文所述的本发明的各种另外的说明性方面。在标题为“具体实施方式”的这部分中描述的各种实施方案可应用于以下编号条款中描述的本发明的任何以下实施方案。
1.一种饲喂动物的方法，该方法包括向所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株引起动物的肠球菌抑制。
2.根据条款1的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
3.根据条款2的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
4.根据条款1至3中任一项的方法，其中肠球菌抑制预防动物的肠球菌疾病。
5.根据条款1至3中任一项的方法，其中肠球菌抑制减少动物的肠球菌疾病。
6.根据条款1至5中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
7.根据条款1至6中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
8.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
9.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
10.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
11.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
12.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
13.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
14.根据条款1至7中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
15.根据条款1至14中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
16.根据条款1至14中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
17.根据条款1至16中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
18.根据条款1至17中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
19.根据条款18的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
20.根据条款1至19中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
21.根据条款1的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
22.根据条款1至7或15至21中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
23.一种控制肠球菌的有害影响的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
24.根据条款23的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
25.根据条款24的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
26.根据条款23至25中任一项的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括预防动物的肠球菌疾病。
27.根据条款23至25中任一项的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括减少动物的肠球菌疾病。
28.根据条款23至27中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
29.根据条款23至28中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
30.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
31.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
32.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
33.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
34.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
35.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
36.根据条款23至29中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
37.根据条款23至36中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
38.根据条款23至36中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
39.根据条款23至38中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
40.根据条款23至39中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
41.根据条款40的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
42.根据条款23至41中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
43.根据条款23的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
44.根据条款23至29或37至43中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
45.一种饲喂动物的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包括选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中芽孢杆菌菌株预防或减少动物的足皮炎。
46.根据条款45的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
47.根据条款46的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
48.根据条款45至47中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到预防。
