CN112955126A

CN112955126A - 治疗或预防皮肤状况的方法

Info

Publication number: CN112955126A
Application number: CN201980073203.4A
Authority: CN
Inventors: C·L·钟; C·赛欧; I·O·劳伦斯
Original assignee: Drexel University
Current assignee: Drexel University
Priority date: 2018-10-11
Filing date: 2019-10-10
Publication date: 2021-06-11
Also published as: KR20210107625A; CN118304299A; EP3863606A4; EP3863606A1; AU2019357504A1; WO2020077023A1; SG11202103619QA; JP2022512671A; CA3115691A1; US20210379026A1

Abstract

本发明包括用于预防和治疗紫外线诱发的、年龄相关的和炎症后的皮肤变化所引起的某些皮肤障碍的方法和组合物。该皮肤障碍包括，例如，静态皱纹、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、皮肤的UV损伤、静态皱痕、手静脉突出、如原位鳞状细胞癌中的上皮区域性癌变、瘢痕瘤和胶原同工型比例失衡。在某些实施方式中，可用于本发明的组合物包含治疗有效量的雷帕霉素和皮肤病学可接受的载体。

Description

治疗或预防皮肤状况的方法

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)的规定要求2018年10月11日提交的美国临时专利申请号62/744,486的优先权，其全部内容通过引用并入其中。

背景技术

几种皮肤障碍是由于以下引发的皮肤变化引起的：环境因素、激素变化、衰老和炎性事件。这些障碍中的一些包括，例如，雀斑、日光性着色斑、黑斑病、老年性紫癜、细纹、静态皱痕、手静脉突出、光化性角化病和上皮区域性癌变、瘢痕瘤形成以及胶原同工型比例失衡。

雀斑、日光性着色斑、黑斑病、光化性角化病和原位鳞状细胞癌是日晒引起的疾病。雀斑(ephelides)，常被称为雀斑(freckles)，是小色素沉着病变。日光性着色斑是较大色素沉着过度病变，并且黑斑病是更大的斑块状褐色、棕褐色或蓝灰色的面部皮肤变色。区域性癌变指代呈现光化性损伤和表皮发育异常的大面积日晒皮肤。光化性角化病总体上呈现为粉色鳞状丘疹或斑块，并且通常出现在区域性癌变区域。若不治疗，区域性癌变和光化性角化病可发展为鳞状细胞癌。

老年性紫癜、细纹、静态皱痕和手静脉突出是总体上侵袭老化皮肤的疾病。老年性紫癜通常随轻度创伤后发生，是一种具有以下特征的常见良性状况：脆弱的毛细血管由于皮肤真皮或支架(scaffolding)变薄而容易受到损伤而导致出血到真皮中而造成的紫色瘀斑(伤痕(bruises))的反复形成。静态皱痕是在肌肉运动时保持不变的皱纹，并且手静脉突出是由于体脂很低或由于支撑手静脉的结构变薄而导致静脉变得突出的状况。细纹是真皮不规则以及日光损伤和其他外部因素所引起的表皮保水能力下降的结果。

瘢痕瘤是主要由III型(早期)或I型(晚期)胶原构成的瘢痕。瘢痕瘤是由愈合皮肤损伤位点处肉芽组织(3型胶原)(其然后慢慢被1型胶原替代)过度生长而形成。瘢痕瘤是一种异常的瘢痕反应，其导致坚固的色素沉着过度斑块，该斑块的边界延伸至原发性损伤区域之外。瘢痕瘤不成比例地侵袭非白人人群，并且经常瘙痒，触痛和不美观。另外，如果瘢痕瘤发生在关节(诸如例如膝盖或脚踝)附近，则瘢痕瘤可引起紧绷并限制运动范围。

本领域需要可用于治疗或预防紫外线诱发的、年龄相关的和炎症后的皮肤变化所引起的某些皮肤障碍的组合物和方法。本发明解决了这一需求。

发明内容

在一个实施方式中，本发明提供了在有需要的哺乳动物对象中治疗和/或预防皮肤障碍(dermal disorder)的方法。该方法包括向对象局部给予包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体的组合物。在某些实施方式中，所述皮肤障碍是选自以下的至少一种：静态皱纹(static wrinkles)、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕(static rhytides)、手静脉突出、如鳞状细胞癌中的上皮区域性癌变、瘢痕瘤和胶原同工型比例失衡。

在另一实施方式中，组合物包含按重量计约1％至约0.0001％的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。

附图说明

为了示例本发明，在附图中描绘了本发明的某些实施方式。然而，本发明不限于附图中描绘的实施例的精确布置和手段。

图1显示雷帕霉素治疗使人皮肤(skin)中的p16水平降低。

图2显示，与安慰剂治疗的活组织检查相比，雷帕霉素治疗的活组织检查呈现老化/受损皮肤的组织学标志物减少。

图3显示，与安慰剂治疗的活组织检查相比，雷帕霉素治疗的活组织检查呈现上皮层的排列更加有序。

图4显示，与安慰剂治疗的活组织检查相比，雷帕霉素治疗的活组织检查呈现胶原纤维的排列更有序并且日光性弹性组织变性更少。

图5显示雷帕霉素治疗的皮肤更集中地位于皮肤的基层中，而安慰剂治疗的皮肤显示粒层中细胞角蛋白5/6染色，表示老化皮肤典型的不完全分化。

图6显示了细胞角蛋白5/6(CK 5/6)染色，显示在安慰剂治疗的皮肤中粒层阳性染色并延伸到角质层中，而在雷帕霉素治疗的活组织检查中CK 5/6染色图案更局限于基层。

图7显示了67岁妇女在施用雷帕霉素乳膏6个月后的临床改善。还显示了经安慰剂治疗的左手以进行比较。

图8显示了4.5个月雷帕霉素治疗后紫癜的显著减少。

图9A-9C显示雷帕霉素防止UV诱发的细胞死亡。

具体实施方式

一方面，本发明涉及预防和/或治疗各种皮肤和表皮障碍的方法，所述障碍包括但不限于雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕、手静脉突出、上皮区域性癌变、瘢痕瘤形成和胶原同工型比例失衡。

在某些实施方式中，本发明提供了组合物，其包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。在其他实施方式中，组合物包含雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体，作为唯一的对本文考虑的皮肤状况具有活性的成分。在再其他实施方式中，组合物包含雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体，作为唯一的以足以对本文考虑的皮肤状况具有活性的浓度和/或量存在的成分。在再其他实施方式中，组合物被配制用于局部(topical，表面)给予。

适当的分化对于皮肤功能至关重要，如提供防止水分流失的保护层，防止由于日晒引起的UV损伤，以及对病原体起屏障作用。这些保护功能需要表皮内细胞的有序分化。随着年龄增长，皮肤的分化模式被破坏，形成功能失调的屏障，从而导致容易受伤、撕裂和/或UV损伤的脆弱皮肤。如本文所证，纳摩尔浓度的雷帕霉素造成人皮肤的表皮内更有序的分化以及老化和细胞功能失调标志物的减少。与真皮(dermis)和表皮细胞老化有关的关键蛋白p16^INK4A的表达减少。该蛋白质与皮肤中的老化相关变化有关(Waaijer,et al.,2016,JGerontol A Biol Sci Med Sci.71(8):1022-1028；Waaijer,et al.,2012,Aging Cell 11(4):722-725)。另外，雷帕霉素治疗还使皮肤中与UV损伤相关的组织学变化减少。这些变化意味着老年个体的肤色和皱纹化的临床改善。

定义

如本文所用，以下各术语具有本节中其相关含义。

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语总体上具有与本发明所属领域的普通技术人员所普遍理解的相同含义。总体上，本文所用的命名法以及细胞培养、分子遗传学和化学中的实验室程序是本领域公知的和常用的那些。

如本文所用，冠词“一种”和“一个”是指冠词的语法对象中的一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)。举例来说，“一个元件”是指一个元件或多于一个元件。

如本文中所用，术语“约”将被本领域普通技术人员理解，并且将在其所用语境中在一定程度上变化。如本文所用，当谈及诸如含量、持续时间等的可测量值时，术语“约”意为涵盖与指定值相差±20％或±10％、±5％、±1％或±0.1％的变化，因为这样的变化适于实施所公开的方法。

如本文所用，“皮肤病学可接受的载体”或“皮肤病学可接受的赋形剂”是指适用于与人角蛋白组织接触而没有过度毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等的组合物或组分。

“疾病”是动物的如下健康状态：其中动物无法维持稳态，并且其中如果疾病没有得到改善，则动物的健康继续恶化。动物的“障碍”是指如下健康状态：其中动物能够维持稳态，但其中与不存在该障碍的情况相比，动物的健康状态较不好。若不治疗，障碍不一定会导致动物健康状态进一步下降。

如本文所用，术语化合物的“有效量”或“治疗有效量”或“药学有效量”被可互换地使用，以指代足以对化合物所给予的对象提供有益效果的化合物量。如本文所用，术语“治疗”意为降低患者或对象经历的症状的频率或给予药剂或化合物以降低所经历的症状的严重程度。任何个案下的适当治疗量可由本领域普通技术人员利用常规实验确定。

如本文所用，“说明材料”包括出版物、记录、图表或试剂盒中可用于传达本发明的化合物、组合物、测定或方法对于抑制或降低对象的全身免疫响应的有用性的任何其他表达介质。本发明的试剂盒的说明材料可以例如固定在容纳本发明的已鉴定化合物、组合物、测定或方法的容器上，或者与容纳已鉴定化合物、组合物、测定或方法的容器一起装运。可选地，说明材料可与容器分开运输，目的是说明材料和化合物、组合物、测定或方法被接收者配合使用。

如本文所用，术语“调节”意为，关于本发明的化合物与本发明所考虑的受体结合相关的疾病状态或状况，直接或间接产生状况或疾病状态的改善或减轻，该状况或疾病状态在给予根据本发明的化合物之前是次优的并且在很多情况下是造成衰弱的以及甚至危及生命的。调节可以借助于激动剂活性、拮抗剂活性或混合激动剂/拮抗剂活性(取决于受体位点)来进行。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不消除组合物的生物学活性或性质并且相对无毒的材料，如载体或稀释剂，即该材料可被给予于个体，而不引起不期望的生物学效果或以有害的方式与包含其的组合物的任何组分相互作用。

如本文所用，术语“药物组合物”或“组合物”是指在本发明中有用的至少一种化合物与其他化学组分如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。药物组合物促进化合物向生物体的给予。本领域存在多种给予化合物的技术，包括但不限于：静脉内、口服、气溶胶、肠胃外、眼科、肺部、颅内和局部给予。在某些实施方式中，给予包括局部给予。

如本文所用，“对象”是指人或非人哺乳动物。非人哺乳动物包括例如牲畜和宠物，如羊、牛、猪、犬、猫和鼠类哺乳动物。在某些实施方式中，对象是人。

如本文所用，“局部给予”或“局部施用”是指药物施用至诸如皮肤或粘膜的体表。

如本文所用，术语“治疗”或“处理”定义为向对象施用或给予治疗剂，即本发明中有用的组合物(单独或与另一药物剂组合)，或向分离自对象的组织或细胞系施用或给予治疗剂(例如，用于诊断或离体应用)，该对象具有疾病或障碍、疾病或障碍的症状或发展疾病或障碍的可能，目的是治愈、治疗、缓解、减轻、改变、补救、改善、康复或影响该疾病或障碍、该疾病或障碍的症状或发展该疾病或障碍的可能。这样的治疗可基于从药物基因组学领域获得的知识被具体地调整或修改。

贯穿本公开，本发明的各种方面可以以范围形式来呈现。应当理解，范围形式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为是对本发明范围的不灵活的限制。因此，范围的描述应被视为已具体公开了该范围内所有可能的子范围以及个体数值。例如，对诸如从1到6的范围的描述应被视为已具体公开了该范围内的子范围如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等，以及个体数值，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。这无论范围的宽度而适用。

组合物

在一个实施方式中，本发明的组合物包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。雷帕霉素也被称为(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9,27-二羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4-氧杂氮杂三十一环烯-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-戊酮，并且具有下列结构：

在某些实施方式中，可以使用向特定细胞内区室或细胞器如线粒体、细胞核、溶酶体和/或内质网的递送改善的雷帕霉素修饰形式。雷帕霉素的修饰形式包括酯、酰胺、醚衍生物等。

雷帕霉素外以外的其他mTORC1抑制剂也可用于本文展示的方法，以实现本文所述的治疗效果。在某些实施方式中，mTORC1抑制剂是选自以下的至少一种：BEZ235、依维莫司(everolimus)、AZD8055、替西罗莫司(Temsirolimus)、KU-0063794、PI-103、Torkinib、他克莫司(Tacrolimus)、利达福莫司(Ridaforolimus)、INK-128、Voxtalisib、Torin-1、Omipalisib、OSI-027、PF-04691502、Apitolisib、GSK1059615、WYE-354、Gedatolisib、AZD-2014、Torin-2、WYE-125132、BGT226、Palomid-529、PP121、WYE-687、CH5132799、Way-600、ETP-46464、GDC-0349、XL388、和佐他莫司(Zotarolimus)或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。在其他实施方式中，mTORC1抑制剂是选自以下的至少一种：雷帕霉素、利达福莫司和依维莫司或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。在再其他实施方式中，mTORC1抑制剂是雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。本文所述的任何mTORC1抑制剂的治疗有效量可以为组合物的约0.0001％至约1％、0.0005％至约0.95％、约0.001％至约0.85％、0.002％至约0.75％、约0.005％至约0.5％、约0.008％至约0.25％、约0.01％至约0.2％、约0.02％至约0.15％、约0.0001％至约0.001％、约0.0001％至约0.01％或约0.03％至约0.1％(w/w)。可用于本文所述的组合物的mTORC1抑制剂的治疗有效量可以为组合物的约0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％,0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或约0.0001％(w/w)。

在某些实施方式中，组合物中雷帕霉素的治疗有效量在以下范围内：组合物的约0.0001％至约1％、0.0005％至约0.95％、约0.001％至约0.85％、0.002％至约0.75％、约0.005％至0.5％、约0.008％至约0.25％、约0.01％至约0.2％、约0.02％至约0.15％、约0.0001％至约0.001％、约0.0001％至约0.01％、或约0.03％至约0.1％(w/w)。在某些实施方式中，组合物中雷帕霉素的治疗有效量在约0.0001％至约0.001％(w/w)的范围内。在其他实施方式中，组合物中雷帕霉素的按重量计治疗有效量在约0.0001％至约0.01％(w/w)的范围内。

在某些实施方式中，组合物中雷帕霉素的治疗有效量为约0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％,0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％、或约0.0001％(w/w)。在某些实施方式中，包含处于或低于0.001％w/w的雷帕霉素的组合物不抑制皮肤细胞生长，并且维持皮肤细胞的增殖潜力。在某些实施方式中，包含处于或低于0.001％w/w的雷帕霉素的组合物防止或减少皮肤细胞的衰老。在某些实施方式中，包含约0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或约0.0001％(w/w)量的雷帕霉素的组合物不抑制皮肤细胞生长，维持皮肤细胞的增殖潜力，并防止或减少皮肤细胞的衰老。

在某些实施方式中，本发明的组合物还包含皮肤病学可接受的载体。本发明的组合物可包含约60％至约99.9％、可选地约70％至约95％、以及可选地约80％至约90％的皮肤病学可接受的载体。在某些实施方式中，皮肤病学可接受的载体至少选自溶剂、润滑剂、柔润剂、乳化剂、保湿剂、增稠蜡、软化剂、香料、防腐剂和人造色素(一种或多种)。在其他实施方式中，皮肤病学可接受的载体是选自水、脂肪醇和挥发性有机醇的至少一种。皮肤病学可接受的载体的一个非限制性实例是凡士林。

方法

在一个实施方式中，本发明是用于预防和/或早期治疗由雀斑和黑斑病引起的UV诱发的色素沉着异常的方法。在另一实施方式中，本发明提供了用于预防和/或治疗年龄有关的皮肤障碍(如但不限于老年性紫癜、静态皱痕和/或手静脉突出)的方法。在再另一实施方式中，本发明提供了用于预防和/或治疗如原位鳞状细胞癌中的上皮区域性癌变的方法。在再另一实施方式中，本发明提供了用于预防和/或治疗瘢痕瘤的方法。在再另一实施方式中，本发明进一步提供了用于维持胶原同工型的最佳比例以防止老化(衰老，aging)的方法。在再另一实施方式中，本发明进一步提供了用于治疗或预防有需要的哺乳动物对象中发生的皮肤变化所引起的皮肤障碍的试剂盒。

在某些实施方式中，方法包括向对象局部给予治疗有效量的雷帕霉素，该雷帕霉素任选地被配制成皮肤可接受的组合物。

在某些实施方式中，组合物包含治疗有效量的雷帕霉素。在再其他实施方式中，组合物还包含皮肤病学可接受的载体。在再其他实施方式中，组合物被局部施用于对象的患病皮肤区域。

在某些实施方式中，本文考虑的组合物的局部配制物(formulations)用于治疗UV诱发的、年龄相关的以及炎症后的皮肤变化。

在某些实施方式中，本发明提供了局部乳膏，其包含治疗有效量的雷帕霉素，用于治疗或预防UV诱发的、年龄相关的以及炎症后的皮肤变化。

在某些实施方式中，通过测量衰老相关蛋白例如p16^INK4A、分化标志物如细胞角蛋白5/6、胶原纤维的组织(organization)、临床度量如皱纹化严重程度和肤色来评价皮肤变化。

配制物

本发明药物组合物中的活性成分、皮肤病学可接受的载体和任何其他成分的相对量将根据所治疗对象的身份、尺寸和状况而变化。举例来说，组合物可包含约0.0001％至约1％(w/w)的雷帕霉素。在某些实施方式中，组合物包含约0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％,0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％、或约0.0001％(w/w)的雷帕霉素。

在某些实施方式中，组合物中雷帕霉素的按重量计治疗有效量为约0.0001％至约1％、0.0005％至约0.95％、约0.001％至约0.85％、0.002％至约0.75％、0.005％至约0.5％、约0.008％至约0.25％、约0.01％至约0.2％、约0.02％至约0.15％或约0.03％至约0.1％。

尽管本文提供的药物组合物的描述主要针对适于合乎伦理地给予人类的药物组合物，但本领域技术人员将理解，这种组合物总体上适于给予所有种类的动物。为了使组合物适于给予各种动物而对适于给予人类的药物组合物进行的改动是公知的，并且普通技术兽医药理学家可以通过仅仅普通的实验(如有)来设计和实施这种改动。本发明的药物组合物的给予所考虑的对象包括但不限于人和其他灵长类动物、哺乳动物，包括商业相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、猫和狗。

本发明的组合物可以频繁如一天几次地被给予于哺乳动物，或者其可以较低频率被给予，如一天一次、一周一次、每两周一次、一月一次，或还更低频率，如每几个月一次、或甚至一年一次或更少。

用于给予本发明的组合物的用药方案可以是一天一次或一天两次。活性剂的施用频率和浓度取决于皮肤状况和真皮响应。施用可以持续以对真皮实现期望的效果，并且在获得满意的结果后可以减少施用频率。在某些实施方式中，给予需要最少6-8周以实现结果。施用可以持续超过最初的6-8周，以获得持续的改善，并且可以在达到此结果后减少施用频率。施用可基于在任何一个时间的病变相对严重程度以不同水平的施用持续数年过程。

可理解，在非限制性实例中，本发明的组合物的日剂量可以被每天、每隔一天、每2天、每3天、每4天或每5天给予。剂量的频率对技术人员而言是显而易见的，并且将取决于任何数量的因素，如但不限于所治疗疾病的类型和严重程度、动物的类型和年龄等。

