CN113100134A - 一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其依次包括如下步骤：母本管理、候选交尾父本的饲养与筛选、父本半定向交尾、亲本确定、受精卵处理、幼体选育和虾苗培育。该方法结合凡纳滨对虾的繁殖习性与特征，从候选交尾父本中筛选出1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满，追逐能力强的雄虾，将该1尾雄虾与5尾卵巢饱满的雌虾进行半定向交尾，以提高交配的成功率，该方法能够快捷高效地构建凡纳滨对虾的全同胞家系，并得到大量的全同胞家系子代，还能简单、快捷地确定全同胞家系的亲本，以便能完整准确地获得全同胞家系亲本的遗传及性状特征，进而为凡纳滨对虾分子标记辅助育种提供重要的技术支撑。
Description
技术领域
本发明属于遗传育种技术领域，特别是涉及一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法。
背景技术
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei，又称南美白对虾)养殖业是我国水产养殖的支柱产业之一。然而，对于优质的凡纳滨对虾的亲虾，我国长期依靠进口，且国内育种工作仍以传统选育为主。加强凡纳滨对虾分子遗传育种技术的研究，将有助于改善我国凡纳滨对虾产业的不利局面，促进对虾养殖产业的健康发展。
目前，已有的全同胞家系构建技术中，通过取精、卵并直接混合的方法可以直接确定父本和母本，但这种方法需要杀死亲虾，且该方法的受精率较低，无法得到大量子代；而利用雌虾体内残留的精荚组织获取雄虾DNA，再通过亲权鉴定技术确定雄虾的方法，可以得到较多子代，但后续亲权鉴定程序步骤多，较繁琐。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，该方法的平均交配成功率能达100％，且能高效快捷地构建凡纳滨对虾全同胞家系并简单、快捷地确定全同胞家系的亲本，进而能得到大量的全同胞家系子代。
基于此，本发明公开了一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，所述雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于雌虾池中且投喂活体饵料进行饲养，其中，所述活体饵料为活体沙蚕和活体蚝肉，所述活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1进行投喂；
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：所述雄虾不去除眼柄，将雄虾置于雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，所述候选交尾父本按质量比2：1投喂所述活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的所述雌虾放入另一个新的池子，作为交配池；在所述候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入所述交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵；
步骤四，亲本确定：在所述容器中待产卵的雌虾即为母本，放入所述交配池中的雄虾即为父本；
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，以免幼体缺氧；
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育；
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
其中，候选交尾父本投喂活体饵料的同时，还投喂新鲜鱿鱼饵料，以增强候选交尾父本精荚的活力，并提高候选交尾父本的质量，进而提高交尾的成功率，以获得大量的子代。
优选地，步骤一中，所述雌虾池的水体深度为30-45cm。
优选地，步骤二中，所述雄虾池的水体深度为65-100cm。
优选地，步骤三中，所述交配池的水体深度为65-100cm、面积为5-15m2。
优选地，步骤五中，对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在6-8mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧。
优选地，步骤五中，加大充气，使水体中的溶氧控制在8-12mg/L，以免幼体缺氧。
与现有技术相比，本发明至少包括以下有益效果：
本发明的凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其结合了凡纳滨对虾的繁殖习性与特征，从雄虾中挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，采用活体饵料(即由活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1组成的活体饵料)和新鲜鱿鱼饵料对候选交尾父本进行精心饲养，再从候选交尾父本中筛选出1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾，将该1尾雄虾与5尾卵巢饱满的雌虾进行半定向交尾，以提高交配的成功率，该方法能确保雄虾与雌虾100％的平均交配成功率，交配率高、且稳定；而且，该方法无需杀死亲虾，也无需亲权鉴定等繁琐的程序，即可高效快捷地构建凡纳滨对虾的全同胞家系，其子代幼体的平均成活率高达85.3％以上，能够得到大量的全同胞家系子代；还能简单、快捷地确定全同胞家系的亲本(即父本和母本)，解决了现有技术中构建全同胞家系及确定父本困难的技术问题，以便能完整、准确地获得全同胞家系亲本的遗传及性状特征，进而为凡纳滨对虾分子标记辅助育种提供重要的技术支撑。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于水体深度为40cm的雌虾池中且按质量比2：1投喂活体沙蚕与活体蚝肉进行饲养。
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：雄虾不去除眼柄，将雄虾置于水体深度为75cm的雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，候选交尾父本按质量比2：1投喂活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；其中，活体饵料由活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1组成。
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的雌虾放入另一个新的池子，作为交配池，其中，交配池的水体深度为80cm、面积为12m2；在候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵。
步骤四，亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本，放入交配池中的雄虾即为父本。
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在6mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，使水体中的溶氧控制在10mg/L，以免幼体缺氧。
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育。
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
实施例2
本实施例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于水体深度为30cm的雌虾池中且按质量比2：1投喂活体沙蚕与活体蚝肉进行饲养。
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：雄虾不去除眼柄，将雄虾置于水体深度为100cm的雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，候选交尾父本按质量比2：1投喂活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；其中，活体饵料由活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1组成。
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的雌虾放入另一个新的池子，作为交配池，其中，交配池的水体深度为65cm、面积为15m2；在候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵。
步骤四，亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本，放入交配池中的雄虾即为父本。
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在7mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，使水体中的溶氧控制在12mg/L，以免幼体缺氧。
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育。
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
实施例3
本实施例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于水体深度为45cm的雌虾池中且按质量比2：1投喂活体沙蚕与活体蚝肉进行饲养。
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：雄虾不去除眼柄，将雄虾置于水体深度为65cm的雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，候选交尾父本按质量比2：1投喂活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；其中，活体饵料由活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1组成。
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的雌虾放入另一个新的池子，作为交配池，其中，交配池的水体深度为100cm、面积为5m2；在候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵。
步骤四，亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本，放入交配池中的雄虾即为父本。
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在8mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，使水体中的溶氧控制在11mg/L，以免幼体缺氧。
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育。
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
实施例4
本实施例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于水体深度为35cm的雌虾池中且按质量比2：1投喂活体沙蚕与活体蚝肉进行饲养。
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：雄虾不去除眼柄，将雄虾置于水体深度为70cm的雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，候选交尾父本按质量比2：1投喂活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；其中，活体饵料由活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1组成。
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的雌虾放入另一个新的池子，作为交配池，其中，交配池的水体深度为75cm、面积为9m2；在候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵。
步骤四，亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本，放入交配池中的雄虾即为父本。
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在6mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，使水体中的溶氧控制在8mg/L，以免幼体缺氧。
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育。
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
对比例1
本对比例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法与实施例1基本相同，其区别仅在于：本对比例挑选2尾卵巢饱满的雌虾与1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾进行半定向交尾。
对比例2
本对比例的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法与实施例1基本相同，其区别仅在于：本对比例挑选15尾卵巢饱满的雌虾与1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾进行半定向交尾。
其中，实施例1-4分别经20次试验后，其所得的平均交配成功率均达100％，且其幼体的平均成活率均在85.3％以上。而经对比例1-2的对比试验发现，对比例1的交配成功率极不稳定，对比例1经20次试验所得的平均交配成功率仅为85.52％，其幼体的平均成活率仅为62.3％。而对比例2，由于其参与半定向交尾的雌虾数量高达15尾，所以，能确保其平均交配成功率达100％，但是，其幼体的平均成活率为80.2％，略低于实施例1-4，而且，采用数量高达15尾的雌虾与1尾雄虾进行半定向交尾，雌虾的利用率较低，浪费了雌虾资源。
综上，实施例1-4的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，具有如下优势：(1)该方法能获得全同胞家系，对虾育种提供好的研究方法和技术支持；(2)交配后的雌虾腹部白色精荚明显，在交配池边捞出，即可简单、快捷的确定母本及父本，母本和父本的确定更加容易；(3)父本半定向交尾后，雄虾与雌虾的平均交配成功率均为100％，交配率高、且稳定；(4)父本半定向交尾后，幼体的平均成活率高达85.3％以上。
尽管已描述了本发明实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明实施例范围的所有变更和修改。
以上对本发明所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (6)
1.一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，母本管理：雌虾去除单侧眼柄，所述雌虾与雄虾分开饲养，将雌虾置于雌虾池中且投喂活体饵料进行饲养，其中，所述活体饵料为活体沙蚕和活体蚝肉，所述活体沙蚕与活体蚝肉按质量比2：1进行投喂；
步骤二，候选交尾父本的饲养与筛选：所述雄虾不去除眼柄，将雄虾置于雄虾池中饲养，挑选精荚呈乳白色的雄虾作为候选交尾父本，所述候选交尾父本按质量比2：1投喂所述活体饵料与新鲜鱿鱼饵料；
步骤三，父本半定向交尾：在上午挑选5尾卵巢饱满的所述雌虾放入另一个新的池子，作为交配池；在所述候选交尾父本中挑选1尾精荚呈乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入所述交配池中，与雌虾进行半定向交尾；然后，当天下午将纳精囊已打入精荚的交尾后的雌虾放入单独的容器中待产卵；
步骤四，亲本确定：在所述容器中待产卵的雌虾即为母本，放入所述交配池中的雄虾即为父本；
步骤五，受精卵处理：定期检查交尾后的雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气，以免幼体缺氧；
步骤六，幼体选育：将孵出的无节幼体置于幼体专用筛选装置中选取上层趋光性强的幼体进行虾苗培育；
步骤七，虾苗培育：将步骤六中确定所述父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。
2.根据权利要求1所述的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤一中，所述雌虾池的水体深度为30-45cm。
3.根据权利要求1所述的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤二中，所述雄虾池的水体深度为65-100cm。
4.根据权利要求1所述的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤三中，所述交配池的水体深度为65-100cm、面积为5-15m2。
5.根据权利要求1所述的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤五中，对受精卵进行微充气，使水体中的溶氧控制在6-8mg/L，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧。
6.根据权利要求1或5所述的一种凡纳滨对虾父本半定向交尾的全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤五中，加大充气，使水体中的溶氧控制在8-12mg/L，以免幼体缺氧。
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Citations (5)
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|---|---|---|---|---|
| US20040194156A1 (en) * | 2002-12-27 | 2004-09-30 | Califa Llc | Transgenic aquatic invertebrates as a bioreactor for production of recombinant polypeptides |
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-
2021
- 2021-04-13 CN CN202110395286.8A patent/CN113100134A/zh active Pending
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