49.根据条款45至47中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到减少。
50.根据条款45至49中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
51.根据条款45至50中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
52.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)或具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株。
53.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B-67515)或具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株。
54.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株300(NRRLNo.B-50943)或具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株。
55.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株。
56.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株。
57.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)或具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株。
58.根据条款45至51中任一项的方法，其中施用的菌株是芽孢杆菌菌株177(NRRLNo.B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株。
59.根据条款45至58中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
60.根据条款45至58中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
61.根据条款45至60中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
62.根据条款45至61中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
63.根据条款62的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
64.根据条款45至63中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
65.根据条款45的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
66.根据条款45至51或59至65中任一项的方法，其中施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
67.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的商业包装，其中商业包装包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRLNo.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
68.一种用于动物饲料的饲料添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
69.一种用于动物饮用水的饲料添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
70.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的动物饲料组合物，其中饲料组合物包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
71.根据条款68或69的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为浓缩物的形式。
72.根据条款68或69的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为超浓缩物形式。
73.根据条款68至72中任一项的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其为干燥形式。
74.根据条款70的饲料组合物，其为丸粒形式。
75.根据条款67的商业包装，其中菌株的形式选自粉末、液体和丸粒形式。
76.根据条款67至75中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含芽孢杆菌菌株的载体。
77.根据条款76的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中载体选自麸、稻壳、盐、糊精及其组合。
78.根据条款67至77中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在袋中。
79.根据条款78的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中袋是塑料袋。
80.根据条款67至79中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
81.根据条款67至80中任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其在20磅袋中。
82.根据条款67至80中任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其在50磅袋中。
83.根据条款68、69、71至73或76至82中任一项的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为粉末形式。
84.根据条款68、69、71至72或76至82中任一项的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂其为液体形式。
85.根据条款67至84中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在用于商业用途的容器中。
86.根据条款85的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中容器包含塑料。
87.根据条款85的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中容器包含纸。
88.根据条款67至87中任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含粘合剂。
89.根据条款88的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中粘合剂选自粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝和葡聚糖或其组合。
90.一种饲喂动物的方法，该方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包括分离的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
91.根据条款90的方法，其中动物选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。
92.根据条款91的方法，其中动物是家禽物种，且家禽物种为肉鸡。
93.根据条款90至92中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到预防。
94.根据条款90至92中任一项的方法，其中动物的肠球菌疾病得到减少。
95.根据条款90至94中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
96.根据条款90至95中任一项的方法，其进一步包括向动物施用另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
97.根据条款90至96中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
98.根据条款90至96中任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。
99.根据条款90至98中任一项的方法，其进一步包括向动物施用抗生素的步骤。
100.根据条款90至99中任一项的方法，其进一步包括向动物施用选自以下的酶的步骤：半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合。
101.根据条款100的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
102.根据条款90至101中任一项的方法，其中每天向动物施用饲料组合物。
103.根据条款90的方法，其中动物选自鸡、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。
在各种实施方案中，施用本文所述的饲料添加剂、饲料组合物或饮用水的动物可选自家禽物种、猪物种、山羊物种、牛物种、绵羊物种、马物种和伴侣动物。在动物是伴侣动物的实施方案中，伴侣动物可以是例如犬物种或猫物种。在动物是猪物种的实施方案中，猪物种可以选自生长肥育猪、保育猪、母猪和种猪。在各种示例性实施方案中，动物可以选自鸡(例如肉鸡或蛋鸡)、猪、马、矮种马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭及其组合。在另一个实施方案中，本文所述的饲料添加剂、饲料组合物或饮用水可施用于人。
在另一个实施方案中，芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRLNo.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRLNo.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合可以减少从动物产生的肉制品(包括动物足)的有害细菌的污染。
在本文所述的方法、商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于饮用水的添加剂的各种实施方案中，芽孢杆菌菌株可具有选自以下的作用：维持动物肠道中的微生物平衡、预防或减少动物的肠球菌疾病(例如比如肉鸡或其他农业动物或伴侣动物的足皮炎、心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死)、改善动物生产性能或健康、维持动物的肠道健康、减少动物肠道中的有害病原体、减少气味、减少动物尿液或粪便中的有害病原体以及保护动物肠道中有益细菌的生长。
在本文所述的任何实施方案中，芽孢杆菌菌株可以是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌株(例如菌株86、300、101、235、A12和681)，或短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)菌株(例如菌株177)。在一个实施方案中，芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
在本文所述的任何实施方案中，芽孢杆菌菌株可以单独或以任何组合施用，或者可以是本文所述的任何组合物的形式，使得菌株单独或以任意组合在本文所述的组合物中。本文所述的芽孢杆菌菌株也可与其他微生物菌株组合使用，包括其他芽孢杆菌菌株或乳酸杆菌(Lactobacillus)菌株。
在本发明的一个实施方案中，可以施用有效量的芽孢杆菌菌株以抑制动物的肠球菌疾病。如本文所用，“抑制肠球菌”疾病可以指减少肠球菌疾病(例如比如肉鸡或其他农业动物或伴侣动物的足皮炎、心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死)、预防肠球菌疾病、维持动物的正常微生物平衡、减少动物中有害肠球菌的数量、降低动物中肠球菌的活性或减少动物中肠球菌疾病的症状，或其组合。“有效量”是指能够通过任何机制如上所述抑制肠球菌或能够控制肠球菌的有害影响的芽孢杆菌菌株(例如菌株A12、681、86、300、101、177或235)的量。
对于涉及减少或预防动物的足皮炎的方法，“减少”或“预防”可指减少足皮炎、预防足皮炎或减少动物中足皮炎的症状，或其组合。对于涉及减少或预防动物的足皮炎的方法，“有效量”的芽孢杆菌菌株是指能够通过任何机制减少或预防足皮炎的量。在其他实施方案中，芽孢杆菌菌株的“有效量”是指能够通过任何机制控制肠球菌的有害影响的量，其中有害影响可以是例如足皮炎。
在涉及“控制肠球菌的有害影响”的实施方案中，“控制肠球菌的有害影响”可以指减少肠球菌疾病(例如比如肉鸡或其他农业动物或伴侣动物的足皮炎、心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死)、预防肠球菌疾病、维持动物中的正常微生物平衡、减少动物中有害肠球菌的数量、降低动物中肠球菌的活性或减少动物中肠球菌疾病的症状，或其组合。“有效量”是指能够通过任何机制如上所述控制肠球菌的有害影响的芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或大肠杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或称芽孢杆菌菌株177)的量。
在将包含芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株的本发明组合物施用于动物的本文所述的实施方案中，组合物优选在饲料组合物或饮用水中口服施用给动物，但可以使用本领域技术人员已知的任何有效的施用方法，比如在糊剂、液体兽用顿服药、表肥(top dress)或胶囊中。在一个说明性实施方案中，芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株，以添加剂的形式提供，用于添加到动物饮用水中。在另一个实施方案中，菌株可以用作垫料处理。
在另一个说明性实施方案中，芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株以饲料添加剂的形式提供，用于添加到饲料组合物中。饲料组合物可含有与动物饲料共混物(包括任何本领域公认的动物饲料共混物或本文所述的任何动物饲料共混物)混合的芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株。如本文所用，“饲料组合物”或“动物饲料组合物”是指包含与动物饲料共混物混合的芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株，以及任选的可用于饲料组合物中的任何其他组分(包括其他细菌菌株，比如其他芽孢杆菌菌株或乳酸杆菌菌株)的饲料组合物。在一个实施方案中，饲料组合物可以是粗磨粉(ground meal)的形式。
任何动物饲料共混物，包括本领域已知的和本文所述的那些，都可以根据本专利申请中所述的方法和组合物使用，比如菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、玉米粕、大麦、小麦、青贮饲料和半干青贮料。在各种实施方案中，动物饲料共混物可以补充有芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株，但其他成分可以任选地添加到动物饲料共混物中，包括其他细菌菌株，比如其他芽孢杆菌菌株或乳酸杆菌菌株。
在各种说明性实施方案中，动物饲料共混物的任选成分包括糖和复杂碳水化合物，比如水溶性和水不溶性单糖、二糖和多糖。其他任选成分包括干酒糟谷物可溶物、脂肪(例如粗脂肪)、磷、碳酸氢钠、石灰石、盐、植酸盐、钙、钠、硫、镁、钾、铜、铁、锰、锌、灰分、鱼油、源自鱼粉的油、生种子(例如亚麻籽)、抗氧化剂和淀粉。在另一个实施方案中，可以添加为矿物质预混料的形式的矿物质。
可添加到动物饲料共混物中的任选氨基酸成分为精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸乙酯盐酸盐(tyrosine ethyl HCl)、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、半胱氨酸乙酯盐酸盐(cysteine ethyl HCl)及其类似物和盐。可任选添加的维生素是盐酸硫胺素、核黄素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、肌醇、氯化胆碱、泛酸钙、生物素、叶酸、抗坏血酸和维生素A、B、K、D、E等。在另一个实施方案中，维生素可以以维生素预混物的形式添加。在另一个实施方案中，可以将蛋白质成分添加到动物饲料共混物中，并且包括从肉粉、骨粉或鱼粉、液体或粉末状鸡蛋、鱼可溶物、粗蛋白质等获得的蛋白质。
在另一个说明性方面，可以将本领域已知的任何药物成分添加到动物饲料共混物中或添加到用于动物饮用水的添加剂中，比如抗生素。在各种实施方案中，抗生素选自氨苄青霉素、氯霉素、环丙沙星、克林霉素、四环素、金霉素、DenagardTM(即泰妙菌素)、BMDTM(即亚甲基二水杨酸杆菌肽)、CarbadoxTM(即卡巴多司)、StafacTM(即维吉尼霉素)、红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄氨嘧啶、达托霉素、利福平、TylanTM(即泰乐菌素)、PulmotilTM(即替米考星)、万古霉素及其组合。在另一个实施方案中，动物饲料共混物、饲料组合物、饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂可以不含抗生素。
在另一个说明性实施方案中，可以将一种或多种酶添加到动物饲料共混物中。在各种实施方案中，可添加的酶包括半乳糖苷酶、植酸酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、其组合以及改善用于肠球菌抑制或控制肠球菌的有害影响或预防或减少动物的足皮炎或控制动物中足皮炎的有害影响的饲料组合物的有效性的任何其他酶。在另一个实施方案中，可以将酵母、真菌(例如曲霉属(Aspergillus)或木霉属(Trichoderma))或微量营养素添加到动物饲料中。适合于添加到用于动物饮用水的添加剂中的任何上述成分可以作为如本文所述的用于动物饮用水的添加剂的组分添加。
在各种说明性实施方案中，芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株)或除芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株之外添加的任何其他细菌菌株，可以以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量或以约1.0×103CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。在其他实施方案中，芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株)以大于约1.0×103CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.1×103CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.25×103CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.5×103CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.75×103CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约2.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约3.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约4.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约5.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约6.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约7.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约8.0×104CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×105CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×106CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×108CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×109CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×1010CFU/克饲料组合物的剂量、以大于约1.0×1011CFU/克饲料组合物的剂量或以大于约1.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。在又一个实施方案中，芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株)以约7.3×104CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。在另一个实施方案中，芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株)或除芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株之外添加的任何其他细菌菌株，可以以约1.0×102CFU/克饲料组合物至约5.0×1012CFU/克饲料组合物的剂量或以约1.0×102CFU/克饲料组合物至约1.0×107CFU/克饲料组合物的剂量或以大于约1.0×102CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中施用。在另一个实施方案中，在菌株在动物饮用水中施用的实施方案中，本文所述的任何剂量都可以是以CFU/ml饮用水为单位。
在各种实施方案中，用于根据本文所述的方法和组合物使用的芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或681和/或300和/或101和/或235和/或86和/或177或具有其鉴定特征的菌株)可以选自芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B-67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。芽孢杆菌菌株A12和681于2017年9月14日保藏于美国农业研究局培养物保藏中心(NRRL)，National Center forAgricultural Utilization Research,Agricultural Research Service,USDA,1815North University Street,Peoria,Illinois 61604-3999，且分别给出保藏号B-67516和B-67515。保藏在根据布达佩斯条约为专利程序的目的对微生物保藏的国际认可的规定下进行。NRRL菌株名称为B-67516和B-67515，它们分别对应于本申请中提到的菌株或芽孢杆菌菌株A12和681。芽孢杆菌菌株MDG86和芽孢杆菌菌株MDG300于2014年3月14日保藏于美国农业研究局培养物保藏中心(NRRL)，National Center for AgriculturalUtilization Research,Agricultural Research Service,USDA,1815North UniversityStreet,Peoria,Illinois 61604-3999，且分别给出保藏号B-50944和B-50943。保藏在根据布达佩斯条约为专利程序的目的对微生物保藏的国际认可的规定下进行。NRRL菌株名称为MDG86和MDG300，它们分别对应于本申请中提到的菌株或芽孢杆菌菌株86和300。芽孢杆菌菌株MDG101和芽孢杆菌菌株MDG235于2016年1月4日保藏于美国农业研究局培养物保藏中心(NRRL)，National Center for Agricultural Utilization Research,AgriculturalResearch Service,USDA,1815North University Street,Peoria,Illinois 61604-3999，且分别给出保藏号B-67218和B-67219。保藏在根据布达佩斯条约为专利程序的目的对微生物保藏的国际认可的规定下进行。芽孢杆菌菌株MGL177于2016年6月7日保藏于美国农业研究局培养物保藏中心(NRRL)，National Center for Agricultural UtilizationResearch,Agricultural Research Service,USDA,1815North University Street,Peoria,Illinois 61604-3999，且给出保藏号B-67275。保藏在根据布达佩斯条约为专利程序的目的对微生物保藏的国际认可的规定下进行。NRRL菌株名称为MDG 101、MDG 235和MGL177，它们分别对应于本申请中提到的菌株或芽孢杆菌菌株101、235和177。
这些菌株中的任一种都可以以饲料组合物(例如包含动物饲料共混物的全价饲料)或动物饮用水的形式单独或组合施用。在一个实施方案中，多个菌株在单个组合物中组合施用。在另一个实施方案中，多个菌株在分开的组合物中组合施用。
在另一个实施方案中，一种或多种前述段落中描述的芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177或具有其鉴定特征的菌株)可以与另一种细菌菌株一起施用给动物，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。在另一个实施方案中，一种或多种前述段落中描述的芽孢杆菌菌株(例如芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177或具有其鉴定特征的菌株)可以与任何其他细菌菌株一起施用给动物，所述任何其他细菌菌株有效抑制或控制动物中肠球菌的有害影响或预防或减少足皮炎或控制肠球菌的有害影响以控制动物的足皮炎。
如本文所用，“具有芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的所有鉴定特征的菌株”可以是具有芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的所有鉴定特征的突变菌株(例如基于对应于芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的DNA指纹的DNA分析的DNA指纹，对应于芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的酶活性，对应于芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的抗微生物活性，对应于芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的抗生素敏感性和耐受性概况，或这些鉴定特征的组合)。在备选实施方案中，突变体可以是天然突变体或遗传工程化的突变体。在另一个实施方案中，“具有芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的所有鉴定特征的菌株”可以是例如通过以下产生的菌株：从芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177分离一个或多个质粒，并将该一个或多个质粒引入另一种细菌(比如另一种芽孢杆菌菌株)中，只要该一个或多个质粒含有提供芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的鉴定特征的DNA即可(例如基于对应于芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177的DNA指纹的DNA分析的DNA指纹)。
可向动物施用包含芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株的饲料组合物或饮用水，持续任何有效抑制肠球菌或控制肠球菌的有害影响或减少或预防足皮炎或控制肠球菌的有害影响以控制动物的足皮炎或其组合的时间段。例如，在一个实施方案中，饲料组合物或饮用水可以每天提供给动物。施用饲料组合物或饮用水的时间段是非限制性的，并且应当理解的是，可以使用任何确定为有效抑制肠球菌或控制肠球菌的有害影响或减少或预防足皮炎或控制肠球菌的有害影响以控制动物的足皮炎或其组合的时间段或施用方案。
在另一个实施方案中，选自芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRLNo.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株可用于减少从动物生产的肉(包括动物的爪)中的有害细菌污染物。
在一个实施方案中，用于添加到动物饲料共混物中以生产全价饲料组合物的饲料添加剂可以与动物饲料共混物混合，例如，与微量营养素自动递送系统混合，或例如，通过手动称重和添加以获得本文所述的芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681、和/或芽孢杆菌菌株235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌株177或具有其鉴定特征的菌株的任何剂量，用于以全价饲料组合物的形式施用给动物。混合也可以通过本领域已知的任何其他合适的方法进行，以将直接饲喂的微生物与动物饲料共混物混合以获得均匀混合物。在各种实施方案中，混合可以进行任何合适的时间段(例如约1至约4分钟)。在芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株为用于动物饮用水的添加剂的形式的实施方案中，芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株可以是例如粉末、液体或丸粒的形式，并且可以使用本领域已知的任何合适的方法与饮用水混合以获得本文所述的芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株的任何剂量，用于在动物饮用水中施用给动物。芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株也可以以粉末、液体或丸粒的形式直接口服(即通过口服插入)饲喂给动物。
在本文所述的任何组合物实施方案中，可以将芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株添加到组合物中以减少或预防动物的足皮炎或控制肠球菌的有害影响或抑制肠球菌。在一个实施方案中，控制或抑制肠球菌是为了控制动物的足皮炎。
在本文所述的任何组合物实施方案中，芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，可引起选自在动物中抑制肠球菌或控制肠球菌的有害影响的作用。这些作用是这些芽孢杆菌菌株可引起的作用类型的非限制性实例。例如，在本文所述的方法、商业包装、饲料添加剂、饲料组合物或用于饮用水的添加剂的各种组合物实施方案中，芽孢杆菌菌株可以具有选自以下的作用：维持动物肠道中的微生物平衡、预防或减少动物的肠球菌疾病(例如比如肉鸡或其他农业动物或伴侣动物的足皮炎、心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死)、改善动物生产性能或健康、维持动物的肠道健康、减少动物肠道中的有害病原体、减少气味、减少动物尿液或粪便中的有害病原体、减少从动物生产的肉制品的有害细菌的污染以及保护动物肠道中有益细菌的生长。
在一个说明性方面，饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可以是商业包装的形式。在另一个说明性的实施方案中，商业包装中的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，或芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株可以是浓缩物(例如约1×108至约5×109CFU/g)或超浓缩物(例如约1×1010至约5×1012CFU/g)的形式。在另一个实施方案中，商业包装的组合物中的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，或芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株可以是干燥形式(例如粉末)、丸粒形式、液体形式、表肥形式或凝胶形式或任何其他合适的形式。
在另一个实施方案中，商业包装形式的菌株可以是例如干燥形式(例如粉末或冻干形式)、丸粒形式或液体形式。
在另一个说明性实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可进一步包含芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株的载体。载体可选自麸、稻壳、盐、矿物油、糊精(例如麦芽糊精)、乳清、糖、蔗糖、石灰石、酵母培养物、干淀粉、硅铝酸钠、二氧化硅、聚丙二醇、聚山梨醇酯80、植物油及其组合。在另一个实施方案中，载体可以是本领域已知的直接饲喂的微生物的任何合适的载体。在另一个实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可进一步包含粘合剂，比如粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝、葡聚糖或其他已知的粘合剂。在另一个实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可进一步包含无机/有机粘合剂、精油和/或有机酸。
在另一些实施方案中，包含芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物在用于商业用途的容器中。在各种实施方案中，容器可以是例如袋(例如20磅袋、50磅袋、2盎司袋、1磅袋或1千克袋)、小袋、大桶、瓶或盒。在说明性方面，包含芽孢杆菌菌株A12和/或芽孢杆菌菌株681和/或芽孢杆菌菌株300和/或芽孢杆菌菌株101和/或芽孢杆菌菌种235和/或芽孢杆菌菌株86和/或芽孢杆菌菌种177或具有其鉴定特征的菌株的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物的容器可包含塑料、金属、箔、纸、纤维或硬纸板(例如塑料桶、纸袋、箔袋、纤维大桶等)。商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物可进一步包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
以下示例仅用于说明性目的。这些实施例是非限制性的，并且不旨在以任何方式限制本发明。
实施例1
芽孢杆菌菌株681、A12、101、235、177、86和300针对肉鸡的足垫病变的效力的体内研究
在试验1中，在使用暴露于新垫料的肉鸡的平面栏饲研究中确定了芽孢杆菌菌株组合在降低足垫病变的严重程度方面的效力。该试验每次治疗使用400只罗斯禽(Ross xRoss bird)(每个围栏50只，重复8次)。将未补饲的对照禽与从起始阶段至完成阶段(第0天至第42天)在饲料中补充有0.25磅/美吨的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRLNo.B-67515)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRL No.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)的组合的禽进行比较。在第42天，从每个围栏中随机选择5只禽，并使用0-2的量表评估足垫病变严重程度。补充芽孢杆菌共混物导致病变严重程度的降低(0.51相比于1.03，P<0.05；图1和表1)，并导致更多的病变评分为0类别的禽(49相比于28；图2)，这为这种芽孢杆菌菌株共混物对肉鸡健康和福利的影响及其在足皮炎的预防和治疗中的效用提供了证据。
表1.42日龄时的肉鸡足垫病变平均评分
*注：P值来自ANOVA并且P＝0.05的平均值通过Tukey’s检验分离。
实施例2
芽孢杆菌菌株681、A12、101、235、177、86和300针对肉鸡的足垫病变的效力的体内研究
在试验2中，在使用暴露于用过的垫料的肉鸡的平面栏饲研究中确定了两种浓度的芽孢杆菌菌株组合在降低足垫病变的严重程度方面的效力。这是一项用饲喂商业型饮食的Ross 308雄雏鸡进行的42天平面栏饲试验。给禽饲喂基础饮食或补充有0.25lb/美吨(1X)的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRL No.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)的组合的饮食或饲喂1/2浓度(0.5X)的相同芽孢杆菌共混物。所有禽从第4天开始暴露于用过的垫料，并持续整个试验的剩余时间。在第41天，对10只禽/围栏(20只爪子/围栏)的右爪和左爪进行评分并取平均值。对病变进行评分，从表示无病变的0到表示最严重病变的4。1X芽孢杆菌治疗组的足垫病变评分显著低于(P＝0.039；图3和表2)未补充对照组，0.5X组居中。病变评分的分布为芽孢杆菌共混物治疗中向更低病变严重程度的转变提供了进一步的支持(图4)。这些结果为这种芽孢杆菌共混物在预防和治疗足皮炎方面的作用提供了进一步的证据。
表2.第41天的左侧、右侧和组合平均爪得分
*注：P值来自ANOVA并且P＝0.05的平均值通过Tukey’s检验分离。对10只禽/围栏(20只爪子/围栏)的右爪和左爪各自进行评分并取平均值。评分从用于正常的0到表示最严重病变的4。
实施例3
肠球菌的体外生长抑制
肠球菌是革兰氏阳性细菌，其通常栖息在家禽的胃肠道中。肠球菌的传播是经由口腔和/或气溶胶途径以及从皮肤伤口传播，并且粪肠球菌中发现的天然高水平的抗生素抗性有助于其致病性。在肉种鸡中，爪病变与包括粪肠球菌在内的革兰氏阳性球菌的全身感染相关联。粪肠球菌还与肉鸡的心内膜炎特别相关，而其他肠球菌与肉鸡和肉种鸡群的关节炎、骨髓炎、脊柱炎和股骨头坏死有关。减少胃肠道或垫料中肠球菌的数量是减少传播的起点。这里我们证明了特定的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRLNo.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)在体外可抑制来自家禽垫料的粪肠球菌分离株的生长。
方法：
使用BBL Enterococcosel琼脂(Becton Dickenson)，从来自美国的5个联合企业的21个商业肉鸡舍的垫料环境培养肠球菌分离株。培养物在37℃下孵育24小时，并在相同的生长条件下，在Brain Heart Infusion肉汤(BHI,Becton Dickenson)中进行推定阳性菌落的进一步繁殖。通过物种特异性qPCR，确认分离物为粪肠球菌。筛选了总共48个粪肠球菌分离株对来自芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)、681(NRRL No.B67515)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRL No.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)的培养发酵物的敏感性。将24小时病原体培养物1％(v/v)接种到含有>5％(v/v)的来自每种芽孢杆菌菌株的无细胞芽孢杆菌发酵物的BHI肉汤中，在液体测定中一式两份进行筛选。将测定在37℃，有氧生长条件下孵育24小时。测量光密度(OD600)，并计算与在不含芽孢杆菌发酵物的BHI中生长的每个病原体分离株的阳性对照相比的抑制百分比。检测到的每个肠球菌分离株和芽孢杆菌菌株组合的生长抑制被评分为弱(<25％抑制，-)、中等(25-50％抑制，+/-)或强(>50％抑制，+)。
结果
垫料来源的粪肠球菌分离株的体外生长被来自芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、177(NRRL No.B-67275)、86(NRRL No.B-50944)和300(NRRL No.B-50943)中的一种或多种的发酵物的存在强烈抑制。垫料和足垫环境中的粪肠球菌的生长抑制提供了这些特定的芽孢杆菌菌株可以减少家禽的足皮炎的示例性机制。
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表3.特定的芽孢杆菌菌株针对来自商业肉鸡联合企业的垫料环境的粪肠球菌分离株的体外抑制活性。生长抑制被分为高(+)、中等(+/-)或低(-)。
实施例4
菌株鉴定和独特性
随机扩增多态性DNA PCR方法(以下称为RAPD-PCR)用于鉴定每个菌株的遗传变异性。待在RAPD-PCR反应中使用的DNA的制备是通过使用Tissue and Bloodsingle column kit(/>Venlo,The Netherlands)进行的。为了获得DNA，制备过夜培养物，检测纯度，将其丸粒化，并按照制造商的方案提取DNA。RAPD-PCR反应在热循环仪中用以下运行条件进行：95℃ 5min，然后是(95℃1min，36℃ 1min，72℃ 2min)的45次循环，然后是72℃ 7min，并以4℃无限期保持以保存产物结束。通过凝胶电泳对RAPD-PCR产物进行分析。图5A和5B以及6至9示出了芽孢杆菌菌株A12、681、101、235、177、86和300的RAPD-PCR结果。/>
Claims (32)
1.一种饲喂动物的方法，所述方法包括向所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中所述芽孢杆菌菌株引起所述动物的肠球菌抑制。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述肠球菌抑制预防动物的肠球菌疾病。
3.权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述肠球菌抑制减少动物的肠球菌疾病。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
5.一种控制肠球菌的有害影响的方法，所述方法包括向动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRLNo.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
6.根据权利要求5所述的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括预防动物的肠球菌疾病。
7.根据权利要求5至6中任一项所述的方法，其中控制肠球菌的有害影响包括减少动物的肠球菌疾病。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
9.一种饲喂动物的方法，所述方法包括向所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRLNo.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRLNo.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合，其中所述芽孢杆菌菌株预防或减少动物的足皮炎。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述动物的肠球菌疾病得到预防。
11.根据权利要求9至10中任一项所述的方法，其中所述动物的肠球菌疾病得到减少。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述施用的菌株包括芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
13.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的商业包装，其中所述商业包装包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRLNo.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
14.一种用于动物饲料的饲料添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
15.一种用于动物饮用水的添加剂，其用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎，其中所述添加剂包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
16.一种用于抑制肠球菌和/或预防或减少动物的足皮炎的动物饲料组合物，其中所述饲料组合物包含选自以下的分离的芽孢杆菌菌株：芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)、177(NRRL No.B-67275)、具有芽孢杆菌菌株A12(NRRLNo.B67516)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株681(NRRL No.B67515)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株300(NRRL No.B-50943)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No.B-67218)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRLNo.B-67219)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株86(NRRL No.B-50944)的所有鉴定特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No.B-67275)的所有鉴定特征的菌株及其组合。
17.根据权利要求14或15所述的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为浓缩物的形式。
18.根据权利要求14至16中任一项所述的饲料添加剂、饲料组合物或用于动物饮用水的添加剂，其为干燥形式。
19.根据权利要求16所述的饲料组合物，其为丸粒形式。
20.根据权利要求13所述的商业包装，其中所述菌株的形式选自粉末、液体和丸粒形式。
21.根据权利要求13至20中任一项所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含所述芽孢杆菌菌株的载体。
22.根据权利要求21所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述载体选自麸、稻壳、盐、糊精及其组合。
23.根据权利要求13至22中任一项所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在袋中。
24.根据权利要求23所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述袋是塑料袋。
25.根据权利要求14、15、17、18或21至24中任一项所述的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为粉末形式。
26.根据权利要求14、15、17或21至24中任一项所述的饲料添加剂或用于动物饮用水的添加剂，其为液体形式。
27.根据权利要求l3至26中任一项所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其在用于商业用途的容器中。
28.根据权利要求l3至27中任一项所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其进一步包含粘合剂。
29.根据权利要求28所述的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂或饲料组合物，其中所述粘合剂选自粘土、酵母细胞壁组分、硅酸铝和葡聚糖或其组合。
30.一种饲喂动物的方法，所述方法包括向所述动物施用包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的芽孢杆菌菌株A12(NRRL No.B-67516)、681(NRRL No.B-67515)、300(NRRL No.B-50943)、101(NRRL No.B-67218)、235(NRRL No.B-67219)、86(NRRL No.B-50944)和177(NRRL No.B-67275)。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述动物的肠球菌疾病得到预防。
32.根据权利要求30至31中任一项所述的方法，其中所述动物的肠球菌疾病得到减少。
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