CN112899276A - 迷你启动子pHSP90AA1及其应用 - Google Patents

迷你启动子pHSP90AA1及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112899276A
CN112899276A CN202110141764.2A CN202110141764A CN112899276A CN 112899276 A CN112899276 A CN 112899276A CN 202110141764 A CN202110141764 A CN 202110141764A CN 112899276 A CN112899276 A CN 112899276A
Authority
CN
China
Prior art keywords
phsp90aa1
recombinant adeno
associated virus
phsp90aa
promoter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110141764.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112899276B (zh
Inventor
王静怡
林剑邦
郑琼萍
陈思杨
朱钰媛
张建情
徐冬冬
李梦奇
柏艳阳
路中华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Enji Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS filed Critical Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority to CN202110141764.2A priority Critical patent/CN112899276B/zh
Publication of CN112899276A publication Critical patent/CN112899276A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112899276B publication Critical patent/CN112899276B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/34—Vector systems having a special element relevant for transcription being a transcription initiation element
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种迷你启动子pHSP90AA1及其应用，所述迷你启动子pHSP90AA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述迷你启动子pHSP90AA1能应用在重组腺相关病毒中，使外源基因得以在包含应激相关核团在内的中枢神经系统神经元中高效表达，在神经环路示踪领域和基因治疗领域具有广泛的应用前景。

Description

迷你启动子pHSP90AA1及其应用
技术领域
本发明属于神经工程技术领域，具体涉及一种迷你启动子pHSP90AA1及其应用。
背景技术
应激反应是指生物体受到外界有害刺激或接收到危险信号时所产生的一系列的非特异性应答反应，是机体协同多个系统共同应对不利环境，维持自身稳态的过程。其对生物体规避应激源对机体的损害和保持机体的稳态起着至关重要的作用。但长期或者过度的应激反应也会干扰各个系统的正常运作，对机体造成很多伤害。其中，和应激密切相关的精神疾病包括创伤后应激综合征(PTSD)、焦虑、抑郁和药物成瘾等。因此，解析机体调控应激反应的大脑神经环路机制，从而寻找干预机体产生过度应激反应的靶点显得十分必要和迫切。然而，目前尚没有对应激相关神经环路高效标记的病毒工具，阻碍了对应激引起的情绪及能量平衡改变背后的大脑神经环路作用机制的研究。
目前，在生命科学研究领域，嗜神经病毒是解析神经环路结构和功能的主要工具。在所有嗜神经病毒工具中最常用的病毒工具是腺相关病毒(AAV)，其中重组腺相关病毒(rAAV)是在野生型AAV基础上改造而成的重组型病毒。由于rAAV具有免疫原性低、滴度高、感染谱广、表达时间长等优点，是生命科学研究和基因治疗等实践应用的最重要的工具之一。
但是，rAAV也具有一些限制性。首先，rAAV的包装容量相对较小(5kb)，这是它的主要限制之一。因此，更小的启动子的发展才能使得更大基因组的传递成为可能。其次，对于神经科学研究而言，解析不同行为学表现背后的神经学机制，需要高效率标记并调控特定脑区或核团的特异性神经元。对于神经系统疾病的基因治疗而言，干预不同的神经系统疾病，同样需要对全脑不同脑区或核团的不同亚型的神经元进行操纵。目前，最主要的方法是选择不同血清型的rAAV。目前已有的报道中，适用于神经系统的AAV血清型有：1型、2型、5型、6型、8型、9型、DJ、PHP.B、PHP.eB、PHP.S、Retro、rh10等十几种。然而，由于中枢神经系统的复杂性，这些血清型远无法满足高时空特异性的需求。因此，开发不同类型的组织特异性启动子，并在rAAV中使用特异性启动子来驱动基因表达，使得基因高时空、高效率的递送成为可能。
发明内容
为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种在中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)中高效表达的迷你启动子pHSP90AA1及其应用。所述迷你启动子pHSP90AA1能适用在重组腺相关病毒中，使外源基因得以在中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)中高效表达，在神经环路示踪领域和基因治疗领域具有广泛的应用前景。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一方面，本发明提供了一种迷你启动子pHSP90AA1，所述迷你启动子pHSP90AA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
进一步地，启动子pHSP90AA1是编码热休克蛋白HSP 90-alpha的HSP90AA1基因的部分序列，所述序列选取了HSP90AA1基因的转录起始位点附近-80到+40共121bp的序列。
进一步地，所述迷你启动子pHSP90AA1在中枢神经系统神经元中高效表达。
进一步地，所述中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元。
另一方面，本发明提供了一种重组腺相关病毒载体，包括上述所述的迷你启动子pHSP90AA1。
进一步地，所述重组腺相关病毒载体包括pAAV-pHSP90AA1-荧光蛋白、pAAV-pHSP90AA1-功能性蛋白或pAAV-pHSP90AA1-治疗性蛋白。
进一步地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述功能性蛋白包括光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
pAAV-pHSP90AA1-荧光蛋白(荧光蛋白包括eYFP、tdTomato)可以实现神经环路多种荧光颜色示踪。pAAV-pHSP90AA1-功能性蛋白(所述功能性蛋白包括光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白)可以制得激活或者抑制特定神经元的重组腺相关病毒。pAAV-pHSP90AA1-治疗性蛋白可以应用于基因治疗。
进一步地，所述重组腺相关病毒载体pAAV-pHSP90AA1-eYFP采用pAAV-hSyn-eYFP作为骨架载体，向该载体中替换hSyn为pHSP90AA1启动子，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pHSP90AA1-eYFP。
进一步地，所述重组腺相关病毒载体pAA-pHSP90AA1-eYFP的制备方法包括以下步骤：将启动子pHSP90AA1克隆于pUC-57载体得到pUC57-pHSP90AA1载体；采用限制性内切酶xbalI-HF和kpnI-HF处理pAAV-hSyn-eYFP载体，同时用限制性内切酶xbalI-HF和kpnI-HF处理pUC57-pHSP90AA1载体；对两种酶切产物进行回收、纯化、连接，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pHSP90AA1-eYFP。
另一方面，本发明提供了一种重组腺相关病毒，包括上述任一所述的重组腺相关病毒载体。
进一步地，所述重组腺相关病毒包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-荧光蛋白、AAV-PHP.B-pHSP90AA1-功能性蛋白或AAV-PHP.B-pHSP90AA1-治疗性蛋白；
优选地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述功能性蛋白包括光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
重组腺相关病毒AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP、AAV-PHP.B-pHSP90AA1-tdTomato可以有效跨越血脑屏障标记中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)，并表达高荧光强度的eYFP或tdTomato。
再一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括上述所述的迷你启动子pPHSP90AA1、上述任一所述的重组腺相关病毒载体或上述任一所述的重组腺相关病毒。
再一方面，本发明提供了一种上述所述的迷你启动子pPHSP90AA1、上述任一所述的重组腺相关病毒载体、上述任一所述的重组腺相关病毒或上述所述的试剂盒在制备神经环路示踪和/或操控神经细胞和/或基因治疗试剂中的应用。
再一方面，本发明提供了一种神经网络示踪剂，包括pAAV-pHSP90AA1-荧光蛋白和/或包括pAAV-pHSP90AA1-荧光蛋白的重组腺相关病毒；
优选地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述重组腺相关病毒包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP、AAV-PHP.B-pHSP90AA1-tdTomato。
再一方面，本发明提供了一种上述所述的神经网络示踪剂在中枢神经系统神经元示踪中的应用。
进一步地，所述中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明启动子pHSP90AA1为迷你启动子，仅有121bp，可以有效的提高重组腺相关病毒的包装容量。
(2)本发明迷你启动子pHSP90AA1，在中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)具有高效表达效率，可以实现外源基因高效表达，其在神经环路示踪，基因治疗领域具有广泛的应用前景；
(3)本发明迷你启动子pHSP90AA1在细菌和哺乳动物细胞中无细胞毒性；
(4)本发明重组腺相关病毒载体采用pHSP90AA1作为启动子，在中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)中具有高效表达效率；
(5)本发明重组腺相关病毒在大脑中可以高效地跨越血脑屏障标记中枢神经系统神经元，标记效率高，感染能力强。
附图说明
图1是本发明pAAV-pHSP90AA1-eYFP载体的构造流程图；
图2是本发明AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP跨越血脑屏障在中枢神经系统中的表达效率图。
图3是本发明AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP跨越血脑屏障在应激相关脑区中的表达效率图。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1构建pUC57-pHSP90AA1载体
pHSP90AA1启动子是编码热休克蛋白HSP 90-alpha的HSP90AA1基因的部分序列，所述序列选取了HSP90AA1基因的转录起始位点附近共121bp的序列，所述启动子pHSP90AA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
将所述启动子pHSP90AA1经过人工合成后克隆于pUC-57载体得到pUC57-pHSP90AA1载体。
实施例2构建重组腺相关病毒载体pAAV-pHSP90AA1-eYFP
本实施例由于采用eYFP作为启动子的报告基因，因此在构造重组载体时，选用了含有eYFP基因的重组腺相关载体pAAV-hSyn-eYFP作为载体骨架来连接pHSP90AA1启动子，步骤如下：
如图1所示，采用限制性内切酶xbalI-HF和kpnI-HF处理pAAV-hSyn-eYFP载体，同时用限制性内切酶xbalI-HF和kpnI-HF处理pUC57-pHSP90AA1载体，37℃下酶切3h，酶切体系如表1和表2所示，回收酶切产物后采用链接预混液(2×ligation premix，TAKARA)在16℃下进行连接30min，体系如表3所示，得到连接成功的pAAV-pHSP90AA1-eYFP载体。
表1pAAV-hSyn-eYFP载体酶切体系
试剂 用量
酶切缓冲液10×CutSmart Buffer 5μL
MluI-HF 1μL
KpnI-HF 1μL
pAAV-hSyn-eYFP 1μg
ddH<sub>2</sub>O 补齐至50μL
表2pUC57-pHSP90AA1载体酶切体系
试剂 用量
酶切缓冲液10×CutSmart Buffer 5μL
MluI-HF 1μL
KpnI-HF 1μL
pUC57-pHSP90AA1 1μg
ddH<sub>2</sub>O 补齐至50μL
表3连接体系
试剂 用量
连接预混液2×ligation premix 5μL
pAAV-eYFP连接骨架 0.5μL
pHSP90AA1连接片段 4.5μL
实施例3重组腺相关病毒AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP的制备
本实例采用三质粒共转染法制备病毒。病毒制备前，需要将包装病毒所需质粒进行中提，包括重组腺相关病毒载体pAAV-pHSP90AA1-eYFP、包装质粒AAV-PHP.B-RCB和辅助质粒。具体步骤如下：
制备细胞：将293T细胞铺在含有全培养基(10％胎牛血清、1％双抗)培养皿中，于培养箱中培养。
制备转染试剂：吸取5.25mL的超纯水、75μg包装质粒、75μg重组质粒、75μg辅助质粒和800μL的氯化钙溶液，轻轻混匀。向前述试剂中，加入等体积2×HBS，涡旋后静置30min。
转染细胞：向每盘细胞加20μL氯奎，加入转染试剂后培养。
收取病毒：72h后将前述转染后的细胞收集于离心管以3000rpm离心30min。弃上清后加入细胞裂解液，随后用反复冻融法裂解细胞。得到含有病毒的细胞破碎液。
纯化病毒：将上述细胞破碎液以11500rpm离心30min，弃上清后加入200μL HBS混匀，加入200μL氯仿以12100rpm离心5min，取上清，加入100μL 2.5mM NaCl和100μL 40％PEG8000，涡旋混匀，4℃冰箱过夜。将前述过夜样品以12100rpm离心30min，弃上清，加入30μL的HBS、0.5μL核酸酶，静置30min。随后加入30μL氯仿，以12100rpm离心5min。纯化完成后于-80℃冰箱保存。
测定滴度：用AAV滴度测定染料法荧光定量试剂盒(TAKARA公司)对前述纯化病毒进行滴度测定，滴度结果为2.86×1012VG/mL。
实施例4重组腺相关病毒跨越血脑屏障标记小鼠中枢神经系统神经元、应激相关脑区神经元
将纯化后的重组腺相关病毒，注射至小鼠右侧脑室(AP:+0.02mm,ML:+0.8mm,D/V:-2.4mm)。所述重组腺相关病毒衣壳是AAV-PHP.B，具有跨越血脑屏障能力，能够感染中枢神经系统神经元(中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元)。三周后灌流取脑，随后进行4％PFA后固定及30％蔗糖溶液脱水，待脑组织完全脱水后进行冰冻切片和免疫荧光染色，并观察脑片结果。实验结果如图2和图3所示，eYFP在小鼠中枢神经系统神经元、应激相关脑区神经元中均有很高的表达效率。
综上，本发明在小鼠上进行验证，证明迷你启动子pHSP90AA1在中枢神经系统神经元、应激相关脑区神经元中具有高效表达水平。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，不是全部的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院深圳先进技术研究院
<120> 迷你启动子pHSP90AA1及其应用
<130> CP121010014C
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 121
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggttcgggag gcttctggaa aaagcgccgc gcgctgggcg ggcccgtcgc tatataaggc 60
aggcgcgggg gtggcgcgtc agttgcttca gcgtcccggt gtggctgtgc cgttggtcct 120
g 121

Claims (10)

1.一种迷你启动子pHSP90AA1，其特征在于，所述迷你启动子pHSP90AA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的迷你启动子pHSP90AA1，其特征在于，所述迷你启动子pHSP90AA1在中枢神经系统神经元中高效表达；优选地，所述中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元。
3.一种重组腺相关病毒载体，其特征在于，包括权利要求1或2所述的迷你启动子pHSP90AA1。
4.根据权利要求3所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体包括pAAV-pHSP90AA1-荧光蛋白、pAAV-pHSP90AA1-功能性蛋白或pAAV-pHSP90AA1-治疗性蛋白；
优选地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述功能性蛋白包括光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
5.一种重组腺相关病毒，其特征在于，包括权利要求3或4所述的重组腺相关病毒载体。
6.根据权利要求5所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-荧光蛋白、AAV-PHP.B-pHSP90AA1-功能性蛋白或AAV-PHP.B-pHSP90AA1-治疗性蛋白；
优选地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述功能性蛋白包括光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
7.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的迷你启动子pHSP90AA1、权利要求3-4任一项所述的重组腺相关病毒载体或权利要求5-6任一项所述的重组腺相关病毒。
8.权利要求1-2任一项所述的迷你启动子pHSP90AA1、权利要求3-4任一项所述的重组腺相关病毒载体、权利要求5-6任一项所述的重组腺相关病毒或权利要求7所述的试剂盒在制备神经环路示踪和/或操控神经细胞和/或基因治疗试剂中的应用。
9.一种神经网络示踪剂，其特征在于，包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-荧光蛋白和/或包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-荧光蛋白的重组腺相关病毒；
优选地，所述荧光蛋白包括eYFP、tdTomato；
优选地，所述重组腺相关病毒包括AAV-PHP.B-pHSP90AA1-eYFP、AAV-PHP.B-pHSP90AA1-tdTomato。
10.权利要求9所述的神经网络示踪剂在中枢神经系统神经元示踪中的应用；优选地，所述中枢神经系统神经元包括应激相关脑区神经元。
CN202110141764.2A 2021-02-02 2021-02-02 迷你启动子pHSP90AA1及其应用 Active CN112899276B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110141764.2A CN112899276B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 迷你启动子pHSP90AA1及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110141764.2A CN112899276B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 迷你启动子pHSP90AA1及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112899276A true CN112899276A (zh) 2021-06-04
CN112899276B CN112899276B (zh) 2023-06-16

Family

ID=76121389

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110141764.2A Active CN112899276B (zh) 2021-02-02 2021-02-02 迷你启动子pHSP90AA1及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112899276B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113652427A (zh) * 2021-08-20 2021-11-16 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
CN113667671A (zh) * 2021-08-20 2021-11-19 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pRTN1及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GENBANK: "Homo sapiens epididymis luminal secretory protein 52 (EL52) mRNA, complete cds", 《GENBANK》 *
MILLER, D. J.等: "Heat Shock Proteins Regulatory Role in Neurodevelopment", 《FRONTIERS IN NEUROENCE》 *
李嘉敏: "AAV神经环路示踪病毒的改造和应用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113652427A (zh) * 2021-08-20 2021-11-16 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
CN113667671A (zh) * 2021-08-20 2021-11-19 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pRTN1及其应用
CN113652427B (zh) * 2021-08-20 2023-08-29 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
CN113667671B (zh) * 2021-08-20 2023-08-29 深圳市恩辑生物科技有限公司 一种迷你启动子pRTN1及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112899276B (zh) 2023-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7465583B2 (en) Duplexed parvovirus vectors
CN108603174A (zh) 在适用于临床应用的无血清悬浮细胞培养体系中产生重组腺相关病毒(aav)载体的可扩展方法
CN112725342B (zh) 一种启动子pCALM2及其应用
CN102741405A (zh) 提高基因表达的系统和保持有该系统的载体
CN107058634A (zh) 鸭腺病毒2型和鸭腺病毒a型双重pcr检测引物及试剂盒
CN112899276A (zh) 迷你启动子pHSP90AA1及其应用
CN112680443B (zh) 一种启动子pCalm1及其应用
CN108004216B (zh) Tspo在治疗脑胶质瘤中的应用及重组单纯疱疹病毒及其制备方法和应用
JP2023011736A (ja) 核酸封入ａａｖ中空粒子
CN104178514B (zh) 一种提高AcMNPV多角体内部外源蛋白含量的方法
Ning et al. Generation of recombinant Orf virus using an enhanced green fluorescent protein reporter gene as a selectable marker
CN109456995A (zh) 基因敲除质粒、细胞系及制备方法和应用
CN112695032B (zh) 一种启动子pLRRK2及其应用
Mahmood et al. Human cytomegalovirus plasmid-based amplicon vector system for gene therapy
Dvoracek et al. Construction of a novel set of transfer vectors to study vaccinia virus replication and foreign gene expression
US20210292787A1 (en) Pseudotyped insect baculovirus gene transfer system and pseudotyped baculovirus for shrimps, construction method and use thereof
CN113667671B (zh) 一种迷你启动子pRTN1及其应用
EP3792367A1 (en) Method for the production of raav and method for the in vitro generation of genetically engineered, linear, single-stranded nucleic acid fragments containing itr sequences flanking a gene of interest
CN113584032B (zh) 一种迷你启动子pAPP及其应用
CN113652427B (zh) 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
WO2023283749A1 (zh) 一种迷你启动子pCALM1及其应用
CN109504679A (zh) 用于基因在禽类骨骼肌中特异性表达的启动子以及应用
CN111100847A (zh) 安全性更高的端粒基因治疗产品使人体健康逆转衰老
WO2023102735A1 (zh) 一种特异性靶向星形胶质细胞的重组腺相关病毒及其应用
CN111228292B (zh) 人tpt1/tctp基因在制备抗肿瘤药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210926

Address after: 518055 Shenzhen integrated circuit design and application Industrial Park, south of chaguang Road, Shuguang community, Xili street, Nanshan District, Shenzhen, Guangdong 312

Applicant after: Shenzhen Enji Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 1068 No. 518055 Guangdong city of Shenzhen province Nanshan District Shenzhen University city academy Avenue

Applicant before: SHENZHEN INSTITUTES OF ADVANCED TECHNOLOGY CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant