CN113092792A - 一种检测abo血型抗原的方法、系统及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测ABO血型抗原的方法、系统及其应用，属于生物检测技术领域。本发明提供了一种基于固相吸附法检测ABO血型抗原的正定型方法，此方法为将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部的吸附情况，根据吸附情况判断待分型红细胞的ABO血型抗原；此方法避免了人工操作，易于自动化操作且稳定性高，此方法包被抗体用量少、样本红细胞经稀释后也是微量，反应结果清晰宜读，灵敏度高且特异性强，并且，此方法摆脱对价格较高的凝胶的依赖，两个微孔和微量抗体与样本红细胞就可以鉴定一个样本红细胞的血型抗原，成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测ABO血型抗原的方法、系统及其应用，属于生物检测领域。
背景技术
ABO血型可以分为A型、B型、O型和AB型，是经典的人类遗传标记，在输血、亲子鉴定、人类学研究、法医物证检验等领域均占据重要地位，其中，临床输血中ABO血型分型的意义最为重要，属于临床输血前检查的必查项目。
ABO血型分型可分正定型和反定型。正定型是用抗A和抗B抗体去鉴定被检者红细胞上有没有相应的抗原，反定型是用A型红细胞和B型红细胞去鉴定被检者血清(血浆)中有无相应的抗体。根据正反定型结果，进而检测出被检者ABO系统的具体血型。
目前，通用的ABO血型分型方法有玻片法(纸片法)、试管法、微板凝集法、微柱凝胶法等方法(玻片法、试管法、微板凝集法、微柱凝胶法均记载于《全国临床检验操作规程》中)。但是，这些方法均存在缺陷，例如：
玻片法和试管法需要人工进行混匀的步骤，费时费力，还容易产生人为误差；
微板凝集法抗体和红细胞的加样量和抗体批间差异会影响结果的稳定性；
微柱凝胶法在运输过程中试剂凝胶容易变形和产生气泡，影响检测结果。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种检测ABO血型抗原的方法，所述方法包含分型步骤；所述分型步骤为：将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心，离心结束后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部是否被抗体吸附；
若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型；
若待分型红细胞仅在包被有抗B抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型；
若待分型红细胞仅在包被有抗A抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型；
若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为90～360g、时间为1～30min。
在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为190～360g、时间为1～3min。
在本发明的一种实施方式中，所述分型步骤前，还包含稀释步骤；所述稀释步骤为：将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述稀释步骤为：用Liss(低离子强度溶液)或生理盐水将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述稀释步骤为：用生理盐水将待分型红细胞洗涤3～5次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器或包被有抗B抗体的容器中的添加量为10～100μL。
在本发明的一种实施方式中，所述包被有抗A抗体的容器的制备方法为：将抗A抗体添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；在经包被的容器中加入含有BSA(牛血清蛋白)和Tween20(吐温-20)的缓冲液A后，于37℃封闭1～6h，得到包被有抗A抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液A为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液A中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液A中的体积浓度为0.02～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述包被有抗A抗体的容器的制备方法包含如下步骤：
包被步骤：用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗A抗体倍比稀释16～2048倍，得到稀释液；将稀释液添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；
第一次洗板步骤：在经包被的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到经洗涤的容器；
封闭步骤：在经洗涤的容器中加入含有体积浓度为0.1～5％的BSA和体积浓度为0.02～1％的Tween20的pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭1～6h，得到经封闭的容器；
第二次洗板步骤：在经封闭的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到包被有抗A抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述包被有抗B抗体的容器的制备方法为：将抗B抗体添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；在经包被的容器中加入含有BSA和Tween20的缓冲液B后，于37℃封闭1～6h，得到包被有抗B抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液B为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液B中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液B中的体积浓度为0.02～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述包被有抗B抗体的容器的制备方法包含如下步骤：
包被步骤：用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗B抗体倍比稀释16～2048倍，得到稀释液；将稀释液添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；
第一次洗板步骤：在经包被的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到经洗涤的容器；
