CN112852657A - 植物乳杆菌及/或其代谢产物用于制备减肥组合物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种植物乳杆菌，其为植物乳杆菌TCI405，且此植物乳杆菌TCI405寄存于德国微生物保藏中心,寄存编号为DSM 33504。本发明更提供一种植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用于制备减肥组合物的用途。

Description

植物乳杆菌及/或其代谢产物用于制备减肥组合物的用途

技术领域

本发明关于一种植物乳杆菌，特别是关于一种植物乳杆菌TCI405(Lactobacillus plantarum TCI405)，以及其或其代谢产物用于制备减肥的组合物的用途。

背景技术

由于科技与农业的进步，使得人类在饮食上可以获得到充足供应，但也造成每日从饮食中所吸收的养分超过维持活动所需，多余养分便在体内转换成脂肪储存。在无法消耗过剩热量的情况下，常造成体重超重的状况。

过度精致化的饮食，并且缺乏运动、压力过大的状况下，也更会造成现代人常发生胆固醇代谢上的障碍。

发明内容

有鉴于此，如何协助现代人更轻松的进行体重的控制，是发明人重要的目标。是以本发明提供一种植物乳杆菌TCI405，以及其或其代谢产物用于制备减肥的组合物的用途。

在一些实施例中，一种植物乳杆菌，其为植物乳杆菌TCI405，寄存编号为 BCRC910983。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物可以抑制α-葡萄糖苷酶活性。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物具有下列蛋白质其中至少一种：硫酸酯酶结构域包含蛋白(Sulfatase domain-containing protein)、 ABC转运通透酶(ABC transporter permease)、脱氧鸟苷激酶(Deoxyguanosine kinase)、麸胺酰胺合成酶β亚基(Glutamate synthase subunit beta)、50S核糖体蛋白质L1(50S ribosomalprotein L1)及葡萄糖基神经酰胺酶 (Glucosylceramidase)。

在一些实施例中，一种植物乳杆菌或其代谢产物用于制备减肥的组合物的用途，其中植物乳杆菌TCI405是寄存于财团法人食品工业发展研究所其寄存编号为BCRC 910983的植物乳杆菌。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用以减少消化系统吸收淀粉及/或葡萄糖量。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用以抑制淀粉酶活性。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用以抑制α-葡萄糖苷酶活性。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用以减少细胞内脂肪堆积。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用以提升胆固醇代谢相关基因表现。

在一些实施例中，胆固醇代谢相关基因包括CETP基因、LDLR基因或 ABCA1基因其中至少一项。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405具备酸碱耐受性，其中该酸碱耐受性范围为pH值3到pH值8。

综上所述，任一实施例的植物乳杆菌TCI405或其代谢产物可以减少消化系统吸收淀粉及/或葡萄糖量、抑制淀粉酶活性、抑制α-葡萄糖苷酶活性、减少细胞内脂肪堆积、提升胆固醇代谢相关基因表现，从而达到减肥的用途。

以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。

附图说明

图1是植物乳杆菌TCI405于抑制淀粉酶活性实验的结果图。

图2是植物乳杆菌TCI405于抑制α-葡萄糖苷酶活性实验的结果图。

图3是植物乳杆菌TCI405人体环境模拟存活实验结果图。

图4是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图5是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图6是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图7是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图8是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图9是植物乳杆菌TCI405的质谱胜肽比对结果。

图10是植物乳杆菌TCI405于抑制细胞内脂肪堆积结果图。

图11是胆固醇相关基因表现量的结果图。

具体实施方式

植物乳杆菌TCI405(Lactobacillus plantarum TCI405)，是分离自巴西莓果的菌株。植物乳杆菌TCI405以寄存编号BCRC 910983寄存于财团法人食品工业发展研究所，以及以寄存编号DSM 33504寄存于德国微生物保藏中心。

植物乳杆菌TCI405为一种乳杆菌属(Lactobacillus)的革兰氏阳性杆菌，于厌氧环境下生长，生长温度于高于15℃但不超过45℃，可定殖于小肠。植物乳杆菌TCI405的酸碱耐受性范围为pH值3到pH值8，意即本菌株在模拟小肠、模拟胃液及模拟胆盐的环境下都有90％以上的存活率，故而能调整人体内肠胃道的菌相，以达调整人体新陈代谢。

植物乳杆菌TCI405或其代谢产物具有下列蛋白质其中至少一种：硫酸酯酶结构域包含蛋白(Sulfatase domain-containing protein)、ABC转运通透酶(ABC transporterpermease)、脱氧鸟苷激酶(Deoxyguanosine kinase)、麸胺酰胺合成酶β亚基(Glutamatesynthase subunit beta)、50S核糖体蛋白质L1(50S ribosomal protein L1)及葡萄糖基神经酰胺酶(Glucosylceramidase)。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物用于制备减肥的组合物的用途，其中植物乳杆菌TCI405是寄存于财团法人食品工业发展研究所其寄存编号为BCRC910983的植物乳杆菌，以及寄存在德国微生物保藏中心其寄存编号为DSM 33504的植物乳杆菌。

在一些实施例中，植物乳杆菌或其代谢产物用以减少消化系统吸收淀粉及/ 或葡萄糖量。

在一些实施例中，植物乳杆菌或其代谢产物用以抑制淀粉酶活性。

在一些实施例中，植物乳杆菌或其代谢产物用以抑制α-葡萄糖苷酶活性。

在一些实施例中，植物乳杆菌或其代谢产物用以减少细胞内脂肪堆积。

在一些实施例中，植物乳杆菌或其代谢产物用以提升胆固醇代谢相关基因表现。

在一些实施例中，胆固醇代谢相关基因包括CETP基因(GENE ID 1071)、 LDLR基因(GENE ID 3949)或ABCA1基因(GENE ID 19)其中至少一项。

其中，CETP(cholesterolester transfer protein)是血浆胆固醇酯转移蛋白，CETP促进各种脂蛋白之间脂质的交换和转运。意即CETP在完成和促进胆固醇逆转过程中充当着重要的角色，其为低密度脂蛋白(LDL)代谢中的重要的转运蛋白之一。CETP基因表现的提升可以使得体内的血浆胆固醇酯转移蛋白含量增加，进而导致低密度脂蛋白(LDL)含量降低。

其中，LDLR基因与低密度脂蛋白受体(Low-Density Lipoprotein Receptor，后续简称LDL受体)有关，LDL受体是一种膜镶嵌式蛋白质用以调控低密度脂蛋白的胞吞作用。意即LDL受体会使得细胞吸收外围低密度脂蛋白以进行代谢，从而移除过多的低密度脂蛋白。

其中，ABCA1基因表现提升可以使得高密度脂蛋白(High-density lipoprotein，HDL)含量增加。研究指出，高密度脂蛋白含量增加可以有效抑制心血管疾病的风险。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405藉由在人体内消化道的高定殖率，进一步调控消化道内碳水化合物的代谢吸收，以致调整新陈代谢并且可以减重。

在一些实施例中，植物乳杆菌TCI405的有效剂量为5x10¹⁰ CFU/天。

在一些实施例中，前述之组合物包含特定含量的植物乳杆菌TCI405或其代谢产物。

在一些实施例中，前述之组合物可为医药品。换言之，此医药品包含有效剂量的植物乳杆菌TCI405或其代谢产物。

在一些实施例中，前述之医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于经肠地道、非经肠地道(parenterally)、口服的、或局部地(topically) 投药剂型。

在一些实施例中，经肠道或口服的投药剂型可为，但不限于，锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)或类似之物。在一些实施例中，非经肠地道或局部地投药剂型可为，但不限于，注射品 (injection)、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(externalpreparation) 或类似之物。在一些实施例中，注射品的投药方式可为皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection) 或病灶内注射(intralesional injection)。

在一些实施例中，前述之医药品可包含被广泛地使用于药物制造技术之医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。在一些实施例中，医药上可接受的载剂可为下列载剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润湿剂 (wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似之物。关于选用之载剂的种类与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。在一些实施例中，作为医药上可接受的载剂的溶剂可为水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)、或含有醇的水性溶液(aqueous solutioncontaining alcohol)。

在一些实施例中，前述之组合物可包括食品产品，该食品产品包含特定含量的植物乳杆菌TCI405或其代谢产物。

在一些实施例中，食品产品可为一般食品、保健食品或膳食补充品。换言之，此一般食品、保健食品(health foods)或膳食补充品包含有效剂量的植物乳杆菌TCI405或其代谢产物。

在一些实施例中，前述之食品产品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于口服的剂型。在一些实施例中，前述之一般食品可为食品产品本身或为另一食品产品的添加物(food additive)。在一些实施例中，一般食品可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)或调味料。

例1：菌种鉴定

首先，将分离自巴西莓果的果实(Euterpe oleracea全果)的分离菌株进行菌种鉴定。透过聚合酶连锁反应(PCR)得到此分离菌株的16S核醣体基因 (16SrDNA)序列(即SEQIDNO:1)。接着，将SEQID NO:1序列以美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站与其他植物乳杆菌(如表一所示)之16S 核醣体基因(16SrDNA)进行序列比对后可知，此分离菌株的16SrDNA序列与其他植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的相似性为96.49％(如表一所示)。因此，将此分离菌株命名为植物乳杆菌TCI405。

表一

例2：植物乳杆菌TCI405的保存及培育实验

首先，使用液态培养基(MRS)培养分离所得的植物乳杆菌TCI405以得到菌液，然后将菌液与甘油以4:1的比例混合。之后，将菌液与甘油的混合液置于 -80℃下进行保存。

接下来，将植物乳杆菌TCI405以1％的植菌量(约1x10⁴CFU/mL)接种于MRS培养基(BD Difco^TM Lactobacilli MRS Broth，1％(v/v))中，并于37℃且厌氧环境下培养18小时后形成TCI405菌液。

将植物乳杆菌TCI405菌液以5000rpm转速进行离心5分钟取得上清液，将上清液以0.2μm的滤膜进行过滤，所得滤液即为TCI405样品(即TCI405 样品含有植物乳杆菌TCI405之代谢产物)。

例3：α-淀粉酶活性测试

3-1.溶液配置

含有6mM氯化钠的0.02穆尔浓度(M)磷酸钠缓冲溶液(Sodium phosphate buffer)(以下简称NaCl-Pi缓冲溶液)：将0.7356克的磷酸一氢钠(购自 J.T.Baker，编号3828-01)、0.5492克的磷酸二氢钠(购自Sigma，编号04270) 及1.7532克的氯化钠(购自第一化工，编号C4B07)混合并溶于500毫升的水 (H2O)中，以配置含有6mM氯化钠且酸碱值(pH)为6.3的NaCl-Pi缓冲溶液。

2当量浓度(N)氢氧化钠(NaOH)溶液：以8克氢氧化钠(购自Macron，编号7708-10)溶于100毫升水中，以配置2N的氢氧化钠溶液。

二硝基水杨酸颜色试剂(Dinitrosalicylic acid color reagent，以下称终止剂)：将1克3,5-二硝基水杨酸(购自Sigma，编号D0550)溶入50毫升去离子水中，再缓慢加入30克酒石酸钾钠(sodium potassium tartrate tetrahydrate，购自Sigma，编号32312)及缓慢加入20毫升2N氢氧化钠溶液，并以去离子水定量至100 毫升。于此，可得到终止剂。

1％淀粉溶液：秤取1克淀粉(购自Sigma，编号S9765)至100毫升NaCl-Pi 缓冲溶液并缓慢加热使淀粉完全溶解于NaCl-Pi缓冲溶液中，待加热后的含有淀粉的NaCl-Pi缓冲溶液降至室温后，以水定量至100毫升。于此，可得到1％淀粉溶液。

α-淀粉酶(α-amylase)溶液(5单位/毫升)：将0.0096克α-淀粉酶(购自Sigma，编号A3176)溶解于25毫升NaCl-Pi缓冲溶液。于此，可得到每毫升5单位的α-淀粉分解酶溶液。

3-2.测试流程

于此，以例2所培育的TCI405样品作为测试样品。也就是说淀粉溶液、α-淀粉酶及测试样品混合后，在反应时间点为0分钟时为空白组，其系代表α -淀粉酶并无与淀粉产生反应的情况，而反应时间点10分钟时为实验组，其系代表α-淀粉酶、淀粉与测试样品已进行10分钟反应的。于此。实验进行三次重复。

流程如下，取200μL的测试样品至离心管中，接着于离心管中加入200 μL的α-淀粉酶溶液(5单位/毫升)，并进行震荡以将离心管内的测试样品及α-淀粉酶溶液混合均匀以形成待反应溶液。接着，将离心管置于25℃环境下反应10分钟。

将反应起始点(0分钟)的空白组加入400μL的终止剂至离心管中与待反应溶液混合均匀，再加入200μL的1％淀粉溶液并于25℃下静置10分钟以形成未反应溶液。换言之，在反应起始点(0分钟)的空白组别中，α-淀粉酶不会与淀粉产生反应。

将反应终止点(10分钟)的实验组别加入200μL的1％淀粉溶液至离心管中，使1％淀粉溶液与待反应溶液混合均匀以形成混合溶液。将装有混合溶液的离心管置于25℃下反应10分钟以形成反应溶液，然后再加入400μL的终止剂与反应溶液混合均匀，以停止淀粉与α-淀粉酶的反应。

接着，将所有组别置于沸水(100℃)中反应5分钟，并冷却至室温(25 ℃)，以形成待测溶液。从各组别分别取出150μL待测溶液与850μL水混合以稀释待测溶液。接着取200μL稀释后的待测溶液至96孔盘中，并测量其在 540nm下之吸光值。

3-3.实验结果

根据下列公式(1)计算实验组相对于控制组的淀粉酶活性，如图2所示。换言之，是将控制组的淀粉酶活性视为100％，来计算实验组的淀粉酶活性。

公式(1)

其中，α-Amylase活性代表淀粉酶活性；A_540nm(Sample_10min-Sample_0min)代表反应终止点(10分钟)的待测溶液在540nm下之吸光值与反应起始点(0分钟)的待测溶液在540nm下之吸光值之间的差值，且此测试组别为实验组。 A_540nm(Control_10min-Control_0min)代表反应终止点(10分钟)的空白组在540nm 下之吸光值与反应起始点(0分钟)的空白组在540nm下之吸光值之间的差值。

请参阅图1。相较于空白组(即其淀粉酶活性视为100％)，实验组的淀粉酶活性为26.12％。换言之，实验组的淀粉酶活性相对于空白组明显下降73.88％。由此可知，植物乳杆菌TCI405对于淀粉酶的活性具有很高的抑制能力。

例4：葡萄糖苷酶活性测试

4-1.溶液配置

0.1穆尔浓度(M)磷酸钠缓冲溶液(Sodium phosphate buffer，以下简称 Pi缓冲溶液)：将4.7283克的磷酸一氢钠(购自J.T.Baker，编号3828-01)及 2.0028克的磷酸二氢钠(购自Sigma，编号04270)混合并溶于400毫升的逆渗透水(RO水)中，并以定量瓶定量至500毫升，以得到酸碱值(pH)为7.0 的Pi缓冲溶液。

2.5mM对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷(p-Nitrophenylβ-D-glucopyranoside, PNPG)：秤取0.0377克PNPG以逆渗透水(RO水)定量至100毫升。

0.2M碳酸钠(Na2CO3)：秤取2.1198克碳酸钠(购自Sigma，编号31432) 以RO水定量至100毫升，作为葡萄糖苷酶的终止剂。

0.2单位/毫升(units/ml)α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，购自sigma ChemicalCo.(St.Louis,MO,G5003-100UN))溶液：取3.85毫克的固态α- 葡萄糖苷酶以2.0毫升的0.1M Pi缓冲溶液溶解，以得到50U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液。接着，取0.1毫升50U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液并以RO水定量至25毫升，即可得到0.2U/毫升α-葡萄糖苷酶溶液。

4-2.比对菌株相关信息

其他比对菌株包括菌株L24、菌株L26、菌株L30、菌株L32、菌株L33 及菌株L36。

菌株L24分自巴西莓果。菌株L24的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:2)。并且，以NCBI网站与其他芽孢乳酸菌(Bacillus coagulans) (如表二所示)之16S核醣体基因进行序列比对，可得到L24菌株的16SrDNA 序列与其他芽孢乳酸菌的相似性在96.53％至96.38％。

表二

菌株L26分自巴西莓果。菌株L26的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:3)。并且，以NCBI网站与其他芽孢乳酸菌(如表三所示)之16S 核醣体基因进行序列比对，可得到L26菌株的16SrDNA序列与其他芽孢乳酸菌的相似性在97.27％至97.12％。

表三

菌株L30分自巴西莓果。菌株L30的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:4)。并且，以NCBI网站与其他植物乳杆菌(如表四所示)之16S 核醣体基因进行序列比对，可得到菌株L30的16SrDNA序列与其他植物乳杆菌的相似性在89.60％至89.66％。

表四

菌株L32分自巴西莓果。菌株L32的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:5)。并且，以NCBI网站与其他植物乳杆菌(如表五所示)之16S 核醣体基因进行序列比对，可得到L32菌株的16SrDNA序列与其他植物乳杆菌的相似性在96.58％至96.50％。

表五

菌株L33分自巴西莓果。菌株L33的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:6)。并且，以NCBI网站与其他植物乳杆菌(如表六所示)之16S 核醣体基因进行序列比对，可得到菌株L33的16SrDNA序列与其他植物乳杆菌的相似性在97.10％至96.11％。

表六

菌株L36分自巴西莓果。菌株L36的16S核醣体基因(16SrDNA)序列(即 SEQID NO:7)。并且，以NCBI网站与其他副干酪乳杆菌(如表七所示)之 16S核醣体基因进行序列比对，可得到L36菌株的16SrDNA序列与其他副干酪乳杆菌的相似性在97.87％至97.24％。

表七

4-3.测试流程

于此，以例2所制备的TCI405样品作为测试样品的组别为实验组，并且以上述4-2所述的各对比菌株作为测试样品的组别为控制组。并且，实验组及控制组以反应时间点分为实验组(0分钟)、控制组(0分钟)、实验组(15 分钟)及控制组(15分钟)。其中，实验组(0分钟)及控制组(0分钟)代表葡萄糖苷酶并无与PNPG反应的组别(以下称反应起始点(0分钟))，而实验组(15分钟)及控制组(15分钟)代表葡萄糖苷酶与PNP进行15分钟反应的组别(以下称反应终止点(15分钟))。

表八

依照表八，取160μL的测试样品至96孔盘中，接着分别于各孔中加入20 μL Pi缓冲溶液以形成待反应溶液。

反应起始点(0分钟)的测试组别：加入20μL的Pi缓冲溶液至对应的孔中与待反应溶液混合均匀并于25℃下反应10分钟。于反应10分钟后，于每孔中加入20μL的2.5mM PNPG，并将待反应溶液、Pi缓冲溶液及PNPG混合均匀后置于37℃下反应15分钟以形成0分钟组反应溶液。于0分钟组反应溶液中加入80μL终止剂。接着，于0分钟组反应溶液与终止剂混合均匀后，测量其在405nm下之吸光值。

反应终止点(15分钟)的测试组别：将加入20μL的0.2单位/毫升α-葡萄糖苷酶溶液至对应的孔中与待反应溶液混合均匀并于25℃下反应10分钟，以活化α-葡萄糖苷酶。于反应10分钟后，再于每孔中加入20μL的2.5mM PNPG，并将待反应溶液、α-葡萄糖苷酶溶液及PNPG混合均匀后置于37℃下反应15分钟，使活化的α-葡萄糖苷酶与PNPG作用，以形成15分钟组反应溶液。于15分钟组反应溶液中加入80μL终止剂，以中止α-葡萄糖苷酶的活性。接着，于15分钟组反应溶液与终止剂混合均匀后，测量其在405nm下之吸光值。

4-4.实验结果

根据下列公式(2)计算各组的葡萄糖苷酶活性，如图2所示。换言之，是将空白组的葡萄糖苷酶活性视为100％，来计算实验组的葡萄糖苷酶活性。

公式(2)

其中，α-Glucosidase活性代表葡萄糖苷酶活性；A_405nm(Sample_15min-Sample _0min)代表反应终止点(15分钟)的实验组(或控制组)在405nm下之吸光值与反应起始点(0分钟)的实验组(或控制组)在405nm下之吸光值之间的差值。 A_405nm(Control_15min-Control_0min)代表反应终止点(15分钟)的空白组在405nm 下之吸光值与反应起始点(0分钟)的空白组在405nm下之吸光值之间的差值。

请参阅图2，相较于空白组(即其葡萄糖苷酶活性视为100％)，实验组的葡萄糖苷酶活性为0％。换言之，实验组的葡萄糖苷酶活性相对于空白组明显下降100％。由此可知，植物乳杆菌TCI405对于葡萄糖苷酶活性的抑制能力非常高。对比于其他同样自巴西莓果所分离出来的菌株L24、菌株L26、菌株L30、菌株L32、菌株L33及菌株L36，其葡萄糖苷酶活性的抑制能力明显高于其他菌株。尤其是菌株L33、L32及L30与植物乳杆菌TCI405同样属于植物乳杆菌，但是其对于葡萄糖苷酶活性完全不具备抑制性。

例5：酸碱耐受性测试

于此，将植物乳杆菌TCI405以缓冲液、人工胃液(pH 3)、人工胆盐(pH 7)、人工小肠液(pH 8)进行测试，以确认植物乳杆菌TCI405于生物体消化道中的酸碱耐受性。其中，缓冲液为0.2穆尔浓度(M)氯化钾(KCL,型号 Sigma-Aldrich P9333)且pH值为7。人工胃液为0.2M氯化钾且pH值为3。人工胆盐为0.2M氯化钾及0.3重量％的牛胆盐(购自Difco^TMOxgall，型号 212820)且pH值为7。人工小肠液为0.1M的三羟甲基氨基甲烷(购自Sigma)，且PH值为8。

于此，以例2所培育的TCI405样品作为测试样品。

接着，将TCI405样品取1％(V/V)的浓度接种至20毫升的待测溶液中，然后以转速50rpm于37℃下震荡培养3小时。其中，四个组别的待测溶液分别为人工小肠液(第一实验组)、人工胃液(第二实验组)、人工胆盐(第三实验组)及氯化钾缓冲液(空白组)。从培养后的菌液取100微升(μL)的菌液涂盘，并于28℃下静置培养3天，并于3天后以肉眼计数各组别的活菌数(计算固态YPD培养基上的菌落数)。

请参阅图3。相较于空白组(即其菌体存活率为100％)，第一实验组菌体存活率为94％，第二实验组菌体存活率为92％，第三实验组菌体存活率为90％。换言之，不论是在PH5、PH7或PH8的环境下，植物乳杆菌TCI405皆具有90％以上的存活率(也可称为定殖率)。由此可知，植物乳杆菌TCI405具有耐胃酸、耐胆盐及耐小肠液的能力。

例6：菌体蛋白质分析

首先，以例2所制得的TCI405菌液与MRS培养基配置OD600＝0.1OD的初始菌液，并将初始菌液于37℃且厌氧环境下培养隔夜。

将待测菌液以高速离心机(Heraeus Megafuge 16centrifuge，ThermoScientific)以5000XP转速离心20分钟，然后去除上清液，并保留沉淀物(即到菌体)。接着，以50毫升(mL)裂解缓冲液(Lysis Buffer)回溶菌体，再加入1μ g/ml的氧核糖核酸酶(DNAse)并于室温下反应10分钟，以形成待破菌液。于此，裂解缓冲液是由50mM NaH2PO4、300mM NaCl及1mM MgCl2所制得，并且其pH值为7。

反应后，将待破菌液以高压破菌机(Constant System TS series CF1)分别以25Kpsi、30Kpsi及32Kpsi三种压力进行三次破菌以得到破菌液。

将破菌液以冷冻抽干机(EYELA)在-80℃低温及真空环境下干燥24小时，把破菌液中的水分直接以升华为水蒸气的方式除去以得到干燥后的破菌。

接着，以二次水及三氟乙酸为溶剂将上述干燥后的破菌配置为30mg/ml的样本，将样本使用高效液相色谱仪(High Performance Liqid Chromatography)设定检测波长220,280nm，流速0.5ml/min，柱温40℃，进样体积20μL，梯度设定 ACN 0％-45％进行分离，并将分离出的胜肽分馏物(fractions)以冷冻抽干机 (EYELA)在-80℃低温及真空环境下干燥48小时得粗分离胜肽。

将粗分离胜肽以300μ的无菌水回溶后，取出10μl粗分离胜肽水溶液以奈米级液相层析仪(UltiMate 3000RSLCnano LC Systems)进行分离，再经由飞行时间式串联质谱仪系统(Q-TOF Mass Spectrometry:

6600System) 分析所分离出来的胜肽之分子质量，并将质量比对于NCBI及UniProt数据库，可得到结果如图4到图9。

也就是说，植物乳杆菌TCI405或其代谢产物可测得包括有下列蛋白质，如硫酸酯酶结构域包含蛋白(Sulfatase domain-containing protein)、ABC转运通透酶(ABCtransporter permease)、脱氧鸟苷激酶(Deoxyguanosine kinase)、麸胺酰胺合成酶β亚基(Glutamate synthase subunit beta)、50S核糖体蛋白质 L1(50S ribosomal proteinL1)及葡萄糖基神经酰胺酶(Glucosylceramidase)等。

例7：脂质油滴堆积量测试

7-1.溶液配置

于此，所使用的前脂肪细胞增殖培养基(pre-adipocyte expansion medium) 为添加有20vol％FBS(品牌：Gibco)及1vol％盘尼西林-链霉素之最低必需培养基α(MinimumEssential Medium Alpha，MEMα，品牌：Gibco)。所使用的分化培养基(differentiationmedium)为添加有20vol％FBS(品牌：Gibco)及 1vol％盘尼西林-链霉素之MEMα(品牌：Gibco)。并且，将油-红O染色试剂 (品牌：Sigma)彻底溶解于100％异丙醇(isopropanol，供货商：ECHO)以配制3mg/mL之油-红O染色试剂的储备溶液。为获得可供使用的油-红O工作溶液(oil-red O working solution)，于使用前实时将油-红O染色试剂的储备溶液以二次水(ddH2O)稀释至浓度1.8mg/mL，即为60％油-红O染色试剂的储备溶液。

7-2.检测流程

首先，以每孔8×10⁴个细胞的细胞数，将小鼠骨髓基质细胞株OP9(购自

编号CRL-2749^TM)接种于含有500μL前脂肪细胞增殖培养基的24 孔培养盘的各孔中，并置于37℃下培养7天。于7天的培养期间，每3天更换一次新鲜的500μL分化培养基。于培养7天后，使用显微镜(厂牌：ZEISS) 观察各孔中的细胞内的油滴(lipid droplet)形成以确认细胞完全分化成脂肪细胞，供后续实验使用。

将脂肪细胞分成实验组以及空白组。移除各组别的分化培养基，并更换成每孔500μL实验培养基，然后置于37℃下接续培养7天。于7天的培养期间，每3天更换一次新鲜的500μL实验培养基。其中，实验组的实验培养基为含有0.0125vol％例2所制备的TCI405样品。空白组的实验培养基为单纯的分化培养基。

接着，移除各孔中的实验培养基并以1xDPBS润洗二次。继而，于各孔内添加1mL的10％甲醛(formaldehyde，供货商：ECHO)并于室温下培养30分钟，藉以固定细胞。之后，移除各孔内的甲醛并以1X DPBS对各孔润洗二次。于再次润洗后，添加1mL的60％异丙醇至每孔中并作用1分钟。接着，移除异丙醇，再添加1mL油-红O工作溶液并于室温下作用1小时。

于作用1小时后，移除油-红O工作溶液并以1mL的60％异丙醇快速退染 5秒。接着，加入100％异丙醇至各孔中，并置于振荡器(shaker)上反应10 分钟以溶解染剂。然后，从各孔中取100μL前述之染剂-异丙醇溶液至96孔培养盘并于510nm的波长下以ELISA读取仪(厂牌：BioTek)读取各孔的吸光值(OD510)。

于量测后，藉由将所测得的吸光值代入下列公式(3)而计算出脂质油滴堆积量(％)。换言之，是将空白组的脂质油滴堆积量视为100％来计算各组别的脂质油滴堆积量(％)。

公式(3)

脂质油滴堆积量(％)＝(OD₅₁₀ sample/OD₅₁₀ control)×100％ (3)

其中，OD₅₁₀ sample代表欲换算之组别的吸光值，而OD₅₁₀ control代表空白组的吸光值。

7-3.实验结果

参阅图10。以空白组的脂质油滴堆积量为100％的情况下，而实验组的脂质油滴堆积量只有60％。由此可知，植物乳杆菌TCI405能有效地抑制脂肪累积，具有减少受体的脂肪形成的功能，进而达成减肥之功能。

例8：胆固醇相关基因表现

8-1.检测目标及溶液配置

本次试验采用人类的肝癌细胞Hep G2(后续简称肝细胞)，购自美国典型培养物保存中心(American Type Culture Collection，

)之Hep G2细胞株(ATCC HB-8065^TM)。

培养基采用细胞培养于购自Gibco(美国)含有10％之胎牛血清(Fetal BovineSerum)以及90％之DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium,Gibco； Cat.11965-092)，并加入1％之青霉素-链霉素(Gibco；Cat.15140122)。

10X DPBS杜氏磷酸盐缓冲液(购自Gibco；Cat.14200-075)。

RB Buffer缓冲液(购自Geneaid；Cat.RP050)。

8-2.操作流程

首先，取6孔培养盘将每孔接种1×10⁶个肝细胞及2mL的培养基并培养隔夜。将培养完成的肝细胞分为二组：实验组与控制组。

空白组：仅添加培养基，然后在37℃下培养24小时。

实验组：添加TCI405样品，然后在37℃下培养6、24及48小时。

将培养后的实验组及空白组的细胞去除上清液之后，以1X DPBS缓冲液清洗一次，再加入600μL的RB Buffer以裂解细胞膜而分别形成二组细胞溶液。

接着，使用RNA萃取试剂套组(购自Geneaid公司，中国台湾，Lot No.FC24015-G)分别收集二组细胞溶液内之RNA。接着，每组取1000奈克(ng) 所萃取出的RNA为模板，藉由

III反转录酶(购自Invitrogene 公司，美国，编号18080-051)以引子黏合进行反转录作用产生相应之cDNA。后续利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific 公司，美国)，以及KAPA SYBR FAST(购自Sigma公司，美国，编号38220000000)将二组反转录后产物分别以表二之组合引子进行定量实时反转录聚合酶连锁反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chainreaction)以观察实验组和控制组的PBMC细胞的基因的表现量。定量实时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应1秒，60℃反应20秒，总共40 个循环，并使用2-ΔCt方法进行基因定量。于此，藉由cDNA进行定量实时反转录聚合酶连锁反应可间接定量各基因的mRNA表现量，进而推断各基因编码的蛋白质的表现量，如图11所示。

表九

参考图11。将空白组的CETP基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的CETP基因的表现量为1.8，也就是说，相较于空白组，实验组的CETP基因的表现量显著地的提高。

将空白组的LDLR基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的LDLR 基因的表现量为1.13，也就是说，相较于空白组，实验组的LDLR基因的表现量显著地的提高。

将空白组的ABCA1基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的 ABCA1基因的表现量为1.14，也就是说，相较于空白组，实验组的ABCA1基因的表现量显著地的提高。

于此，相较于空白组，实验组的三种基因的表现量均有显著的差异；其中， CETP基因的表现量，更具有高度差异。

需要特别说明的是，图11中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为1来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。其中，使用 Excel软件之STDEV公式计算标准偏差，并在Excel软件中以单尾学生t检验 (Student t-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中，「*」代表相对于空白组p值小于0.05，「**」代表相对于空白组p值小于0.01，以及「***」代表相对于空白组p值小于0.001。

由此可知，当胃细胞存在有植物乳杆菌TCI405的情况下，可以明显提高胆固醇相关相关基因的表现量。也就是说，植物乳杆菌TCI405可以有效提升胆固醇的代谢率，从而降低体内胆固醇含量。

虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明之精神所作些许之更动与润饰，皆应涵盖于本发明的范畴内，因此本发明之保护范围当视后附之申请专利范围所界定者为准。

当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。

【生物材料寄存】

财团法人食品工业发展研究所(中国台湾)；公元2020年3月27日；寄存编号为BCRC910983。

德国微生物保藏中心(德国)；公元2020年4月17日；寄存编号为DSM 33504。

【序列表】

<110> 大江生医股份有限公司

<120> 植物乳杆菌及/或其代谢产物用于制备减肥组合物的用途

<150> 62/940,948

<151> 2019-11-27

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1196

<212> DNA

<213> Lactobacillus plantarum TCI405

<400> 1

ggccggggcg gggtgcctaa tacatgcaag tcgaacgact ctggtattga ttggtgcttg 60

catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt aacacgtggg aaacctgccc 120

agaagcgggg ataacacctg gaaacagatg ctaataccgc ataacaactt ggaccgcatg 180

gtccgagctt gaaagatggc ttcggctatc acttttggat ggtcccgcgg cgtattagct 240

agatggtggg gtaaggctca ccatggcaat gatacgtagc cgacctgaga gggtaatcgg 300

ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc 360

acaatggacg aaagtctgat gagcaacgcc gcgtgagtga agaagggttt cggctcgtaa 420

aactctgttg ttaaagaaga acatatctga gagtaactgt tcaggtattg acggtattta 480

accagaaagc cacggctaac tacgtgccgc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt 540

gtccggattt attgggcgta aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc 600

ttcggctcaa ccgaagaagt gcatcggaaa ctgggaactt gagtgcagaa gaggacagtg 660

gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg 720

gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagtatg ggagcaaaca ggattagata 780

ccctggtagt ccataccgta aacgatgaat gctaagtgtt ggagggtttc cgcccttcag 840

tgctgcagct aacgcattaa gcattccgcc tggggagtac ggccgcaagc tgaaactcaa 900

aggaatgacg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgagc tacgcgaaga 960

ccttaccagt cttgacatac tatgcaaatc tagagataga cgttcctttc ggggactgat 1020

acaggtggtg catgcgtcgt cagctcgtgt cttgaaattg ttgggtaagt tccgcacgag 1080

cgccaccgta ttatcagtgc agcatagttg ggcactctgg tgaagctgcg ttacatcgaa 1140

gaagtgggat gactcatcat catgccttag actgcctcac ccacgggtgt ctacca 1196

<210> 2

<211> 1193

<212> DNA

<213> Bacillus coagulans L24

<400> 2

gccggggggg cgggctatac atgcaagtcg tgcggacctt ttaaaagctt gcttttaaaa 60

ggttagcggc ggacgggtga gtaacacgtg ggcaacctgc ctgtaagatc gggataacgc 120

cgggaaacgg ggctaatacc ggatagtttt ttcctccgca tggaggaaaa aggaaagacg 180

gcttctgctg tcacttacag atgggcccgc ggcgcattag ctagttggtg gggtaacggc 240

tcaccaaggc aacgtgcgta gccgacctga gagggtgatc ggccacattg ggactgagac 300

acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt ccgcaatgga cgaaagtctg 360

acggagcaac gccgcgtgag taagaaggcc ttcgggtcgt aaaactctgt tgccggggaa 420

gaacaagtgc cgttcgaaca gggcggcgcc ttgacggtac ccggccagaa agccacggct 480

aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc 540

gtaaagcgcg cgcaggcggc ttcttaagtc tgatgtgaaa tcttgcggct caaccgcaag 600

cggtcattgg aaactgggag gcttgagtgc agaagggaga gtggaattcc acgtgtagcg 660

gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcggctctct ggtctgtaac 720

tgacgctgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gaaccctggt agtccacgcc 780

gtaaacgatg agtgctaagt gttagagggt ttccgccctt tagtgctgca gctaacgcat 840

taagcactcc gcctggggag tacggccgca aggctgaaac tcaaaggaat gacgggggcc 900

cgcacagcgg tggagcatgt ggtttaaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccagtctt 960

gacatcctct gatcctccct gagacagggc cttccccttt cggggacaga agtgacggtg 1020

gtgcatgatg tcgtcagctc gtgtcgtgga attgtggtta agtcccgcac gagcgcaacc 1080

cttgacttag ttgcagcatg cagtggcact ctaggtgact gcggtgacac gagatgtgga 1140

tgagtcatca tcaggcctat gactgggtct aacacacggt gtcttcacaa atg 1193

<210> 3

<211> 1192

<212> DNA

<213> Bacillus coagulans L26

<400> 3

acgggggggc gtgctataca tgcaagtcgt gcggaccttt taaaagcttg cttttaaaag 60

gttagcggcg gacgggtgag taacacgtgg gcaacctgcc tgtaagatcg ggataacgcc 120

gggaaacggg gctaataccg gatagttttt tcctccgcat ggaggaaaaa ggaaagacgg 180

cttcggctgt cacttacaga tgggcccgcg gcgcattagc tagttggtgg ggtaacggct 240

caccaaggca acgagcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacattgg gactgagaca 300

cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360

cggagcaacg ccgcgtgagt gagaaggcct tcgggtcgta aaactctgtt gccggggaag 420

aacaagtgcc gttcgaacag ggcggcgcct tgacggtacc cggccagaaa gccacggcta 480

actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg 540

taaagcgcgc gcaggcggct tcttaagtct gatgtgaaat cttgcggctc aaccgcaagc 600

ggtcattgga aactgggagg cttgagtgca gaagagagag tggaattcca cgtgtagcgg 660

tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cggctctctg gtctgtaact 720

gacgctgagg cgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag atccctggta gtccacgccg 780

taaacgatga gtgctaagtg ttagagggtt tccgcccttt agtgctgcag ctaacgcatt 840

aagcactccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatg acgggggccc 900

gcacaagcgg ggggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct ttaccagtct 960

tgacatcctc tgatcctccc tggagacagg gccttcccct tcgggggaca gagtgaaggt 1020

gatgcatgga tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggt taagtcccgc aacgagcgcc 1080

acccatgact tagtgccagc attcagtggc actctaggtg actgccgtga ccatcgagag 1140

tggtgacgtc atcatcatgc cttatgactt gggcttacac acggtgcctc ag 1192

<210> 4

<211> 1237

<212> DNA

<213> Lactobacillus plantarum L30

<400> 4

acaggggggg tgctacactg cagtcgaacg atctctggta ttgattgttg cttgcatcat 60

gatttaattt gaatgaatgg cgaactggtg agcccccttc gggaaacctg cccagaaacg 120

gggatatacc tggatcagat gctcctgccg catgacgact tggaccgcag ggtcccagct 180

tgaaagatgg cttccgctat cacttttgga tggtcccgcg gattattaac tagatggtgg 240

ggtaacggct cacctggaaa tgatacgtac ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg 300

gactgaaaca cggcccaaac tcctacggga ggggcagtag ggaatcttcc acaatggacg 360

aaagtctgat ggagcctccc ccgtgagtga agaagggttt cggctcgtaa aactctgttg 420

ttaaagaaga acatatctga tagtaactgt tcacgtattg actgtattta accagaaagc 480

cacggctaac tacgtgccac catccgcgaa atacttaggt ggcaaacgtt gtccggattt 540

gttgggcgta aagcgagcgc acgctgtttt ataagtctga tgtgaaagcc ttcggctcaa 600

ccgaagaagt gcatcgggag actgggaaac ttgaggcaga agaggacagt ggaaatccat 660

gtgtaacggt gaaatgcgaa gatatatgta agaacaccag tggcgaatga ggatgtctgg 720

tctgtagctg acactgaggc tcaaaagtat gggtagcaca cagattagat agcctggaag 780

tccataccgt aaacgatgga tgctaagtgt tggagggttt ccgcccttga ctgctgcagc 840

tacgcattaa gcattccgcc tggggagtac agtcgcaggc tgaaactcac ggaattgacg 900

ggggcccgca ttagatggtg cagcatgtag tttactcgag ctacgcgaga ccataccagg 960

tcttgactac ttgcccatct agagatttca cgtgccttcg atgactggca tcagtctgtc 1020

atgattgtct tcgtttcgtg tcgcgagatg ttggatctac gttcccgagc tagcgccacc 1080

cttatgatca gtatgtcaac ggataacttg cggcgactct agctcgaact tgacgttgac 1140

aaaagcgtag acggtgtgac tgacattcga cctggcatgt acctatgtac ttggtcagcc 1200

actgtgctca tatcgatgtc taccacgaat gttatgc 1237

<210> 5

<211> 1201

<212> DNA

<213> Lactobacillus plantarum L32

<400> 5

gagggggggg gtgctatact gcaagtcgaa cgaactctgg tattgattgg tgcttgcatc 60

atgatttaca tttgagtgag tggcgaactg gtgagtaaca cgtgggaaac ctgcccagaa 120

gcgggggtaa cacctggaaa cagatgctaa taccgcataa caacttggac cgcatggtcc 180

gagcttgaaa gatggcttcg gctatcactt ttggatggtc ccgcggcgta ttagctagat 240

ggtggggtaa cggccaccat ggcaatgata cgtagccgac ctgagagggt aatcggccac 300

attgggactg agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa 360

tggacgaaag tctgatggag cacgccgcgt gagtgaagaa gggtttcggc tcgtaaaact 420

ctgttgttaa agaagaacat atctgagagt aactgttcag gtattgacgg tatttaacca 480

gaaagccacg gctaactacg tgccagcacc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc 540

ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa gtctgatgtg aaagccttcg 600

gctcaaccga agaagtgcat cggaaactgg gaaactgagt gcagaagagg acagtggaac 660

tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aatgcggctg 720

tctggtctgt aactgacgct gaggctcgaa agtatgggta gcaacaggat tagataccct 780

ggtagtccat accgtaaacg atgaatgcta agtgttggag ggtttccgcc cttcagtgct 840

gcagctaacg cattaagcat tccgcctggg gagtacagcc gcaaggctga ctcaaacgga 900

gttgacgggg gcccgcacta gcggtggagc atgtagctta ttcgagctac gcgaggatct 960

ttaccaggtc atgacttact atgcaaatct agagattaga cgttcccgtt cggggaatgc 1020

atacagtgtg catgttgtcg tcagcttcgt gtcgtgagat gtggtctagt cccgcaagct 1080

agcgcaacct tattatcagt tgccagcata gctcggcact ctaggttgga actgccggtg 1140

acaatcggag agttggatga ctcatctcag tcccttgact ggctagcacg ggtctacatt 1200

g 1201

<210> 6

<211> 1200

<212> DNA

<213> Lactobacillus plantarum L33

<400> 6

aggggggggg ggtgctatac atgcaagtcg acgaactctg gtattgattg gtgcttgcat 60

catgatttac atttgagtga gtggcgaact ggtgagtaac acgtgggaaa cctgcccaga 120

agcggggata acacctggaa acagatgcta ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc 180

cgagcttgaa agatggcttc ggctatcact tttggatggt cccgcggcgt attagctaga 240

tggtggggta acggtcacca tggcaatgat acgtagccga cctgagaggg taatcggcca 300

cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccaca 360

atggacgaaa gtctgatgga gaacgccgcg tgagtgaaga agggtttcgg ctcgtaaaac 420

tctgttgtta aagaagaaca tatctgagag taactgttca ggtattgacg gtatttaacc 480

agaaagccac ggctaactac gtgccagcgc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc 540

cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg cggtttttta agtctgatgt gaaagccttc 600

ggctcaaccg aagaagtgca tcggaaactg ggaaattgag tgcagaagag gacagtggaa 660

ctccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct 720

gtctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagtatgggt agaaacagga ttagataccc 780

tggtagtcca taccgtaaac gatgaatgct aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc 840

tgcagctaac gcattaagca ttccgcctgg ggagtacggc cgcaaggcta aactcaaagg 900

aattgacggg ggcccgcaca agcgtggagc atggtggttt tattcgaagc tacgcgaaga 960

tcctaccagg tcttgacata ctattgcaat tctaagagat tagacgttcc tttcggacat 1020

gaatacagtg ttgcatgtgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgtggttaag tcccgcaacg 1080

gacgcaccct tataatcagt tgcagcatag tggtacttct ggtggaactg cggtaccacc 1140

gagtgtggga tgactcatct acatgcctat gactggccct accacacggg ttctcgcaag 1200

<210> 7

<211> 1203

<212> DNA

<213> Lactobacillus paracasei L36

<400> 7

ggggcggggc gcgtgcctaa tacatgcaag tcgaacgagt tctcgttgat gatcggtgct 60

tgcaccgaga ttcaacatgg aacgagtggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc 120

ccttaagggg ggataacatt tggaaacaga tgctaatacc gcatagatcc aagaaccgca 180

tggttcttgg ctgaaagatg gcgtaagcta tcgcttttgg atggacccgc ggcgtattag 240

ctagttggtg aggtatggct caccaaggcg atgatacgta gccgaactga gaggttgatc 300

ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 360

ccacaatgga cgcaagtctg aggagcaacg ccgcgtgagt gaagaaggct ttcgggtcgt 420

aaaactctgt tgttggagaa gaatggtcgg cagagtaact gttgtcggcg tgacggtatc 480

caaccagaaa gccacggcta actacgtgca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg 540

ttatccggat ttattgggcg taaagcgagc gcaggcggtt ttttaagtct gatgtgaaag 600

ccctcggctt aaccgaggaa gcgcatcgga aactggaaac ttgagtgcag aagaggacag 660

tggaactcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg 720

cggctgtctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagca tggtagcgaa caggattaga 780

taccctggta gtccatgccg taaacgatga atgctaggtg ttggagggtt tccgcccttc 840

agtgccgcag ctaacgcatt aagcattccg cctggggagt acgaccgcag ttgaaactca 900

aaggaattga cgggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcacgcgaag 960

aaccttacca gtcttgacat cttttgatca ctgagaagat caggtttccc cttcgggcaa 1020

atgacaagtg tgcatgttgt cgtcagcctc gtgtctgaga tgttgggtag tcccgcaacg 1080

agcgcaccta tgactagtgg cagcattagt tggcactcta gtagactgcg tgacaacgag 1140

tagtgggaat gacgtcaatc atcatgctgt tgactggcta aacacggtgt ctctacacaa 1200

tgt 1203

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CETP-F

<400> 8

gcccagacca gcaacattct 20

<210> 9

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CETP-R

<400> 9

gatgcccaca gcggtgat 18

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> LDLR-F

<400> 10

ttcactccat ctcaagcatc ga 22

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> LDLR-R

<400> 11

ggacagtagg ttttcagcca aca 23

<210> 12

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> ABCA1-F

<400> 12

aatcatggtc aatggaaggt tca 23

<210> 13

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> ABCA1-R

<400> 13

aagatggaag ctggtattgt agca 24

Claims (12)

1.一种植物乳杆菌，其特征在于，该植物乳杆菌为植物乳杆菌TCI405，寄存编号DSM33504。

2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，该植物乳杆菌TCI405或其代谢产物可以抑制α-葡萄糖苷酶活性。

3.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，该植物乳杆菌TCI405或其代谢产物具有下列蛋白质其中至少一种：硫酸酯酶结构域包含蛋白、ABC转运通透酶、脱氧鸟苷激酶、麸胺酰胺合成酶β亚基、50S核糖体蛋白质L1及葡萄糖基神经酰胺酶。

4.根据权利要求1到3其中任一项所述的植物乳杆菌，其特征在于，该植物乳杆菌TCI405具备酸碱耐受性，其中该酸碱耐受性范围为pH值3到pH值8。

5.一种植物乳杆菌或其代谢产物用于制备减肥组合物的用途，其特征在于，该植物乳杆菌为植物乳杆菌TCI405，寄存编号DSM 33504。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌或其代谢产物用以减少消化系统吸收淀粉及/或葡萄糖量。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌或其代谢产物用以抑制淀粉酶活性。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌或其代谢产物用以抑制α-葡萄糖苷酶活性。

9.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌或其代谢产物用以减少细胞内脂肪堆积。

10.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌或其代谢产物用以提升胆固醇代谢相关基因表现。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，该胆固醇代谢相关基因包括CETP基因、LDLR基因或ABCA1基因其中至少一项。

12.根据权利要求5到10其中任一项所述的用途，其特征在于，该植物乳杆菌具备酸碱耐受性，其中该酸碱耐受性范围为pH值3到pH值8。

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