CN112876398A - 一种吲哚三碳菁染料化合物及其制备方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属医药领域，具体涉及一种吲哚三碳菁染料化合物及其制备方法、应用；本发明合成制备了一种大共轭、水溶性的吲哚三碳菁染料化合物，该化合物可以作为荧光染料，具有潜在的开发与应用前景。本发明同时开发了该化合物的相关分析方法，能够为吲哚菁绿药物中杂质的研究提供研究基础，为吲哚菁绿药物的安全性研究提供依据。

Description

一种吲哚三碳菁染料化合物及其制备方法、应用
技术领域
本发明属医药领域，具体涉及一种吲哚三碳菁染料化合物及其制备方法以及在药学的应用。
背景技术
吲哚菁染料是非常重要的一类近红外染料，是花菁类染料中非常重要的分支，根据染料分子共轭甲川链上的碳原子数的不同，吲哚菁染料可以分为单甲川染料、三甲川染料、五甲川染料和七甲川染料等。
吲哚菁绿(indocyanine green，ICG)是一种荧光三碳菁染料，于1955年由柯达实验室研制开发，并从1956年开始用于人类疾病的诊断。ICG的大多数临床应用都利用了其荧光功能，吲哚菁绿具有穿透力强、与血浆蛋白结合率高的特点，可以清晰显示脉络膜图像。ICG分子荧光成像技术早期应用于眼科领域，随后该技术开始用于术中导航，识别关键结构和指导实体肿瘤的切除，在神经外科、心脏外科、血管外科术中的血管显影，以及在乳腺癌、胃癌术中前哨淋巴结标记等，近年来随着吲哚菁绿造影技术不断发展，吲哚菁绿在临床上应用也不断拓展。ICG如今已被广泛用于眼科，泌尿外科和普通外科等大多数外科领域。
Figure BDA0002897909610000011
静脉注射的ICG主要与血清蛋白结合(主要是球蛋白)，以结合和未结合两种不同的形式在血液中运输，注射后血浆中ICG的浓度呈指数下降。未结合的ICG会被肝脏迅速从血管系统中清除，并通过蛋白谷胱甘肽S-转移酶未经修饰地转运到胆汁中。自由溶解的ICG可定位于所需靶标，但其在靶标内的保留时间相对较短，限制了其在诊断和治疗应用中的潜力。
此外，ICG分子的稳定性和光学特性与浓度、温度、溶剂介质和pH值等因素有关从而影响ICG分子的有效性。药典中明确规定了吲哚菁绿中碘化钠的含量不能超过5％，吲哚菁绿中碘化钠的作用在于，一方面促进溶解性，一方面增加ICG的稳定性。ICG的吸收光谱随浓度变化很大，溶液中的ICG分子以单体形式保留，其浓度低于约400ug/ml，并且吸收光谱峰显示780至810nm之间，具体取决于溶剂介质。随着存放时间的延长，ICG溶液中会形成无色共轭物(一种共轭较少的分子)而导致ICG降解，从而导致IR范围内的吸光度降低，吸收光谱峰发生变化。在水中降解速度明显快于醇类等有机溶剂。此外在持续光照或者温度升高条件下，降解过程更容易发生。
已经有相关研究表明ICG分解后具有细胞毒性(例如：RPE细胞)，由于术中ICG的剂量和使用的条件有所不同，ICG应用的精确安全阈值尚未确定。因此，对ICG降解物的研究，有利于对ICG临床上的相关副作用的研究，确保更科学地运用该药物。
在过去的几年中，已经开发出定性和定量方法，例如高压液相色谱结合UV检测器(HPLC-UV)或液相色谱结合质谱(LC-MS)来分析ICG的稳定性。但是，这些方法大多数都集中在完整ICG化合物的分析上，对ICG降解和分解产物的研究分析较少。
本发明合成制备了一种大共轭、水溶性的吲哚三碳菁染料化合物，该化合物可以作为荧光染料，具有潜在的开发与应用前景。本发明同时开发了该化合物的相关分析方法，能够为吲哚菁绿药物中杂质的研究提供研究基础，为吲哚菁绿药物的安全性研究提供依据。
发明内容
本发明合成制备了一种吲哚三碳菁染料化合物，其具有如下所示结构特征：
Figure BDA0002897909610000021
上述结构中，其特征在于，化合物I为碘化钠盐形式，其中，碘化钠个数为0<X≤2。
上述结构中，其特征在于化合物I的碘化钠含量为0.01％～5％，优选3.0％～5.0％。
本发明另一方面提供了化合物I的制备方法。
具体方法如下：
Figure BDA0002897909610000031
述制备方法其特征在于以吲哚菁绿或其药学上可接受盐，在合适的溶剂和温度下，与氧化剂反应后经高效液相色谱法制备获得。上述制备方法包括如下
步骤：
所述步骤(1)以吲哚菁绿或其药学上可接受盐，在合适的溶剂和温度下，与氧化剂反应制备待分离溶液，采用高效液相色谱法对所述待分离液进行分离，收集得到所述化合物I的游离体；
所述步骤(2)以化合物I游离体为原料，加入定量碘化钠成盐，制备得到化合物I。
上述制备步骤(1)，其特征在于以吲哚菁绿或其药学上可接受盐，在合适的溶剂和温度下，与氧化剂反应制备获得待分离溶液，采用液相色谱法分离，收集得到所述式I所示的化合物的游离体；；
上述制备步骤(1)，其特征在于反应溶剂选自水，醇，四氢呋喃，二氧六环，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，丙酮，乙腈中的一种或几种，所述反应溶剂优选为水；
上述制备步骤(1)，其特征在于反应温度选自0℃至100℃。
上述制备步骤(1)，其特征在于氧化剂选自空气、氧气、臭氧、双氧水、氯酸盐、高氯酸盐、硝酸盐、高锰酸盐、重铬酸盐，有机过氧化物等中的一种或几种，所述氧化剂优选为双氧水；
上述制备步骤(1)，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的流动相水、乙腈、甲醇、乙醇中的一种或几种，优选水和乙腈，紫外检测波长为10-400nm，优选263nm，洗脱方式为梯度洗脱。
上述制备步骤(1)，其特征在于所述梯度洗脱的方法如下：
0～30min，保持流动相A的体积百分比为85％；
30～40min，流动相A的体积百分比由85％下降至70％；
40～42min，流动相A的体积百分比由70％下降至45％；
42～50min，保持流动相A的体积百分比为85％。
上述制备步骤(2)，其特征在于成盐溶剂选自反应溶剂选自水，醇，四氢呋喃，二氧六环，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，丙酮，乙腈中的一种或几种；所述成盐溶剂优选为乙醇。
上述制备步骤(2)，其特征在于成盐反应温度选自0℃至100℃。
上述制备步骤(2)，其特征在于碘化钠投料量为0.01％～32.46％，优选6.0％～10.0％；
本发明另一方面提供了化合物I的无定形态，化合物I以两种形态存在：结晶态和无定形态，无定形态相对结晶态具有更好的水溶性，更加符合制剂的要求。
上述无定形态的化合物I制备方法，其特征在于运用冻干方法，将化合物I配置成适宜浓度的水溶液，低温冷冻干燥制备得到。
此外本发明还提供所述化合物I的分析检测方法，吲哚菁绿中该杂质的含量随着药品制备工艺、储存条件等的影响较大，因此，有必要开发快速而高效的分析检测方法，评估产品质量，提供用药安全指导。
上述分析检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的流动相A为磷酸二氢钠缓冲液，流动相B为甲醇-乙腈混合溶液，紫外检测波长为263nm，洗脱方式为梯度洗脱。其检测方法，主要包括如下步骤：
所述步骤(1)取所述化合物I的对照品，以溶剂溶解，制备对照品溶液；
所述步骤(2)取吲哚菁绿待测物，以溶剂溶解或提取，制备供试品溶液；
所述步骤(3)采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测
上述检测方法，其特征在于所述高效液相色谱法采用的色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
上述检测方法，其特征在于所述流动相A的pH值为4.4～5.2。
上述检测方法，其特征在于所述流动相B中甲醇与乙腈的比例为2:48；
上述检测方法，其特征在于所述梯度洗脱的方法如下：
0～15min，流动相A的体积百分比由83％下降至80％；
15～40min，流动相A的体积百分比由80％下降至50％；
40～55min，流动相A的体积百分比由50％下降至45％；
55～60min，流动相A的体积百分比由45％上升至83％；
60～70min，保持流动相A的体积百分比为83％。
有益效果
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
1、本发明首次制备了化合物I，其是吲哚菁绿原料药最大单个杂质，为一种二聚体化合物。其可以作为吲哚三碳菁染料，扩大了吲哚菁染料的应用。
2、化合物I作为吲哚菁绿原研药和国内市售品主要杂质(大于3％)。该化合物能够为吲哚菁绿药物的降解物提供研究基础，为吲哚菁绿药物的安全性研究提供了依据。对于ICG降解产物及临床副作用的研究目前还较少，该化合物的研究有利于对ICG的全面深入了解。
3、本发明通过半制备液相色谱、高效液相色谱、高分辨质谱和核磁共振光谱等等多种技术手段，对化合物I进行了分离、制备、浓缩、纯化、检测和鉴定，原料常见且易得，合成及分离步骤简单可控，能够为ICG杂质的研究提供对照品，便于对ICG进行质量控制，提高其用药安全性。
4、本发明通过冷冻干燥法，制备了水溶性更好的无定形态的化合物I，有利于吲哚菁绿制剂产品的开发研究，便于全面研究吲哚菁绿的质量控制方法。
5、本发明开发了该化合物的检测方法，采用合适流动相设置的高效液相色谱法，能够检测ICG原料药和制剂中化合物I的含量。该检测方法操作简单、结果可靠，可实现ICG原料药和制剂中化合物I的快速、低成本检测。
附图说明
附图1本发明所述化合物I MS图谱。
附图2本发明所述化合物I1H-NMR图谱。
附图3本发明所述化合物I13C-NMR图谱。
附图4实施例13条件下，流动相A的pH值为3.6和4.0时，吲哚菁绿待测物样品及所述化合物的HPLC色谱图。
附图5实施例13条件下，流动相A的pH值为5.8时，吲哚菁绿待测物样品及实施例4制备得到的所述化合物I的HPLC色谱图。
附图6实施例14条件下，样品及实施例4制备得到的所述式化合物I的HPLC图。
附图7为实施例15条件下对照品溶液、1批自制制剂及原研产品(IC-Green)的色谱图。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
本发明实施例中吲哚菁绿参照专利US2895955A制备；吲哚菁绿的HPLC分析方法为：
本发明实施例中采用高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)对本品碘化钠进行检测，色谱条件如下：
色谱柱：Thermo BDS HypersilTM C18，4.6×250mm，5μm或效能相当的色谱柱。流动相A：四丁基氢氧化铵溶液(取10％四丁基氢氧化铵溶液12.5ml，加水1000ml，摇匀，用磷酸溶液调节pH值至6.5)；流动相B：乙腈。溶剂：水；柱温：25℃；流速：1ml/min；检测波长：227nm；进样量：10μl
照下表进行梯度洗脱：
Figure BDA0002897909610000061
下面结合具体实施方式对本发明做进一步描述。
实施例1
取5.0g吲哚菁绿自制原料药(化合物Ⅰ含量3.0％)溶于5mL甲醇中，静置，过滤，收集滤液。将所得滤液经高压反相制备柱进行分离，具体步骤如下：
高压制备液相为汉邦科技AS20005二元分析液相色谱系统(含NU3000UV/VIS检测器和NP7000分析液相色谱泵)；色谱柱：Morphling WD-C18柱(20mm×250mm，5μm)；流动相：水/乙腈混合溶液梯度洗脱；柱温：25℃；检测波长：263nm；流速：5-10mL/min；进样量：5mL。
流动相A：水；
流动相B：乙腈；
按照下表进行梯度洗脱：
Figure BDA0002897909610000071
收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(50mg)，收率33％，碘化钠含量0.02％。MS图谱如图1所示，1H-NMR图谱如图2所示，13C-NMR图谱如图3所示。
MS：752.2[1/2M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.29(m,10H),8.05-8.07(d,4H),7.97-8.01(m,4H),7.77-7.79(d,2H),7.62-7.70(m,6H),7.51-7.55(m,2H),7.45-7.49(m,2H),6.63-6.66(m,2H),5.76-5.79(d,2H),4.23(m,4H),4.00(m,4H),2.34-2.48(m,8H),1.96-2.03(m,24H),1.67-1.77(m,16H)
13CNMR(400MHz,DMSO-d6))δ175.02,171.54,156.70,153.03,148.21,140.54,139.98,134.59,132.80,131.99,131.48,130.80,130.62,130.34,128.88,128.14,128.01,127.84,125.55,124.85,123.73,122.78,122.56,112.48,111.87,105.90,99.64,51.43,51.13,51.05,50.62,44.56,43.93,27.84,27.27,27.13,26.42,22.93,22.84。
实施例2
取4g吲哚菁绿成品溶于2.0L水中，20-30℃条件下，搅拌，保证充分溶解，往反应液中持续通入氧气，使反应液充分接触氧气，搅拌反应3天，氧化杂质含量约50.0％。浓缩，取浓缩物200mg，加入5mL水溶解，按实施例1的方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(250mg)，波谱数据同实施例1，收率12.5％，碘化钠含量0.02％。
实施例3
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL甲醇中，加入1mL 3％双氧水溶液，室温条件下搅拌10分钟，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(5mg)，波谱数据同实施例1，收率2.5％，碘化钠含量0.01％。
实施例4
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL水中，加入配置好的高氯酸钠水溶液(500mg溶于5ml水中)，室温条件下搅拌1小时，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(10mg)，波谱数据同实施例1，收率5.0％，碘化钠含量0.01％。
实施例5
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL水中，加入硝酸钾水溶液(500mg溶于5ml水中)，室温条件下搅拌1小时，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(8mg)，波谱数据同实施例1，收率4.0％，碘化钠含量0.01％。
实施例6
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL甲醇中，加入高锰酸钾水溶液(500mg溶于10ml水中)，室温条件下搅拌1小时，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(6mg)，波谱数据同实施例1，收率3.0％，碘化钠含量0.01％。
实施例7
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL甲醇中，加入重铬酸钾水溶液(500mg溶于10ml水中)，室温条件下搅拌1小时，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(12mg)，波谱数据同实施例1，收率6.0％，碘化钠含量0.01％。
实施例8
取200mg吲哚菁绿成品溶于5mL乙醇中，加入过氧苯甲酸乙醇溶液(1ml过氧苯甲酸溶于5ml乙醇中)，室温条件下搅拌2小时，静置，过滤，收集滤液，得到待分离液。将所得分离液按实施例1所述方法进行分离，收集洗脱液，冷冻干燥得深青绿色固体，即化合物Ⅰ游离体(5mg)，波谱数据同实施例1，收率2.5％，碘化钠含量0.01％。
实施例9碘化钠盐的制备
取实施例2制备得到的化合物I游离体200mg，溶于3ml无水乙醇中，室温条件下搅拌溶清后，加入碘化钠的乙醇溶液(35mg碘化钠溶于1ml乙醇中)，反应1小时，有大量固体析出，过滤，滤饼用丙酮洗涤，滤饼于50℃减压干燥8小时，收料得深青绿色固体，即化合物I(125mg)，波谱数据同实施例1，收率60.7％，碘化钠含量4.25％，。
实施例10无定形态化合物的制备
取实施例9制备得到的化合物I 100mg，加入注射用水10ml溶解，用滤膜过滤除去不溶物，将配置好的滤液用冻干机冷冻干燥24小时，得到深青绿色固体，即无定形态化合物Ⅰ(95mg)，波谱数据同实施例1，收率95.0％。
实施例11：溶解性比较试验
分别称取化合物I和无定形态化合物I固体各10mg，25℃下加一定量水或乙醇，每隔5分钟振摇30秒，30分钟后观察溶解性。结果如表1所示，相比化合物I，无定形态化合物I在水中溶解性稍好，而在乙醇中溶解性有较显著增加，且化合物I成盐后，其水溶性可进一步增强。
表1化合物溶解性比较试验
化合物 温度 介质 溶解性
化合物I 25℃ 水 2.50mg/mL
化合物I 25℃ 乙醇 0.18mg/mL
无定形态化合物I 25℃ 水 >20.0mg/mL
无定形态化合物I 25℃ 乙醇 2.6mg/mL
实施例12：高温稳定性比较试验
根据文献报道，吲哚菁绿中的碘化钠有增强稳定性的作用，但过量的碘离子会引起一些临床副反应，因此药典中将碘化钠得含量定为不超过5.0％。分别称取化合物I固体(碘化钠含量从0.01％至4.5％)各10mg，，40℃/60℃下静置保持10天。各组高温稳定性结果如表2所示，随着碘化钠含量的增加，化合物I具备显著的高温稳定性优势。
表2化合物高温稳定性比较试验
Figure BDA0002897909610000101
实施例13：
样品：吲哚菁绿原料药，批号为20032701-5批。
取吲哚菁绿原料药，以及实施例10制备得到的所述化合物Ⅰ作为对照品进行下述研究。色谱条件如下：
仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；
色谱柱：Welch Xtimate C18，4.6×250mm，5μm；
流动相A：不同pH值的磷酸盐缓冲液；
流动相A-1：20mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至3.6；
流动相A-2：10mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至4.0；
流动相A-3：10mmol/L的磷酸二氢钠-10mmol/L的磷酸氢二钠(94︰6，pH值约5.8)；
流动相B：乙腈；
按照下表3进行梯度洗脱：
表3洗脱程序
Figure BDA0002897909610000111
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
紫外检测波长：263nm；
进样体积：10μl；
自动进样器温度：5℃
溶剂：甲醇。
制备对照品溶液：取实施例10制备得到的化合物Ⅰ适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5μg的溶液。
制备样品溶液：取样品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液。
以不同pH值的流动相A按上述条件分别进样分析，色谱图如图4和图5所示，其中，样品中与所述对照品保留时间一致的色谱峰，按峰面积归一化法计算，对比如下表4：
表4.不同pH值的流动相A比较试验
流动相A-pH值 检测溶液 杂质含量(％)
3.6 样品溶液 0.845
4.0 样品溶液 0.153
5.8 样品溶液 0.009
结果表明，吲哚菁绿原料药，批号为20032701-5批含有同样的杂质(化合物Ⅰ)。且供试品溶液检测时，流动相A的pH值对检测结果有明显影响，说明应严格控制流动相A的pH值，以防造成化合物Ⅰ的假阳性检测结果。
实施例14
鉴于实施例13的色谱条件下，流动相A的pH值对检测结果有明显影响，因此对色谱条件进行优化。
样品：吲哚菁绿原料药，批号为20051103批。
本实施例采用的色谱条件如下：
仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；
色谱柱：Welch Xtimate C18，4.6×250mm，5μm；
流动相A：不同pH值的磷酸盐缓冲液；
流动相A-1:10mmol/L的磷酸二氢钠溶液-10mmol/L的磷酸氢二钠(498:2；pH值约5.2)；
流动相A-2:10mmol/L的磷酸二氢钠溶液-10mmol/L的磷酸氢二钠(998:2；pH值约5.0)；
流动相A-3:10mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至4.8；
流动相A-4:10mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至4.6；
流动相A-5:10mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至4.4；
流动相B：甲醇-乙腈(3∶47)；
按照下表5进行梯度洗脱；
表5洗脱程序
Figure BDA0002897909610000121
Figure BDA0002897909610000131
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
紫外波长：263nm；
进样体积：10μl；
溶剂：甲醇。
供试品溶液：分别取样品适量，精密称定，加溶剂溶解后于光照条件(4500±500lux，90μW/cm2)下放置6.5h，加溶剂并定量稀释制成每1ml约样品0.25mg的溶液。
色谱图如图6所示；杂质Ⅰ检出量见下表6。
表6不同pH值的流动相A光照条件比较试验
流动相A-pH值 检测溶液 化合物Ⅰ含量(％)
4.4 光照破坏溶液 0.537
4.6 光照破坏溶液 0.602
4.8 光照破坏溶液 0.516
5.0 光照破坏溶液 0.525
5.2 光照破坏溶液 0.512
实施例15化合物Ⅰ的检测方法及方法应用。
样品：吲哚菁绿原料药，实验室自制，批号为20090301批、20092701批；注射用吲哚菁绿：实验室自制，20092105批、20073001批；国外上市品：IC-Green，美国AKRON INC，061179A批；Diagnogreen，日本第一三共株式会社，QHA0133批。国内上市制剂：瑞度，丹东医创药业有限责任公司，19061213批；
对照品：采用实施例4所述方法进行制备，20120401批。
其中对照品采用质量平衡法进行标定其含量，为93.12％。
色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；
色谱柱：Welch Xtimate C18，4.6×250mm，5μm；
流动相A：10mmol/L的磷酸二氢钠溶液，磷酸调节pH值至4.6；
流动相B：甲醇-乙腈(2∶48)；
按照下表7进行梯度洗脱：
表7洗脱程序
Figure BDA0002897909610000141
柱温：30℃；流速：1.0ml/min；紫外波长：263nm；进样体积：10μl；溶剂：甲醇。
对照品溶液：取化合物Ⅰ适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml约含5μg的溶液。
供试品溶液：取待测吲哚菁绿适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml约吲哚菁绿0.25mg的溶液。
计算公式：
(1)校正因子
Figure BDA0002897909610000142
式中：F—校正因子；
C对照品—对照品溶液的浓度(mg/ml)；
A对照品—对照品溶液的峰面积。
(2)杂质Ⅰ含量
Figure BDA0002897909610000143
式中：F平均—校正因子的平均值；
A供试品—供试品溶液中杂质Ⅰ的峰面积；
D—供试品的稀释倍数；
W供试品—供试品的称样量(mg)。
对照品溶液、1批自制制剂及原研产品(IC-Green)的色谱图如图7所示：按外标法，供试品溶液化合物Ⅰ检测出结果见下表8；
表8自制制剂及原研产品比较试验
Figure BDA0002897909610000151

Claims (6)

1.一种结构式如式I所示的化合物
Figure FDA0002897909600000011
其中0<X≤2。
2.如权利要求1所述化合物，其特征在于化合物I的碘化钠含量为0.01％～5％。
3.如权利要求1或2所述化合物的制备方法，其特征在于以吲哚菁绿或其药学上可接受盐为原料，发生氧化反应，再加入碘化钠制备获得化合物I。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于包括：
步骤(1)：以吲哚菁绿或其药学上可接受盐与氧化剂反应制备分离得到化合物I的游离体；
步骤(2)：以式I化合物游离体为原料，加入定量碘化钠进行反应，制备得到式I所示化合物。
其中步骤(1)中所用的溶剂为水，醇，四氢呋喃，二氧六环，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，丙酮，乙腈中的一种或几种；
其中步骤(1)中反应温度为0℃至100℃；
步骤(1)中氧化剂为空气、氧气、臭氧、双氧水、氯酸盐、高氯酸盐、硝酸盐、高锰酸盐、重铬酸盐，有机过氧化物中的一种或几种；
其中步骤(2)中反应溶剂为水，醇，四氢呋喃，二氧六环，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，丙酮，乙腈中的一种或几种；
步骤(2)中反应温度为0℃至100℃；
步骤(2)中碘化钠投料量为游离体投料量的0.01％～5％。
5.一种无定形态的化合物I制备方法，其特征在于将权利要求1或2所述化合物I配制成水溶液，冷冻干燥制备得到无定形态的化合物I。
6.一种如权利要求1或2所述的I化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
取所述式I化合物的对照品，以溶剂溶解，制备对照品溶液；
取吲哚菁绿待测物，以溶剂溶解或提取，制备供试品溶液；
采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测；
具体检测方法如下：
高效液相色谱法采用的流动相A为磷酸二氢钠缓冲液，流动相B为甲醇-乙腈混合溶液，紫外检测波长为263nm，洗脱方式为梯度洗脱；
所述高效液相色谱法采用的色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；
所述流动相A的pH值为4.4～5.2；
所述流动相B中，甲醇-乙腈的混合比例为2∶48；
所述梯度洗脱的方法如下：
0～15min，流动相A的体积百分比由83％下降至80％；
15～40min，流动相A的体积百分比由80％下降至50％；
40～55min，流动相A的体积百分比由50％下降至45％；
55～60min，流动相A的体积百分比由45％上升至83％；
60～70min，保持流动相A的体积百分比为83％。
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