CN113150070A - 一种ace抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法，其中蛋白肽提取自杏鲍菇，其中蛋白肽的氨基酸序列为EHDASLVHTDA。其中制备方法如下：(1)预处理；(2)切片处理；(3)粉碎和浸泡处理；(4)离心和超滤处理；(5)吸附和纯化处理：选择超滤液，并选择大孔吸附树脂进行蛋白肽的吸附，随后将蛋白肽用生理盐水洗脱下来，接着选择色谱柱进行纯化处理；(6)真空冷冻干燥处理。首次从杏鲍菇中提取到新的蛋白肽，经验证，制备的蛋白肽具有很好的ACE抑制活性，其IC50值小于0.069mg/mL；同时，制备的蛋白肽不仅可以延长小鼠的游泳时间，促进肝糖原的合成，而且提升CAT、SOD、GSH‑Px酶的活性，延缓体力疲劳。

Description

一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法
技术领域
本发明涉及蛋白肽及其制备方法技术领域，特别是涉及一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法。
背景技术
杏鲍菇菌肉肥厚，质地脆嫩，特别是菌柄组织致密、结实、乳白，可全部食用，且菌柄菌盖更脆滑、爽口，被称为“平菇王”、“干贝菇”，具有愉快的杏仁香味和如鲍鱼的口感，适合保鲜、加工，深得人们的喜爱。杏鲍菇营养丰富，富含蛋白质、碳水化合物、维生素及钙、镁、铜、锌等矿物质，可以提高人体免疫功能，对人体具有抗癌、降血脂、润肠胃以及美容等作用。目前杏鲍菇加工仅限于脱水生制品，杏鲍菇酱，杏鲍菇罐头以及杏鲍菇脯等。
蛋白肽是氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物，并且许多蛋白肽还具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的新功能。如果将杏鲍菇的蛋白质进行提取，并通过试验进行论证，应该可以找到很多具有特殊生理功能(例如具有抗疲劳性能)的蛋白肽。
发明内容
本发明的目的是提供一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法，首次从杏鲍菇中提取到新的蛋白肽，经验证，制备的蛋白肽具有很好的ACE抑制活性，其IC50值小于0.069mg/mL；同时，制备的蛋白肽不仅可以延长小鼠的游泳时间，促进肝糖原的合成，而且提升CAT、SOD、GSH-Px酶的活性，延缓体力疲劳。
为了实现上述目的，本发明提供一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽，所述的蛋白肽提取自杏鲍菇；所述的蛋白肽的氨基酸序列为EHDASLVHTDA。
还包括如上述所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理：筛选和清洗杏鲍菇；
(2)切片处理：选择步骤(1)预处理后的杏鲍菇进行切分，得到薄片；
(3)粉碎和浸泡处理：选择步骤(2)得到的薄片，转移至粉碎机中进行低温粉碎，随后转移至浸泡池中搅拌浸泡；
(4)离心和超滤处理：选择步骤(3)搅拌浸泡后的料液进行超速离心，离心后取上清液，选择超滤膜进行超滤处理，得到超滤液；
(5)吸附和纯化处理：选择步骤(4)得到的超滤液，并选择大孔吸附树脂进行蛋白肽的吸附，随后将蛋白肽用生理盐水洗脱下来，接着选择色谱柱进行纯化处理；
(6)真空冷冻干燥处理：选择步骤(5)纯化处理后的蛋白肽，直接转移到真空冷冻干燥设备中，最后收集粉末状蛋白肽，并在超低温冰箱-80℃下保藏，即可。
优选的，步骤(1)中杏鲍菇的筛选标准为表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的杏鲍菇。
优选的，步骤(1)中杏鲍菇的清洗步骤为用清水清洗干净并在阴凉处晾干。
优选的，步骤(2)中薄片的厚度为1mm-3mm。
优选的，步骤(3)中低温粉碎的温度为4℃-8℃；
步骤(3)中低温粉碎后的粒径范围为0.2mm-0.4mm；
步骤(3)中搅拌浸泡的温度为10℃-15℃；
步骤(3)中搅拌浸泡的溶液为Tris-HCl缓冲液，其中Tris-HCl缓冲液的浓度为50mM，其中Tris-HCl缓冲液的pH为4.8-5.3；其中Tris-HCl缓冲液中加入酸性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，其中酸性蛋白酶的质量浓度为5mg/L，其中中性蛋白酶的质量浓度为10mg/L，其中木瓜蛋白酶的质量浓度为8mg/L。
优选的，步骤(4)中超速离心的离心力为30000g，其中超速离心的时间为1h，其中超速离心的温度为4℃；
步骤(4)中超滤处理的步骤如下：
A-选择孔径为2000D的超滤膜进行第一次过滤，洗脱液为去离子水；
B-选择孔径为1000D的超滤膜进行第二次过滤，洗脱液为去离子水；
C-将两次过滤的杂质洗脱下来并再次溶解，使用超声波进行辅助处理，其中超声的功率为200W，其中超声的时间为20min，其中超声的温度为8℃；
D-将超声后的料液，选择孔径为1000D的超滤膜进行第三次过滤，洗脱液为去离子水。
优选的，步骤(5)中大孔吸附树脂的骨架选自丙烯腈与苯乙烯二者的混合物，其中丙烯腈与苯乙烯的用量比1：2；
步骤(5)中大孔吸附树脂的上柱流速为2BV/h。
优选的，步骤(5)中色谱柱为赛默飞世尔科技公司生产的ID16126-157569型色谱柱，并选择乙腈溶液作为流动相，流速为3mL/min，检测波长183nm，收集12.5min-14.2min的产品。
优选的，步骤(6)中真空冷冻干燥的最低温度控制在-40℃。
上述技术方案所提供的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法，具有以下有益效果：
首次从杏鲍菇中提取到新的蛋白肽，经验证，制备的蛋白肽具有很好的ACE抑制活性，其IC50值小于0.069mg/mL；同时，制备的蛋白肽不仅可以延长小鼠的游泳时间，促进肝糖原的合成，而且提升CAT、SOD、GSH-Px酶的活性，延缓体力疲劳。
附图说明
图1是本发明实施例ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽制备方法的流程示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
最优方案
本实施例提供一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽，所述的蛋白肽提取自杏鲍菇(Pleurotus eryngii)；所述的蛋白肽的氨基酸序列为EHDASLVHTDA，详见序列表的SEQ IDNO.1。
上述所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，如图1所示，包括以下步骤：
(1)预处理：筛选和清洗杏鲍菇；
(2)切片处理：选择步骤(1)预处理后的杏鲍菇进行切分，得到薄片；
(3)粉碎和浸泡处理：选择步骤(2)得到的薄片，转移至粉碎机中进行低温粉碎，随后转移至浸泡池中搅拌浸泡；
(4)离心和超滤处理：选择步骤(3)搅拌浸泡后的料液进行超速离心，离心后取上清液，选择超滤膜进行超滤处理，得到超滤液；
(5)吸附和纯化处理：选择步骤(4)得到的超滤液，并选择大孔吸附树脂进行蛋白肽的吸附，随后将蛋白肽用生理盐水洗脱下来，接着选择色谱柱进行纯化处理；
(6)真空冷冻干燥处理：选择步骤(5)纯化处理后的蛋白肽，直接转移到真空冷冻干燥设备中，最后收集粉末状蛋白肽，并在超低温冰箱-80℃下保藏，即可。
需要注意的是，步骤(1)中杏鲍菇的筛选标准为表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的杏鲍菇。
需要注意的是，步骤(1)中杏鲍菇的清洗步骤为用清水清洗干净并在阴凉处晾干。
需要注意的是，步骤(2)中薄片的厚度为2mm。
需要注意的是，步骤(3)中低温粉碎的温度为4℃；
步骤(3)中低温粉碎后的粒径范围为0.2mm；
步骤(3)中搅拌浸泡的温度为10℃；
步骤(3)中搅拌浸泡的溶液为Tris-HCl缓冲液，其中Tris-HCl缓冲液的浓度为50mM，其中Tris-HCl缓冲液的pH为5；其中Tris-HCl缓冲液中加入酸性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，其中酸性蛋白酶的质量浓度为5mg/L，其中中性蛋白酶的质量浓度为10mg/L，其中木瓜蛋白酶的质量浓度为8mg/L。
需要注意的是，步骤(4)中超速离心的离心力为30000g，其中超速离心的时间为1h，其中超速离心的温度为4℃；
步骤(4)中超滤处理的步骤如下：
A-选择孔径为2000D的超滤膜进行第一次过滤，洗脱液为去离子水；
B-选择孔径为1000D的超滤膜进行第二次过滤，洗脱液为去离子水；
C-将两次过滤的杂质洗脱下来并再次溶解，使用超声波进行辅助处理，其中超声的功率为200W，其中超声的时间为20min，其中超声的温度为8℃；
D-将超声后的料液，选择孔径为1000D的超滤膜进行第三次过滤，洗脱液为去离子水。
需要注意的是，步骤(5)中大孔吸附树脂的骨架选自丙烯腈与苯乙烯二者的混合物，其中丙烯腈与苯乙烯的用量比1：2；
步骤(5)中大孔吸附树脂的上柱流速为2BV/h。
需要注意的是，步骤(5)中色谱柱为赛默飞世尔科技公司生产的ID16126-157569型色谱柱，并选择乙腈溶液作为流动相，流速为3mL/min，检测波长183nm，收集12.5min-14.2min的产品。
需要注意的是，步骤(6)中真空冷冻干燥的最低温度控制在-40℃。
对比例1
基本同实施例1，不同的地方在于：
其中Tris-HCl缓冲液中未加入酸性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物。
对比例2
基本同实施例1，不同的地方在于：
步骤(4)中超滤处理的步骤如下：
选择孔径为1000D的超滤膜进行过滤，洗脱液为去离子水。
对比例3
基本同实施例1，不同的地方在于：
步骤(5)中大孔吸附树脂的骨架选自丙烯腈。
对比例4
现有技术，公开号为CN111743144A，公开一种双菇复合肽组合物及其制备方法和应用，其说明书公开如下方案：
“(1)分别取双孢菇和金针菇清洗干净，沸水煮2分钟，晾干，加入8倍菇体重量的水，破碎，离心，取上清液用滤布连续过滤3次，取滤液，冷冻干燥，得双孢菇干粉和金针菇干粉；
(2)按照重量份数称取双孢菇干粉25份、金针菇干粉20份，混合、杀菌，随后进行均质，均质压力11MPa、均质时间为1.5小时，均质后的混料冷却至室温，得到均质粉料；
(3)再添加鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌，在30℃温度范围内混合，混合时间为2小时，即得”。
为了更好作为比对，修改成如下方案：
(1)取杏鲍菇清洗干净，沸水煮2分钟，晾干，加入8倍菇体重量的水，破碎，离心，取上清液用滤布连续过滤3次，取滤液，冷冻干燥，得杏鲍菇干粉；
(2)按照重量份数称取杏鲍菇45份，杀菌，随后进行均质，均质压力11MPa、均质时间为1.5小时，均质后的混料冷却至室温，得到均质粉料；
(3)再添加鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌，在30℃温度范围内混合，混合时间为2小时，即得。
对比例5
现有技术，公开号为CN106434809B，公开一种具有ACE抑制功能的鱼肉蛋白肽及其制备方法，其说明书公开如下方案：
“(1)选用草鱼鱼肉10克，经过121℃高温处理30分钟，用打浆机将鱼肉打成浆，然后加入2.0倍鱼肉重量的水，通过10000rpm分散均质机匀浆3min，得到鱼肉浆液，通过6000g离心15min，去上层脂肪，得到去脂的鱼肉浆液。
(2)用1mol/L的NaOH或HCl来调节步骤(1)鱼肉浆液的pH为2.0，温度调节为45℃，然后按照胃蛋白酶为鱼肉质量的0.3％加入胃蛋白酶，酶解60分钟。
(3)用1mol/L的NaOH或HCl来调节调节步骤(2)的酶解液的pH为7.0，温度调节为55℃，然后按照复合蛋白酶(碱性蛋白酶：菠萝蛋白酶＝1～2：1)为鱼肉质量的0.3％加入复合蛋白酶，酶解90分钟。
(4)将步骤(3)的酶解液，在95℃下保温3～5min，冷却至室温，在4000g条件下离心10min，收集上清液；
(5)将步骤(4)所得的上清液利用孔径为6000道尔顿的陶瓷膜超滤，取分子量小于6000道尔顿的蛋白多肽，再利用孔径为2000道尔顿的陶瓷膜超滤，取分子量小于2000道尔顿的蛋白多肽液。
(6)将步骤(5)所得的多肽液，经过Sephadex G-25的凝胶色谱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行测量，收集第2个洗脱峰,再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5％～90％乙腈溶液作为洗脱液，流速为5mL/min，取10-13分收集的肽溶液。
(7)将步骤(6)得到的DPP-Ⅳ抑制肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼肉ACE抑制肽粉”。
对比例6
现有技术，公开号为CN108841905B，公开一种具有ACE抑制和抗疲劳功能的蜂蛹蛋白肽及其制备方法，其说明书公开如下方案：
“(1)选用冷冻鲜蜂蛹100克，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,蜂蛹先经过超高压(100Mpa处理2分钟)，将蜂蛹放置于1倍的水中，在115条件下处理2小时，冷却到65℃，用打浆机将蜂蛹打成浆，通过离心机去脂，得到蜂蛹蛋白液；
(2)将步骤(1)得到的蜂蛹蛋白液，温度调整到65℃，利用超声波发生器经超声波(频率为90kH)处理25分钟，改变蜂蛹蛋白的组织结构；
(3)调节蜂蛹蛋白液中蛋白含量为9％，第一步利用0.5％复合蛋白酶一(碱性蛋白酶和胰蛋白酶组成，二者质量比为2：1)，在50℃条件下进行酶解反应1.0h；然后进行第二步利用0.4％复合蛋白酶二(木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，二者质量比为1：1)，在55℃条件下进行酶解反应1.0h；第三步利用0.1％风味蛋白酶，在55℃条件下进行酶解反应0.5h；在95℃下保温10分钟，冷却至室温，加入酶解液重量0.1％的活性炭于酶解液中，通过硅藻土进行分离，收集分离液；
(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜将分子量小于2000道尔顿的蛋白肽分离出来；
(5)取分子量为小于2000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5-90％乙腈溶液作为洗脱液，取15-16分收集的肽溶液；
(6)将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蜂蛹蛋白肽粉”。
对比例7
现有技术，公开号为CN108342441B，公开一种具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽的制备方法及制备得到的蛋白肽，其说明书公开如下方案：
“1)选用冷冻鲜牦牛骨100克，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗，牛骨清洗后用牛骨粉碎机将牛骨打成骨粒，加入牛骨颗粒总量2倍的水在121℃条件下处理5小时，通过离心过滤得到去骨渣的牛骨蒸煮液，冷却到20℃，通过分液罐去脂，得到牛骨蛋白液。
2)将步骤1)得到的牦牛骨蛋白液，温度调整到65℃，利用超声波发生器经超声波(频率为80kH)处理15分钟，再经过20MPa的均质机预均质处理一次，再在压力160Mpa的条件下进行超高压微射流处理2次。
3)调节牦牛骨蛋白液中蛋白含量为8％，按照牦牛骨蛋白液中蛋白重量0.8％的重量百分比加入复合蛋白酶进行分步酶解，第一步利用0.5％复合蛋白酶一(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶组成，它们之间的质量比为2∶1∶1)，在50℃条件下进行酶解反应1.5h；然后进行第二步利用0.3％复合蛋白酶二(木瓜蛋白酶和风味蛋白酶组成，它们之间的质量比为1：2)，在55℃条件下进行酶解反应1.0h；在95℃下保温10分钟，冷却至室温，加入酶解液重量0.2％的活性炭于酶解液中，通过硅藻土进行分离，收集分离液；
4)将步骤3)所得的分离液利用孔径为10000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于10000的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来。
5)取分子量为小于3000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-15凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第1个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到经过凝胶分离的牛骨蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相高效液相色谱分离的具体操作为：流动相流速5～10mL/min；检测波长220nm；洗脱程序为：流动相A为纯水，流动相B为体积分数0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min流动相B的体积分数为0％，5～40min流动相B的体积分数从0％到35％，40～45min流动相B的体积分数从35％到95％，45～50min流动相B从95％到0％，取12-14min收集的肽溶液。
6)将步骤5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到具有缓解疲劳和抗氧化功能的骨胶原蛋白肽粉”。
对比例8
现有技术，公开号为CN104450839B，公开一种具有ACE抑制活性的米糠蛋白肽的制备方法，其说明书公开如下方案：
“一、以米糠为原料，采用碱法提取米糠蛋白；
二、向米糠蛋白中加入蒸馏水，控制底物浓度为1.0～6.0mg/mL，充分搅拌溶解后，调节pH值为7.5～10。再添加一定比例的蛋白酶后放于恒温水浴中，使其发生酶解反应，控制酶添加量为500～5000u/g，酶解温度为30～55℃，水解时间为0.5～10h；反应结束后，迅速升温至94～96℃保持10～15min，对蛋白酶进行充分的灭活处理；离心分离酶解液，即得米糠蛋白水解液；
三、采用超滤法初级分离米糠蛋白水解液，控制超滤操作温度为20～25℃，超滤操作压力在0.1～0.4MPa范围内，截留分子量＜6KDa。
四、采用葡聚糖凝胶Sephadex G-15纯化步骤三获得的米糠ACE抑制肽；
五、采用RP-HPLC法分离纯化步骤四获得的米糠ACE抑制肽，得到纯化的米糠ACE抑制肽”。
测试方案
ACE抑制功效测试
参照在先专利文献(中国发明专利，申请号：CN201810646683.6，公开公告号：CN108841905A，公开了一种具抗疲劳功能的蜂蛹蛋白肽及其制备方法)进行相关指标(ACE抑制能力)测定；
样品的ACE抑制能力按照如下方法进行测定：
ACE抑制率的方法。用高效液相色谱在228nm下定量检测释放出的Hip量，从而计算出多肽的ACE抑制率。
(1)试剂的配置
pH8.3的磷酸盐缓冲溶液：用超纯水配制，其中含磷酸盐50mmol/L，NaCl 300mmol/L，调整pH到8.3；
ACE酶液：将2mL的磷酸盐缓冲液加入1U的ACE中，使其浓度变为0.5U/mL。
HHL溶液：使用磷酸缓冲液溶解HHL，使其终浓度为5mmol/L。
样品溶液：称取适量样品，用磷酸盐缓冲液所需浓度的溶液。
(2)ACE抑制率测定的色谱条件
检测波长：228nm；流速：1mL/min；流动相A：超纯水(含0.1％三氟乙酸)，流动相B：甲醇(含0.1％三氟乙酸)；进样量：10μL，手动进样。
(3)测定ACE抑制活性的方法
取120μL HHL底物溶液，加入20μL的样品混合均匀，在37℃恒温水浴中保温10min。然后加入10μL ACE酶液在37℃恒温水浴中反应30min，再加入150μL 1mol/L的HCl终止反应，得到反应液。该反应液利用HPLC进行分析，同时设置空白对照组。ACE抑制活性计算公式如下：
ACE抑制活性％＝(M-N)/M×100％
式中，M为对照组中马尿酸的峰面积，N为添加的样品组中马尿酸的峰面积。
(4)半抑制浓度的测定
按照ACE抑制肽体外检测方法测定其抑制活性，以浓度为横坐标，ACE抑制率为纵坐标绘成圆滑的曲线，从曲线中计算出IC50值
上述相关测试如表1所示，
表1
Figure BDA0002985222290000121
由表1可知，本发明制备的蛋白肽具有很好的ACE抑制活性，其IC50值小于0.069mg/mL。
抗疲劳功效测试
参照在先专利文献(中国发明专利，申请号：CN201810646683.6，公开公告号：CN108841905A，公开了一种具抗疲劳功能的蜂蛹蛋白肽及其制备方法)进行相关指标(抗疲劳能力)测定，其中需要将每10mg蛋白肽产品用100mL纯水进行溶解，制得溶解后的饮料；
延缓疲劳功能的测定试验按照如下方法进行测定：
(1)实验动物饲养与分组
280只清洁级昆明种小鼠，于洁净动物实验室适应性饲养一周，每8-10只一笼，分笼饲养，保持垫料干燥卫生，每三天换洗一次。每天按时打扫，做好消毒灭菌等工作，保证洁净动物实验室干净整洁。室温25±2℃，相对湿度50±5％，光照明暗间隔为12h，以鼠标准饲料常规饲养，自由进食和饮水，每周记录一次小鼠体重。经过一周的适应期后，300只小鼠随机分为10组，即空白组、对比例8组和实施例1组。空白组小鼠灌胃等量的生理盐水，其它9组的剂量设为50mL/kg/d，每天上午9：00-10：30期间灌胃，灌胃30天后，检测受试样品(即溶解后的饮料)的抗疲劳功效。
(2)负重游泳实验
末次给样30min后，从各组中随机取10只小鼠，将其尾根部缠绕5％体重的铅皮后，放置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温25±1℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。
(3)肝糖原、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定
末次给样30min后，从各组中随机取10只小鼠拔眼球采全血，将收集到的血液于3000r/min离心10min，取血清备用，按照CAT、SOD和GSH-Px测试盒进行测定。采血完成后，立即解剖小鼠，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，按照肝糖原检测试剂盒说明进行测定。
上述相关测试如表2所示，
表2
Figure BDA0002985222290000141
从以上结果(表2)可以看出，本发明制备的蛋白肽不仅可以延长小鼠的游泳时间，促进肝糖原的合成，而且提升CAT、SOD、GSH-Px酶的活性，延缓体力疲劳。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 广州明创生物科技有限公司
<120> 一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽及其制备方法
<130> 20201219
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工合成(Synthetic)
<400> 1
Glu His Asp Ala Ser Leu Val His Thr Asp Ala
1 5 10

Claims (10)

1.一种ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽，其特征在于，
所述的蛋白肽提取自杏鲍菇；
所述的蛋白肽的氨基酸序列为EHDASLVHTDA。
2.一种如权利要求1所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理：筛选和清洗杏鲍菇；
(2)切片处理：选择步骤(1)预处理后的杏鲍菇进行切分，得到薄片；
(3)粉碎和浸泡处理：选择步骤(2)得到的薄片，转移至粉碎机中进行低温粉碎，随后转移至浸泡池中搅拌浸泡；
(4)离心和超滤处理：选择步骤(3)搅拌浸泡后的料液进行超速离心，离心后取上清液，选择超滤膜进行超滤处理，得到超滤液；
(5)吸附和纯化处理：选择步骤(4)得到的超滤液，并选择大孔吸附树脂进行蛋白肽的吸附，随后将蛋白肽用生理盐水洗脱下来，接着选择色谱柱进行纯化处理；
(6)真空冷冻干燥处理：选择步骤(5)纯化处理后的蛋白肽，直接转移到真空冷冻干燥设备中，最后收集粉末状蛋白肽，并在超低温冰箱-80℃下保藏，即可。
3.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(1)中杏鲍菇的筛选标准为表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的杏鲍菇。
4.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(1)中杏鲍菇的清洗步骤为用清水清洗干净并在阴凉处晾干。
5.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(2)中薄片的厚度为1mm-3mm。
6.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(3)中低温粉碎的温度为4℃-8℃；
步骤(3)中低温粉碎后的粒径范围为0.2mm-0.4mm；
步骤(3)中搅拌浸泡的温度为10℃-15℃；
步骤(3)中搅拌浸泡的溶液为Tris-HCl缓冲液，其中Tris-HCl缓冲液的浓度为50mM，其中Tris-HCl缓冲液的pH为4.8-5.3；其中Tris-HCl缓冲液中加入酸性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，其中酸性蛋白酶的质量浓度为5mg/L，其中中性蛋白酶的质量浓度为10mg/L，其中木瓜蛋白酶的质量浓度为8mg/L。
7.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(4)中超速离心的离心力为30000g，其中超速离心的时间为1h，其中超速离心的温度为4℃；
步骤(4)中超滤处理的步骤如下：
A-选择孔径为2000D的超滤膜进行第一次过滤，洗脱液为去离子水；
B-选择孔径为1000D的超滤膜进行第二次过滤，洗脱液为去离子水；
C-将两次过滤的杂质洗脱下来并再次溶解，使用超声波进行辅助处理，其中超声的功率为200W，其中超声的时间为20min，其中超声的温度为8℃；
D-将超声后的料液，选择孔径为1000D的超滤膜进行第三次过滤，洗脱液为去离子水。
8.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(5)中大孔吸附树脂的骨架选自丙烯腈与苯乙烯二者的混合物，其中丙烯腈与苯乙烯的用量比1：2；
步骤(5)中大孔吸附树脂的上柱流速为2BV/h。
9.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的制备方法，其特征在于，
步骤(5)中色谱柱为赛默飞世尔科技公司生产的ID16126-157569型色谱柱，并选择乙腈溶液作为流动相，流速为3mL/min，检测波长183nm，收集12.5min-14.2min的产品。
10.如权利要求2所述的ACE抑制和抗疲劳功效的蛋白肽的其制备方法，其特征在于，
步骤(6)中真空冷冻干燥的最低温度控制在-40℃。
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