在某些实施方式中，本发明的组合物利用一种或多种皮肤病学可接受的赋形剂或载体来配制。在某些实施方式中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的雷帕霉素和皮肤病学可接受的载体。有用的皮肤病学可接受的载体包括但不限于甘油、水、盐水、乙醇和其他皮肤病学可接受的盐溶液，如磷酸盐和有机酸盐。这些和其他皮肤病学可接受的载体的实例被描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences(1991,Mack Publication Co.,NewJersey)。

本发明的组合物可包含约0.01％至约1％，可选地约1％至约10％，可选地约10％至约50％的皮肤病学可接受的载体。在某些实施方式中，皮肤病学可接受的载体至少选自溶剂、润滑剂、柔润剂、乳化剂、保湿剂、增稠蜡、软化剂、香料、防腐剂和人造色素(一种或多种)。在其他实施方式中，皮肤病学可接受的载体是选自水、脂肪醇和挥发性有机醇的至少一种。皮肤病学可接受的载体的一个非限制性实例是凡士林。

载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其适当混合物和植物油。例如通过使用诸如卵磷脂的包衣，在分散液的情况下通过维持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。

可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，来防止微生物的作用。在很多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、氯化钠或多元醇，如甘露醇和山梨糖醇。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝或明胶，可实现可注射组合物的吸收延长。

配制物可以与常规赋形剂(即本领域已知的适于局部给予的药学上可接受的有机或无机载体物质)共混使用。药物制剂(preparations)可以被灭菌，并且如需，可以与辅助剂混合，例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、用于影响渗透压缓冲剂的盐、着色剂、调味剂和/或芳香族物质等。其也可以在需要时与其他活性剂(例如其他镇痛剂)组合。

如本文所用，“其他成分”包括但不限于以下一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；制粒剂和崩解剂；粘合剂；润滑剂；着色剂；防腐剂；生理上可降解的组合物，如明胶；水性媒介和溶剂；油性媒介和溶剂；悬浮剂；分散剂或湿润剂；乳化剂、粘滑剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填充剂；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；以及药学上可接受的聚合物或疏水材料。可以被包括在本发明的药物组合物中的其他的“其他成分”是本领域已知的，并且被描述于例如Genaro ed.(1985,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA)，其通过引用并入本文。

本发明的组合物可以包含防腐剂。防腐剂用于防止在暴露于环境中的污染物的情况下变质。根据本发明有用的防腐剂的实例包括但不限于选自下列的那些：苄醇、山梨酸、对羟基苯甲酸酯、咪唑烷脲(imidurea)及其组合。特别优选的防腐剂是约0.5％至2.0％苄醇和0.05％至0.5％山梨酸的组合。

组合物优选包含抗氧化剂和/或螯合剂，如EDTA。对于一些化合物优选的抗氧化剂是BHT、BHA、α-生育酚和抗坏血酸，优选范围为约0.01％至0.3％，并且更优选组合物总重量的按重量计0.03％至0.1％范围内的BHT。优选地，螯合剂的存在量为组合物总重量的按重量计0.01％至0.5％。特别优选的螯合剂包括氨基聚羧酸盐(例如乙二胺四乙酸二钠)和柠檬酸，其重量范围为组合物总重量的按重量计约0.01％至0.20％，并且更优选0.02％至0.10％的范围。螯合剂可用于螯合组合物中的金属离子，金属离子可不利于配制物的保质期。

局部给予

药物的局部给予的一个阻碍是表皮的角质层。角质层是由蛋白质、胆固醇、鞘脂、游离脂肪酸和各种其他脂质构成的高阻性层，并且包括角化细胞和活细胞。限制化合物穿过角质层的穿透率(通量)的因素之一是能够被负载或施加到皮肤表面的活性物质量。每单位皮肤面积施加的活性物质量越大，皮肤表面与皮肤下层之间的浓度梯度越大，进而活性物质通过皮肤的扩散力越大。因此，含有更高浓度的活性物质的配制物比具有较低浓度而所有其他方面等同的配制物更可能导致活性物质穿透皮肤，并且其更多并且以更一致速率穿透皮肤。

适用于局部给予的配制物包括但不限于液体或半液体制剂，如搽剂、洗剂、水包油或油包水乳剂如乳膏、油膏或糊剂、以及溶液或悬浮液。这样的制剂可以被直接或通过使用药签、涂覆器、刮刀等以及以透皮贴剂的形式施加于皮肤。在某些实施方式中，贴剂使通过皮肤的洗涤、摩擦、抓擦和/或刮蹭导致的药物损失最小化。在其他实施方式中，贴剂增加了通过皮肤的药物吸收，同时使皮肤对药物的暴露最小化。

本发明中考虑的局部给予配制物可以例如包含约0.0001％至约1％(w/w)的雷帕霉素，尽管雷帕霉素的浓度可以高达其在溶剂中的溶解度极限。在一个具体实施方式中，组合物包含约0.0001％至约0.1％(w/w)的雷帕霉素。用于局部给予的配制物可进一步包含一种或多种本文所述的其他成分。

可以使用渗透增强剂。这些材料增加了药物穿越皮肤的穿透率。本领域中的一般增强剂包括乙醇、单月桂酸甘油酯、PGML(聚乙二醇单月桂酸酯)、二甲基亚砜等。其他增强剂包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮

酮、烷烃羧酸、二甲基亚砜、极性脂质或N-甲基-2-吡咯烷酮。

用于局部递送本发明的一些组合物的一种可接受的媒介可以包含脂质体。脂质体的组成及其用途在本领域中是已知的(例如，美国专利号6,323,219)。

在可选实施方式中，局部配制物还包含其他成分，如佐剂、抗氧化剂、螯合剂、表面活性剂、发泡剂、湿润剂、乳化剂、增粘剂、缓冲剂、防腐剂等。在其他实施方式中，渗透或穿透增强剂被包括在配制物中，并且相对于缺乏渗透增强剂的组合物，有效提高活性成分进入和穿过角质层的经皮渗透。各种渗透增强剂，包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮

酮、烷烃羧酸、二甲基亚砜、极性脂质或N-甲基-2-吡咯烷酮，是本领域技术人员已知的。在另一方面，局部配制物可进一步包含促水溶剂，其作用以增加角质层结构的无序，并因此允许增加穿越角质层的运输。诸如异丙醇、丙二醇或二甲苯磺酸钠的各种促水溶剂是本领域技术人员已知的。

局部配制物中的其他非活性成分是本领域公知的。这些成分包括但不限于致湿剂、柔润剂、pH稳定剂、螯合剂、胶凝剂、增稠剂、乳化剂、粘合剂、缓冲剂、载体、抗氧化剂等。这种成分的其他实例被包括在美国食品药品监督管理局(U.S.Food&DrugAdministration)的《批准药物的非活性成分》(Inactive Ingredients for ApprovedDrugs)(可在线获得)中。其他讨论和可被包括在配制物中的潜在非活性成分可在“TheScience and Practice of Pharmacy”,21st Edition,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.(2006)中找到。

在某些实施方式中，本发明的凝胶配制物包含允许释放雷帕霉素的无机物质如铝盐或天然或合成来源的有机聚合物。

在再其他实施方式中，本发明的溶液或喷雾配制物包含药物的聚合物溶液，其被喷雾在完整皮肤上，提供雷帕霉素从聚合物基质的持续释放。

在再其他实施方式中，本发明的乳膏或洗剂配制物包含聚氧乙烯、甘油、石蜡、丙二醇和甘油。

在再其他实施方式中，本发明的油膏配制物包含石油、石蜡、甾醇和胆固醇。

受控释放配制物和药物递送系统

可以使用常规技术制备本发明的药物组合物的受控或持续释放配制物。在一些情况下，待用剂型可以以其中一种或多种活性成分缓慢或受控释放的形式被提供——利用例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体或微球或其组合来以不同比例提供期望的释放曲线。本领域普通技术人员已知的适当受控释放配制物，包括本文所述的那些，可以容易地被选择以用于本发明的药物组合物。因此，适于局部给予的单一单位剂型，如搽剂、洗剂、水包油或油包水乳剂(如乳膏、油膏或糊剂)、透皮贴剂以及适于受释放的溶液或悬浮液，被包括在本发明中。

大多数受控释放药物产品的共同目标是相对于其非受控的对应物改善药物治疗。理想地，在医疗中采用最佳设计的受控释放制剂的特征在于，在最少时间量内使用最少的药物物质来治愈或控制状况。受控释放配制物的优点包括药物活性延长，剂量频率降低和患者依从性增加。另外，受控释放配制物可用于影响作用开始时间或其他特征，如药物的血液水平，并且因此可影响副作用的发生。

大多数受控释放配制物被设计以最初释放立即产生期望的治疗效果的药物量，以及逐渐和持续地释放其他药物量以经延长的时间段维持该水平的治疗效果。为了维持药物在体内的这种恒定水平，药物必须以一定的速率从剂型释放，该速率将替代被代谢和从体内排出的药物量。

活性成分的受控释放可以通过各种诱导剂来刺激，例如pH、温度、酶、水或其他生理条件或化合物。在本发明环境中的术语“受控释放组分”在本文中被定义为促进活性成分的受控释放的一种或多种化合物，包括但不限于聚合物、聚合物基质、凝胶、渗透膜、脂质体或微球或其组合。

在某些实施方式中，本发明的配制物可以是，但不限于，短期、快速抵消(rapidoffset)以及受控释放例如持续释放、延迟释放和脉冲释放配置。

术语“持续释放”以其常规意义指代药物配制物实现经延长的时间段逐级释放药物，并且可以，虽非一定，导致药物的血液水平经延长的时间段基本上恒定。该时间段可以长达一个月或更长，并且应当是长于以推注(弹丸，bolus)形式给予等量药剂的释放。

关于持续释放，可以将化合物与为化合物提供持续释放性质的适当聚合物或疏水性材料一起配制。

在本发明的某些实施方式中，利用持续释放配制物，将本发明的组合物单独或与另一种药物剂组合给予患者。

术语延迟释放在本文中以其常规意义使用，指代药物配制物在药物给予后的一定延迟后实现药物的初始释放，并且可以，虽非一定，包括约10分钟上至约12小时的延迟。

术语脉冲释放在本文中以其常规意义使用，指代药物配制物在药物给予后以产生药物脉冲式血浆曲线(profile)的方式提供药物释放。

术语立即释放以其常规意义使用，指代药物配制物在药物给予后立即实现药物释放。

如本文所用，短期是指在药物给予后上至并且包括约24小时、约48小时、约72小时以及其任何或所有全增量或偏增量的时间段。

本领域技术人员将认识到，或能够利用不超过常规的实验确定，本文所述的具体程序、实施方式、权利要求和实施例的多种等同形式。这种等同形式被认为在本发明的范围内，并被所附权利要求书覆盖。例如，应该理解，以本领域公认的替代形式和利用不超过常规的实验对反应条件(包括但不限于反应时间、反应尺寸/体积和实验试剂如溶剂、催化剂、压力、气氛条件(例如氮气气氛)和还原剂/氧化剂)进行的改动是在本申请的范围内的。

应当理解，本文无论在何处提供数值和范围，这些数值和范围所涵盖的所有数值和范围都意在被涵盖在本发明的范围内。此外，本申请还考虑落入这些范围内的所有数值以及数值范围的上限或下限。

以下实施例进一步示例了本发明的方面。但是，其不以任何方式作为对本文所述的本发明的教导或公开的限制。

实施例

现在参考以下实施例描述本发明。提供这些实施例仅出于示例的目的，并且本发明不限于这些实施例，而是涵盖因本文提供的教导而显而易见的所有变型。

材料和方法

除非另有说明，所有细胞系、起始材料、试剂和细胞系均购自商业供应商，并且不经进一步操作使用。

向患者提供以雷帕霉素专属局部配制物(0.001％；相当于10μM)或安慰剂配制物(除不含雷帕霉素外，其余均相同)。对于脂溢性角化病，指示患者在夜晚在睡前将配制物施用于病变周围上至1cm的局部皮肤区域。指示患者一天一次在夜晚在睡前将乳膏施用于手背侧。

该乳膏包含以下成分：聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯、单硬脂酸甘油酯、石蜡、鲸蜡醇、矿物油、水、丙二醇、山梨糖醇、甘油、对羟基苯甲酸甲酯。

向患者提供4周乳膏供应，以编号标记，不指示其是否包含雷帕霉素。指示患者如果在任何时候发生任何刺激或消极反应则联系研究人员。

实施例1：

用1微摩尔雷帕霉素的配制物或包含媒介对照的相同配制物治疗人皮肤240天。每天施用0.5cc的配制物。处理皮肤活组织检查(N＝8)用于免疫组织化学，并使用LeicaAperio软件系统定量核的p16。由图1可见，雷帕霉素治疗使人皮肤中的p16水平降低。

实施例2：

图2显示了在施用含有雷帕霉素(10μM)或安慰剂的局部乳膏后的患者手背的人皮肤活组织检查的苏木精伊红染色。光化性(日光性)弹性组织变性的组织学证据用箭头指示。类似于图2中所示。在多个患者活组织检查中观察到老化/受损皮肤的这些组织学标志物的存在减少。

实施例3：

图3显示了在施用含有雷帕霉素(10μM)或安慰剂的局部乳膏后的患者手背的人皮肤活组织检查的40X放大图像。雷帕霉素治疗的活组织检查显示上皮层的排列更有序，包括在基层内的核的顶点位置(apical placement)和更显著的角蛋白层。

实施例4：

图4显示了在施用含有雷帕霉素(10μM)或安慰剂的局部乳膏后的患者手背的人皮肤活组织检查的40X放大图像。未经治疗的皮肤显示UV损伤迹象，其形式为紫色染色的弹性蛋白纤维(称为日光性弹性组织变性)和杂乱无章的胶原纤维。雷帕霉素治疗的活组织检查显示胶原纤维排列更有序并且日光性弹性组织变性较少。

实施例5：

将在施用含有雷帕霉素(10μM)或安慰剂的局部乳膏后的患者手背的人皮肤活组织检查用识别细胞角蛋白5/6的抗体染色(棕色染色)，该细胞角蛋白5/6是表皮中的基底细胞的标志物。观察到雷帕霉素治疗的皮肤中的染色更集中位于皮肤的基层中，而接受安慰剂治疗的皮肤显示了粒层中的细胞角蛋白5/6(CK 5/6)染色，这指示老化皮肤的典型不完全分化。

实施例6：

高度放大(40X)的CK 5/6染色证实，如图6所示，在安慰剂治疗的皮肤中阳性染色处于粒层中并延伸到角质层中，而在雷帕霉素治疗的活组织检查中CK 5/6染色图案仍局限于基层。

实施例7：

如图7所示，在施用10μM(0.001％)雷帕霉素乳膏6个月后，在67岁老年女性身上观察到临床改善。提供安慰剂治疗的左手用于比较。

实施例8：

对一名六十多岁的白人女性用雷帕霉素(0.001％)进行治疗4.5个月。该患者是癌症幸存者，多轮化疗，复发性紫癜伴随后续瘢痕形成。治疗结果显示在图8中，图8显示在4.5个月治疗期后紫癜显著减少。在试验结束时治疗中止。

实施例9：

图9A-9C显示了雷帕霉素保护人细胞免受UV损伤。将在存在或不存在1nM雷帕霉素的情况下生长的细胞暴露于增加量的UV辐射，并在24小时后确定细胞数。细胞损失百分数展示在图9A中。雷帕霉素处理的培养物显示在UV照射后细胞死亡减少(P＝0.0044)。在图9B中，展示了UV后24小时对照培养物的代表性照片。观察到凋亡的典型特征，包括圆润的漂浮细胞和典型的细胞起泡。在图9C中，展示了已经在1nM雷帕霉素中生长的平行培养物，其明显缺乏凋亡细胞。

列举的实施方式

提供以下示例性实施方式，其编号不应被解释为指定重要性等级。

实施方式1提供了治疗和/或预防有需要的哺乳动物对象中的皮肤障碍的方法，该方法包括向对象局部给予包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体的组合物，其中所述皮肤障碍是选自以下的至少一种：静态皱纹、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕、UV损伤、手静脉突出、如鳞状细胞癌中的上皮区域性癌变、瘢痕瘤和胶原同工型比例失衡。

实施方式2提供了实施方式1的方法，其中上皮区域性癌包括表皮发育异常和光化性损伤。

实施方式3提供了实施方式1-2的方法，其中所述对象是人。

实施方式4提供了实施方式1-3的方法，其中所述组合物包含按重量计约0.1至约0.0001％的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。

实施方式5提供了实施方式1-4的方法，其中所述组合物包含按重量计约0.001％至约0.0001％的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体。

实施方式6提供了实施方式1-5的方法，其中所述组合物还包含皮肤病学可接受的载体。

实施方式7提供了实施方式1-6的方法，其中所述皮肤病学可接受的载体是选自溶剂、润滑剂、柔润剂、乳化剂、保湿剂、增稠蜡、软化剂、香料、防腐剂和人造色素的至少一种。

实施方式8提供了实施方式1-7的方法，其中所述皮肤病学可接受的载体包括凡士林。

实施方式9提供了实施方式1-8的方法，其中将所述组合物施用于对象的皮肤障碍位点。

实施方式10提供了用于治疗和/或预防有需要的哺乳动物对象的皮肤障碍的试剂盒，该试剂盒包括：包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体的组合物、施用器、和将所述组合物局部给予对象的说明，其中所述皮肤障碍是选自以下的至少一种：静态皱纹、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕、手静脉突出、上皮区域性癌变、瘢痕瘤以及胶原同工型比例失衡。

其他实施方式

本文对任何变量限定中要素列举的叙述包括该变量作为所列要素中的任何单个要素或组合(或子组合)的限定。本文对实施方式的叙述包括该实施方式作为任何单个实施方式或与任何其他实施方式或其部分组合。

本文引用的各专利、专利申请和出版物的公开内容其整体通过引并入本文。尽管本发明已被参考具体实施方式公开，但是显然，本领域的其他技术人员可以想到本发明的其他实施方式和变型而不脱离本发明的实际精神和范围。所附权利要求意图被解释为包括所有这样的实施方式和等同变型。

Claims

1.治疗有需要的哺乳动物对象的皮肤障碍的方法，所述方法包括向所述对象局部给予包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体的组合物，其中所述皮肤障碍是选自以下的至少一种：静态皱纹、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕、UV损伤、手静脉突出、如鳞状细胞癌中的上皮区域性癌变、瘢痕瘤和胶原同工型比例失衡。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述上皮区域性癌变包括表皮发育异常和光化性损伤。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述对象是人。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含按重量计约0.1％至约0.0001％的雷帕霉素。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含按重量计约0.001％至约0.0001％的雷帕霉素。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物还包含皮肤病学可接受的载体。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述皮肤病学可接受的载体是选自以下的至少一种：溶剂、润滑剂、柔润剂、乳化剂、保湿剂、增稠蜡、软化剂、香料、防腐剂和人造色素。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述皮肤病学可接受的载体包括凡士林。

9.根据权利要求1所述的方法，其中将所述组合物施用于所述对象的所述皮肤障碍的位点。

10.用于治疗和/或预防有需要的哺乳动物对象的皮肤障碍的试剂盒，所述试剂盒包括：包含治疗有效量的雷帕霉素或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体的组合物、施用器、和将所述组合物局部给予所述对象的说明，其中所述皮肤障碍是选自以下的至少一种：静态皱纹、细皱纹、肤色丧失、雀斑、黑斑病、老年性紫癜、静态皱痕、手静脉突出、上皮区域性癌变、瘢痕瘤和胶原同工型比例失衡。