CN112839963A - 新型癌症免疫治疗抗体组合物 - Google Patents
新型癌症免疫治疗抗体组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112839963A CN112839963A CN201980054723.0A CN201980054723A CN112839963A CN 112839963 A CN112839963 A CN 112839963A CN 201980054723 A CN201980054723 A CN 201980054723A CN 112839963 A CN112839963 A CN 112839963A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- chain variable
- cancer
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 11
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 title description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 97
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 97
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 87
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 67
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 62
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 61
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 27
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 claims description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 8
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010024305 Leukaemia monocytic Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006894 monocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 22
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 16
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 14
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 11
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 11
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 8
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 101150089646 Hpdl gene Proteins 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 6
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 101150107276 hpd-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 4
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 3
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 101100407306 Mus musculus Cd274 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 2
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010013142 Disinhibition Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000913079 Homo sapiens IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 101000635799 Homo sapiens Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 108091008029 Immune checkpoint ligands Proteins 0.000 description 1
- 102000037977 Immune checkpoint ligands Human genes 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108700001097 Insect Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102100030852 Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Human genes 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008860 allosteric change Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000006315 carbonylation Effects 0.000 description 1
- 238000005810 carbonylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 101150042537 dld1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000005746 immune checkpoint blockade Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/005—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies constructed by phage libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了与具有ADCC和/或CDC活性的抗PD‑L1抗体相关或来源于该抗体的新型组合物和方法。更具体地，本发明公开了结合PD‑L1的完全人源抗体、PD‑L1结合抗体片段和衍生物以及包含这些片段的PD‑L1结合多肽。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年8月20日递交的申请号为62/720,015的美国临时专利申请的优先权并要求享有该申请的权益，该临时专利申请的完整内容引入本申请当中作为参考。
技术领域
本发明涉及与人体PD-L1相结合的抗原结合多肽、药物组合物及其用途。本发明还涉及产生这些抗原结合多肽或者抗体的表达系统。本发明所描述的抗原结合多肽或者药物组合物有利于治疗有需要的受试者的病理状况，例如哺乳动物癌症、感染等等。
背景技术
在免疫细胞的细胞表面上有共刺激受体和抑制性受体，该受体与膜结合型、可溶性配体相互作用。这些受体通过改变免疫细胞激活或者抑制的阈值及持续时间，来调节免疫应答的效力、持续时间及种类。这些通常统称为免疫检查点。很多检查点分子是B7超级家族分子或者肿瘤坏死因子(TNF)超级家族分子之一的成员。
B7家族既包含抑制性共受体也包含刺激性共受体。例如，一方面，程序性(细胞)死亡受体1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)与它们各自的配体(分别为PD-L1和PD-L2；B7-1和B7-2)的连接，导致调节性T细胞的激活或增殖的抑制、无反应性、耗竭及细胞凋亡。另一方面，分化簇28(CD28)和可诱导T细胞共刺激分子(ICOS)受体与它们各自的配体的连接，导致增殖增加和细胞因子的产生增加。相反，TNF家族的共刺激受体只包含促进增殖和效应器功能分化的刺激分子，例如OX40、4-1BB、CD40、CD27及它们的配体。此外，还有其它归属于这两个家族之一的共受体，例如，Tim-3、LAG-3、Ceacam-1等等。
在过去的几十年里，已经明确了多种癌症通过各种各样的机制在肿瘤内产生免疫抑制环境。一种复发的机制是抑制肿瘤内T细胞的抑制性免疫检查点配体(特别是PDL1)的异位表达。也有越来越多的证据证明，这种肿瘤介导的免疫抑制的阻断，可以使肿瘤内的T细胞脱抑制，让它们杀死肿瘤(A dachi K,Tamada K.Cancer Sci.2015；106(8):945-50；Rafiq S,et al.,Nat Biotechnol.2018Aug 13；Hargadon KM,et al.,IntImmunopharmacol.2018；62:29-39.)。阻断可以通过抗体或多种其他方法来实现。这与抗体与癌症细胞相结合，招募补体依赖的细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，直接杀死肿瘤细胞的传统抗癌抗体治疗不同。
CTLA-4抗体是获得FDA批准的第一个基于免疫检查点阻断的免疫疗法。其它阻断靶点，例如PD1及其相关分子，在临床中提供了更多不同的增强抗肿瘤免疫的机会。
发明概述
本发明提供结合PD-L1的抗原结合多肽(或，可互换地，称为“抗PD-L1多肽”、“PD-L1结合多肽”)，优选地，为人PD-L1；该多肽具有以下特征之一或全部：(a)与PD-L1相结合并抑制其与PD1相互作用的能力；以及(b)具有可以触发ADCC和/或CDC的同种型或恒定区。所产生的抗体可以通过两种协同通路杀死肿瘤细胞——T细胞脱抑制和直接细胞毒性。本发明的多肽可以单独或与(a)靶向其它免疫抑制通路的抗体；(b)化疗或放疗；(c)其他阻断免疫抑制通路的机制，例如适配体或RNAi；或(d)其它免疫治疗剂，例如细胞因子、靶向治疗等联合，用于治疗肿瘤。
在一方面，本发明提供一种抗原结合多肽，例如抗体、片段、衍生物或其类似物，他们是IgG1的同种型的并与PD-L1表位结合，优选地，具有至少10-6M结合亲和力，并且具有“基本上由”，在这里的意思是，至少80％，或者更优选地，85％、90％、95％或甚至100％与选自下列氨基酸序列所组成的群组中相同的序列组成的重链可变区结构域：SEQ ID NO:2、SEQID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:26、SEQID NO:30、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:50、SEQID NO:54、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:74、SEQID NO:78、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:98、SEQID NO:102、SEQ ID NO:106及其组合；以及具有基本上由，即，至少80％，或者更优选地，85％、90％、95％或甚至100％，与选自下列氨基酸序列所组成的群组中相同的序列组成的轻链可变区结构域：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:40、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:108及其组合。
在优选的实施方案中，本发明的抗原结合多肽或抗体包含一对重链可变区和轻链可变区，其各自序列基本上由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20；(b)SEQ IDNO:42和SEQ ID NO:44；或(c)SEQ ID NO:34和SEQ ID NO:36。
在其它优选的实施方案中，本发明的抗原结合多肽或抗体包含一对重链可变区和轻链可变区，其各自序列基本上由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24；(b)SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4；(c)SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64；或(d)SEQ ID NO:82和SEQID NO:84。
在其它优选的实施方案中，本发明的抗原结合多肽或抗体包含一对重链可变区和轻链可变区，其各自序列基本上由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:72；(b)SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:52；(c)SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:104；或(d)SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32。
在其它优选的实施方案中，本发明的抗原结合多肽或抗体包含一对重链可变区和轻链可变区，其各自可变区序列基本上由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8；(b)SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；(c)SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16；(d)SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:28；(e)SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40；(f)SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:48；(g)SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:56；或(h)SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:60。
在其它优选的实施方案中，本发明的抗原结合多肽或抗体包含一对重链可变区和轻链可变区，其各自可变区序列基本上由以下配对：(a)SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:68；(b)SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:76；(c)SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:80；(d)SEQ ID NO:86和SEQID NO:88；(e)SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:92；(f)SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:96；(g)SEQID NO:98和SEQ ID NO:100；或(h)SEQ ID NO:106和SEQ ID NO:108组成。
优选地，抗原结合多肽是完全人源的或者被人源化的。在一个优选的实施方案中，抗原结合多肽进一步包含一个人源恒定区。在一个特征中，该人源恒定区为IgG1。在一些实施方案中，本发明的抗体进一步包含第二对重链可变区和轻链可变区，例如，其与第一对基本上相同。
在一个优选的情形中，抗PD-L1多肽与PD-L1相结合，阻断PD-L1与PD1的相互作用。这可能是由于PD-L1上与之结合的表位位于或靠近PD1相互作用界面，或是由于PD1相互作用界面的构象发生了变构变化。
在另一方面，本发明提供编码上述多肽的核酸分子。该核酸分子可以是DNA分子或RNA分子。在一个优选的实施方案中，该核酸分子是编码本发明抗原结合多肽或抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分子，该DNA序列基本上分别由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19；(b)SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:35；(c)SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43。
在其它优选的实施方案中，该核酸分子是编码本发明抗原结合多肽或抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分子，该DNA序列基本上分别由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:23；(b)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3；(c)SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:63；或(d)SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:83。
在其它优选的实施方案中，该核酸分子是编码本发明抗原结合多肽或抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分子，该DNA序列基本上分别由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:71；(b)SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:51；(c)SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:103；或(d)SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31。
在其它优选的实施方案中，该核酸分子是编码本发明抗原结合多肽或抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分子，该DNA序列基本上分别由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7；(b)SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:11；(c)SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15；(d)SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:27；(e)SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:39；(f)SEQ ID NO:45和SEQID NO:47；(g)SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:55；或(h)SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:59。
在其它优选的实施方案中，该核酸分子是编码本发明抗原结合多肽或者抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分子，该DNA序列基本上分别由以下配对组成：(a)SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:67；(b)SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:75；(c)SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:79；(d)SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:87；(e)SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91；(f)SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:95；(g)SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:99；或(h)SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:107。
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含一个抗原结合多肽，例如本发明公开的抗PD-L1抗体、片段、衍生物或类似物。该药物组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体或者稀释剂。
在一个相关的方面，本发明提供了一种用于治疗有需要的受试者的病理状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明公开的抗PD-L1多肽或抗体。该方法可进一步包括施用第二种且不同的治疗抗体的步骤，该治疗抗体抗至少一种指示所述状况的细胞表面抗原。该被治疗的状况可以是哺乳动物癌症、感染等等。在多种实施方案中，该抗PD-L1多肽可以是抗体、抗体片段、抗体衍生物或者抗体类似物。
优选地，所治疗的哺乳动物癌症的范围选自由以下癌症所组成的群组中：卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨髓瘤、神经母细胞源性中枢神经系统肿瘤、单核细胞白血病、B细胞源性白血病、T细胞源性白血病、B细胞源性淋巴瘤、T细胞源性淋巴瘤、肥大细胞肿瘤、黑色素瘤、膀胱癌、胃癌、肝癌、尿路上皮癌、皮肤癌、肾癌、头颈部癌、胰腺癌以及上述癌症的组合。更广泛地，任何癌症，至少很大一部分肿瘤细胞表达可检测量的PD-L1，都被视为是本发明组合物治疗的靶标。
在另一个方面，本发明提供了一种用于预防有需要的受试者的相似状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用预防有效量的本发明的药物组合物。该方法可以进一步包括施用针对所述状况的疫苗的步骤。在一种实施方案中，该状况是癌症。
再一个方面，本发明提供一种哺乳动物表达系统，该表达系统产生与本发明所述PD-L1表位相结合的抗原结合多肽，例如一种抗体、片段、衍生物或其类似物。
附图简述
图1示意地描述了采用固相噬菌体筛选技术，根据本发明的实施方案具体地说，利用测试蛋白间接包被到免疫管，筛选抗原结合多肽。
图2示意地描述了采用固相噬菌体筛选技术，根据本发明的实施方案具体地说，利用测试蛋白直接包被到免疫管，筛选抗原结合多肽。
图3为一幅图表，列出了表征在间接ELISA结合试验中，通过本发明实施方案获得的代表性单链可变片段(scfv)结合hPDL1的能力的数据。“NC”代表阴性对照。
图4为一幅图表，列出了表征在FACS结合试验中，通过本发明实施方案获得的代表性单链可变片段(scfv)结合hPDL1的能力的数据。“PC”代表阳性对照，使用经抗hPDL1-APC(10μg/ml)染色的hPDL1/293T细胞。“NC”代表阴性对照，使用未经染色的hPDL1/293T细胞。
图5为一幅图表，列出了表征在受体阻断试验(以hPDL1包被试验板)中，通过本发明实施方案获得的多种单链可变片段(scfv)阻断hPD1和hPDL1相互作用的能力的数据。“PC”代表添加了biotin-hPD1-Fc的阳性对照。“NC”代表只添加了缓冲剂的阴性对照。
图6为一幅图表，列出了表征在受体阻断试验(以hPD1包被试验板)中，通过本发明实施方案获得的多种单链可变片段(scfv)阻断hPD1和hPDL1相互作用的能力的数据。“PC”代表添加了biotin-hPDL1-Fc的阳性对照。“NC”代表只添加了缓冲剂的阴性对照。
图7描述在直接ELISA试验中，通过本发明实施方案获得的单链可变片段(scfv)结合hPDL1-Fc、mPDL1-Fc(小鼠PDL1)和hIgG1的能力。
图8A和8B显示通过SDS-PAGE(图8A)和体积排阻色谱(图8B)表征的全长抗体4-1E8。
图9A和9B显示通过SDS-PAGE(图9A)和体积排阻色谱(图9B)表征的全长抗体3-1B11。
图10A和10B显示通过SDS-PAGE(图10A)和体积排阻色谱(图10B)表征的全长抗体3-1E4。
图11B和11C显示，以如图11A所示的ELISA形式的，部分本发明全长抗体实例与hPDL1的定量结合分析结果。
图12A和12B显示部分本发明全长抗体实例的定量FACS结果，其结合hPDL1-表达293T细胞(上图)，以及hPDL1-阴性293T细胞(下图)。
图13B以RBA形式1(图13A)：由hPDL1-Fc包被并添加Biotin-hPD1-Fc，显示本发明先导抗体候选物受体阻断试验的结果。
图14B以RBA形式2(图14A)：由hPD1-Fc包被并添加Biotin-hPDL1-Fc)，显示本发明先导抗体候选物受体阻断试验的结果。
图15是一幅图表，列出了表征通过本发明实施方案获得的多个全长抗体的数据。
图16A-16D描述使用BIAcore的先导抗体候选物与PD-L1的亲和力：图16A示意地描述本发明实施例应用的BIAcore形式；图16B列出了使用BIAcore测试先导抗体候选物与PD-L1的亲和力的结果；图16C描述了4-1E8抗体的BIAcore亲和力测试响应曲线；以及图16D描述了3-1B11抗体的BIAcore亲和力测试响应曲线。
图17A示意地描述了本发明实施例应用的表位鉴定形式。图17B示意地描述了本发明实施方案中先导抗体候选物的表位鉴定。图17C列出了使用图17A所示形式，先导抗体候选物表位鉴定矩阵。
图18A-18D显示FACS试验测定：对照组(图18A)、本发明中的“4-1E8”(图18B)、“3-1E4”(图18C)及“3-1B11”(图18D)抗体，与恒河猴PDL1-GFP表达构建体转染的293T细胞(上)以及亲代293T细胞(下)的结合能力。
图19A-19D显示FACS试验测定：对照组(图19A)、本发明中的“4-1E8”(图19B)、“3-1E4”(图19C)及“3-1B11”(图19D)抗体，与恒河猴PDL1表达构建体转染的293T细胞(上)以及亲代293T细胞(下)的结合能力。
图20显示本发明的实施例中，IL-2生成试验的代表性EC50结果。
图21显示编号为“4-1E8”的多肽实施例与市售的抗PDL1抗体阿特珠单抗(Atezolizumab)的ADCC活性比较。
图22A-22C显示编号为“4-1E8”的多肽实施例与编号为“3-1B11”(图22A)和“3-1E4”(图22B)的实施例的ADCC活性比较，重要的数据点总结在图表(图22C)中。
图23A、23B和23C提供在本发明的先导抗体存在下与市售的抗PDL1抗体存在下，与PDL1+MDA-MB-231肿瘤细胞共培养的PBMCs的IL-2生成能力比较的三组试验数据。
图24提供在本发明的先导抗体存在下与市售的抗PDL1抗体存在下，与PDL1+MDA-MB-231肿瘤细胞共培养的CD8 T细胞的IFNγ生成能力比较结果。
图25A和25B显示本发明实施例中，先导抗体的混合淋巴细胞反应结果。
图26A和26B显示本发明编号“4-1E8”(图26A)和“3-1B11”(图26B)抗体的结合特异性。
图27A和27B显示与单独CD80(实线)和单独第二试剂(虚线)相比，本发明E8(图27A)和B11(图27B)抗体阻断CD80和PD-L1-表达细胞结合(灰底曲线)的能力。
图28显示使用Tg32小鼠对本发明的抗体实例进行的半衰期测定。
发明详述
除非另有说明，技术术语根据常规用法使用。
如本发明中所使用的，“一个(a)”或“一种(an)”可以指一个或者多个。如本发明中所使用的，当与词语“包含(comprising)”结合使用时，词语“一个(a)”或“一种(an)”可以指一个或多于一个。如本发明中所使用，“另一个(another)”可以指至少第二个或更多。进一步地，除非上下文另有要求，单数术语包括复数，复数术语包括单数。
如本发明中所使用，不论是否明确指明，“大约(about)”指数值，例如，包括整数、分数和百分数。术语“大约(about)”通常指数值的范围(例如，该列举值的±5至10％)，本领域的普通技术人员会认为该数值的范围等同于所列举的值(如，有同样的功能或结果)。在一些情况下，术语“大约(about)”可以包含的数值四舍五入到最接近的有效数字。除非另外指明，“大约(about)”为所列举值的±10％。
“抗原结合多肽”是指含有与抗原相结合的部分的多肽。抗原结合多肽的示例包括抗体、抗体片段(例如：抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物以及抗体类似物。
抗原结合多肽或抗原结合蛋白可以具有，例如，天然产生的抗体(也被称为“免疫球蛋白”)的结构。每个天然产生的抗体由两对相同的多肽链组成，每对有一条“轻”链(大约25kDa)和一条“重”链(大约50-70kDa)。每个轻/重链对的可变区形成抗体-结合位点，这样一个完整的抗体有两个结合位点。
天然产生的抗体链的可变区展示出相同的一般结构，即相对保守的骨架区(FR)由三个也称为互补决定区或CDRs的高变区连接着。从N端到C端，轻链和重链都包含了FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4结构域。氨基酸在每个结构域的分配与Kabat等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.,US Dept.of Health andHuman Services,PHS,NIH,NIH出版号91-3242,1991中的定义一致。免疫球蛋白链上氨基酸的其它编号系统包括IMGT(international ImMunoGeneTics information system，国际免疫遗传学信息系统；Lefran c et al.,Dev.Comp.Immunol.29:185-203；2005)和AHo(Honegger and Pluckthun,J.Mol.Biol.309(3):657-670；2001)。
抗体可以从诸如血清或血浆等含有不同抗原特性免疫球蛋白的来源获得。如果这些抗体经过亲和纯化，它们可以被富集为特定的抗原特性。这种抗体的富集制剂通常由少于大约10％的对特定抗原具有特异性结合活性的抗体来制备。使这些制剂经过几轮的亲和纯化，可以提高对抗原具有特异性结合活性的抗体的比例。以这种方式制备的抗体通常被称为“单特异性(monospecific)”。单特异性抗体制剂可由约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或99.9％对特定抗原具有特异性结合活性的抗体组成。
本发明中使用的术语“抗体”或“Ab”(及它们的复数形式)，广泛地指由四条多肽链(两条重(H)链和两条轻(L)链)组成的任何的免疫球蛋白(Ig)分子，或保留了Ig分子的基本特征和特定的表位结合特征的，其任何的功能性片段、突变体、变体、衍生物或类似物。这些片段、突变体、变体、衍生物或类似物抗体形式是本领域已知的，并且包括，尤其是，Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv、单链抗体(scFv)、单域抗体(sdAbs)、互补决定区(CDR)片段、嵌合抗体、双抗体、三抗体、四抗体以及包含至少一部分免疫球蛋白的多肽，该部分免疫球蛋白足以使特定抗原与该多肽相结合。抗体片段、衍生物和类似物可以通过重组DNA技术或者通过酶或化学裂解完整的抗体产生。
Fab片段是具有VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；F(ab')2片段是具有两个Fab片段的二价片段，这两个Fab片段在其铰链区由二硫键连接着；Fd片段具有VH和CH1结构域；Fv片段具有抗体单臂的VL和VH结构域；dAb片段具有VH结构域、VL结构域或者VH或VL结构域的抗原结合片段(参见，例如：U.S.Pat.Nos.6,846,634；6,696,245,US App.Pub.20/0202512；2004/0202995；2004/0038291；2004/0009507；2003/0039958，及Ward et al.,Nature 341:544-546,1989)。
单链抗体(scFv)是一种在VL和VH区通过接头(例如：氨基酸残基的合成序列)相连以形成连续蛋白链的抗体，该接头足够长以允许蛋白链自我折叠，形成一个单价抗原结合位点(参见，例如：Bird et al.,1988,Science 242:423-26及Huston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-83)。双抗体是包含两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包含由接头连接的VH和VL结构域，该接头太短，以至于不能允许在同一条链上的两个结构域配对，因此允许每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对(参见，例如：Holliger et al.,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-48和Poljak et al.,1994,Structure 2:1121-23)。如果双抗体的两条多肽链是相同的，那么它们配对产生的双抗体将有两个相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链，可以用于制备具有两个不同抗原结合位点的双抗体。类似地，三抗体和四抗体是分别包含三条和四条多肽链的抗体，分别形成三个和四个抗原结合位点，抗原结合位点可以相同也可以不同。
利用上述Kabat et al.；上述Lefranc et al.和/或上述Honegger和Pluckthun描述的系统，可以识别给定抗体的互补决定区(CDRs)和骨架区(FR)。一个或多个CDRs可以共价或非共价地并入到一个分子中，使其成为抗原结合蛋白。抗原结合多肽可以将CDR(s)作为一条较大多肽链的一部分并入，可以共价地连接CDR(s)到另一条多肽链上，也可以非共价地并入CDR(s)。CDRs允许抗原结合蛋白与特定的目标抗原特异性地结合。
抗原结合多肽可以具有一个或多个结合位点。如果有不只一个结合位点，这些结合位点可以是彼此相同的或不同的。例如，天然产生的人类免疫球蛋白典型地具有两个相同的结合位点，然而“双特异性”或“双功能”抗体具有两个不同的结合位点。
本发明中使用的术语“人类抗体”或“人源化抗体”包含来源于人免疫球蛋白序列的具有一个或多个可变区和恒定区的所有抗体。在一个实施方案中，所有的可变区和恒定区都来源于人免疫球蛋白序列(完全人类抗体或人源化抗体)。这些抗体可以通过多种方式制备，包括通过用目标抗原对小鼠进行免疫，该小鼠经基因修饰以表达源自人类重链和/或轻链编码基因的抗体。通过一个或多个氨基酸的替换、缺失和/或添加，使人源化抗体具有与来源于非人类物种的抗体序列不同的序列，因此，在施用于人类受试者时，与非人类物种抗体相比，人源化抗体不太可能诱导免疫应答，和/或诱导程度较轻的免疫应答。在一个实施方案中，位于非人类物种抗体的重链和/或轻链的骨架区和恒定区的某些氨基酸经突变以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，人类抗体的恒定区融合到非人类物种抗体的可变区。在另一个实施方案中，将非人类抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基进行改变，以减少非人类抗体在施用于人类受试者时可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残基对抗体与抗原的免疫特异性结合不是关键的，或者对氨基酸序列的改变是保守的改变，因此人源化抗体与抗原的结合不会明显地比非人类抗体与抗原的结合差。如何制备人源化抗体的例子可以在美国专利U.S.Pat.Nos.6,054,297,5,886,152和5,877,293中找到。
本发明中所使用的术语“嵌合抗体”是指一类包含来自一种抗体的一个或多个区域和来自至少另一种抗体的一个或多个区域的抗体。在一个实施方案中，来自多个人类抗PD-L1抗体的CDRs在一个嵌合抗体中混合和配对。
活化的T细胞在其细胞表面表达PD1。PD-L1与PD1的结合激活PD1，并且抑制PD1+T细胞。本发明中使用的“中和抗体”或“抑制性抗体”是指阻断PD1激活的抗体，即采用如本发明实施例中描述的试验，过量的抗PD-L1抗体减少所述激活量的至少约20％。在各实施方案中，抗原结合蛋白使PD1激活量减少了至少30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％以及99.9％。
本领域普通技术人员遵循本说明书的教导以及使用本领域已知的技术可以容易地制备抗体的片段或类似物。片段或类似物优选的氨基和羧基端出现在功能结构域边界附近。通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专用序列数据库进行比较，可以确定结构和功能结构域。计算机化对比方法可以用于识别序列基序或预测在其他已知结构和/或功能的蛋白质中出现的蛋白构象域。识别折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法是已知的。参见，Bowie et al.,1991,Science 253:164。
如本发明所使用，如果抗原结合多肽以100纳摩尔或更低的离解常数与抗原结合，则该抗原结合多肽“特异性地结合”抗原(例如，人PD-L1)。
本发明所使用的“抗原结合结构域”、“抗原结合区”或“抗原结合位点”，是抗原结合蛋白的一部分，其包含与抗原相互作用且有助于抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基(或其它基团)。为了使抗体特异性地结合抗原，该抗体至少要包含至少其CDR结构域之一的一部分。
本发明中所使用的“表位”是指被抗原结合蛋白(例如，抗体)结合的分子的那部分。表位可以包含该分子的非连续的部分(例如，在多肽链中，在多肽一级序列中不连续的氨基酸残基，但在多肽的三级和四级结构中，它们彼此足够近以使其被抗原结合蛋白结合)。
如本发明所使用，术语“多聚核苷酸”、“寡核苷酸”及“核酸”在全文中互换使用，包括DNA分子(例如，cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如，mRNA)、利用核苷酸类似物生成的DNA或RNA类似物(例如，肽核酸和非天然产生的核苷酸类似物)及上述的混合物。核酸分子可以是单链或者双链的。在一个实施方案中，本发明中的核酸分子包含编码抗体、或其片段、衍生物、突变体或变体的连续开放阅读框(open reading frame)。
本发明中使用的“载体”是一种核酸，可以用于将与之相连的另一个核酸导入细胞。载体的一种类型是“质粒”，指线状或环状双链DNA分子，可以将附加的核酸片段连接到其中。载体的另一种类型是病毒载体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，其中附加的DNA片段可以被引入到病毒的基因组中。某些载体能够在被引入的宿主细胞中自主复制(例如，包含细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞后被整合入宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起被复制。“表达载体”是一种可以指导所选多聚核苷酸表达的一种载体。
如本发明所使用的，如果调控序列影响核苷酸序列的表达(例如，表达的水平、时间或部位)，则该核苷酸序列“可操作地连接”到调控序列。“调控序列”是一种核酸，其影响与之可操作地连接的核酸的表达(例如，表达的水平、时间或部位)。例如，该调控序列可以直接在被其调节的核酸上发挥作用，或通过一个或多个其它分子(例如，与调节序列和/或核酸相连的多肽)的功能发挥作用。调控序列的例子包括启动子、增强子和其它表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。进一步的调控序列的例子描述于，例如，Goeddel,1990,GeneExpression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif.and Baron et al.,1995,Nucleic Acids Res.23:3605-06。
优选地，本发明的组合物所治疗的广谱哺乳动物癌症选自以下癌症所组成的群组中：卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨髓瘤、神经母细胞源性中枢神经系统肿瘤、单核细胞白血病、B细胞源性白血病、T细胞源性白血病、B细胞源性淋巴瘤、T细胞源性淋巴瘤、肥大细胞肿瘤、黑色素瘤、膀胱癌、胃癌、肝癌、尿路上皮癌、皮肤癌、肾癌、头颈部癌、胰腺癌及上述癌症的组合。更广泛地，任何至少部分肿瘤细胞表达可检测量的PD-L1的癌症都可以通过本发明的组合物治疗。
本公开的多肽可以使用本领域公知的任何标准方法生产。在一个实施例中，通过重组DNA的方法生产多肽，通过将编码多肽的核酸序列(例如cDNA)插入到重组表达载体中，并在促进表达的条件下表达DNA序列。
编码任何一种本发明所公开的各种多肽的核酸，可以是经化学合成的。为了提高在细胞中的表达，可以对密码子选用进行选择。这种密码子选用将取决于所选择的细胞类型。针对大肠埃希菌和其它细菌，以及哺乳动物细胞、植物细胞、酵母细胞和昆虫细胞，已经开发出专门的密码子选用模式。参见，例如：Mayfield et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2003100(2):438-42；Sinclair et al.ProteinExpr.Purif.2002(1):96-105；Connell N D.Curr.Opin.Biotechnol.2001 12(5):446-9；Makrides et al.Microbiol.Rev.1996 60(3):512-38和Sharp et al.Yeast.1991 7(7):657-78。
核酸操纵的一般技术描述于，例如：Sambrook et al.,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Vols.1-3,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2ed.,1989，或F.Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(Green Publishing andWiley-Interscience:New York,1987)并且其定期更新中，在本发明中通过引用合并。编码多肽的DNA可操作地连接于来自哺乳动物、病毒或昆虫基因的适当的转录或翻译调节元件。这些调节元件包括转录启动子、控制转录的可选的操纵序列、编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列以及控制转录和翻译终止的序列。通常由复制起点赋予其在宿主中复制的能力，以及便于识别转化子的选择基因也被并入。
本发明中的重组DNA也可以包含任何类型的蛋白质标签序列，这些序列可能有利于蛋白质的纯化。蛋白质标签的例子包括但不限于组氨酸标签、FLAG标签、myc标签、HA标签或GST标签。用于细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主的适当的克隆和表达载体可以在Cloning Vectors:A Laboratory Manual,(Elsevier,N.Y.,1985)中找到。
本发明的表达构建体通过适合于宿主细胞的方法导入宿主细胞。将核酸导入宿主细胞的各种方式为本领域公知，包括但不限于，电穿孔；使用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、葡聚糖(DEAE-dextran)或其它物质转染；基因枪法；脂质转染；以及感染(其中，载体为感染制剂)。适宜的宿主细胞包括原核细胞、酵母、哺乳动物细胞或细菌细胞。
本发明公开的蛋白也可以使用细胞翻译系统生产。为此目的，编码该多肽的核酸必须经过修饰，使其能够在体外转录产生mRNA，并允许在所使用的特定无细胞系统(真核的，如哺乳动物或酵母无细胞翻译系统；或原核的，如细菌无细胞翻译系统)中对mRNA进行无细胞翻译。
PD-L1结合多肽也可以通过化学合成产生(例如，通过Solid Phase PeptideSynthesis,2nd ed.,1984,The Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill中描述的方法)。蛋白质的修饰也可以通过化学合成产生。
本文公开的多肽可以通过蛋白质化学领域通常已知的蛋白质分离/纯化方法进行纯化。非限制性例子包括：萃取、重结晶、盐析(例如，使用硫酸铵或硫酸钠)、离心、透析、超滤、吸附层析、离子交换色谱、疏水色谱、正相色谱、反相色谱、凝胶过滤、凝胶渗透色谱、亲和层析、电泳、逆流分布或上述任何的组合。纯化后，多肽可以交换到不同的缓冲物和/或通过任何本领域所公知的各种方法进行浓缩，包括但不限于过滤和透析。
纯化的多肽优选至少85％纯，更优选至少90％或95％纯，最优选至少98％纯。无论纯度的确切数值是多少，多肽都经过充分地纯化以作为药物产品使用。
多肽的翻译后修饰
在某些实施方案中，本发明的结合多肽可以进一步包含翻译后的修饰。示例性的翻译后的蛋白修饰包括，磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖化、泛素化、糖基化、羰基化、类泛素化、生物素化或添加多肽侧链或疏水基团。因此，经修饰的可溶性多肽可能含有非氨基酸元素，例如类脂、多聚糖或单糖以及磷酸盐。糖基化的一种优选形式是唾液酸化，其将一个或多个唾液酸基团连接到多肽上。唾液酸基团改善蛋白质的溶解性和血清半衰期，同时也降低蛋白质可能的免疫原性。参见Raju et al.Biochemistry.2001 31；40(30):8868-76。可以测试这些非氨基酸元素对多肽功能的影响，以了解其对PD-L1或PD-1功能的拮抗作用，例如其对血管生成或肿瘤生长的抑制作用。
在一个实施方案中，主体多肽的修饰形式包含将所述主体可溶性多肽与非蛋白聚合物连接。在一个具体的实施方案中，所述聚合物是聚乙二醇(“PEG”)、聚丙二醇或聚氧化烯，按照美国专利U.S.Pat.No.4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中规定的方式。
在一个特征中，本发明结合多肽的PEG化实施例优选地保留至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％的未被修饰的蛋白相关生物活性。在一个实施方案中，生物活性是指其结合PD-L1的能力，通过KD、kon或koff速率进行评估。在一个具体的实施方案中，与未PEG化的对应物相比，PEG化的结合多肽蛋白与人PD-L1的结合增加。在另一个实施方案中，生物活性指阻断PD-L1/PD1相互作用。
治疗，疫苗&施用
本公开进一步提供了治疗疾病或预先预防疾病的方法，该疾病对PD-L1生物活性的抑制有响应。优选的实施例为以细胞过度增生和持续感染为特征的疾病。施用技术和剂量取决于具体的多肽类型和具体治疗的疾病。由于监管机构要求用于治疗的蛋白试剂的致热源含量需为可接受的低水平，本发明的治疗配方可与其它配方区分，因其基本上不含致热源，或至少包含不超过适当的监管机构(如美国FDA)所确定的可接受水平的致热源。
本发明的药物制剂可包含至少一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。包含于制剂中的赋形剂将有不同的用途，例如，取决于使用的基因构建体或效应细胞的种类以及施用方式。通常使用的赋形剂包括但不限于：盐水、缓冲盐水、葡萄糖、注射用水、甘油、乙醇及上述的组合、稳定剂、增溶剂和表面活性剂、缓冲液和防腐剂、强化剂、填充剂和润滑剂。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的药物制剂施用于患者。示例性施用方式包括但不限于，静脉注射。其它方式包括但不限于，瘤内、皮内、皮下(s.c.、s.q.、sub-Q、Hypo)、肌内(i.m.)、腹膜内(i.p.)、动脉内、髓内、心内、关节内(关节)、滑膜内(关节液区)、颅内、脊柱内以及鞘内(脊髓液)。用于胃肠外注射或输注本制剂的任何已知的器械可以用于实现这些施用。如本发明中所使用，术语“治疗(treat,treating,treatment)”具有其通常及惯用的含义，且包含以下一种或多种含义：阻滞、改善受试者疾病(例如肿瘤)症状或降低其严重程度和/或频率，和/或抑制受试者癌症细胞的生长、分裂、扩散或增殖，或癌症进展(例如：出现新的肿瘤)。治疗是指，与未使用本发明方法的受试者相比，阻滞、改善、降低或抑制约5％至约100％。优选地，与未使用本发明方法的受试者相比，阻滞、改善、降低或抑制约100％、99％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％。
本发明还提供了一种试剂盒，包含一个或多个容器，其中装有大量编码本发明多肽的基因构建体，及药学上可接受的赋形剂。该试剂盒还可以包含使用说明。与试剂盒相关联的，还可以是管理药品或生物制品生产、使用或销售的政府机构规定格式的通知，该通知反映了生产、使用或销售机构对人类用药的批准。
实施例
利用噬菌体展示技术筛选抗原结合多肽
间接包被：参考图1，通过标准噬菌体展示技术鉴别PDL1-结合单链可变片段(scFv)。人源原始scFv文库通过基于PCR的重建产生，该基因文库来源于50个健康供体的B细胞。采用hPDL1-Fc融合蛋白和无关的Fc融合蛋白间接地固定于包被了抗人IgG Fc抗体的免疫管上，进行固相免疫管淘选(panning)。为淘选出强结合物，首先使用无关的Fc融合蛋白耗尽与Fc结合的scFvs，然后选出未结合的噬菌体，这些未结合的噬菌体可与hPDL1-Fc融合蛋白结合。洗脱的噬菌体在细菌中扩增。这些过程重复3-4轮，在第二轮之后确定噬菌体滴度及复杂度。一旦噬菌体被依次富集(第3轮和第4轮)，则通过ELISA试验检测单个噬菌体克隆对hPDL1的结合能力。
直接包被：直接将Fc蛋白包被在免疫管上，不使用抗人Fc抗体(图2)。
噬菌体结合ELISAs：
使用与淘选相同的策略进行ELISAs。对于间接淘选的克隆，首先以抗人Fc抗体包被试验板(plates)，然后是Fc蛋白。对于直接淘选的克隆，以Fc蛋白直接包被试验板。在间接ELISA试验中，在平行试验中检测噬菌体对hPDL1-Fc和其对无关的Fc蛋白(或hIgG1)的结合能力。选出显示与无关的Fc蛋白结合程度低，与hPDL1结合程度高的噬菌体进行进一步测序和二次筛选。数据如图3所示。大多数克隆的非特异性结合较低(以Fc蛋白的信号值(1:10稀释)为背景，小于0.2)。在直接ELISA试验中，以平行试验的方式检测噬菌体对hPDL1-Fc、mPDL1-Fc(小鼠PDL1)和hIgG1的结合能力。噬菌体研究显示，本发明的任何先导分子与小鼠PDL1无显著结合，即没有先导分子与小鼠PDL1发生显著的交叉反应性。数据如图7所示。
测序
通过对重链CDR3区的初步测序，确定出独特的的克隆。之后也会通过完整序列进行确认。一小部分克隆共享相同的CDR3，但在其序列的其它部分具有显著的差异。
通过FACS进行二次筛选
对噬菌体、噬菌体裂解物或表达scFvs的细菌的裂解物进行测试，测试其优先与表达hPDL1的293T细胞而非亲代293T细胞结合的能力。使用平均荧光强度(MFI)比值作为鉴定阳性克隆的依据。数据如图4所示。大多数克隆显示出高比值，可被鉴定为阳性克隆。
阻断剂鉴定
对测试噬菌体、噬菌体裂解物或表达scFvs的细菌的裂解物进行测试，测试其阻断hPD1与hPDL1间相互作用的能力。通过用hPD1-Fc或者hPDL1-Fc包被试验板建立结合试验。采用标准方法，用链霉亲和素-HRP检测生物素标记配体(hPDL1或hPD1)的结合。在scFv存在下，其结合的消失被用于鉴定潜在的阻断剂。结果如图5和6所示。
Fc融合蛋白的生成和表征：
由于scFvs相对不稳定，部分scFvs被转化为Fc融合体并在哺乳动物细胞中表达。这些融合蛋白使用蛋白A柱纯化，并测试其阻断PD1-PDL1相互作用的能力以及与表达PDL1的293T细胞结合的能力。
全长抗体的生成：
使用本领域技术人员熟悉的标准方法，通过PCR扩增单一scFv克隆的VH和VL区域，构建全长抗体基因，并克隆到合适的表达载体上。通过本领域技术人员熟悉的标准方法，全长抗体蛋白通过瞬时转染悬浮培养的293T细胞生成，并使用蛋白A柱进行纯化。
全长抗体的表征
通过SDS-PAGE和体积排除色谱(结果如图8A、8B、9A、9B、10A和10B所示)对示例性全长抗体表征，以及对其效力进行定量：(a)通过ELISA测定其对hPDL1的特异性结合(结果如图11B和11C所示)；(b)其对表达hPDL1的293T细胞和未处理的293T细胞的特异性结合(结果如图12A和12B所示)；和(c)在两种阻断试验中阻断PD1-PDL1的相互作用。形式1和形式2中示例性先导抗体候选物的结果数据显示在图13B和14B中。本发明27个抗体实施方案的结果数据显示在图15中。
通过BIAcore测定PD-L1相互作用的亲和力：
使用BIAcore检测先导抗体候选物与PD-L1的亲和力(图16B-16D)。简而言之，通过链霉亲和素，生物素化的hPDL1被捕获到传感器芯片表面。抗体流经芯片，根据相互作用的稳定性，采用单循环动力学方法计算反应参数。使用带有二价分析物结合模型的BIAcoreX100评估软件2.0评估KD值。
通过FACS测定恒河猴PD-L1结合
(A)恒河猴PDL1-GFP表达构建体瞬时转染293T细胞。测试实施方案4-1E8、3-1E4和3-1B11并与对照组比较。结果如图18A-18D所示：三个抗体均与恒河猴PDL1结合。
(B)恒河猴PDL1表达构建体瞬时转染293T细胞。测试实施方案4-1E8、3-1E4和3-1B11并与对照组比较。结果如图19A-19D所示：三个抗体实施方案均与恒河猴PDL1结合。
IL2诱导和EC50测定
利用Ficoll梯度从人体血液中分离出外周血单核细胞(PBMCs)，接着用标准方法将红细胞裂解。本实验RPMI+培养基准备如下：10％FBS、1％抗-抗(Gibco)和1％非必须氨基酸(Gibco)加入到经ATCC修饰的RPMI培养基(Gibco)。从血液中分离后，将PBMCs重悬浮于10-20ml RPMI+中，在37℃、5％CO2条件下培养过夜。接下来，将PBMCs以100000PBMCs/96孔的浓度接种于96孔组织培养板(Corning)；每孔的最终体积为200ul。以1ng/ml的浓度添加葡萄球菌肠毒素B(SEB)，以20ug/ml(用于筛选)的浓度或以50ug/ml至0.003ug/ml的浓度范围添加先导抗体。以无SEB(如，无刺激)、单独含有SEB或含有SEB和同型对照的细胞(如，基线)，作为对照组。
37℃、5％CO2下孵育76小时后，在室温下将PBMCs 1200rpm离心(spun down)15分钟，收集上清液并存储于-20℃。使用市售的IL2-ELISA试剂盒(Biolegend或Thermofisher)，按照生产商的说明书进行IL2 ELISA。将上清液稀释1/20-1/80用于ELISA。使用Spectramax3 M3 microplate reader酶标仪(Molecular Devices)测量吸光度，使用Graphpad软件分析数据。先导抗体候选物与市售的抗PD1抗体进行比较。结果如图20所示。在肿瘤与MDA-MB-231细胞的共同培养试验中(参见图23A-23C)，在去抑制IL2(参见图23A-23C)方面和去抑制IFNγ(参见图24)方面，4-1E8始终优于3-1B11和3-1E4。然而，在与T细胞和MDA-MB-231细胞的相似的共同培养试验中，这三个抗体都与市售PDL1抗体(如阿特珠单抗(Atezo)和德瓦鲁单抗(Durva))产品一样好或更好。
ADCC活性
如图21和22所示，三个先导抗体都显示出很强的ADCC活性，而阿特珠单抗(atezolizumab)(设计为ADCC-阴性)显示无活性。在本发明的三个实施方案中，4-1E8表现出最高的ADCC活性。
混合淋巴细胞反应
利用Ficoll梯度从人体血液中分离外周血单核细胞(PBMCs)，接着使用标准方法将红细胞裂解。在37℃下，将细胞在无血清RPMI 1640中培养1小时。去除非贴壁细胞，剩余的单核细胞在添加有5％人AB血清、2ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL4(BD Biosciences)的RPMI 1640中进行培养。每2到3天添加含细胞因子补充剂的新鲜培养基。第6天添加20ng/mlTNFa(BD Biosciences)诱导成熟树突状细胞，培养24小时。
对树突状细胞进行采集、表型分析以及冷冻以备后用。按照各生产商的说明书，使用磁珠(Dynal)将CD4 T细胞从PBMCs中分离出来。CD4 T细胞和同种异型树突状细胞以1：2.5的比例，共培养于96孔平底板(flat bottom plates)(Costar)中，使用添加了10％人AB血清的RPMI 1640培养基。在添加树突状细胞前，用100mg/ml丝裂霉素C(Sigma)处理树突状细胞。用CFSE(或类似染料)稀释T细胞，检测增殖。使用市售的IFNg-ELISA试剂盒，根据生产商的说明书，测定IFNg释放。使用Spectramax3 M3 microplate reader酶标仪(MolecularDevices)测量吸光度，使用graphpad软件分析数据。在这些研究中，本发明实施方案的先导抗体候选物和其它市售的抗PD1抗体和抗PDL1抗体的表现相当。示例结果如图25A和25B所示。
结合特异性
生成稳定表达多种B7家族成员及其受体的Expi293细胞系。使用荧光抗人IgG，通过FACS检测抗PDL1抗体的能力。示例性的先导抗体候选物的结果数据如图26A和26B所示。
阻断CD80-PDL1结合
设计表达PDL1的DLD1细胞，在存在或不存在抗PDL1 Abs的情况下，其被用来检测与生物素标记的CD80-Fc的结合，接着使用荧光链霉亲和素。本发明的示例性先导抗体候选物的结果数据如图27A和27B所示。
半衰期测量
使用雄性纯合Tg32小鼠(B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ，Jacksonlabs)测量血清半衰期。第0天静脉滴注2mg/kg抗体，第1天及其后多个时间点抽血。制备血浆，用夹心ELISA法测定抗体滴度。滴度归一化至第1天滴度。抗-抗体反应也被测量，并将高滴度样本从分析中移除，因为它们在ELISA中经常出现突然的变化。本发明的示例性先导抗体候选物的结果数据如图28所示。不同抗体的半衰期从6.9天(3-1E4，详细序列参见下面实施例9)到10.5天(3-1B11，详细序列参见下面实施例11)和12.3天(4-1E8，详细序列参见下面实施例5)不等。
多肽序列
本发明的PD-L1结合多肽序列实施例如下所列：
实施例1：抗体编号：4-1A2
VH
DNA(SEQ ID NO:1)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGGACTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCAGTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCACAGACACTTCTACGGGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATTTTTATGGGGTTCGGGGAGTTATGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:2)
QVQLVQSGTEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSTGTAYMELRSLRSDDTAVYYCARFLWGSGSYDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:3)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTCGCAACTTACTACTGTCAACAGACTTACACATTCCCGCACACTTTTGCCCAGGGGACCAACCTGGAGATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:4)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTYTFPHTFAQGTNLEIK
实施例2：抗体编号：4-1A12
VH
DNA(SEQ ID NO:5)
CAAGTCCAGCTGGTACAATCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATTGGATACAGCTATGGTTACCCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:6)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDWIQLWLPLDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:7)
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAACAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTCACAGTTCCCCCCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGACATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:8)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHSSPLTFGGGTKVDIK
实施例3：抗体编号：4-1B9
VH
DNA(SEQ ID NO:9)
GAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATTTGATCCCGTTGCGAGATAGTAGGGGGGGGTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGGAGT
氨基酸(SEQ ID NO:10)
EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDLIPLRDSRGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:11)
TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAGTCAGGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAGAGACTATTATGCAAGCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCTGTACTTGTCATCTATGGTAAAAACAACCGGCCCTCAGGAATCCCAGACCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGACTCAGGCGGAAGATGAGGCTGACTATTACTGTAACTCCCGTGACAGCGGTGCTTACCATTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:12)
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRDYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGTQAEDEADYYCNSRDSGAYHYVFGTGTKVTVL
实施例4：抗体编号：4-1B12
VH
DNA(SEQ ID NO:13)
CAAATCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGGAAGTATTATAGGGGATGGTGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
氨基酸(SEQ ID NO:14)
QIQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGSIIGDGAFDIWGQGTMVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:15)
GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGACCCTCCTGCATAATGGATTCAACTTTTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAACTCCTGATGTATTTGGCCTCTAGCCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCGGGCACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGGTACACACTGGCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGATATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:16)
DIVMTQSPLSLPVTLGEPASISCRSSQTLLHNGFNFLDWYLQKPGQSPQLLMYLASSRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPYTFGQGTKLDIK
实施例5：抗体编号：4-1E8(E8)
VH
DNA(SEQ ID NO:17)
CAAATCCAGCTGGTACAATCTGGGGCTGAGGTGAAGATGCCTGGGGCCTCAGTGACGATTTCCTGCGAGGCGTCTGGATACAACTTCATCAGCTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGATTCGTCGTCCCTAGTGGTGGTGCCGCAGGCTACACACAGAAGTTCCAGGGCAGACTCACCGTGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGACCTGAACAGCCTGACATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGTGCGAGAAATGAGTGGTGGCTGGTTTGATTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCG
氨基酸(SEQ ID NO:18)
QIQLVQSGAEVKMPGASVTISCEASGYNFISYYIHWVRQAPGQGLEWMGFVVPSGGAAGYTQKFQGRLTVTRDTSTSTVYMDLNSLTSDDTAVYYCVREMSGGWFDFWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:19)
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCTCTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:20)
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGPGTKVDIK
实施例6：抗体编号：4-1G7
VH
DNA(SEQ ID NO:21)
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCCTCACCGGTACAGCAGCCCATATGGTGGGCGGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:22)
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARASPVQQPIWWAEYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:23)
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTCTGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAACTACACTTTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:24)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMISDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSNYTLVFGGGTKLTVL
实施例7：抗体编号：4-1H10
VH
DNA(SEQ ID NO:25)
CAGCTGCAGCTACAGCAGTCCGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTCCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATCCTTGGTATAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGTCATGGTCGGGCAGCAGCTGGTAGGTACGCTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:26)
QLQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKAPGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASHGRAAAGRYAMDVWGQGTTVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:27)
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGATTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTATGACGATAAGCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCGGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGACGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCCTTTGATGGCAGCAGTGTCATCTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTG
氨基酸(SEQ ID NO:28)
NFMLTQPHSVSDSPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYDDKQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLTTEDEADYYCQSFDGSSVIFGGGTKLTVL
实施例8：抗体编号：3-1H2
VH
DNA(SEQ ID NO:29)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAAGGAGCGTTTCTATGATAGTAGTGGTTATTACGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
氨基酸(SEQ ID NO:30)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKERFYDSSGYYDAFDIWGQGTMVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:31)
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGGCAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAATGATGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGCCTCCAGCCTGAGGATGAGGCTGACTATTATTGCGCCTCTTATGGAGGCAGGAACAATTTGCTTTTTGGCGGAGGGACTCAACTGACCGTCTTA
氨基酸(SEQ ID NO:32)
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSNDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCASYGGRNNLLFGGGTQLTVL
实施例9：抗体编号：3-1E4
VH
DNA(SEQ ID NO:33)
CAAATCCAGCTGGTACAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCCGGAGGGGGAGCAGTGGCGGACAATAGTTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:34)
QIQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAGGGAVADNSYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:35)
GACATCCGGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAAGATTACAATTACCCTCGAACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:36)
DIRMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPRTFGQGTKVEIK
实施例10：抗体编号：3-1A8
VH
DNA(SEQ ID NO:37)
CAAATCCAGCTGGTACAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACGGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACGGTTCGTATAGCAGCAGCTGGTACTCGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:38)
QIQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGSYSSSWYSFDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:39)
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTCGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCTCCTCATATGCAGGTGATATTAGTTATGTACTGTTCGGCGGCGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:40)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGDISYVLFGGGTKLTVL
实施例11：抗体编号：3-1B11(B11)
VH
DNA(SEQ ID NO:41)
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTTAGTGACTATGACATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGAGTTCTTTGGTGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
氨基酸(SEQ ID NO:42)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYDMIWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEFFGAFDIWGQGTMVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:43)
TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCGGTGGCCTTGGGACAGACAGTCACGATCACATGCCAAGGAGACAGCCTCAATTACTATTATGCAAACTGGTTCCAGCTGAAGCCAGGGCAGGCCCCTGTACTTGTCCTCTTTGGTAAAAACAACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTCTCTGGCTCCTACTCGGGAAGCACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATGACGCTGACTATTACTGTAATTCGCGGGACAGCGGTGGTAATCCTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:44)
SSELTQDPAVSVALGQTVTITCQGDSLNYYYANWFQLKPGQAPVLVLFGKNNRPSGIPDRFSGSYSGSTASLTITGAQAEDDADYYCNSRDSGGNPWVFGGGTKLTVL
实施例12：抗体编号：4-1F3
VH
DNA(SEQ ID NO:45)
CAAATCCAGCTGGTACAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATCCTTGGTATAGCAGACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAACTGAGTAGCCTGGGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTTTTGTGCGAGAGAGGGGGGATCCTTTAGGCACTTTGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:46)
QIQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIADYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLGSEDTAVYFCAREGGSFRHFDFWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:47)
CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTCTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCGCTGGGAGCGACCCCAACATCGGGACAGGTCATGATGTGCACTGGTACCAGCAACTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCGTCATCTATGGTAACACCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGAGCGATTCACTGCCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGGCCTACGACAGGAGCCTGCGTGGTTATGTCTTCGGGACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTG
氨基酸(SEQ ID NO:48)
QPVLTQPPSVSGAPGQRVTISCAGSDPNIGTGHDVHWYQQLPGTAPKLVIYGNTNRPSGVPERFTASKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQAYDRSLRGYVFGTGTKVTVL
实施例13：抗体编号：4-1G5
VH
DNA(SEQ ID NO:49)
CAAATCCAGCTGGTACAGTCTGGTGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGACTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAACTACAGGTGACGAGTGGCTACGATTGGCTATAAATGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:50)
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARTTGDEWLRLAINDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:51)
GATATTGTGATGACACAGTCTCCCCTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCTGCGCCTCATGCATCCTAATGGACTCAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTAATCTTTTTGGGTTCTCAGCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGCATTTATTACTGCATGCAAGCTCTAGAACCTCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:52)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSLRLMHPNGLNYLDWYLQKPGQSPQLLIFLGSQRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQALEPPYTFGQGTKLEIK
实施例14：抗体编号：4-1C9
VH
DNA(SEQ ID NO:53)
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCCGGGTATAGCAGTGGCTGGAAAGATGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
氨基酸(SEQ ID NO:54)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGYSSGWKDDAFDIWGQGTMVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:55)
GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGATACAGCCTCCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGACTGTTAGCAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATACATCCAACAGGGCCGCTGGCATCCCGGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGTAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTACGGTAGCTCACTCTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:56)
EIVMTQSPGTLSLSPGDTASLSCRASQTVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYDTSNRAAGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYGSSLWTFGQGTKVEIK
实施例15：抗体编号：11-A4
VH
DNA(SEQ ID NO:57)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGGGCAGCAGCTGGTAGCCCTTTGGTACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:58)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAGQQLVALWYYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:59)
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCGTGGACAGTCAGTCTCCATCTCCTGCAGTGGAAGTCGCAGTGACATTGGATATTATAACTATGTCTCCTGGTATCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATCATTTTTGACGTCAATAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGCCTCCAGCCTGAGGATGAGGCTGACTATTATTGCGCCTCTTATGGAGGCAGGAACAATTTGCTTTTTGGCGGAGGGACTCAACTGACCGTCTTA
氨基酸(SEQ ID NO:60)
QSALTQPPSASGSRGQSVSISCSGSRSDIGYYNYVSWYQQHPGKAPKLIIFDVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCASYGGRNNLLFGGGTQLTVL
实施例16：抗体编号：21-A1
VH
DNA(SEQ ID NO:61)
CAGGTGCAACTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGGAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTTCTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGCTATATCAATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAGATATTATGGTTCGGGGAGTTAAGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCC
TCA
氨基酸(SEQ ID NO:62)
QVQLQESGPGLVEPSETLSLTCTVSGGSISSFYWSWIRQPPGKGLEWIGYINYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQILWFGELRWFDPWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:63)
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACATTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACTGCGCCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGACGTCACCAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:64)
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNYVSWYQLRPGKAPKLMIYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNVVFGGGTKLTVL
实施例17：抗体编号：21-H12
VH
DNA(SEQ ID NO:65)
CAAGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAATCCCTACGGTTTCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:66)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNPYGFNWFDPWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:67)
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCCGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATGGCTTCAATCAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:68)
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDGFNQVFGGGTKLTVL
实施例18：抗体编号：7-D12
VH
DNA(SEQ ID NO:69)
CAAATGCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAACCGGTAGTAGTGGTTATGTACGTTGGAGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:70)
QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTGSSGYVRWSNWFDPWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:71)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCCTCCACCCTGTCTGCATTTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTGAGAGTATTAGTAGGTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTAATCTCTAAGACGTCTAATTTAGAAAGCGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCGCTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAGTCTGCAACCTGAGGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGGTTCCAAAATGCCTCCGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAG
氨基酸(SEQ ID NO:72)
DIQMTQSPSTLSAFVGDRVTITCRASESISRWLAWYQQKPGKAPKLLISKTSNLESGVPSRFSGAGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQGSKMPPTFGGGTKVEIK
实施例19：抗体编号：9-E3
VH
DNA(SEQ ID NO:73)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGCCTACGGTGGTAACTCCGCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:74)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAYGGNSAFDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:75)
CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATGTACAGTAATGATCAGCGGCCCTCAGGGGTCACTGAGCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAAGATGAGGGTGATTACTACTGCCAGTCCTATGACAGAAGCCTGAGAGGTTCGGTCTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTC
氨基酸(SEQ ID NO:76)
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLMYSNDQRPSGVTERFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEGDYYCQSYDRSLRGSVFGGGTKLTVL
实施例20：抗体编号：10-A6
VH
DNA(SEQ ID NO:77)
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATTCCATAGCAGCAGCTGGTACTCCGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:78)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDSIAAAGTPFDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:79)
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTCACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCATCATTGCCAGCAAATATGTGCACTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCGTCTGGGGTCCCTGATCGATTCTCTGGCTCCATCGACAACTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGCAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTCATGACGGCATCAATCAGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:80)
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGIIASKYVHWYQQRPGSAPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDNSSNSASLTISGLQTEDEADYYCQSHDGINQVFGGGTKVTVL
实施例21：抗体编号：12-A4
VH
DNA(SEQ ID NO:81)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCCGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAACTTCTGGATTCAGCTTTAACAACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTGTTAGTGGTAGTGGTGGTACCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTTTGTGCAGATGGACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGGACTTTTCCCTACGATTTTTGGAGTAGGAGCAATGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:82)
EVQLVESRGGLVQPGGSLRLSCVTSGFSFNNYAMNWVRQAPGKGLEWVSAVSGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFVQMDSLRAEDTAVYYCAKGLFPTIFGVGAMFDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:83)
TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATGCTGTTAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGATAATAATCACCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTATTGTGCAGCATGGGATGACACCATTCCTGGTGTGCTATTCGCCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:84)
SSELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDTIPGVLFAGGTKLTVL
实施例22：抗体编号：14-G10
VH
DNA(SEQ ID NO:85)
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTGTTTCTTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:86)
EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGVSYYYGMDVWGQGTTVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:87)
CAGGCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCATCATCTCCTGTTCTGGACATAAATTGGGTGATAAGTATGTTTCCTGGTATCAACAGCAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCCTCTTTCAGGATACCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGCGACCCAGGCTGCGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGGGGGACACCAAGTCTGTGATCTTCGGCGGCGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
氨基酸(SEQ ID NO:88)
QAVLTQPPSVSVSPGQTAIISCSGHKLGDKYVSWYQQQPGQSPVLVLFQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISATQAADEADYYCQAGDTKSVIFGGGTKLTVL
实施例23：抗体编号：22-A6
VH
DNA(SEQ ID NO:89)
CAGGTTCAGGTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGGCAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGATACAGCTATGGTTCAGGACACCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:90)
QVQVVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYSYGSGHLDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:91)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCGCTCTCACCATCAGCAGTCTCCAACCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCTCGGACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:92)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFALTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPRTFGQGTKLEIK
实施例24：抗体编号：35-B1
VH
DNA(SEQ ID NO:93)
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTGACACAGCCTATACACAGAACTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACCCCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAACCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCGGGGGTTCGCGGAGAAGCCCCTTGGGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:94)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGDTAYTQNFQGRVTMTRNPSISTAYMELSNLRSEDTAVYYCARGRGFAEKPLGYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:95)
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGGGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTATTTTATCCAGCTCCAATAATAAGAACTATTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGGTTCAGCGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCTCCGACATTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:96)
DIVMTQSPDSLAVSLGGRATINCKSSQSILSSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVEIK
实施例25：抗体编号：3-1F4
VH
DNA(SEQ ID NO:97)
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGGCCCCTCGAGGGCAGTGGCTGGTTCACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:98)
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAPRGQWLVHYFDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:99)
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTCTCTCTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCTGGGCCAGTCAGGATGTTAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAGCCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAACGTAGCAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGCGGGACCAAGGTGGAGCTCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:100)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCWASQDVSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVELK
实施例26：抗体编号：4-1B3
VH
DNA(SEQ ID NO:101)
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTCGTCCGCAGGTATTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
氨基酸(SEQ ID NO:102)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARESYSSAGIDYWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:103)
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGACCCTCCTGCATAGTAATGGATTCAACTATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAACTCCTGATGTATTTGGGCTCTAGCCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCGGGCACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAACTCTACAAACTCCTCCGGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
氨基酸(SEQ ID NO:104)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQTLLHSNGFNYLDWYLQKPGQSPQLLMYLGSSRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTLQTPPAFGGGTKVEIK
实施例27：抗体编号：21-G1
VH
DNA(SEQ ID NO:105)
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGACGATTTCCTGCGAGGCGTCTGGATACAACTTCATCAGCTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGATTCGTCGTCCCTAGTGGTGGTGCCGCAGGCTACACACAGAAGTTCCAGGGCAGACTCACCGTGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGACCTGAACAGCCTGACATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGTGCGAGAAATGAGTGGTGGCTGGTTTGATTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCG
氨基酸(SEQ ID NO:106)
QVQLVQSGAEVKKPGASVTISCEASGYNFISYYIHWVRQAPGQGLEWMGFVVPSGGAAGYTQKFQGRLTVTRDTSTSTVYMDLNSLTSDDTAVYYCVREMSGGWFDFWGQGTLVTVSS
VL
DNA(SEQ ID NO:107)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
氨基酸(SEQ ID NO:108)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPITFGQGTRLEIK
对本领域技术人员而言，本发明可以产生多种不同的修饰和变种，且不会脱离本发明的范围或精神，是显而易见的。对本领域技术人员而言，参考本公开发明的说明书和实践，本发明的其它实施方案是显而易见的。我们希望说明书和实施例只是被认为是示例的，以下的权利要求书会对本发明的真正的范围和精神进行阐述。
贯穿本申请，为更全面地描述和本发明有关的现有技术的情况，参考了不同的公开、专利、和/或专利申请。这些公开、专利、和/或专利申请的公开在本文中以其整体作为参考并入，就如同每一个单独的公开、专利、和/或专利申请专门地、单个地被指出作为参考并入。
Claims (18)
1.一种结合人PD-L1表位的抗原结合多肽，包含重链可变区和轻链可变区，其中它们各自的序列基本上由：
(a)SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20；
(b)SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44；
或
(c)SEQ ID NO:34和SEQ ID NO:36组成。
2.一种结合人PD-L1表位的抗原结合多肽，包含重链可变区和轻链可变区，其中它们各自的序列基本上由：
(a)SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24；
(b)SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4；
(c)SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64；
或
(d)SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84组成。
3.一种结合人PD-L1表位的抗原结合多肽，包含重链可变区和轻链可变区，其中他们各自的序列基本上由：
(a)SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:72；
(b)SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:52；
(c)SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:104；
或
(d)SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32组成。
4.一种结合人PD-L1表位的抗原结合多肽，包含重链可变区和轻链可变区，其中它们各自的序列基本上由：
(a)SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8；
(b)SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12；
(c)SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16；
(d)SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:28；
(e)SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40；
(f)SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:48；
(g)SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:56；
或
(h)SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:60组成。
5.一种结合人PD-L1表位的抗原结合多肽，包含重链可变区和轻链可变区，其中它们各自的序列基本上由：
(a)SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:68；
(b)SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:76；
(c)SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:80；
(d)SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:88；
(e)SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:92；
(f)SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:96；
(g)SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:100；
或
(h)SEQ ID NO:106和SEQ ID NO:108组成。
6.根据权利要求1所述的抗原结合多肽，其中所述多肽具有重链可变区序列，所述重链可变区序列至少95％与SEQ ID NO:18相同，和轻链可变区序列，所述轻链可变区至少95％与SEQ ID NO:20相同。
7.根据权利要求1-6任一项所述的抗原结合多肽，其中所述多肽是完全人源抗体。
8.根据权利要求7所述的抗原结合多肽，其中所述抗体进一步包含人源恒定区，其中所述人源恒定区具有ADCC和/或CDC活性。
9.一种编码权利要求1-6任一项所述的抗原结合多肽的核酸分子，其中所述核酸分子是DNA分子或RNA分子。
10.根据权利要求9所述的核酸分子，其中所述核酸分子基本上由：(a)SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19；(b)SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:35；或(c)SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43组成。
11.一种结合人PD-L1表位的抗体，包含与权利要求1-6任一项中所述的任一对重链可变区和轻链可变区基本上相同的重链可变区和轻链可变区。
12.一种包含权利要求1-8所述的抗原结合多肽或权利要求11所述的抗体的药物组合物，及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
13.一种用于治疗有需要的受试者状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求12所述的药物组合物。
14.一种治疗有需要的受试者状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求13所述的药物组合物，联合(a)靶向其它免疫抑制通路的抗体；(b)化疗或放射治疗；(c)其它阻断免疫抑制通路的机制；或(d)其它免疫治疗剂。
15.权利要求13-14任一项所述的方法，其中所述状况是哺乳动物癌症，该哺乳动物癌症选自下列所组成的群组中：卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨髓瘤、神经母细胞源性中枢神经系统肿瘤、单核细胞白血病、B细胞源性白血病、T细胞源性白血病、B细胞源性淋巴瘤、T细胞源性淋巴瘤、肥大细胞肿瘤、黑色素瘤、膀胱癌、胃癌、肝癌、尿路上皮癌、皮肤癌、肾癌、头颈部癌、胰腺癌以及其组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述哺乳动物癌症具有至少部分肿瘤细胞表达可检测量的PD-L1。
17.一种多肽，与权利要求1-5任一项所述的多肽竞争结合PDL1。
18.一种哺乳动物表达系统，产生权利要求1-8任一项所述的多肽。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310026623.5A CN116410320A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
| CN202211332831.XA CN116063519A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862720015P | 2018-08-20 | 2018-08-20 | |
| US62/720,015 | 2018-08-20 | ||
| PCT/CN2019/101659 WO2020038379A1 (en) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | Novel cancer immunotherapy antibody compositions |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310026623.5A Division CN116410320A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
| CN202211332831.XA Division CN116063519A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112839963A true CN112839963A (zh) | 2021-05-25 |
| CN112839963B CN112839963B (zh) | 2023-02-10 |
Family
ID=69591356
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211332831.XA Pending CN116063519A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
| CN201980054723.0A Active CN112839963B (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
| CN202310026623.5A Pending CN116410320A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211332831.XA Pending CN116063519A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310026623.5A Pending CN116410320A (zh) | 2018-08-20 | 2019-08-20 | 新型癌症免疫治疗抗体组合物 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210332138A1 (zh) |
| EP (1) | EP3841126A4 (zh) |
| JP (1) | JP7488534B2 (zh) |
| KR (1) | KR20210046725A (zh) |
| CN (3) | CN116063519A (zh) |
| AU (1) | AU2019324388A1 (zh) |
| BR (1) | BR112021003182A2 (zh) |
| CA (1) | CA3110138A1 (zh) |
| MX (1) | MX2021002077A (zh) |
| SG (1) | SG11202101757QA (zh) |
| TW (1) | TW202016150A (zh) |
| WO (1) | WO2020038379A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023187460A1 (en) * | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Mabtree Biologics Ag | Human antibody or antigen binding fragment thereof specific against pd-l1 to enhance t-cell function |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100068135A1 (en) * | 2005-08-08 | 2010-03-18 | Onconon, Llc | Antibody compositions, methods for treating neoplastic disease and methods for regulating fertility |
| CN102264762A (zh) * | 2008-09-26 | 2011-11-30 | 达纳-法伯癌症研究公司 | 人抗pd-1、pd-l1和pd-l2的抗体及其应用 |
| CN104736168A (zh) * | 2012-05-31 | 2015-06-24 | 索伦托治疗有限公司 | 与pd-l1结合的抗原结合蛋白 |
| CN105777906A (zh) * | 2014-12-19 | 2016-07-20 | 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 | 抗pd-l1全人抗体及其应用 |
| US20160326264A1 (en) * | 2015-03-10 | 2016-11-10 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind psma |
| US20170022273A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind lag3 |
| CN106432501A (zh) * | 2015-08-06 | 2017-02-22 | 上海药明生物技术有限公司 | 新型抗pd‑l1抗体 |
| CN106496327A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-03-15 | 昆山百尔泰生物科技有限公司 | 针对pd‑l1胞外段的人源抗体或抗体片段和用途、核苷酸序列和载体 |
| US20170218066A1 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Heyue Zhou | Antigen binding proteins that bind pd-l1 |
| CN107973854A (zh) * | 2017-12-11 | 2018-05-01 | 苏州银河生物医药有限公司 | Pdl1单克隆抗体及其应用 |
| CN108350082A (zh) * | 2016-06-13 | 2018-07-31 | 爱迈博 | Pd-l1抗体及其用途 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101888321B1 (ko) * | 2005-07-01 | 2018-08-13 | 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. | 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체 |
| CN102245640B (zh) * | 2008-12-09 | 2014-12-31 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途 |
| MX359551B (es) | 2009-11-24 | 2018-10-02 | Medimmune Ltd | Agentes de union diana contra b7-h1. |
| PT2785375T (pt) * | 2011-11-28 | 2020-10-29 | Merck Patent Gmbh | Anticorpos anti-pd-l1 e usos destes |
| AR093984A1 (es) * | 2012-12-21 | 2015-07-01 | Merck Sharp & Dohme | Anticuerpos que se unen a ligando 1 de muerte programada (pd-l1) humano |
| WO2017020291A1 (en) * | 2015-08-06 | 2017-02-09 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. | Novel anti-pd-l1 antibodies |
| CN108239149B (zh) * | 2016-12-25 | 2021-03-05 | 南京传奇生物科技有限公司 | 高亲和力、高特异性、多抗原识别表位的具有更高功能性的抗人pd-l1抗体 |
| MX2021004916A (es) * | 2018-10-29 | 2021-06-18 | 1Globe Biomedical Co Ltd | Nuevas composiciones proteicas de diseño idóneo. |
-
2019
- 2019-08-20 JP JP2021509199A patent/JP7488534B2/ja active Active
- 2019-08-20 CN CN202211332831.XA patent/CN116063519A/zh active Pending
- 2019-08-20 KR KR1020217008130A patent/KR20210046725A/ko unknown
- 2019-08-20 TW TW108129705A patent/TW202016150A/zh unknown
- 2019-08-20 CA CA3110138A patent/CA3110138A1/en active Pending
- 2019-08-20 BR BR112021003182-0A patent/BR112021003182A2/pt unknown
- 2019-08-20 CN CN201980054723.0A patent/CN112839963B/zh active Active
- 2019-08-20 WO PCT/CN2019/101659 patent/WO2020038379A1/en active Application Filing
- 2019-08-20 SG SG11202101757QA patent/SG11202101757QA/en unknown
- 2019-08-20 MX MX2021002077A patent/MX2021002077A/es unknown
- 2019-08-20 US US17/270,034 patent/US20210332138A1/en active Pending
- 2019-08-20 AU AU2019324388A patent/AU2019324388A1/en active Pending
- 2019-08-20 CN CN202310026623.5A patent/CN116410320A/zh active Pending
- 2019-08-20 EP EP19853152.7A patent/EP3841126A4/en active Pending
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100068135A1 (en) * | 2005-08-08 | 2010-03-18 | Onconon, Llc | Antibody compositions, methods for treating neoplastic disease and methods for regulating fertility |
| CN102264762A (zh) * | 2008-09-26 | 2011-11-30 | 达纳-法伯癌症研究公司 | 人抗pd-1、pd-l1和pd-l2的抗体及其应用 |
| CN104736168A (zh) * | 2012-05-31 | 2015-06-24 | 索伦托治疗有限公司 | 与pd-l1结合的抗原结合蛋白 |
| CN105777906A (zh) * | 2014-12-19 | 2016-07-20 | 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 | 抗pd-l1全人抗体及其应用 |
| US20160326264A1 (en) * | 2015-03-10 | 2016-11-10 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind psma |
| US20170022273A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind lag3 |
| CN106432501A (zh) * | 2015-08-06 | 2017-02-22 | 上海药明生物技术有限公司 | 新型抗pd‑l1抗体 |
| US20170218066A1 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Heyue Zhou | Antigen binding proteins that bind pd-l1 |
| CN108350082A (zh) * | 2016-06-13 | 2018-07-31 | 爱迈博 | Pd-l1抗体及其用途 |
| CN106496327A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-03-15 | 昆山百尔泰生物科技有限公司 | 针对pd‑l1胞外段的人源抗体或抗体片段和用途、核苷酸序列和载体 |
| CN107973854A (zh) * | 2017-12-11 | 2018-05-01 | 苏州银河生物医药有限公司 | Pdl1单克隆抗体及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20210332138A1 (en) | 2021-10-28 |
| JP7488534B2 (ja) | 2024-05-22 |
| CN116410320A (zh) | 2023-07-11 |
| KR20210046725A (ko) | 2021-04-28 |
| AU2019324388A1 (en) | 2021-03-18 |
| WO2020038379A1 (en) | 2020-02-27 |
| MX2021002077A (es) | 2021-05-27 |
| EP3841126A4 (en) | 2022-08-10 |
| CA3110138A1 (en) | 2020-02-27 |
| CN112839963B (zh) | 2023-02-10 |
| EP3841126A1 (en) | 2021-06-30 |
| SG11202101757QA (en) | 2021-03-30 |
| JP2021534750A (ja) | 2021-12-16 |
| BR112021003182A2 (pt) | 2021-05-11 |
| CN116063519A (zh) | 2023-05-05 |
| TW202016150A (zh) | 2020-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3575322A1 (en) | Anti-pd-1 monoclonal antibody, and preparation method therefor and application thereof | |
| JP2023075294A (ja) | 抗ｃｄ４７抗体及びその応用 | |
| CN108026169B (zh) | 抗人cd137的完全人抗体及其应用 | |
| JP2020535839A (ja) | Ｃｄ４７およびｐｄ−ｌ１に特異的な抗体 | |
| CN113880952A (zh) | 自然杀伤细胞接合抗体融合构建体 | |
| JP2022550832A (ja) | Ｃｄ３を標的とする抗体、二重特異性抗体及びその使用 | |
| EA036779B1 (ru) | Моноклональное антитело к pd-1 и способ его получения | |
| IL247715B (en) | Antigen binding molecules that activate the immune system | |
| JP7496091B2 (ja) | 合理的に設計された新規なタンパク質組成物 | |
| JP7397897B2 (ja) | ヒトｐｄ－ｌ１に結合する抗体 | |
| EP4378954A1 (en) | Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibody and application | |
| JP7365654B2 (ja) | 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体 | |
| JP2022153280A (ja) | Ｐｄ－１とｖｅｇｆを標的とした四価二重特異性抗体、その製造方法および用途 | |
| US20230357398A1 (en) | Novel human antibodies binding to human cd3 epsilon | |
| JP7352007B2 (ja) | ヒト化抗ｖｅｇｆモノクローナル抗体 | |
| JP7488534B2 (ja) | 新規ながん免疫療法抗体組成物 | |
| EP4393946A1 (en) | Cdc platform antibody | |
| RU2809746C2 (ru) | Гуманизированное моноклональное антитело против vegf | |
| AU2020272376B2 (en) | Bispecific antibody specifically binding to GPNMB and CD3, and use thereof | |
| WO2022141378A1 (zh) | 一种抗pd-1的单域抗体 | |
| WO2021045184A1 (ja) | 多血症治療薬 | |
| CN114075288A (zh) | 抗pd-l2抗体 | |
| CN116897207A (zh) | 稳定的多特异性分子及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40047112 Country of ref document: HK |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |