CN113087842B - 一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及分子印迹聚合物技术领域，尤其涉及一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备与应用。本发明通过非共价键法，以磁性碳纳米管为载体，阿魏酸为模板分子，α‑甲基丙烯酸为功能单体，偶氮二异丁氰为引发剂，二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂，进一步将磁性碳纳米管制备成分子印迹聚合物，结合磁性固相萃取技术与高效液相色谱联用，成功将其应用于中药川芎提取液中活性物质阿魏酸的分离富集与服用复方太太口服液的大鼠血浆中阿魏酸含量的测定。本方法具有制备方法简单、成本低、特异性强的优势，其制备的阿魏酸分子印迹聚合物具有磁性，外加磁场下即可轻松分离，对复杂成分中的目标物质吸附容量大，且灵敏度高、富集效果好、回收率高、重复使用性好。

Description

一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及分子印迹聚合物技术领域，尤其涉及一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备与应用。
背景技术
阿魏酸(FA)，也称为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸。它是肉桂酸的衍生物之一。FA在阿魏、当归、川芎、升麻和枣仁等中草药中含量较高。阿魏酸可以清除自由基，促进清除自由基的酶的产生，增加谷胱甘肽转化硫酸酶的活性，并抑制酪氨酸酶的活性，从而调节人体的生理功能。此外，阿魏酸也是阿魏酸钠，对癌症、心脑血管疾病、糖尿病和阿尔茨海默氏病具有良好的治疗作用。基于FA在日常生活中的广泛分布，其含量的检测也受到越来越多的关注。
如今已经建立的几种检测阿魏酸的方法，包括高效液相色谱(HPLC)，薄层色谱扫描(TLCS)和高效毛细管电泳(HPCE)等，但是涉及到复杂的样品基体和痕量的阿魏酸的检测仍然存在许多限制，如费时、选择性低、成本高。为了提高检测的灵敏度，不仅需要从系统中分离目标物质，还需要进一步的富集。因此，找到一种简单、快速的样品前处理技术来提高分析灵敏度已变得越来越重要。
分子印迹技术具有选择性高、操作简便、速度快、化学稳定性好和易于制备的优点。通过分子印迹技术制备的聚合物称为分子印迹聚合物 (MIPS)。分子印迹聚合物可以将模板分子与具有相似结构的其他分子区别开来，并具有很高的物理稳定性、结构可预测性和低成本。因此，如何寻找一种分离阿魏酸效果优良的印迹聚合物是本领域所要解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种用于分离富集阿魏酸的阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法。本发明通过非共价键法，以磁性碳纳米管为载体，阿魏酸(FA)为模板分子，α-甲基丙烯酸 (MAA)为功能单体，偶氮二异丁氰(AIBN)为引发剂，二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂，进一步将磁性碳纳米管制备成分子印迹聚合物，结合磁性固相萃取技术与高效液相色谱联用，成功将其应用于中药川芎提取液中活性物质阿魏酸的分离富集与服用复方太太口服液的大鼠血浆中阿魏酸含量的测定。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将阿魏酸加入到无水甲醇中，再加入甲基丙烯酸，搅拌30～60min 后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯，得到混合液；
(2)将磁性碳纳米管加入到无水甲醇中，超声5～10min后，将其和步骤(1)的混合液进行混合后再超声30～60min得到预聚合液；
(3)交联聚维酮加入到无水甲醇中，在50～80℃下搅拌至均匀后，加入步骤(2)的预聚合液与偶氮二异丁氰，在50～80℃惰性气体保护下冷凝回流6～24h，得到聚合液；
(4)聚合液经分离后，将分离得到的聚合物用无水甲醇/乙酸的混合物清洗多次，直至阿魏酸不能被HPLC检测到为止；
(5)用无水甲醇再多次清洗以去除残留的乙酸，随后真空干燥，得到阿魏酸分子印迹聚合物。
优选的，所述步骤(1)中阿魏酸、甲基丙烯酸和二甲基丙烯酸乙二醇酯的摩尔比为1：(2～6)：(8～24)，更优选为1:4:20。
优选的，所述步骤(2)中每1g磁性碳纳米管加入4mL的甲醇，磁性碳纳米管与阿魏酸的质量比为4～6:1。
优选的，所述步骤(3)中加热温度为60℃，回流时间为12h。
优选的，所述步骤(3)中交联聚维酮与阿魏酸的摩尔比为(3～4)：1，交联聚维酮与偶氮二异丁氰的质量比为4:1。
优选的，所述步骤(3)中惰性气体为不与反应中各物质如溶剂、反应物和生成物反应的气体，如氮气、氩气或氦气的任意一种或多种混合。
优选的，所述步骤(4)中甲醇/乙酸的混合物中甲醇和乙酸的体积比为9:2。
优选的，所述步骤(4)中的分离操作为聚合液用外加磁场的方法将聚合物与溶剂分离开来。
优选的，所述步骤(5)中真空干燥温度为50℃，干燥时间为4-20h。
一种本发明制备方法制备的阿魏酸分子印迹聚合物的应用，所述阿魏酸分子印迹聚合物适用于复杂成分以及生物样品中阿魏酸的分离与测定。
优选的，所述阿魏酸分子印迹聚合物结合磁性固相萃取技术与高效液相色谱联用，将其应用于中药川芎提取液中活性物质阿魏酸的分离富集与服用复方太太口服液的大鼠血浆中阿魏酸含量的测定。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物具有制备方法简单、成本低、特异性强的优势。
(2)本发明制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物具有磁性，只需外加磁场，即可轻松分离。
(3)本发明制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物对复杂成分中的目标物质吸附容量大，且灵敏度高、富集效果好、回收率高、重复使用性好。
附图说明
图1为实施例1所制备的阿魏酸分子印迹聚合物的SEM图；
图2为实施例1所制备的阿魏酸分子印迹聚合物的TEM图；
图3为测试例2中等温吸附实验与动力学吸附实验的测试结果图；
图4为测试例2中选择性考察的测试结果图；
图5为川芎原溶液(a)、上清液(b)、洗脱液(c)及阿魏酸标准品(d) 的色谱图；
图6为试验例2的HPLC检测图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备及应用作进一步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。
实施例1
本发明提出的阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法具体步骤如下：
(1)磁性碳纳米管的制备：
将0.5g原始碳纳米管加入到50mL盐酸中，在40℃下磁力搅拌2h 后，用超纯水冲洗直至pH达到中性并干燥，然后再次加入到50mL硝酸中于60℃磁力搅拌7h，用超纯水洗至中性后真空干燥50℃得Ox-CNTs。取0.15gOx-CNTs和0.81g FeCl3·6H2O分散在40mL乙二醇溶液中超声2 h，再加入0.15g柠檬酸，3.60gCH3COONa，1.00g PEG2000，磁力搅拌1 h，在200℃下密封反应10h。冷却后分别用超纯水和无水乙醇进行洗涤， 0℃下在冷冻干燥8h。
(2)预组装液的制备：
1.0mmol阿魏酸标准品溶解于10mL无水甲醇中，再加入4.0mmol 甲基丙烯酸，将混合液在磁力搅拌器上搅拌30min得到预组装液。
(3)预聚合液的制备：