封闭步骤：在经洗涤的容器中加入含有体积浓度为0.1～5％的BSA和体积浓度为0.02～1％的Tween20的pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭1～6h，得到经封闭的容器；
第二次洗板步骤：在经封闭的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到包被有抗B抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述容器为微孔板。
在本发明的一种实施方式中，所述微孔板为U型微孔板。
本发明还提供了利用上述方法进行检测的系统，所述系统包括分别包被有抗A抗体和抗B抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述容器为微孔板。
在本发明的一种实施方式中，所述微孔板为U型微孔板。
本发明还提供了上述系统的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
包被步骤：将抗A抗体或抗B抗体添加至容器中，于2～8℃包被8～16h，洗涤，得到经包被的容器；
封闭步骤：在经包被的容器中加入含有BSA和Tween20的缓冲液B，于37℃封闭1～6h，洗涤，得到包被有抗A抗体或抗B抗体的容器。
在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液中的体积浓度为0.02～1％。
在本发明的一种实施方式中，所述包被步骤中，先用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗A抗体或抗B抗体稀释至16～2048倍，得到稀释液，再将稀释液添加至容器中。
在本发明的一种实施方式中，所述洗涤步骤为：加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次。
本发明还提供了上述方法或上述系统在检测ABO血型抗原中的应用。
本发明技术方案，具有如下优点：
本发明提供了一种基于固相吸附法检测ABO血型抗原的正定型方法，所述方法为将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心，离心结束后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部是否被抗体吸附，若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型，若待分型红细胞仅在包被有抗B抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型，若待分型红细胞仅在包被有抗A抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型，若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型；所述方法可以避免人工操作，具有易于自动化操作和稳定性高的优势，所述方法包被抗体用量少、样本红细胞经稀释后也是微量，反应结果清晰宜读，具有灵敏度高和特异性强的优势，并且，所述方法摆脱对价格较高的凝胶的依赖，两个微孔和微量抗体与样本红细胞就可以鉴定一个样本红细胞的血型抗原，具有成本低的优势。
附图说明
图1：一种检测ABO血型抗原的方法的检测原理图。图2中，从左至右依次为：包被有抗A抗体或抗B抗体的容器，添加了待测红细胞的包被有抗A抗体或抗B抗体的容器，红细胞被吸附的包被有抗A抗体或抗B抗体的容器，红细胞没有被吸附的包被有抗A抗体或抗B抗体的容器。
图2：一种检测ABO血型抗原的方法的检测结果图。图2中，阳性结果为红细胞被容器底部的抗体吸附，根据吸附程度的高低，阳性结果分为4+、3+、2+和1+；阴性结果为红细胞不能被容器底部的抗体吸附，从而在容器底部形成圆形细胞扣。
图3：A型红细胞的ABO血型抗原分型实验结果图(以试管法和微柱凝胶法为对照)。
图4：B型红细胞的ABO血型抗原分型实验结果图(以试管法和微柱凝胶法为对照)。
图5：AB型红细胞的ABO血型抗原分型实验结果图(以试管法和微柱凝胶法为对照)。
图6：O型红细胞的ABO血型抗原分型实验结果图(以试管法和微柱凝胶法为对照)。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1：一种检测ABO血型抗原的方法
本实施例提供了一种检测ABO血型抗原的方法(检测原理见图1，可能的检测结果见图2)，所述方法包括如下步骤：
(1)包被：用pH 9.6的碳酸盐缓冲液分别将效价512的抗A抗体、抗B抗体倍比稀释64倍，得到稀释液A、B；将稀释液A、B分别以每孔100μL的添加量加入U型微孔板后，于4℃包被12h，得到经包被的微孔板A、B；
(2)第一次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经包被的微孔板A、B中加入pH 7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤的微孔板A1、B1；
(3)封闭：以每孔250μL的添加量分别在经洗涤的微孔板A1、B1中加入含有体积浓度为1％的BSA和体积浓度为0.02％的Tween20的pH 9.6的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭2h，得到经封闭的微孔板A、B；
(4)第二次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经封闭的微孔板A、B中加入pH 7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤孔板A2、B2；
(5)稀释：用生理盐水将待分型红细胞洗涤3次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至浓度为0.5％，得到待分型红细胞悬液；
(6)分型：以每孔30μL的添加量在经洗涤孔板A2、B2中分别加入待分型红细胞悬液后，于190g的转速下离心1min，得到经离心的微孔板A、B；观察经离心的微孔板A、B，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板B底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板A底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
实施例2：一种检测ABO血型抗原的方法
本实施例提供了一种检测ABO血型抗原的方法(检测原理见图1，可能的检测结果见图2)，所述方法包括如下步骤：
(1)包被：用pH 8.9的碳酸盐缓冲液分别将效价512的抗A抗体、抗B抗体倍比稀释1024倍，得到稀释液A、B；将稀释液A、B分别以每孔100μL的添加量加入U型微孔板后，于2℃包被8h，得到经包被的微孔板A、B；
(2)第一次洗板：以每孔200μL的添加量分别在经包被的微孔板A、B中加入pH 7.0的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤的微孔板A1、B1；
(3)封闭：以每孔200μL的添加量分别在经洗涤的微孔板A1、B1中加入含有体积浓度为0.1％的BSA和体积浓度为0.02％的Tween20的pH 8.9的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭1h，得到经封闭的微孔板A、B；
(4)第二次洗板：以每孔200μL的添加量分别在经封闭的微孔板A、B中加入pH 7.0的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤孔板A2、B2；
(5)稀释：用生理盐水将待分型红细胞洗涤3次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至浓度为0.3％，得到待分型红细胞悬液；
(6)分型：以每孔40μL的添加量在经洗涤孔板A2、B2中分别加入待分型红细胞悬液后，于190g的转速下离心1min，得到经离心的微孔板A、B；观察经离心的微孔板A、B，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板B底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板A底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
实施例3：一种检测ABO血型抗原的方法
本实施例提供了一种检测ABO血型抗原的方法(检测原理见图1，可能的检测结果见图2)，所述方法包括如下步骤：
(1)包被：用pH 9.8的碳酸盐缓冲液分别将效价512的抗A抗体、抗B抗体倍比稀释512倍，得到稀释液A、B；将稀释液A、B分别以每孔100μL的添加量加入U型微孔板后，于8℃包被16h，得到经包被的微孔板A、B；
(2)第一次洗板：以每孔280μL的添加量分别在经包被的微孔板A、B中加入pH 6.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤的微孔板A1、B1；
(3)封闭：以每孔280μL的添加量分别在经洗涤的微孔板A1、B1中加入含有体积浓度为3％的BSA和体积浓度为1％的Tween20的pH 9.8的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭6h，得到经封闭的微孔板A、B；
(4)第二次洗板：以每孔280μL的添加量分别在经封闭的微孔板A、B中加入pH 6.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤孔板A2、B2；
(5)稀释：用生理盐水将待分型红细胞洗涤5次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至浓度为1％，得到待分型红细胞悬液；
(6)分型：以每孔100μL的添加量在经洗涤孔板A2、B2中分别加入待分型红细胞悬液后，于360g的转速下离心3min，得到经离心的微孔板A、B；观察经离心的微孔板A、B，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板B底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板A底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
实施例4：一种检测ABO血型抗原的方法
本实施例提供了一种检测ABO血型抗原的方法(检测原理见图1，可能的检测结果见图2)，所述方法包括如下步骤：
(1)包被：用pH 9.6的碳酸盐缓冲液分别将效价512的抗A抗体、抗B抗体倍比稀释64倍，得到稀释液A、B；将稀释液A、B分别以每孔100μL的添加量加入U型微孔板后，于4℃包被12h，得到经包被的微孔板A、B；
(2)第一次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经包被的微孔板A、B中加入pH 7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤的微孔板A1、B1；
(3)封闭：以每孔250μL的添加量分别在经洗涤的微孔板A1、B1中加入含有体积浓度为1％的BSA和体积浓度为0.02％的Tween20的pH 9.6的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭2h，得到经封闭的微孔板A、B；
(4)第二次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经封闭的微孔板A、B中加入pH 7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤孔板A2、B2；
(5)稀释：用生理盐水将待分型红细胞洗涤3次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至浓度为0.5％，得到待分型红细胞悬液；
(6)分型：以每孔30μL的添加量在经洗涤孔板A2、B2中分别加入待分型红细胞悬液后，于90g的转速下离心30min，得到经离心的微孔板A、B；观察经离心的微孔板A、B，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板B底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型，若待分型红细胞仅在经离心的微孔板A底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型，若待分型红细胞在经离心的微孔板A、B底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
实验例1：ABO血型抗原分型实验(已知ABO血型抗原)
1.1实验材料
1.1.1试剂
鼠抗人红细胞A抗原IgM(效价512，购自Millipore公司)，鼠抗人红细胞B抗原IgM(效价512，购自Millipore公司)，pH 9.6的碳酸盐缓冲液(购自Sigma公司)，pH 7.2的PBS缓冲液(购自Sigma公司)，Tween20(购自Sigma公司)、BSA(购自赛默飞公司)，Liss(购自江苏力博医药生物技术股份有限公司)，微柱凝胶ABO血型检测卡(购自江苏力博医药生物技术股份有限公司)，A型、B型、AB型、O型红细胞(购自江苏力博医药生物技术股份有限公司)。
1.1.2耗材
试管离心机，微板离心机，全自动微板操作系统，10～1000μL加样枪，U型可拆卸96微孔板(购自NUNC Maxisorp公司)。
1.2ABO血型抗原分型实验方法
ABO血型抗原分型实验以试管法和微柱凝胶法为对照(试管法和微柱凝胶法均记载于《全国临床检验操作规程》中)，使用实施例1中的检测ABO血型抗原的方法，包含如下步骤：
1.2.1包被：用pH 9.6的碳酸盐缓冲液分别将鼠抗人红细胞A抗原IgM、鼠抗人红细胞B抗原IgM倍比稀释64倍，得到稀释液A、B；将稀释液A、B分别以每孔100μL的添加量加入U型可拆卸96微孔板后，于4℃包被12h，得到经包被的微孔板A、B；
1.2.2第一次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经包被的微孔板A、B中加入pH7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤的微孔板A1、B1；
1.2.3封闭：以每孔250μL的添加量分别在经洗涤的微孔板A中加入含有体积浓度为1％的BSA和体积浓度为0.02％的Tween20的pH 9.6的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭2h，得到经封闭的微孔板A、B；
1.2.4第二次洗板：以每孔250μL的添加量分别在经封闭的微孔板A、B中加入pH7.2的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤5次，每次洗涤均需将微孔板中的剩余液体吸干，得到经洗涤孔板A2、B2；
1.2.5稀释：用生理盐水分别将A型、B型、AB型、O型红细胞洗涤3次后，用Liss分别将A型、B型、AB型、O型红细胞分别稀释至浓度为0.5％，得到A型、B型、AB型、O型红细胞悬液；
1.2.6分型：以每孔30μL的添加量分别在经洗涤孔板A2、B2中分别加入A型、B型、AB型、O型红细胞悬液后，于190g的转速下离心1min，得到经离心的微孔板A、B；观察经离心的微孔板A、B，观察结果见图3～6。
1.3ABO血型抗原分型实验结果
如图3～6所示，A型、B型、AB型、O型红细胞的分型结果均与试管法和微柱凝胶法相符合。可见，使用实施例1中的检测ABO血型抗原的方法对A型、B型、AB型、O型红细胞进行分型的结果准确。
实验例2：ABO血型抗原分型实验(未知ABO血型抗原)
2.1实验材料
参见实验例1。
2.2ABO血型抗原分型实验方法
采用实验例1相同的检测试剂和方法，区别在于，将A型、B型、AB型、O型红细胞替换为10例未知ABO血型抗原的临床样本；观察检测结果，结果见表1。
2.3ABO血型抗原分型实验结果
如表1所示，使用实施例1中的检测ABO血型抗原的方法对10例未知ABO血型抗原的临床样本进行分型的结果与试管法和微柱凝胶法均相符，其中，1号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为A型，用实施例1的方法鉴定结果为A型，2号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为B型，用实施例1的方法鉴定结果为B型，3号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为AB型，用实施例1的方法鉴定结果为AB型，4号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为O型，用实施例1的方法鉴定结果为O型，5号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为A型，用实施例1的方法鉴定结果为A型，6号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为O型，用实施例1的方法鉴定结果为O型，7号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为O型，用实施例1的方法鉴定结果为O型，8号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为A型，用实施例1的方法鉴定结果为A型，9号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为B型，用实施例1的方法鉴定结果为B型，10号样本试管法与微柱凝胶法鉴定结果为O型，用实施例1的方法鉴定结果为O型。可见，使用实施例1中的检测ABO血型抗原的方法对A型、B型、AB型、O型红细胞进行分型的结果准确。
表1 10例未知ABO血型抗原的临床样本的分型结果
注：试管法A为使用抗A抗体的试管法，试管法B为使用抗B抗体的试管法，微柱凝胶法A为使用抗A抗体的微柱凝胶法，微柱凝胶法B为使用抗B抗体的微柱凝胶法。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述方法包含分型步骤；所述分型步骤为：将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心，离心结束后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部是否被抗体吸附；
若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型；
若待分型红细胞仅在包被有抗B抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型；
若待分型红细胞仅在包被有抗A抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型；
若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
2.如权利要求1所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述离心的转速为90～360g、时间为1～30min。
3.如权利要求1或2所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述分型步骤前，还包含稀释步骤；所述稀释步骤为：将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
4.如权利要求3所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述待分型红细胞采用Liss或生理盐水进行稀释。
5.利用权利要求1～4任一项所述的一种检测ABO血型抗原的方法进行检测的系统，其特征在于，所述系统包括分别包被有抗A抗体和抗B抗体的容器。
6.如权利要求5所述的系统，其特征在于，所述容器为微孔板。
7.权利要求5或6所述的系统的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
包被步骤：将抗A抗体或抗B抗体添加至容器中，于2～8℃包被8～16h，洗涤，得到经包被的容器；
封闭步骤：在经包被的容器中加入含有BSA和Tween20的缓冲液B，于37℃封闭1～6h，洗涤，得到包被有抗A抗体或抗B抗体的容器。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液中的体积浓度为0.02～1％。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述包被步骤中，先用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗A抗体或抗B抗体稀释至16～2048倍，得到稀释液，再将稀释液添加至容器中；
所述洗涤步骤为：加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次。
10.权利要求1～4任一项所述的一种检测ABO血型抗原的方法或权利要求5或6所述的系统在检测ABO血型抗原中的应用。
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