CN112870183B - 一种抗炎药物及在制备抗急性炎症药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物活性物质领域,具体涉及一种抗炎药物及在制备抗急性炎症药物中的用途。该抗炎药物至少应含有柯托苷,也可含有其他抗炎药物。该抗炎药物的剂型可以选择口服片剂、口服颗粒剂、脂肪乳注射剂、注射用环糊精包合物等。本发明的抗炎药物对二甲苯诱发的急性炎症、脂多糖诱发的急性肺炎、脓毒症诱发的急性肝炎等具有抗炎效果,有利于通过抗炎作用改善急性炎症引起的组织和脏器损伤。
Description
技术领域
本发明属于植物活性物质领域,具体涉及一种抗炎药物及在制备抗急性炎症药物中的用途。
背景技术
炎症反应是人体的一种防御机制,参与机体对外部微生物和内部坏死组织的清除,以及损伤组织的修复。但炎症因子的攻击缺乏选择性,过度的炎症反应对正常组织细胞的攻击会导致局部或全身性的组织损伤。根据炎症的不同持续时间可将炎症分为急性炎症和慢性炎症。其中引起急性炎症的因素包括创伤、休克、感染等,如内毒素、脓毒症可引起广泛的急性炎症性脏器损伤,包括肝损伤、肺损伤、肾损伤等。急性炎症如不能得到有效控制可转换为慢性炎症。
直接参与人体炎症反应的细胞因子包括各类促炎症细胞因子,如IL1、IL6、IL12、TNF-α、IFN-γ等。而促炎症细胞因子的调控则涉及诸多分子机制,如核因子κB(Nuclearfactor kappa-B, NF-κB)信号通路、Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)信号通路、核因子NF-E2相关因子(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、环氧合酶(Cyclooxygenase, COX)、NO等。脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成部分,属于细菌内毒素。其主要由Toll样受体4识别,配体结合后激活下游炎症信号通路,引发急性炎症反应。脂多糖是各种急性炎症中较常用的造模用化学物质,也是脓毒症所致组织器官损伤的重要启动因素。
非甾体抗炎药物和糖皮质激素类药物是使用较早并且使用时间较长的一类抗炎药物,对各类急慢性炎性都具有较好的抑制作用。其中非甾体抗炎药物由于对COX-1、COX-2缺乏选择性往往存在各种副作用,如出血等。而糖皮质激素抗炎作用极强,也存在肉萎缩、向心性肥胖、骨质疏松等副作用。鉴于常规抗炎药物的上述副作用,新的抗炎药物成为筛选和研究的必要。其中一个方向是抗体类药物,这类药物生产工艺复杂,价格昂贵。另一个方向是从天然植物中筛选抗炎活性物质,也可进行进一步的结构优化。来源于天然植物的活性成分成为筛选新的抗炎药物的重要来源。大量来自天然植物的化学物质陆续被发现具有较好的抗炎作用,并对一些慢性炎症具有较好的抑制效果。例如七叶皂苷、甘草黄酮、葛根素、桑橙素、丹芝酸A、科罗索酸等等。
但目前对于各种急性炎症损伤如细菌内毒素或脓毒症引发的全身或局部炎症导致的脏器损伤,仍然缺乏特效治疗药物。柯托苷即Cotoin(CAS号479-21-0)是一种来自天然植物的固体物质。市场销售的柯托苷提取自柯托树和藤黄属植物。其中柯托树的树皮传统用于腹泻。以前部分学者对柯托苷对离体器官和健康动物的作用进行了研究,表明柯托苷具有止泻、轻微扩血管、降低体温等作用。关于柯托苷在其他病理条件下的活性比如炎症条件下的抗炎活性此前还没有研究。 目前关于柯托苷的制剂研究报道也较少。
发明内容
针对上述问题,本发明的目的之一是提供一种抗炎药物,以克服急性炎症损伤治疗药物匮乏的问题,为急性炎症损伤提供新的备选药物。
该抗炎药物的主药(即负责发挥抗炎作用的活性物质)至少含有柯托苷,也可进一步含有已知的抗炎药物,包括但不限于阿魏酸、连翘苷、积雪草苷、小檗碱、七叶皂苷、甘草黄酮、葛根素、桑橙素、莲心碱、丹芝酸A、科罗索酸、二氢杨梅素。
当该抗炎药物的主药为柯托苷,优选的药物制剂包括口服制剂、注射制剂和外用制剂。当该抗炎药物为柯托苷口服制剂,优选的口服制剂包括口服片剂、口服颗粒剂、口服液体制剂。片剂可以加入固体或液体辅料,如固体辅料的填充剂淀粉、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉等;崩解剂交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠等;润滑剂,如硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉等;润湿剂和粘合剂乙醇、水、乙醇水溶液、甲基纤维素、乙基纤维素等。其中乙醇、水或乙醇水溶液属于液体辅料。当该抗炎药物为柯托苷口服颗粒剂。颗粒剂可以加入固体或液体辅料,如固体辅料的稀释剂蔗糖、甘露醇、糊精、淀粉、乳糖等;润湿及粘合剂乙醇、水、乙醇水溶液、甲基纤维素、聚维酮等。其中乙醇、水或乙醇水溶液属于液体辅料。
当该抗炎药物为柯托苷注射剂,则优选为脂肪乳注射剂或注射用环糊精包合物。其中脂肪乳注射剂油相可使用大豆油、玉米油、棉籽油;乳化剂可使用卵磷脂、泊洛沙姆;助乳化剂油酸或油酸钠;抗氧化剂可使用维生素E、亚硫酸氢钠等,以及水相甘油、水等。
本发明的另一个目的是提供柯托苷的一种新的用途,即柯托苷及含柯托苷的复方药物在制备抗急性炎症药物中的用途。其中急性炎症包括但不限于脂多糖即内毒素诱发的急性肺炎、急性肝炎;脓毒症诱发的急性肺炎、急性肝炎、急性肾炎等。
本发明发现,柯托苷注射给药对急性炎症具有抗炎效果,可抑制TNF-a、IL-6等炎症细胞因子水平,对脂多糖即内毒素诱发的急性肺炎、脓毒症诱发的急性肝炎等具有抗炎效果。因此,柯托苷可用于对抗急性炎症引起的组织和脏器损伤。当然,对于严重的脓毒症如存在血容量严重降低和休克,抗炎药物仍需要联合血容量补充治疗,此时及时补充血容量必要的。
具体实施方式
以下结合具体实施例更具体的解释本发明,以下这些实施例仅对本发明的技术方案进行辅助说明,本发明的技术范围不限于以下实施例。
实施例1 柯托苷口服片剂及制备
主药:柯托苷90g;
辅料:微晶纤维素100 g;
乳糖10g;
淀粉40 g;
硬脂酸镁4 g;
滑石粉2g。
制备:按照上述主药和辅料的用量,分别取主药和辅料过80目筛;将柯托苷、微晶纤维素、乳糖、淀粉混合均匀,加入70%的乙醇制备软材,18目筛制粒,40℃干燥,16目筛整粒,然后加入硬脂酸镁、滑石粉混合均匀压片。
实施例2 柯托苷口服颗粒剂及制备
主药:柯托苷50g;
辅料:淀粉40 g;
制备:按照上述主药和辅料的用量,分别取主药和辅料过80目筛;将柯托苷、淀粉混合均匀,加入70%的乙醇制备软材,20目筛制粒,40℃干燥,18目筛整粒,干燥后分装。
实施例3 柯托苷脂肪乳注射制剂及制备
主药:柯托苷5g
辅料:注射用大豆油 5g
注射用卵磷脂 1.2g
注射用甘油 2.5g
油酸 0.03g
维生素E 0.01g
注射用水 加至100mL
制备:按照上述主药和辅料的用量,取注射用大豆油加热至70℃作为油相,边搅拌边向油相中加入注射用卵磷脂、柯托苷、油酸、维生素E搅拌均匀作为油相混合物;取注射用甘油、20mL注射用水搅拌均匀,加热至70℃作为水相混合物。将油相混合物和水相混合物混合,加入余量注射用水定容至100 mL,70℃下16000rpm高速剪切制备初乳,40℃下1000 bar高压均质5次制备终乳,氮气保护,灭菌分装。
实施例4 柯托苷对二甲苯诱导小鼠耳肿胀急性炎症的抗炎作用研究
4.1动物:雄性昆明小鼠,体质量20±2 g。
4.2造模及给药:取24只小鼠,随机分为对照组及柯托苷低、中、高3个剂量组,每组6只。对照组腹腔注射生理盐水,柯托苷低、中、高剂量组腹腔注射柯托苷生理盐水混悬液。柯托苷低、中、高剂量组的注射剂量按柯托苷计算分别为0.5mg/只、1.0mg/只、2.0mg/只。各组小鼠隔日给药1次,共给药3次,最后一次给药后40分钟于左右双侧耳朵的内外两侧进行造模和对照。右耳内外两侧共涂抹二甲苯30μL,左耳内外两侧共涂抹蒸馏水30μL。
4.3指标及测量:造模完成30分钟后,取各小鼠双耳样本,同一部位打直径8 mm的圆孔,称重左右耳样本的质量(左耳质量为Ml和右耳质量为Mr)。按照如下公式计算耳质量差、耳肿胀率和耳肿胀抑制率。左右耳质量差(mg)= Mr-Ml;耳肿胀率=(Mr-Ml)/Mlx100;耳肿胀抑制率=(对照组耳肿胀率-给药组耳肿胀率)/对照组耳肿胀率x100。
4.4结果:各组小鼠耳质量差、耳肿胀率、耳肿胀抑制率结果如表1所示。柯托苷显著降低了模型动物的耳质量差和耳肿胀率,具有一定的剂量相关性。
其中与生理盐水对照组相比,柯托苷低、中、高剂量组耳质量差显著降低P<0.01。柯托苷中剂量组耳质量差与低剂量组相比P<0.05。柯托苷高剂量组耳质量差与低剂量组相比P<0.01。
其中与生理盐水对照组相比,柯托苷低、中、高剂量组耳肿胀率显著降低 P<0.01。柯托苷高剂量组耳肿胀率与低剂量组相比P<0.01。
表1 各组小鼠耳质量差、耳肿胀率、耳肿胀抑制率结果
实施例5 柯托苷对脂多糖急性炎症性肺损伤的影响
5.1动物:雄性昆明小鼠,体质量20±2 g。
5.2造模及给药:取24只小鼠,随机分为对照组及柯托苷低、中、高3个剂量组,每组6只。对照组腹腔注射生理盐水,柯托苷低、中、高剂量组腹腔注射柯托苷生理盐水混悬液。柯托苷低、中、高剂量组的注射剂量按柯托苷计算分别为0.5mg/只、1.0mg/只、2.0mg/只。各组小鼠隔日给药1次,共给药3次,最后一次给药后40分钟各组小鼠腹腔注射5 mg/kg LPS(生理盐水溶液配制)。LPS注射后12小时,处死各组小鼠。
5.3 指标及测量:取出小鼠单侧肺组织称重获得湿重数据(Ww),70℃烘干至恒重获得干重数据(Dw),计算小鼠肺组织湿重-干重比(Ww/ Dw)。取小鼠另一侧肺组织PBS中匀浆,4℃下离心取上清液,ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-6的含量。
5.4结果:与生理盐水对照组相比,柯托苷组小鼠Ww/Dw、TNF-α、IL-6均显著降低P<0.01,具有一定的剂量相关趋势。其中与柯托苷低剂量组相比,高剂量组小鼠Ww/ Dw、TNF-α、IL-6均显著降低,P<0.05或P<0.01;中剂量组小鼠IL-6显著降低,P<0.05。
表2 各组小鼠肺湿重-干重比及肺组织TNF-α和IL-6含量测定结果
实施例6 柯托苷对脓毒症急性炎症性肝损伤的影响
6.1动物:雄性昆明小鼠,体质量20±2 g。
6.2造模及给药:取24只小鼠,随机分为对照组及柯托苷低、中、高3个剂量组,每组6只。各组小鼠禁食24小时后麻醉状态下盲肠结扎穿刺暴露内容物,常规关腹。术后立即给药,对照组腹腔注射生理盐水,柯托苷低、中、高剂量组腹腔注射柯托苷生理盐水混悬液。柯托苷低、中、高剂量组的注射剂量按柯托苷计算分别为0.6mg/只、1.2mg/只、2.4mg/只。
6.3 指标及测量:给药后4小时小鼠采血分离血清,ELISA法测定血清中TNF-α和IL-6含量。
6.4结果:与生理盐水组相比,柯托苷组小鼠血清TNF-α、IL-6均显著降低,具有剂量相关趋势。其中柯托苷中、高剂量组小鼠血清TNF-α、IL-6显著低于柯托苷低剂量组。
表3 各组小鼠血清TNF-α和IL-6含量测定结果
以上实施例显示了于柯托苷注射给药对急性炎症的抗炎作用以及对急性炎症相关组织损伤的保护作用。鉴于不同给药途径的药物吸收效果与给药量的关系差异,本领域技术人员可以推测上述药物口服给药或外用给药等也可发挥抗炎效果,从而有利于缓解慢性炎症损伤。
Claims (4)
1.柯托苷在制备抗急性炎症药物中的用途,其特征在于,所述急性炎症选自脂多糖诱发的急性肺炎、脓毒症诱发的急性肝炎中的一种;所述抗急性炎症药物的剂型选自口服片剂、口服颗粒剂、脂肪乳注射剂中的一种。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述口服颗粒剂的辅料包括淀粉,所述口服颗粒剂中柯托苷、淀粉的重量份比为:柯托苷5重量份、淀粉4重量份;所述口服颗粒剂的制备方法为:按照重量份,分别取柯托苷和淀粉过80目筛;将柯托苷、淀粉混合均匀,加入70%的乙醇制备软材,20目筛制粒,40℃干燥,18目筛整粒,干燥后分装。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述脂肪乳注射剂的辅料包括注射用大豆油、注射用卵磷脂、注射用甘油、油酸、维生素E、注射用水;所述脂肪乳注射剂中柯托苷、大豆油、注射用卵磷脂、注射用甘油、油酸、维生素E的重量份比为:柯托苷500重量份、大豆油500重量份、注射用卵磷脂120重量份、注射用甘油250重量份、油酸3重量份、维生素E1重量份。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于, 所述脂肪乳注射剂的制备方法为:按照重量份,取注射用大豆油加热至70℃作为油相,边搅拌边向油相中加入注射用卵磷脂、柯托苷、油酸、维生素E搅拌均匀作为油相混合物;取注射用甘油与注射用水搅拌均匀,加热至70℃作为水相混合物;将油相混合物和水相混合物混合,加入注射用水定容,70℃下6000rpm高速剪切制备初乳,40℃下1000 bar高压均质5次制备终乳,氮气保护,灭菌分装。
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