CN112778050A - 一种促根型微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

一种促根型微生物菌剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种促根型微生物菌剂，其包括复合微生物菌体、保水剂以及复合载体。其中，所述复合微生物菌体包括巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌；所述载体包括海藻粉、腐植酸和硅藻土。本发明还涉及所述促根型微生物菌剂的制备方法及其用于促进作物根系生长的用途。本发明所述的微生物菌剂不仅能够明显增加所述微生物菌剂的微生物活性和存活率，而且施用后明显促进作物生根。

Description

一种促根型微生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物肥料领域，具体涉及一种促根型微生物菌剂及其制备方法和用途。
背景技术
微生物肥料是指含有特定微生物活体的制品，应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。微生物肥料作为一种生物制剂，与化学肥料相比，具有生态友好、安全无害、不污染环境、不破坏土壤结构、效果持久以及提高产量和品质等诸多优点。
中国专利申请CN201910180390.8公开了一种微生物肥料，其配方包括：微生物菌剂1％～3％，载体80％～90％，余量水。所述微生物菌剂包括枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的一种或多种混合。
中国专利申请CN201910314496.2公开了一种复合微生物菌肥，包括菌剂和菌剂载体；所述菌剂是由枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、地衣芽孢杆菌和酵母菌混合后活化而成；所述菌剂载体包括发酵污泥、发酵秸秆、硝化抑制剂、发酵牛粪、保水剂等。
中国专利申请CN201811264239.4公开了一种复合微生物菌剂，其由复合菌剂、微量元素、硅藻土和干燥剂混合而成；所述的复合菌剂由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和植物乳杆菌组成。
中国专利申请CN201410831390.7公开了一种复合微生物菌剂，其包含复合微生物菌剂、微量元素、硅藻土以及干燥剂。
目前虽然存在诸多种复合微生物菌剂，但是现有微生物菌剂仍然存在存活率低、货架期短的缺陷，导致田间施用时有效活菌数大大减少，田间效果也不同程度的降低。此外，现有微生物菌剂在功效方面的研究仍不够深入，多数仅仅是作为有益微生物施用至田间，至于施用后对作物生长发育的影响等方面缺乏研究，这也导致了目前微生物肥料施肥的盲目性，缺乏针对性。
发明内容
本发明旨在开发一种促根型微生物菌剂，该促根型微生物菌剂不仅具有良好的微生物存活率，而且已经证实能够促进植物根系生长发育。本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明一方面涉及一种促根型微生物菌剂，其包括如下组分及其重量份：
复合微生物菌体：1-30份
保水剂：1-10份
复合载体：5-150份。
其中，各组分的重量份优选为：
复合微生物菌体：10-20份
保水剂：3-6份
载体：50-100份。
在本发明的一种实施方式中，其中所述复合微生物菌体包括巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌，其重量比为1∶2-3∶2-3∶0.5-1∶1-2，优选为1∶3∶2∶1∶2。在本发明的一种实施方式中，所述复合微生物菌体由巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌组成，上述菌种均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，例如巨大芽孢杆菌的保藏号为ACCC 02745、枯草芽孢杆菌的保藏号为ACCC60364、长枝木霉菌的保藏号为ACCC31767、绿色木霉菌的保藏号为ACCC 31911、植物乳杆菌的保藏号为ACCC 10533。
在本发明的一种实施方式中，其中所述保水剂包括聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、羟甲基化淀粉、磷酸酯化淀粉、羟丙基化纤维素中的一种或多种，优选为聚乙烯醇或羟甲基化淀粉。
在本发明的一种实施方式中，其中所述载体包括海藻粉、腐植酸和硅藻土，其重量比为1∶4-6∶3-5，优选为1∶5∶4。在本发明优选的实施方式中，所述载体由海藻粉、腐植酸和硅藻土组成，其重量比如上所述。在本发明中，所述海藻粉包括马尾藻粉、泡叶藻粉中的一种或两种，优选为泡叶藻粉。
本发明另一方面涉及本发明所述促根型微生物菌剂的制备方法，其包括如下步骤：
(1)单一微生物菌体的制备：
分别将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌经过斜面培养、种子培养以及发酵培养，获得发酵培养物；然后，将发酵培养物离心，收集沉淀，经喷雾干燥，得到各种微生物菌体；
(2)复合微生物菌体的制备：
将配方量步骤(1)制备得到的巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌的菌体进行混合，得到复合微生物菌体；
(3)复合载体的制备
将配方量的海藻粉、腐植酸和硅藻土混合均匀，得到复合载体；
(4)微生物菌剂的制备
将配方量步骤(2)制备得到的复合微生物菌体与步骤(3)制备得到的复合载体混合均匀，然后加入配方量的保水剂并再次混合均匀，得到微生物菌剂。
在本发明中，所述巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌单一微生物菌体的制备方法如下，具体为：
A、巨大芽孢杆菌菌体、枯草芽孢杆菌菌体各自的制备方法为：
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在30-35℃条件下培养24-36小时。
所述斜面培养基为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠5g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在30-35℃、120-160rpm培养条件下培养20-30小时。
所述种子培养基为：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、玉米粉10g/L、硫酸铵40g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)发酵培养
将摇床种子培养的菌种在无菌条件下，以15-20％的接种量接种于发酵培养基中，在温度35-37℃、转速200-220rpm、罐压0.06MPa、通气量0.6-1.2vvm的下发酵培养36-48h，当芽孢形成率大于80％时，停止发酵，得到发酵培养物。
所述发酵培养基为：葡萄糖50g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L、豆饼粉10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸二氢钾1g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)微生物菌体制备
对发酵培养物进行离心，离心转速为3000-5000rpm，离心时间为10-30min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到微生物菌体。
B、长枝木霉菌菌体、绿色木霉菌菌体各自的制备方法为：
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在25-28℃下培养48-72小时。
所述斜面培养基为PDA培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖及琼脂，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在25-28℃、150-200rpm下培养24-48小时。
所述种子培养基为PD培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)固体发酵培养
将种子培养的菌种在无菌条件下，以10-15％的接种量接种于固体发酵培养基中，在温度25-30℃、湿度60-80％下发酵培养5-7天，90％以上产孢时，得到发酵培养物。
所述固体发酵培养基为(以质量百分比计)：麦麸皮48％、玉米粉24％、米糠24％、蔗糖1.5％、硫酸镁0.5％、硫酸铵1.5％、磷酸二氢钾0.5％。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)微生物菌体制备
将发酵培养物浸于灭菌水中制成孢子悬浮液，然后经离心，离心转速为4000-6000rpm，离心时间为10-30min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到微生物菌体。
C、植物乳杆菌菌体的制备方法为：
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35-40℃条件下培养24-36小时。
所述斜面培养基为MRS琼脂培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在35-40℃下培养24-36小时。
所述种子培养基为MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)发酵培养
将种子培养的菌种在无菌条件下，以15-20％的接种量接种于发酵培养基中，在温度37-40℃、转速100-120rpm下发酵培养36-48h，得到发酵培养物。
所述发酵培养基为MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)微生物菌体制备
对发酵培养物进行离心，离心转速为3000-5000rpm，离心时间为10-30min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到微生物菌体。
本发明另一方面涉及本发明上述的促根型微生物菌剂用于促进作物根系生长的用途，其中可以在播种前将所述微生物菌剂混入土壤，也可以在作物生长季作为追肥使用，优选在播种前将所述微生物菌剂混入土壤。本发明所述促根型微生物菌剂的施用量为20-80kg/亩，优选为40-60kg/亩。本发明所述的促根型微生物菌剂适用的作物包括玉米、小麦、大豆、番茄、黄瓜等作物，优选玉米。
有益效果
本发明所述的微生物菌剂，通过将适宜的微生物菌菌种进行复合应用，且选用适宜的载体，不仅能够明显增加所述微生物菌剂的微生物活性和存活率，而且施用后明显促进作物生根。另外，通过在微生物菌剂中混入保水剂，施入土壤后能够保持微生物周围环境的水分，这有利于微生物在土壤中的生长繁殖。
具体实施方式
为了理解本发明，下面以实施例进一步说明本发明，但不限制本发明。
一、制备实施例
下述实施例中所用的微生物菌体通过下述方法获得。
A、巨大芽孢杆菌(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC 02745)
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在30℃条件下培养28小时。
所述斜面培养基为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠5g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在30℃、120rpm培养条件下培养24小时。
所述种子培养基为：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、玉米粉10g/L、硫酸铵40g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)发酵培养
将摇床种子培养的菌种在无菌条件下，以15％的接种量接种于发酵培养基中，在温度35℃、转速200rpm、罐压0.06MPa、通气量0.8vvm的下发酵培养36h，检测芽孢形成率约85％，停止发酵，得到发酵培养物。
所述发酵培养基为：葡萄糖50g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L、豆饼粉10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸二氢钾1g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)巨大芽孢杆菌菌体制备
对发酵培养物进行离心，离心转速为4000rpm，离心时间为15min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到巨大芽孢杆菌菌体。
B、枯草芽孢杆菌(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC 60364)
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35℃条件下培养24小时。
所述斜面培养基为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠5g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在35℃、140rpm培养条件下培养28小时。
所述种子培养基为：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、玉米粉10g/L、硫酸铵40g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)发酵培养
将摇床种子培养的菌种在无菌条件下，以20％的接种量接种于发酵培养基中，在温度37℃、转速200rpm、罐压0.06MPa、通气量0.8vvm的下发酵培养48h，检测芽孢形成率约88％，停止发酵，得到发酵培养物。
所述发酵培养基为：葡萄糖50g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L、豆饼粉10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸二氢钾1g/L，用蒸馏水配制，pH7.2。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)枯草芽孢杆菌菌体制备
对发酵培养物进行离心，离心转速为3000rpm，离心时间为20min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到枯草芽孢杆菌菌体。
C、长枝木霉菌(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC 31767)
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在25℃下培养72小时。
所述斜面培养基为PDA培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖及琼脂，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在25℃、150rpm下培养48小时。
所述种子培养基为PD培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)固体发酵培养
将种子培养的菌种在无菌条件下，以12％的接种量接种于固体发酵培养基中，在温度28℃、湿度60％下发酵培养7天，90％以上产孢，得到发酵培养物。
所述固体发酵培养基为(以质量百分比计)：麦麸皮48％、玉米粉24％、米糠24％、蔗糖1.5％、硫酸镁0.5％、硫酸铵1.5％、磷酸二氢钾0.5％。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)长枝木霉菌菌体制备
将发酵培养物浸于灭菌水中制成孢子悬浮液，然后经离心，离心转速为4000rpm，离心时间为15min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到长枝木霉菌菌体。
D、绿色木霉菌(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC 31911)
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28℃下培养48小时。
所述斜面培养基为PDA培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖及琼脂，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)摇床种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在28℃、150下培养36小时。
所述种子培养基为PD培养基：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L，用蒸馏水配制。
配制方法为：称取去皮马铃薯，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加葡萄糖，溶化后用蒸馏水补足。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)固体发酵培养
将种子培养的菌种在无菌条件下，以15％的接种量接种于固体发酵培养基中，在温度28℃、湿度70％下发酵培养6天，90％以上产孢，得到发酵培养物。
所述固体发酵培养基为(以质量百分比计)：麦麸皮48％、玉米粉24％、米糠24％、蔗糖1.5％、硫酸镁0.5％、硫酸铵1.5％、磷酸二氢钾0.5％。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)绿色木霉菌菌体制备
将发酵培养物浸于灭菌水中制成孢子悬浮液，然后经离心，离心转速为4000rpm，离心时间为15min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到绿色木霉菌菌体。
E、植物乳杆菌(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC 10533)
(1)斜面培养
将菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在37℃条件下培养36小时。
所述斜面培养基为MRS琼脂培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、琼脂18g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(2)种子培养
将斜面培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在37℃下培养24小时。
所述种子培养基为MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(3)发酵培养
将种子培养的菌种在无菌条件下，以15％的接种量接种于发酵培养基中，在温度37℃、转速120rpm下发酵培养48h，得到发酵培养物。
所述发酵培养基为MRS培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L，用蒸馏水配制。培养基于121℃、0.1MPa条件下灭菌30min。
(4)植物乳杆菌菌体制备
对发酵培养物进行离心，离心转速为3000rpm，离心时间为15min，收集沉淀，经喷雾干燥，得到植物乳杆菌菌体。
实施例1
称取2kg巨大芽孢杆菌菌体，5kg枯草芽孢杆菌菌体，4kg长枝木霉菌菌体，1.6kg绿色木霉菌菌体，4kg植物乳杆菌菌体，混合均匀，得到复合微生物菌体；
称取7kg泡叶藻粉，35kg腐植酸，28kg硅藻土，混合均匀，得到复合载体；
将上述制备的复合微生物菌体与复合载体混合均匀，然后加入4kg聚乙烯醇，再混合均匀，即可。
实施例2
称取2kg巨大芽孢杆菌菌体，4kg枯草芽孢杆菌菌体，6kg长枝木霉菌菌体，1kg绿色木霉菌菌体，4kg植物乳杆菌菌体，混合均匀，得到复合微生物菌体；
称取7.5kg泡叶藻粉，30kg腐植酸，32kg硅藻土，混合均匀，得到复合载体；
将上述制备的复合微生物菌体与复合载体混合均匀，然后加入5kg羟甲基化淀粉，再混合均匀，即可。
实施例3
称取2kg巨大芽孢杆菌菌体，6kg枯草芽孢杆菌菌体，4kg长枝木霉菌菌体，2kg绿色木霉菌菌体，2kg植物乳杆菌菌体，混合均匀，得到复合微生物菌体；
称取7kg泡叶藻粉，42kg腐植酸，21kg硅藻土，混合均匀，得到复合载体；
将上述制备的复合微生物菌体与复合载体混合均匀，然后加入5kg羟甲基化淀粉，再混合均匀，即可。
实施例4
称取2kg巨大芽孢杆菌菌体，4kg枯草芽孢杆菌菌体，4kg长枝木霉菌菌体，2kg绿色木霉菌菌体，4kg植物乳杆菌菌体，混合均匀，得到复合微生物菌体；
称取7kg泡叶藻粉，28kg腐植酸，32kg硅藻土，混合均匀，得到复合载体；
将上述制备的复合微生物菌体与复合载体混合均匀，然后加入4kg聚乙烯醇，再混合均匀，即可。
实施例5
称取2kg巨大芽孢杆菌菌体，6kg枯草芽孢杆菌菌体，6kg长枝木霉菌菌体，1kg绿色木霉菌菌体，2kg植物乳杆菌菌体，混合均匀，得到复合微生物菌体；
称取8kg泡叶藻粉，32kg腐植酸，28kg硅藻土，混合均匀，得到复合载体；
将上述制备的复合微生物菌体与复合载体混合均匀，然后加入5kg羟甲基化淀粉，再混合均匀，即可。
对比例1
使用含35kg腐植酸与35kg硅藻土的复合载体替代实施例1的复合载体，其余与实施例1完全相同。
对比例2
使用含7.5kg泡叶藻粉与62kg硅藻土的复合载体替代与实施例2中的复合载体，其余与实施例2完全相同。
对比例3
使用由7kg枯草芽孢杆菌菌体，5.6kg绿色木霉菌菌体，4kg植物乳杆菌菌体组成的复合微生物菌体替代实施例1的复合微生物菌体，其余与实施例1完全相同。
对比例4
使用由8kg巨大芽孢杆菌菌体，6kg长枝木霉菌菌体，2kg植物乳杆菌菌体组成的复合微生物菌体替代实施例3的复合微生物菌体，其余与实施例3完全相同。
二、微生物存活试验
对于实施例1-5以及对比例1-2所述的微生物菌剂，采用平板计数法测定不同储存时期的有效活菌总数。
具体为：称取样品10g，加入带玻璃珠的100ml无菌水中，静置20min，在旋转式摇床上20r/min充分振荡30min，制成母液菌悬液。然后将上述母液菌悬液进行梯度稀释，采用平板计数法测定其中的有效活菌总数(参照GB 20287-2006方法)，并计算菌体存活率(某一时期有效活菌总数与初始有效活菌总数的比值)。结果如下表1所示。其中，所述有效活菌总数即巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌的数量总和。
表1微生物存活率测定
Figure BDA0002939036090000171
上述结果显示，采用本申请的复合载体负载复合微生物菌体所得到的复合微生物菌剂，具有稳定的货架期，其在储存180天后的存活率仍高于170％，最高可达186.1％。而对比例1-2微生物菌剂，其在180天后的存活率仅为70％左右。可见，本申请的微生物菌剂具有稳定的货架期，在至少180天的期间内，未出现有效活菌数的减少，甚至有较大幅度的增加，这对微生物菌剂来说是非常有利的。
三、促根生长试验
选取土壤条件一致的试验田，施用基肥(每亩N、P、K的施用量分别为10kg/亩、5kg/亩、8kg/亩)，翻土整地，将试验田划分成30个小区，每小区面积为20平方米。然后，对各小区分别随机施用实施例1-5以及对比例1-4的复合微生物菌剂(施用量50kg/亩)，共9个处理。另外设不施复合微生物菌剂的处理为对照。各处理以及对照均设三次重复。之后播种玉米(郑丹958)，播种行距为40cm，株距为30cm，常规田间管理。待玉米长至7叶期时，每小区采集具有代表性的3株玉米根系，每处理合并共采集9株，用清水将根系冲洗干净，然后用滤纸吸干表面水分，并于80℃下烘干至恒重，计算各处理玉米植株的平均根系干重，结果如下表2所示。
表2各处理玉米植株根系干重比较
处理 根系干重(g/株)
实施例1 2.06
实施例2 1.97
实施例3 1.83
实施例4 2.02
实施例5 1.91
对比例1 1.59
对比例2 1.52
对比例3 1.39
对比例4 1.42
对照 1.31
上述结果显示，本申请的复合微生物菌剂相对于对比例1-4所述的复合微生物菌剂以及对照，能够明显增加玉米的根重。这对于玉米作物的生长是有利的，尤其在对土壤营养的吸收以及作物抗倒伏等方面。
上述实例仅仅是对本发明的进一步解释，并不是对本发明的限定，通过将上述方案进行简单的调整进而得到的方案，同样在本申请的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种促根型微生物菌剂，其特征在于，包括如下组分及其重量份：
复合微生物菌体：5-30份
保水剂：1-8份
复合载体：25-150份。
2.根据权利要求1所述的促根型微生物菌剂，其特征在于，各组分的重量份优选为：
复合微生物菌体：10-20份
保水剂：3-6份
载体：50-100份。
3.根据权利要求1所述的促根型微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌体包括巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌，其重量比为1∶2-3∶2-3∶0.5-1∶1-2。
4.根据权利要求1所述的促根型微生物菌剂，其特征在于，所述保水剂包括聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、羟甲基化淀粉、磷酸酯化淀粉、羟丙基化纤维素中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的促根型微生物菌剂，其特征在于，所述载体包括海藻粉、腐植酸和硅藻土，其重量比为1∶4-6∶3-5；所述海藻粉包括马尾藻粉、泡叶藻粉中的一种或两种。
6.一种权利要求1-5任一项所述的促根型微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)单一微生物菌体的制备：
分别将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌经过斜面培养、种子培养以及发酵培养，获得发酵培养物；然后，将发酵培养物离心，收集沉淀，经喷雾干燥，得到各种微生物菌体；
(2)复合微生物菌体的制备：
将配方量步骤(1)制备得到的巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长枝木霉菌、绿色木霉菌、植物乳杆菌的菌体进行混合，得到复合微生物菌体；
(3)复合载体的制备
将配方量的海藻粉、腐植酸和硅藻土混合均匀，得到复合载体；
(4)微生物菌剂的制备
将配方量步骤(2)制备得到的复合微生物菌体与步骤(3)制备得到的复合载体混合均匀，然后加入配方量的保水剂并再次混合均匀，得到微生物菌剂。
7.权利要求1所述的促根型微生物菌剂用于促进作物根系生长的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述作物为玉米。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113372148A (zh) * 2021-07-22 2021-09-10 创想未来生物工程(北京)有限公司 一种有机物料腐熟微生物菌剂及其制备方法
CN113817645A (zh) * 2021-10-11 2021-12-21 山东众高农业科技有限公司 一种促进植物生根专用微生物菌剂及其制备方法
CN114181838A (zh) * 2021-12-07 2022-03-15 中国农业科学院草原研究所 一种马铃薯用微生物菌剂及其制备方法以及使用方法
CN114804949A (zh) * 2021-09-29 2022-07-29 漯河市盛粮生物科技有限公司 一种促进农作物生根的复合菌剂

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1158217A (zh) * 1996-11-19 1997-09-03 刘文治 一种高效微生物种子生长促进剂
CN105753569A (zh) * 2016-01-28 2016-07-13 青岛益佰农肥业有限公司 碱性微生物菌剂
CN105967779A (zh) * 2016-05-05 2016-09-28 张艳艳 一种延长花期的有机无机复合花肥及其制备方法
CN106588349A (zh) * 2016-12-16 2017-04-26 重庆壹点玖包企业管理咨询有限公司 一种微生物菌剂肥料
CN107244982A (zh) * 2017-07-28 2017-10-13 眉山市金威特化肥有限公司 一种塔式熔体造粒高浓度复合微生物菌肥及其制备方法
CN107285918A (zh) * 2017-08-10 2017-10-24 英丽华 一种生物混合菌肥及其制备方法和应用
CN108147919A (zh) * 2017-12-11 2018-06-12 新科环农（北京）生物科技有限公司 微生物海藻复合肥及其制备方法
CN109796279A (zh) * 2019-04-03 2019-05-24 成都云图控股股份有限公司 一种多元素生物有机肥及其制备方法
CN109851454A (zh) * 2019-02-25 2019-06-07 深圳市芭田生态工程股份有限公司 碱性农用复合微生物改良剂及其制备方法
CN109880632A (zh) * 2019-03-08 2019-06-14 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 酸化板结土壤修复菌剂及其制备方法和使用方法
CN110577437A (zh) * 2019-09-10 2019-12-17 青岛明月蓝海生物科技有限公司 一种液态海藻微生物菌肥及其制备方法
CN110590447A (zh) * 2019-09-27 2019-12-20 青岛九天智慧农业集团有限公司 一种酸性微生物菌剂、其制备方法及应用
CN110818509A (zh) * 2019-12-04 2020-02-21 四川省眉山益稷农业科技有限公司 一种用于促进作物根系生长的高菌有机肥及其应用
CN111517859A (zh) * 2020-04-29 2020-08-11 海口绿之海生态农业科技有限公司 一种适用于多种作物的全价配合菌肥及生产工艺

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1158217A (zh) * 1996-11-19 1997-09-03 刘文治 一种高效微生物种子生长促进剂
CN105753569A (zh) * 2016-01-28 2016-07-13 青岛益佰农肥业有限公司 碱性微生物菌剂
CN105967779A (zh) * 2016-05-05 2016-09-28 张艳艳 一种延长花期的有机无机复合花肥及其制备方法
CN106588349A (zh) * 2016-12-16 2017-04-26 重庆壹点玖包企业管理咨询有限公司 一种微生物菌剂肥料
CN107244982A (zh) * 2017-07-28 2017-10-13 眉山市金威特化肥有限公司 一种塔式熔体造粒高浓度复合微生物菌肥及其制备方法
CN107285918A (zh) * 2017-08-10 2017-10-24 英丽华 一种生物混合菌肥及其制备方法和应用
CN108147919A (zh) * 2017-12-11 2018-06-12 新科环农（北京）生物科技有限公司 微生物海藻复合肥及其制备方法
CN109851454A (zh) * 2019-02-25 2019-06-07 深圳市芭田生态工程股份有限公司 碱性农用复合微生物改良剂及其制备方法
CN109880632A (zh) * 2019-03-08 2019-06-14 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 酸化板结土壤修复菌剂及其制备方法和使用方法
CN109796279A (zh) * 2019-04-03 2019-05-24 成都云图控股股份有限公司 一种多元素生物有机肥及其制备方法
CN110577437A (zh) * 2019-09-10 2019-12-17 青岛明月蓝海生物科技有限公司 一种液态海藻微生物菌肥及其制备方法
CN110590447A (zh) * 2019-09-27 2019-12-20 青岛九天智慧农业集团有限公司 一种酸性微生物菌剂、其制备方法及应用
CN110818509A (zh) * 2019-12-04 2020-02-21 四川省眉山益稷农业科技有限公司 一种用于促进作物根系生长的高菌有机肥及其应用
CN111517859A (zh) * 2020-04-29 2020-08-11 海口绿之海生态农业科技有限公司 一种适用于多种作物的全价配合菌肥及生产工艺

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113372148A (zh) * 2021-07-22 2021-09-10 创想未来生物工程(北京)有限公司 一种有机物料腐熟微生物菌剂及其制备方法
CN114804949A (zh) * 2021-09-29 2022-07-29 漯河市盛粮生物科技有限公司 一种促进农作物生根的复合菌剂
CN113817645A (zh) * 2021-10-11 2021-12-21 山东众高农业科技有限公司 一种促进植物生根专用微生物菌剂及其制备方法
CN114181838A (zh) * 2021-12-07 2022-03-15 中国农业科学院草原研究所 一种马铃薯用微生物菌剂及其制备方法以及使用方法

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