CN112830973A - 嵌合多肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种嵌合多肽，其包含截短的HLA‑E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA‑E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。

Description

嵌合多肽及其用途
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种嵌合多肽及其用途。
背景技术
目前，免疫疗法在癌症、传染病、以及自身免疫性疾病等等疾病中显示出广泛的潜力。例如，过继性细胞疗法(ACT)就是依赖在体外刺激和扩增的自体或者异体淋巴细胞回输到人体中，以达到治疗疾病的目的。但是及时并高效制造和输注淋巴细胞是实施有效ACT疗法的最大障碍，如果以自体淋巴细胞进行制备，虽然避免了免疫排斥的问题但是同时也受到病人自身条件的诸多限制，例如，病人自身免疫系统障碍；又例如在肿瘤治疗领域，病人之前采用化疗方案治疗，化疗药物会引起病免疫细胞在体外扩增困难或功能降低，导致不能产生足够数量的免疫细胞产品，或质量较差。为了增加免疫细胞的范围，异体淋巴细胞移植吸引了更多的注意，然而异体淋巴细胞移植则不可避免的会有免疫排斥的问题，针对该问题虽然已出现众多的解决方案，例如通用型T细胞、通用型CAR-T细胞等，但是由于其自身的缺陷(例如由于缺失I类MHC分子而被一些免疫细胞消杀)在受试者体内存续时间不理想，因此，提高供体免疫细胞在移植后的存续时间仍需进一步解决。
发明内容
本申请提供了一种嵌合多肽、编码该嵌合多肽的核酸分子、表达该嵌合多肽的免疫效应细胞，以及该嵌合多肽、编码该嵌合多肽的核酸分子、和/或表达该嵌合多肽的细胞的用途，所述嵌合多肽包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。本申请提供的技术方案具有至少如下技术效果：通过向免疫效应细胞中引入所述嵌合多肽，能够延长免疫效应细胞在异体环境中的存续能力，显示了在过继性细胞疗法(ACT)中的广阔应用前景。
一方面，本申请提供一种嵌合多肽，其包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽以N端至C端的顺序包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述截短的HLA-E重链包含α1域。
在某些实施方式中，所述截短的HLA-E重链包含α1域、α2域。
在某些实施方式中，所述截短的HLA-E重链还包含α3域，所述α3域位于所述α2域或α1域和所述铰链域之间。
在某些实施方式中，所述截短的HLA-E重链自N端至C端依次包含：α1域、α2域、α3域。
在某些实施方式中，所述截短的HLA-E重链包含如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述源自共刺激分子的共刺激结构域包含选自下述蛋白的共刺激结构域：：CD137/4-1BB、CD28、OX-40、ICOS、CD30、CD40、LFA-1、CD2、CD7、CD160(BY55)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL7Rα、γc(IL-2RG)、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、CD40L、TIM1、CD226、DR3、SLAM、PD-1、、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD27、GITR、HVEM、DAP10、NKG2C、LIGHT和DAP12。
在某些实施方式中，所述源自共刺激分子的共刺激结构域包含如SEQ ID NO:6-11中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述初级信号转导分子的信号传导结构域包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、Igα受体、Igβ受体、BLV gp30(bovine leukemia virus gp30)、EBV(Ep-stein-Barr virus)LMP2A、猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus)PBj14 Nef和和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。
在某些实施方式中，所述初级信号转导分子的信号传导结构域包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域包含4-1BB共刺激结构域和/或CD3ζ信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域自N端至C端依次包含4-1BB共刺激结构域、CD3ζ信号传导结构域。
在某些实施方式中，所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域和/或源自非HLA-E重链的跨膜域。
在某些实施方式中，所述源自非HLA-E重链的跨膜域包含选自下述蛋白的跨膜域：CD27、CD7、PD1、TRAC、TRBC、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
在某些实施方式中，所述来源自非HLA-E重链的跨膜域包含SEQ ID NO:16-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域和/或源自非HLA-E重链的铰链域。
在某些实施方式中，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：CD28、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-DQ、HLA-DP、HLA-DR、CD8、Fc、IgG、IgD、4-1BB、CD4、CD27、CD7和PD1。
在某些实施方式中，所述来源自非HLA-E蛋白的铰链域包含SEQ ID NO:22-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽还包含B2M蛋白。
在某些实施方式中，所述B2M蛋白位于所述截短的HLA-E重链的N端。
在某些实施方式中，所述B2M蛋白包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽还包含膜定位信号肽。
在某些实施方式中，所述膜定位信号肽位于所述B2M蛋白的N端。
在某些实施方式中，所述膜定位信号肽包含选自下述蛋白的膜定位信号肽：B2M和CD8。
在某些实施方式中，所述膜定位信号肽包含SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽还包含呈递肽段。
在某些实施方式中，所述呈递肽段位于所述B2M蛋白和所述膜定位信号肽之间。
在某些实施方式中，所述呈递肽段包含HLA-A2信号肽、HLA-B7信号肽、HLA-B15信号肽、HLA-Cw3信号肽、HLA-Cw7信号肽、HLA-G信号肽、HLA-F信号肽、CMV多肽、EBV多肽和/或HIV多肽。
在某些实施方式中，所述呈递肽段包含SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽还包含第一连接肽，所述第一连接肽连接所述B2M蛋白和所述截短的HLA-E重链。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽还包含第二连接肽，所述第二连接肽连接所述呈递肽段和所述B2M蛋白。
在某些实施方式中，所述第一连接肽或第二连接肽包含SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽包含所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。
在某些实施方式中，所述嵌合多肽包含如SEQ ID NO:88-89中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
在某些实施方式中，所述HLA-E重链选自如下亚型：HLA-E*01:01和HLA-E*01:03。
另一方面，本申请还提供了核酸分子，其编码本申请所述的嵌合多肽。
在某些实施方式中，所述核酸分子包含SEQ ID NO:103-104中任一项所示的核酸序列。
另一方面，本申请还提供了载体，其包含本申请所述的核酸分子。
另一方面，本申请还提供了免疫效应细胞，其包含本申请所述的嵌合多肽、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体。
在某些实施方式中，所述免疫效应细胞包含淋巴细胞。
在某些实施方式中，所述免疫效应细胞选自T细胞、B细胞、NK细胞、树突状递呈细胞、NKT细胞、浆细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。
另一方面，本申请还提供了提高免疫效应细胞存续能力的方法，其包括向所述免疫效应细胞中引入本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体。
在某些实施方式中，所述方法还包括使所述免疫效应细胞表达本申请所述的嵌合多肽。
在某些实施方式中，所述方法在离体条件下进行。
另一方面，本申请还提供了药物组合物，其包含本申请所述的嵌合多肽或本申请所述的免疫效应细胞。
另一方面，本申请还提供了本申请所述的嵌合多肽，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，或本申请所述的免疫效应细胞用于制备药物的用途，其中所述药物用于预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：
图1显示的是本申请所述的嵌合多肽NKi、NKi-1、NKi-2的结构示意图。
图2显示的是本申请所述的经载体转染并进行基因编辑的靶细胞的流式细胞结果图。
图3显示的是本申请所述的靶细胞在异体PBMC-1条件下的存续能力结果图。
图4显示的是本申请所述的靶细胞在异体PBMC-2条件下的存续能力结果图。
图5显示的是本申请所述的靶细胞在异体PBMC条件下的增殖情况结果图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“HLA”通常是指人类白细胞抗原(human leukocyte antigen)家族或其功能性变体。HLA家族是一类细胞表面蛋白，其主要负责调节人体的免疫系统。HLA基因位于染色体6p21及其他位置(例如HLA-E位于17号染色体)，表现为高度多态性，编码数量庞大的等位基因。通常可以包括LA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-DP、HLA-DM、HLA-DO、HLA-DQ、HLA-DR，其中可以分为两大类，MHC I类包括LA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G；MHC II类包括HLA-DP、HLA-DM、HLA-DO、HLA-DQ、HLA-DR。HLA类分子具有抗原呈递等功能，在免疫功能中起到重要作用，同时也是器官移植免疫排斥的重要因素。
在本申请中，术语“HLA-E重链”通常是指人类白细胞抗原(human leukocyteantigen)E的α链或其功能性变体。HLA-E基因位于17号染色体17B1(例如如MGI：2442805所示信息)。一般情况下，HLA-E基因包含8个外显子，外显子1编码信号肽，外显子2和3编码与肽结合的α1和α2结构域，外显子4编码α3结构域，外显子5编码跨膜结构域，外显子6和7编码胞质域。
在本申请中，术语“截短的HLA-E重链”通常是指自HLA-E重链截取的一段多肽序列或其功能性变体。例如，所述截短的HLA-E重链可以不含有完整的胞质域、跨膜域、铰链域。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α1结构域、α2结构域、和/或α3结构域。
在本申请中，术语“功能性变体”通常是指所述功能性变体可以包括在原蛋白序列上进行氨基酸修饰(例如基团取代等)或者进行一个或多个氨基酸的插入、取代、和/或缺失，而保留原序列功能的分子。例如，所述功能性变体可以比原序列具有更好的生物活性(或功能)。例如，所述保留不必是完全保留。例如，所述功能性变体可以基本保留原序列功能，例如，保留原序列至少50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％的功能。例如，所述功能性变体的氨基酸序列可以与原氨基酸序列至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，或99％相同。
在本申请中，术语“源自非HLA-E重链的胞内激活信号域”通常是指来自于HLA-E重链之外的任何分子的胞内信号传导结构域或其功能性变体。例如，可以是能够产生和/或传递免疫效应子功能信号的胞内信号传导结构域。
在本申请中，术语“初级信号转导分子”通常是指能够通过与TCR形成的复合物(例如TCR/CD3)与载有肽的MHC分子识别/结合引发并介导T细胞免疫效应子功能的细胞信号分子或其功能性变体。所述的免疫效应子功能包括但不限于、增殖、活化、分化等。所述免疫效应子功能或免疫效应子反应”指例如免疫效应细胞的增强或促进免疫攻击靶细胞的功能或应答。例如，免疫效应子功能或应答指促进杀伤靶细胞或抑制靶细胞生长或增殖的T细胞或NK细胞特性。在T细胞的情况下，初级刺激和共刺激是免疫效应子功能或应答的例子。初级信号转导分子不限于T细胞的细胞信号分子，只要是其信号传导结构域在天然或人工操作(例如表达融合蛋白等)的条件下能够引发和/或介导免疫细胞免疫效应子功能的细胞信号分子均在术语“初级信号转导分子”的范围内。
在本申请中，术语“共刺激分子”通常是指免疫细胞(例如T细胞)上与共刺激配体特异性结合，从而介导免疫细胞(例如T细胞)的共刺激反应(例如但不限于增殖)的结合分子或其功能性变体。共刺激分子是除抗原受体或其配体之外有助于免疫应答(例如，产生细胞活化的第二信号)的细胞表面分子。共刺激分子可以包括以下蛋白质家族中：TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化性NK细胞受体、MHC I类分子、BTLA和Toll配体受体等。例如，OX40、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)和/或4-1BB(CD137)。共刺激分子不限于T细胞的细胞表面分子，只要是其信号传导结构域在天然或人工操作(例如表达融合蛋白等)的条件下能够介导免疫细胞共刺激反应的的细胞分子均在术语“共刺激分子”的范围内。
在本申请中，术语“共刺激结构域”可以是共刺激分子的胞内部分或其截短形式或他们的功能性变体，所述胞内部分或其截短形式能够传导共刺激信号(也称作第二信号)。
在本申请中，术语“4-1BB”，也称作“CD137”通常是指TNFR超家族成员，所述成员可以具有作为GenBank登录号AAA62478.2提供的氨基酸序列或其功能性变体或来自非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的等同残基。“4-1BB共刺激结构域”可以定义为GenBank登录号AAA62478.2的氨基酸残基214-255或来自非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的等同残基。CD137(4-1BB)可以是在活化的CD4+和CD8+T细胞、NKT、NK细胞、DC、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞以及Tregs上表达的诱导型共刺激受体。
在本申请中，术语“初级信号转导分子的信号传导结构域”，也称作“初级信号传导结构域”)通常是指含有称作基于免疫受体酪氨酸的活化基序或ITAM的信号转导导序列。例如，衍生自CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10和DAP12的初级信号传导结构域。在某些实施方式中，初级信号传导结构域转导效应功能信号并指导细胞进行特化功能。虽然可以使用整个初级信号传导结构域，但在许多情况下，不必使用整个链。就使用初级信号传导结构域的截短部分而言，此类截短部分可用于代替完整链，只要其能够转导效应子功能信号即可。因此，初级信号传导结构域意在包括足以转导效应子功能信号的胞内信号传导结构域的任一截短部分。
在本申请中，术语“CD3ζ”也写作CD3zeta，通常指来自分化簇3(CD3)ζ链的胞质结构域的氨基酸残基，其足以功能性地传递免疫效应细胞(例如T细胞)活化所需的初始信号。
在本申请中，术语“CD8”也称作分化簇8，通常是指一类作为T细胞受体的辅助受体的跨膜糖蛋白。该蛋白质有两种亚型，即α和β，分别由不同的基因编码。在人类中，这两个基因都位于2号染色体的2p12位置。
在本申请中，术语“铰链域”通常是指在蛋白质的两个域之间的氨基酸区段，其能够允许蛋白质的柔性和/或一个或两个以上的域相对于彼此的运动。例如来源于IgG家族(例如IgG1和IgG4)、IgD以及其他蛋白分子的铰链域，例如来自于CD28、HLA家族的铰链域。
在本申请中，术语“HLA-A”通常是指一类人类白细胞抗原(human leukocyteantigens)多肽链，由位于人类染色体6p21.3的HLA-A基因(例如HGNC:4931所示的信息)编码。
在本申请中，术语“跨膜域”通常是指蛋白质序列中跨越细胞膜的区域。在某些实施方式中，蛋白质序列中跨越细胞膜的区域通常为α-螺旋结构，包含大部分为疏水性的氨基酸。在某些实施方式中，所述跨膜域可获取自天然蛋白质(例如来自于CD8的跨膜域或其功能性衍生序列)，或者，跨膜域可以是合成的非天然存在的蛋白质区段，例如在细胞膜中热力学稳定的疏水性蛋白质区段。
在本申请中，术语“C端”通常是指多肽链的两个末端之一，此末端的氨基酸残基携带游离的α羧基(—COOH)。在某些实施方式中，所述游离的α羧基在某些肽链中也可被酰胺化。
在本申请中，术语“N端”通常是指多肽链的两个末端之一，此末端的氨基酸残基携带游离的α氨基(—NH2)。在某些实施方式中，所述游离的α氨基也可被酰胺化或环化。
在本申请中，术语“连接肽”通常是指一段具备柔性特征的氨基酸序列。例如，所述连接肽可以用于在嵌合多肽(或融合蛋白、嵌合蛋白)连接不同的功能模块，其功能可以包括提高嵌合多肽的折叠和稳定性、提高表达量、提高嵌合多肽的生物活性等。例如，连接肽的长度可以有较大的变化范围，例如，可以在6-59个氨基酸之间；例如，所述连接肽可以是(EAAAK)n、(GGGGS)n等，n≤6。
在本申请中，术语“膜定位信号肽”通常是指位于肽链N端(也可能位于其他位置)的一段序列，其作用为引导肽链定位和/或整合到细胞含不同膜结构的亚细胞器和/或细胞膜。信号肽通常在该过程中被切除，也可能不被切除。
在本申请中，术语“呈递肽段”通常是指HLA-E复合体呈递的一段多肽，能够稳定HLA-E复合体的稳定性和/或结构特异性。例如，所述呈递肽段可以来自于I类MHC分子(例如，HLA-C信号肽、HLA-G信号肽、HLA-Cw*03信号肽等)以及病毒蛋白(例如，病毒蛋白UL40、HIV gag蛋白)。
在本申请中，术语“B2M”通常是指是β2微球蛋白(β2-microglobulin)或其功能性变体，是MHC I类分子的组成部分之一。β2微球蛋白(也称为β链)可以与HLA编码的α链组成MHC I类的分子。B2M通常在所有有核的细胞中都有表达。在人类中，β2微球蛋白由位于15q21.1的B2M基因(例如HGNC:914所示的信息)所编码。
在本申请中，术语“免疫效应细胞”通常是指参与免疫应答，行使效应功能的免疫细胞。例如所述行使效应功能可以包括清除异物抗原或促进免疫效应子应答等。免疫效应细胞可以包括浆细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和骨髓源性吞噬细胞。
在本申请中，术语“药物组合物”通常指涉及适合施用于患者、例如人患者的组合物。例如，本申请所述的药物组合物，其可以包含本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
在本申请中，术语“载体”通常指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及病毒载体等。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。
在本申请中，术语“预防”通常是指对健康患者预防性地施用组合，以预防本申请所述疾病和病症的爆发。此外，术语“预防”指对处于待治疗变应性疾病前期的患者预防性地施用这种组合。术语“预防”不需要100％消除事件的可能性。更准确地说，它表示在所述药物组合物或方法存在下事件发生的可能性降低了。
在本申请中，术语“治疗”通常是指将治疗剂施加或给予患者，或将治疗剂施加或给予由患者分离的组织或细胞系，该患者患有疾病、具有疾病症状或疾病倾向，其目的是治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、提高或影响该疾病、疾病症状或疾病倾向。可以包括改善病状态、消除病灶或改善的预后。
在本申请中，术语“肿瘤”和“癌症”通常是指在正常生长和/或发育中呈现出至少部分失去控制的细胞。例如，常见的肿瘤或癌细胞通常已经失去了接触抑制并可能是入侵性的和/或具有转移的能力。
在本申请中，术语“免疫调节相关的疾病或病症”通常是指免疫调节失去平衡影响机体的免疫应答而引起的疾病或病症。在某些实施方式中，还可以包括先天或后天性原因导致的免疫系统结构上或功能上的异常。例如所述后天原因可以包括细菌或病毒感染，器官移植等。
在本申请中，术语“包含”或“包括”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
发明详述
一方面，本申请提供一种嵌合多肽，其包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
例如，所述嵌合多肽以N端至C端的顺序包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
例如，所述HLA-E重链可以选自国际免疫遗传学数据库(InternationalImmunogenetics Database)中公开的所有亚型(alleles)。
例如，所述HLA-E重链可以选自下述亚型：HLA-E*01:01和HLA-E*01:03。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含自HLA-E重链截取的一段多肽序列或其功能性变体。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α1域、α2域和/或α3域。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α1域。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α2域。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α1域、α2域。例如，所述截短的HLA-E重链还可以包含α3域，所述α3域位于所述α2域/或α1域和所述铰链域之间。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α2域、α3域。例如，所述截短的HLA-E重链可以包含α1域、α3域。例如，所述截短的HLA-E重链可以自N端至C端依次包含：α1域、α2域、α3域。
例如，所述α1域可以包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述α1域可以包含与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述α1域的序列来自于人类。例如，所述α1域的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述α2域可以包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述α2域可以包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述α2域的序列来自于人类。例如，所述α2域的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述α2域还可以包含如下取代：如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中第17位的G被R取代(即HLA-E重链的G107R)。相应地，本申请中任意包含如SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸序列均可以包含所述取代。
例如，所述α3域可以包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述α3域可以包含与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述α3域的序列来自于人类。例如，所述α3域的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含与SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。
例如，所述截短的HLA-E重链的序列来自于人类。例如，所述截短的HLA-E重链的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述HLA-E重链胞内域可以包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述截短的HLA-E重链的序列来自于人类。例如，所述截短的HLA-E重链的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述截短的HLA-E重链可以包含部分HLA-E重链的胞内域，例如所述截短的HLA-E重链可以包含部分HLA-E重链的胞内信号传导结构域。
例如，所述截短的HLA-E重链可以不包含HLA-E重链的胞内信号传导结构域。
例如，所述胞内激活信号域可以包含源自共刺激分子的共刺激结构域。例如，所述胞内激活信号域可以包含源自初级信号转导分子的信号传导结构域。例如，所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域、源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
例如，所述共刺激分子可以包含细胞因子受体。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含所述细胞因子受体的信号传导结构域。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD137、CD28、CD27、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、CD160(BY55)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL7Rα、γc(IL-2RG)、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46和/或NKG2D。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)和SLAMF4(CD244、2B4)。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46和NKG2D。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD137/4-1BB、CD28、OX-40、ICOS、CD30、CD40、LFA-1、CD2、CD7、CD160(BY55)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL7Rα、γc(IL-2RG)、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、CD40L、TIM1、CD226、DR3、SLAM、PD-1、、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD27、GITR、HVEM、DAP10、NKG2C、LIGHT和DAP12。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD137/4-1BB、CD28、OX-40、ICOS、CD30、CD40、LFA-1、CD2、CD7和CD160(BY55)。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)和SLAMF7。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD137/4-1BB、CD28、IL7Rα、IL2Rβ和γc(IL-2RG)。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含选自下述蛋白的共刺激结构域：CD40L、TIM1、CD226、DR3、SLAM、PD-1、、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD27、GITR、HVEM、DAP10、NKG2C、LIGHT和DAP12。
例如，所述细胞因子受体的信号传导结构域可以包括选自下述蛋白的信号传导结构域：IL7Rα、IL2Rβ、γc(IL-2RG)以及其他白细胞介素家族受体的信号传导结构域。
例如，以上所述的蛋白的共刺激结构域还可以包含其功能性变体。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含如SEQ ID NO:6-11中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述源自共刺激分子的共刺激结构域可以包含与SEQ ID NO:6-11中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述共刺激结构域的序列来自于人类。例如，所述共刺激结构域的序列来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、Igα受体、Igβ受体、BLV gp30(bovine leukemia virus gp30)、EBV(Ep-stein-Barr virus)LMP2A、猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus)PBj14Nef和和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ和CD3ε。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD79a、CD79b、DAP10和DAP12。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10和DAP12。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、CD3γ、CD3δ和CD3ε。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含选自下述蛋白的信号传导结构域：Igα受体、Igβ受体、BLV gp30(bovine leukemia virus gp30)、EBV(Ep-stein-Barr virus)LMP2A、猴免疫缺损病毒(Simian Immunodeficiency Virus)PBj14 Nef和和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。
例如，以上所述的蛋白的信号传导结构域还可以包含其功能性变体。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域可以包含与SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域的序列可以来自于人类。例如，所述初级信号转导分子的信号传导结构域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域可以包含4-1BB共刺激结构域。例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域可以包含CD3ζ信号传导结构域。例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域自N端至C端依次包含4-1BB共刺激结构域、CD3ζ信号传导结构域。
例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域可以包含如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列。
例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域可以包含与SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域的序列可以来自于人类。例如，所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域和/或源自非HLA-E重链的跨膜域。例如，所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域。例如，所述跨膜域包含源自非HLA-E重链的跨膜域。例如，所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域和源自非HLA-E重链的跨膜域。例如，所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域的一部分和源自非HLA-E重链的跨膜域。
例如，所述HLA-E重链的跨膜域可以包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述HLA-E重链的跨膜域可以包含与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述HLA-E重链的跨膜域的序列可以来自于人类。例如，所述HLA-E重链的跨膜域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含选自下述蛋白的跨膜域：CD27、CD7、PD1、TRAC、TRBC、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
例如，所述源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含选自下述蛋白的跨膜域：CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8。
例如，所述源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含选自下述蛋白的跨膜域：CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64。
例如，所述源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含选自下述蛋白的跨膜域：CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
例如，所述源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含选自下述蛋白的跨膜域：CD27、CD7、PD1、TRAC、TRBC。
例如，以上所述的蛋白的跨膜域还可以包含其功能性变体。
例如，所述来源自非HLA-E重链的跨膜域包含SEQ ID NO:16-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述来源自非HLA-E重链的跨膜域可以包含与SEQ ID NO:16-20中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述来源自非HLA-E重链的跨膜域的序列可以来自于人类。例如，所述来源自非HLA-E重链的跨膜域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域和/或源自非HLA-E重链的铰链域。例如，所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域。例如，所述铰链域包含源自非HLA-E重链的铰链域。例如，所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域和源自非HLA-E重链的铰链域。例如，所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域的一部分和源自非HLA-E重链的铰链域。例如，所述HLA-E重链的铰链域可以包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述HLA-E重链的铰链域可以包含与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述HLA-E重链的铰链域的序列可以来自于人类。例如，所述HLA-E重链的铰链域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：CD28、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-DQ、HLA-DP、HLA-DR、CD8、Fc、IgG、IgD、4-1BB、CD4、CD27、CD7和PD1。
例如，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-DQ、HLA-DP、HLA-DR。
例如，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：CD28、CD8、Fc、IgG和IgD。
例如，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：CD8、HLA-A。
例如，所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：4-1BB、CD4、CD27、CD7或PD1。
例如，以上所述的蛋白的铰链域还可以包含其功能性变体。
例如，所述来源自非HLA-E重链的铰链域包含SEQ ID NO:22-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述来源自非HLA-E重链的铰链域可以包含与SEQ ID NO:22-27中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述来源自非HLA-E重链的铰链域的序列可以来自于人类。例如，所述来源自非HLA-E重链的铰链域的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述嵌合多肽还包含B2M蛋白。例如，所述B2M蛋白位于所述截短的HLA-E重链的N端。例如，所述位于所述截短的HLA-E重链的N端可以是指位于所述截短的HLA-E重链的N端的一侧。例如，所述B2M蛋白可以与所述截短的HLA-E重链直接连接。例如，所述B2M蛋白可以与所述截短的HLA-E重链间接连接。例如，所述间接连接可以包括所述B2M蛋白与所述截短的HLA-E重链之间相隔1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。
例如，所述B2M蛋白可以包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述B2M蛋白可以包含与SEQ ID NO:28中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述B2M蛋白的序列可以来自于人类。例如，所述B2M蛋白的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述嵌合多肽还包含膜定位信号肽。例如，所述膜定位信号肽位于所述B2M蛋白的N端。例如，所述位于所述B2M蛋白的N端可以是指位于所述B2M蛋白的N端的一侧。例如，所述膜定位信号肽可以与所述B2M蛋白直接连接。例如，所述膜定位信号肽可以与所述B2M蛋白间接连接。例如，所述间接连接可以包括所述膜定位信号肽与所述B2M蛋白之间相隔1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。
例如，所述膜定位信号肽包含选自下述蛋白的膜定位信号肽：B2M和CD8。例如，以上所述的蛋白的膜定位信号肽还可以包含其功能性变体。
例如，所述膜定位信号肽可以包含SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述膜定位信号肽可以包含与SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述膜定位信号肽的序列可以来自于人类。例如，所述膜定位信号肽的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述嵌合多肽还包含呈递肽段。例如，所述呈递肽段位于所述B2M蛋白和所述膜定位信号肽之间。例如，所述呈递肽段的C端可以与所述B2M蛋白的N端直接或间接连接，例如，例如，所述呈递肽段的N端可以与所述膜定位信号肽的C端直接或间接连接，例如，所述间接连接可以包括所述呈递肽段与所述膜定位信号肽和/或B2M蛋白之间相隔1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。
例如，所述呈递肽段可以包含HLA-A2信号肽、HLA-B7信号肽、HLA-B15信号肽、HLA-Cw3信号肽、HLA-Cw7信号肽、HLA-G信号肽、HLA-F信号肽、CMV多肽、EBV多肽和/或HIV多肽。例如，以上所述的呈递肽段还可以包含其功能性变体。
例如，所述呈递肽段可以包含SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。例如，所述呈递肽段可以包含与SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％、99.5％同源性的氨基酸序列。例如，所述呈递肽段的序列可以来自于人类。例如，所述呈递肽段的序列可以来自于非人类物种(例如，小鼠、大鼠、猴、猩猩等)的相应氨基酸残基。
例如，所述嵌合多肽还包含第一连接肽。例如，所述第一连接肽连接所述B2M蛋白和所述截短的HLA-E重链。例如，所述连接可以是直接连接，例如，所述连接可以是间接连接，例如，所述间接连接可以包括所述第一连接肽与所述截短的HLA-E重链和/或B2M蛋白之间相隔1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。
例如，所述嵌合多肽还包含第二连接肽。例如，所述第二连接肽连接所述呈递肽段和所述B2M蛋白。例如，所述连接可以是直接连接。例如，所述连接可以是间接连接。例如，所述间接连接可以包括所述第二连接肽与所述呈递肽段和/或B2M蛋白之间相隔1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。
例如，所述第一连接肽或第二连接肽可以包含(EAAAK)n、(GGGGS)n等，n≤6。例如，n等于1、2、3、4、5或6。例如，所述第一连接肽或第二连接肽包含n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列，n可以等于1、2、3、4、5或6。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述B2M蛋白、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述膜定位信号肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列，如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述膜定位信号肽、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列，(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ IDNO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述呈递肽段、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述呈递肽段、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：如SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。例如，所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：SEQ IDNO:29-30中任一项所示的氨基酸序列，如SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体，n个如SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列(n可以等于1、2、3、4、5或6)，如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:21-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，如SEQ ID NO:15-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体，以及如SEQ ID NO:6-14中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
例如，所述嵌合多肽包含的所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域和/或源自非HLA-E重链的胞内激活信号域之间不必是直接相连接的，例如，所述各肽段之间允许存在由于在进行分子实验或蛋白实验操作(例如载体构建等)过程中产生的不必要的氨基酸或氨基酸修饰。
例如，编码所述嵌合多肽的所述核酸分子中编码所述膜定位信号肽的序列、编码所述呈递肽段的序列、编码所述第二连接肽的序列、编码所述B2M蛋白的序列、编码所述第一连接肽的序列、编码所述截短的HLA-E重链的序列、编码铰链域的序列、编码跨膜域的序列和/或源自非HLA-E重链的胞内激活信号域的序列之间不必是直接相连接的，例如，所述各肽段之间允许存在由于在进行分子实验或蛋白实验操作(例如载体构建等)过程中产生的不必要的核苷酸或核苷酸修饰。
例如，所述嵌合多肽包含如SEQ ID NO:88-89中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
核酸分子和载体
在本申请中，所述核酸分子可以编码本申请所述的嵌合多肽。例如，所述的核酸分子可以为任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从天然环境分离的或人工合成的类似物，但可以编码本申请所述的嵌合多肽。例如，所述的核酸分子可以包含SEQ ID NO:103-104中任一项所示的核酸序列。
在本申请中，所述载体可以包含本申请所述的核酸分子。例如，所述载体可以包括质粒、噬菌粒、柯斯质粒、人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)、噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及病毒载体。
例如，所述病毒载体可以包括逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒(AAV载体)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(例如SV40)。
例如，所述腺相关病毒载体(AAV载体)基因可以包含反向末端重复序列(ITR)、开放阅读框(ORF)，所述开放阅读框可以包括编码Rep蛋白的多核苷酸，还可以包括编码衣壳的多核苷酸。
例如，所述腺相关病毒载体(AAV载体)还可以包括重组腺相关病毒载体(rAAV载体)。
例如，所述重组腺相关病毒载体中衣壳、ITR和其它所选AAV组件可以选自任何AAV，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8和AAVAnc80、DJ、DJ/8、Rh10任何已知或提及的AAV的变体或尚待发现的AAV或其变体或混合物。
例如，所述AAV载体可以是AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8、AAVAnc80、DJ、DJ/8、Rh10中的任意一种。
例如，所述AAV载体为眼组织亲和性AAV载体，例如，AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV8、DJ/8或任意rAAV载体。
例如，所述AAV载体可以是AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8或AAV2/9。
免疫效应细胞和处理方法
本审请还提供了免疫效应细胞，其包含本申请所述的嵌合多肽，本申请所述的核酸分子，或本申请所述的载体。例如，所述免疫效应细胞可以包含淋巴细胞。例如，所述免疫效应细胞可以包括浆细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或骨髓源性吞噬细胞。例如，所述免疫效应细胞选自T细胞、NK细胞、树突状递呈细胞和巨噬细胞。
例如，所述免疫效应细胞可以包括野生型免疫效应细胞和/或经过人工改造的免疫效应细胞。所述野生型细胞可以包括自然存在的或自然来源的细胞，例如分离自人体的浆细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或骨髓源性吞噬细胞，或者由分离自人体的前体细胞或多潜能细胞诱导分化得到免疫效应细胞；所述经过人工改造的细胞可以是分离自人体或由分离自人体的前体细胞/多潜能细胞诱导分化得到，之后进一步经过人工改造的浆细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和/或骨髓源性吞噬细胞。例如，所述经过人工改造的免疫效应细胞可以包含B2M和/或TRAC基因编辑的免疫效应细胞，例如，所述基因编辑可以通过CRISPR/Cas系统进行。例如，所述经过人工改造的免疫效应细胞可以包含CAR-T细胞和或TCR-T细胞。例如，所述CAR-T细胞可以包括靶向CD19或BCMA的CAR的T细胞，例如，所述CAR可以包含如SEQ ID NO.97-102所示的氨基酸序列。例如，所述TCR-T细胞可以包括靶向实体瘤靶点(NY-ESO-1)的TCR。例如，所述人体为健康人体。例如，所述健康人体可以包括未患有肿瘤或免疫调节相关疾病或病症的。
所述免疫效应细胞细胞可以包括单个细胞的后代。由于天然、偶然或有意的突变，后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总DNA互补体的形态上或在基因组上)。
例如，所述浆细胞是指效应B细胞/抗体分泌细胞，可以包括原始浆细胞、幼浆细胞、Russell小体、Dutcher小体和火焰状细胞等。
例如，所述B细胞是指除浆细胞之外的所有B细胞类型，例如，前B细胞、不成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞等。
例如，所述T细胞可以包括：辅助性T细胞(Helper T cells,Th)，所述辅助性T细胞T细胞能够协助体液免疫和细胞免疫；抑制性T细胞(Suppressor T cells,Ts)，所述抑制性T细胞能够抑制细胞免疫及体液免疫；效应T细胞(Effector T cells,Te)，所述效应T细胞能够释放淋巴因子；细胞毒性T细胞(Cytotoxic T cells,Tc)，所述细胞毒性T细胞能够杀伤靶细胞；迟发性变态反应T细胞(Delayed type hypersensitivityT cells,Td)，所述迟发性变态反应T细胞能够参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞(Ta)，所述放大T细胞(Ta)能够作用于Th和Ts，扩大免疫效果；原始的或天然T细胞(Virgin or Natural T cells)原始的或天然T细胞能够和抗原接触后分化成效应T细胞或记忆T细胞；记忆T细胞(Memory Tcell,Tm)，所述记忆T细胞能够记忆特异性抗原刺激。例如，所述细胞毒性T细胞可以具有细胞表面标志CD8+。例如，所述辅助性T细胞可以具有细胞表面标志CD4+。
本申请还提供了处理所述免疫效应细胞(例如，提高所述免疫效应细胞存续能力)的方法，其可以包括向所述免疫效应细胞中引入本省请所述的核酸分子或本申请所述的载体。例如，所述免疫效应细胞存续能力可以包含在异体环境中的存续能力。例如，所述异体环境可以包括非所述免疫效应细胞来源的个体的体内环境。例如，异源PBMC。例如，所述方法还可以包括使所述免疫效应细胞表达本申请中所述的嵌合多肽。例如，所述方法可以在离体条件下进行。例如，在离体条件下向所述免疫效应细胞中引入本省请所述的核酸分子或本申请所述的载体，例如，在离体条件下使所述免疫效应细胞表达本申请中所述的嵌合多肽。
药物组合物和用途
本申请还提供了药物组合物，其可以包含本申请所述的嵌合多肽或本申请所述的免疫效应细胞。本申请还提供了本申请所述的嵌合多肽，本申请所述的核酸分子本申请所述的载体，本申请所述的免疫效应细胞用于制备药物的用途，其中所述药物用于预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症。
本申请还提供了一种预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向患者或受试者施用本申请所述的嵌合多肽，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体或本申请所述的免疫效应细胞。
本申请还提供所述嵌合分子，所述核酸分子，所述载体或所述免疫效应细胞，其用于预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症。
例如，所述肿瘤可以包括实体瘤和/或非实体瘤。
例如，所述实体瘤选自以下组：肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食道癌、黑素瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊枢椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤以及所述癌症的转移病灶。
例如，所述非实体瘤选自以下组：慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性白血病、急性淋巴样白血病(ALL)、B细胞急性淋巴样白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴样白血病(T-ALL)、慢性髓性白血病(CML)、急性髓样白血病(AML)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树状细胞肿瘤、Burkitt淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、多毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡淋巴瘤、恶性淋巴细胞增生性疾病、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良和脊髓发育不良综合征、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树状细胞肿瘤和Waldenstrom巨球蛋白血症。
例如，所述与免疫调节相关的疾病或病症可以包括感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由损伤或出血性缺血性引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾和/或呼吸或肝功能不全。
例如，所述感染性疾病可以包括细菌感染或病毒感染。例如，细菌感染可以包括细菌(例如，肺炎链球菌、葡萄球菌、肠球菌、沙门菌、志贺杆菌、霍乱、肉毒杆菌、假单胞菌、军团杆菌、鼠疫杆菌等)感染导致的炎症或败血症等；例如，病毒感染可以包括获得性免疫缺陷综合征(HIV)、乙型肝炎、丙型肝炎、病毒性脑膜炎、流行性乙型脑炎、出血热、脓毒血症等。
例如，例如所述感染性疾病可以包括传染性疾病，例如，所述传染性疾病可以包括人感染禽流感、肺结核、腮腺炎、麻疹、百日咳、登革热、流行性出血热、流行性乙型脑炎、乙型肝炎、丙型肝炎、免疫缺陷综合征(HIV)等。
例如，所述与免疫调节相关的疾病或病症可以包括局部和系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、结节性多动脉炎、多肌炎、进行性系统性硬化症、弥散性硬皮病、肾小球肾炎、重症肌无力、干燥综合征、桥本氏病、格雷夫斯病、肾上腺炎、甲状旁腺功能减退症、恶性贫血、糖尿病、多发性硬化、脱髓鞘疾病、葡萄膜炎、天疱疮、类天疱疮肝硬化、溃疡性结肠炎、心肌炎、局限性肠炎、成人呼吸窘迫综合征和对药物反应的局部表现、异位性皮肤炎、婴儿湿疹、接触性皮炎、银屑病、扁平苔癣、过敏性肠病、支气管哮喘、链球菌感染后疾病例如心脏、肾和关节性风湿。
例如，所述药物组合物还可以包括药学上可接受的载体。例如，所述组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
例如，所述药学上可接受的载体可以包括与所述免疫效应细胞相容的任何和所有的溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂，通常安全、无毒，且既不是生物学上也非其它方面不合需要的。例如，所述药学上可接受的载体可以包括2℃-8℃储存液、冻存液、注射液等。例如所述载体可以包括如下成分：腺苷、氯化钠、白蛋白、白细胞介素-15、血管紧张素-II、来自人脐带间充质干细胞的无血清培养液中的短肽和多肽类化合物等。例如，所述载体还可以包括Normosol R(Abbott)、Plasma-Lyte A(Baxter)注射液、5％葡萄糖水或林格氏乳酸盐溶液。例如，所述载体还可以包括甘油或DMSO。
例如，所述药物组合物可以包含与一种或多种药物或生理可接受载体、稀释剂或赋形剂组合的如本申请所述的细胞，例如，多个细胞。这类组合物可以包含缓冲液如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。
例如，所述药物组合物基本上不含(例如，不存在)可检测水平的杂质。例如，所述杂质选自内毒素、支原体(Mycoplasma)、有复制能力的慢病毒(RCL)、p24、VSV-G核酸、HIVgag、汇集的人血清、牛血清白蛋白、牛血清、培养基组分、载体包装细胞或质粒组分、细菌和真菌。例如，所述细菌可以是选自以下的至少一种：粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)、白假丝酵母(Candida albicans)、大肠杆菌(Escherichia coli)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)和化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)A群。
例如，施用所述组合物可以按任何便利方式实施，包括气溶胶吸入、注射、摄入、输血、植入或移植。例如，本申请所述的药物组合物可以经动脉、皮下、真皮内、瘤内、淋巴结内、髓内、肌内、通过静脉内(i.v.)注射、或腹腔内施用至患者。例如，所述药物组合物可以包含肠胃外、经皮、腔内、动脉内、鞘内和/或鼻内施用或直接注射到组织中。例如，所述组合物可以通过输注或注射施用于患者或者受试者。例如，通过真皮内或皮下注射向患者施用本申请的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞等)组合物。例如，通过静脉内注射施用本申请的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞等)组合物。例如，可以将免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞等)的组合物直接注射至肿瘤、淋巴结或感染部位中。例如，所述药物组合物的施用还可以通过不同的方式进行，例如静脉内、腹膜内、皮下、瘤内、局部或真皮内施用。例如，所述药物组合物可以不间断施用。所述不间断(或连续)施用可以通过患者佩戴的小泵系统来实现，以测量流入患者体内的治疗剂，如WO2015/036583中所述。
例如，所述药物组合物可以按适于待治疗(或预防)疾病的方式施用。施用的量和频率将由这类因素决定，如患者的状况和患者疾病的类型和严重性，不过适宜的剂量可以通过临床试验确定。
例如，本申请所述的药物组合物的施用量可以由医师在考虑例如年龄、体重、肿瘤尺寸、程度感染或转移和患者(受试者)状况的个体差异时确定。例如，本申请所述的包含免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞等)的药物组合物可以按104至109个细胞/kg体重，例如，105至106个细胞/kg体重(包括这些范围内部的全部整数值)的剂量施用。例如，T细胞组合物还可以按这些剂量多次施用。所述包含免疫效应细胞的药物组合物可以通过使用免疫疗法中公知的输注技术施用(参见，例如，Rosenberg等人,New Eng.J.of Med.319:1676,1988)。
本申请还包含以下的实施方式：
1.嵌合多肽，其包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的
胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/
或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
2.实施方式1所述的嵌合多肽，其以N端至C端的顺序包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
3.实施方式1-2中任一项所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链包含α1域。
4.实施方式1-3中任一项所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链包含α1域、α2域。
5.实施方式1-4中任一项所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链还包含α3域，所述α3域位于所述α2域或α1域和所述铰链域之间。
6.实施方式1-5所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链自N端至C端依次包含：α1域、α2域、α3域。
7.实施方式1-6所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链包含如SEQ ID NO:1-4中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
8.实施方式1-7中任一项所述的嵌合多肽，其中所述源自共刺激分子的共刺激结构域包含选自下述蛋白的信号转导结构域：CD137/4-1BB、CD28、OX-40、ICOS、CD30、CD40、LFA-1、CD2、CD7、CD160(BY55)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL7Rα、γc(IL-2RG)、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、CD40L、TIM1、CD226、DR3、SLAM、PD-1、、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD27、GITR、HVEM、DAP10、NKG2C、LIGHT和DAP12。
9.实施方式8所述的嵌合多肽，其中所述源自共刺激分子的共刺激结构域包含如SEQ ID NO:6-11中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
10.实施方式1-9中任一项所述的嵌合多肽，其中所述初级信号转导分子的信号传导结构域包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、Igα受体、Igβ受体、BLV gp30(bovineleukemia virus gp30)、EBV(Ep-stein-Barr virus)LMP2A、猴免疫缺陷病毒(SimianImmunodeficiency Virus)PBj14 Nef、和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。
11.实施方式10所述的嵌合多肽，其中所述初级信号转导分子的信号传导结构域包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或其功能性变体。
12.实施方式1-11中任一项所述的嵌合多肽，其中所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域包含4-1BB共刺激结构域和/或CD3ζ信号传导结构域。
13.实施方式12所述的嵌合多肽，其中所述来源自非HLA-E蛋白的胞内信号域自N端至C端依次包含4-1BB共刺激结构域、CD3ζ信号传导结构域。
14.实施方式1-13中任一项所述的嵌合多肽，其中所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域和/或源自非HLA-E重链的跨膜域。
15.实施方式14所述的嵌合多肽，其中所述源自非HLA-E重链的跨膜域包含选自下述蛋白的跨膜域：CD27、CD7、PD1、TRAC、TRBC、CD28、CD3e、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
16.实施方式14-15中任一项所述的嵌合多肽，其中所述来源自非HLA-E重链的跨膜域包含SEQ ID NO:16-20中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
17.实施方式1-16中任一项所述的嵌合多肽，其中所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域和/或源自非HLA-E重链的铰链域。
18.实施方式17所述的嵌合多肽，其中所述源自非HLA-E重链的铰链域包含选自下述蛋白的铰链域：CD28、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-DQ、HLA-DP、HLA-DR、CD8、Fc、IgG、IgD、4-1BB、CD4、CD27、CD7和PD1。
19.实施方式17-18中任一项所述的嵌合多肽，其中所述来源自非HLA-E蛋白的铰链域包含SEQ ID NO:22-27中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
20.实施方式1-19中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含B2M蛋白。
21.实施方式20所述的嵌合多肽，其中所述B2M蛋白位于所述截短的HLA-E重链的N端。
22.实施方式20-21中任一项所述的嵌合多肽，其中所述B2M蛋白包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或其功能性变体。
23.实施方式1-22中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含膜定位信号肽。
24.实施方式23所述的嵌合多肽，其中所述膜定位信号肽位于所述B2M蛋白的N端。
25.实施方式23-24中任一项所述的嵌合多肽，其中所述膜定位信号肽包含选自下述蛋白的膜定位信号肽：B2M和CD8。
26.实施方式23-25中任一项所述的嵌合多肽，其中所述膜定位信号肽包含SEQ IDNO:29-30中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
27.实施方式1-26中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含呈递肽段。
28.实施方式27所述的嵌合多肽，其中所述所述呈递肽段位于所述B2M蛋白和所述膜定位信号肽之间。
29.实施方式27-28中任一项所述的嵌合多肽，其中所述呈递肽段包含HLA-A2信号肽、HLA-B7信号肽、HLA-B15信号肽、HLA-Cw3信号肽、HLA-Cw7信号肽、HLA-G信号肽、HLA-F信号肽、CMV多肽、EBV多肽和/或HIV多肽。
30.实施方式27-29中任一项所述的嵌合多肽，其中所述呈递肽段包含SEQ ID NO:31-84中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
31.实施方式1-30中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含第一连接肽，所述第一连接肽连接所述B2M蛋白和所述截短的HLA-E重链。
32.实施方式1-31中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含第二连接肽，所述第二连接肽连接所述呈递肽段和所述B2M蛋白。
33.实施方式31-32中任一项所述的嵌合多肽，其中所述第一连接肽或第二连接肽包含SEQ ID NO:85-87中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
34.实施方式1-33中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。
35.实施方式1-34中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽自N端至C端依次包含：所述膜定位信号肽、所述呈递肽段、所述第二连接肽、所述B2M蛋白、所述第一连接肽、所述截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域。
36.实施方式35所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含如SEQ ID NO:88-89中任一项所示的氨基酸序列或其功能性变体。
37.实施方式1-36中任一项所述的嵌合多肽，其中所述HLA-E重链选自如下亚型：HLA-E*01:01和HLA-E*01:03。
38.核酸分子，其编码实施方式1-37中任一项所述的嵌合多肽。
39.实施方式38所述的核酸分子，其包含SEQ ID NO:103-104中任一项所示的核酸序列。
40.载体，其包含实施方式38-39中任一项所述的核酸分子。
41.免疫效应细胞，其包含实施方式1-37中任一项所述的嵌合多肽，实施方式38-39中任一项所述的核酸分子，或实施方式40所述的载体。
42.实施方式41所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞包含淋巴细胞。
43.实施方式41-42中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞选自T细胞、B细胞、NK细胞、树突状递呈细胞、NKT细胞、浆细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。
44.提高免疫效应细胞存续能力的方法，其包括向所述免疫效应细胞中引入实施方式38-39中任一项所述的核酸分子或实施方式40所述的载体。
45.实施方式44所述的方法，其还包括使所述免疫效应细胞表达如实施方式1-37中任一项所述的嵌合多肽。
46.实施方式44-45中任一项所述的方法，所述方法在离体条件下进行。
47.药物组合物，其包含实施方式1-37中任一项所述的嵌合多肽或实施方式41-43中任一项所述的免疫效应细胞。
48.实施方式1-37中任一项所述的嵌合多肽，实施方式38-39中任一项所述的核酸分子，实施方式40所述的载体，或实施方式41-43中任一项所述的免疫效应细胞用于制备药物的用途，其中所述药物用于预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1质粒构建
本实施例所涉及的基因均构建于慢病毒表达载体中，表达质粒(Addgene ID：#12252)用BamHI/SalI酶切作为骨架。GFP蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:90所示，CAR19序列如SEQ ID NO:97所示，NKi的氨基酸序列如SEQ ID NO:108所示，NKi-1氨基酸序列如SEQ IDNO:88所示，NKi-2氨基酸序列如SEQ ID NO:89所示。相关基因片段经基因合成后用GibsonAssembly Master Mix,(厂家：NEB，货号：E2611L)的方法进行重组克隆到慢病毒载体中。NKi、NKi-1、NKi-2的结构如图1所示。
GFP(或CAR19)与NKi(或NKi-1、NKi-2)之间通过P2A序列连接。P2A是一种自切割多肽连接序列，是在一个载体中一个转录本同时表达两个独立蛋白常用的连接序列，蛋白在翻译过程中在P2A序列的末端断裂分开，使得由P2A所连接的前后两个蛋白分开，分别发挥功能，P2A的氨基酸序列为ATNFSLLKQAGDVEENPGP。
构建完成后，GFP-P2A-NKi的氨基酸序列如SEQ ID NO:91所示，GFP-P2A-NKi-1的氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示，GFP-P2A-NKi-2的氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示，CAR19-P2A-NKi的氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示，CAR19-P2A-NKi-1的氨基酸序列如SEQID NO:95所示，CAR19-P2A-NKi-2的氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示。
实施例2制备双基因敲除并表达嵌合多肽的靶细胞
2.1慢病毒制备
采用三质粒系统：利用实施例1构建的慢病毒目的表达质粒(GFP-P2A-NKi、GFP-P2A-NKi-1、GFP-P2A-NKi-2)，包装辅助质粒psPAX2(Addgene ID：#12260)和pMD2.G(Addgene ID：#12259)。在HEK293T细胞(购自中科院上海细胞研究所)中进行病毒包装。制备流程如下：将冻存的HEK293T细胞复苏，用DMEM培养基(+10％FBS+1％P/S)(Cellgro 10-013-CMR)置于10cm培养皿培养，复苏第2天后换液。待细胞长满后开始传代(通常1个培养皿长满之后可传至5个培养皿)，将细胞传代4代后进行质粒转染。采用PEI作为转染试剂，以PEI：质粒(质量比)＝2:1的条件转染。将质粒与PEI的混合物加入到Opti-MEM培养基(Gibco,cat#31985-070)中，再将此混合溶液加入到传代至第4代的HEK293T细胞中。转染6小时后用2％FBS的新鲜培养基换液，之后继续培养至72小时，收集HEK293T细胞上清。收集的病毒上清采用超离的方式(82200g，4-8℃离心2小时)进行浓缩，浓缩好的病毒用0.22μm滤膜过滤除菌后重悬待用。
2.2原代T细胞激活
原代T细胞来源于健康人志愿者的外周血(PBMC)。所用培养基为完全培养基，ImmunoCultTM-XF T Cell Expansion Medium(Stem Cell Technology，cat#10981)+300IU/ml IL2(Cayan,cat#HEILP-0201c)。利用Dynabeads(Thermo,cat#11141D)激活T细胞，Dynabeads数量与细胞数量比为Dynabeads：细胞＝3：1。
2.3慢病毒转染
T细胞激活后48小时，取3X105个/孔细胞于24孔培养板，以细胞数的10倍量加入制备好的慢病毒，即MOI＝10(Multiplicity of Infection，感染复数，病毒量与细胞数的比值)，补充培养基至500μL(培养基与前述原代T细胞激活所用培养基一致)。24小时后补充培养基至1mL，以利于细胞生长。
2.4 sgRNA/Cas系统
根据相关网站的信息(http://chopchop.cbu.uib.no/)，筛选并设计了编辑B2M基因的指导RNA序列sgRNA1和sgRNA2(分别如SEQ ID NO:105，106所示)，TRAC基因的sgRNA，序列如SEQ ID NO:107所示。
Cas9蛋白是购自于IDT DNA technology公司的Alt-R s.p.Cas9 Nuclease 3NLS蛋白。
2.5电击转化
T细胞慢病毒转染后48小时，收集细胞，用电转缓冲液(Invitrogen,Lot#1E14211)、Opti-MEM(Gibco,cat#31985-070)清洗3遍，将细胞重悬于电转缓冲液中，细胞密度调整为1×108/mL，取3ul细胞。在体外同时将上述两组sgRNA(即，TRAC的sgRNA是200ng，B2M的sgRNA1是100ng，B2M的sgRNA2是100ng)与1μg的Cas9蛋白混合均匀后在室温(20℃-25℃)孵育10分钟，再将混合物加入至重悬好的细胞(1×108/mL，3ul)中进行电击，终体积定为10uL用于电转，用Neon电转仪进行电转。电击电压条件如下：1200v，10ms(3次)。
2.6病毒转染效率和基因编辑效率检测
完成电击3天后，检测病毒转染效率和细胞编辑的效率。CAR19检测采用如下方法，取出少量细胞，加入1ml PBS(Gibco，cat#C10010500BT)清洗细胞1遍，用100μL PBS重悬，加入3μL抗FMC63的抗体(一抗，检测CAR19)4℃孵育30分钟后，加入1ml PBS混匀，350g离心3分钟收集细胞去上清，顺次加入0.5μL二抗(一抗、二抗来自抗-Mouse FMC63试剂盒，上海星湾，R19PB-100的产品)和3μL抗HLA-E-APC抗体(购自Biolegend，货号：342606)至细胞中，混合均匀，4℃孵育30分钟，加入1ml的PBS混匀，350g离心3分钟收集细胞去上清，加入200μL的PBS重悬细胞，流式细胞仪上机检测。
基因编辑效率检测，取出少量细胞，加入1ml的PBS清洗细胞1遍，用100μL的PBS重悬，加入3μL抗HLA-E-PE(购自Biolegend，货号：342604)、3μL抗HLA-ABC-PE-CYANINE抗体(购自eBioscience，货号：25-9983-42)、3μL抗CD3-APC(购自BD PMG，货号：555335)抗体，4℃孵育30分钟，加入1ml的PBS混匀，350g离心3分钟收集细胞去上清，加入200μL的PBS重悬细胞，流式细胞仪上机检测。
结果如图2所示，在原代T细胞中，转染表达NKi、NKi-1、NKi-2的病毒且敲除了TRAC和B2M后，细胞CD3/HLA-ABC的双阴性率达95％左右，且这些双阴性的细胞可以同时共表达GFP和HLA-E。
实施例3靶细胞在异体PBMC条件下的存续能力
3.1模拟体内环境。由于体内的免疫细胞复杂，不仅仅包含NK细胞，还包含T细胞、巨噬细胞、髓系细胞等，因此使用原代的异源PBMC更能接近体内异体免疫系统的环境。
3.2检测实施例2制备的细胞在异体PBMC环境下的存续能力。本实施例中，靶细胞为经基因编辑后CD3/HLA-ABC为双阴性，并且分别表达NKi、NKi-1或NKi-2的细胞，经基因编辑未转染病毒的细胞(UT，Untraduced T cell)作为对照组。异源PBMC来自两例健康人志愿者的外周血，分别PBMC-1组、PBMC-2组(均购于妙顺(上海)生物科技有限公司)。
细胞共培养，异源PBMC：靶细胞＝10：1。即异源PBMC细胞数为5×105/ml，靶细胞数为5×104/ml，24孔培养板，培养基为ImmunoCultTM-XF T Cell Expansion Medium(StemCell Technology，cat#10981)+300IU/ml IL2(Cayan,cat#HEILP-0201c)。，37℃培养，在不同时间点记录不同组别靶细胞的数目，将各时间点、各组别靶细胞的细胞数除以实验开始相应靶细胞的数量，得到靶细胞存留率。为了方便区分异源PBMC和靶细胞，共培养之前异源PBMC用Dye eFluorTM 670染色。染色方法为：将细胞密度调至1×107/ml，加入终浓度为10μM的e670染料，室温避光孵育5min，培养基洗涤三遍后，用于实验。
结果如图3和图4所示，图3显示的为PBMC-1的结果，图4显示的是PBMC-2的结果，两例不同异源PBMC验证结果均显示，与表达NKi的细胞相比，各时间点中表达NKi-1和NKi-2的细胞均具备更好的存续能力，例如，在PBMC-1中，NKi-1在第7天仍有60.2％的存续，NKi-2仍有20.3％的存续，均显著好于NKi(8.4％)；在PBMC-2中，NKi-1在第5天有34.6％的存续，NKi-2有22.0％以上的存续，均显著好于NKi(约6.7％)。
实施例4靶细胞在异体PBMC环境下的增殖
利用实施例2制备的靶细胞(经基因编辑后CD3/HLA-ABC为双阴性，并且分别表达NKi、NKi-1)，异源PBMC来自不同的健康人志愿者的外周血，即实施例3中的PBMC-1。
为了方便跟踪靶细胞的增殖，靶细胞共培养前进行Dye eFluorTM 670染色，如果发生增殖，染料的荧光强度会逐渐减弱。
染色方法：将细胞密度调至1×107/ml，加入终浓度为10μM的e670染料，室温避光孵育5min，培养基洗涤三遍后，用于实验。
细胞共培养：异源PBMC：靶细胞＝10：1，即异源PBMC细胞数为5×105/ml，靶细胞数为5×104/ml，24孔培养板，培养基为ImmunoCultTM-XF T Cell Expansion Medium(StemCell Technology，cat#10981)+300IU/ml IL2(Cayan,cat#HEILP-0201c)。37℃培养，在不同时间点记录不同组别靶细胞的染料荧光强度。
图5显示，随着时间的延长，基因编辑的NKi细胞数目显著减少，表明被大量杀伤，同时e670染料的荧光强度基本不变，表明细胞没有发生增殖；而基因编辑的NKi-1细胞有大量细胞存活，同时e670染料的荧光强度逐渐向左偏移，表明细胞发生了增殖。该结果表明，在异源PBMC环境中，基因编辑的NKi-1细胞比基因编辑的NKi细胞有明显的细胞扩增，从而靶细胞能够更持久的存续。
实施例5验证表达不同嵌合多肽的靶细胞在异体PBMC条件下的存续能力
5.1按照实施例1和实施例2的方式分别制备表达如下嵌合多肽的靶细胞：
1)NKi-3：以CD3 zeta序列(如SEQ ID NO:12所示)取代NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)。
2)NKi-4：以4-1BB共刺激结构域(如SEQ ID NO:6所示)取代NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)。
3)NKi-5：以CD28共刺激结构域(如SEQ ID NO:11所示)取代NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)
4)NKi-6：以IL2Rβ共刺激结构域(如SEQ ID NO:7或8所示)取代NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)
5)NKi-7：以γc共刺激结构域(如SEQ ID NO:10所示)NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)
6)NKi-8：以IL7Rα共刺激结构域(如SEQ ID NO:9所示)取代NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)。
7)NKi-9：以CD28+CD3zeta序列(如SEQ ID NO:14所示)NKi(如SEQ ID NO:108所示)中HLA-E重链的胞内域(如SEQ ID NO:5所示)。
5.2按照实施例3的方式验证分别表达嵌合多肽NKi-3至NKi-9的靶细胞在异体PBMC条件下的存续能力，结果表明分别表达嵌合多肽NKi-3至NKi-9的靶细胞与表达NKi的相应细胞相比具有更好的存续能力。
实施例6验证表达嵌合多肽的不同靶细胞在异体PBMC条件下的存续能力
6.1按照实施例1和实施例2的方式分别制备表达嵌合多肽NKi-1的靶细胞：CD19-CAR-T细胞和靶向实体瘤靶点NY-ESO-1的TCR-T细胞。
6.2按照实施例3的方式验证表达嵌合多肽NKi-1的靶细胞(CD19-CAR-T细胞和靶向实体瘤靶点NY-ESO-1的TCR-T细胞)在异体PBMC条件下的存续能力，结果表明表达嵌合多肽NKi-1的靶细胞(CD19-CAR-T细胞和靶向实体瘤靶点NY-ESO-1的TCR-T细胞)与表达NKi的相应细胞相比具有更好的存续能力。
序列表
<110> 苏州克睿基因生物科技有限公司
<120> 嵌合多肽及其用途
<130> 0141-PA-007
<160> 108
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 90
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E重链分子α1
<400> 1
Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser Arg Pro Gly
1 5 10 15
Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln
20 25 30
Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met Val Pro Arg
35 40 45
Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp Arg Glu Thr
50 55 60
Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn Leu Arg Thr
65 70 75 80
Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala
85 90
<210> 2
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E重链分子α2
<400> 2
Gly Ser His Thr Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp
1 5 10 15
Gly Arg Phe Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp
20 25 30
Tyr Leu Thr Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr
35 40 45
Ala Ala Gln Ile Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu
50 55 60
His Gln Arg Ala Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys
65 70 75 80
Tyr Leu Glu Lys Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu
85 90
<210> 3
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E重链分子α3
<400> 3
Glu Pro Pro Lys Thr His Val Thr His His Pro Ile Ser Asp His Glu
1 5 10 15
Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr
20 25 30
Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly Glu Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu
35 40 45
Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala
50 55 60
Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln
65 70 75 80
His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Val Thr Leu Arg Trp
85 90
<210> 4
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E重链分子α1+α2+α3
<400> 4
Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser Arg Pro Gly
1 5 10 15
Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln
20 25 30
Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met Val Pro Arg
35 40 45
Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp Arg Glu Thr
50 55 60
Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn Leu Arg Thr
65 70 75 80
Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Leu Gln
85 90 95
Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly Arg Phe Leu Arg Gly
100 105 110
Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Leu Thr Leu Asn Glu
115 120 125
Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala Ala Gln Ile Ser Glu
130 135 140
Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His Gln Arg Ala Tyr Leu
145 150 155 160
Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr Leu Glu Lys Gly Lys
165 170 175
Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr His Val Thr His His
180 185 190
Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe
195 200 205
Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly Glu Gly His
210 215 220
Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr
225 230 235 240
Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg
245 250 255
Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Val Thr Leu
260 265 270
Arg Trp
<210> 5
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E重链分子胞内域
<400> 5
Arg Lys Lys Ser Ser Gly Gly Lys Gly Gly Ser Tyr Tyr Lys Ala Glu
1 5 10 15
Trp Ser Asp Ser Ala Gln Gly Ser Glu Ser His Ser Leu
20 25
<210> 6
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4-1BB共刺激结构域
<400> 6
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 7
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL2Rβ共刺激结构域
<400> 7
Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn
1 5 10 15
Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly
20 25 30
Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe
35 40 45
Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu
50 55 60
Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu
65 70 75 80
Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala
100 105 110
Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp
115 120 125
Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln
130 135 140
Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp
145 150 155 160
Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro
165 170 175
Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro
180 185 190
Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly
195 200 205
Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro
210 215 220
Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro
225 230 235 240
Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu
245 250 255
Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu
260 265 270
Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val
275 280 285
<210> 8
<211> 94
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL2Rβ共刺激结构域-2
<400> 8
Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn
1 5 10 15
Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly
20 25 30
Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe
35 40 45
Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu
50 55 60
Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val
85 90
<210> 9
<211> 195
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IL7Rα共刺激结构域
<400> 9
Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys
1 5 10 15
Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val
20 25 30
Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile His Arg Val Asp
35 40 45
Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu Gln Asp Thr Phe
50 55 60
Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu Gly Gly Asp Val
65 70 75 80
Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Ile Thr Pro Glu Ser
85 90 95
Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala
100 105 110
Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu
115 120 125
Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu Leu Leu Ser Leu
130 135 140
Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro Ile Leu Thr Ser
165 170 175
Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr
180 185 190
Gln Asn Gln
195
<210> 10
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> rc共刺激结构域
<400> 10
Glu Arg Thr Met Pro Arg Ile Pro Thr Leu Lys Asn Leu Glu Asp Leu
1 5 10 15
Val Thr Glu Tyr His Gly Asn Phe Ser Ala Trp Ser Gly Val Ser Lys
20 25 30
Gly Leu Ala Glu Ser Leu Gln Pro Asp Tyr Ser Glu Arg Leu Cys Leu
35 40 45
Val Ser Glu Ile Pro Pro Lys Gly Gly Ala Leu Gly Glu Gly Pro Gly
50 55 60
Ala Ser Pro Cys Asn Gln His Ser Pro Tyr Trp Ala Pro Pro Cys Tyr
65 70 75 80
Thr Leu Lys Pro Glu Thr
85
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD28共刺激结构域
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD3ζ信号传导结构域
<400> 12
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
100 105 110
Arg
<210> 13
<211> 154
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 源自非HLA-E重链的胞内激活信号域（4-1BB+CD3ζ）
<400> 13
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
35 40 45
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
50 55 60
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
65 70 75 80
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
85 90 95
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
100 105 110
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
115 120 125
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
130 135 140
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
145 150
<210> 14
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 源自非HLA-E重链的胞内激活信号域（CD28+CD3ζ）
<400> 14
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
35 40 45
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
50 55 60
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
65 70 75 80
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
85 90 95
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
100 105 110
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
115 120 125
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
130 135 140
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
145 150
<210> 15
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E跨膜域
<400> 15
Val Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Gly Ser Val Val Ser Gly
1 5 10 15
Ala Val Val Ala Ala Val Ile Trp
20
<210> 16
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-A跨膜域
<400> 16
Ile Val Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Phe Gly Ala Val Ile Thr
1 5 10 15
Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp
20 25
<210> 17
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8跨膜域
<400> 17
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 18
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD3ζ跨膜区
<400> 18
Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu
20
<210> 19
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> DAP12跨膜区
<400> 19
Gly Val Leu Ala Gly Ile Val Met Gly Asp Leu Val Leu Thr Val Leu
1 5 10 15
Ile Ala Leu Ala Val
20
<210> 20
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> DAP10跨膜区
<400> 20
Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Ala Ser Leu Leu Ile
1 5 10 15
Val Gly Ala Val Phe
20
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-E铰链域
<400> 21
Leu Arg Trp Lys Pro Ala Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile
1 5 10
<210> 22
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HLA-A铰链域
<400> 22
Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile
1 5 10
<210> 23
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8铰链域
<400> 23
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 24
<211> 84
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD28铰链域
<400> 24
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Glu Val
35 40 45
Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile
50 55 60
Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly
65 70 75 80
Pro Ser Lys Pro
<210> 25
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG1铰链域
<400> 25
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20
<210> 26
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG4铰链域
<400> 26
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro
20
<210> 27
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgD铰链域
<400> 27
Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala Gln Pro Gln Ala
1 5 10 15
Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg Asn
20 25 30
Thr
<210> 28
<211> 99
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B2M蛋白
<400> 28
Ile Gln Arg Thr Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu
1 5 10 15
Asn Gly Lys Ser Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro
20 25 30
Ser Asp Ile Glu Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys
35 40 45
Val Glu His Ser Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu
50 55 60
Leu Tyr Tyr Thr Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys
65 70 75 80
Arg Val Asn His Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp
85 90 95
Arg Asp Met
<210> 29
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B2M膜定位信号肽
<400> 29
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala
20
<210> 30
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD8膜定位信号肽
<400> 30
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段1(HLA-A2信号肽)
<400> 31
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段2(HLA-B7信号肽)
<400> 32
Val Met Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段3(HLA-B15信号肽)
<400> 33
Val Thr Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段4(HLA-Cw3信号肽)
<400> 34
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段5(HLA-Cw7信号肽)
<400> 35
Val Met Ala Pro Arg Ala Leu Leu Leu
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段6(HLA-G信号肽)
<400> 36
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段7(HLA-F信号肽)
<400> 37
Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu Leu
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段8(HCV多肽)
<400> 38
Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu
1 5 10
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段9
<400> 39
Ala Leu Ala Leu Val Arg Met Leu Ile
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段10
<400> 40
Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段11
<400> 41
Gln Met Arg Pro Val Ser Arg Val Leu
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段12
<400> 42
Ser Gln Gln Pro Tyr Leu Gln Leu Gln
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段13
<400> 43
Val Thr Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段14
<400> 44
Val Thr Ala Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段15
<400> 45
Val Met Ala Pro Gln Ala Leu Leu Leu
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段16
<400> 46
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Thr Leu
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段17
<400> 47
Ile Met Ala Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段18
<400> 48
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段19
<400> 49
Val Met Pro Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段20
<400> 50
Val Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段21
<400> 51
Val Met Ala Pro Arg Ser Leu Ile Leu
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段22
<400> 52
Val Met Thr Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段23
<400> 53
Val Met Ala Pro Arg Ile Leu Ile Leu
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段24
<400> 54
Ala Met Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段25
<400> 55
Val Ile Ala Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段26
<400> 56
Val Met Ala Pro Gln Ser Leu Leu Leu
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段27
<400> 57
Val Met Ala Pro Arg Thr Phe Val Leu
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段28
<400> 58
Val Met Thr Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段29
<400> 59
Val Thr Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段30
<400> 60
Val Met Ala Pro Trp Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段31
<400> 61
Val Met Val Pro Arg Ser Leu Ile Leu
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段32
<400> 62
Ala Met Ala Pro Arg Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段33
<400> 63
Val Ile Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段34
<400> 64
Val Ile Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段35
<400> 65
Val Leu Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段36
<400> 66
Val Met Ala Leu Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段37
<400> 67
Val Met Ala Pro Arg Gly Leu Ile Leu
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段38
<400> 68
Val Met Ala Pro Arg Asn Leu Ile Leu
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段39
<400> 69
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Val
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段40
<400> 70
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Met
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段41
<400> 71
Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Val Met
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段42
<400> 72
Val Met Ala Pro Arg Thr Ser Leu Leu
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段43
<400> 73
Val Met Ala Pro Arg Thr Ser Val Leu
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段44
<400> 74
Val Met Ala Pro Trp Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段45
<400> 75
Val Met Ala Pro Trp Thr Leu Val Leu
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段46
<400> 76
Val Met Asp Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段47
<400> 77
Val Met Gly Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段48
<400> 78
Val Met Gly Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段49
<400> 79
Val Met Val Pro Gln Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段50
<400> 80
Val Met Val Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 81
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段51
<400> 81
Val Val Ala Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段52
<400> 82
Val Val Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段53
<400> 83
Val Met Val Pro Arg Thr Leu Ile Leu
1 5
<210> 84
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 呈递肽段54
<400> 84
Val Met Ala Thr Arg Thr Leu Leu Leu
1 5
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接肽1
<400> 85
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 86
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接肽2
<400> 86
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 87
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接肽3
<400> 87
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 88
<211> 628
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合多肽Nki-1序列
<400> 88
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Val Met Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser
165 170 175
Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp
180 185 190
Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met
195 200 205
Val Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp
210 215 220
Arg Glu Thr Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn
225 230 235 240
Leu Arg Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His
245 250 255
Thr Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly Arg Phe
260 265 270
Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Leu Thr
275 280 285
Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala Ala Gln
290 295 300
Ile Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His Gln Arg
305 310 315 320
Ala Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr Leu Glu
325 330 335
Lys Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr His Val
340 345 350
Thr His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala
355 360 365
Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly
370 375 380
Glu Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly
385 390 395 400
Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu
405 410 415
Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro
420 425 430
Val Thr Leu Arg Trp Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln Pro Thr Ile
435 440 445
Pro Ile Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu
450 455 460
Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys
465 470 475 480
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
485 490 495
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
500 505 510
Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
515 520 525
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
530 535 540
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
545 550 555 560
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
565 570 575
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
580 585 590
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
595 600 605
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
610 615 620
Leu Pro Pro Arg
625
<210> 89
<211> 625
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合多肽Nki-2序列
<400> 89
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Val Met Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser
165 170 175
Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp
180 185 190
Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met
195 200 205
Val Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp
210 215 220
Arg Glu Thr Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn
225 230 235 240
Leu Arg Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His
245 250 255
Thr Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly Arg Phe
260 265 270
Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Leu Thr
275 280 285
Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala Ala Gln
290 295 300
Ile Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His Gln Arg
305 310 315 320
Ala Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr Leu Glu
325 330 335
Lys Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr His Val
340 345 350
Thr His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala
355 360 365
Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly
370 375 380
Glu Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly
385 390 395 400
Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu
405 410 415
Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro
420 425 430
Val Thr Leu Arg Trp Lys Pro Ala Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val
435 440 445
Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Gly Ser Val Val Ser Gly Ala
450 455 460
Val Val Ala Ala Val Ile Trp Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
465 470 475 480
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
485 490 495
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
500 505 510
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
515 520 525
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
530 535 540
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
545 550 555 560
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
565 570 575
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
580 585 590
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
595 600 605
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
610 615 620
Arg
625
<210> 90
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> GFP序列
<400> 90
Met Pro Ala Met Lys Ile Glu Cys Arg Ile Thr Gly Thr Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Glu Phe Glu Leu Val Gly Gly Gly Glu Gly Thr Pro Glu Gln Gly
20 25 30
Arg Met Thr Asn Lys Met Lys Ser Thr Lys Gly Ala Leu Thr Phe Ser
35 40 45
Pro Tyr Leu Leu Ser His Val Met Gly Tyr Gly Phe Tyr His Phe Gly
50 55 60
Thr Tyr Pro Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Phe Leu His Ala Ile Asn Asn
65 70 75 80
Gly Gly Tyr Thr Asn Thr Arg Ile Glu Lys Tyr Glu Asp Gly Gly Val
85 90 95
Leu His Val Ser Phe Ser Tyr Arg Tyr Glu Ala Gly Arg Val Ile Gly
100 105 110
Asp Phe Lys Val Val Gly Thr Gly Phe Pro Glu Asp Ser Val Ile Phe
115 120 125
Thr Asp Lys Ile Ile Arg Ser Asn Ala Thr Val Glu His Leu His Pro
130 135 140
Met Gly Asp Asn Val Leu Val Gly Ser Phe Ala Arg Thr Phe Ser Leu
145 150 155 160
Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr Ser Phe Val Val Asp Ser His Met His Phe
165 170 175
Lys Ser Ala Ile His Pro Ser Ile Leu Gln Asn Gly Gly Pro Met Phe
180 185 190
Ala Phe Arg Arg Val Glu Glu Leu His Ser Asn Thr Glu Leu Gly Ile
195 200 205
Val Glu Tyr Gln His Ala Phe Lys Thr Pro Ile Ala Phe Ala Arg Ser
210 215 220
Arg Ala Arg
225
<210> 91
<211> 755
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> GFP-P2A-NKi序列
<400> 91
Met Pro Ala Met Lys Ile Glu Cys Arg Ile Thr Gly Thr Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Glu Phe Glu Leu Val Gly Gly Gly Glu Gly Thr Pro Glu Gln Gly
20 25 30
Arg Met Thr Asn Lys Met Lys Ser Thr Lys Gly Ala Leu Thr Phe Ser
35 40 45
Pro Tyr Leu Leu Ser His Val Met Gly Tyr Gly Phe Tyr His Phe Gly
50 55 60
Thr Tyr Pro Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Phe Leu His Ala Ile Asn Asn
65 70 75 80
Gly Gly Tyr Thr Asn Thr Arg Ile Glu Lys Tyr Glu Asp Gly Gly Val
85 90 95
Leu His Val Ser Phe Ser Tyr Arg Tyr Glu Ala Gly Arg Val Ile Gly
100 105 110
Asp Phe Lys Val Val Gly Thr Gly Phe Pro Glu Asp Ser Val Ile Phe
115 120 125
Thr Asp Lys Ile Ile Arg Ser Asn Ala Thr Val Glu His Leu His Pro
130 135 140
Met Gly Asp Asn Val Leu Val Gly Ser Phe Ala Arg Thr Phe Ser Leu
145 150 155 160
Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr Ser Phe Val Val Asp Ser His Met His Phe
165 170 175
Lys Ser Ala Ile His Pro Ser Ile Leu Gln Asn Gly Gly Pro Met Phe
180 185 190
Ala Phe Arg Arg Val Glu Glu Leu His Ser Asn Thr Glu Leu Gly Ile
195 200 205
Val Glu Tyr Gln His Ala Phe Lys Thr Pro Ile Ala Phe Ala Arg Ser
210 215 220
Arg Ala Arg His Met Arg Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe
225 230 235 240
Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met
245 250 255
Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser Gly
260 265 270
Leu Glu Ala Val Met Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr Pro
290 295 300
Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser Asn
305 310 315 320
Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu Val
325 330 335
Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser Asp
340 345 350
Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr Glu
355 360 365
Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His Val
370 375 380
Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly Gly
385 390 395 400
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
405 410 415
Gly Ser Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser Arg
420 425 430
Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp Asp
435 440 445
Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met Val
450 455 460
Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp Arg
465 470 475 480
Glu Thr Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn Leu
485 490 495
Arg Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr
500 505 510
Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly Arg Phe Leu
515 520 525
Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Leu Thr Leu
530 535 540
Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala Ala Gln Ile
545 550 555 560
Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His Gln Arg Ala
565 570 575
Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr Leu Glu Lys
580 585 590
Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr His Val Thr
595 600 605
His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu
610 615 620
Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly Glu
625 630 635 640
Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp
645 650 655
Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu
660 665 670
Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Val
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995 1000 1005
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
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Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
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Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
1045 1050 1055
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
1060 1065 1070
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
1075 1080 1085
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
1090 1095 1100
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
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1140
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<211> 1139
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CAR19-P2A-Nki-2序列
<400> 96
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1 5 10 15
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20 25 30
Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
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50 55 60
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Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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245 250 255
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260 265 270
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
275 280 285
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Gln Ala Leu Pro Pro Arg His Met Arg Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ala
485 490 495
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610 615 620
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625 630 635 640
Asn His Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp
645 650 655
Met Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
660 665 670
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser
675 680 685
Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr
690 695 700
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725 730 735
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755 760 765
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770 775 780
Arg Phe Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035 1040
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
1045 1050 1055
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
1060 1065 1070
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
1075 1080 1085
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
1090 1095 1100
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
1105 1110 1115 1120
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
1125 1130 1135
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<210> 97
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<220>
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50 55 60
Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
100 105 110
Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
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420 425 430
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435 440 445
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
450 455 460
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<220>
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<400> 98
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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180 185 190
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210 215 220
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225 230 235 240
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275 280 285
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195 200 205
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225 230 235 240
Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
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260 265 270
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
275 280 285
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
290 295 300
Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
305 310 315 320
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
325 330 335
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
340 345 350
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355 360 365
Arg
<210> 100
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Anti-BCMA CAR2
<400> 100
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1 5 10 15
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65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
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Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
100 105 110
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115 120 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145 150 155 160
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
165 170 175
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg
180 185 190
Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
195 200 205
Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala
210 215 220
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
225 230 235 240
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
245 250 255
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly
260 265 270
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Arg
275 280 285
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
290 295 300
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
305 310 315 320
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
325 330 335
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
340 345 350
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
355 360 365
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
370 375 380
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
385 390 395 400
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
405 410 415
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
420 425 430
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
435 440 445
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
450 455 460
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
465 470 475 480
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
485 490 495
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
500 505 510
<210> 101
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Anti-BCMA CAR3
<400> 101
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
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Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Leu Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly
165 170 175
Arg Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
180 185 190
Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr
195 200 205
Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
210 215 220
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe
245 250 255
Gly Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr
260 265 270
Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
275 280 285
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
290 295 300
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
305 310 315 320
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu
325 330 335
Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile
340 345 350
Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp
355 360 365
Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
370 375 380
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
385 390 395 400
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
405 410 415
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
420 425 430
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
435 440 445
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
450 455 460
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
465 470 475 480
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 102
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Anti-BCMA CAR4
<400> 102
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
20 25 30
Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu
35 40 45
Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu
65 70 75 80
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr
100 105 110
Cys Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
130 135 140
Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu
145 150 155 160
Leu Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
165 170 175
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
180 185 190
Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro
195 200 205
Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr
210 215 220
Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
275 280 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
290 295 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
305 310 315 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
325 330 335
Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
340 345 350
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
355 360 365
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
370 375 380
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
385 390 395 400
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
405 410 415
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
420 425 430
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
435 440 445
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
450 455 460
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
465 470 475 480
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 103
<211> 1884
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合多肽Nki-1全长核苷酸序列
<400> 103
atgtctcgct ccgtggcatt ggctgtgctc gcgctactct ctctttctgg tctcgaagct 60
gttatggctc cgcggactgt gctgttaggt ggtggcggtt ccggtggtgg cggttctggt 120
ggtggcggct ccatccagcg tacgccaaag attcaggttt actcacgtca tccagcagag 180
aatggaaagt caaatttcct gaattgctat gtgtctgggt ttcatccatc cgacattgaa 240
gttgacttac tgaagaatgg agagagaatt gaaaaagtgg agcattcaga cttgtctttc 300
agcaaggact ggtctttcta tctcttgtac tacactgaat tcacccccac tgaaaaagat 360
gagtatgcct gccgtgtgaa ccatgtgact ttgtcacagc ccaagatagt taagtgggat 420
cgcgacatgg gtggtggcgg ttctggtggt ggcggtagtg gcggcggagg aagcggtggt 480
ggcggttccg gatctcactc cttgaagtat ttccacactt ccgtgtcccg gcccggccgc 540
ggggagcccc gcttcatctc tgtgggctac gtggacgaca cccagttcgt gcgcttcgac 600
aacgacgccg cgagtccgag gatggtgccg cgggcgccgt ggatggagca ggaggggtca 660
gagtattggg accgggagac acggagcgcc agggacaccg cacagatttt ccgagtgaac 720
ctgcggacgc tgcgcggcta ctacaatcag agcgaggccg ggtctcacac cctgcagtgg 780
atgcatggct gcgagctggg gcccgacggg cgcttcctcc gcgggtatga acagttcgcc 840
tacgacggca aggattatct caccctgaat gaggacctgc gctcctggac cgcggtggac 900
acggcggctc agatctccga gcaaaagtca aatgatgcct ctgaggcgga gcaccagaga 960
gcctacctgg aagacacatg cgtggagtgg ctccacaaat acctggagaa ggggaaggag 1020
acgctgcttc acctggagcc cccaaagaca cacgtgactc accaccccat ctctgaccat 1080
gaggccaccc tgaggtgctg ggctctgggc ttctaccctg cggagatcac actgacctgg 1140
cagcaggatg gggagggcca tacccaggac acggagctcg tggagaccag gcctgcaggg 1200
gatggaacct tccagaagtg ggcagctgtg gtggtgcctt ctggagagga gcagagatac 1260
acgtgccatg tgcagcatga ggggctaccc gagcccgtca ccctgagatg gctgagatgg 1320
gagccgtctt cccagcccac catccccatc atctacatct gggcgccctt ggccgggact 1380
tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc accctttact gcaaacgggg cagaaagaaa 1440
ctcctgtata tattcaaaca accatttatg agaccagtac aaactactca agaggaagat 1500
ggctgtagct gccgatttcc agaagaagaa gaaggaggat gtgaactgag agtgaagttc 1560
agcaggagcg cagacgcccc cgcgtaccag cagggccaga accagctcta taacgagctc 1620
aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag 1680
atggggggaa agccgagaag gaagaaccct caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa 1740
gataagatgg cggaggccta cagtgagatt gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag 1800
gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt acagccacca aggacaccta cgacgccctt 1860
cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1884
<210> 104
<211> 1875
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合多肽Nki-2全长核苷酸序列
<400> 104
atgtctcgct ccgtggcatt ggctgtgctc gcgctactct ctctttctgg tctcgaagct 60
gttatggctc cgcggactgt gctgttaggt ggtggcggtt ccggtggtgg cggttctggt 120
ggtggcggct ccatccagcg tacgccaaag attcaggttt actcacgtca tccagcagag 180
aatggaaagt caaatttcct gaattgctat gtgtctgggt ttcatccatc cgacattgaa 240
gttgacttac tgaagaatgg agagagaatt gaaaaagtgg agcattcaga cttgtctttc 300
agcaaggact ggtctttcta tctcttgtac tacactgaat tcacccccac tgaaaaagat 360
gagtatgcct gccgtgtgaa ccatgtgact ttgtcacagc ccaagatagt taagtgggat 420
cgcgacatgg gtggtggcgg ttctggtggt ggcggtagtg gcggcggagg aagcggtggt 480
ggcggttccg gatctcactc cttgaagtat ttccacactt ccgtgtcccg gcccggccgc 540
ggggagcccc gcttcatctc tgtgggctac gtggacgaca cccagttcgt gcgcttcgac 600
aacgacgccg cgagtccgag gatggtgccg cgggcgccgt ggatggagca ggaggggtca 660
gagtattggg accgggagac acggagcgcc agggacaccg cacagatttt ccgagtgaac 720
ctgcggacgc tgcgcggcta ctacaatcag agcgaggccg ggtctcacac cctgcagtgg 780
atgcatggct gcgagctggg gcccgacggg cgcttcctcc gcgggtatga acagttcgcc 840
tacgacggca aggattatct caccctgaat gaggacctgc gctcctggac cgcggtggac 900
acggcggctc agatctccga gcaaaagtca aatgatgcct ctgaggcgga gcaccagaga 960
gcctacctgg aagacacatg cgtggagtgg ctccacaaat acctggagaa ggggaaggag 1020
acgctgcttc acctggagcc cccaaagaca cacgtgactc accaccccat ctctgaccat 1080
gaggccaccc tgaggtgctg ggctctgggc ttctaccctg cggagatcac actgacctgg 1140
cagcaggatg gggagggcca tacccaggac acggagctcg tggagaccag gcctgcaggg 1200
gatggaacct tccagaagtg ggcagctgtg gtggtgcctt ctggagagga gcagagatac 1260
acgtgccatg tgcagcatga ggggctaccc gagcccgtca ccctgagatg gaagccggct 1320
tcccagccca ccatccccat cgtgggcatc attgctggcc tggttctcct tggatctgtg 1380
gtctctggag ctgtggttgc tgctgtgata tggaaacggg gcagaaagaa actcctgtat 1440
atattcaaac aaccatttat gagaccagta caaactactc aagaggaaga tggctgtagc 1500
tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc 1560
gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag aaccagctct ataacgagct caatctagga 1620
cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag agacgtggcc gggaccctga gatgggggga 1680
aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg 1740
gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat 1800
ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct acgacgccct tcacatgcag 1860
gccctgcccc ctcgc 1875
<210> 105
<211> 109
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B2M sgRNA-1
<400> 105
cucacgcugg auagccuccg uuuuagagcu augcuggaaa cagcauagca aguuaaaaua 60
aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc ggugcuuuu 109
<210> 106
<211> 109
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B2M sgRNA-2
<400> 106
aguagcgcga gcacagcuag uuuuagagcu augcuggaaa cagcauagca aguuaaaaua 60
aggcuagucc guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc ggugcuuuu 109
<210> 107
<211> 99
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TRAC sgRNA
<400> 107
gagucucuca gcugguacag uuuuagagcu agaaauagca aguuaaaaua aggcuagucc 60
guuaucaacu ugaaaaagug gcaccgaguc ggugcuuuu 99
<210> 108
<211> 500
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合多肽Nki序列
<400> 108
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Val Met Ala Pro Arg Thr Val Leu Leu Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser Val Ser
165 170 175
Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp
180 185 190
Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro Arg Met
195 200 205
Val Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr Trp Asp
210 215 220
Arg Glu Thr Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg Val Asn
225 230 235 240
Leu Arg Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His
245 250 255
Thr Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly Arg Phe
260 265 270
Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Leu Thr
275 280 285
Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala Ala Gln
290 295 300
Ile Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His Gln Arg
305 310 315 320
Ala Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr Leu Glu
325 330 335
Lys Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr His Val
340 345 350
Thr His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala
355 360 365
Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly
370 375 380
Glu Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly
385 390 395 400
Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu
405 410 415
Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro
420 425 430
Val Thr Leu Arg Trp Lys Pro Ala Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val
435 440 445
Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Gly Ser Val Val Ser Gly Ala
450 455 460
Val Val Ala Ala Val Ile Trp Arg Lys Lys Ser Ser Gly Gly Lys Gly
465 470 475 480
Gly Ser Tyr Tyr Lys Ala Glu Trp Ser Asp Ser Ala Gln Gly Ser Glu
485 490 495
Ser His Ser Leu
500

Claims (10)

1.嵌合多肽，其包含截短的HLA-E重链、铰链域、跨膜域以及源自非HLA-E重链的胞内激活信号域，其中所述胞内激活信号域包含源自共刺激分子的共刺激结构域和/或源自初级信号转导分子的信号传导结构域。
2.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其中所述截短的HLA-E重链自N端至C端依次包含：α1域、α2域、α3域。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的嵌合多肽，其中所述源自共刺激分子的共刺激结构域包含选自下述蛋白的信号转导结构域：CD137/4-1BB、CD28、OX-40、ICOS、CD30、CD40、LFA-1、CD2、CD7、CD160(BY55)、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL7Rα、γc(IL-2RG)、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、CD40L、TIM1、CD226、DR3、SLAM、PD-1、、B7-H3、与CD83特异性结合的配体、NKG2D、2B4、CD244、FcεRIγ、BTLA、CD27、GITR、HVEM、DAP10、NKG2C、LIGHT和DAP12。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合多肽，其中所述初级信号转导分子的信号传导结构域包含选自下述蛋白的信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12、Igα受体、Igβ受体、BLV gp30(bovineleukemia virus gp30)、EBV(Ep-stein-Barr virus)LMP2A、猴免疫缺陷病毒(SimianImmunodeficiency Virus)PBj14 Nef、和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的嵌合多肽，其中所述跨膜域包含HLA-E重链的跨膜域和/或源自非HLA-E重链的跨膜域。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的嵌合多肽，其中所述铰链域包含HLA-E重链的铰链域和/或源自非HLA-E重链的铰链域。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含B2M蛋白。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽还包含膜定位信号肽。
9.免疫效应细胞，其包含权利要求1-8中任一项所述的嵌合多肽。
10.权利要求1-8中任一项所述的嵌合多肽或权利要求9所述的免疫效应细胞用于制备药物的用途，其中所述药物用于预防和/或治疗肿瘤和/或与免疫调节相关的疾病或病症。
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