CN112872024A - 一种石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于土壤修复领域，涉及到一种石油污染土壤联合修复方法，其利用土著微生物，通过外界改善土壤条件，促进土著菌增殖，达到修复土壤的目的。该方法涉及到营养体系构建、固定化微生物。本发明以特定的有机肥和土著菌作为土壤修复剂降解退役井场周围石油污染土壤中的石油烃，对石油污染土壤具有较好的修复效果。实验结果表明，在相同的实验条件下，鸡粪和牛粪复配质量比2.8：1，添加固定化微生物（10%）的土壤中，石油烃的降解率明显高于未添加的土壤，土壤肥力明显提高。与传统的原位修复和生物法相比，营养刺激联合固定化微生物修复退役井场石油污染土壤无二次污染，具有更加高效、更加绿色经济等优点。

Description

一种石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法

技术领域

本发明涉及土壤修复技术领域，具体涉及一种一种石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法。

背景技术

随着石油石化行业的快速发展，在生产作业过程中，石油污染土壤的面积日益增多，污染程度日趋严重，井场周围的污染情况更为明显。石油污染土壤中石油烃和有机物含量高，具有含水率高、迁移扩散快、污染面积大、自然降解缓慢等特点。常见的处理方式有物理法、化学法、生物法等，但这些方法普遍存在各种缺点如成本高、二次污染、周期长等，且不适用于污染面积大的现场。因此，寻找一种全新的、切实可行的处理方法已经迫在眉睫。

例如，CN105772499A公开了一种石油类污染场地土壤的原位联合修复方法，其中化学氧化药剂有氧化剂过硫酸钠、活化剂氢氧化钠或过氧化钙、缓释剂硫代硫酸钠等组成，微生物刺激营养物质有磷酸钠和硫酸铵组成。过硫酸钠与活化剂的摩尔比为5:1。缓释剂的量为氧化剂和活化剂量的1-5%。促进微生物生长的营养物质C:N:P的摩尔比 为120:10:1 ，磷源为磷酸钠（Na ₃ PO 4 •12H ₂ O），氮源为硫酸铵（(NH ₄ ) ₂ SO ₄ ）。碳源为石油类污染物，按照实际污染物程度估算。本发明可以达到将长期石油类污染土壤彻底修复的目的，从而克服了老化污染土壤微生物难修复、化学氧化成本较高、对环境影响较大的问题，降低了修复成本。

CN106734186A公开了一种石油类污染场地土壤的原位修复方法，其方法主要是：1.将秸秆破碎，与沼渣混合，混合比例为秸秆：沼渣质量比（1-100）：10，同时添加占沼渣质量0.1-5%的KNO₃ ，维持混合物含水率在60-200%，反应1-20天，配制成沼渣菌剂；2.将沼渣菌剂和酒精溶液混合，混合比例是（1-10）：5，通过注入井将混合溶液加压注入土壤中，注入压力在0.1-1Mpa，混合溶液注入量与土壤比例为（1-10）：10；3.间隔1-20天后，抽取地下水，通过注入井将地下水加压注入土壤中，注入压力在0-1Mpa，并检测地下水COD及石油含量；4.不断重复步骤3，直至同时满足地下水石油未检出，COD＜50mg/L。其思路是首先培养出水解酸化功能较强的沼渣菌剂，原位注入到污染土壤中，同时使用酒精将土壤中的石油溶出，沼渣中的微生物利用酒精作为碳源，更加有效的将溶液中石油分解转化，同时酒精的加入也提高了土壤中石油的生物可利用性。

CN102464438A公开了一种利用微生物降解井场含油污泥的方法；从黄土塬区油田井场含油污泥中通过培养、分离、筛选、驯化、诱变，得到绿脓杆菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、琼氏不动杆菌4种降解菌，按照重量比为1:1:1:1混合为含油污泥降解微生物菌群；初始pH值=6，碳氮重量比等于100:3，碳磷重量比等于1000:0.6，实验室在72 h内，投加混合菌的处理体系中石油类的质量浓度从17214 mg/kg降至1257 mg/kg，降解率为92.7%；在井场对初始含油率为10.55%的含油污泥经过56天的处理试验，石油类物质去除率可达89.1%，处理效果明显。

CN109679863A公开了一种石油污染土壤微生物修复剂及其制备方法，主要包括微生物试剂、物理调节试剂、辅料试剂，其中微生物试剂体积份：物理调节试剂重量份：辅料试剂重量份比例为3.8-7L：1.6-3kg：2.8kg。微生物修复试剂主要包括黑曲霉菌10-15份、假单细胞菌10-20份、产朊假丝酵母菌10-15份、粘红酵母菌8-10份；物理调节剂包括：生物炭8-15份、白云石粉10-20份；辅料剂包括：槐糖脂10-20份、尿素2-3份、葡萄糖3-5份。制备方法为：将微生物菌种分别进行活化、扩培，混合均匀后加入尿素和葡萄糖再混合，静置培养，加入经高温灭菌的白云石和生物炭再加入槐糖脂混合均匀，获得成品。

CN106001104A公开了一种利用土著菌修复石油污染土壤的方法，是将从石油污染土壤中筛选富集的道德混合土著菌添加到石油污染土壤中进行生物修复的方法，其具体步骤包括：石油污染土壤的研磨过筛预处理、利用无机盐培养基从石油污染土壤中筛选出富集土著菌、向石油污染土壤中投加富集得到的土著菌、并向石油污染土壤中添加一定比例的无机营养物及改良剂、搅拌均匀后进行堆肥，定期对处理土壤进行翻耕和浇水。

CN108672492A一种生物刺激修复石油污染土壤有机肥营养体系的构建方法,其中公开了有机肥营养体系的构建的具体步骤，并且也验证了投加入石油烃污染土壤，可改善土壤环境，提高土著微生物活性，进而通过有机肥生物刺激方式加速石油烃污染物的降解，但是其仅仅建立了一个营养体系，并且是通过实验室内的花盆实验来确定其技术效果；但是在实际现场应用时，单纯的生物刺激修复效果并不理想，即在大面积的现场进行土壤原位修复处理，实用性方面还比较欠缺。

目前处理石油污染土壤的方法众多，但都或多或少存在一些缺点，如：二次污染、处理周期长、成本高、不适用于大面积现场处理等等，所以，面对这些不足，一种新型的微生物降解石油烃方法的研究迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高效经济的退役井场石油污染土壤的营养刺激联合固定化微生物的原位修复方法。该方法采取的是投加有机肥（鸡粪和牛粪），调节氮磷比，改善土壤营养条件，刺激土著菌微生物的活性并加速其生长增殖，并添加固定化微生物，进一步提高微生物的利用率，加速污染物的去除效率。

本发明基于以下原理：

原位修复在不改变位置的情况下，对土壤中的石油烃进行降解，避免了挖掘、运输的成本，更减少了二次污染。

固定化微生物技术是将特定的微生物固定在载体上，使其高度密集并保持生物活性，再投入使用时，能够快速增值。固定化微生物技术广泛应用于水处理当中，如今引入到石油污染土壤的修复当中。

营养刺激法修复主要是利用土著微生物，通过改善土壤环境，促进土著菌的增殖，从而修复土壤。土著菌品种众多，各种土著菌的具体降解细节因而有所差异。然而它们降解的核心原理却大致一样：首先发生土著菌细胞膜的吸附作用，污染物打入土著菌内部，然后土著菌进行生长增殖活动，污染物被分解。

在营养刺激法的基础上结合固定化微生物技术的原位修复原位修复方法，一定程度上缓解了原位修复速度慢、周期长的缺点，加速了石油烃的降解，使得微生物利用更加高效并加速去除污染物，同时也更加适合大面积的现场修复。

基于上述原理，本发明采用如下技术方案：

一种石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，包括如下步骤

1）退役井场石油污染土壤含油量测定；

2）有机肥营养体系的构建：初步选用多种有机肥进行成分测定分析，并分别进行石油烃降解效果实验，根据各有机肥对石油烃去除效果，初步筛选出最优的两种有机肥来构建有机肥营养体系；

3）有机肥营养体系的再构建：将步骤1）筛选出的两种有机肥，以若干个不同混合比例初试混合，构建有机肥营养体系，并加入石油污染土壤中，检测一段时间后石油烃降解效果，从而得到最佳的复配比例；

4）营养体系构建条件的响应面优化：按照步骤2）确定的最佳复配比例，以有机肥投加量、氮磷比、温度和含水率4个因素为自变量，以石油烃降解率为响应值进行响应面实验，确定最佳的有机肥投加量、氮磷比、温度、含水率条件；

5）现场应用：选取石油污染土壤区块，按照步骤3）得到的有机肥最佳的复配比例，以步骤4）确定的最佳的有机肥投加量向石油污染土壤区块中施加有机肥，同时添加固定化微生物，并根据步骤3）确定的最佳氮磷比、含水率进行调节，然后对石油污染土壤区块进行翻耕、平整；定期取样，测定含油量、氮磷、水分、有机质含量，确定石油烃降解效果。

进一步的，所述有机肥步骤2）中的多种有机肥包括禽畜粪便以及腐殖酸，所述禽畜粪便包括鸡粪、牛粪、猪粪、羊粪、鸭粪和马粪。

进一步的，所述步骤2）中的筛选出最优的两种有机肥为鸡粪和牛粪。

进一步的，所述步骤3）中鸡粪和牛粪最佳的复配质量比2.8：1。

进一步的，所述步骤4）中，确定的4个因素的最优条件分别为每200g石油污染土壤有机肥投加量为8-12g、氮磷比为10-15:1、温度为28-32℃、含水率为18-22%。更有选的，确定的4个因素的最优条件分别为每200g石油污染土壤有机肥投加量为9.97g、氮磷比为10.01、温度为29.99℃、含水率为19.94%。

进一步的，所述步骤5）中，固定化微生物的投入量为石油污染土壤重量的的10%。

进一步的，所述步骤2）中，多种有机肥需经过预处理，所述预处理过程如下：经过风干处理后，破碎过40目筛，保存待用；使用前放入高压灭菌锅内进行灭菌处理确保不携带外来杂菌。

进一步的，所述步骤2）中，石油烃降解效果实验为：

a、取多个花盆，每种有机肥设一个平行花盆实验，投加有机肥的为实验组；对照组一个花盆，其它条件相同，不加有机肥，每个花盆中加入200g实验土壤；

b、设置基础条件：有机肥投加量为10g、碳氮磷比为100:10-15:1、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次；

进一步的，所述步骤3）中，有机肥营养体系的再构建为：取9个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，将有机肥鸡粪和牛粪按照总投加量10g，质量比分别为1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1进行初试，每个花盆其它基础条件为：碳氮磷比为100:10-15:1、含水率20%、pH为7、温度为30℃、每天翻土一次；每6天测一次土壤中石油烃含量。

与现有技术相比，本发明具有下述优点：

1.营养刺激与固定化微生物结合，不仅加强了土著细菌的增殖与活动，也提高了固定化微生物的利用率；

2.不使用化学、物理等方法，杜绝了二次污染，又不破坏土壤理化性质；

3.以废治废，使用有机肥替代传统肥料，进一步避免了二次污染，使得此方法更加经济高效；

4.土著菌与固定化微生物联合，克服了只有土著菌或者固定化微生物处理周期长、微生物利用率等缺点，同时也避免了菌群不适性导致的死亡；

5.土著菌包含细菌、真菌、放线菌等微生物、添加了实验室条件下模拟得到的适合的固定化微生物，能够更好的发挥相互协同作用，更快更高效地降解土壤中石油烃；

6.此方法与已公开专利中的其它方法相比，更加适用于大面积的退役井场石油污染土壤的原位修复；

7.与传统生物法修复相比，此方法微生物利用率提升显著，降解石油烃效率更高，处理周期明显缩短；

8.此方法更加利用土著菌，适用于处理各种不同的退役井场石油污染土壤，极大增强了适用性；

9.营养体系再构建与响应面优化结合，提高了此方法的科学性；

10.实验室模拟与现场试验结合，进一步确保了该方法的可行性、实用性、科学性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为有机肥营养体系对石油烃降解效果的影响对比示意图。

图2为营养刺激+固定化微生物和不做处理两种条件下退役井场土壤中石油烃降解率对比示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下实施例均按照以下技术步骤为基础来进行：

1、退役井场和土壤现状调查及样品测定，分析土壤石油烃含量；

2、通过对7种有机肥（鸡粪、牛粪、猪粪、羊粪、鸭粪、马粪和腐殖酸）进行成分测定分析，以及28天的石油烃降解效果实验，初步筛选出最优的2种有机肥来构建有机肥营养体系，根据单因素实验结果进行响应面优化实验，构建出最优的有机肥营养体系，来进行石油污染土壤的修复。

3、有机肥营养营养体系的再构建，进行花盆实验，确定效果最佳的复配方式。

4、营养体系构建条件的响应面优化，确定最佳的有机肥投加量、氮磷比、温度、含水率条件。

5、现场试验，精确测量出5m×3m的两块试验田，分别别号为A、B，其中A为土著菌＋C、N（有机）＋固定化微生物（10%）＋水分（控制在20%左右）；B为对照组（不作处理）。定期取样，测定石油烃、氮磷、水分、有机质含量。

实施例1

本发明中退役井场石油污染土壤含油量测定步骤如下：

a、分别将定期采取的样品烘干24小时；

b、准确称取0.1 g含油土样装入50 mL的离心管中；

c、加入10 mL石油醚（馏程60-90℃），在超声波中萃取15 min，超声波强 度：360 W（最小300 w），超声水浴温度：选用室温，控制在40 ℃以下。然后离心，转速7500 r/min，时间10min；

d、将上清提取液经盛有1cm厚度无水硫酸钠（500℃下烘2 h）的玻璃长径漏斗，收集至容量瓶中；

e、重复提取3次；

f、用5mL萃取剂小心洗涤离心管与漏斗三次，洗涤液一并转入容量瓶中；用沸程60~90℃分析纯的石油醚转移到容量瓶中并定容，浓度稀释到紫外分光光度计测量范围，采用UV-2100紫外分光光度计，测定其225 nm特征吸收波长处的吸光度，根据标准曲线计算石油烃含量，通过换算计算出土样含油率。

实施例2

以鸡粪作为有机肥，做单因素实验，确定有机肥营养体系的构建构建的基础条件，具体步骤如下：

a、 取6个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，实验组5个花盆，分别添加有机肥（选用鸡粪）2g、6g、10g、14g、18g；对照组1个花盆，除不加有机肥外都相同。每个花盆其它基础条件为：碳氮磷比为100:10:1、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳有机肥投加量。

b、取7个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，实验组6个花盆，分别设置碳氮比为：100:2:1、100:6:1、100:10:1、100:14:1、100:18:1、100:22:1；对照组一个花盆，除不调碳氮磷比外，其它都相同。每个花盆其它基础条件为：添加有机肥（选用鸡粪）10g、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳的碳氮磷比。

c、取7个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，实验组6个花盆，分别设置含水率为：5%、10%、15%、20%、25%、30%；对照组一个花盆，除不加水外，其它都相同。每个花盆其它基础条件为：添加有机肥（选用鸡粪）10g、碳氮磷比为100:10:1、pH为7、温度30℃、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳的含水率。

d、取6个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，分别设置pH值为：4、5、6、7、8、9；每个花盆其它基础条件为：添加有机肥（选用鸡粪）10g、碳氮磷比为100:10:1、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳的pH值。

e、取6个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，分别设置温度为24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、36℃。每个花盆其它基础条件为：添加有机肥（选用鸡粪）10g、碳氮磷比为100:10:1、含水率20%、pH为7、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳的温度。

f、取7个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，分别设置翻土频率为1天1次、2天一次、3天一次、4天一次、5天一次、6天一次、不翻土。每个花盆其它基础条件为：添加有机肥（选用鸡粪）10g、碳氮磷比为100:10:1、含水率20%、温度30℃、温度为30℃。每6天测一次土壤中石油烃含量，确定最佳的翻土频率。

实验结果表明，有机肥营养体系的构建，最佳的基础条件是：有机肥投加量为10g、碳氮磷比为100:10-15:1、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次；因此实施例3、4、5的有机肥营养体系的构建、再构建以及响应面优化均参以上述条件作为基础。

实施例3

有机肥营养体系的构建步骤如下：

a、取15个花盆（每种有机肥设一个平行花盆实验，投加有机肥的为实验组；对照组一个花盆，其它条件相同，不加有机肥），每个花盆中加入200g实验土壤；

b、设置基础条件：有机肥投加量为10g、碳氮磷比为100:15:1、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次。

c、每6天测一次土壤中石油烃含量。

d、通过测定结果，见图1，鸡粪、牛粪降解效果最好，因此确定以鸡粪、牛粪为有机肥来构建有机肥营养体系。

实施例4

有机肥营养体系再构建步骤如下：

取9个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，将有机肥鸡粪和牛粪按照总投加量10g，质量比分别为1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1进行初试，每个花盆其它基础条件为：碳氮磷比为100:10:1、含水率20%、pH为7、温度为30℃、每天翻土一次。每6天测一次土壤中石油烃含量（石油烃含量采用超声萃取-紫外分光光度法测定）。

通过测定结果，鸡粪和牛粪质量比为2:1-4：1效果最佳，进一步实验确定后，二者质量比2.8：1效果最佳。

实施例5

营养体系构建条件的响应面优化，具体步骤如下：

a、以有机肥投加量、氮磷比、温度和含水率4个因素分别为自变量A、B、C、D，以35天石油烃降解率为响应值进行4因素3水平的29组实验。（见表1以及表2，注：因元素碳对实验结果无影响且响应面实验因素须为数值不能是比值，故用氮磷比代替碳氮磷比）。

b、利用响应面软件Design Expert 8.0对得到的实验数据进行分析，到4个因素的最优条件分别为有机肥投加量为9.97g、氮磷比为10.01:1、温度为29.99℃、含水率为19.94%，响应值石油烃降解率为30.21%。

c、对6个响应曲面和等高线图以及回归方程进行综合分析，得到4个因素的最佳值分别为有机肥投加量为9.97g、氮磷比为10.01:1、温度为29.99℃、含水率为19.94%。

实施例6

现场试验的具体步骤如下：

a、初步对现场进行了调查，然后对石油污染土地进行了测量、划分、编号,用尺子精确测量出5 m（长）×3 m（宽）2块试验田，分别编号为A、B。

对A进行施加有机肥、构建其他营养条件、添加固定化微生物（选择秸秆固定化微生物）、控制水分在20%左右[A ：土著菌＋C、N（有机）＋固定化微生物（10%）＋20%水分]，有机肥选择鸡粪和牛粪，二者按照质量比2.8：1配置，通过控制碳氮磷比为100：10:1，C、N、P比调节用的氮源为硝酸钠，磷源为磷酸氢二钾；即通过加入无机盐调节N、P与C（来源于石油烃）的比例;

对B不进行处理，保持原有土壤条件（B：对照（不加处理））；

d、而后，进行试验田的翻耕、平整。同时采用五点取样法对现场样田进行了采样分析，进行了土壤含水率、含油量、土壤氮磷以及有机质的测定。

e、每隔两周定期采样，分别用五点取样法取A、B试验田中的样品土壤500 g于采样袋中，过40目筛，充分混合，当场测其含水率，随后密封好带回测其含油量、土壤中氮磷含量、有机质含量。

参见图2，经过营养刺激+固定化微生物修复后的土壤中石油烃降解率明显高于不做处理的降解率，

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）退役井场石油污染土壤含油量测定；

2）有机肥营养体系的构建：初步选用多种有机肥进行成分测定分析，并分别进行石油烃降解效果实验，根据各有机肥对石油烃去除效果，初步筛选出最优的两种有机肥来构建有机肥营养体系；

3）有机肥营养体系的再构建：将步骤1）筛选出的两种有机肥，以若干个不同混合比例初试混合，构建有机肥营养体系，并加入石油污染土壤中，检测一段时间后石油烃降解效果，从而得到最佳的复配比例；

4）营养体系构建条件的响应面优化：按照步骤2）确定的最佳复配比例，以有机肥投加量、氮磷比、温度和含水率4个因素为自变量，以石油烃降解率为响应值进行响应面实验，确定最佳的有机肥投加量、氮磷比、温度、含水率条件；

5）现场应用：选取石油污染土壤区块，按照步骤3）得到的有机肥最佳的复配比例，以步骤4）确定的最佳的有机肥投加量向石油污染土壤区块中施加有机肥，同时添加固定化微生物，并根据步骤3）确定的最佳氮磷比、含水率进行调节，然后对石油污染土壤区块进行翻耕、平整；定期取样，测定含油量、氮磷、水分、有机质含量，确定石油烃降解效果。

2.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述有机肥步骤2）中，多种有机肥包括禽畜粪便以及腐殖酸，所述禽畜粪便包括鸡粪、牛粪、猪粪、羊粪、鸭粪和马粪。

3.根据权利要求2所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述有机肥步骤2）中，筛选出最优的两种有机肥为鸡粪和牛粪。

4.根据权利要求3所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述有机肥步骤3）中，鸡粪和牛粪最佳的复配质量比2.8：1。

5.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述步骤4）中，确定的4个因素的最优条件分别为每200g石油污染土壤有机肥投加量为8-12g、氮磷比为10-15:1、温度为28-32℃、含水率为18-22%。

6.根据权利要求5所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，确定的4个因素的最优条件分别为每200g石油污染土壤有机肥投加量为9.97g、氮磷比为10.01、温度为29.99℃、含水率为19.94%。

7.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述步骤5）中，固定化微生物的投入量为石油污染土壤重量的的10%。

8.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述步骤2）中，多种有机肥需经过预处理，所述预处理过程如下：经过风干处理后，破碎过40目筛，保存待用；使用前放入高压灭菌锅内进行灭菌处理确保不携带外来杂菌。

9.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述步骤2）中，石油烃降解效果实验为：

a、取多个花盆，每种有机肥设一个平行花盆实验，投加有机肥的为实验组；对照组一个花盆，其它条件相同，不加有机肥，每个花盆中加入200g实验土壤；

b、设置基础条件：有机肥投加量为10g、碳氮磷比为100:10-15:1、pH为7、含水率20%、温度30℃、每天翻土一次；

c、每6天测一次土壤中石油烃含量。

10.根据权利要求1所述的石油污染土壤营养刺激联合固定化微生物原位修复方法，其特征在于，所述步骤3）中，有机肥营养体系的再构建为：取9个花盆，每个花盆中加入200g实验土壤，将有机肥鸡粪和牛粪按照总投加量10g，质量比分别为1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1进行初试，每个花盆其它基础条件为：碳氮磷比为100:10-15:1、含水率20%、pH为7、温度为30℃、每天翻土一次；每6天测一次土壤中石油烃含量。

Images