1.0g磁性碳纳米管加入到4mL无水甲醇中，放入超声仪中超声5min 得到混合物。20mmol二甲基丙烯酸乙二醇酯加入到预组装液中，再将二者一起加入到上述含磁性碳纳米管的混合物中，在超声仪中超声30min得到预聚合液。
(4)阿魏酸分子印迹聚合物的制备：
将0.4g交联聚维酮加入到80mL甲醇中，60℃下搅拌至均匀后再加入0.1g偶氮二异丁氰和预聚合液，在60℃氮气保护下冷凝回流12h，得到聚合液。用外加磁场的方法将聚合液中的聚合物与溶剂分离开来，将分离得到的聚合物用体积比为9:2的甲醇/乙酸的混合物清洗多次，直至模板分子阿魏酸不能被HPLC检测到为止。清洗过后的聚合物用无水甲醇再清洗多次以去除残留的乙酸，随后在真空干燥箱50℃下干燥过夜，此时得到的聚合物即为阿魏酸分子印迹聚合物。
实施例2
本发明提出的阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法具体步骤如下：
(1)磁性碳纳米管的制备：
将0.5g原始碳纳米管加入到50mL盐酸中，在40℃下磁力搅拌2h 后，用超纯水冲洗直至pH达到中性并干燥，然后再次加入到50mL硝酸中于60℃磁力搅拌7h，用超纯水洗至中性后真空干燥50℃得Ox-CNTs。取0.15gOx-CNTs和0.81g FeCl3·6H2O分散在40mL乙二醇溶液中超声2 h，再加入0.15g柠檬酸，3.60gCH3COONa，1.00g PEG2000，磁力搅拌1 h，在200℃下密封反应10h。冷却后分别用超纯水和无水乙醇进行洗涤， 0℃下在冷冻干燥8h。
(2)预组装液的制备：
1.0mmol阿魏酸标准品溶解于10mL无水甲醇中，再加入2.0mmol 甲基丙烯酸，将混合液在磁力搅拌器上搅拌30min得到预组装液。
(3)预聚合液的制备：
1.0g磁性碳纳米管加入到4mL无水甲醇中，放入超声仪中超声5min 得到混合物。8mmol二甲基丙烯酸乙二醇酯加入到预组装液中，再将二者一起加入到上述混合物中，在超声仪中超声30min得到预聚合液。
(4)阿魏酸分子印迹聚合物的制备：
将0.35g交联聚维酮加入到80mL甲醇中，50℃下搅拌至均匀后再加入0.1g偶氮二异丁氰和预聚合液，在50℃氮气保护下冷凝回流6h，得到聚合液。用外加磁场的方法将聚合液中的聚合物与溶剂分离开来，将分离得到的聚合物用体积比为9:2的甲醇/乙酸的混合物清洗多次，直至模板分子阿魏酸不能被HPLC检测到为止。清洗过后的聚合物用无水甲醇再清洗多次以去除残留的乙酸，随后在真空干燥箱50℃下干燥过夜，此时得到的聚合物即为阿魏酸分子印迹聚合物。
实施例3
本发明提出的阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法具体步骤如下：
(1)磁性碳纳米管的制备：
将0.5g原始碳纳米管加入到50mL盐酸中，在40℃下磁力搅拌2h 后，用超纯水冲洗直至pH达到中性并干燥，然后再次加入到50mL硝酸中于60℃磁力搅拌7h，用超纯水洗至中性后真空干燥50℃得Ox-CNTs。取0.15gOx-CNTs和0.81g FeCl3·6H2O分散在40mL乙二醇溶液中超声2 h，再加入0.15g柠檬酸，3.60gCH3COONa，1.00g PEG2000，磁力搅拌1 h，在200℃下密封反应10h。冷却后分别用超纯水和无水乙醇进行洗涤， 0℃下在冷冻干燥8h。
(2)预组装液的制备：
1.0mmol阿魏酸标准品溶解于10mL无水甲醇中，再加入6.0mmol 甲基丙烯酸，将混合液在磁力搅拌器上搅拌60min得到预组装液。
(3)预聚合液的制备：
1.0g磁性碳纳米管加入到4mL无水甲醇中，放入超声仪中超声10 min得到混合物。24mmol二甲基丙烯酸乙二醇酯加入到预组装液中，再将二者一起加入到上述混合物中，在超声仪中超声60min得到预聚合液。
(4)阿魏酸分子印迹聚合物的制备：
将0.4g交联聚维酮加入到80mL甲醇中，80℃下搅拌至均匀后再加入0.1g偶氮二异丁氰和预聚合液，在80℃氮气保护下冷凝回流24h，得到聚合液。用外加磁场的方法将聚合液中的聚合物与溶剂分离开来，将分离得到的聚合物用体积比为9:2的甲醇/乙酸的混合物清洗多次，直至模板分子阿魏酸不能被HPLC检测到为止。清洗过后的聚合物用无水甲醇再清洗多次以去除残留的乙酸，随后在真空干燥箱50℃下干燥过夜，此时得到的聚合物即为阿魏酸分子印迹聚合物。
测试例1用扫描电镜和透色电镜观察实施例1制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物的形貌
图1是阿魏酸分子印迹聚合物的扫描电镜SEM图，图中显示被打开的碳纳米管两端的端口明显有亮光的存在，因为洗脱模板分子过后会在碳纳米管表面留下孔洞，表明模板分子的骨架覆盖在磁性碳纳米管的表面上，而不会破坏磁性碳纳米管的管状结构。图2是阿魏酸分子印迹聚合物的透射电镜扫描TEM图。由图可知，在该倍数下的TEM图片表现为Fe3O4粒子串联在碳纳米管上。
测试例2测试实施例1制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物的吸附性能
(1)建立吸光度与浓度的标准曲线：
将质量浓度分别为0.056、0.112、0.224、0.448以及0.56μg/mL的阿魏酸系列梯度浓度的标准溶液进HPLC检测，每个浓度分别进样三次，色谱峰面积结果取平均值。
以色谱峰面积Y对阿魏酸与标准溶液的质量浓度X(mg/mL)进行线性回归。得到阿魏酸的线性方程为：Y＝0.468X+0.0322，R2＝0.9998。说明阿魏酸在质量浓度0.056～0.56μg/mL范围内线性关系良好。
(2)等温吸附实验：
1)配制对比例：
按照实施例1的制备方法制备对比例，但不加入模板分子阿魏酸，得到分子印迹聚合物MCNTs@NIPs。
2)等温吸附实验：
分别配制0.01～0.5mg/mL不同质量浓度的阿魏酸溶液10份，每份 10mL，将100mg的MCNTs@FA-MIPs分别加入每个水平浓度的阿魏酸溶液中，室温震荡吸附6h，用外部磁铁将MCNTs@FA-MIPs与阿魏酸水溶液分离开来，分离得到的阿魏酸溶液进行HPLC分析，平行实验3次。根据线性方程可计算吸附前后阿魏酸水溶液中游离阿魏酸浓度变化， MCNTs@FA-MIPs对阿魏酸的吸附量Q(mg/mL)可通过下列公式计算得出。
Q＝(C0-Ce)×V)/m
式中，C0为吸附前溶液中阿魏酸的质量浓度，mg/mL；Ce为吸附后溶液中阿魏酸的质量浓度，mg/mL；V为阿魏酸溶液上样量体积，mL；m为吸附剂使用质量，mg。
在FA初始浓度为0.01～0.5mg/mL范围内，使用静态平衡吸附法，测定了MCNTs@FA-MIPs与MCNTs@NIPs对不同初始浓度下的阿魏酸溶液中的阿魏酸吸附量，得到不同浓度下的等温吸附曲线，见图3A。由等温吸附曲线可知，MCNTs@FA-MIPs的吸附量随着浓度的增大而逐渐增加，而 MCNTs@NIPs在阿魏酸初始浓度大于0.3mg/mL时的吸附量己趋于饱和，并且在相同初始浓度下的MCNTs@FA-MIPs吸附量明显大于 MCNTs@NIPs的吸附量，说明在印迹过程中，模板分子在MCNTs@FA-MIPs 中选择性键合产生的印迹结合位点决定了MCNTs@FA-MIPs对FA的特异性结合能力远高于MCNTs@NIPs的非特异性结合。
(3)吸附动力学实验：
1)配制对比例：
按照实施例1的制备方法制备对比例，但不加入模板分子阿魏酸，得到分子印迹聚合物MCNTs@NIPs。
2)吸附动力学实验：
将100mg实施例1制备的阿魏酸分子印迹聚合物MCNTs@FA-MIPs 和100mg的分子印迹聚合物MCNTs@NIPs分别各加入到10mL质量浓度为0.5mg/mL的阿魏酸溶液中室温震荡，每隔30min分别取20μL阿魏酸溶液进行HPLC分析测定游离阿魏酸的浓度。
动力学吸附实验结果由图3B可知，随着时间的增加， MCNTs@FA-MIPs对阿魏酸的吸附量也逐渐增大，当吸附时间达到2h时，基本达到动态吸附平衡，即MCNTs@FA-MIPs对阿魏酸的吸附量接近于饱和。MCNTs@NIPs对阿魏酸的吸附量也随着时间增大，但是由于是非特异性结合，所以吸附量相对较低。
(3)选择性考察：
本发明选取与阿魏酸具有相似结构的肉桂酸作为阿魏酸的竞争底物以考察其对阿魏酸的选择性吸附性能。配制阿魏酸与肉桂酸质量浓度均为0.5 mg/mL的同体系混合溶液，取定量该混合溶液与阿魏酸分子印迹聚合物进行平衡吸附实验，测定平衡时混合溶液中阿魏酸与肉桂酸的质量浓度，计算得到静态吸附分配系数(KD)及分离因子(α)。
Figure BDA0003040956240000081
阿魏酸分子印迹聚合物的选择性考察结果由图4可知，阿魏酸分子印迹聚合物MCNTs@FA-MIPs对阿魏酸的分配系数KD为46.32±1.80，比肉桂酸的26.74±1.96大，分离因子为1.73，而对比例MCNTs@NIPs对阿魏酸和肉桂酸则没有较好的分离效果，说明本发明所制备的阿魏酸分子印迹聚合物对阿魏酸拥有识别选择性，即该吸附过程是特异性吸附。
试验例1
(1)中药川穹的提取：
将中药材川芎粉用100mL的90％乙醇75℃下冷凝回流3h，回流结束后进行抽滤。将所得滤液60℃下旋蒸至干燥后再溶解至100mL的40％乙醇中，将此时的溶解液标记为原液S1；所述中药材川穹粉购于厂家山东省丙一中药材。
(2)阿魏酸分子印迹聚合物对川芎提取物的吸附实验：
将5mL原液S1加入到50mg预先用甲醇活化过的阿魏酸分子印迹聚合物中，室温震荡2h后，用施加外部磁场的方法分离阿魏酸分子印迹聚合物与溶剂，分离得到的溶剂标记为S2。分离得到的阿魏酸分子印迹聚合物先用蒸馏水淋洗一遍以去除一些非特异性结合的活性物质，随后用5mL 洗脱剂进行洗脱30min，所述洗脱剂为体积比为9:2的甲醇/乙酸的混合物。结束后，将洗脱液与阿魏酸分子印迹聚合物分离开来，得到的洗脱液标记为S3。将S1、S2和S3进行HPLC分析，分析图谱见图3。
根据测试例2得到的标准曲线以及洗脱液中阿魏酸的色谱峰面积即可求得本实验中所购买川芎中的阿魏酸含量为1.295mg/g，加样回收率达到 95％以上。
图5为川芎原溶液S1(a)、上清液S2(b)、洗脱液S3(c)及阿魏酸标准品(d)的色谱图，可知，上清液中阿魏酸的含量几乎为零，而得到洗脱液S3中可以认为只有目标物质阿魏酸的存在。本试验例进一步证明了该分子印迹聚合物的成功，同时也说明此方法适用于中药川芎中阿魏酸的分离富集。
试验例2
(1)给药方案：
取SPF级健康雄性SD大鼠7只(许可证号：SCXK(浙)2014-0001)，体重230±10g，给药12h前禁食，自由饮水。规格为10mL的太太口服液浓缩至2mL给实验组6只大鼠进行灌胃，对照组大鼠灌胃同等剂量生理盐水。分别于一段时间眼眶取血500μL，于离心管中3000r/min离心10min 取血浆上清液。
(2)标准含药血浆的配制：
取对照组大鼠空白血浆200μL，分别加入阿魏酸对照品配制成阿魏酸质量浓度分别为0.28、0.56、1.12、2.24、2.8μg/mL的标准含药血浆，进行HPLC分析，得到各浓度下阿魏酸的峰面积，以此峰面积对各个浓度进行线性回归得标准含药血浆的线性方程。
(3)血浆样品的处理：
将200μL血浆样品加入到2倍体积下乙醇溶液，立即于离心机10000 r/min下离心15min，取上清液，加入到已经活化过后的阿魏酸分子印迹聚合物，涡旋震荡2h后用5mL洗脱液进行洗脱，洗脱液为体积比为9:2的甲醇/乙酸的混合物，得到的洗脱液于氮吹仪60℃下吹干，吹干后残渣进行HPLC分析。
空白含药血浆经过处理进HPLC分析得到的标准方程为： y＝0.3782x+0.0457(R2＝0.9991)，阿魏酸在空白血浆中质量浓度为0.28～2.8 μg/mL范围内线性关系良好。回收率达95％以上，在允许范围80～120％之间，表明该方法回收率较好。
分别在5、20、45min和2h时对大鼠进行血浆取样，取样后的血浆样品在处理前记为a，经步骤(3)磁性固相萃取技术处理后记为b，对应的 HPLC图谱见图6，由图6可知，在给大鼠灌胃太太口服液后，复方中的阿魏酸在2h后基本就已被肠胃迅速吸收完全，随后便进入代谢与排泄过程。给大鼠灌胃5min后血浆样品处理前变化图a，与空白含药血浆色谱图相比，图中并未出现阿魏酸的色谱峰，而在经过M-SPE处理后，对比图中空白含药血浆中阿魏酸FA出峰时间，在与对照品保留时间相同时间下，图b洗脱液在该时间有色谱峰出现，初步判断为阿魏酸，该方法可以检测到高效液相色谱下的检测限下的浓度，说明以本发明中制备的MCNTs@FA-MIPs为吸附剂的磁性固相萃取技术联用HPLC比仅使用HPLC具有更高的灵敏度。为给大鼠灌胃45min后血浆样品处理前后变化图结果显示，45min时，图 a中大鼠血浆中的阿魏酸已经可以通过HPLC检测到，磁性固相萃取处理后，图b中峰面积变大，说明方法灵敏度与准确度提高。灌胃2h后血浆样品处理前后变化图结果显示，大鼠体内阿魏酸已经被吸收完全参与体内代谢过程。以45min为药时曲线最高点来算，得到此时的血药浓度为1.48μg/mL。
该试验例可以检测到高效液相色谱下的阿魏酸检测限下的浓度，说明以本发明制备的阿魏酸分子印迹聚合物为吸附剂的磁性固相萃取技术联用 HPLC比仅使用HPLC具有更高的灵敏度和准确度。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制，即本发明的保护范围并不局限于此，通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下，任何根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将阿魏酸加入到无水甲醇中，再加入甲基丙烯酸，搅拌30 ~60min后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯，得到混合液；
（2）将磁性碳纳米管加入到无水甲醇中，超声5~10 min后，和步骤（1）的混合液进行混合，再超声30~60 min得到预聚合液；
（3）交联聚维酮加入到无水甲醇中，在50~80℃下搅拌至均匀后，加入步骤（2）的预聚合液与偶氮二异丁氰，在50~80℃惰性气体保护下冷凝回流6~24h，得到聚合液；
（4）聚合液经分离后，将分离得到的聚合物用无水甲醇/乙酸的混合物清洗多次，直至阿魏酸不能被HPLC检测到为止；
（5）用无水甲醇再多次清洗以去除残留的乙酸，随后真空干燥，得到阿魏酸分子印迹聚合物；
其中，所述步骤（1）中阿魏酸、甲基丙烯酸和二甲基丙烯酸乙二醇酯的摩尔比为1：（2~6）：（8~24）；
所述步骤（3）中交联聚维酮与阿魏酸的摩尔比为（3~4）：1，交联聚维酮与偶氮二异丁氰的质量比为4:1；
所述步骤（4）中甲醇/乙酸的混合物中甲醇和乙酸的体积比为9:2。
2.根据权利要求1所述一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中阿魏酸、甲基丙烯酸和二甲基丙烯酸乙二醇酯的摩尔比为1:4:20。
3.根据权利要求1所述一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中加热温度为60℃，回流时间为12h。
4.根据权利要求1所述一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中惰性气体为氮气、氩气或氦气的任意一种或多种混合。
5.根据权利要求1所述一种阿魏酸分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的分离操作为聚合液用外加磁场的方法将聚合物与溶剂分离开来。
6.一种权利要求1-5任意一种制备方法制备得到的阿魏酸分子印迹聚合物的应用，其特征在于，所述阿魏酸分子印迹聚合物适用于复杂成分以及生物样品中阿魏酸的分离与测定。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述阿魏酸分子印迹聚合物结合磁性固相萃取技术与高效液相色谱联用，将其应用于中药川芎提取液中活性物质阿魏酸的分离富集与服用复方太太口服液的大鼠血浆中阿魏酸含量的测定。
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