CN112930394B - 表达ii类主要组织相容性复合物的癌细胞疫苗和用于产生整合免疫应答的使用方法 - Google Patents

表达ii类主要组织相容性复合物的癌细胞疫苗和用于产生整合免疫应答的使用方法 Download PDF

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Abstract

提供了经过修饰以共表达II类反式激活因子(CIITA)和免疫刺激分子的经修饰癌细胞。免疫刺激分子是OX‑40‑配体或4‑1BB‑配体。提供了通过将编码CIITA和免疫刺激分子的多核苷酸引入癌细胞来制备所述细胞的方法。还提供了通过施用经修饰癌细胞或编码CIITA和免疫刺激分子的多核苷酸来刺激体液和细胞介导的免疫应答的方法。这些方法可用于刺激针对多种癌症抗原中任一种的免疫应答。

Description

表达II类主要组织相容性复合物的癌细胞疫苗和用于产生整 合免疫应答的使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年7月22日提交的美国临时申请号62/701,791的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
技术领域
本公开内容一般地涉及癌症的预防和治疗，并且更具体地涉及用于改善对癌症的免疫应答的组合物和方法。
背景技术
肿瘤抗原特异性CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞在抗肿瘤免疫中起协同作用。在肿瘤部位，CD8+T细胞(也称为细胞毒性T细胞)被认为是破坏癌细胞的主要效应细胞。CD4+T细胞(也称为辅助T细胞)通过激活抗原呈递细胞和/或分泌细胞因子来辅助CD8+T细胞的激活、功能和维持。CD4+T细胞还通过表达与B细胞上CD40分子结合的CD40-配体(CD40L)并分泌诱导抗体类别转换的细胞因子来辅助B细胞的激活以诱导抗体分泌。B细胞产生肿瘤抗原特异性抗体，其与肿瘤抗原蛋白结合形成抗原-抗体复合物，有时称为“免疫复合物”。免疫复合物被抗原呈递细胞有效捕获，并同时通过与Fc受体结合而激活抗原呈递细胞(APC)。随后，激活的抗原呈递细胞将肿瘤抗原蛋白交叉呈递至CD4+和CD8+T细胞。由于CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞的不同且协同的抗肿瘤功能，因此建立整合CD4+T细胞、CD8+T细胞和分泌抗体的B细胞的策略对于癌症患者将是有前途的免疫疗法。
T细胞通过识别癌细胞上的MHC分子呈递的肿瘤抗原蛋白来源的肽来破坏癌细胞。然而，已知一些癌细胞通过从其表面消除MHC分子而逃脱了T细胞介导的杀伤。与癌细胞的细胞表面结合的抗体通过抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)破坏癌细胞，而与MHC表达无关(或以不依赖于MHC的方式)。
由于辅助CD8+T细胞和B细胞二者，CD4+辅助T细胞被认为在诱导整合抗肿瘤免疫应答中起着核心作用。通常，CD4+T细胞的激活需要捕获并交叉呈递细胞外蛋白(例如肿瘤抗原蛋白)的抗原呈递细胞。最近，我们发现了直接识别表达II类MHC(MHC-II)的癌细胞的独特的CD4+T细胞亚群。我们将这种CD4+T细胞亚群称为“肿瘤识别CD4+T细胞(TR-CD4细胞)”，其通过直接识别癌细胞来增强肿瘤抗原特异性CD8+T细胞的功能，而无需抗原呈递细胞。因此，预期TR-CD4细胞有效地为其它免疫细胞提供帮助，以增强肿瘤部位的抗肿瘤免疫。然而，目前尚没有有效地在体内诱导TR-CD4细胞的方法。因此，对于改善对癌症和其它免疫原性试剂的免疫应答的组合物和方法存在持续且未满足的需求。本公开内容涉及这些需求。
发明内容
本公开内容提供了可用于刺激和/或增强免疫应答(包括但不一定限于对肽抗原的免疫应答)的组合物和方法。在一些实施方案中，通过使用本公开内容的组合物和方法来刺激和/或增强细胞介导的免疫、体液免疫或两者。
在某些方面，本公开内容包括用于疫苗接种的组合物。在一些实施方案中，本公开内容提供了包含经修饰癌细胞的细胞疫苗组合物，所述经修饰癌细胞是经过改造而过表达II类反式激活因子(CIITA)基因和免疫刺激分子。本公开内容中所述的免疫刺激分子包括GM-CSF、CD80、GITR-配体、OX-40-配体和4-1BB-配体。在一个实施方案中，可以使用CD86。在一些实施方案中，经修饰癌细胞表达4-BB-配体和/或OX40-配体，如下文进一步所述的。在替代实施方案中，本公开内容包括使用编码CIITA蛋白和免疫刺激剂的多核苷酸，例如在作为递送至个体的试剂的表达载体中。在一些实施方案中，作为CIITA基因的替代，本公开内容包括改造癌细胞以提高MHC IIα和β链的表达。
使用相关的小鼠模型，证明了与表达单独的CIITA或共刺激配体的癌细胞相比，本文所述的疫苗诱导有效且持久的抗肿瘤CD8+T细胞。此外，本文所述的细胞疫苗诱导针对癌细胞上细胞表面分子的细胞毒性抗体的产生。因此，预期本文所述的疫苗通过T细胞介导的细胞毒性提供针对表达MHC的癌症的保护性免疫，而且还通过抗体介导的细胞毒性提供针对MHC丢失的免疫逃逸变体的保护性免疫。
本领域技术人员将认识到，本文所用的术语MHC可通过在本领域中称为白细胞抗原基因复合物(HLA)的MHC人等同物而扩展至人应用。
如通过本公开内容提出的非限制性实例所认识的，为了诱导TR-CD4细胞，我们通过过表达MHC II类反式激活因子(CIITA)基因(其为II类MHC介导的抗原呈递的主要调节因子)的逆转录病毒在鼠癌细胞系的细胞表面表达MHC-II。为了增强表达MHC-II的癌细胞的免疫原性，还共表达了免疫刺激基因。与亲本癌细胞或表达单独CIITA的细胞相反，一些共表达CIITA和免疫刺激基因(尤其是4-1BB-配体(BB-L))的工程化癌细胞系在同基因小鼠中诱导了强且持久的抗肿瘤免疫应答。共表达CIITA+BB-L但不表达单独BB-L的癌细胞诱导了特异性结合至癌细胞表面并杀死癌细胞的循环抗体。通过表达CIITA+BB-L的癌细胞诱导的癌症特异性抗体保护小鼠对抗MHC丢失癌细胞生长。这些发现表明，共表达CIITA+BB-L的工程化癌细胞适合用作疫苗，以诱导整合的T细胞和抗体应答从而保护对抗MHC表达癌症和MHC丢失癌症。
附图说明
图1.共表达CIITA和免疫刺激基因的鼠癌细胞系的产生。将CIITA和/或免疫刺激基因(CD80、GM-CSF、GITR-配体、4-1BB-配体和OX40-配体)克隆到双顺反子逆转录病毒转移质粒(pQCXIX，购自Clontech)中。通过该转移质粒和表达pVSV-G包膜的质粒(Clontech)对GP2-293包装细胞系(Clontech)的共转染产生逆转录病毒颗粒。通过逆转录病毒转导改造小鼠癌细胞系以表达CIITA和/或免疫刺激基因。
图2.工程化癌细胞的免疫原性。CIITA和免疫刺激基因的表达对同基因(C57BL/6)小鼠中鼠淋巴瘤细胞系EL4的生长的影响。给小鼠皮下注射经改造而表达指定基因的EL4细胞。由直径计算出的肿瘤体积为0.5×(较短直径)2×(较长直径)。单独CIITA的表达不会改变EL4的肿瘤生长。CIITA与免疫刺激基因的共表达显著延迟了肿瘤生长。特别地4-1BB-L和OX40-L在所有小鼠中诱导自发完全消退。尽管单独4-1BB-L的表达诱导完全消退，但是单独OX-40L的表达仅部分延迟了肿瘤的生长。
图3.通过工程化癌细胞诱导记忆CD8+T细胞应答。(A)实验方法。为了研究长期的抗肿瘤记忆免疫应答，首先给小鼠接种用单独4-1BB-L、CIITA+4-1BB-L或CIITA+OX40-L改造的EL4。完全消退后两个月，用亲本EL4对小鼠进行皮下再攻击，并监测肿瘤生长。(B)再攻击后亲本EL4的生长。只有一些排斥表达单独4-1BB-L或CIITA+OX40-L的EL4的小鼠在再攻击时表现出保护作用。相比之下，所有最初接受表达CIITA+4-1BB-L的EL4的小鼠都排斥再攻击的亲本EL4。(C)为了研究记忆CD8+T细胞应答，首先用指定的工程化EL4接种小鼠。完全消退后立即和一个月后，通过与亲本EL4共培养并通过细胞内细胞因子染色法测量细胞因子产生来研究脾脏中的EL4特异性CD8+T细胞。(D)在肿瘤消退(第20天)后立即，接受表达单独4-1BB-L和CIITA+4-1BB-L的EL4的小鼠表现出相似的EL4特异性CD8+T细胞。接受CIITA+OX40-L的小鼠显示EL4特异性CD8+T细胞减少。一个月后(第50天)，与第20天相比，尽管接受表达单独4-1BB-L和CIITA+OX40-L的EL4的小鼠表现出EL4特异性CD8+T细胞减少，但是接受表达CIITA+4-1BB-L的EL4的小鼠中EL4特异性CD8+T细胞的百分比得以维持。
图4.通过工程化癌细胞诱导抗体应答。(A)实验方案。为了研究保护性抗体应答，首先给小鼠接种用单独4-1BB-L、CIITA+4-1BB-L或CIITA+OX40-L改造的EL4。完全消退后两个月，用经改造而通过CRISPR/Cas9技术破坏b2m基因来使I类MHC表达沉默的EL4(b2m-/-EL4)对小鼠进行皮下再攻击，并监测肿瘤生长。(B)再攻击后MHC丢失EL4(b2m-/-EL4)的生长。最初排斥表达单独4-1BB-L或CIITA+OX40-L的EL4的小鼠针对MHC丢失EL4分别没有表现出排斥或表现出局部排斥。相比之下，所有最初接受表达CIITA+4-1BB-L的EL4的小鼠都排斥再攻击的MHC丢失EL4。(C)为了研究针对癌细胞上细胞表面分子的抗体的诱导，在小鼠排斥表达单独4-1BB-L、CIITA+4-1BB-L或CIITA+OX40-L的工程化EL4之后，从小鼠中收集血清。首先将亲本EL4与稀释的血清一起孵育，并用荧光标记的抗小鼠IgG抗体染色。显示了通过流式细胞术测量的荧光强度。(D)对治疗组之间的荧光强度进行比较。排斥表达CIITA+4-1BB-L的EL4或较低程度的表达CIITA+OX40-L的EL4的小鼠产生了与EL4结合的血清抗体。(E)使用来自(C)中表达CIITA+4-1BB-L的EL4排斥小鼠的相同血清对无关的对照细胞如活化的鼠T细胞、B16F10鼠黑素瘤细胞系和MC38鼠结肠癌细胞系进行染色，表明除EL4外无交叉反应。(F)通过工程化癌细胞诱导的抗体的细胞毒性。首先向亲本EL4负载荧光钙黄绿素AM试剂，与稀释的血清孵育，然后与兔补体孵育。由上清液中的荧光水平计算细胞毒性。
图5.治疗性疫苗接种对肿瘤生长的影响。(A)实验方案。首先给小鼠皮下接种表达CIITA的EL4或MHC丢失EL4。在第3、10和17天，用经辐射IITA-EL4或CIITA+4-1BB-L-EL4对小鼠进行疫苗接种，或未处理。(B)表达CIITA的EL4的生长。用CIITA-EL4进行疫苗接种没有明显作用，通过CIITA+4-1BB-L-EL4明显抑制了肿瘤生长。5只小鼠中有2只完全排斥肿瘤。(C)首先给小鼠皮下接种MHC丢失EL4。在第3、10和17天，用经辐射IITA+4-1BB-L-EL4对小鼠进行疫苗接种，或未处理。用CIITA+4-1BB-L-EL4进行疫苗接种的小鼠表现出延迟的肿瘤生长，并且7只小鼠中有2只完全排斥肿瘤。(D)(C)中小鼠的存活率。
图6.在其它鼠肿瘤模型中的确认。(A)给小鼠皮下接种经改造而表达指定基因的MC38结肠癌和B16F10黑素瘤细胞系。在两个鼠肿瘤模型中，CIITA和4-1BB-L的共表达诱导自发排斥。(B)使用来自(A)中小鼠的血清对亲本MC38和B16F10染色。仅排斥表达CIITA+4-1BB-L的工程化癌细胞的小鼠诱导了大量与癌细胞上细胞表面结合的抗体。(C)通过疫苗接种诱导卵巢肿瘤反应性抗体应答。天然(Naive)小鼠在第0天和第7天用表达CIITA+4-1BB-L或CIITA+OX40-L的工程化鼠卵巢癌细胞系ID8进行疫苗接种。第二次疫苗接种后的第19天，收集血清并用于对亲本ID8细胞系进行染色。用CIITA+4-1BB-L-ID8进行疫苗接种的两只小鼠诱导了ID8反应性抗体，而接受CIITA+OX40-L-ID8的小鼠中有一半诱导了大量ID8反应性抗体。
具体实施方式
除非本文另外定义，否则本公开内容中使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
在整个说明书中给出的每个数值范围包括其上限值和下限值，以及落入该范围内的每个较窄的数值范围，如同这些较窄的数值范围均在本文中明确写出一样。
本公开内容包括本文在本公开内容的文本和附图中描述的所有步骤和物质组合物，包括单独的所有这些步骤及其所有组合，并且包括所有物质组合物，包括但不一定限于载体、克隆中间体、细胞、细胞培养物、细胞后代等。
本公开内容包括但不限于本文所述的工程化免疫原性癌细胞，使用该免疫原性癌细胞制备的癌症疫苗，制备该免疫原性癌细胞的方法，免疫原性组合物，多核苷酸以及用于治疗癌症的方法。本公开内容包括本文公开的所有多核苷酸、其互补序列和反向互补序列。对于通过数据库条目对多核苷酸或氨基酸序列的任何引用，在数据库条目中给出的多核苷酸和氨基酸序列都并入本文，因为其存在于本申请或专利的有效提交日期。
如上所述，癌细胞表达一系列被T细胞和B细胞识别的免疫原性抗原。因此，本公开内容利用经修饰癌细胞作为有效疫苗来诱导多价免疫应答。
在一些实施方案中，本公开内容包括如本文所述修饰癌细胞，并且包括经修饰癌细胞本身，以及包含癌细胞的组合物，例如药物组合物。在一些实施方案中，癌细胞是任何癌症类型，包括实体肿瘤和液体肿瘤。在一些实施方案中，根据本公开内容修饰的癌细胞包括但不一定限于乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠癌、食道癌、胃癌、膀胱癌、脑癌、睾丸癌、头颈癌、黑素瘤、皮肤癌、任何肉瘤，包括但不限于纤维肉瘤、血管肉瘤、腺癌和横纹肌肉瘤，以及任何血液癌，包括所有类型的白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
在一些实施方案中，将本文所述的细胞疫苗组合物施用于患有癌症或先前患有癌症或处于患癌症风险中的个体。癌症可以是任何上述类型。在一些实施方案中，用作本公开内容的疫苗的经修饰癌细胞包括来自癌细胞系的癌细胞。在一些实施方案中，用作本公开内容的疫苗的经修饰癌细胞包括来自个体的癌细胞，并且被修饰以使其表达或过表达如本文所述的CIITA和一种或多种共刺激分子或免疫刺激细胞因子，并且作为癌症治疗提供给同一个体。在一些实施方案中，同种异体癌细胞被修饰并用于本文所述的方法中。在一些实施方案中，经修饰癌细胞与在个体中针对其产生治疗性免疫应答的癌症是相同的癌症类型。
在一些实施方案中，可以用由经修饰癌细胞(或使用如本文所述的多核苷酸靶向的癌细胞)表达的一种或多种抗原对个体进行疫苗接种。在一些实施方案中，肿瘤或癌细胞裂解物可以用作疫苗接种。在一些实施方案中，通过本公开内容的方法(有或没有随后的疫苗接种)引起的免疫学保护可以是持久的，并且持续数天、数周或数月或更长时间，包括但不限于疫苗接种后，并且这样的疫苗接种可在单剂或多剂后有效引起保护。可以根据本领域已知的方案使用加强疫苗接种，并且可以在提供本说明书的益处的情况下适于与本公开内容的方法一起使用，并且包括诸如初免-加强策略的方法。
关于如本文所述刺激和/或增强的免疫应答，为了通过基于癌细胞的疫苗诱导TR-CD4细胞，癌细胞需要表达MHC-II(或在人的情况下为HLA)。然而，并非所有癌细胞都组成性表达细胞表面MHC-II。例如，鼠癌细胞系，包括但不一定限于EL4淋巴瘤、B16F10黑素瘤、MC38结肠癌和ID8卵巢癌，均不表达组成型MHC-II。
为了在鼠癌细胞系的细胞表面上表达MHC-II，我们用逆转录病毒过表达MHC II类反式激活因子(CIITA)基因，其为II类MHC介导的抗原呈递的主要调节因子。因此，在一些实施方案中，被修饰以用作如本文所述的疫苗的每种癌细胞将被修饰以使其表达CIITA(如果其先前不表达的话)，或被修饰以使其相对于根据本公开内容进行修饰之前表达的量表达更多CIITA。本领域技术人员将认识到，CIITA也被称为C2TA、NLRA、MHC2TA和CIITAIV。
代替使用CIITA基因，预期II类MHCα和β链基因的过表达将诱导细胞表面II类MHC表达。因此，在一些实施方案中，使用重组分子生物学方法(例如通过定向引入编码MHCα和β链的多核苷酸)来改造癌细胞被认为是提供经修饰癌细胞疫苗的替代方法，所述经修饰癌细胞疫苗将以类似于本文另外所述的修饰的癌细胞的方式起作用。在某些实施方案中，本公开内容提供了通过直接引入多核苷酸或为了产生经修饰癌细胞使用编码II类HLAα和β链的多核苷酸来增加MHC或HLA表达。使用本领域中已经成熟建立的技术可以确定任何特定个体的II类HLAα和β链。在一些实施方案中，可以使用与个体的HLA类型匹配的预先存在的癌细胞。或者，可以测试来自个体的包含有核细胞的任何生物样品以确定个体的HLA类型，并且可以设计和产生编码相关II类HLAα和β链的合适的多核苷酸，并将其用于本公开内容的实施方案中。在一些实施方案中，II类HLAα链是HLA-DM、HLA-DMA、HLA-DO、HLA-DOA、HLA-DP、HLA-DPA1、HLA-DQ、HLA-DQA1、HLA-DQA2、HLA-DR或HLA-DRA，或这些HLA类型的任何子类型的。在一些实施方案中，II类HLAβ链是HLA-DMB、HLA-DOB、HLA-DPB1、HLA-DQB1、HLA-DQB2、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4或HLA-DRB5，或这些HLB类型的任何子类型的。
下面提供了CIITA与共表达蛋白质的鼠和人氨基酸序列以及编码它们的DNA序列的代表性和非限制性实例。本公开内容包括使用与本文提供的那些不同的核苷酸和氨基酸序列，只要经修饰癌细胞相对于未经修饰癌细胞起作用以增强免疫应答即可。在一些实施方案中，癌细胞表达本文所述的CIITA和共刺激分子或免疫刺激细胞因子，其与以下所述的氨基酸序列相同，或与相关序列具有70-99％的氨基酸同一性。本公开内容包括使用具有氨基酸插入、缺失和替换的蛋白质，只要其保留其预期功能即可。所有编码本文所述蛋白质的多核苷酸序列被本公开内容涵盖，并且不受以下给出的那些的限制。
本公开内容的实例组合了CIITA与G-CSF、CD80、GITR-配体、OX-40-配体和4-1BB-配体之一或组合的工程化表达或过表达。然而，已证明CIITA与4-1BB-L的共表达优于其它共表达蛋白质。因此，在一些实施方案中，本公开内容提供了用作包含经修饰癌细胞的癌症疫苗的组合物和方法，所述经修饰癌细胞通过重组分子生物学方法被改造而表达CIITA和免疫刺激因子，所述免疫刺激因子优选为4-1BB-L，但是其它免疫刺激因子也包括在本公开内容的范围内。
在一些实施方案中，本文所述的细胞癌症疫苗的使用包括癌症治疗。在一些实施方案中，本文所述的细胞癌症疫苗的使用产生持久的记忆应答，包括但不一定限于持久的CD8+T细胞记忆应答。在一些实施方案中，单次施用本文所述的细胞疫苗组合物产生的免疫应答至少持续从至少一个月到至少一年，或持续至少一年，或将提供终身保护，并且因此对于在人或非人动物中的使用可以持续数十年。因此，包括人和兽医用途。
在一些实施方案中，如本文所述的细胞癌症疫苗或相关多核苷酸的使用产生以下结果中的任一种或任何组合，其可以与任何合适的参考进行比较：改善的T细胞的活化，TR-CD4+T细胞增加，改善的CD8+记忆细胞的产生和/或持久性，改善的抗癌抗体的产生，改善的对肿瘤生长的抑制，以及改善的生存时间。在一些实施方案中，本公开内容的疫苗接种阻止肿瘤的形成，或限制现有肿瘤的生长，或根除现有肿瘤。在一些实施方案中，与作为改善的免疫应答的组分的免疫刺激分子相比，通过表达不同免疫刺激分子的癌细胞获得参考。在一些实施方案中，改进了本文所述疫苗改善针对癌细胞再攻击的应答的能力。
编码CIITA和/或共刺激分子的载体可以是任何合适的载体或其它多核苷酸。可以使用一种或多种载体或多核苷酸。在非限制性实施方案中，可以使用逆转录病毒载体。图1提供了合适的载体的非限制性实施方案。在一些实施方案中，编码或设计为一旦整合就编码CIITA的序列在载体中单独使用。在一些实施方案中，编码或设计为一旦整合就编码共刺激分子的序列在载体中单独使用。在一些实施方案中，单个载体编码或被设计为编码CIITA和共刺激分子二者。因此，在一些实施方案中，本公开内容包括多顺反子载体。在一些实施方案中，CIITA和编码共刺激分子的序列被例如内部核糖体进入序列(IRES)分开。
在一些实施方案中，癌细胞疫苗或编码本文所述蛋白质的多核苷酸与常规化学疗法、放射疗法或其它免疫疗法同时或相继使用，或者在诸如肿瘤切除的外科手术干预之前或之后使用。在一些实施方案中，癌细胞疫苗或编码由癌细胞疫苗重组表达的蛋白质的多核苷酸以单剂量或多剂量使用。在一些实施方案中，仅一次或每周、每月、每3个月、每6个月、每年或以预定的年间隔提供癌症疫苗。
本文所述的癌细胞疫苗可以使用任何合适的途径施用于需要其的个体，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，所施用的癌细胞的量包括有效剂量。在一些实施方案中，有效剂量包含足以产生本文所述的一种或多种作用的细胞，所述作用包括有效抑制癌症生长和/或产生抗癌记忆应答的任何细胞介导的应答或体液应答或其组合。在一些实施方案中，引入104至109个经修饰癌细胞。在一些实施方案中，用作疫苗的本公开内容的癌细胞组合物包含如本文所述修饰的分离的细胞，其中所有或一些癌细胞被修饰。在一些实施方案中，本公开内容包括包含细胞的组合物，其中1-100％的细胞是经修饰癌细胞。在一些实施方案中，本公开内容提供了包含癌细胞的组合物，其中1-100％的癌细胞是经修饰癌细胞。本领域技术人员将认识到，癌细胞形态的保留是与经修饰癌细胞表型有关的解决方案。在一些实施方案中，经修饰癌细胞可以包含在药物组合物中。通过与任何合适的药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂组合，可以将本公开内容的经修饰癌细胞和/或多核苷酸提供在药物组合物中。药学上可接受的载体、赋形剂和稳定剂的实例可在Remington:The Science andPractice of Pharmacy(2005)第21版,Philadelphia,PA.Lippincott Williams&Wilkins中找到，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，可以将本文所述的用于制备细胞疫苗制剂的一种或多种重组多核苷酸或其它治疗性多核苷酸用作递送至个体的试剂，并且因此，多核苷酸本身可以包含治疗剂。在一些实施方案中，根据本公开内容的递送至个体的组合物可以是无细胞的组合物。在一些实施方案中，可以使用经修饰癌细胞和不在细胞中的多核苷酸的组合。
在一些实施方案中，如果用于本公开内容的方法的治疗剂是多核苷酸，则其可以以裸多核苷酸、与递送试剂组合或作为包含和/或表达多核苷酸试剂的重组质粒或病毒载体施用于个体。在一个实施方案中，所述蛋白质由重组溶瘤病毒编码，所述重组溶瘤病毒可以特异性地靶向癌细胞，并且其可以对非癌细胞是无感染性的和/或如果溶瘤病毒进入非癌细胞则其可以从非癌细胞中消除。可以与本公开内容一起使用的重组溶瘤病毒的实例包括但不限于重组痘苗病毒(rOVV)。在一些实施方案中，本文所述的一种或多种多核苷酸可通过经修饰病毒递送，所述经修饰病毒包含被癌细胞优先或排他地表达的一种或多种配体靶向并因此特异性结合的经修饰病毒衣壳或其它蛋白质。在一些实施方案中，可以使用编码不同的本文所述蛋白质的单独的多核苷酸。在一些实施方案中，本文所述的一种或多种多核苷酸可被直接注射入肿瘤。
如果需要，可以将本公开内容的多核苷酸治疗剂与递送剂组合。用于施用的合适的递送试剂包括但不限于Mirus Transit TKO亲脂性试剂；lipofectin；lipofectamine；cellfectin；或聚阳离子(例如聚赖氨酸)、脂质体或其组合。
如本文所述的对癌症的治疗或抑制可以与任何其它抗癌方法例如手术干预和常规化学治疗剂组合。在一些实施方案中，根据本公开内容的癌症治疗可以与一种或多种免疫检查点抑制剂的施用组合。在一些实施方案中，检查点抑制剂包括抗程序性细胞死亡蛋白1(抗PD-1)检查点抑制剂或抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(抗CTLA-4)检查点抑制剂。本领域已知许多这样的检查点抑制剂。例如，抗PD-1剂包括派姆单抗(Pembrolizumab)和纳武单抗(Nivolumab)。抗PD-L1的实例是Avelumab。抗CTLA-4的实例是伊匹单抗(Ipilimumab)。
在以下实施例的某些非限制性说明中，使用具有经修饰淋巴瘤、结肠癌细胞、黑素瘤和卵巢癌细胞系的同基因C57BL/6小鼠分析了工程化癌细胞的免疫原性，所有这些均证明了CIITA和4-1BB-L的共表达是刺激有效抗癌应答的有效方法。因此，并且无意于受任何特定理论的束缚，预期本文所述的方法，并且特别是CIITA和4-1BB-L的共表达将广泛适用于多种癌症类型，并且鉴于使用临床上相关的小鼠模型证明本公开内容的各个方面，其在人中将以相同或相似的功效发挥作用。
本公开内容的方面将通过以下实施例进行说明，其旨在说明而非限制本公开内容。
实施例
通过将工程化癌细胞引入同基因C57BL/6小鼠中来研究其免疫原性。
在EL4淋巴瘤模型中，与亲本EL4相比，单独CIITA的过表达并没有改变肿瘤的生长。相比之下，CIITA和免疫刺激分子的共表达显著延迟了肿瘤的生长。特别地，共表达OX40-L+CIITA或4-1BB-L+CIITA的EL4被完全排斥。在此模型中，接受过表达OX40-L+CIITA、4-1BB-L+CIITA、和单独4-1BB-L的EL4的3个组在所有小鼠中显示出完全的肿瘤消除(图2)。
为了评估工程化癌细胞对长期记忆T细胞应答的诱导，将排斥过表达OX40-L+CIITA、4-1BB-L+CIITA、或单独4-1BB-L的EL4的小鼠用亲本EL4再攻击(图3A)。只有一部分排斥过表达单独4-1BB-L或OX40-L+CIITA的EL4的小鼠对再攻击具有抗性(图3B)。相比之下，所有排斥4-1BB-L+CIITA的小鼠均排斥了再攻击的EL4。4-1BB-L-EL4和4-1BB-L+CIITA-EL4在免疫应答的早期诱导了可比较的EL4特异性CD8+T细胞应答(图3D左)。相比之下，与单独4-1BB-L组中的显著下降相比，由4-1BB-L+CIITA诱导的CD8+T细胞维持到了较晚时间点(图3D右)。排斥OX40-L+CIITA的小鼠在较早的时间点出现较少的EL4特异性CD8+T细胞，并且在较晚的时间点进一步下降(图3D左和右)。
为了确定工程化癌细胞是否诱导抗肿瘤抗体，将排斥过表达OX40-L+CIITA、4-1BB-L+CIITA、和单独4-1BB-L的EL4的小鼠用通过CRISPR/Cas9基因编辑进行改造而沉默β2m基因并且因此不表达MHC分子的EL4(MHC丢失EL4)再攻击(图4A)。如图4B所示，所有排斥表达4-1BB+CIITA的EL4的小鼠均对MHC丢失EL4的再攻击具有抗性，而那些排斥表达单独4-1BB-L或OX40-L+CIITA的EL4的小鼠分别没有表现出抗性或表现出部分抗性(图4B)。通过在稀释的血清中孵育亲本EL4并通过荧光抗小鼠IgG抗体检测结合在EL4上的免疫球蛋白(IgG)来测试循环EL4反应性抗体的存在。与表达单独4-1BB-L的EL4相比，表达4-1BB-L+CIITA的EL4诱导显著更高的EL4结合IgG应答。相比之下，表达OX40-L+CIITA的EL4诱导较弱的抗体应答(图4C和4D)。由表达4-1BB-L+CIITA的EL4诱导的抗体对EL4具有特异性，如通过对照活化的鼠T细胞、B16F10黑素瘤和MC38结肠癌未被血清染色证实的。由表达4-1BB-L+CIITA的EL4诱导的抗体诱导针对EL4的补体依赖性细胞毒性(图4F)。
使用治疗性疫苗模型分析了工程化癌细胞的治疗潜力。在此模型中，在C57BL/6小鼠中接种表达MHC I类和MHC-II二者的过表达CIITA的EL4细胞或MHC丢失EL4，并且用经辐射的工程化EL4对小鼠进行疫苗接种(图5A)。用表达4-1BB-L+CIITA的EL4进行治疗性疫苗接种诱导了显著的抗肿瘤作用，包括在2/5的小鼠中完全消除(图5B)。此外，相同的疫苗接种消除了2/7的小鼠中的MHC丢失EL4，并且延长了其余小鼠的生存时间(图5C和5D)。
在其它肿瘤模型中测试了工程化癌细胞的作用。在MC38结肠癌和B16F10黑素瘤两种模型中，表达4-1BB-L+CIITA的癌细胞在所有小鼠中被自发排斥(图6A)，这与针对各个癌症具有特异性的更高循环抗体有关(图6B)。使用鼠卵巢癌细胞系ID8，用经辐射的表达4-1BB-L+CIITA的ID8以及较低程度的表达OX40-L+CIITA的ID8对小鼠的疫苗接种诱导了与亲本ID8结合的抗体(图6C)。
以下代表性的鼠序列被用来说明本公开内容的实施方案。鉴于本公开内容的益处，本领域技术人员将认识到，在鼠序列下方提供的人序列可适用于人癌症疫苗和基于本公开内容的其它治疗方法。
小鼠
在DNA序列中，粗体密码子指示起始或终止密码子。
<CIITA>
>小鼠(Mus musculus)II类主要组织相容性复合物反式激活因子(CIITA)(也称为(“又名”)C2ta；Gm9475；Mhc2ta；EG669998)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_001302618.1)
CIITA蛋白序列(NCBI参考序列：NP_001289547.1)
<4-1BB-L>
>TNFSF9：TNF超家族成员9(又名Ly63l；4-1BBL；Cd137l；4-1BB-L；AI848817)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_009404.3)
4-1BB-L蛋白序列(NCBI参考序列：NP_033430.1)
<OX40-L>
>TNFSF4：TNF超家族成员4(又名Ath1；gp34；Ath-1；Ox40l；TXGP1；CD134L；OX-40L；Tnlg2b；Txgp1l)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_009452.2)
>OX40-L蛋白序列(NCBI参考序列：NP_033478.1)
<GITR-L>
>TNFSF18 TNF超家族成员18(又名Gitrl；Tnlg2a)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_183391.3)
>TNFSF18蛋白序列(NCBI参考序列：NP_899247.3)
<CD80>
>CD80(又名B71；Ly53；TSA1；Cd28l；Ly-53；MIC17)>DNA序列(NCBI参考序列：NM_001359898.1)
>CD80蛋白序列(NCBI参考序列：NP_001346827.1)
<GM-CSF>
>CSF2：集落刺激因子2(又名CSF；Csfgm；GMCSF；Gm-CSf；MGI-IGM)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_009969.4)
>GM-CSF蛋白序列(NCBI参考序列：NP_034099.2)
人
在以下DNA序列中，粗体密码子指示起始或终止密码子。
<CIITA>
>智人II类主要组织相容性复合物反式激活因子(CIITA)(在本领域中也称为C2TA；NLRA；MHC2TA；CIITAIV)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_001286402.1)
/>
/>
>人CIITA蛋白序列(NCBI参考序列：NP_001273331.1)
<4-1BB-L>
>人TNFSF9：TNF超家族成员9(又名CD137L；TNLG5A；4-1BB-L)>DNA序列(NCBI参考序列：NM_003811.3)
>人4-1BB-L蛋白序列(NCBI参考序列：NP_003802.1)
<OX40-L>
>TNFSF4：TNF超家族成员4(又名GP34；CD252；OX4OL；TXGP1；CD134L；OX-40L；TNLG2B)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_003326.4)
>人OX40-L蛋白序列(NCBI参考序列：NP_003317.1)
<GITR-L>
>TNFSF18 TNF超家族成员18(又名TL6；AITRL；GITRL；TNLG2A；hGITRL)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_005092.3)
>人GITR-L蛋白序列(NCBI参考序列：NP_005083.2)
<CD86>
>CD86(又名B70；B7-2；B7.2；LAB72；CD28LG2)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_175862.4)
>人CD86蛋白序列(NCBI参考序列：NP_787058.4)
<GM-CSF>
>CSF2：集落刺激因子2(又名CSF；GMCSF)
>DNA序列(NCBI参考序列：NM_000758.3)
>人GM-CSF蛋白序列(NCBI参考序列：NP_000749.2)
特定实施方案的前述描述是出于说明的目的，而不应被解释为限制性的。根据本发明的教导，本领域技术人员将认识到，可以在不脱离本发明的精神的情况下进行各种修改和改变。
序列表
<110> 健康研究公司（Health Research, Inc.）
<120> 表达II类主要组织相容性复合物的癌细胞疫苗和用于产生整合免疫应答的使用方法
<130> 003551.00812
<140> PCT/US19/42764
<141> 2019-07-22
<150> 62/701,791
<151> 2018-07-22
<160> 24
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3468
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 1
atgaaccact tccaggccat cctggcccaa gtacagacac tgctctccag ccagaagccc 60
aggcaggtgc gggccctcct ggatggcctg ctggaagaag agctgctctc acgggaatac 120
cactgtgcct tgctgcatga gcctgatggt gatgccctgg cccggaagat ttccctgacc 180
ctgctggaga aaggggactt agacttgact ttcttgagct gggtctgcaa cagtctgcag 240
gctcccacgg tagagagggg caccagctac agggaccatg gagaccatag tctgtgtgcc 300
accatggatc tgggatctcc agagggcagc tacctggaac tccttaacag tgatgccgac 360
cccctacatc tctaccacct ctatgaccag atggacctgg ctggggagga ggagatcgaa 420
ctcagctcag agccagacac agataccatc aactgcgacc agttcagcaa gctgttgcag 480
gacatggaac tggatgaaga gacccgggag gcctatgcca acattgcgga actggatcag 540
tacgtgttcc aggataccca gctcgagggc ctgagcaagg acctcttcat agagcacatt 600
ggagcagagg aaggctttgg tgagaacata gagatccctg tagaagcagg acagaagcct 660
cagaagagac gcttcccgga agagcatgct atggactcaa agcacaggaa gctagtgccc 720
acctctagga cctcactgaa ctatttggat ctccccactg ggcacatcca gatcttcacc 780
actctgcccc agggactctg gcaaatctca ggggctggca caggtctctc cagtgtccta 840
atctaccacg gtgagatgcc ccaggtcaac caagtgctcc cttcaagcag cctcagtatc 900
cccagtctcc ccgagtcccc agaccggcct ggctccacca gccccttcac accatctgca 960
gctgacctgc ccagcatgcc cgaacctgcg ctgacctccc gtgtaaatga gacagaggac 1020
acatctccct ccccatgcca agagggtccc gagtcttcca tcaagcttcc aaaatggcca 1080
gaggctgtgg agcgattcca gcactcccta caggacaaat acaaggcatt gccccagagc 1140
ccaaggggtc ctctggtggc cgtggagctg gtacgggcca ggctggaaag aggcagcaac 1200
aagagccagg aaagggagct ggccactccc gactggacag agcgccagct agcccacggt 1260
ggtctggcag aggtacttca ggttgtcagt gactgcaggc gaccaggaga gacacaggtg 1320
gtcgctgtgc tgggcaaggc tggccaggga aagagccact gggccaggac agtgagtcac 1380
acctgggcat gtggccagtt gctacaatat gactttgtct tctatgtccc ctgtcattgc 1440
ttggatcgtc ccggggacac ctaccacctg cgggatctgc tctgtccccc gagcctgcag 1500
ccactggcca tggatgacga ggtccttgat tatatcgtga ggcagccaga ccgtgttctg 1560
ctcatcctag atgctttcga ggagctagag gcccaagatg gcctcctgca cggaccctgt 1620
ggatctctgt ccccagagcc ctgctccctc cgaggactgc tggctgggat cttccagcgg 1680
aagctactgc gaggctgcac actgctcctc acagcccggc cccggggccg cctggctcag 1740
agcctgagca aggcagatgc catctttgag gtgcccagct tctctaccaa gcaggccaag 1800
acttacatga ggcactactt tgagaactca gggacagcgg ggaaccaaga caaggccctg 1860
ggcctcctgg agggccagcc tcttctctgc agctatagtc acagccctgt tgtgtgcagg 1920
gctgtgtgcc agctctccaa ggccctgcta gaacagggca cagaggccca gctaccttgt 1980
acacttacag gactctatgt cagcctgcta ggtcctgcag ctcagaacag tcctcccgga 2040
gccttagtcg agctggccaa gctggcctgg gagctgggac gaagacacca aagcaccttg 2100
caagaaaccc ggttttcatc cgtggaggtg aaaacctggg cagtgaccca aggcttgatg 2160
cagcagaccc tggagaccac ggaggctcaa ctggccttct ccagttttct gctacagtgt 2220
ttcctgggtg ctgtgtggct ggcacagtgc aatgaaatca aagacaagga gctgccacag 2280
tacctggcct tgactccgag gaagaagaga ccctatgaca actggctgga gggtgtacca 2340
cgctttctgg ctggattagt tttccagcct cgagcccact gcctgggagc tctggtggag 2400
cctgcagtgg ctgcagtggc ggataggaaa cagaaggttc ttaccaggta cctgaagcgc 2460
ctgaagctgg ggacactccg ggcagggagg ctgctggagc tgctccactg tgcccacgag 2520
acacagcaac ctgggatatg ggagcatgtt gcacaccagc tccctggcca cctctccttc 2580
ctgggcaccc ggctcacacc cccagatgtg tatgtgctgg gcagggcctt ggagacagcc 2640
agccaggact tctccttgga ccttcgtcag actggcgttg agccttctgg actgggaaac 2700
ctcgtgggac tcagctgtgt caccagtttc agggcctcct tgagtgatac aatggcatta 2760
tgggagtccc ttcagcagca gggagaagcc cagctactcc aggcggcaga ggagaagttc 2820
accattgagc catttaaagc caaatcccca aaggatgtgg aagacctgga tcgtctcgtg 2880
cagacccaga ggctgagaaa cccctcagaa gatgcagcca aggatcttcc tgccatccgg 2940
gaccttaaga agctagagtt tgcgttgggc cccatcttgg gcccccaggc tttccccaca 3000
ctggcaaaga tccttccagc cttctcttct ctgcaacacc tggacctgga ctcacttagt 3060
gagaacaaga tcggagacaa gggtgtgtcg aagctctcag ccaccttccc tcagctgaag 3120
gccctggaga cgctcaactt gtcccaaaac aacatcactg atgtgggtgc ctgcaagctt 3180
gcagaagctc tgccagccct agccaagtcc ctcctaaggc tgagcttgta caataactgc 3240
atctgtgaca aaggagccaa gagcctggca caagtacttc cggacatggt gtccctgcgt 3300
gtgatggatg tccagttcaa caagttcacg gctgccggtg cccagcaact ggcctccagc 3360
cttcagaagt gccctcaggt ggaaacactg gcaatgtgga cacccactat cccctttggg 3420
gttcaggaac acctgcagca gctggatgcc aggatcagtc tgagatga 3468
<210> 2
<211> 1155
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 2
Met Asn His Phe Gln Ala Ile Leu Ala Gln Val Gln Thr Leu Leu Ser
1 5 10 15
Ser Gln Lys Pro Arg Gln Val Arg Ala Leu Leu Asp Gly Leu Leu Glu
20 25 30
Glu Glu Leu Leu Ser Arg Glu Tyr His Cys Ala Leu Leu His Glu Pro
35 40 45
Asp Gly Asp Ala Leu Ala Arg Lys Ile Ser Leu Thr Leu Leu Glu Lys
50 55 60
Gly Asp Leu Asp Leu Thr Phe Leu Ser Trp Val Cys Asn Ser Leu Gln
65 70 75 80
Ala Pro Thr Val Glu Arg Gly Thr Ser Tyr Arg Asp His Gly Asp His
85 90 95
Ser Leu Cys Ala Thr Met Asp Leu Gly Ser Pro Glu Gly Ser Tyr Leu
100 105 110
Glu Leu Leu Asn Ser Asp Ala Asp Pro Leu His Leu Tyr His Leu Tyr
115 120 125
Asp Gln Met Asp Leu Ala Gly Glu Glu Glu Ile Glu Leu Ser Ser Glu
130 135 140
Pro Asp Thr Asp Thr Ile Asn Cys Asp Gln Phe Ser Lys Leu Leu Gln
145 150 155 160
Asp Met Glu Leu Asp Glu Glu Thr Arg Glu Ala Tyr Ala Asn Ile Ala
165 170 175
Glu Leu Asp Gln Tyr Val Phe Gln Asp Thr Gln Leu Glu Gly Leu Ser
180 185 190
Lys Asp Leu Phe Ile Glu His Ile Gly Ala Glu Glu Gly Phe Gly Glu
195 200 205
Asn Ile Glu Ile Pro Val Glu Ala Gly Gln Lys Pro Gln Lys Arg Arg
210 215 220
Phe Pro Glu Glu His Ala Met Asp Ser Lys His Arg Lys Leu Val Pro
225 230 235 240
Thr Ser Arg Thr Ser Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Pro Thr Gly His Ile
245 250 255
Gln Ile Phe Thr Thr Leu Pro Gln Gly Leu Trp Gln Ile Ser Gly Ala
260 265 270
Gly Thr Gly Leu Ser Ser Val Leu Ile Tyr His Gly Glu Met Pro Gln
275 280 285
Val Asn Gln Val Leu Pro Ser Ser Ser Leu Ser Ile Pro Ser Leu Pro
290 295 300
Glu Ser Pro Asp Arg Pro Gly Ser Thr Ser Pro Phe Thr Pro Ser Ala
305 310 315 320
Ala Asp Leu Pro Ser Met Pro Glu Pro Ala Leu Thr Ser Arg Val Asn
325 330 335
Glu Thr Glu Asp Thr Ser Pro Ser Pro Cys Gln Glu Gly Pro Glu Ser
340 345 350
Ser Ile Lys Leu Pro Lys Trp Pro Glu Ala Val Glu Arg Phe Gln His
355 360 365
Ser Leu Gln Asp Lys Tyr Lys Ala Leu Pro Gln Ser Pro Arg Gly Pro
370 375 380
Leu Val Ala Val Glu Leu Val Arg Ala Arg Leu Glu Arg Gly Ser Asn
385 390 395 400
Lys Ser Gln Glu Arg Glu Leu Ala Thr Pro Asp Trp Thr Glu Arg Gln
405 410 415
Leu Ala His Gly Gly Leu Ala Glu Val Leu Gln Val Val Ser Asp Cys
420 425 430
Arg Arg Pro Gly Glu Thr Gln Val Val Ala Val Leu Gly Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Gly Lys Ser His Trp Ala Arg Thr Val Ser His Thr Trp Ala Cys
450 455 460
Gly Gln Leu Leu Gln Tyr Asp Phe Val Phe Tyr Val Pro Cys His Cys
465 470 475 480
Leu Asp Arg Pro Gly Asp Thr Tyr His Leu Arg Asp Leu Leu Cys Pro
485 490 495
Pro Ser Leu Gln Pro Leu Ala Met Asp Asp Glu Val Leu Asp Tyr Ile
500 505 510
Val Arg Gln Pro Asp Arg Val Leu Leu Ile Leu Asp Ala Phe Glu Glu
515 520 525
Leu Glu Ala Gln Asp Gly Leu Leu His Gly Pro Cys Gly Ser Leu Ser
530 535 540
Pro Glu Pro Cys Ser Leu Arg Gly Leu Leu Ala Gly Ile Phe Gln Arg
545 550 555 560
Lys Leu Leu Arg Gly Cys Thr Leu Leu Leu Thr Ala Arg Pro Arg Gly
565 570 575
Arg Leu Ala Gln Ser Leu Ser Lys Ala Asp Ala Ile Phe Glu Val Pro
580 585 590
Ser Phe Ser Thr Lys Gln Ala Lys Thr Tyr Met Arg His Tyr Phe Glu
595 600 605
Asn Ser Gly Thr Ala Gly Asn Gln Asp Lys Ala Leu Gly Leu Leu Glu
610 615 620
Gly Gln Pro Leu Leu Cys Ser Tyr Ser His Ser Pro Val Val Cys Arg
625 630 635 640
Ala Val Cys Gln Leu Ser Lys Ala Leu Leu Glu Gln Gly Thr Glu Ala
645 650 655
Gln Leu Pro Cys Thr Leu Thr Gly Leu Tyr Val Ser Leu Leu Gly Pro
660 665 670
Ala Ala Gln Asn Ser Pro Pro Gly Ala Leu Val Glu Leu Ala Lys Leu
675 680 685
Ala Trp Glu Leu Gly Arg Arg His Gln Ser Thr Leu Gln Glu Thr Arg
690 695 700
Phe Ser Ser Val Glu Val Lys Thr Trp Ala Val Thr Gln Gly Leu Met
705 710 715 720
Gln Gln Thr Leu Glu Thr Thr Glu Ala Gln Leu Ala Phe Ser Ser Phe
725 730 735
Leu Leu Gln Cys Phe Leu Gly Ala Val Trp Leu Ala Gln Cys Asn Glu
740 745 750
Ile Lys Asp Lys Glu Leu Pro Gln Tyr Leu Ala Leu Thr Pro Arg Lys
755 760 765
Lys Arg Pro Tyr Asp Asn Trp Leu Glu Gly Val Pro Arg Phe Leu Ala
770 775 780
Gly Leu Val Phe Gln Pro Arg Ala His Cys Leu Gly Ala Leu Val Glu
785 790 795 800
Pro Ala Val Ala Ala Val Ala Asp Arg Lys Gln Lys Val Leu Thr Arg
805 810 815
Tyr Leu Lys Arg Leu Lys Leu Gly Thr Leu Arg Ala Gly Arg Leu Leu
820 825 830
Glu Leu Leu His Cys Ala His Glu Thr Gln Gln Pro Gly Ile Trp Glu
835 840 845
His Val Ala His Gln Leu Pro Gly His Leu Ser Phe Leu Gly Thr Arg
850 855 860
Leu Thr Pro Pro Asp Val Tyr Val Leu Gly Arg Ala Leu Glu Thr Ala
865 870 875 880
Ser Gln Asp Phe Ser Leu Asp Leu Arg Gln Thr Gly Val Glu Pro Ser
885 890 895
Gly Leu Gly Asn Leu Val Gly Leu Ser Cys Val Thr Ser Phe Arg Ala
900 905 910
Ser Leu Ser Asp Thr Met Ala Leu Trp Glu Ser Leu Gln Gln Gln Gly
915 920 925
Glu Ala Gln Leu Leu Gln Ala Ala Glu Glu Lys Phe Thr Ile Glu Pro
930 935 940
Phe Lys Ala Lys Ser Pro Lys Asp Val Glu Asp Leu Asp Arg Leu Val
945 950 955 960
Gln Thr Gln Arg Leu Arg Asn Pro Ser Glu Asp Ala Ala Lys Asp Leu
965 970 975
Pro Ala Ile Arg Asp Leu Lys Lys Leu Glu Phe Ala Leu Gly Pro Ile
980 985 990
Leu Gly Pro Gln Ala Phe Pro Thr Leu Ala Lys Ile Leu Pro Ala Phe
995 1000 1005
Ser Ser Leu Gln His Leu Asp Leu Asp Ser Leu Ser Glu Asn Lys
1010 1015 1020
Ile Gly Asp Lys Gly Val Ser Lys Leu Ser Ala Thr Phe Pro Gln
1025 1030 1035
Leu Lys Ala Leu Glu Thr Leu Asn Leu Ser Gln Asn Asn Ile Thr
1040 1045 1050
Asp Val Gly Ala Cys Lys Leu Ala Glu Ala Leu Pro Ala Leu Ala
1055 1060 1065
Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser Leu Tyr Asn Asn Cys Ile Cys Asp
1070 1075 1080
Lys Gly Ala Lys Ser Leu Ala Gln Val Leu Pro Asp Met Val Ser
1085 1090 1095
Leu Arg Val Met Asp Val Gln Phe Asn Lys Phe Thr Ala Ala Gly
1100 1105 1110
Ala Gln Gln Leu Ala Ser Ser Leu Gln Lys Cys Pro Gln Val Glu
1115 1120 1125
Thr Leu Ala Met Trp Thr Pro Thr Ile Pro Phe Gly Val Gln Glu
1130 1135 1140
His Leu Gln Gln Leu Asp Ala Arg Ile Ser Leu Arg
1145 1150 1155
<210> 3
<211> 930
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 3
atggaccagc acacacttga tgtggaggat accgcggatg ccagacatcc agcaggtact 60
tcgtgcccct cggatgcggc gctcctcaga gataccgggc tcctcgcgga cgctgcgctc 120
ctctcagata ctgtgcgccc cacaaatgcc gcgctcccca cggatgctgc ctaccctgcg 180
gttaatgttc gggatcgcga ggccgcgtgg ccgcctgcac tgaacttctg ttcccgccac 240
ccaaagctct atggcctagt cgctttggtt ttgctgcttc tgatcgccgc ctgtgttcct 300
atcttcaccc gcaccgagcc tcggccagcg ctcacaatca ccacctcgcc caacctgggt 360
acccgagaga ataatgcaga ccaggtcacc cctgtttccc acattggctg ccccaacact 420
acacaacagg gctctcctgt gttcgccaag ctactggcta aaaaccaagc atcgttgtgc 480
aatacaactc tgaactggca cagccaagat ggagctggga gctcatacct atctcaaggt 540
ctgaggtacg aagaagacaa aaaggagttg gtggtagaca gtcccgggct ctactacgta 600
tttttggaac tgaagctcag tccaacattc acaaacacag gccacaaggt gcagggctgg 660
gtctctcttg ttttgcaagc aaagcctcag gtagatgact ttgacaactt ggccctgaca 720
gtggaactgt tcccttgctc catggagaac aagttagtgg accgttcctg gagtcaactg 780
ttgctcctga aggctggcca ccgcctcagt gtgggtctga gggcttatct gcatggagcc 840
caggatgcat acagagactg ggagctgtct tatcccaaca ccaccagctt tggactcttt 900
cttgtgaaac ccgacaaccc atgggaatga 930
<210> 4
<211> 309
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 4
Met Asp Gln His Thr Leu Asp Val Glu Asp Thr Ala Asp Ala Arg His
1 5 10 15
Pro Ala Gly Thr Ser Cys Pro Ser Asp Ala Ala Leu Leu Arg Asp Thr
20 25 30
Gly Leu Leu Ala Asp Ala Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Arg Pro Thr
35 40 45
Asn Ala Ala Leu Pro Thr Asp Ala Ala Tyr Pro Ala Val Asn Val Arg
50 55 60
Asp Arg Glu Ala Ala Trp Pro Pro Ala Leu Asn Phe Cys Ser Arg His
65 70 75 80
Pro Lys Leu Tyr Gly Leu Val Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Ile Ala
85 90 95
Ala Cys Val Pro Ile Phe Thr Arg Thr Glu Pro Arg Pro Ala Leu Thr
100 105 110
Ile Thr Thr Ser Pro Asn Leu Gly Thr Arg Glu Asn Asn Ala Asp Gln
115 120 125
Val Thr Pro Val Ser His Ile Gly Cys Pro Asn Thr Thr Gln Gln Gly
130 135 140
Ser Pro Val Phe Ala Lys Leu Leu Ala Lys Asn Gln Ala Ser Leu Cys
145 150 155 160
Asn Thr Thr Leu Asn Trp His Ser Gln Asp Gly Ala Gly Ser Ser Tyr
165 170 175
Leu Ser Gln Gly Leu Arg Tyr Glu Glu Asp Lys Lys Glu Leu Val Val
180 185 190
Asp Ser Pro Gly Leu Tyr Tyr Val Phe Leu Glu Leu Lys Leu Ser Pro
195 200 205
Thr Phe Thr Asn Thr Gly His Lys Val Gln Gly Trp Val Ser Leu Val
210 215 220
Leu Gln Ala Lys Pro Gln Val Asp Asp Phe Asp Asn Leu Ala Leu Thr
225 230 235 240
Val Glu Leu Phe Pro Cys Ser Met Glu Asn Lys Leu Val Asp Arg Ser
245 250 255
Trp Ser Gln Leu Leu Leu Leu Lys Ala Gly His Arg Leu Ser Val Gly
260 265 270
Leu Arg Ala Tyr Leu His Gly Ala Gln Asp Ala Tyr Arg Asp Trp Glu
275 280 285
Leu Ser Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Phe Gly Leu Phe Leu Val Lys Pro
290 295 300
Asp Asn Pro Trp Glu
305
<210> 5
<211> 597
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 5
atggaagggg aaggggttca acccctggat gagaatctgg aaaacggatc aaggccaaga 60
ttcaagtgga agaagacgct aaggctggtg gtctctggga tcaagggagc agggatgctt 120
ctgtgcttca tctatgtctg cctgcaactc tcttcctctc cggcaaagga ccctccaatc 180
caaagactca gaggagcagt taccagatgt gaggatgggc aactattcat cagctcatac 240
aagaatgagt atcaaactat ggaggtgcag aacaattcgg ttgtcatcaa gtgcgatggg 300
ctttatatca tctacctgaa gggctccttt ttccaggagg tcaagattga ccttcatttc 360
cgggaggatc ataatcccat ctctattcca atgctgaacg atggtcgaag gattgtcttc 420
actgtggtgg cctctttggc tttcaaagat aaagtttacc tgactgtaaa tgctcctgat 480
actctctgcg aacacctcca gataaatgat ggggagctga ttgttgtcca gctaacgcct 540
ggatactgtg ctcctgaagg atcttaccac agcactgtga accaagtacc actgtga 597
<210> 6
<211> 198
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 6
Met Glu Gly Glu Gly Val Gln Pro Leu Asp Glu Asn Leu Glu Asn Gly
1 5 10 15
Ser Arg Pro Arg Phe Lys Trp Lys Lys Thr Leu Arg Leu Val Val Ser
20 25 30
Gly Ile Lys Gly Ala Gly Met Leu Leu Cys Phe Ile Tyr Val Cys Leu
35 40 45
Gln Leu Ser Ser Ser Pro Ala Lys Asp Pro Pro Ile Gln Arg Leu Arg
50 55 60
Gly Ala Val Thr Arg Cys Glu Asp Gly Gln Leu Phe Ile Ser Ser Tyr
65 70 75 80
Lys Asn Glu Tyr Gln Thr Met Glu Val Gln Asn Asn Ser Val Val Ile
85 90 95
Lys Cys Asp Gly Leu Tyr Ile Ile Tyr Leu Lys Gly Ser Phe Phe Gln
100 105 110
Glu Val Lys Ile Asp Leu His Phe Arg Glu Asp His Asn Pro Ile Ser
115 120 125
Ile Pro Met Leu Asn Asp Gly Arg Arg Ile Val Phe Thr Val Val Ala
130 135 140
Ser Leu Ala Phe Lys Asp Lys Val Tyr Leu Thr Val Asn Ala Pro Asp
145 150 155 160
Thr Leu Cys Glu His Leu Gln Ile Asn Asp Gly Glu Leu Ile Val Val
165 170 175
Gln Leu Thr Pro Gly Tyr Cys Ala Pro Glu Gly Ser Tyr His Ser Thr
180 185 190
Val Asn Gln Val Pro Leu
195
<210> 7
<211> 522
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 7
atggaggaaa tgcctttgag agaatcaagt cctcaaaggg cagagaggtg caagaagtca 60
tggctcttgt gcatagtggc tctgttactg atgttgctct gttctttggg tacactgatc 120
tatacttcac tcaagccaac tgccatcgag tcctgcatgg ttaagtttga actatcatcc 180
tcaaaatggc acatgacatc tcccaaacct cactgtgtga atacgacatc tgatgggaag 240
ctgaagatac tgcagagtgg cacatattta atctacggcc aagtgattcc tgtggataag 300
aaatacataa aagacaatgc ccccttcgta gtacagatat ataaaaagaa tgatgtccta 360
caaactctaa tgaatgattt tcaaatcttg cctataggag gggtttatga actgcatgct 420
ggagataaca tatatctgaa gttcaactct aaagaccata ttcagaaaac taacacatac 480
tgggggatca tcttaatgcc tgatctacca ttcatctctt ag 522
<210> 8
<211> 173
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 8
Met Glu Glu Met Pro Leu Arg Glu Ser Ser Pro Gln Arg Ala Glu Arg
1 5 10 15
Cys Lys Lys Ser Trp Leu Leu Cys Ile Val Ala Leu Leu Leu Met Leu
20 25 30
Leu Cys Ser Leu Gly Thr Leu Ile Tyr Thr Ser Leu Lys Pro Thr Ala
35 40 45
Ile Glu Ser Cys Met Val Lys Phe Glu Leu Ser Ser Ser Lys Trp His
50 55 60
Met Thr Ser Pro Lys Pro His Cys Val Asn Thr Thr Ser Asp Gly Lys
65 70 75 80
Leu Lys Ile Leu Gln Ser Gly Thr Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ile
85 90 95
Pro Val Asp Lys Lys Tyr Ile Lys Asp Asn Ala Pro Phe Val Val Gln
100 105 110
Ile Tyr Lys Lys Asn Asp Val Leu Gln Thr Leu Met Asn Asp Phe Gln
115 120 125
Ile Leu Pro Ile Gly Gly Val Tyr Glu Leu His Ala Gly Asp Asn Ile
130 135 140
Tyr Leu Lys Phe Asn Ser Lys Asp His Ile Gln Lys Thr Asn Thr Tyr
145 150 155 160
Trp Gly Ile Ile Leu Met Pro Asp Leu Pro Phe Ile Ser
165 170
<210> 9
<211> 921
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 9
atggcttgca attgtcagtt gatgcaggat acaccactcc tcaagtttcc atgtccaagg 60
ctcattcttc tctttgtgct gctgattcgt ctttcacaag tgtcttcaga tgttgatgaa 120
caactgtcca agtcagtgaa agataaggta ttgctgcctt gccgttacaa ctctcctcat 180
gaagatgagt ctgaagaccg aatctactgg caaaaacatg acaaagtggt gctgtctgtc 240
attgctggga aactaaaagt gtggcccgag tataagaacc ggactttata tgacaacact 300
acctactctc ttatcatcct gggcctggtc ctttcagacc ggggcacata cagctgtgtc 360
gttcaaaaga aggaaagagg aacgtatgaa gttaaacact tggctttagt aaagttgtcc 420
atcaaagctg acttctctac ccccaacata actgagtctg gaaacccatc tgcagacact 480
aaaaggatta cctgctttgc ttccgggggt ttcccaaagc ctcgcttctc ttggttggaa 540
aatggaagag aattacctgg catcaatacg acaatttccc aggatcctga atctgaattg 600
tacaccatta gtagccaact agatttcaat acgactcgca accacaccat taagtgtctc 660
attaaatatg gagatgctca cgtgtcagag gacttcacct gggaaaaacc cccagaagac 720
cctcctgata gcaagaacac acttgtgctc tttggggcag gattcggcgc agtaataaca 780
gtcgtcgtca tcgttgtcat catcaaatgc ttctgtaagc acagaagctg tttcagaaga 840
aatgaggcaa gcagagaaac aaacaacagc cttaccttcg ggcctgaaga agcattagct 900
gaacagaccg tcttccttta g 921
<210> 10
<211> 306
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 10
Met Ala Cys Asn Cys Gln Leu Met Gln Asp Thr Pro Leu Leu Lys Phe
1 5 10 15
Pro Cys Pro Arg Leu Ile Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser
20 25 30
Gln Val Ser Ser Asp Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Val Lys Asp
35 40 45
Lys Val Leu Leu Pro Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His Glu Asp Glu Ser
50 55 60
Glu Asp Arg Ile Tyr Trp Gln Lys His Asp Lys Val Val Leu Ser Val
65 70 75 80
Ile Ala Gly Lys Leu Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Leu
85 90 95
Tyr Asp Asn Thr Thr Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly Leu Val Leu Ser
100 105 110
Asp Arg Gly Thr Tyr Ser Cys Val Val Gln Lys Lys Glu Arg Gly Thr
115 120 125
Tyr Glu Val Lys His Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser Ile Lys Ala Asp
130 135 140
Phe Ser Thr Pro Asn Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro Ser Ala Asp Thr
145 150 155 160
Lys Arg Ile Thr Cys Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro Lys Pro Arg Phe
165 170 175
Ser Trp Leu Glu Asn Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile Asn Thr Thr Ile
180 185 190
Ser Gln Asp Pro Glu Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser Ser Gln Leu Asp
195 200 205
Phe Asn Thr Thr Arg Asn His Thr Ile Lys Cys Leu Ile Lys Tyr Gly
210 215 220
Asp Ala His Val Ser Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys Pro Pro Glu Asp
225 230 235 240
Pro Pro Asp Ser Lys Asn Thr Leu Val Leu Phe Gly Ala Gly Phe Gly
245 250 255
Ala Val Ile Thr Val Val Val Ile Val Val Ile Ile Lys Cys Phe Cys
260 265 270
Lys His Arg Ser Cys Phe Arg Arg Asn Glu Ala Ser Arg Glu Thr Asn
275 280 285
Asn Ser Leu Thr Phe Gly Pro Glu Glu Ala Leu Ala Glu Gln Thr Val
290 295 300
Phe Leu
305
<210> 11
<211> 426
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 11
atgtggctgc agaatttact tttcctgggc attgtggtct acagcctctc agcacccacc 60
cgctcaccca tcactgtcac ccggccttgg aagcatgtag aggccatcaa agaagccctg 120
aacctcctgg atgacatgcc tgtcacgttg aatgaagagg tagaagtcgt ctctaacgag 180
ttctccttca agaagctaac atgtgtgcag acccgcctga agatattcga gcagggtcta 240
cggggcaatt tcaccaaact caagggcgcc ttgaacatga cagccagcta ctaccagaca 300
tactgccccc caactccgga aacggactgt gaaacacaag ttaccaccta tgcggatttc 360
atagacagcc ttaaaacctt tctgactgat atcccctttg aatgcaaaaa accaggccaa 420
aaatga 426
<210> 12
<211> 141
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 12
Met Trp Leu Gln Asn Leu Leu Phe Leu Gly Ile Val Val Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ala Pro Thr Arg Ser Pro Ile Thr Val Thr Arg Pro Trp Lys His
20 25 30
Val Glu Ala Ile Lys Glu Ala Leu Asn Leu Leu Asp Asp Met Pro Val
35 40 45
Thr Leu Asn Glu Glu Val Glu Val Val Ser Asn Glu Phe Ser Phe Lys
50 55 60
Lys Leu Thr Cys Val Gln Thr Arg Leu Lys Ile Phe Glu Gln Gly Leu
65 70 75 80
Arg Gly Asn Phe Thr Lys Leu Lys Gly Ala Leu Asn Met Thr Ala Ser
85 90 95
Tyr Tyr Gln Thr Tyr Cys Pro Pro Thr Pro Glu Thr Asp Cys Glu Thr
100 105 110
Gln Val Thr Thr Tyr Ala Asp Phe Ile Asp Ser Leu Lys Thr Phe Leu
115 120 125
Thr Asp Ile Pro Phe Glu Cys Lys Lys Pro Gly Gln Lys
130 135 140
<210> 13
<211> 3396
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 13
atgcgttgcc tggctccacg ccctgctggg tcctacctgt cagagcccca aggcagctca 60
cagtgtgcca ccatggagtt ggggccccta gaaggtggct acctggagct tcttaacagc 120
gatgctgacc ccctgtgcct ctaccacttc tatgaccaga tggacctggc tggagaagaa 180
gagattgagc tctactcaga acccgacaca gacaccatca actgcgacca gttcagcagg 240
ctgttgtgtg acatggaagg tgatgaagag accagggagg cttatgccaa tatcgcggaa 300
ctggaccagt atgtcttcca ggactcccag ctggagggcc tgagcaagga cattttcata 360
gagcacatag gaccagatga agtgatcggt gagagtatgg agatgccagc agaagttggg 420
cagaaaagtc agaaaagacc cttcccagag gagcttccgg cagacctgaa gcactggaag 480
ccagctgagc cccccactgt ggtgactggc agtctcctag tgggaccagt gagcgactgc 540
tccaccctgc cctgcctgcc actgcctgcg ctgttcaacc aggagccagc ctccggccag 600
atgcgcctgg agaaaaccga ccagattccc atgcctttct ccagttcctc gttgagctgc 660
ctgaatctcc ctgagggacc catccagttt gtccccacca tctccactct gccccatggg 720
ctctggcaaa tctctgaggc tggaacaggg gtctccagta tattcatcta ccatggtgag 780
gtgccccagg ccagccaagt accccctccc agtggattca ctgtccacgg cctcccaaca 840
tctccagacc ggccaggctc caccagcccc ttcgctccat cagccactga cctgcccagc 900
atgcctgaac ctgccctgac ctcccgagca aacatgacag agcacaagac gtcccccacc 960
caatgcccgg cagctggaga ggtctccaac aagcttccaa aatggcctga gccggtggag 1020
cagttctacc gctcactgca ggacacgtat ggtgccgagc ccgcaggccc ggatggcatc 1080
ctagtggagg tggatctggt gcaggccagg ctggagagga gcagcagcaa gagcctggag 1140
cgggaactgg ccaccccgga ctgggcagaa cggcagctgg cccaaggagg cctggctgag 1200
gtgctgttgg ctgccaagga gcaccggcgg ccgcgtgaga cacgagtgat tgctgtgctg 1260
ggcaaagctg gtcagggcaa gagctattgg gctggggcag tgagccgggc ctgggcttgt 1320
ggccggcttc cccagtacga ctttgtcttc tctgtcccct gccattgctt gaaccgtccg 1380
ggggatgcct atggcctgca ggatctgctc ttctccctgg gcccacagcc actcgtggcg 1440
gccgatgagg ttttcagcca catcttgaag agacctgacc gcgttctgct catcctagac 1500
ggcttcgagg agctggaagc gcaagatggc ttcctgcaca gcacgtgcgg accggcaccg 1560
gcggagccct gctccctccg ggggctgctg gccggccttt tccagaagaa gctgctccga 1620
ggttgcaccc tcctcctcac agcccggccc cggggccgcc tggtccagag cctgagcaag 1680
gccgacgccc tatttgagct gtccggcttc tccatggagc aggcccaggc atacgtgatg 1740
cgctactttg agagctcagg gatgacagag caccaagaca gagccctgac gctcctccgg 1800
gaccggccac ttcttctcag tcacagccac agccctactt tgtgccgggc agtgtgccag 1860
ctctcagagg ccctgctgga gcttggggag gacgccaagc tgccctccac gctcacggga 1920
ctctatgtcg gcctgctggg ccgtgcagcc ctcgacagcc cccccggggc cctggcagag 1980
ctggccaagc tggcctggga gctgggccgc agacatcaaa gtaccctaca ggaggaccag 2040
ttcccatccg cagacgtgag gacctgggcg atggccaaag gcttagtcca acacccaccg 2100
cgggccgcag agtccgagct ggccttcccc agcttcctcc tgcaatgctt cctgggggcc 2160
ctgtggctgg ctctgagtgg cgaaatcaag gacaaggagc tcccgcagta cctagcattg 2220
accccaagga agaagaggcc ctatgacaac tggctggagg gcgtgccacg ctttctggct 2280
gggctgatct tccagcctcc cgcccgctgc ctgggagccc tactcgggcc atcggcggct 2340
gcctcggtgg acaggaagca gaaggtgctt gcgaggtacc tgaagcggct gcagccgggg 2400
acactgcggg cgcggcagct gctggagctg ctgcactgcg cccacgaggc cgaggaggct 2460
ggaatttggc agcacgtggt acaggagctc cccggccgcc tctcttttct gggcacccgc 2520
ctcacgcctc ctgatgcaca tgtactgggc aaggccttgg aggcggcggg ccaagacttc 2580
tccctggacc tccgcagcac tggcatttgc ccctctggat tggggagcct cgtgggactc 2640
agctgtgtca cccgtttcag ggctgccttg agcgacacgg tggcgctgtg ggagtccctg 2700
cagcagcatg gggagaccaa gctacttcag gcagcagagg agaagttcac catcgagcct 2760
ttcaaagcca agtccctgaa ggatgtggaa gacctgggaa agcttgtgca gactcagagg 2820
acgagaagtt cctcggaaga cacagctggg gagctccctg ctgttcggga cctaaagaaa 2880
ctggagtttg cgctgggccc tgtctcaggc ccccaggctt tccccaaact ggtgcggatc 2940
ctcacggcct tttcctccct gcagcatctg gacctggatg cgctgagtga gaacaagatc 3000
ggggacgagg gtgtctcgca gctctcagcc accttccccc agctgaagtc cttggaaacc 3060
ctcaatctgt cccagaacaa catcactgac ctgggtgcct acaaactcgc cgaggccctg 3120
ccttcgctcg ctgcatccct gctcaggcta agcttgtaca ataactgcat ctgcgacgtg 3180
ggagccgaga gcttggctcg tgtgcttccg gacatggtgt ccctccgggt gatggacgtc 3240
cagtacaaca agttcacggc tgccggggcc cagcagctcg ctgccagcct tcggaggtgt 3300
cctcatgtgg agacgctggc gatgtggacg cccaccatcc cattcagtgt ccaggaacac 3360
ctgcaacaac aggattcacg gatcagcctg agatga 3396
<210> 14
<211> 1131
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 14
Met Arg Cys Leu Ala Pro Arg Pro Ala Gly Ser Tyr Leu Ser Glu Pro
1 5 10 15
Gln Gly Ser Ser Gln Cys Ala Thr Met Glu Leu Gly Pro Leu Glu Gly
20 25 30
Gly Tyr Leu Glu Leu Leu Asn Ser Asp Ala Asp Pro Leu Cys Leu Tyr
35 40 45
His Phe Tyr Asp Gln Met Asp Leu Ala Gly Glu Glu Glu Ile Glu Leu
50 55 60
Tyr Ser Glu Pro Asp Thr Asp Thr Ile Asn Cys Asp Gln Phe Ser Arg
65 70 75 80
Leu Leu Cys Asp Met Glu Gly Asp Glu Glu Thr Arg Glu Ala Tyr Ala
85 90 95
Asn Ile Ala Glu Leu Asp Gln Tyr Val Phe Gln Asp Ser Gln Leu Glu
100 105 110
Gly Leu Ser Lys Asp Ile Phe Ile Glu His Ile Gly Pro Asp Glu Val
115 120 125
Ile Gly Glu Ser Met Glu Met Pro Ala Glu Val Gly Gln Lys Ser Gln
130 135 140
Lys Arg Pro Phe Pro Glu Glu Leu Pro Ala Asp Leu Lys His Trp Lys
145 150 155 160
Pro Ala Glu Pro Pro Thr Val Val Thr Gly Ser Leu Leu Val Gly Pro
165 170 175
Val Ser Asp Cys Ser Thr Leu Pro Cys Leu Pro Leu Pro Ala Leu Phe
180 185 190
Asn Gln Glu Pro Ala Ser Gly Gln Met Arg Leu Glu Lys Thr Asp Gln
195 200 205
Ile Pro Met Pro Phe Ser Ser Ser Ser Leu Ser Cys Leu Asn Leu Pro
210 215 220
Glu Gly Pro Ile Gln Phe Val Pro Thr Ile Ser Thr Leu Pro His Gly
225 230 235 240
Leu Trp Gln Ile Ser Glu Ala Gly Thr Gly Val Ser Ser Ile Phe Ile
245 250 255
Tyr His Gly Glu Val Pro Gln Ala Ser Gln Val Pro Pro Pro Ser Gly
260 265 270
Phe Thr Val His Gly Leu Pro Thr Ser Pro Asp Arg Pro Gly Ser Thr
275 280 285
Ser Pro Phe Ala Pro Ser Ala Thr Asp Leu Pro Ser Met Pro Glu Pro
290 295 300
Ala Leu Thr Ser Arg Ala Asn Met Thr Glu His Lys Thr Ser Pro Thr
305 310 315 320
Gln Cys Pro Ala Ala Gly Glu Val Ser Asn Lys Leu Pro Lys Trp Pro
325 330 335
Glu Pro Val Glu Gln Phe Tyr Arg Ser Leu Gln Asp Thr Tyr Gly Ala
340 345 350
Glu Pro Ala Gly Pro Asp Gly Ile Leu Val Glu Val Asp Leu Val Gln
355 360 365
Ala Arg Leu Glu Arg Ser Ser Ser Lys Ser Leu Glu Arg Glu Leu Ala
370 375 380
Thr Pro Asp Trp Ala Glu Arg Gln Leu Ala Gln Gly Gly Leu Ala Glu
385 390 395 400
Val Leu Leu Ala Ala Lys Glu His Arg Arg Pro Arg Glu Thr Arg Val
405 410 415
Ile Ala Val Leu Gly Lys Ala Gly Gln Gly Lys Ser Tyr Trp Ala Gly
420 425 430
Ala Val Ser Arg Ala Trp Ala Cys Gly Arg Leu Pro Gln Tyr Asp Phe
435 440 445
Val Phe Ser Val Pro Cys His Cys Leu Asn Arg Pro Gly Asp Ala Tyr
450 455 460
Gly Leu Gln Asp Leu Leu Phe Ser Leu Gly Pro Gln Pro Leu Val Ala
465 470 475 480
Ala Asp Glu Val Phe Ser His Ile Leu Lys Arg Pro Asp Arg Val Leu
485 490 495
Leu Ile Leu Asp Gly Phe Glu Glu Leu Glu Ala Gln Asp Gly Phe Leu
500 505 510
His Ser Thr Cys Gly Pro Ala Pro Ala Glu Pro Cys Ser Leu Arg Gly
515 520 525
Leu Leu Ala Gly Leu Phe Gln Lys Lys Leu Leu Arg Gly Cys Thr Leu
530 535 540
Leu Leu Thr Ala Arg Pro Arg Gly Arg Leu Val Gln Ser Leu Ser Lys
545 550 555 560
Ala Asp Ala Leu Phe Glu Leu Ser Gly Phe Ser Met Glu Gln Ala Gln
565 570 575
Ala Tyr Val Met Arg Tyr Phe Glu Ser Ser Gly Met Thr Glu His Gln
580 585 590
Asp Arg Ala Leu Thr Leu Leu Arg Asp Arg Pro Leu Leu Leu Ser His
595 600 605
Ser His Ser Pro Thr Leu Cys Arg Ala Val Cys Gln Leu Ser Glu Ala
610 615 620
Leu Leu Glu Leu Gly Glu Asp Ala Lys Leu Pro Ser Thr Leu Thr Gly
625 630 635 640
Leu Tyr Val Gly Leu Leu Gly Arg Ala Ala Leu Asp Ser Pro Pro Gly
645 650 655
Ala Leu Ala Glu Leu Ala Lys Leu Ala Trp Glu Leu Gly Arg Arg His
660 665 670
Gln Ser Thr Leu Gln Glu Asp Gln Phe Pro Ser Ala Asp Val Arg Thr
675 680 685
Trp Ala Met Ala Lys Gly Leu Val Gln His Pro Pro Arg Ala Ala Glu
690 695 700
Ser Glu Leu Ala Phe Pro Ser Phe Leu Leu Gln Cys Phe Leu Gly Ala
705 710 715 720
Leu Trp Leu Ala Leu Ser Gly Glu Ile Lys Asp Lys Glu Leu Pro Gln
725 730 735
Tyr Leu Ala Leu Thr Pro Arg Lys Lys Arg Pro Tyr Asp Asn Trp Leu
740 745 750
Glu Gly Val Pro Arg Phe Leu Ala Gly Leu Ile Phe Gln Pro Pro Ala
755 760 765
Arg Cys Leu Gly Ala Leu Leu Gly Pro Ser Ala Ala Ala Ser Val Asp
770 775 780
Arg Lys Gln Lys Val Leu Ala Arg Tyr Leu Lys Arg Leu Gln Pro Gly
785 790 795 800
Thr Leu Arg Ala Arg Gln Leu Leu Glu Leu Leu His Cys Ala His Glu
805 810 815
Ala Glu Glu Ala Gly Ile Trp Gln His Val Val Gln Glu Leu Pro Gly
820 825 830
Arg Leu Ser Phe Leu Gly Thr Arg Leu Thr Pro Pro Asp Ala His Val
835 840 845
Leu Gly Lys Ala Leu Glu Ala Ala Gly Gln Asp Phe Ser Leu Asp Leu
850 855 860
Arg Ser Thr Gly Ile Cys Pro Ser Gly Leu Gly Ser Leu Val Gly Leu
865 870 875 880
Ser Cys Val Thr Arg Phe Arg Ala Ala Leu Ser Asp Thr Val Ala Leu
885 890 895
Trp Glu Ser Leu Gln Gln His Gly Glu Thr Lys Leu Leu Gln Ala Ala
900 905 910
Glu Glu Lys Phe Thr Ile Glu Pro Phe Lys Ala Lys Ser Leu Lys Asp
915 920 925
Val Glu Asp Leu Gly Lys Leu Val Gln Thr Gln Arg Thr Arg Ser Ser
930 935 940
Ser Glu Asp Thr Ala Gly Glu Leu Pro Ala Val Arg Asp Leu Lys Lys
945 950 955 960
Leu Glu Phe Ala Leu Gly Pro Val Ser Gly Pro Gln Ala Phe Pro Lys
965 970 975
Leu Val Arg Ile Leu Thr Ala Phe Ser Ser Leu Gln His Leu Asp Leu
980 985 990
Asp Ala Leu Ser Glu Asn Lys Ile Gly Asp Glu Gly Val Ser Gln Leu
995 1000 1005
Ser Ala Thr Phe Pro Gln Leu Lys Ser Leu Glu Thr Leu Asn Leu
1010 1015 1020
Ser Gln Asn Asn Ile Thr Asp Leu Gly Ala Tyr Lys Leu Ala Glu
1025 1030 1035
Ala Leu Pro Ser Leu Ala Ala Ser Leu Leu Arg Leu Ser Leu Tyr
1040 1045 1050
Asn Asn Cys Ile Cys Asp Val Gly Ala Glu Ser Leu Ala Arg Val
1055 1060 1065
Leu Pro Asp Met Val Ser Leu Arg Val Met Asp Val Gln Tyr Asn
1070 1075 1080
Lys Phe Thr Ala Ala Gly Ala Gln Gln Leu Ala Ala Ser Leu Arg
1085 1090 1095
Arg Cys Pro His Val Glu Thr Leu Ala Met Trp Thr Pro Thr Ile
1100 1105 1110
Pro Phe Ser Val Gln Glu His Leu Gln Gln Gln Asp Ser Arg Ile
1115 1120 1125
Ser Leu Arg
1130
<210> 15
<211> 765
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 15
atggaatacg cctctgacgc ttcactggac cccgaagccc cgtggcctcc cgcgccccgc 60
gctcgcgcct gccgcgtact gccttgggcc ctggtcgcgg ggctgctgct gctgctgctg 120
ctcgctgccg cctgcgccgt cttcctcgcc tgcccctggg ccgtgtccgg ggctcgcgcc 180
tcgcccggct ccgcggccag cccgagactc cgcgagggtc ccgagctttc gcccgacgat 240
cccgccggcc tcttggacct gcggcagggc atgtttgcgc agctggtggc ccaaaatgtt 300
ctgctgatcg atgggcccct gagctggtac agtgacccag gcctggcagg cgtgtccctg 360
acggggggcc tgagctacaa agaggacacg aaggagctgg tggtggccaa ggctggagtc 420
tactatgtct tctttcaact agagctgcgg cgcgtggtgg ccggcgaggg ctcaggctcc 480
gtttcacttg cgctgcacct gcagccactg cgctctgctg ctggggccgc cgccctggct 540
ttgaccgtgg acctgccacc cgcctcctcc gaggctcgga actcggcctt cggtttccag 600
ggccgcttgc tgcacctgag tgccggccag cgcctgggcg tccatcttca cactgaggcc 660
agggcacgcc atgcctggca gcttacccag ggcgccacag tcttgggact cttccgggtg 720
acccccgaaa tcccagccgg actcccttca ccgaggtcgg aataa 765
<210> 16
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 16
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 17
<211> 552
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 17
atggaaaggg tccaacccct ggaagagaat gtgggaaatg cagccaggcc aagattcgag 60
aggaacaagc tattgctggt ggcctctgta attcagggac tggggctgct cctgtgcttc 120
acctacatct gcctgcactt ctctgctctt caggtatcac atcggtatcc tcgaattcaa 180
agtatcaaag tacaatttac cgaatataag aaggagaaag gtttcatcct cacttcccaa 240
aaggaggatg aaatcatgaa ggtgcagaac aactcagtca tcatcaactg tgatgggttt 300
tatctcatct ccctgaaggg ctacttctcc caggaagtca acattagcct tcattaccag 360
aaggatgagg agcccctctt ccaactgaag aaggtcaggt ctgtcaactc cttgatggtg 420
gcctctctga cttacaaaga caaagtctac ttgaatgtga ccactgacaa tacctccctg 480
gatgacttcc atgtgaatgg cggagaactg attcttatcc atcaaaatcc tggtgaattc 540
tgtgtccttt ga 552
<210> 18
<211> 183
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 18
Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg
1 5 10 15
Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln
20 25 30
Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser
35 40 45
Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val
50 55 60
Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln
65 70 75 80
Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn
85 90 95
Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu
100 105 110
Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln
115 120 125
Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr
130 135 140
Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu
145 150 155 160
Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn
165 170 175
Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
180
<210> 19
<211> 600
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 19
atgacattgc atccttcacc catcacttgt gaatttttgt tttccacagc tctcatttct 60
ccaaaaatgt gtttgagcca cttggaaaat atgcctttaa gccattcaag aactcaagga 120
gctcagagat catcctggaa gctgtggctc ttttgctcaa tagttatgtt gctatttctt 180
tgctccttca gttggctaat ctttattttt ctccaattag agactgctaa ggagccctgt 240
atggctaagt ttggaccatt accctcaaaa tggcaaatgg catcttctga acctccttgc 300
gtgaataagg tgtctgactg gaagctggag atacttcaga atggcttata tttaatttat 360
ggccaagtgg ctcccaatgc aaactacaat gatgtagctc cttttgaggt gcggctgtat 420
aaaaacaaag acatgataca aactctaaca aacaaatcta aaatccaaaa tgtaggaggg 480
acttatgaat tgcatgttgg ggacaccata gacttgatat tcaactctga gcatcaggtt 540
ctaaaaaata atacatactg gggtatcatt ttactagcaa atccccaatt catctcctag 600
<210> 20
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 20
Met Thr Leu His Pro Ser Pro Ile Thr Cys Glu Phe Leu Phe Ser Thr
1 5 10 15
Ala Leu Ile Ser Pro Lys Met Cys Leu Ser His Leu Glu Asn Met Pro
20 25 30
Leu Ser His Ser Arg Thr Gln Gly Ala Gln Arg Ser Ser Trp Lys Leu
35 40 45
Trp Leu Phe Cys Ser Ile Val Met Leu Leu Phe Leu Cys Ser Phe Ser
50 55 60
Trp Leu Ile Phe Ile Phe Leu Gln Leu Glu Thr Ala Lys Glu Pro Cys
65 70 75 80
Met Ala Lys Phe Gly Pro Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser
85 90 95
Glu Pro Pro Cys Val Asn Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu
100 105 110
Gln Asn Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn
115 120 125
Tyr Asn Asp Val Ala Pro Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp
130 135 140
Met Ile Gln Thr Leu Thr Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly
145 150 155 160
Thr Tyr Glu Leu His Val Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser
165 170 175
Glu His Gln Val Leu Lys Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu
180 185 190
Ala Asn Pro Gln Phe Ile Ser
195
<210> 21
<211> 990
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
atggatcccc agtgcactat gggactgagt aacattctct ttgtgatggc cttcctgctc 60
tctggtgctg ctcctctgaa gattcaagct tatttcaatg agactgcaga cctgccatgc 120
caatttgcaa actctcaaaa ccaaagcctg agtgagctag tagtattttg gcaggaccag 180
gaaaacttgg ttctgaatga ggtatactta ggcaaagaga aatttgacag tgttcattcc 240
aagtatatgg gccgcacaag ttttgattcg gacagttgga ccctgagact tcacaatctt 300
cagatcaagg acaagggctt gtatcaatgt atcatccatc acaaaaagcc cacaggaatg 360
attcgcatcc accagatgaa ttctgaactg tcagtgcttg ctaacttcag tcaacctgaa 420
atagtaccaa tttctaatat aacagaaaat gtgtacataa atttgacctg ctcatctata 480
cacggttacc cagaacctaa gaagatgagt gttttgctaa gaaccaagaa ttcaactatc 540
gagtatgatg gtattatgca gaaatctcaa gataatgtca cagaactgta cgacgtttcc 600
atcagcttgt ctgtttcatt ccctgatgtt acgagcaata tgaccatctt ctgtattctg 660
gaaactgaca agacgcggct tttatcttca cctttctcta tagagcttga ggaccctcag 720
cctcccccag accacattcc ttggattaca gctgtacttc caacagttat tatatgtgtg 780
atggttttct gtctaattct atggaaatgg aagaagaaga agcggcctcg caactcttat 840
aaatgtggaa ccaacacaat ggagagggaa gagagtgaac agaccaagaa aagagaaaaa 900
atccatatac ctgaaagatc tgatgaagcc cagcgtgttt ttaaaagttc gaagacatct 960
tcatgcgaca aaagtgatac atgtttttaa 990
<210> 22
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 22
Met Asp Pro Gln Cys Thr Met Gly Leu Ser Asn Ile Leu Phe Val Met
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ser Gly Ala Ala Pro Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe
20 25 30
Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln
35 40 45
Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val
50 55 60
Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val His Ser
65 70 75 80
Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg
85 90 95
Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile
100 105 110
His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln Met Asn Ser
115 120 125
Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile
130 135 140
Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile
145 150 155 160
His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Ile Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn
180 185 190
Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro
195 200 205
Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys
210 215 220
Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln
225 230 235 240
Pro Pro Pro Asp His Ile Pro Trp Ile Thr Ala Val Leu Pro Thr Val
245 250 255
Ile Ile Cys Val Met Val Phe Cys Leu Ile Leu Trp Lys Trp Lys Lys
260 265 270
Lys Lys Arg Pro Arg Asn Ser Tyr Lys Cys Gly Thr Asn Thr Met Glu
275 280 285
Arg Glu Glu Ser Glu Gln Thr Lys Lys Arg Glu Lys Ile His Ile Pro
290 295 300
Glu Arg Ser Asp Glu Ala Gln Arg Val Phe Lys Ser Ser Lys Thr Ser
305 310 315 320
Ser Cys Asp Lys Ser Asp Thr Cys Phe
325
<210> 23
<211> 435
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 23
atgtggctgc agagcctgct gctcttgggc actgtggcct gcagcatctc tgcacccgcc 60
cgctcgccca gccccagcac gcagccctgg gagcatgtga atgccatcca ggaggcccgg 120
cgtctcctga acctgagtag agacactgct gctgagatga atgaaacagt agaagtcatc 180
tcagaaatgt ttgacctcca ggagccgacc tgcctacaga cccgcctgga gctgtacaag 240
cagggcctgc ggggcagcct caccaagctc aagggcccct tgaccatgat ggccagccac 300
tacaagcagc actgccctcc aaccccggaa acttcctgtg caacccagat tatcaccttt 360
gaaagtttca aagagaacct gaaggacttt ctgcttgtca tcccctttga ctgctgggag 420
ccagtccagg agtga 435
<210> 24
<211> 144
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 24
Met Trp Leu Gln Ser Leu Leu Leu Leu Gly Thr Val Ala Cys Ser Ile
1 5 10 15
Ser Ala Pro Ala Arg Ser Pro Ser Pro Ser Thr Gln Pro Trp Glu His
20 25 30
Val Asn Ala Ile Gln Glu Ala Arg Arg Leu Leu Asn Leu Ser Arg Asp
35 40 45
Thr Ala Ala Glu Met Asn Glu Thr Val Glu Val Ile Ser Glu Met Phe
50 55 60
Asp Leu Gln Glu Pro Thr Cys Leu Gln Thr Arg Leu Glu Leu Tyr Lys
65 70 75 80
Gln Gly Leu Arg Gly Ser Leu Thr Lys Leu Lys Gly Pro Leu Thr Met
85 90 95
Met Ala Ser His Tyr Lys Gln His Cys Pro Pro Thr Pro Glu Thr Ser
100 105 110
Cys Ala Thr Gln Ile Ile Thr Phe Glu Ser Phe Lys Glu Asn Leu Lys
115 120 125
Asp Phe Leu Leu Val Ile Pro Phe Asp Cys Trp Glu Pro Val Gln Glu
130 135 140

Claims (5)

1.经修饰癌细胞，所述经修饰癌细胞是经过修饰而共表达II类反式激活因子(CIITA)和免疫刺激分子，其中所述免疫刺激分子为4-1BB-配体。
2.药物组合物，包含权利要求1所述的经修饰癌细胞。
3.细胞系，包含权利要求1所述的经修饰癌细胞。
4.一种制备用于癌症疫苗的经修饰癌细胞的方法，所述方法包括将导致II类反式激活因子(CIITA)和免疫刺激分子表达的一种或多种多核苷酸引入癌细胞中，其中所述免疫刺激分子为4-1BB-配体。
5.如权利要求1所述的经修饰癌细胞在制备癌症疫苗中的用途，其中所述癌症疫苗用于在个体中刺激针对一种或多种癌症抗原的免疫应答，包括：
i)将所述经修饰癌细胞引入所述个体中，从而刺激针对由癌细胞表达的一种或多种抗原的免疫应答；或
ii)将编码II类反式激活因子(CIITA)和免疫刺激分子4-1BB-配体的一种或多种多核苷酸引入所述个体中的癌细胞中以在所述个体中产生所述经修饰癌细胞，其中所述经修饰癌细胞从所述一种或多种多核苷酸表达所述CITTA和所述免疫刺激分子，并且其中刺激针对由所述经修饰癌细胞表达的一种或多种抗原的免疫应答，
并且其中由所述经修饰癌细胞刺激的所述免疫应答包括与所述经修饰癌细胞相同癌症类型的癌细胞上的细胞表面分子的细胞毒性抗体的产生。
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