CN112891358A - Bcl-2抑制剂的应用及治疗衰老相关皮肤病的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了BCL‑2抑制剂治疗衰老相关皮肤病的应用以及治疗衰老相关皮肤病的药物组合物，属于医药技术领域。在本发明研究发现，含BCL‑2抑制剂的药物组合物均能够显著改善咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型的皮肤红斑、鳞屑等症状，显著降低皮损厚度，并且能降低银屑病小鼠模型皮损处衰老相关蛋白p16和p21的表达及p16、p21等的基因mRNA表达水平，此外，含BCL‑2抑制剂的药物组合物能显著降低银屑病小鼠模型皮损真皮CD4+T细胞浸润及皮损炎症因子如IFN‑γ、IL‑17A、IL‑22、IL‑23等mRNA表达水平。并且所述药物组合物优于传统的腹腔注射方法。可见，所述BCL‑2抑制剂和药物组合物能够有效改善银屑病小鼠模型的病情，具有开发成银屑病药物及衰老相关皮肤病药物的前景。

Description

BCL-2抑制剂的应用及治疗衰老相关皮肤病的药物组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及BCL-2抑制剂的应用以及治疗衰老相关皮肤病的药物组合物。
背景技术
细胞衰老是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。衰老细胞发生形态学和代谢变化、染色质重构、基因表达改变、细胞周期停滞以及分泌衰老相关分泌表型(SASP)。衰老细胞广泛存在于衰老人群和疾病组织中，并且研究发现衰老细胞可能在许多疾病发生和进展中起到关键的作用，如癌症、阿尔兹海默症、帕金森疾病、动脉粥样硬化、心血管功能紊乱和炎症性疾病等。
近年来，衰老细胞在疾病中的发病作用越来越得到重视。衰老相关皮肤病包含湿疹、银屑病、色素沉着过度、痣、皮疹、特应性皮炎、荨麻疹、与光过敏或光老化相关的疾病和病症、皱纹；瘙痒；感觉迟钝；湿疹爆发；嗜酸性皮肤病；反应性嗜中性皮肤病；天疱疮；类天疱疮；免疫大疱性皮肤病；皮肤纤维组织细胞增殖；瘢痕疙瘩；皮肤淋巴瘤；和皮肤狼疮的皮肤疾病或病症。以下以银屑病为例展开介绍。
银屑病是一种慢性炎症性皮肤病，其特征在于角质形成细胞异常增殖。银屑病的发病机制很复杂，被认为是遗传、表观遗传和环境因素共同作用的结果。银屑病最常见的类型是寻常型银屑病，占所有银屑病病例的近85-90％。病理组织学上，银屑病表现为角质形成细胞过度增殖和异常分化，新生毛细血管扩张以及真皮炎性浸润等。临床特点上，银屑病表现为反复发生的多层银白色干燥鳞屑，鳞屑下分布有广泛浸润性红斑和出血点，可伴有瘙痒症状。银屑病发病率高，我国总患病率约为0.59％[参见中国六省市银屑病流行病学调查，丁晓岚]。近期研究发现银屑病患者皮肤中出现衰老相关蛋白p16和衰老相关分泌表型(SASP)的上调，这是衰老细胞在是银屑病发病机制发挥作用的重要证据之一。
目前银屑病的治疗按药物种类主要分为传统疗法和生物靶向治疗方法。传统治疗效果大多只能达近期临床疗效，难以治愈，多数还伴有程度不一的不良反应；生物靶向治疗较传统疗法有更高的功效和更好的安全性，但也存在部分患者治疗效果不佳或存在不良反应，此外，部分生物制剂价格昂贵。从用药方式主要分为局部给药和系统给药。部分局部给药方式控制银屑病皮损效果良好，并且从安全性考虑，局部用药优于系统治疗。对于银屑病患者的治疗，开发安全、高效且经济的新型银屑病治疗药物具有重大意义。
发明内容
本发明第一目的在于，提供一种BCL-2抑制剂在治疗衰老相关皮肤病特别是银屑病中的全新用途。
本发明第二目的在于，提供一种包含所述的BCL-2抑制剂的治疗衰老相关皮肤病药物；特别涉及一种用于包含BCL-2抑制剂治疗银屑病的局部注射以及外用制剂。
本发明所采用的技术方案是：
一种BCL-2抑制剂在用于制备治疗衰老相关皮肤病药物中的应用。
本发明开发了一种BCL-2抑制剂用于治疗衰老相关皮肤病的全新用途。
本发明中，所述的BCL-2抑制剂为能抑制BCL-2抗凋亡蛋白家族成员的抑制剂。
优选地，所述的BCL-2抗凋亡蛋白家族成员为BCL-2、BCL-xL、BCL-w等中的至少一种。
优选地，所述的BCL-2抑制剂为ABT-737、ABT-263中的至少一种；进一步优选为ABT-737。
本发明所述的应用，将药学有效量的所述的BCL-2抑制剂与药学上可接受的辅料联合制备药学上可接受的任意药物制剂。
本发明所述的应用，将包括一个或多个BCL-2抗凋亡蛋白家族成员(如BCL-2，BCL-xL,BCL-w等)的抑制剂和(或)一切药学上可接受的载体或赋性剂联合，基于现有的制备设备和手段，制得药学上可以接受的任意药物制剂。
优选地，将所述BCL-2抑制剂用于制备经外用、局部、经皮、皮内、系统、吸入、气管内或通过插管术施用给药的任意药物制剂。
优选地，所述的药物制剂为注射制剂、外用制剂中的至少一种。
优选地，所述的注射制剂为皮下注射制剂。
优选地，所述的外用制剂为凝胶剂、乳膏、乳液、面霜、软膏、糊剂、洗剂、贴剂、敷贴、涂膜剂、巴布剂、气雾剂或喷雾剂中的至少一种。
优选地，将所述的BCL-2抑制剂用于制备处于进行期、静止期或消退期的所述的衰老相关皮肤病的药物。
所述的应用中，所述的衰老相关皮肤病为湿疹、银屑病、色素沉着过度、痣、皮疹、特应性皮炎、荨麻疹、与光过敏或光老化相关的疾病和病症、皱纹；瘙痒；感觉迟钝；湿疹爆发；嗜酸性皮肤病；反应性嗜中性皮肤病；天疱疮；类天疱疮；免疫大疱性皮肤病；皮肤纤维组织细胞增殖；瘢痕疙瘩；皮肤淋巴瘤；和皮肤狼疮的皮肤疾病或病症。
优选地，所述的衰老相关皮肤病为银屑病。
进一步优选，所述的银屑病为寻常型银屑病、红皮病型银屑病、关节型银屑病或脓疱型银屑病中的至少一种。
优选的应用，将所述的BCL-2抑制剂用于与其他治疗衰老相关皮肤病联合的复合药物。
本发明还提供了一种治疗衰老相关皮肤病的药物，其包含药学有效量的BCL-2抑制剂。
本发明所述的治疗衰老相关皮肤病的药物中，包含一种或者多种联合的BCL-2抑制剂活性成分。
本发明所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，所述的BCL-2抑制剂为能抑制BCL-2抗凋亡蛋白家族成员的抑制剂。优选地，所述的BCL-2抗凋亡蛋白家族成员为BCL-2、BCL-xL、BCL-w等中的至少一种；优选地，所述的BCL-2抑制剂为ABT-737、ABT-263中的至少一种；进一步优选为ABT-737。
本发明所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，所述的药物为药学上可接受的任意药物制剂。例如，可以是经外用、局部、经皮、皮内、系统、吸入、气管内或通过插管术施用给药的任意药物制剂。
优选地，所述的药物剂型为注射制剂或外用制剂；
优选地，所述的注射制剂为皮下注射制剂；
优选地，所述的外用制剂为凝胶剂、乳膏、乳液、面霜、软膏、糊剂、洗剂、贴剂、敷贴、涂膜剂、巴布剂、气雾剂或喷雾剂中的至少一种。
本发明所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，所述的注射制剂包含所述的BCL-2抑制剂、溶剂A、溶剂B、溶剂C和表面活性剂；
优选地，所述的溶剂A为有机溶剂；优选为二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC或DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、DMAF中的至少一种；
优选地，所述的溶剂B为醇溶剂，优选为PEG-300、PEG-400、聚乙二醇或丙二醇中、乙醇、甘油中的一种或几种；
优选地，溶剂C为水或者缓冲液；优选为磷酸盐缓冲液(PBS)、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或纯化水中的一种或几种；
优选地，表面活性剂选自聚山梨酸酯、Tween80、Tween20、聚氧蓖麻油、非离子型表面活性剂HS15、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、Pluronic F68、月桂酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种；
优选地，所述的注射制剂中；BCL-2抑制剂的质量百分含量为0.001～5％；优选为0.05～1％；
溶剂A的质量百分含量为0.1～15％；优选为5～10％；
溶剂B的质量百分含量为20～60％；
表面活性剂的质量百分含量为1～10％；
余量为溶剂C；
优选地，所述的外用制剂中，还选择性包含其他在注射制剂中允许添加的其他辅料，例如为促渗透剂、防腐剂中的至少一种。
优选地，促渗透剂为薄荷醇、冰片、氮酮、油酸、蛇床子挥发油等中的一种或几种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％；
优选地，防腐剂选自羟苯乙酯、尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯扎溴铵、三氯叔丁醇或山梨酸中的至少一种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％。
本发明还开发了外用制剂，且创新地发现，外用所述的BCL-2抑制剂有助于基于全新的机制，进一步改善衰老相关皮肤病特别是银屑病的治疗效果，此外，本发明研究发现，所述外用制剂在改善衰老相关皮肤病特别是银屑病的治疗效果明显优于传统的腹腔注射的系统给药方法，并有助于降低其他给药途径难于避免的毒副作用。
所述的外用制剂包括：所述的BCL-2抑制剂、溶剂D、基质和溶剂E；
所述的溶剂D为二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC或DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、DMAF等有机溶剂中的一种或几种。
所述的基质选自羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素钠、卡波姆、透明质酸、聚乙烯醇、海藻酸钠、玻璃酸钠、甲基纤维素、壳聚糖、甲壳素中的一种或一种以上。
溶剂E为磷酸盐缓冲液(PBS)、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或纯化水中的一种或几种。
优选地，所述的外用制剂中，BCL-2抑制剂的重量百分含量为0.001～5％；优选为0.02～1％；
溶剂D的含量为0.1～15％；优选为0.5～1.5％；
基质的含量为0.01～10％；优选为0.1～1.0％；
余量为溶剂E；
优选地，所述的外用制剂中，还允许添加其他在外用制剂中允许添加的辅料，例如保湿剂、溶剂F、促渗透剂、防腐剂中的至少一种；
优选地，所述的保湿剂为丙二醇或甘油；优选地，所述的保湿剂的重量百分含量不高于10％。
优选地，所述的溶剂F为PEG-300、PEG-400、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、甘油中的一种或几种；优选地，所述的溶剂F的重量百分含量不高于10％。
优选地，促渗透剂为薄荷醇、冰片、氮酮、油酸、蛇床子挥发油等中的一种或几种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％；
优选地，防腐剂选自羟苯乙酯、尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯扎溴铵、三氯叔丁醇或山梨酸中的至少一种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％。
本发明所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，所述的药物中还包含其他用于治疗治疗衰老相关皮肤病的活性成分。本发明所述的BCL-2抑制剂及药物组合物可以用于单一疗法或联合治疗。本发明技术方案，可以基于BCL-2抑制剂和其他成分的联合用药，有助于进一步改善衰老相关皮肤病的治疗效果。
需要说明的是，在本发明揭露的技术范围内，通过增加或删减辅助药用成份或通过改变剂型、更改或删增各成分配比比例、在所述药物组合物中添加赋形剂、或根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，均涵盖在本发明的保护范围之内。
本发明所述的BCL-2抑制剂注射液和外用制剂，能被局部吸收从而清除衰老相关皮肤病皮损衰老细胞，控制疾病的发展，并且在安全型方面，BCL-2抑制剂注射液和外用制剂较系统用药有很好的安全性。
本发明所述的药物，针对进行期、静止期或消退期的衰老相关皮肤病均能表现出良好的治疗效果。
此外，本发明所述药物及药物组合物减轻咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型皮肤红斑、鳞屑等症状及减少表皮厚度；并且能降低银屑病小鼠模型皮损处衰老相关蛋白p16和p21的表达及p16、p21等基因的mRNA表达水平，改善银屑病小鼠模型皮肤衰老情况；能显著降低银屑病小鼠模型皮损真皮CD4+T细胞浸润及炎症因子如IFN-γ、IL-17A、IL-22、IL-23等基因的mRNA表达水平；此外，所述药物组合物在改善衰老相关皮肤病特别是银屑病的治疗效果明显优于传统的腹腔注射的系统给药方法；同时本发明创新性地发现所述药物及药物组合物显著降低银屑病小鼠皮肤组织Tet2的mRNA表达水平。
在上文所述的医药用途中，对于BCL-2抑制剂及药物组合物的给药时间、给药次数和给药频率等等，需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。
将对小鼠的治疗方案应用于人体上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员而言也是容易实现的。
为了更好地理解本发明的实质，在下文实施方式部分用动物实验结果来进一步说明BCL-2抑制剂及药物组合物在制药领域的新用途。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明将BCL-2抑制剂及两种含BCL-2抑制剂的药物组合物来用于治疗衰老相关皮肤病，价格低廉，使用方便；同时，所述药物组合物在改善衰老相关皮肤病特别是银屑病的治疗效果明显优于传统的腹腔注射的系统给药方法；此外，采用注射和外用途径，避免了系统治疗的不良反应；以银屑病为例，试验结果表明，本发明药物能够显著改善咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型动物的皮肤炎症反应，缓解皮肤红斑、鳞屑等症状，显著降低皮损厚度。此外，两种BCL-2药物组合物均能显著降低银屑病小鼠皮损处衰老相关蛋白p16和p21的表达，及p16、p21等基因的mRNA表达水平，改善银屑病小鼠模型皮肤衰老情况；能显著降低银屑病小鼠模型皮损真皮CD4+T细胞浸润及炎症因子如IFN-γ、IL-17A、IL-22、IL-23等基因的mRNA表达水平；同时，所述药物组合物较传统的腹腔给药方式更明显地改善了银屑病的疾病表型、HE病理染色情况、屑病小鼠皮损处衰老相关蛋白p16和p21的表达、及p16、p21及各炎症因子等基因mRNA水平。此外，所述药物及药物组合物显著降低银屑病小鼠皮肤组织Tet2的mRNA表达水平。
本发明研究发现，针对银屑病，外用所述的BCL-2抑制剂有助于基于全新的机制表现出更优的治疗效果，同时优于传统地腹腔给药方式，且有助于进一步降低副作用。
附图说明
图1是本发明实施例5提供的银屑病小鼠模型组、空白注射液皮下注射组、ABT-737皮下注射组在咪喹莫特造模第7日小鼠背部皮损图；
图2是本发明实施例5提供的银屑病小鼠模型组、空白注射液皮下注射组、ABT-737皮下注射组小鼠背部造模处皮损切片HE图；
图3是本发明实施例5提供的空白注射液皮下注射组、ABT-737皮下注射组小鼠背部造模处皮损石蜡切片衰老相关蛋白p16及p21与CD4分子免疫组化染色图；
图4是本发明实施例5提供的空白注射液皮下注射组和ABT-737皮下注射组小鼠背部造模处皮损用实时定量PCR技术检测衰老相关分子p16及p21、BCL-2及各炎症因子基因的mRNA表达水平图；
图5是本发明实施例5提供的空白注射液皮下注射组和ABT-737皮下注射组小鼠脾脏、引流淋巴结，运用流式检测Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例图；
图6是本发明实施例6提供的银屑病小鼠模型组、空白注射液腹腔注射组、ABT-737腹腔注射治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737凝胶剂治疗组第7日小鼠背部造模处皮损图；
图7是本发明实施例6提供的银屑病小鼠模型组、空白注射液腹腔注射组、ABT-737腹腔注射治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737凝胶剂治疗组第7日小鼠背部造模处皮损切片HE图；
图8是本发明实施例6提供的空白注射液腹腔注射组、ABT-737腹腔注射治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737凝胶剂治疗组第7日小鼠背部造模处皮损切片衰老相关蛋白p16、p21与CD4分子及BCL-2免疫组化染色图；
图9是本发明实施例6提供的空白注射液腹腔注射组、ABT-737腹腔注射治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737凝胶剂治疗组第7日取小鼠背部造模处皮肤检测衰老相关分子p16、p21、BCL-2及各炎症因子的mRNA表达水平图；
图10是本发明实施例6提供的空白凝胶剂对照组及ABT-737凝胶剂治疗组第7日取小鼠脾脏、引流淋巴结，运用流式检测Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例变化图；
图11是本发明实施例7提供的正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组第7日小鼠背部造模处皮损图；
图12是本发明实施例7提供的正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组试验期间体重变化图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中为注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
除非另有定义，否则所有在此使用的技术和科学术语与本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及其引用的材料都将以引用的方式被并入。
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步详细的说明。需要说明的是，以下实施例仅为本发明较佳的具体实施方式，而非限制本发明的技术方案，在本发明揭露的技术范围内，通过增加或删减辅助药用成份或通过改变剂型、更改或删增各成分配比比例、在所述药物组合物中添加赋形剂、或根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，均涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例1
2.5mg/ml BCL-2抑制剂注射液
处方组成:
质量百分含量为0.25％BCL-2抑制剂(ABT-737)，10％DMSO，40％PEG-300，5％吐温80，余量为磷酸盐缓冲液(PBS)。
制备方法:
按处方量精密称取或用移液枪精密量取各组分；取BCL-2抑制剂ABT-737粉末3mg，用移液枪加入120μL DMSO，并轻柔吹打至ABT-737完全溶解，得到黄色的澄清溶液；再依次加入480μL PEG300，60μL吐温80，再加537μL PBS至上述溶液，并使用涡旋仪涡旋使上述混合均匀，即得所需黄色澄清溶液。
实施例2
BCL-2抑制剂凝胶剂
处方组成:
质量百分含量0.05％BCL-2抑制剂(ABT-737)，1％DMSO，0.5％卡波姆，余量为纯化水。
制备方法:
按处方量精密称取或用移液枪精密量取各组分；取卡波姆0.5g溶于98.5g纯化水，搅拌使其完全溶解，得半透明溶液，并用保鲜膜封包于4℃冰箱溶胀过夜；次日在搅拌下缓慢加入三乙醇胺使基质PH值为7，得到透明凝胶基质备用；取50mg ABT-737粉末于1mLDMSO,用移液枪轻柔吹打使其充分溶解；将ABT-737溶液转移至备用的凝胶基质中，充分搅拌使其混合均匀，即得淡黄色凝胶。
实施例3
0mg/ml BCL-2抑制剂注射液(空白注射液)
处方组成:
质量百分含量10％DMSO，40％PEG-300，5％吐温80，余量为磷酸盐缓冲液(PBS)。
制备方法:
按处方量精密称取或用移液枪精密量取各组分；取120μL DMSO，依次加入480μLPEG300，60μL吐温80，再取540μL PBS至上述溶液，并使用涡旋仪涡旋使上述混合均匀，即得所需透明澄清溶液。
实施例4
0％BCL-2抑制剂凝胶剂(空白凝胶剂)
处方组成:
质量百分含量1％DMSO，0.5％卡波姆，余量为纯化水。
制备方法:
按处方量精密称取或用移液枪精密量取各组分；取卡波姆0.5g溶于98.5g纯化水，搅拌使其完全溶解，得半透明溶液，并用保鲜膜封包于4℃冰箱溶胀过夜；次日在搅拌下缓慢加入三乙醇胺使基质PH值为7，得到透明凝胶基质备用；取1mL DMSO转移至备用的凝胶基质中，充分搅拌使其混合均匀，即得透明基质凝胶。
实施例5
皮下注射2.5mg/ml BCL-2抑制剂ABT-737注射液对咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的影响。
取8周龄体重20±2g雌性Balb/c健康小鼠16只，分别于躯干背部脱毛2x2cm2,脱毛24小时后，确认脱毛处无异常变化，将小鼠随机分为4组，分别为：(1)正常对照组(3只)：不进行任何特殊操作；(2)银屑病小鼠模型组(3只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型；(3)皮下注射ABT-737注射液(实施例1)治疗银屑病小鼠模型组(以下简称ABT-737皮下注射组，5只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且进行皮下注射25mg/kg/天ABT-737治疗(即对上述小鼠给予200ul 2.5mg/ml ABT-737注射液治疗)；(4)皮下注射空白注射液(实施例3)治疗银屑病小鼠模型组(以下简称空白注射液皮下注射组，5只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且皮下注射与ABT-737治疗组等体积的空白注射液。
除外正常对照组，上述小鼠均制备咪喹莫特诱发银屑病模型：于小鼠躯干背部脱毛处，用棉签均匀涂抹62.5mg 5％咪喹莫特(四川明欣药业有限责任公司)，每日一次，连续涂抹7天，每次间隔时间为24小时。造模结束后，取银屑病模型组小鼠背部造模处皮肤进行组织石蜡包埋，常规切片进行HE染色观察，与正常对照组比较，以角化不全、棘层肥厚等组织学改变判定模型成立。
在造模过程中和造模结束后进行如下方法学检测：
(1)从造模开始日至皮下注射治疗完成日，每日观察银屑病小鼠模型组、ABT-737皮下注射组、空白注射液皮下注射组共13只小鼠躯干背部造模处(正常对照组则为脱毛处)的皮肤外观变化(附图1)；
(2)于末次皮下注射治疗24h后处死小鼠，随即取银屑病小鼠模型组、ABT-737皮下注射组、空白注射液皮下注射组共13只小鼠躯干背部造模处皮肤标本用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋、切片，进行HE染色，通过光学显微镜逐个标本观察皮肤的角质层、颗粒层、棘细胞层、基底细胞层、真皮层的变化，比较每组间差异性(附图2)。同时行免疫组织化学p16、p21及CD4染色，于多光谱显微镜下比较各组间皮肤衰老相关分子的p16、p21阳性细胞比例，以及比较各组间皮肤的CD4+T细胞浸润程度(附图3)；
(3)另取ABT-737皮下注射组和空白注射液皮下注射组共10只小鼠躯干背部造模处皮肤标本加入RNA保护液中剪碎研磨制备成单细胞悬液。加入1mLtrizol充分吹匀混合，随后进行提取RNA，并逆转录为cDNA，利用实时定量PCR技术检测衰老相关分子p16、p21、BCL-2及各炎症因子对应基因的mRNA表达水平(附图4)；
(4)处死小鼠后，随即分别取出ABT-737皮下注射组和空白注射液皮下注射组共10只小鼠脾脏和双侧引流淋巴结(腹股沟和腋下淋巴结)，经研磨、过滤、PBS洗涤并离心后制备为单细胞悬液，从各样本中取出2x106个细胞，先染色细胞膜表面分子CD4，CD25，再使用Zombie NIRTM Fixable Viability Kit区分死活细胞，随后再使用破细胞核膜剂破核膜后，染色细胞核内Foxp3转录因子，染色完毕后进行流式细胞仪上机操作(附图5)；
(5)从上述10只小鼠的脾脏和引流淋巴结的单细胞悬液中各取出2.5x106个细胞入完全培养基(含10％FBS的1640溶液)，各样本中加入2ul离子霉素-高尔基体阻断剂，随后转移至24孔细培养板各孔中，并添加完全培养基保证孔内总体积为1ml，将细胞培养板放至37℃细胞培养箱，培养5小时后收获细胞染色细胞膜表面分子CD4，再使用Zombie NIRTMFixable Viability Kit区分死活细胞，随后用细胞膜破膜剂破细胞膜，再使用流式抗体染色细胞内分泌因子IFN-γ，IL-4，IL-17A，染色完毕后进行流式细胞仪上机操作(附图5)；
结果显示如下：
(1)在造模处皮肤组织表现方面，银屑病造模组出现显著皮肤红肿，皮损颜色加深，表皮增厚，皮沟加深，皮嵴隆起；空白注射液皮下注射组小鼠造模处皮损较银屑病模型组稍改善，但仍有显著的上述症状；ABT-737皮下注射组小鼠相对空白注射液皮下注射组及银屑病造模组有显著的皮肤红肿、皮肤增厚和鳞屑的改善(附图1)；
(2)各组小鼠躯干背部皮肤病理切片于光学显微镜下观察：银屑病小鼠模型组皮肤病理切片可见角质层断裂，颗粒层变薄或消失，角化不全明显，棘层肥厚，基底细胞增生活跃，真皮炎症细胞较多浸润伴真皮纤维化，呈现银屑病病理状态；ABT-737皮下注射组小鼠背部皮损处表皮突向下延伸明显减少，棘细胞层变薄，真皮炎症细胞明显减少；空白注射液皮下注射组小鼠背部皮损处表皮突明显向下延伸、增宽，棘细胞层变厚，真皮炎症细胞有所减少，但效果不及ABT-737皮下注射组(附图2)。
(3)小鼠躯干背部造模处皮肤病理切片免疫组化染色p16、p21及CD4并在多光谱显微镜下观察：相比于空白注射液皮下注射组，ABT-737皮下注射组小鼠背部皮损石蜡切片p16、p21染色阳性的衰老细胞比例明显减少；真皮炎症浸润CD4阳性细胞比例明显减少(附图3)。
(4)小鼠躯干背部造模处皮肤实时定量PCR检测衰老相关分子p16、p21、BCL-2及各炎症因子对应基因的mRNA表达水平：相比于空白注射液皮下注射组，ABT-737皮下注射组P16、P21、BCL-2及INF-γ、IL17A对应基因的mRNA表达水平均明显下降(附图4)。
(5)小鼠脾脏、引流淋巴结流式检测Th亚群及Treg细胞表达水平：相比于空白注射液皮下注射组，ABT-737皮下注射组的脾脏、引流淋巴结中Th1、Th2、Th17及Treg细胞占CD4阳性T细胞比例无统计学差异(附图5)。
结果表明：与空白注射液皮下注射组比较，ABT-737皮下注射组能使咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠皮肤红肿、皮肤增厚、覆盖鳞屑等银屑病症状显著减轻或消失；并通过减少表皮突延伸和真皮炎症细胞浸润、使肥厚的棘细胞层变薄从而使表皮变薄，抑制表皮增生过快和异常角化，使皮损趋于消退，显著改善银屑病的病理状态。此外，ABT-737皮下注射组小鼠背部皮损石蜡切片较银屑病造模组及空白注射液皮下注射组p16、p21染色阳性衰老细胞比例明显减少；炎症浸润CD4阳性细胞比例明显减少。同时，ABT-737皮下注射组小鼠躯干背部造模处皮肤P16、P21、BCL-2及INF-γ、IL17A对应基因的mRNA表达水平均明显下降。另外，相比于空白注射液皮下注射组，ABT-737皮下注射组的脾脏、引流淋巴结中Th1、Th2、Th17及Treg细胞占CD4阳性T细胞比例无统计学差异。说明BCL-2抑制剂ABT-737注射液可以用作治疗银屑病的药物，且仅在皮肤水平缓解银屑病皮损症状，并无任何系统损伤。
实施例6
外用BCL-2抑制剂ABT-737凝胶剂(实施例2)及腹腔注射2.5mg/ml BCL-2抑制剂ABT-737注射液(实施例1)对咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的影响。
取8周龄体重20±2g雌性Balb/c健康小鼠19只，分别于躯干背部脱毛2x2cm2,脱毛24小时后，确认脱毛处无异常变化，将小鼠随机分为5组，分别为：(1)银屑病小鼠模型组(3只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型；(2)外用ABT-737凝胶剂(实施例2)治疗银屑病小鼠模型组(以下简称ABT-737凝胶剂治疗组，5只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且每只进行外用ABT-737凝胶剂0.5g/天治疗；(3)外用空白凝胶剂(实施例4)治疗银屑病小鼠模型组(以下简称空白凝胶剂对照组，5只)，外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且每只外涂与ABT-737治疗组等量的空白凝胶剂治疗；(4)腹腔注射BCL-2抑制剂ABT-737注射液组(实施例1以下简称ABT-737腹腔注射治疗组，3只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且每只进行腹腔注射25mg/kg/天ABT-737治疗(即对上述小鼠给予200ul 2.5mg/ml ABT-737注射液治疗)；(5)空白注射液腹腔注射组(实施例3；以下简称空白注射液腹腔注射组，3只)：外涂咪喹莫特诱导银屑病模型，并且每只进行腹腔注射200ul空白注射液治疗)。
上述小鼠均制备咪喹莫特诱发银屑病模型，具体同实施例5。
ABT-737凝胶剂治疗组和空白凝胶剂对照组小鼠在咪喹莫特诱发银屑病小鼠模型造模的过程中，还需要对小鼠背部造模皮肤处分别进行外用ABT-737凝胶或空白凝胶剂进行治疗。在脱毛18小时，对ABT-737凝胶剂治疗组和空白凝胶剂对照组分别进行外用0.5g/只ABT-737凝胶或空白凝胶剂，每日一次，连续操作6天，每次间隔时间为24小时。每日外用凝胶治疗结束6小时后再进行外涂咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型造模操作。
ABT-737腹腔注射治疗组及空白注射液腹腔注射组小鼠在咪喹莫特诱发银屑病小鼠模型造模的过程中，还需要对小鼠腹部进行ABT-737腹腔注射治疗或空白注射液腹腔注射治疗。在上述ABT-737凝胶剂治疗组和空白凝胶剂对照组小鼠治疗的同一时间，对ABT-737腹腔注射治疗组及空白注射液腹腔注射组小鼠进行腹腔注射200ul 2.5mg/ml ABT-737注射液或等体积空白注射液治疗。
在造模过程中和造模结束后进行如下方法学检测：
(1)从造模开始日至涂药完成日，每日观察上述19只小鼠躯干背部造模处的皮肤外观变化(附图6)；
(2)于末次外用凝胶治疗24h后处死小鼠，随即取19只小鼠躯干背部造模处皮肤标本用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋、切片，进行HE染色，通过光学显微镜逐个标本观察皮肤的角质层、颗粒层、棘细胞层、基底细胞层、真皮层的变化，比较每组间差异性(附图7)。同时ABT-737凝胶剂治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737腹腔注射治疗组、空白注射液腹腔注射组小鼠躯干背部造模处皮损石蜡切片行免疫组织化学p16、p21、CD4、BCL2染色，于多光谱显微镜下比较各组间皮肤衰老相关分子p16、p21阳性的衰老细胞比例变化，各组间皮肤的CD4+T细胞浸润程度及BCL2阳性细胞比例变化(附图8)；
(3)另取ABT-737凝胶剂治疗组、空白凝胶剂对照组及ABT-737腹腔注射治疗组、空白注射液腹腔注射组小鼠躯干背部造模处皮肤标本加入RNA保护液中剪碎研磨制备成单细胞悬液。加入1mLtrizol充分吹匀混合，随后进行提取RNA，并逆转录为cDNA，利用实时定量PCR技术检测衰老相关分子p16、p21、Tet2，BCL-2、BCL-xL及各炎症因子对应基因的mRNA表达水平(附图9)；
(4)处死小鼠后，随即分别取出ABT-737凝胶剂治疗组及空白凝胶剂对照组小鼠的脾脏和双侧引流淋巴结(腹股沟和腋下淋巴结)，经研磨、过滤、PBS洗涤并离心后制备为单细胞悬液，从各样本中取出2x106个细胞，先染色细胞膜表面分子CD4，CD25，再使用ZombieNIRTM Fixable Viability Kit区分死活细胞，随后再使用破细胞核膜剂破核膜后，染色细胞核内Foxp3转录因子，染色完毕后进行流式细胞仪上机操作(附图10)；
(5)从上述ABT-737凝胶剂治疗组及空白凝胶剂对照组小鼠的脾脏和引流淋巴结的单细胞悬液中各取出2.5x106个细胞入完全培养基(含10％FBS的1640溶液)，各样本中加入2ul离子霉素-高尔基体阻断剂，随后转移至24孔细培养板各孔中，并添加完全培养基保证孔内总体积为1ml，将细胞培养板放至37℃细胞培养箱，培养5小时后收获细胞染色细胞膜表面分子CD4，再使用Zombie NIRTM Fixable Viability Kit区分死活细胞，随后用细胞膜破膜剂破细胞膜，再使用流式抗体染色细胞内分泌因子IFN-γ，IL-4，IL-17A，染色完毕后进行流式细胞仪上机操作(附图10)；
结果显示如下：
(1)在造模处皮肤组织表现方面，银屑病造模组出现显著皮肤红肿，皮损颜色加深，表皮增厚，皮沟加深，皮嵴隆起；空白凝胶剂对照组小鼠造模处皮损较银屑病模型组稍改善，但仍有显著的上述症状；ABT-737凝胶剂治疗组小鼠相对空白凝胶剂对照组及银屑病造模组有显著的皮肤红肿、皮肤增厚和鳞屑的改善；空白注射液腹腔注射组小鼠造模处皮损改善情况同空白凝胶剂对照组，ABT-737腹腔注射治疗组改善情况优于银屑病造模组、空白凝胶剂对照组及空白注射液腹腔注射组，但略逊于ABT-737凝胶剂治疗组(附图6)。
(2)各组小鼠躯干背部皮肤病理切片于光学显微镜下观察：银屑病造模组小鼠镜下可见角质层断裂，颗粒层变薄或消失，角化不全明显，棘层肥厚，基底细胞增生活跃，真皮炎症细胞较多浸润伴真皮纤维化，呈现银屑病病理状态；ABT-737凝胶剂治疗组小鼠背部皮损处表皮突向下延伸明显减少，棘细胞层变薄，真皮炎症细胞明显减少；空白凝胶剂对照组小鼠背部皮损处表皮突明显向下延伸、增宽，棘细胞层变厚，真皮炎症细胞有所减少，但效果不及ABT-737凝胶剂治疗组；空白注射液腹腔注射组小鼠造模处皮损改善情况同空白凝胶剂对照组，ABT-737腹腔注射治疗组改善情况优于银屑病造模组、空白凝胶剂对照组及空白注射液腹腔注射组，但略逊于ABT-737凝胶剂治疗组(附图7)。
(3)各组小鼠躯干背部造模处皮肤病理切片免疫组化染色p16、p21、CD4及BCL2于多光谱显微镜下观察：相比于空白凝胶剂对照组，ABT-737凝胶剂治疗组小鼠背部皮肤病理切片染色p16、p21阳性衰老细胞比例明显减少；真皮炎症浸润CD4阳性细胞比例明显减少；表皮BCL2阳性细胞明显减少；空白注射液腹腔注射组小鼠造模处皮肤病理切片染色p16、p21、CD4及BCL2阳性细胞比例与空白凝胶剂对照组基本相同，ABT-737腹腔注射治疗组p16、p21、CD4及BCL2阳性细胞减少情况优于空白凝胶剂对照组及空白注射液腹腔注射组，但略逊于ABT-737凝胶剂治疗组(附图8)。
(4)各组小鼠躯干背部造模处皮肤实时定量PCR检测衰老相关分子p16、p21、Tet2，BCL-2及各炎症因子对应基因的mRNA表达水平：相比于银屑病造模组、空白凝胶剂对照组、空白注射液腹腔注射组及ABT-737腹腔注射治疗组，ABT-737凝胶剂治疗组P16、P21、BCL-2及IL-22、IL-23、Tet2，对应基因的mRNA表达水平均明显下降(附图9)。
(5)将ABT-737凝胶剂治疗组及空白凝胶剂对照组小鼠脾脏、引流淋巴结流式检测Th亚群及Treg细胞表达水平：相比于空白凝胶剂对照组，ABT-737凝胶剂治疗组的脾脏、引流淋巴结中Th1、Th2、Th17占CD4阳性T细胞比例无统计学差异；而脾脏Treg细胞占CD4阳性T细胞的比例上升，具有统计学差异(附图10)。
结果显示，与空白凝胶剂对照组、空白注射液腹腔注射组及ABT-737腹腔注射治疗组比较，用BCL-2抑制剂ABT-737凝胶剂能使咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠皮肤红肿、增厚、覆盖鳞屑等银屑病症状显著减轻或消失；通过减少表皮突延伸和真皮炎症细胞浸润、使肥厚的棘细胞层变薄从而使表皮变薄，抑制表皮增生过快和异常角化，使皮损趋于消退，显著改善银屑病的病理状态；相比于银屑病造模组、空白凝胶剂对照组、空白注射液腹腔注射组及ABT-737腹腔注射治疗组，ABT-737凝胶剂治疗组小鼠背部皮肤病理切片染色p16、p21阳性衰老细胞比例明显减少；炎症浸润CD4阳性细胞比例明显减少，表皮BCL2阳性细胞明显减少。同时，ABT-737凝胶剂治疗组皮肤P16、P21、BCL-2及IL-22、IL-23对应基因的mRNA表达水平均明显下降，且ABT-737凝胶剂治疗组在降低IL-17F及IL-22和p21的基因mRNA表达水平较ABT-737腹腔注射治疗组有明显统计学差异；脾脏Treg细胞占CD4阳性T细胞的比例上升，但相比于空白凝胶剂对照组，ABT-737凝胶剂治疗组的脾脏、引流淋巴结中Th1、Th2、Th17占CD4阳性T细胞比例无统计学差异，说明BCL-2抑制剂ABT-737凝胶剂可以用作治疗银屑病的药物，系统影响较小，大部分在皮肤水平缓解银屑病皮损症状。
实施例7
外用BCL-2抑制剂ABT-737凝胶剂(基质同实施例2，区别在于ABT-737含量不同)对小鼠完整皮肤急性毒性试验。
取12只8周龄雌性Balb/c小鼠分别于躯干背部脱毛2x2cm2,脱毛24小时后，确认脱毛处无异常变化。将Balb/c小鼠随机分为四组，分别为：(1)正常对照组：共3只小鼠，不做其他处理；(2)外用质量分数为0.05％ABT-737凝胶剂(以下简称低剂量组，3只)：外用0.05％ABT-737凝胶剂，剂量为0.5g/只/天，连续7天，间隔时间为24小时；(3)外用质量分数为0.1％ABT-737凝胶剂(以下简称中剂量组，3只)：外用0.1％ABT-737凝胶剂，剂量为0.5g/只/天，连续7天，间隔时间为24小时；(4)外用质量分数为0.2％ABT-737凝胶剂(以下简称高剂量组，3只)：外用0.2％ABT-737凝胶剂，剂量为0.5g/只/天，连续7天，间隔时间为24小时。
在实验过程中进行如下方法学监测：每日观察凝胶剂完全吸收后各组小鼠背部皮肤的反应(附图11)，动物体重(附图12)，观察并记录动物反应与动物死亡数，连续观察7日，死亡动物及时尸检，有异常者进行组织形态学镜检。
结果显示，涂药后动物背部皮肤无明显刺激性(附图11)，体重无差异(附图12)，各组动物一般情况良好，活动与行为无明显变化，饮食与粪便正常，四组动物无一死亡。
最后所应说明的是，以上实施例仅为本发明较佳的具体实施方式，而非限制本发明的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，在本发明揭露的技术范围内，通过增加或删减辅助药用成份或通过改变剂型、更改或删增各成分配比比例、在所述药物组合物中添加赋形剂、或根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，均涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种BCL-2抑制剂在用于制备治疗衰老相关皮肤病药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的BCL-2抑制剂为能抑制BCL-2抗凋亡蛋白家族成员的抑制剂；
优选地，所述的BCL-2抗凋亡蛋白家族成员为BCL-2、BCL-xL、BCL-w中的至少一种；
优选地，所述的BCL-2抑制剂为ABT-737、ABT-263中的至少一种；进一步优选为ABT-737。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，将药学有效量的所述的BCL-2抑制剂与药学上可接受的辅料联合制备药学上可接受的任意药物制剂；
优选地，将所述BCL-2抑制剂用于制备经外用、局部、经皮、皮内、系统、吸入、气管内或通过插管术施用给药的任意药物制剂；
优选地，所述的药物制剂为注射制剂、外用制剂中的至少一种；
优选地，所述的注射制剂为皮下注射制剂；
优选地，所述的外用制剂为凝胶剂、乳膏、乳液、面霜、软膏、糊剂、洗剂、贴剂、敷贴、涂膜剂、巴布剂、气雾剂或喷雾剂中的至少一种。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的衰老相关皮肤病为湿疹、银屑病、色素沉着过度、痣、皮疹、特应性皮炎、荨麻疹、与光过敏或光老化相关的疾病和病症、皱纹；瘙痒；感觉迟钝；湿疹爆发；嗜酸性皮肤病；反应性嗜中性皮肤病；天疱疮；类天疱疮；免疫大疱性皮肤病；皮肤纤维组织细胞增殖；瘢痕疙瘩；皮肤淋巴瘤；和皮肤狼疮的皮肤疾病或病症；
优选地，所述的衰老相关皮肤病为银屑病；
进一步优选，所述的银屑病为寻常型银屑病、红皮病型银屑病、关节型银屑病或脓疱型银屑病中的至少一种；
优选地，将所述的BCL-2抑制剂用于制备处于进行期、静止期或消退期的所述的衰老相关皮肤病的药物；
优选地，将所述的BCL-2抑制剂用于与其他治疗衰老相关皮肤病联合的复合药物。
5.一种治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，包含药学有效量的BCL-2抑制剂。
6.如权利要求5所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，所述的BCL-2抑制剂为能抑制BCL-2抗凋亡蛋白家族成员的抑制剂；
优选地，所述的BCL-2抗凋亡蛋白家族成员为BCL-2、BCL-xL、BCL-w中的至少一种；
优选地，所述的BCL-2抑制剂为ABT-737、ABT-263中的至少一种；进一步优选为ABT-737。
7.如权利要求5所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，所述的药物为药学上可接受的任意药物制剂；
优选地，所述的药物剂型为注射制剂或外用制剂；
优选地，所述的注射制剂为皮下注射制剂；
优选地，所述的外用制剂为凝胶剂、乳膏、乳液、面霜、软膏、糊剂、洗剂、贴剂、敷贴、涂膜剂、巴布剂、气雾剂或喷雾剂中的至少一种。
8.如权利要求7所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，所述的注射制剂包含所述的BCL-2抑制剂、溶剂A、溶剂B、溶剂C和表面活性剂；
优选地，所述的溶剂A为有机溶剂；优选为二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC或DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、DMAF中的至少一种；
优选地，所述的溶剂B为醇溶剂，优选为PEG-300、PEG-400、聚乙二醇或丙二醇中、乙醇、甘油中的一种或几种；
优选地，溶剂C为水或者缓冲液；优选为磷酸盐缓冲液(PBS)、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或纯化水中的一种或几种；
优选地，表面活性剂选自聚山梨酸酯、Tween80、Tween20、聚氧蓖麻油、非离子型表面活性剂HS15、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、Pluronic F68、月桂酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种；
优选地，所述的注射制剂中；BCL-2抑制剂的质量百分含量为0.001～5％；优选为0.05～1％；
溶剂A的质量百分含量为0.1～15％；优选为5～10％；
溶剂B的质量百分含量为20～60％；
表面活性剂的质量百分含量为1～10％；
余量为溶剂C；
优选地，所述的外用制剂中，还选择性含有促渗透剂、防腐剂中的至少一种；
优选地，促渗透剂为薄荷醇、冰片、氮酮、油酸、蛇床子挥发油等中的一种或几种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％；
优选地，防腐剂选自羟苯乙酯、尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯扎溴铵、三氯叔丁醇或山梨酸中的至少一种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％。
9.如权利要求7所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，
所述的外用制剂包括：所述的BCL-2抑制剂、溶剂D、基质和溶剂E；
所述的溶剂D为二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC或DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、DMAF等有机溶剂中的一种或几种；
所述的基质选自羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素钠、卡波姆、透明质酸、聚乙烯醇、海藻酸钠、玻璃酸钠、甲基纤维素、壳聚糖、甲壳素中的一种或一种以上；
溶剂E为磷酸盐缓冲液(PBS)、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或纯化水中的一种或几种；
优选地，所述的外用制剂中，BCL-2抑制剂的重量百分含量为0.001～5％；优选为0.02～1％；
溶剂D的含量为0.1～15％；优选为0.5～1.5％；
基质的含量为0.01～10％；优选为0.1～1.0％；
余量为溶剂E；
优选地，所述的外用制剂中，还允许包含保湿剂、溶剂F、促渗透剂、防腐剂中的至少一种；
优选地，所述的保湿剂为丙二醇或甘油；优选地，所述的保湿剂的重量百分含量不高于10％；
优选地，所述的溶剂F为PEG-300、PEG-400、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、甘油中的一种或几种；优选地，所述的溶剂F的重量百分含量不高于10％；
优选地，促渗透剂为薄荷醇、冰片、氮酮、油酸、蛇床子挥发油等中的一种或几种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％；
优选地，防腐剂选自羟苯乙酯、尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯扎溴铵、三氯叔丁醇或山梨酸中的至少一种；促渗透剂的重量百分含量不高于10％。
10.如权利要求5～9任一项所述的治疗衰老相关皮肤病的药物，其特征在于，所述的药物中还包含其他用于治疗衰老相关皮肤病的活性成分。
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