CN113057142A - 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 - Google Patents
一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113057142A CN113057142A CN202110342280.4A CN202110342280A CN113057142A CN 113057142 A CN113057142 A CN 113057142A CN 202110342280 A CN202110342280 A CN 202110342280A CN 113057142 A CN113057142 A CN 113057142A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monkey
- animal model
- vegf
- aav
- intraretinal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000036038 Subretinal fibrosis Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 238000010171 animal model Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 22
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 27
- 208000024304 Choroidal Effusions Diseases 0.000 claims description 6
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 claims description 4
- 239000011435 rock Substances 0.000 claims description 4
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 claims description 3
- 241000288935 Platyrrhini Species 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 4
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 8
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 8
- 238000012014 optical coherence tomography Methods 0.000 description 8
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 6
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 5
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- 208000031873 Animal Disease Models Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 201000010183 Papilledema Diseases 0.000 description 2
- 206010038886 Retinal oedema Diseases 0.000 description 2
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 2
- 238000011558 animal model by disease Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000004313 glare Effects 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 201000011195 retinal edema Diseases 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108010041308 Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 208000021957 Ocular injury Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000007135 Retinal Neovascularization Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002137 anti-vascular effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 208000011325 dry age related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013534 fluorescein angiography Methods 0.000 description 1
- 238000002594 fluoroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/106—Primate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法，它是向非人灵长类动物的眼部给予重组腺病毒AAV‑VEGF得到动物模型。本发明选择非人灵长类恒河猴，通过眼局部给予AAV‑VEGF得到的动物模型可以同时模拟nAMD的长期CNV和SRF，并且在短时间内就能得到能够长期模拟nAMD的晚期表型SRF。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法。
背景技术
年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)是导致发达地区50岁以上人群不可逆性盲的首要病因。中国由于人口老龄化日趋严重，AMD也已成为重要的致盲性眼病。由于发病机制不清，一直是眼科临床工作的重点及难点。AMD根据临床病理特征分为干性(萎缩性)和湿性(nAMD)两类，而SRF(视网膜下纤维化，又称为黄斑盘状变性)被认为是湿性AMD的晚期阶段，是造成不可逆性视力受损的主要原因及nAMD抗VEGF(抗血管内皮生长因子)治疗的重要瓶颈。因此，迫切需要研究SRF发病机制，以期阻止nAMD进展以指导有效治疗。
目前已有运用大小鼠，兔，猪和猴等物种建立了能够模拟AMD部分重要的病理特征，但是仍未有任何动物模型可以重现人nAMD的所有表型。Ambati等于2003年报道了兼具类似干性AMD及湿性AMD(CNV)病理改变的基因敲除动物模型，即Ccl-2-/-和Ccr-2-/-小鼠模型，然而作为一种免疫缺陷动物，此类小鼠的存活率以及成模率不甚理想。也有多项研究利用激光诱导CNV啮齿动物模型来研究AMD晚期SRF的发病机制，但是首先，激光诱导的CNV持续时间较短(不超过1个月)并能自行恢复，不足与进行长期的药效学观察尤其是进行SRF的观察及研究；其次，不是所有激光诱导的CNV病灶都能够出现SRF；再者，解剖结构和人类相比，啮齿动物由于寿命短及眼球解剖差异大(眼球小，无黄斑区)等缺点，也不能真实反应AMD病人CNV和SRF特点。
由于nAMD病因复杂、病程长及临床病变多样，目前还没有任何动物模型可以重现人nAMD所有表型，尤其是早期和晚期nAMD病变都能够模拟的体内动物模型，并且纤维化的动物模型耗时均较长，这些都给建立该疾病动物模型带来了挑战。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法，它是向非人灵长类动物的眼部给予重组腺病毒AAV-VEGF得到动物模型。
进一步地，它是向非人灵长类动物眼部巩膜位置给予重组腺病毒AAV-VEGF得到动物模型。
进一步地，所述非人灵长类动物为新大陆猴或旧大陆猴，优选旧大陆猴。
更进一步地，所述旧大陆猴为猕猴，所述猕猴为恒河猴、熊猴、短尾猴、台湾岩猴或平顶猴，优选恒河猴。
进一步地，所述重组腺病毒AAV-VEGF的剂量为1.6*107～1.6*109μg/眼。
本发明还提供了一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型，它是眼部被给予重组腺病毒AAV-VEGF的非人灵长类动物。
进一步地，它是眼部巩膜下的脉络膜上腔位置被给予重组腺病毒AAV-VEGF的非人灵长类动物。
进一步地，所述非人灵长类动物是旧大陆猴；所述旧大陆猴为猕猴。
进一步地，所述猕猴为恒河猴、熊猴、短尾猴、台湾岩猴或平顶猴，优选恒河猴。
本发明还提供了一种前述方法构建的动物模型在筛选治疗视网膜内和/或视网膜下纤维化的药物中的应用。
本发明还提供了一种前述方法构建的动物模型在研究视网膜内和/或视网膜下纤维化病理机制中的应用。
本发明最后提供了一种重组腺病毒AAV-VEGF在构建视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型中的应用。
本发明重组腺病毒AAV-VEGF，是指携带VEGF基因的重组腺病毒。VEGF，是血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)。
本发明一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法，选择非人灵长类恒河猴，通过巩膜外路，向其眼部给予AAV-VEGF，得到的动物模型可以同时模拟nAMD的长期CNV和SRF，并且在短时间内就能得到能够长期模拟nAMD的晚期表型SRF，进一步地，由于是通过巩膜外路给药，不会对眼球和视网膜造成损伤，操作简单，易于工业化推广应用。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1给予重组腺病毒AAV-VEGF 2月后眼底炫彩照相(Multicolor)及荧光造影检查
图2给予重组腺病毒AAV-VEGF 18月后眼底炫彩照相(Multicolor)及荧光造影检查
图3给予重组腺病毒AAV-VEGF 2月后眼底OCT检查
图4给予重组腺病毒AAV-VEGF 18月后眼底OCT检查
图5给予重组腺病毒AAV-VEGF 2月后组织病理学检测HE染色
图6给予重组腺病毒AAV-VEGF 2月后组织病理学检测Masson染色
具体实施方式
实施例1、本发明模型的构建
取恒河猴，在其巩膜下的脉络膜上腔位置给予1.6*108vg/眼重组腺病毒AAV-VEGF，给药后抗感染护理，即得。
实施例2、本发明模型的构建
取恒河猴，在其巩膜下的脉络膜上腔位置给予1.6*109vg/眼重组腺病毒AAV-VEGF，给药后抗感染护理，即得。
以下通过试验例来说明本发明的有益效果。
试验例1
1实验对象
1)对象：4-6岁年龄，体重均值范围5.0～10.0kg，普通级成年恒河猴(动物由四川大学华西医院提供，雌雄不限)；
饲养条件：双层不锈钢猴笼(L×W×H：800mm×900mm×2080mm)，2笼/架，1只/笼；饲料(猴维持饲料，京科澳协力饲料有限公司提供)、饮用水，自由摄取；
饲养环境条件：室温16～26℃(日温差≤4℃)，相对湿度40～70％，人工照明，12/12小时昼夜明暗交替。
2)试验分组设计：4眼/组(每组2只，每只注射2眼)
恒河猴随机平均分为AAV空载对照组2只、溶媒对照组2只、低剂量模型组2只，高剂量模型组2只，每只给药2眼相应剂量试剂，具体如下表1：
表1试验设计
注：眼局部巩膜外路即在避免眼球损伤的情况下，用注射器轻扎巩膜，给予巩膜下方的脉络膜上腔重组腺病毒AAV-VEGF。
2、主要试剂与耗材
1)重组腺相关病毒(AAV-VEGF)(结构示意图rAAV-CMV-VEGFA-hGH pA，货号：2-1499-K190307)，由武汉枢密脑科学技术有限公司提供
2)试验所需主要试剂、仪器、器械：
主要试剂列表：
表2试剂
主要仪器
表3仪器
试验所用主要计算机软件或数据系统
表4计算机系统
3、造模设计
动物麻醉后，根据表1分组，动物眼通过巩膜外路眼局部给予AAV+VEGF或空载AAV对照或溶媒对照，给药后给与抗感染护理(即：注射眼给予左氧氟沙星眼膏眼内涂，并每天电筒光照或手持裂隙灯观察眼情况，确保无异常眼分泌物及眼部感染)。造模后每周做1次眼底检查(包括眼底照相、荧光素血管造影FFA和OCT)，连续4周，以出现晚期荧光素渗漏作为造模成功与否判断依据。以后每月一次检查连续半年，之后每2月一次检查。建模当天定义为试验第1天。
4、眼科检查
检测时间：第1月：1次/周；1次/月，连续5月；之后1次/2月，连续18月；
检查动物：各组动物；
检查内容：眼底炫彩照相、荧光造影检查FFA、光学相干断层扫描(OCT)
5、眼球组织病理学检查
解剖时间：建模后3个月；
每组各摘除1只眼球，沿角巩膜缘穿刺一小口，置于改良的Davidson′s固定液中4度过夜固定用于石蜡切片制备。病理染色：将各组切片进行苏木精-伊红染色及Masson三色染色并行显微镜检查和分析。
6、结果
给药2月后眼底炫彩照相(Multicolor)结果及荧光造影检查FFA结果见图1，由图1可见AAV-VEGF高低剂量组均有墨绿色的视网膜下隆起(蓝色箭头)，提示有血管和纤维组织增生；荧光造影(FFA)显示ND对照组和AAV-ND对照组无明显渗漏改变，AAV-VEGF高和低剂量组血管迂曲，新生血管形成，造影晚期高剂量组的荧光渗漏面积较大。
给药18月后眼底炫彩照相(Multicolor)及荧光造影检查FFA结果见图2，从图2可见AAV-VEGF高低剂量组的墨绿色视网膜下隆起区域的面积较之前均有扩大，高剂量组最明显(蓝色箭头)，黄色箭头提示纤维组织增生累及周围视网膜区域；荧光造影(FFA)示ND对照组和AAV-ND对照组仍无明显渗漏改变，AAV-VEGF高低剂量组血管严重迂曲，新生血管簇较之前明显增多，造影晚期高剂量组的荧光渗漏面积明显增大(蓝色箭头示)。
给药2月后眼底OCT检查结果见图3，从图3可见ND对照组和AAV-ND对照组的注射点有视网膜凹陷区，AAV-VEGF高低剂量组均出现视网膜隆起，并有视网膜下高反射物质(右蓝色箭头)，同时有视网膜下渗漏脱离区域(左蓝色箭头)。
给药18月后眼底OCT检查结果见图4，从图4可见ND对照组和AAV-ND对照组的注射点视网膜凹陷，较前无明显变化，而AAV-VEGF高低剂量组的视网膜下高反射物质增多(蓝色箭头)，视网膜水肿明显，尤其高剂量组显示视网膜内层劈裂(黄色箭头)，可能为视网膜新生血管渗漏导致。
给药2月后组织病理学检测HE染色结果见图5，从图5可见显示与对照组(ND、AAV-ND)比较，AAV-VEGF高低剂量出现视网膜水肿，层次紊乱，视网膜下和视网膜内血管增生(黄色箭头示)，尤其高剂量组出现视网膜内层劈裂(红色星号示)，外核层结构消失。
给药2月后组织病理学检测Masson染色结果见图6，从图6可见显示与对照组(ND、AAV-ND)比较，AAV-VEGF高低剂量组除了视网膜下和视网膜内血管增殖外(红色箭头示)，还出现纤维组织明显增生(黄色箭头示蓝染的胶原纤维)，即视网膜下纤维化和视网膜内纤维化(红色星号示)形成。
本发明通过巩膜外路眼局部给予AAV-VEGF的方法，2-3月后能够诱导恒河猴眼出现CNV，并有明显的视网膜下纤维化形成：FFA示视网膜新生血管形成，眼底炫彩照相和OCT提示有新生血管和纤维组织增生，经病理检测即HE和Masson染色证实CNV与视网膜下和视网膜内的纤维化并存。随访观察18月，眼底影像学显示病变持续存在，并且视网膜下CNV和视网膜内新生血管在不断增多的同时，视网膜下和视网膜内纤维化也在增生，范围扩大。因此说明通过巩膜外路眼局部给予AAV-VEGF可在短期内得到nAMD早期(CNV)和晚期(SRF)病变表型的体内动物疾病模型，并且恒河猴可最大程度模拟人的疾病表型，可重复性良好。
综上，本发明通过巩膜外路眼局部给予AAV-VEGF，可在短期内(2-3月)就出现除CNV之外的视网膜下纤维化(SRF)病变，均符合早期和晚期nAMD的表型特征，并且病变可长期(大于18月)存在，因此本发明建立的长期CNV和SRF动物疾病模型能为AMD疾病尤其是晚期视网膜下纤维化的药效学和病理机制研究提供一个强有力的工具，应用前景广泛。
Claims (10)
1.一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法，其特征在于：
它是向非人灵长类动物的眼部给予重组腺病毒AAV-VEGF得到动物模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：它是向非人灵长类动物眼部巩膜下的脉络膜上腔位置给予重组腺病毒AAV-VEGF得到动物模型；
所述非人灵长类动物为新大陆猴或旧大陆猴，优选旧大陆猴。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述旧大陆猴为猕猴，所述猕猴为恒河猴、熊猴、短尾猴、台湾岩猴或平顶猴，优选恒河猴。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述重组腺病毒AAV-VEGF的剂量为1.6*107～1.6*109μg/眼。
5.一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型，其特征在于：它是眼部被给予重组腺病毒AAV-VEGF的非人灵长类动物。
6.根据权利要求5所述的动物模型，其特征在于：它是眼部巩膜下的脉络膜上腔被给予重组腺病毒AAV-VEGF的非人灵长类动物；所述非人灵长类动物是旧大陆猴；所述旧大陆猴为猕猴。
7.根据权利要求6所述的动物模型，其特征在于：所述猕猴为恒河猴、熊猴、短尾猴、台湾岩猴或平顶猴，优选恒河猴。
8.权利要求1～4任意一项所述方法构建的动物模型在筛选治疗视网膜内和/或视网膜下纤维化的药物中的应用。
9.权利要求1～4任意一项所述方法构建的动物模型在研究视网膜内和/或视网膜下纤维化病理机制中的应用。
10.重组腺病毒AAV-VEGF在构建视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110342280.4A CN113057142B (zh) | 2021-03-30 | 2021-03-30 | 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110342280.4A CN113057142B (zh) | 2021-03-30 | 2021-03-30 | 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113057142A true CN113057142A (zh) | 2021-07-02 |
| CN113057142B CN113057142B (zh) | 2022-12-09 |
Family
ID=76564722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110342280.4A Active CN113057142B (zh) | 2021-03-30 | 2021-03-30 | 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113057142B (zh) |
Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030105018A1 (en) * | 2000-04-12 | 2003-06-05 | Peter Carmeliet | Use of vegf and homologues to treat neuron disorders |
| US20040177387A1 (en) * | 2002-10-30 | 2004-09-09 | Ambati Jayakrishna | Methods and animal model for analyzing age-related macular degeneration |
| EP1491550A1 (en) * | 1998-11-12 | 2004-12-29 | Human Genome Sciences, Inc. | 31 human secreted proteins |
| CN1809383A (zh) * | 2003-04-11 | 2006-07-26 | 免疫医疗公司 | 重组il－9抗体及其用途 |
| US20060188502A1 (en) * | 2001-11-14 | 2006-08-24 | Jill Giles-Komar | Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses |
| US20100086647A1 (en) * | 2005-05-13 | 2010-04-08 | Medimush As | Feed or food products comprising fungal material |
| CN101724653A (zh) * | 2008-10-14 | 2010-06-09 | 四川大学华西医院 | 一种含利钠肽基因的药物及制备方法和应用 |
| CN102198278A (zh) * | 2010-03-24 | 2011-09-28 | 四川大学华西医院 | 恒河猴视网膜变性模型及其药物筛选方法 |
| CN102217980A (zh) * | 2010-04-16 | 2011-10-19 | 四川大学华西医院 | 一种恒河猴脉络膜血管新生模型的制备方法 |
| US20120089072A1 (en) * | 2010-10-12 | 2012-04-12 | Cunningham Jr Emmett T | Subconjunctival conformer device and uses thereof |
| CN104107420A (zh) * | 2014-06-23 | 2014-10-22 | 昭衍（苏州）新药研究中心有限公司 | Aav-vegf诱导视网膜、脉络膜新生血管的方法 |
| CN105664179A (zh) * | 2016-01-12 | 2016-06-15 | 中国人民解放军第二军医大学 | Phf14基因敲除合并急性肾损伤及损伤后肾纤维化动物模型的建立方法 |
| US20190015521A1 (en) * | 2017-07-17 | 2019-01-17 | Macregen, Inc. | Topical delivery of therapeutic agents using cell-penetrating peptides for the treatment of age-related macular degeneration and other eye diseases |
| US20190125802A1 (en) * | 2017-08-15 | 2019-05-02 | Omeros Corporation | Methods for Treating and/or Preventing Graft-Versus-Host Disease and/or Diffuse Alveolar Hemorrhage and/or Veno-Occlusive Disease Associated with Hematopoietic Stem Cell Transplant |
| US20190275034A1 (en) * | 2016-07-22 | 2019-09-12 | Aiviva Biopharma, Inc. | Multikinase inhibitors and uses in ocular fibrosis |
| CN110463663A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-19 | 四川大学华西医院 | 一种视网膜血管瘤样增生和/或视网膜毛细血管瘤模型构建方法 |
| WO2020009248A1 (ja) * | 2018-07-04 | 2020-01-09 | 京都府公立大学法人 | 眼組織の線維化抑制用組成物 |
| CN111109198A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-05-08 | 成都华西海圻医药科技有限公司 | 一种葡萄膜炎动物模型构建方法 |
| CN111979195A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-11-24 | 四川大学华西医院 | 糖尿病视网膜病变全视网膜体外培养模型的构建方法 |
-
2021
- 2021-03-30 CN CN202110342280.4A patent/CN113057142B/zh active Active
Patent Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1491550A1 (en) * | 1998-11-12 | 2004-12-29 | Human Genome Sciences, Inc. | 31 human secreted proteins |
| US20030105018A1 (en) * | 2000-04-12 | 2003-06-05 | Peter Carmeliet | Use of vegf and homologues to treat neuron disorders |
| US20060188502A1 (en) * | 2001-11-14 | 2006-08-24 | Jill Giles-Komar | Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses |
| US20040177387A1 (en) * | 2002-10-30 | 2004-09-09 | Ambati Jayakrishna | Methods and animal model for analyzing age-related macular degeneration |
| CN1809383A (zh) * | 2003-04-11 | 2006-07-26 | 免疫医疗公司 | 重组il－9抗体及其用途 |
| US20100086647A1 (en) * | 2005-05-13 | 2010-04-08 | Medimush As | Feed or food products comprising fungal material |
| CN101724653A (zh) * | 2008-10-14 | 2010-06-09 | 四川大学华西医院 | 一种含利钠肽基因的药物及制备方法和应用 |
| CN102198278A (zh) * | 2010-03-24 | 2011-09-28 | 四川大学华西医院 | 恒河猴视网膜变性模型及其药物筛选方法 |
| CN102217980A (zh) * | 2010-04-16 | 2011-10-19 | 四川大学华西医院 | 一种恒河猴脉络膜血管新生模型的制备方法 |
| US20120089072A1 (en) * | 2010-10-12 | 2012-04-12 | Cunningham Jr Emmett T | Subconjunctival conformer device and uses thereof |
| CN104107420A (zh) * | 2014-06-23 | 2014-10-22 | 昭衍（苏州）新药研究中心有限公司 | Aav-vegf诱导视网膜、脉络膜新生血管的方法 |
| CN105664179A (zh) * | 2016-01-12 | 2016-06-15 | 中国人民解放军第二军医大学 | Phf14基因敲除合并急性肾损伤及损伤后肾纤维化动物模型的建立方法 |
| US20190275034A1 (en) * | 2016-07-22 | 2019-09-12 | Aiviva Biopharma, Inc. | Multikinase inhibitors and uses in ocular fibrosis |
| US20190015521A1 (en) * | 2017-07-17 | 2019-01-17 | Macregen, Inc. | Topical delivery of therapeutic agents using cell-penetrating peptides for the treatment of age-related macular degeneration and other eye diseases |
| US20190125802A1 (en) * | 2017-08-15 | 2019-05-02 | Omeros Corporation | Methods for Treating and/or Preventing Graft-Versus-Host Disease and/or Diffuse Alveolar Hemorrhage and/or Veno-Occlusive Disease Associated with Hematopoietic Stem Cell Transplant |
| WO2020009248A1 (ja) * | 2018-07-04 | 2020-01-09 | 京都府公立大学法人 | 眼組織の線維化抑制用組成物 |
| CN111109198A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-05-08 | 成都华西海圻医药科技有限公司 | 一种葡萄膜炎动物模型构建方法 |
| CN110463663A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-19 | 四川大学华西医院 | 一种视网膜血管瘤样增生和/或视网膜毛细血管瘤模型构建方法 |
| CN111979195A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-11-24 | 四川大学华西医院 | 糖尿病视网膜病变全视网膜体外培养模型的构建方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| SERGIO CABALLERO: "Anti-sphingosine-1-phosphate monoclonal antibodies inhibit angiogenesis and sub-retinal fibrosis in a murine model of laser-induced choroidal", 《EXPERIMENTAL EYE RESEARCH》 * |
| 周诗宇; 韩寅; 孟永春; 程凌云: "生物可降解载药微球经巩膜向眼内给药的研究", 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 * |
| 姜丽平等: "抗血管内皮生长因子( VEGF) 治疗与视网膜下纤维化研究进展", 《眼科新进展》 * |
| 里奥丹-伊娃: "《韦阿普通眼科学》", 30 April 2011, 人民军医出版社 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113057142B (zh) | 2022-12-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wisely et al. | The chick eye in vision research: An excellent model for the study of ocular disease | |
| Jonas et al. | Bruch membrane and the mechanism of myopization: a new theory | |
| Chew et al. | Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial | |
| Cholkar et al. | Eye: Anatomy, physiology and barriers to drug delivery | |
| Norton | Experimental myopia in tree shrews | |
| Ebneter et al. | Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion | |
| Li et al. | A novel model of persistent retinal neovascularization for the development of sustained anti-VEGF therapies | |
| Ramos et al. | Safety evaluation of ocular drugs | |
| Akçay et al. | Quantitative analysis of macular thickness following uneventful and complicated cataract surgery | |
| Rebhun | Retinal and optic nerve diseases | |
| CN113057142B (zh) | 一种视网膜内和/或视网膜下纤维化动物模型的构建方法 | |
| US20180272009A1 (en) | Non-human primate model of age-related macular degeneration and method for producing same | |
| KR102293398B1 (ko) | Si를 이용한 망막 변성 개 동물 모델의 제조방법 및 이를 이용한 망막 변성 동물 모델 | |
| Bradley et al. | Diffuser contact lenses retard axial elongation in infant rhesus monkeys | |
| WO2023192691A2 (en) | Methods and formulations for intranasal delivery of insulin in the treatment of diabetic eye disease | |
| Kuroda et al. | Movement of retinal vessels toward the optic nerve head after increasing intraocular pressure in monkey eyes with experimental glaucoma | |
| Millichamp | Ophthalmology of Serpentes: Snakes | |
| Ahn et al. | Morphologic and electrophysiologic findings of retinal degeneration after intravitreal sodium iodate injection following vitrectomy in canines | |
| Abedi et al. | Corneal subbasal nerve recovery in an acute case of ultraviolet keratitis treated with autologous serum eye drops | |
| Moore et al. | Introduction to ophthalmology of Aves | |
| Liu et al. | Evolution of choroidal neovascularization due to presumed ocular histoplasmosis syndrome on multimodal imaging including optical coherence tomography angiography | |
| Yu et al. | Long-term multimodal imaging characterization of persistent retinal neovascularization using DL-alpha-aminoadipic acid in pigmented and white rabbits | |
| Sun et al. | Protocol for laser-induced chronic ocular hypertension and intracameral injection in nonhuman primates | |
| Nischal et al. | Anterior segment: developmental anomalies | |
| Bitzer et al. | ZENK expression of retinal glucagon amacrine cells in chicks: the effect of defocus presented in vivo, in vitro and under anesthesia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |