CN112999246A - 一种益生菌组合物及其产品和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种益生菌组合物及其产品和应用，涉及生物医药领域。该益生菌组合物包括：长双歧杆菌、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌等益生菌，通过将组合物的各组分进行合理搭配，有效调节肠道菌群，改善免疫、内分泌功能，更加高效、健康的改善抑郁症症状，同时还能有效减轻抗抑郁药的药物副反应。可用于食品、制药、健康保健或天然产品的生产。

Description

一种益生菌组合物及其产品和应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种益生菌组合物及其产品和应用。

背景技术

抑郁症(Depressive disorder)是一种严重危害人类健康的重大精神疾病，世界卫生组织(World health organization,WHO)发布的最新数据显示，全球有超过3亿名患者，相当于世界人口的4.7％，抑郁症已成为人类致残的第一大疾病，同时每年有近80万人因自杀死亡。

目前抑郁症发病机制仍不清楚，代表性学说包括神经递质失衡、神经发育及可塑性障碍、炎性激活、氧化应激障碍以及免疫调节紊乱等。临床上广泛运用的针对神经递质失衡学说而开展的抗抑郁药治疗，也仅能使40％～60％病人症状缓解。这提示现有的抑郁症发病机制不足以解释抑郁症的多病因异质性疾病，在对现有脑内异常分子学说深入研究的同时，更应积极探寻脑外因素在抑郁症发生中的作用，拓宽抑郁症病因及治疗的研究领域，是当今全球生命科学研究亟待解决的重大难题之一。

肠道微生物的改变如何影响大脑功能是当今的前沿和难点，外周对中枢系统(Body and brain)的影响一直是抑郁研究认识的瓶颈。微生物－肠－脑轴(Microbiome-Gut-Brain Axis,MGBA)是肠道和大脑之间的信息交流系统，肠道菌群可通过神经、免疫及内分泌等途径监控和调节肠道菌群，使其顺应环境的变化，维持微生态的动态平衡。目前调节肠道菌群类的食品从原料组成上可分以益生菌为主要原料的活菌类食品和以益生元为主要原料的非活菌类食品。益生菌 (Probiotics)是指能够促进肠内菌群生态平衡，对宿主起有益作用的活的微生物制剂。常见的益生菌主要包括两大类：分别是双歧杆菌(Bifidobacterium)和乳杆菌(Lactobacillus)。摄取适量的益生菌，能对宿主产生一种或多种特殊的功能性健康益处，因此，益生菌在功能食品及药品中有着广阔的应用前景。益生元(Prebiotics)是指不易被消化的食品成分，通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响，从而改善寄主健康的物质。

综上，肠道菌群能很好反映自身内环境变化，提示疾病风险的个体差异、疾病疗程和治疗反应。有研究报道，不良的饮食可诱导微生物菌群发生变化，从而影响抑郁行为。因此，探讨肠道微生物在抑郁症发病中的作用，研究益生菌辅助治疗抑郁症，对抑郁症的预防及治疗有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种益生菌组合物及其产品和应用，克服了现有技术中存在的问题，有效调节肠道菌群，改善免疫、内分泌功能，更加高效、健康的改善抑郁症症状，同时还能有效减轻抗抑郁药的药物副反应。

本发明一方面提供了一种益生菌组合物，按重量份计组成为：长双歧杆菌0.2-5份、瑞士乳杆菌0.5-6份、鼠李糖乳杆菌0.3-5份、嗜酸乳杆菌0.6-8份、罗伊氏乳杆菌0.5-3份和酪酸梭菌0.4-6份。

作为优选，所述的长双歧杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

本发明另一方面提供了另一种益生菌组合物，按重量份计组成为：长双歧杆菌0.2-5份、瑞士乳杆菌0.5-6份、鼠李糖乳杆菌0.3-5份、嗜酸乳杆菌0.6-8份、罗伊氏乳杆菌0.5-3份、酪酸梭菌0.4-6份；

动物双歧杆菌0.1-3份、副干酪乳杆菌0.1-2份、植物乳杆菌 0.1-3份；

所述的长双歧杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；

所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

作为优选，按重量份计组成为：长双歧杆菌1-4份、瑞士乳杆菌 1-5份、鼠李糖乳杆菌0.8-3份、嗜酸乳杆菌1-6份、罗伊氏乳杆菌 1-2.5份、酪酸梭菌0.8-5份；

动物双歧杆菌0.5-3份、副干酪乳杆菌0.5-2份、植物乳杆菌 0.5-3份。

本发明另一方面提供了一种益生菌产品，包括上述的益生菌组合物以及食品、保健品或医学上可接受的载体、辅料或添加剂。

作为优选，按重量份计还包括益生元混合物3-10份；

所述的益生元混合物按重量份数计组成为：水苏糖0.5-2份、菊粉0.5-3份、低聚半乳糖0.2-1份、低聚果糖0.5-2份、低聚木糖 0.5-2份和抗性糊精0.5-2份；

所述的嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；

所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

作为优选，所述的水苏糖和低聚半乳糖的重量比为2-10:1。

作为优选，所述益生菌产品的剂型为胶囊、片剂、颗粒剂、粉剂或缓释剂。

本发明另一方面还提供了上述益生菌组合物在辅助防治抑郁症的药物中的应用。

本发明另一方面还提供了上述益生菌组合物在减轻抗抑郁药物副反应药物中的应用。

本发明与现有技术相对比，其有益效果在于：本发明将益生菌和益生元进行合理搭配，通过调控益生菌之间的比例以及益生菌和益生元之间的比例，最大限度的发挥益生菌和益生元的作用，有效调节肠道菌群，有效调节肠道菌群，改善免疫、内分泌功能，更加高效、健康的改善抑郁症症状，同时还能有效减轻抗抑郁药的药物副反应。

本发明中作为优选的实施方式，所述产品的功能包括下述(1) 至(5)中的至少一项：

(1)改善抑郁症患者肠道微生物的菌群平衡；

(2)提高抑郁症患者大脑中5-羟色胺和去甲肾上腺素含量；

(3)降低抑郁症患者汉密尔顿抑郁量表和贝克抑郁问卷评分；

(4)预防抑郁症患者抑郁症状的复发；

(5)减少抗抑郁药的药物不良反应。

附图说明

图1是益生菌组合物对小鼠应激抑郁行为的影响示意图；

图2是益生菌组合物对应激抑郁小鼠前额皮质中单胺神经介质水平的影响示意图；

图3是益生菌组合物对抑郁症患者治疗前后的HAMD量表评分示意图；

图4是益生菌组合物对抑郁症患者治疗前后的BDI量表评分示意图；

图5是抑郁症患者抗抑郁剂副反应量表评分示意图。

具体实施方式

以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中，而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。

除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

实施例1

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐 0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌5份、瑞士乳杆菌0.5份、鼠李糖乳杆菌0.3份、嗜酸乳杆菌8份、罗伊氏乳杆菌3份和酪酸梭菌0.4份。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、2.5份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物制成粉剂，装袋，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每袋2g。

实施例2

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐 0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌2份、瑞士乳杆菌4份、鼠李糖乳杆菌2份、嗜酸乳杆菌 3份、罗伊氏乳杆菌1份和酪酸梭菌1份。即：嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为3:1；瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为4:1。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为 1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、2.5份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物制成粉剂，装袋，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每袋2g。

实施例3

与实施例2的区别仅在于，按重量份数计，瑞士乳杆菌1份、嗜酸乳杆菌1份，即：瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1:1；嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为1:1。

实施例4

与实施例2的区别仅在于，按重量份数计，瑞士乳杆菌5份、嗜酸乳杆菌6份，罗伊氏乳杆菌0.5份，即：嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为6:1；瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为10:1。

实施例5

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐 0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌2份、瑞士乳杆菌4份、鼠李糖乳杆菌2份、嗜酸乳杆菌 3份、罗伊氏乳杆菌1份、酪酸梭菌1份、动物双歧杆菌0.1份、副干酪乳杆菌0.1份、植物乳杆菌0.1份。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、 2.5份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物制成颗粒剂制，装袋，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每袋2g。

实施例6

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐 0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌2份、瑞士乳杆菌4份、鼠李糖乳杆菌2份、嗜酸乳杆菌 3份、罗伊氏乳杆菌1份、酪酸梭菌1份、动物双歧杆菌3份、副干酪乳杆菌2份、植物乳杆菌2份。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、2.5份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物制成颗粒剂制，装袋，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每袋2g。

实施例7

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐 0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌2份、瑞士乳杆菌4份、鼠李糖乳杆菌2份、嗜酸乳杆菌 3份、罗伊氏乳杆菌1份、酪酸梭菌1份、动物双歧杆菌0.5份、副干酪乳杆菌0.5份、植物乳杆菌0.5份。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、 2.5份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物依次经过制粒机、滚圆机、干燥机、包衣机进行制粒、滚圆、低温真空干燥、包衣，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每片0.25g。

实施例8

(1)分别将长双歧杆菌、瑞士乳杆菌等菌株接种到不同的发酵培养基中进行发酵培养，当发酵培养中活菌数达到5.0×10⁹cfu/mL时，结束发酵培养，得到发酵培养液，其中，培养温度为30℃，发酵培养基的配方为：葡萄糖15.0g、胰酶水解酪蛋白2.0g、酵母膏5.5g、柠檬酸钠1.0g、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐0.1g、西红柿汁2.0g、加水定容至1000mL、pH6.0、105℃灭菌15分钟；

(2)收集步骤(1)所得的各菌种的发酵液按如下重量份数计混合：长双歧杆菌2份、瑞士乳杆菌4份、鼠李糖乳杆菌2份、嗜酸乳杆菌 3份、罗伊氏乳杆菌1份、酪酸梭菌1份、动物双歧杆菌1.5份、副干酪乳杆菌1份、植物乳杆菌1.5份。离心并洗涤后得到活性湿菌泥，将湿菌泥与保护剂加蒸馏水混合均匀，得到菌泥保护剂混合物，其中湿菌泥:保护剂:蒸馏水的质量比为1:0.5:0.8，所述保护剂包含如下质量份的各物质：1份甘油、3份低聚异麦芽糖、2份低聚果糖、2.5 份大豆肽、2份硅酸钙；

(3)将步骤(2)所得到的菌泥保护剂混合物依次经过制粒机、滚圆机、干燥机、包衣机进行制粒、滚圆、低温真空干燥、包衣，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每片0.25g。

实施例9

与实施例8的区别仅在于，加入了益生元混合物3份。

所述的益生元混合物按重量份数计包括：水苏糖1.5份、低聚半乳糖1.5份、菊粉1.5份、低聚果糖3.5份、低聚木糖4.5份和抗性糊精1.5份。其中，水苏糖和低聚半乳糖的重量比为1:1。

将以上原料充分混合，制粒、装入胶囊，制成胶囊剂，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每粒胶囊0.25g。

实施例10

与实施例8的区别仅在于，加入了益生元混合物6份。

所述的益生元混合物按重量份数计包括：水苏糖1.5份、低聚半乳糖4.5份、菊粉1份、低聚果糖1份、低聚木糖1份和抗性糊精1 份。其中，水苏糖和低聚半乳糖的重量比为3:1。

辅料按重量份数计包括：葡萄糖20份、食用香精10份、硬脂酸镁5份和二氧化硅5份。

将以上原料充分混合，制粒、装入胶囊，制成胶囊剂，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每粒胶囊0.25g。

实施例11

与实施例8的区别仅在于，加入了益生元混合物6.2份。

所述的益生元混合物按重量份数计包括：水苏糖5份、低聚半乳糖0.5份。即：水苏糖和低聚半乳糖的重量比为10:1。

加入辅料哌啶-4-酮盐酸盐和聚乙烯吡咯烷酮制成湿颗粒，将该湿颗粒经滚圆处理并干燥制成活性芯层丸，是为活性芯层；将该活性芯层丸投入流化床，喷洒水凝胶包衣剂并干燥制成骨架丸。

将该骨架丸投入流化床，喷洒缓释包衣液(聚酰胺+聚乙二醇) 并干燥制成缓释片，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每片缓释片0.25g。

实施例12

与实施例8的区别仅在于，加入了益生元混合物10份。

所述的益生元混合物按重量份数计包括：水苏糖1.5份、低聚半乳糖4.5份、菊粉1份、低聚果糖1份、低聚木糖1份和抗性糊精1 份。其中，水苏糖和低聚半乳糖的重量比为3:1。

加入辅料哌啶-4-酮盐酸盐和聚乙烯吡咯烷酮制成湿颗粒，将该湿颗粒经滚圆处理并干燥制成活性芯层丸，是为活性芯层；将该活性芯层丸投入流化床，喷洒水凝胶包衣剂并干燥制成骨架丸。

将该骨架丸投入流化床，喷洒缓释包衣液(聚酰胺+聚乙二醇) 并干燥制成缓释片，经检测合格后即得到肠道益生菌制剂，每片缓释片0.25g。

通过上述调整基础实施例中的实验参数，得到了如表1所示的实施例1-12的具体实验参数。

表1.实施例1-12具体实验参数

上述实施例1-12所述的组合物每份含有50亿以上的活菌数量。

本发明提供的辅助防治抑郁症症状，减轻药物副反应的益生菌组合物功能性实验如下。

实验例1益生菌组合物的功能性动物试验

样品：实施例1-12所述组合物。

试验动物：雄性C57BL/6小鼠(8周龄，体重22-28g)购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物经过1周的适应期后开始实验。

小鼠被随机分为实验组(实施例1-12共12组)、空白对照组和阳性对照组，每组10只小鼠，雌雄各半。实验组大鼠灌胃受试物(即：实施例1-12所述组合物)，用量为1.3g/kg·BW·日(人拟用剂量为 4g/60kg·BW·日，相当于人拟用剂量的20倍)；空白对照组每只小鼠给予等体积的生理盐水；阳性对照组每只小鼠一次性灌胃给药盐酸氟西汀，使盐酸氟西汀的给药剂量为20mg/kg·BW·日。给药后1h 开展强迫游泳实验、悬尾实验和旷场实验。

试验所有数据采用SPSS21.0(SPSSInc.,USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。

(1)强迫游泳实验

在SuperFst强迫游泳实验分析系统，规格为25cm×12cm×25cm 的玻璃容器中进行强迫游泳实验：灌胃给药lh后，将每组10只小鼠单独放入强迫游泳仪的玻璃缸中，缸内水深15cm，水温(23±2)℃，从小鼠入水后计时6min，记录后4min内游泳累计不动时间(指小鼠在水中停止挣扎，或显示漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面)，作为游泳不动时间。

(2)悬尾实验在SuperTst高通量悬尾实验分析系统，规格为 25cm×25cm×30cm的盒子中进行悬尾实验：灌胃给药lh后，在安静无风的室内，分别将10只小鼠尾部距末端约2cm处，用医用胶布粘贴固定在悬尾仪上，使小鼠呈倒挂状态，两侧有黑色挡板隔开，遮挡小鼠视线，使其不受外界干扰悬挂6min，记录后4min内小鼠累计不动时间(指小鼠停止挣扎，身体呈垂直倒悬状态，静止不动的时间)，作为悬尾固定时间。

(3)旷场实验(Openfieldtest,OFT)

在XR－XZ301旷场实验分析系统，规格为40cm×40cm×30cm，被等分为面积相等的25个等边方格(8cm×8cm)中进行旷场实验：灌胃给药lh后，每组10只动物，在室温为25℃的安静实验室内将小鼠小心放在自发活动旷场箱底中心，观察5min内活动情况。观察指标为：

①水平穿行方格数:3爪以上跨入邻格或者重心落入；

②竖直站立次数:前肢离开水平地面1cm以上的次数。

结果如表2所示：

表2.益生菌组合物对小鼠应激抑郁行为的影响

注：^*表示与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。

由表2可知在强迫游泳实验中，本发明提供的益生菌组合物能有效降低小鼠的游泳不动时间。其中与空白对照组相比，实例10、实例12和阳性对照组能够极显著降低小鼠的游泳不动时间(P<0.01)，实例10可平均降低游泳不动时间36.77％[(79.4-50.2)/79.4*100％＝36.77％],实例12组可平均降低游泳不动时间 34.51％[(79.4-52.0)/79.4*100％＝34.51％]，阳性对照组可平均降低游泳不动时间50.12％，说明益生菌组合物能够显著降低小鼠的游泳不动时间。两个实例的剂型分别为胶囊和缓释片，说明益生菌组合物的这两种剂型在降低小鼠的游泳不动时间方面没有显著差异。

根据表2可知，本发明提供的益生菌组合物能有效降低小鼠的悬尾固定时间。其中与空白对照组相比，实例10可以降低悬尾固定时间的41.35％[(90.7-53.2)/90.7*100％＝41.35％]，达到显著性差异的程度(P<0.01)；实例12组可以降低悬尾固定时间的 37.05％[(90.7-57.1)/90.7*100％＝37.05％]，达到极其显著性差异的程度(P<0.01)。实例10、实例12和阳性对照组在降低小鼠的悬尾固定时间方面没有显著差异。

实例10和实例12的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为4:1，嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为3:1；水苏糖和低聚半乳糖的重量比为3:1，说明在该种配比下，益生菌组合物对小鼠的抗急性抑郁效果最好。

实验例2抗抑郁作用机制研究

处死实验1中强迫游泳实验结束后的小鼠，解剖摘取其前额皮质区域的脑组织，利用高效液相色谱-质谱联用分析系统(HPLC-MS/MS) 比较分析单胺神经介质(5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺)。结果见表3。

表3.益生菌组合物对应激抑郁小鼠前额皮质中单胺神经介质水平的影响

注：^*表示与空白对照组相比有统计学差异(P＜0.05)。

由表3可知，益生菌组合物能够提高小鼠大脑中的5-羟色胺和去甲肾上腺素的浓度，其中实例10和实例12能极显著提高5-羟色胺(P<0.01)和去甲肾上腺素(P<0.01)，但不能显著提高多巴胺的浓度。说明益生菌组合物可能是通过升高5-羟色胺和去甲肾上腺素途径改善小鼠的抑郁行为。

实验例3抑郁症患者服用益生菌组合物

(1)研究方法。本研究经医院伦理委员会批准后实施。所有研究对象均在入组前充分了解并自愿参加本研究，并签署知情同意书。

(2)招募抑郁症患者。在医院门诊及住院部招募100例抑郁症患者，均符合入组和排除标准。

(3)入组和排除标准。

纳入标准：1)所有纳入的抑郁症患者均符合美国精神障碍诊断与统计手册第五版(DSM-5)抑郁发作诊断标准；2)性别不限，年龄 20-55岁；3)患者本人具有清醒认识，知情并同意参加研究。

排除标准：1)有严重心、肝、肾疾病，有肿瘤、血液病史、风湿病、营养不良及神经系统变性等疾病；2)有双相障碍、精神分裂症，有烟草、酒精及其他精神活性物质滥用史；3)有安装心脏起搏器、人工瓣膜、体内金属植入物；4)少半年内有服用免疫调节剂和激素制剂；5)进入研究前2周内服用过精神类药物。

(4)抑郁症患者组的随机化及双盲。使用计算机程序(Proc Plan, SAS,V.9.1)执行随机化序列代码。这些代码被密封在不透明的信封里，分配给病人。每个信封都按照随机化顺序分配了一个数字，将抑郁症患者随机分为对照组及各干预组。随机化是由一名研究助理完成的，他没有参与这项研究。在数据库解锁和数据分析完成之前，不告知抑郁症患者、临床医生和评分员对每个抑郁症患者分配的组。

(5)抑郁症患者的治疗方案。由于医学伦理要求，抑郁症参与者必须使用抗抑郁药治疗，因此本试验在抗抑郁药治疗的基础上，加用益生菌组合物及安慰剂。

抑郁症的干预组及对照组(安慰剂组)均予舍曲林治疗，初始剂量25mg/d，根据患者病情增至50-150mg/d，最大服用剂量不超过 200mg/d，共计服用8周。干预组服用具有代表性的益生菌组合物(实例2、实例6、实例10、实例12)，对照组则服用安慰剂，安慰剂和益生菌合剂在包装、颜色、口感、稠度等方面难以区分。

(6)采用同时采用汉密尔顿抑郁量表(Hamilton’s Depression Scale,HAMD)、贝克抑郁问卷(Beck Depression Inventory,BDI) 在治疗前后对每组参与者进行抑郁程度评分。

表4.益生菌组合物对抑郁症患者治疗前后的HAMD、BDI量表评分

注：^*表示与安慰剂组相比有统计学差异(P＜0.05)。

结果显示，干预组和安慰剂组的抑郁症患者在治疗后HAMD量表评分均下降，干预组和安慰剂组在HAMD量表评分上存在统计学差异 (P＜0.05)，其中实例10、实例12和安慰剂组存在显著差异(P＜0.01)。说明益生菌组合物能有效改善抑郁症患者的症状，提高抗抑郁药的治疗效果。

由表4可知，干预组和安慰剂组的抑郁症患者在治疗后BDI量表评分均统计学差异下降，干预组和安慰剂组在BDI量表评分上均存在统计学差异(P＜0.05)，其中实例10、实例12和安慰剂组存在显著差异(P＜0.05)。说明益生菌组合物能有效改善抑郁症患者的症状，提高抗抑郁药的疗效。

(7)患者在服用抗抑郁药过程当中，会出现多种药物副反应，如头晕头痛、恶心呕吐、心悸、失眠等症状。对上述患者在治疗前和第2、4、8周进行抗抑郁剂副反应量表(RatingScale for Side Effects,SERS)评分，了解益生菌组合物对抗抑郁药副反应的影响。

SERS量表共14项目，分别是：1、躯体疲倦，2、头痛，3、睡眠障碍4、头晕，5、直立性虚脱，6、心悸，7、震颤，8、出汗，9、口干，10、便秘，11、排屏障碍，12、嗜睡，13、性功目自障碍，14、其他症状。所有项目均采用0～3分的4级评分法。

表5.益生菌组合物对抗抑郁药副反应的影响

组别	治疗前	第2周	第4周	6周	第8周
						实例2	2.3±1.9	5.0±4.1	8.2±5.3	8.5±5.4<sup>*</sup>	9.7±6.1<sup>*</sup>
实例6	2.6±2.0	5.2±3.8	8.4±4.7	9.0±4.9	10.8±6.7<sup>*</sup>
						实例10	1.9±2.8	4.6±3.2	7.5±5.5<sup>*</sup>	7.6±5.2<sup>*</sup>	8.5±5.9<sup>*</sup>
实例12	2.4±2.1	4.0±3.6	7.2±5.1<sup>*</sup>	7.4±5.0<sup>*</sup>	8.3±6.3<sup>*</sup>
						安慰剂组	2.0±1.8	5.6±4.3	11.1±8.4	12.6±8.3<sup>*</sup>	15.2±8.2

注：^*表示与安慰剂组相比有统计学差异(P＜0.05)。

结果显示，干预组和安慰剂组的抑郁症患者在治疗后SERS量表评分均升高，说明抑郁症患者在使用抗抑郁药过程中出现副反应。在治疗的第2周，实例组和安慰剂组的SERS量表评分无统计学差异。在治疗的第4周，实例10、实例12的SERS量表评分都和安慰剂组存在统计学差异(P＜0.05)。在治疗的第8周，实例2、实例6、实例 10、实例12的SERS量表评分和安慰剂组均具有统计学差异(P＜0.05)，其中实例10、实例12的SERS量表评分都和安慰剂组存在显著的统计学差异(P＜0.01)。说明益生菌组合物能有效减轻抗抑郁药的副反应。当配比为瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为4:1，嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为3:1，水苏糖和低聚半乳糖的重量比为3:1 时，SERS量表评分最低，说明在这种配比更能改善患者的药物副反应。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。上述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种益生菌组合物，其特征在于，按重量份计组成为：长双歧杆菌0.2-5份、瑞士乳杆菌0.5-6份、鼠李糖乳杆菌0.3-5份、嗜酸乳杆菌0.6-8份、罗伊氏乳杆菌0.5-3份和酪酸梭菌0.4-6份。

2.根据权利要求1所述的一种益生菌组合物，其特征在于，所述的长双歧杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

3.一种益生菌组合物，其特征在于，按重量份计组成为：长双歧杆菌0.2-5份、瑞士乳杆菌0.5-6份、鼠李糖乳杆菌0.3-5份、嗜酸乳杆菌0.6-8份、罗伊氏乳杆菌0.5-3份、酪酸梭菌0.4-6份；

动物双歧杆菌0.1-3份、副干酪乳杆菌0.1-2份、植物乳杆菌0.1-3份；

所述的长双歧杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；

所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

4.根据权利要求3所述的一种益生菌组合物，其特征在于，按重量份计组成为：长双歧杆菌1-4份、瑞士乳杆菌1-5份、鼠李糖乳杆菌0.8-3份、嗜酸乳杆菌1-6份、罗伊氏乳杆菌1-2.5份、酪酸梭菌0.8-5份；

动物双歧杆菌0.5-3份、副干酪乳杆菌0.5-2份、植物乳杆菌0.5-3份。

5.一种益生菌产品，其特征在于，其包括权利要求1-4任意一项所述的一种益生菌组合物以及食品、保健品或医学上可接受的载体、辅料或添加剂。

6.根据权利要求5所述的一种益生菌产品，其特征在于，按重量份计还包括益生元混合物3-10份；

所述的益生元混合物按重量份数计组成为：水苏糖0.5-2份、菊粉0.5-3份、低聚半乳糖0.2-1份、低聚果糖0.5-2份、低聚木糖0.5-2份和抗性糊精0.5-2份；

所述的嗜酸乳杆菌和酪酸梭菌的重量比为1-6:1；

所述的瑞士乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的重量比为1-10:1。

7.根据权利要求6所述的一种益生菌产品，其特征在于，所述的水苏糖和低聚半乳糖的重量比为2-10:1。

8.根据权利要求5-7任意一项所述的一种益生菌产品，其特征在于，所述益生菌产品的剂型为胶囊、片剂、颗粒剂、粉剂或缓释剂。

9.如权利要求1-4任意一项所述的一种益生菌组合物在辅助防治抑郁症的药物中的应用。

10.如权利要求1-4任意一项所述的一种益生菌组合物在减轻抗抑郁药物副反应药物中的应用。

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