CN113138272A - 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法 - Google Patents

一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113138272A
CN113138272A CN202110529869.5A CN202110529869A CN113138272A CN 113138272 A CN113138272 A CN 113138272A CN 202110529869 A CN202110529869 A CN 202110529869A CN 113138272 A CN113138272 A CN 113138272A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
ubiquitin
kit
detecting
plate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110529869.5A
Other languages
English (en)
Inventor
刘煜
钱莉
朱昱晓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Original Assignee
Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University filed Critical Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Priority to CN202110529869.5A priority Critical patent/CN113138272A/zh
Publication of CN113138272A publication Critical patent/CN113138272A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法，属于生物医学领域。一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗体的活性酯和非放射性溶液。所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、0.01mol/L的PBS溶液、5％的BSA溶液和PBST溶液。所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。与现有技术相比，本申请的试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，无放射物质使用，操作简便，能检测微量血清中的抗体量，具有很好的临床应用价值。

Description

一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法
技术领域
本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。
背景技术
经典T1DM是一种抗原特异性T细胞介导的特异性损伤胰岛β细胞的自身免疫性疾病，胰岛自身抗体在预测和诊断T1DM中起重要作用。联合检测GADA、IAA、IA-2A和ZnT8A四种胰岛自身抗体可以预测85％或更多的T1DM患者或T1DM高危人群。然而，高达15％的临床诊断T1DM患者目前已知的所有胰岛自身抗体均为阴性。因此，发掘新的胰岛自身抗体或建立更精确的检测方法是增加自身抗体阳性的T1DM患者的主要途径。针对现有技术的不足，提供一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提出了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。
进一步地，所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。
进一步地，所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、PBS溶液、BSA溶液、PBST溶液和Block-A溶液。
进一步地，所述PBS溶液为1×PBS溶液。
进一步地，所述BSA溶液的浓度为5％。
进一步地，Block-A溶液的浓度为3％。
进一步地，所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。
本发明还提供一种检测泛素结合酶抗体的制剂在用于检测存在T1DM的受试者的方法中使用的试剂中的应用，所述方法包括所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
使用硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯分别标记重组的泛素结合酶的抗原蛋白；
将标记后的泛素结合酶的抗原蛋白加入5％BSA的溶液进行稀释；
将96孔平板的每孔依次加入16μl的1×PBS溶液、4μl待测血清和稀释后的溶液，并将96孔平板中的混合溶液搅拌均匀；
将96孔平板放置在振荡器中低速振荡1h，振荡结束后将96孔平板在4℃的环境中储存6-12小时；
将装有150μl/孔的3％Block-A溶液的MSD96孔板在4℃的环境中储存6-12小时；将储存后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次；
将96孔平板中的混合溶液转移至MSD96孔板中，将装有混合溶液的MSD96孔板避光放置在在振荡器中低速振荡1h；
将振荡结束后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次，洗涤结束后将MSD96孔板加入150μl/孔的Readingbuffer溶液于MSD计数仪上进行计数；
根据MSD计数仪的输出结果计算泛素结合酶抗体的抗体指数。
本发明的有益效果：
本发明的一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒通过检测泛素结合酶抗体能够快速确定T1DM患者的情况；并且试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，无放射物质使用，操作简便，能检测微量血清中的抗体量，具有很好的临床应用价值。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本申请的UBE2L3-Ab在不同年龄的T1DM患者中的阳性率图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以某医院内分泌科门诊及病房就诊的1型糖尿病患者193例，入组标准为：根据1999年世界卫生组织(WHO)的诊断标准及分型建议(26)临床诊断T1DM并排除继发性糖尿病、妊娠糖尿病及其它自身免疫性疾病患者；患者依赖外源性胰岛素治疗；使用放射免疫配体法检测至少有一种胰岛自身抗体GADA，IAA，IA-2A或ZnT8阳性；每位受试者清晨空腹留取静脉血用于检测，并进行相关临床资料(姓名、性别、年龄、发病时间、病程、身高、体重、糖化血红蛋白、C肽、酮症及低血糖发作情况、胰岛素用量等)的记录，进行身高、体重等体格检查。
具体实验方法：使用电化学发光法，即用硫代钌衍生物活性酯(Sulfo-tag)和生物素聚乙二醇活性酯(Biotin)分别标记重组的泛素结合酶(UBE2L3)抗原蛋白(可从https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/7332查询获知)，用已标记的抗原结合血清样本中的抗体：
在96孔平板中依次加入16μl的1×PBS溶液，4μl待测血清，5％BSA稀释的已与Sulfo-tag和Biotin连接的UBE2L3抗原，混匀后置于振荡器室温低速振荡1h，然后将96孔平板放置在4℃的冰箱6-12小时。
在链霉素标记的MSD96孔板中预加入150μl/孔的3％Block-A溶液，并将MSD96孔板放在4℃的冰箱6-12小时。放置结束后用150μlPBST缓冲液洗涤MSD96孔板3次。
依次从96孔平板各孔中吸取30μl的混合液转移至MSD96孔板中；
将MSD96孔板室温避光震1小时后，用PBST缓冲液再次洗涤3次后加入150μl的Readingbuffer溶液于MSD计数仪上进行计数；
通过公式计算抗体指数：抗体指数＝(待测血清-阴性质控)/(阳性质控-阴性质控)。
实验结果：
1、确定实验人群的UBE2L3-Ab的阳性切点值
采用ECL检测124名健康人的UBE2L3-Ab，UBE2L3-Ab指数中位数为-0.065(-0.036，0.087)，取99％的百分位数，UBE2L3-Ab的阳性切点值为0.037。
2、T1DM组阳性率显著高于健康对照组
UBE2L3-Ab在193例初发T1DM患者中19例阳性，阳性率为9.84％，282例健康对照者中3例阳性，阳性率为1.06％，T1DM组明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.005)。
3、不同年龄组抗体的阳性率
对T1DM人群按诊断时年龄分为四个亚组，分别为为<18岁、18-29岁、30-39岁和>40岁组。UBE2L3抗体的阳性率在0～18岁组为10.96％(8/73)，19～29岁组为16.67％(9/54)，29～39岁组为2.94％(1/34)，40岁以上组为3.13％(1/32)。UBE2L3-Ab的阳性率在发病18-29岁时达到高峰，然后下降，与其他三个亚组相比，>40岁亚组之间存在显著差异(均P<0.05；如图1所示)。
实验结论：UBE2L3-Ab在T1DM患者中的患病率显著高于健康对照组，在不同发病年龄的各亚组阳性率存在显著差异，故UBE2L3-Ab能够作为T1DM患者的病况检测指标。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (8)

1.一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。
2.根据权利要求1所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。
3.根据权利要求2所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、PBS溶液、BSA溶液、PBST溶液和Block-A溶液。
4.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述PBS溶液为1×PBS溶液。
5.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述BSA溶液的浓度为5％。
6.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，Block-A溶液的浓度为3％。
7.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。
8.一种检测泛素结合酶抗体的制剂在用于检测存在T1DM的受试者的方法中使用的试剂中的应用，其特征在于，所述方法包括：
使用硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯分别标记重组的泛素结合酶的抗原蛋白；
将标记后的泛素结合酶的抗原蛋白加入5％BSA的溶液进行稀释；
将96孔平板的每孔依次加入16μl的1×PBS溶液、4μl待测血清和稀释后的溶液，并将96孔平板中的混合溶液搅拌均匀；
将96孔平板放置在振荡器中低速振荡1h，振荡结束后将96孔平板在4℃的环境中储存6-12小时；
将装有150μl/孔的3％Block-A溶液的MSD96孔板在4℃的环境中储存6-12小时；将储存后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次；
将96孔平板中的混合溶液转移至MSD96孔板中，将装有混合溶液的MSD96孔板避光放置在在振荡器中低速振荡1h；
将振荡结束后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次，洗涤结束后将MSD96孔板加入150μl/孔的Reading buffer溶液于MSD计数仪上进行计数；
根据MSD计数仪的输出结果计算泛素结合酶抗体的抗体指数。
CN202110529869.5A 2021-05-14 2021-05-14 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法 Pending CN113138272A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110529869.5A CN113138272A (zh) 2021-05-14 2021-05-14 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110529869.5A CN113138272A (zh) 2021-05-14 2021-05-14 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113138272A true CN113138272A (zh) 2021-07-20

Family

ID=76817329

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110529869.5A Pending CN113138272A (zh) 2021-05-14 2021-05-14 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113138272A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114441610A (zh) * 2021-12-31 2022-05-06 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） 一种检测胰岛素抗体各亚型的电化学发光法检测试剂盒
CN116908433A (zh) * 2023-06-26 2023-10-20 广州市妇女儿童医疗中心 一种nexn化学发光检测试剂盒及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060188951A1 (en) * 2003-02-24 2006-08-24 In Hee Mook Method for measuring the level of anti-beta-amyloid antibody in body fluids and diagnostic kit for alzheimer's disease using same
CN107449904A (zh) * 2017-09-06 2017-12-08 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 一种自身免疫性糖尿病检测用反应膜条、制备和使用方法
CN111579791A (zh) * 2020-04-30 2020-08-25 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） 一种锌转运体8胰岛自身抗体的电化学发光检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060188951A1 (en) * 2003-02-24 2006-08-24 In Hee Mook Method for measuring the level of anti-beta-amyloid antibody in body fluids and diagnostic kit for alzheimer's disease using same
CN107449904A (zh) * 2017-09-06 2017-12-08 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 一种自身免疫性糖尿病检测用反应膜条、制备和使用方法
CN111579791A (zh) * 2020-04-30 2020-08-25 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） 一种锌转运体8胰岛自身抗体的电化学发光检测试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
康欢欢;刘建华;吴丽娜;秦晓松;: "胰岛自身抗体在糖尿病中的应用及研究进展" *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114441610A (zh) * 2021-12-31 2022-05-06 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） 一种检测胰岛素抗体各亚型的电化学发光法检测试剂盒
CN114441610B (zh) * 2021-12-31 2023-02-24 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） 一种检测胰岛素抗体各亚型的电化学发光法检测试剂盒
CN116908433A (zh) * 2023-06-26 2023-10-20 广州市妇女儿童医疗中心 一种nexn化学发光检测试剂盒及其应用
CN116908433B (zh) * 2023-06-26 2024-05-07 广州市妇女儿童医疗中心 一种nexn化学发光检测试剂盒及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102081101B (zh) 用于在急性中风或暂时性缺血性发作的患者中诊断细菌感染和指导抗生素治疗的降钙素原
CN113138272A (zh) 一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法
LEWIS et al. Hemagglutination in the diagnosis of toxoplasmosis and amebiasis
Monteiro et al. Oral extracellular vesicles in early pregnancy can identify patients at risk of developing gestational diabetes mellitus
CN101452001A (zh) 化学发光磁酶免疫法定量检测rbp4试剂盒
Mitchell et al. T-cell responses to hybrid insulin peptides prior to type 1 diabetes development
CN102967704B (zh) 一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒
CN108414769A (zh) 一种用于心衰标志物检测的蛋白芯片及其制备方法
Hartman et al. Salivary glucose concentration exhibits threshold kinetics in normal-weight, overweight, and obese children
CN1173182C (zh) 糖尿病自身免疫抗体检测蛋白芯片、其制备及检测方法
Liang et al. Clinical manifestation and islet β-cell function of a subtype of latent autoimmune diabetes in adults (LADA): positive for T cell responses in phenotypic type 2 diabetes
Rochmah et al. Zinc transporter 8 autoantibody in the diagnosis of type 1 diabetes in children
CN106053835A (zh) 川崎病的诊断标志物和治疗靶点
US20160231334A1 (en) Compositions and Methods for Evaluating Metabolic Syndrome and Related Diseases
CN106053783A (zh) 一种适用于结核感染t细胞检测的快速时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN114441610A (zh) 一种检测胰岛素抗体各亚型的电化学发光法检测试剂盒
JP5196522B2 (ja) 移植用膵島の評価方法
CN208818724U (zh) 一种快速定量检测il-6和pct的免疫荧光层析试剂盒
Allawi et al. Role of Anti-Nucleosome Antibodies in Diagnosis and Evaluation of both Disease Activity and Response to Therapy in Lupus Nephritis
Bañuelos-Andrío et al. Usefulness of analytical parameters in the management of pediatric patients with suspicion of acute pyelonephritis. Is procalcitonin reliable?
CN205679616U (zh) 一种用于急性心梗检测的免疫荧光检测仪
Acid Standard Operating Procedures
CN116482361B (zh) 一种检测结核感染状态的试剂、试剂盒及应用
CN103185778B (zh) 一种检测抗Scl70抗体的试剂装置及其方法
KR20220018149A (ko) 인라인 마이크로 튜브세트를 이용한 잠복결핵 감염 검사방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination