CN113652427A - 一种迷你启动子pATP1B1及其应用 - Google Patents

一种迷你启动子pATP1B1及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113652427A
CN113652427A CN202110962272.XA CN202110962272A CN113652427A CN 113652427 A CN113652427 A CN 113652427A CN 202110962272 A CN202110962272 A CN 202110962272A CN 113652427 A CN113652427 A CN 113652427A
Authority
CN
China
Prior art keywords
patp1b1
recombinant adeno
promoter
associated virus
paav
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110962272.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113652427B (zh
Inventor
路中华
王静怡
李田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Enji Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Enji Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Enji Biotechnology Co ltd filed Critical Shenzhen Enji Biotechnology Co ltd
Priority to CN202110962272.XA priority Critical patent/CN113652427B/zh
Publication of CN113652427A publication Critical patent/CN113652427A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113652427B publication Critical patent/CN113652427B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y306/00—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6)
    • C12Y306/01—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6) in phosphorus-containing anhydrides (3.6.1)
    • C12Y306/01003—Adenosine triphosphatase (3.6.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明属于神经工程技术领域，具体涉及一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pATP1B1。本发明提供了一种迷你启动子pATP1B1及其应用，所述启动子pATP1B1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明另一方面提供了应用该启动子pATP1B1在重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒、重组腺相关病毒的试剂盒、基因治疗载体中，以及在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。本发明提供的迷你启动子pATP1B1使外源基因得以在全脑范围内的神经元中高效表达，在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。

Description

一种迷你启动子pATP1B1及其应用
技术领域
本发明属于神经工程技术领域，具体涉及一种迷你启动子pATP1B1及其应用。
背景技术
腺相关病毒(AAV)是一种无包膜的单链DNA病毒。重组腺相关病毒(rAAV)是在野生型AAV基础上改造而成的重组型病毒。重组腺相关病毒由于其具有能介导基因在哺乳动物体内长期稳定表达、免疫原性低、宿主范围广等优点，是神经科学领域中和临床神经系统疾病基因治疗中广泛使用的基因递送载体。
在应用rAAV于神经科学研究及临床治疗的过程中，提高目的基因表达的时空特异性和表达水平是基因递送的关键。调控外源基因表达的策略直接影响了基因递送的效率和安全性。对于神经系统疾病的基因治疗而言，若要干预不同的神经系统疾病，就要对全脑或不同亚型的神经元进行操纵。其中一个重要的方法是选择不同血清型的rAAV病毒。目前已有的报道中，适用于神经系统的rAAV血清型包括：1型、2型、5型、6型、8型、9型、DJ、PHP.B、PHP.eB、PHP.S、Retro、rh10等十几种。不同血清型的病毒对不同的脑区具有不同的亲和性、感染效率及扩散能力，因此，我们可以根据研究对象及治疗靶点，选择不同的rAAV血清型作为基因递送载体。然而，鉴于中枢神经系统的复杂性，这些血清型远远无法满足当前基因递送特异性的需求。另一种方法是在rAAV基因组中应用组织特异性的启动子。启动子是基因表达调控过程中必要的顺式作用元件。在具有表达特异性启动子的调控下，外源基因一般只在某些特定的细胞类型或脑区中表达。在rAAV中使用特异性启动子来驱动基因表达，能提供基因表达的效率，降低rAAV感染过程中产生的免疫反应。
rAAV是递送治疗性基因元件至中枢神经系统的可靠病毒载体，但有两个重要因素阻碍了其在基因治疗策略中的开发应用。首先，rAAV的最大包装容量为5.2kb，极大限制了大的治疗性基因元件在单一AAV载体中的包装；其次，rAAV的低靶向性也是限制发展rAAV病毒工具的难题。目前常用的神经元特异性启动子hSyn大小为485bp，这一启动子长度在单一AAV载体的前提下进一步限制了功能蛋白的包装容量。
发明内容
本发明旨在提供一种迷你启动子pATP1B1及其应用。所述迷你启动子pATP1B1长度仅为120bp，能适用在重组腺相关病毒中，使外源基因得以在神经元细胞中高效表达，在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明第一目的是提供一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pATP1B1，所述启动子pATP1B1长度为120bp，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
GATTGGCCACCGGGCCGCTAGAGGGCGGGGCGCACGGCCGCCGGGGCGCGGTATATAGTAAAGGTAGGGCGGGCGCAGCCAATTCCTCGGCTCCTGGCGGGAGTGCCGGTGGCGCCCCGC(SEQ ID NO：1)
本发明的第二目的是提供一种含有上述启动子的重组腺相关病毒载体。
优选的，所述重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X采用pAAV-hSyn-X作为骨架载体，将该载体中hSyn替换为pATP1B1启动子，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X，X是需要表达的蛋白序列。
优选的，所述重组腺相关病毒载体为pAAV-pATP1B1-荧光蛋白、pAAV-pATP1B1-功能性蛋白或pAAV-pATP1B1-治疗性蛋白中的一种；所述荧光蛋白为eYFP或tdTomato；所述功能性蛋白为光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
所述pAAV-pATP1B1-荧光蛋白可以实现特异性细胞感染示踪；pAAV-pATP1B1-功能性蛋白可以用于制备激活或者抑制特定神经元的重组腺相关病毒；pAAV-pATP1B1-治疗性蛋白可以用于基因治疗。
优选的，所述的重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X的制备方法，包括以下步骤：
(1)将启动子pATP1B1基因片段两端分别加上限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF识别位点后人工合成；
(2)采用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pAAV-hSyn-X载体，同时用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pATP1B1片段；
(3)对两种酶切产物进行回收、纯化、连接，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X。
本发明的又一目的是提供一种含有上述启动子或上述重组腺相关病毒载体的重组腺相关病毒。
所述重组腺相关病毒AAV-PHP.B-pATP1B1-eYFP、AAV-PHP.B-pATP1B1-tdTomato可以特异性地感染神经元细胞，并表达高荧光强度的eYFP或tdTomato。
本发明的又一目的是提供一种含有上述启动子或上述重组腺相关病毒载体或上述重组腺相关病毒的试剂盒。
进一步地，本发明另一方面提供了所述启动子或重组腺相关病毒载体或重组腺相关病毒或重组腺相关病毒的试剂盒在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明迷你启动子pATP1B1长120bp，且在神经元细胞中具有高效表达效率，在神经元可以实现外源基因高效表达，提高病毒感染后的表达特异性，其在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景；
(2)本发明启动子pATP1B1在细菌和哺乳动物细胞中无细胞毒性；
(3)本发明重组腺相关病毒载体采用pATP1B1作为启动子，具有更大的包装能力，在兴奋性及抑制性神经元均具有高效表达效率；
(4)本发明重组腺相关病毒可以在全脑范围内感染神经元细胞，包括皮层、海马及中脑都能驱动eYFP高水平表达。
附图说明
图1为pAAV-pATP1B1-eYFP载体的构造流程图；
图2为AAV-PHP.B-pATP1B1-eYFP在小鼠大脑的表达效率图。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
所述启动子pATP1B1基因片段由苏州金维智生物科技有限公司合成；
所述核酸酶购自NEB公司，货号R3198S、R3136S；
所述AAV滴度测定染料法荧光定量试剂盒购自TAKARA公司；
所述PFA购自Leagene公司，货号DF0135。
实施例1 pATP1B1基因片段合成
启动子pATP1B1是人源钠钾ATP转运酶beta亚基1(ATPase Na+/K+transportingsubunit beta 1)基因的部分序列，所述序列选取了ATP1B1基因的转录起始位点的-80到+40位的核心启动子区序列，共120bp的序列作为最终启动子序列，所述启动子pATP1B1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
将启动子pATP1B1基因片段两端分别加上限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF识别位点后由苏州金维智生物科技有限公司合成。
实施例2构建重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-eYFP
本实施例由于采用YFP作为启动子的报告基因，因此在构建重组载体时，选用了含有YFP基因的重组腺相关载体pAAV-hSyn-eYFP作为载体骨架来连接pATP1B1启动子，步骤如下：
如图1所示，采用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pAAV-hSyn-eYFP载体，同时用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pATP1B1片段，37℃下酶切3小时，酶切体系如表1和表2所示，回收酶切产物后采用连接预混液(2x ligation premix，TAKARA)在16℃下进行连接30分钟，体系如表3所示，得到连接成功的pAAV-pATP1B1-eYFP载体。
表1 pAAV-hSyn-eYFP载体酶切体系
试剂 用量
酶切缓冲液10x CutSmart Buffer 5μL
MluI-HF 1μL
BamHI-HF 1μL
pAAV-hSyn-eYFP 1μg
ddH2O 补至50μL
表2 pATP1B1片段酶切体系
试剂 用量
酶切缓冲液10×CutSmart Buffer 5μL
MluI-HF 1μL
BamHI-HF 1μL
pATP1B1片段 1μg
ddH2O 补至50μL
表3连接体系
试剂 用量
连接预混液2×ligation premix 5μL
pAAV-eYFP连接骨架 0.5μL
pATP1B1连接片段 4.5μL
实施例3重组腺相关病毒AAV-PHP.B-pATP1B1-eYFP的制备
本实例采用三质粒共转染法制备病毒。病毒制备前，需要将包装病毒所需质粒采用QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit(QIAGEN公司，货号12943)进行中提取，包括重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-eYFP、包装质粒AAV-PHP.B和辅助质粒pHelper。具体步骤如下：
制备细胞：将293T细胞铺在含有全培养基(DMEM，10％胎牛血清、1％双抗)培养皿中，于培养箱中培养。
制备转染试剂：吸取5.25ml超纯水、75μg包装质粒、75μg重组质粒、75μg辅助质粒和800μL的2M氯化钙溶液，轻轻混匀。向前述试剂中，加入等体积2x HBS，涡旋后静置30分钟。
转染细胞：向每盘细胞中加入20μL氯奎(25mM)，加入转染试剂后培养。
收取病毒：72小时后将前述转染后的细胞收集于离心管以3000rpm离心30min。弃上清后加入2ml细胞裂解液(100mM Tris-HCL，150mM NaCl，pH8.0)，随后经过四轮反复冻融法裂解细胞，每轮分别用-80℃冰箱和37℃水浴锅各10分钟速冻和融化，每次融化后进行简短涡旋，以促进裂解，最终得到含有病毒的细胞破碎液。
纯化病毒：将上述细胞破碎液以11500rpm离心30min，弃上清后加入200μL HBS混匀，加入200μL氯仿以12000rpm离心5min，取上清，加入100μL 2.5mM NaCl和100μL 40％PEG8000，涡旋混匀，4℃冰箱静置过夜。将前述过夜样品以12000rpm离心30min，弃上清，加入30μL的HBS、0.5μL核酸酶，静置30min。随后加入30μL氯仿，以12000rpm离心5min。纯化完成后于-80℃冰箱保存。
测定滴度：用AAV滴度测定染料法荧光定量试剂盒(TAKARA公司)对前述纯化病毒进行滴度测定，滴度结果为2.0×1013vg/ml。
实施例4重组腺相关病毒在小鼠全脑神经元的特异性表达
将纯化后的重组腺相关病毒，采用立体定位注射至小鼠侧脑室(Bregma：+0.02mm；R：-0.80mm；D：2.40mm)，在全脑的范围内对pATP1B1表达特性进行研究。三周后，将小鼠用4％的PFA灌流取全脑，经4％PFA固定及30％蔗糖溶液脱水，待脑组织完全脱水后进行冰冻切片和免疫荧光染色，并观察脑片结果。
实验结果如图2所示，eYFP在小鼠全脑范围内的神经元中均有很高的表达水平，表明PHP.B血清型病毒能跨越脑-脑脊液屏障，感染全脑的细胞。pATP1B1在全脑范围内，均具有转录活性，能够在皮层、海马和中脑驱动eYFP的高水平表达。值得注意的是，在高倍显微镜下可以观察到pATP1B1只驱动eYFP在神经元中的表达，而不在胶质细胞中表达，由此可以证明启动子pATP1B1具有神经元特异性及高效表达水平。
综上，本发明在小鼠上进行验证，证明启动子pATP1B1具有神经元特异性及高效表达水平。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110> 深圳市恩辑生物科技有限公司
<120> 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
<130> 2021.8.20
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 120
<212> DNA
<213> 启动子pATP1B1核苷酸序列(Promoter pATP1B1 nucleotide sequence)
<400> 1
gattggccac cgggccgcta gagggcgggg cgcacggccg ccggggcgcg gtatatagta 60
aaggtagggc gggcgcagcc aattcctcgg ctcctggcgg gagtgccggt ggcgccccgc 120

Claims (8)

1.一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pATP1B1，其特征在于，所述启动子pATP1B1长度为120bp，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种含有权利要求1所述启动子的重组腺相关病毒载体。
3.根据权利要求2所述重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体采用pAAV-hSyn-X作为骨架载体，将该载体中hSyn替换为pATP1B1启动子，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X，X是需要表达的蛋白序列。
4.根据权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体为pAAV-pATP1B1-荧光蛋白、pAAV-pATP1B1-功能性蛋白或pAAV-pATP1B1-治疗性蛋白中的一种；所述荧光蛋白为eYFP或tdTomato；所述功能性蛋白为光遗传相关蛋白或化学遗传相关蛋白。
5.根据权利要求2所述的重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将启动子pATP1B1基因片段两端分别加上限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF识别位点后人工合成；
(2)采用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pAAV-hSyn-X载体，同时用限制性内切酶MluI-HF和BamHI-HF处理pATP1B1片段；
(3)对两种酶切产物进行回收、纯化、连接，得到重组腺相关病毒载体pAAV-pATP1B1-X。
6.一种含有权利要求1所述启动子或权利要求2～5任意一项所述重组腺相关病毒载体的重组腺相关病毒。
7.一种含有权利要求1所述启动子或权利要求2～5任意一项所述重组腺相关病毒载体或权利6任意一项所述的重组腺相关病毒的试剂盒。
8.根据权利要求1所述启动子或权利要求2～5任意一项所述重组腺相关病毒载体或权利要求6所述的重组腺相关病毒或权利要求7所述的重组腺相关病毒的试剂盒在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。
CN202110962272.XA 2021-08-20 2021-08-20 一种迷你启动子pATP1B1及其应用 Active CN113652427B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110962272.XA CN113652427B (zh) 2021-08-20 2021-08-20 一种迷你启动子pATP1B1及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110962272.XA CN113652427B (zh) 2021-08-20 2021-08-20 一种迷你启动子pATP1B1及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113652427A true CN113652427A (zh) 2021-11-16
CN113652427B CN113652427B (zh) 2023-08-29

Family

ID=78480569

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110962272.XA Active CN113652427B (zh) 2021-08-20 2021-08-20 一种迷你启动子pATP1B1及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113652427B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002028873A2 (en) * 2000-10-02 2002-04-11 Human Genome Sciences, Inc. Transcription factor polynucleotides, polypeptides, antibodies, and methods based thereon
AU2013224763A1 (en) * 2006-05-17 2013-09-26 Ludwig Institute For Cancer Research Targeting VEGF-B regulation of fatty acid transporters to modulate human diseases
WO2019199841A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Cure Ahc, Inc. Aav-mediated delivery of atp1a3 genes to central nervous system
CN112204047A (zh) * 2018-04-11 2021-01-08 阿瓦克塔生命科学有限公司 Pd-l1结合黏合素及与其相关的用途
CN112725342A (zh) * 2021-02-02 2021-04-30 中国科学院深圳先进技术研究院 一种启动子pCALM2及其应用
CN112899276A (zh) * 2021-02-02 2021-06-04 中国科学院深圳先进技术研究院 迷你启动子pHSP90AA1及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002028873A2 (en) * 2000-10-02 2002-04-11 Human Genome Sciences, Inc. Transcription factor polynucleotides, polypeptides, antibodies, and methods based thereon
AU2013224763A1 (en) * 2006-05-17 2013-09-26 Ludwig Institute For Cancer Research Targeting VEGF-B regulation of fatty acid transporters to modulate human diseases
WO2019199841A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Cure Ahc, Inc. Aav-mediated delivery of atp1a3 genes to central nervous system
CN112204047A (zh) * 2018-04-11 2021-01-08 阿瓦克塔生命科学有限公司 Pd-l1结合黏合素及与其相关的用途
CN112725342A (zh) * 2021-02-02 2021-04-30 中国科学院深圳先进技术研究院 一种启动子pCALM2及其应用
CN112899276A (zh) * 2021-02-02 2021-06-04 中国科学院深圳先进技术研究院 迷你启动子pHSP90AA1及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张惊宇;赵节绪;陈嘉峰;王宇虹;杨永梅;: "表达大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)腺相关病毒的构建及体外表达分析", 脑与神经疾病杂志, no. 01 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113652427B (zh) 2023-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220251145A1 (en) Adeno-associated virus variant capsids and methods of use thereof
EP2940131B1 (en) Aav variant
US7465583B2 (en) Duplexed parvovirus vectors
US20220220453A1 (en) Novel aav capsids and compositions containing same
CN112725342B (zh) 一种启动子pCALM2及其应用
EP2871239A9 (en) Cell capable of producing adeno-associated virus vector
AU2001269723A1 (en) Duplexed parvovirus vectors
TW201741458A (zh) 治療ａ型血友病之基因治療
CN112680443B (zh) 一种启动子pCalm1及其应用
CN112899276B (zh) 迷你启动子pHSP90AA1及其应用
CA3195233A1 (en) Aav-mediated homology-independent targeted integration gene editing for correction of diverse dmd mutations in patients with muscular dystrophy
CN102127546A (zh) 一种骨骼肌特异性actin启动子及其应用
CN113652427B (zh) 一种迷你启动子pATP1B1及其应用
CN113667671B (zh) 一种迷你启动子pRTN1及其应用
CN113584032B (zh) 一种迷你启动子pAPP及其应用
WO2023283749A1 (zh) 一种迷你启动子pCALM1及其应用
CN112695032B (zh) 一种启动子pLRRK2及其应用
EP3792367A1 (en) Method for the production of raav and method for the in vitro generation of genetically engineered, linear, single-stranded nucleic acid fragments containing itr sequences flanking a gene of interest
CN117018231B (zh) 用于治疗神经病变的基因疗法及其应用
Bojescu Treatment of Cancer
WO2024050547A2 (en) Compact bidirectional promoters for gene expression
EP1626091B1 (en) Duplexed parvovirus vectors
CN116284262A (zh) 高效感染ht-22细胞的腺相关病毒突变体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant