CN113040281A - 能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂及其应用。所述制剂包含：丝氨酸、黄芪多糖、益生菌和/或益生元，且优选包含按重量计4～30份的丝氨酸、0.5～2份的黄芪多糖、2～8份的益生菌和/或0～2份的益生元。本发明还提供所述制剂的应用，将所述制剂用生理盐水或磷酸盐缓冲液制备成悬液之后通过灌服的方式施用于哺乳仔猪，或者通过饲喂掺入有所述制剂的日粮的方式将所述制剂施用于断奶仔猪。
Description
技术领域
本发明属于动物饲料的技术领域，具体涉及能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂及其应用。
背景技术
畜牧业养殖，尤其在生猪养殖期间，猪群会遇到各种病原感染的情况，尤其是仔猪极易受到各种病原微生物的感染，断奶应激会降低仔猪的免疫力、影响肠道的消化吸收功能，导致仔猪腹泻、生长缓慢、发生多种疾病，甚至死亡，造成巨大的经济损失。为了应对这些不良影响，以往的做法是广泛使用抗生素。但抗生素滥用造成的药物残留、病原微生物的耐药性等问题，严重威胁畜牧生产和人类健康。
抗菌肽是生物体内诱导产生的具有生物活性的小分子多肽，由于其抗菌谱广、种类多、抗菌机理独特、不容易产生耐药性，通常被认为是很具应用前景的抗生素替代品。同时，抗菌肽是动物先天免疫系统的重要成分，是生物体抵抗病原微生物入侵的重要防线。因此，开发能促进动物分泌抗菌肽的制剂对于养殖业的健康发展将具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，所述制剂包含：丝氨酸、黄芪多糖、益生菌和/或益生元。
优选地，所述制剂包含按重量计的丝氨酸4～30份、黄芪多糖0.5～2份、益生菌2～8份和/或益生元0～2份。
优选地，所述制剂包含按重量计的丝氨酸5～25份、黄芪多糖1～1.5份、益生菌3～5份和/或益生元0～1份。
优选地，所述制剂中的所述益生菌是包含乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌的活菌制剂。所述益生菌中活菌量优选≥1.0×109CFU/g。
优选地，所述制剂中的所述益生元是甘露寡糖。
本发明的目的另一方面在于提供上述制剂的应用，包括对所述仔猪施用上述制剂。
优选地，根据所述应用，将所述制剂用生理盐水或磷酸盐缓冲液配制成悬液之后通过灌服的方式施用于哺乳仔猪。
优选地，根据所述应用，在所述哺乳仔猪出生后的第1、4、7、11、15和19天对所述哺乳仔猪分别施用所述制剂。
优选地，根据所述应用，通过饲喂掺入有所述制剂的日粮的方式对所述仔猪施用所述制剂。
优选地，根据所述应用，将所述制剂按占所述日粮0.7wt％～2.0wt％的量掺入到所述日粮中，通过饲喂掺入有所述制剂的日粮的方式对21日龄的仔猪施用所述制剂，连续施用至少28天。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应当理解，实施例仅是示例性的，不对本发明的范围构成限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
在下文的描述中，所涉及的方法如无特别说明，则均为本领域的常规方法。所涉及的原料如无特别说明，则均是能从公开商业途径获得的原料。
本发明旨在提供一种能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，该制剂包含丝氨酸、黄芪多糖、益生菌和/或益生元。优选地，该制剂包含按重量计4～30份的丝氨酸、0.5～2份的黄芪多糖、2～8份的益生菌和/或0～2份的益生元。进一步优选地，该制剂包含按重量计5～25份的丝氨酸、1～1.5份的黄芪多糖、3～5份的益生菌和/或0～1份的益生元。益生菌优选是包含丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和/或枯草芽孢杆菌的活菌制剂。益生元优选是甘露寡糖。
根据本发明的一个实施方式，该制剂包括按重量计的丝氨酸粉5份、黄芪多糖粉2份、益生菌2份以及用作益生元的甘露寡糖粉1份。
根据本发明的一个实施方式，该制剂包括按重量计的丝氨酸粉20份、黄芪多糖粉1份、益生菌7份以及用作益生元的甘露寡糖粉2份。
根据本发明的一个实施方式，该制剂包括按重量计的丝氨酸粉末4份、黄芪多糖粉1.5份、益生菌8份以及用作益生元的甘露寡糖粉1.5份。
根据本发明的一个实施方式，该制剂包括按重量计的丝氨酸粉25份、黄芪多糖粉1份以及益生菌4份。
根据本发明的一个实施方式，该制剂包括按重量计的丝氨酸粉30份、黄芪多糖粉0.5份以及益生菌4.5份。
本发明还提供上述的制剂的应用，其包括在仔猪出生后的预定时间和/或断奶后对仔猪施用该制剂。
对于刚出生的仔猪，将本发明的制剂用生理盐水或磷酸盐缓冲液制备成悬液之后通过在仔猪出生后的第1、4、7、11、15和19天灌服哺乳仔猪来施用该制剂。悬液中制剂的浓度优选为0.6％～1.5％(w/v)，最优选为1.2％(w/v)。
对于断奶仔猪，通过饲喂掺入有上述制剂的日粮的方式对仔猪施用制剂。将制剂按占日粮0.7wt％～2.0wt％、、优选0.7wt％～1.5wt％、最优选1.5wt％的量掺入到日粮中，通过饲喂掺入有制剂的日粮的方式对21日龄的仔猪施用制剂，连续施用至少28天。
制备实施例1
按以下重量配比准备制备制剂的原料：丝氨酸粉5份、黄芪多糖粉2份、益生菌2份以及甘露寡糖粉1份。其中益生菌是申请人自行研制的由丁酸梭菌、植物乳杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌菌粉组成的活菌制剂，丁酸梭菌和乳酸杆菌的活菌数均≥5.0×109cfu/g，酵母菌活菌数≥3.5×109cfu/g，枯草芽孢杆菌活菌数≥4.0×106cfu/g。
将上述原料搅拌混合均匀，得到制剂1。
制备实施例2
按以下重量配比准备制备制剂的原料：丝氨酸粉20份、黄芪多糖粉1份、益生菌7份以及用作益生元的甘露寡糖粉2份。其中益生菌是申请人自行研制的由丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌粉组成的活菌制剂，丁酸梭菌和乳酸杆菌的活菌数均≥5.0×109cfu/g，酵母菌活菌数≥3.5×109cfu/g，枯草芽孢杆菌活菌数≥4.0×106cfu/g。
将上述原料搅拌混合均匀，得到制剂2。
制备实施例3
按以下重量配比准备制备制剂的原料：丝氨酸粉末4份、黄芪多糖粉1.5份、益生菌8份以及甘露寡糖粉1.5份。其中益生菌是申请人自行研制的由丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌粉组成的活菌制剂，丁酸梭菌和乳酸杆菌的活菌数均≥5.0×109cfu/g，酵母菌活菌数≥3.5×109cfu/g，枯草芽孢杆菌活菌数≥4.0×106cfu/g。
将上述原料搅拌混合均匀，得到制剂3。
制备实施例4
按以下重量配比准备制备制剂的原料：丝氨酸粉30份、黄芪多糖粉1份以及益生菌4份。其中益生菌是申请人自行研制的由丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌粉组成的活菌制剂，丁酸梭菌和乳酸杆菌的活菌数均≥5.0×109cfu/g，酵母菌活菌数≥3.5×109cfu/g，枯草芽孢杆菌活菌数≥4.0×106cfu/g。
将上述原料搅拌混合均匀，得到制剂4。
制备实施例5
按以下重量配比准备制备制剂的原料：丝氨酸粉25份、黄芪多糖粉0.5份以及益生菌4.5份。其中益生菌是申请人自行研制的由丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌菌粉组成的活菌制剂，丁酸梭菌和乳酸杆菌的活菌数均≥5.0×109cfu/g，酵母菌活菌数≥3.5×109cfu/g，枯草芽孢杆菌活菌数≥4.0×106cfu/g。
将上述原料搅拌混合均匀，得到制剂5。
实施例1：制剂对哺乳仔猪生长性能的影响
用生理盐水将上述各制备实施例所制备的制剂1～制剂5制备成悬液，悬液中相应制剂的含量为1.2％(w/v)。
本实验经中国科学院亚热带农业生态研究所动物实验方案管理与评审委员会批准，按照动物保健和福利委员会的指导对所有实验动物进行照料和屠宰。
实验采用单因子随机实验设计。选取刚分娩的出生体重为1.30kg左右的健康哺乳仔猪42头，正常吮吸母乳，随机分为六组，包括对照组和五个实验组，每组7个重复。五个实验组在第1、4、7、11、15、19天分别灌服制剂1～制剂5，对照组在相同的时间灌服相同体积的生理盐水，每天灌服3ml。每头仔猪分别在不同母猪中寄养，所有母猪饲喂相同的日粮，单栏饲养，均自由饮水。每天灌服前先给每头哺乳仔猪称重，第28天最后一次称重。结果如表1所示。
实验开始和结束时，对所有仔猪进行称重，实验期间每天记录仔猪健康和存活情况，计算平均日增重和成活率。
表1
表1的结果显示，与对照组相比，服用了本发明制剂的各实验组哺乳仔猪的平均日增重均表现出明显的增长。实验期间观察发现，对照组有两只仔猪出现腹泻，其中一只死亡，而实验组的所有哺乳仔猪在整个实验期间都保持健康的状态。由此说明，通过灌服本发明的制剂有助于促进哺乳仔猪的存活和生长。
在第28天将平均日增重增长幅度最大的制剂2实验组的哺乳仔猪进行屠宰，采集血液样本，检测血液中抗菌肽的浓度。结果如表2所示。
表2
由表2数据的可知，与对照组相比，制剂2实验组仔猪血清中的抗菌肽PMAP-37和cathelicidin、防御素、溶菌酶、免疫球蛋G和免疫球蛋M的含量均表现出显著提高，且分别提高了46.9％、28.8％、54.68％、40.3％、64.0％和45.1％。但是制剂2组仔猪血清中的脂多糖内毒素含量表现出降低，降低了19.4％，而免疫球蛋白A无显著变化。由此说明，哺乳仔猪灌服本发明的制剂后可提高抗菌肽的分泌和抗体水平，同时减少内毒素的含量，从而提高哺乳仔猪的存活率和生长性能。
实施例2：制剂对断奶仔猪抗菌肽基因表达水平的影响
猪体内发现的抗菌肽主要有PBD-1(猪β防御素1，poricine-β-defensin 1)、PBD-3、PR-39(cathelicidins家族)。仔猪体内抗菌肽的分泌与抗菌肽基因的表达水平正相关。因此，本实施例以上述制备的制剂2为例，通过监测断奶仔猪空肠肠道主要抗菌肽基因的表达水平来评价本发明的制剂对仔猪肠道抗菌肽分泌的影响。
本实施例的实验经中国科学院亚热带农业生态研究所动物实验方案管理与评审委员会批准，按照动物保健和福利委员会的指导对所有实验动物进行照料和屠宰。
选取发育良好、食欲旺盛、健康、遗传基础相似、初始体重相近的21日龄的杜洛克×长白×大约克断奶仔猪40头，随机分为4组，包括对照组和3个实验组，每组10个重复，公母各半。每组仔猪分别饲喂相应日粮，其中对照组饲喂常规的断奶仔猪基础饲粮，3个实验组的日粮是额外添加0.4wt％、0.7wt％、1.5wt％上述制剂的仔猪基础日粮，连续饲喂28天。仔猪基础日粮成分与营养水平参考猪饲养标准(NRC2012)中5-10kg体重断奶仔猪的营养需要标准配制。
各组仔猪均饲养在同一栋猪舍内，单栏饲养。将饲料添加剂充分混合于饲料中饲喂，每天投喂3次(7:00、12:00和17:00)，自由采食和饮水，猪舍内温度保持在26～32℃。
第28天对所有仔猪进行空腹采血，然后屠宰并采集空肠肠段，通过常规的实时荧光定量PCR法检测空肠肠段中抗菌肽基因PBD-1和PBD-3、EP2C以及PR-39mRNA的表达水平。结果如下表3所示。
表3断奶仔猪空肠中抗菌肽基因的表达水平
由表3数据的可知，与对照组相比，日粮添加不同水平的本发明制剂可不同程度地影响断奶仔猪空肠中抗菌肽基因PBD-1和PBD-3、EP2C以及PR-39mRNA的表达水平，尤其是日粮中添加1.5wt％制剂的实验组中这些基因的表达水平表现出显著上调，分别上调了0.95、1.07、3.41、和2.13倍，0.7wt％实验组除PBD-1之外其他基因的表达水平也表现出了一定程度的上调。但是日粮中添加0.4wt％制剂的实验组仅有PR-39的表达水平表现出一定程度的上调，其他基因的表达水平都表现为下降。也就是说，当向仔猪日粮中添加合适量的上述制剂后，仔猪体内抗菌肽基因的表达水平上调，这也就意味着本发明的制剂能促进仔猪体内抗菌肽的生成和分泌，进而能够帮助提高断奶仔猪肠道免疫功能。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的改进和修改也应视为落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，其特征在于，所述制剂包含：丝氨酸、黄芪多糖、益生菌和/或益生元。
2.根据权利要求1所述的能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，其特征在于：所述制剂包含按重量计的所述丝氨酸4～30份、所述黄芪多糖0.5～2份、所述益生菌2～8份和/或所述益生元0～2份。
3.根据权利要求1或2所述的能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，其特征在于：所述制剂包含按重量计的所述丝氨酸5～25份、所述黄芪多糖1～1.5份、所述益生菌4～8份和/或所述益生元0～1份。
4.根据权利要求1或2所述的能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，其特征在于：所述益生菌是包含丁酸梭菌、乳酸杆菌、酵母菌和/或枯草芽孢杆菌的活菌制剂。
5.根据权利要求1或2所述的能提高仔猪肠道抗菌肽分泌的制剂，其特征在于：所述益生元是甘露寡糖。
6.一种权利要求1～5中任一项所述的制剂的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：将所述制剂用生理盐水或磷酸盐缓冲液制备成悬液之后通过灌服的方式施用于哺乳仔猪。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：在哺乳仔猪出生后的第1、4、7、11、15和19天对所述哺乳仔猪施用所述制剂。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：通过饲喂掺入有所述制剂的日粮的方式对所述仔猪施用所述制剂。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：将所述制剂按占所述日粮0.7wt％～2.0wt％的量掺入到所述日粮中，通过饲喂掺入有所述制剂的日粮的方式对21日龄的仔猪施用所述制剂，连续施用至少28天。
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