CN112759589A - 嘧啶并吡啶酮类化合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有式Ⅰ所示结构的嘧啶并吡啶酮类化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、N‑氧化物或其前药分子及其应用。该类化合物可作为蛋白激酶抑制剂，能够有效抑制TTK蛋白激酶的活性并且能抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

Description

嘧啶并吡啶酮类化合物及其应用

技术领域

本发明涉及化学医药技术领域，具体涉及一种嘧啶并吡啶酮类化合物及其应用。

背景技术

酪氨酸苏氨酸激酶(Threonine tyrosine kinase,TTK)，又称单级纺锤体1(Monopolar spindle1,Mps1)激酶，是一类双特异性激酶，最早在20世纪90年代初于出芽酵母中发现。TTK也被证实作为纺锤丝组装检验点(Spindle assembly checkpoint,SAC)中的重要组分，在有丝分裂中对确保姐妹染色单体准确分配到子细胞中，避免非整倍性的产生中起着至关重要的作用。SAC是细胞有丝分裂过程中的一种协调控制机制，当存在染色体未被正确排列组装时，SAC阻滞细胞分裂进行进而避免姐妹染色单体错误分配到两个子细胞，直到所有姐妹染色体正确排列及组装，SAC才失效，让有丝分裂继续进行。而TTK对SAC的启动及维持起着重要作用。在有丝分裂中，当染色体与动粒未结合时，动粒上的Aurora B磷酸化包含HEC1在内的底物，招募TTK，TTK磷酸化Knl1等底物并招募包括Cdc20在内的一系列组分形成四聚体有丝分裂检查点复合物(Mitotic checkpoint complex,MCC)。而Cdc20是泛素E3连接酶APC/C(anaphase promoting complex)的激活亚基，MCC复合物形成后，Cdc20失去激活APC/C的功能，进而通过泛素/蛋白酶体途径抑制分离酶抑制蛋白(Securin)和细胞周期蛋白B1(CyclinB)的降解，阻止有丝分裂后期的启动。而当所有姐妹染色单体与动粒紧密结合后，或是通过微管与KMN网络结合后，占据TTK结合位点从而使其脱落，或是在微管与KMN网络结合后影响TTK与Knl1磷酸化位点的距离，阻碍TTK磷酸化Knl1而发挥功能。MCC复合物解离，新的MCC复合物停止合成，APC/C被Cdc20激活并泛素化标记securin以及cyclinB1，引起其降解。securin降解释放分离酶(separase)，从而裂解黏连蛋白环结构的Scc1kleisin亚基，允许姐妹染色单体分离，进入细胞分裂后期。同时，cyclin B1的降解使Cdk1失活，导致有丝分裂的退出。[Musacchio,A.Curr.Biol.2015.25,1002-1018；S.Biggins等Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2014,15,736-47；G.Kops等Open Biol.2018.8,180109；Taylor,S.S.等J.Cell Sci.2011.124,4332-4345；Barford,D.等Nature 2012,484,208-213；Pines,J.等J.Cell Biol.2012,199,27-37；Yu,H.等Nat.Rev.Mol.CellBiol.2013,14,25-37]。除此之外，TTK还参与调控有丝分裂中的动粒-微管连接纠错新机制[Jallepalli,PrasadV.等J.CellBiol.2010.190,89-100；Taylor,Stephen S.等J.CellBiol.2010,190,25-34；Tomoyuki U.等Curr.tBiol.2007,17,2175-2182；Yao,X.等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2015,112,4546-4555]，中心体复制[Fisk,Harold A.等Mol.Biol.Cell,2007,18,4457-4469；Fisk,H.A.等Environ.Mol.Mutagen.2009,50,654-65；Winey,M.等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2003,100,14875-80.]，DNA损伤调控反应[Shieh,S.Y.等J.of Biol.Chem.2005,280,7748-7757；Medema,R.H.等Science.2011,333,1895-1898；Yoshida,K.等Oncogene.2008.27,7285-7295；Shieh,S.Y.等Mol.Cell.Biol.2009.29,2935-2944；Shieh,S.Y.等NucleicAcidsRes.2016,44,1133-1150]，染色体不稳定性(chromosomal instability,CIN)[Borg,A.等Nat.Genet.2008,40,102-7]等。

TTK在许多肿瘤如结肠癌[Xu,Q.等Biophys.Res.Commun.2014.450,1690-1695]、三阴性乳腺癌[Perou,C.M.等BMC Genomics 2006,7,96；Gabrielson,E.等Proc.NatlAcad.Sci.U.S.A.2011,108,5384-5389]、肝癌[Zhao,H.等J.Hepatol.2014,61,840-849；Zhao,H.等J.Drug Target 2017,25,112-118；Huang,J.等Oncotarget 2015,6,34309-34320]、膀胱癌[Orntoft,T.F.等Cancer Res.2001,61,2492-2499]、胰腺癌[Buchholz,M.等Brit.J.Cancer 2014,111,1780-1787]、恶性胶质瘤[McClelland,M等PLoSOne 2011,6,e25631；Wuerdinger,T.等JNCIJ.Natl.Cancer Inst.2013,105,1322-1331；Tandle,A.等Biochim.Biophys.Acta 2008,1786,32-40]等中存在高表达，并且其高表达与肿瘤治疗的不良预后存在密切关系。而使用siRNA敲低TTK表达量可以选择性诱导乳腺癌细胞的凋亡，并且对于非整倍性越高的细胞，效果越明显，而对正常细胞无明显副作用[Gabrielson,E.等Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2011,108,5384-9]。70％-95％的肿瘤细胞均为非整倍体(10种最常见的器官的肿瘤)[Cimini,D.等Biochim BiophysActa 2008,1786,32-40]，鉴于抑制TTK能选择性诱导非整倍体肿瘤细胞的凋亡，TTK有望成为一种新的肿瘤治疗靶点。

至今已经报道了许多TTK抑制剂，其中有5个小分子作为TTK小分子抑制剂治疗肿瘤处于临床1期研究：S-81694、BAY-1161909、BAY-1217389、CFI-402257和BOS-172722。虽然他们都具有不错的激酶活性以及选择性，然而他们大多数不具备单一药物疗效，临床实验中除了CF-402257外，均采用与紫杉醇联合用药的给药方式。并且他们的临床实验进展并不理想。现今并没有批准上市的TTK小分子抑制剂，因此研发全新骨架的高活性、高选择性TTK小分子抑制剂用于新的肿瘤治疗手段仍然十分重要。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种嘧啶并吡啶酮类化合物，该类化合物可作为蛋白激酶抑制剂，能够高活性、高选择性地抑制TTK蛋白激酶的活性，从而能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。

具技术方案如下：

具有式Ⅰ所示结构的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子：

其中：

X任选自：C、N；当X为N时，没有R₄；

R₁任选自：C₃～C₁₀环烷基、

L₁，L₂各自任选自：-(CH₂)_aNH-、-(CH₂)_bL₃-；

L₃任选自：

R₂任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基；

R₃任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₆-C₁₀芳基；

R₄任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基；

R₅任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基、C₁～C₆烷基取代的C₃～C₈杂环烷基；

R₆任选自：氢、

Y任选自：CH、N；Z任选自：N、O；当Z为O时R₁₀不存在；

R₇任选自：C₁～C₁₂烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₈任选自：氢、C₁～C₆烷氧羰基、C₁～C₆烷磺酰基、C₆～C₁₀芳磺酰基、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₉、R₁₁分别各自任选自：氢、C₁～C₆烷基；

R₁₀任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷酰基；.

n、m、a、b分别各自任选自：0、1、2、3、4；

c任选自：1、2。

在其中一些实施例中，R₁任选自：C₄～C₈环烷基、

L₁，L₂各自任选自：-(CH₂)_aNH-、-(CH₂)_bL₃-；

L₃任选自：

在其中一些实施例中，

R₁任选自：

L₁，L₂各自任选自：环丁烷基、环戊烷基、环已烷基、环庚烷基、

n选自1或2。

在其中一些实施例中，R₇任选自：C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₈任选自：C₁～C₆烷磺酰基、苯磺酰基、叔丁氧羰基；

n选自1或2。

在其中一些实施例中，R₇任选自：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环已基、苯基、萘基、金刚烷基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、

R₈任选自：甲磺酰基，乙磺酰基、丙磺酰基、苯磺酰基、叔丁氧羰基。

在其中一些实施例中，R₂任选自：氢、C₁～C₃烷基。

在其中一些实施例中，R₃任选自：氢、C₁～C₃烷基；R₃更优选为：氢、甲基或异丙基。

在其中一些实施例中，R₄任选自：氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基、二氟丙氧基、二氟异丙氧基、二氟正丁氧基、二氟异丁氧基、二氟叔丁氧基；R₄更优选为：甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、二氟乙氧基。

在其中一些实施例中，R₅任选自：氢、卤素、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基；R₅更优选为氢。

在其中一些实施例中，R₆任选自：

Y任选自：CH、N。

在其中一些实施例中，R₉、R₁₁分别各自任选自：氢、C₁～C₃烷基；R₁₀任选自：氢、C₁～C₃烷基、甲酰基。

在其中一些实施例中，所述的嘧啶并吡啶酮类化合物具有式Ⅱ所示结构：

本发明还提供了上述的嘧啶并吡啶酮类化合物的应用。

具体技术方案如下：

上述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子在制备TTK抑制剂中的应用。

上述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的应用。

在其中一些实施例中，所述肿瘤为：胶质瘤、多发性骨髓瘤、白血病、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、肝癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌。

本发明还提供了一种预防或者治疗肿瘤的药用组合物。

具体技术方案如下：

一种预防或者治疗肿瘤的药用组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料制备得到，所述活性成分包括上述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子。

基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：

本发明的嘧啶并吡啶酮类化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、N-氧化物或其前药分子可以高效、高选择性地抑制TTK蛋白激酶的作用，从而可以选择性抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，同时不会影响正常细胞，具有安全性高，毒副作用低的优点，可用于制备抗肿瘤药物，可用于制备治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过度增殖性疾病的药物。

说明书附图

图1为化合物对TTK激酶亲和力测试的原理图。

图2为化合物对HCT-116细胞蛋白影响。

图3为化合物对HCT-116细胞有丝分裂中染色体分配的影响。

图4为化合物对HCT-116细胞非整倍性的影响。

图5为化合物对HCT-116细胞克隆形成的影响。

图6为化合物对HCT-116细胞凋亡的影响。

图7为化合物HMH5450151的体内肿瘤抑制曲线(HCT-116细胞的小鼠移植瘤模型)。

图8为化合物HMH5450151对小鼠体重的影响(HCT-116细胞的小鼠移植瘤模型)。

图9为化合物HMH5450157和HMH5450183的体内肿瘤抑制曲线(HCT-116细胞的小鼠移植瘤模型)。

图10为化合物HMH5450157和HMH5450183对小鼠体重的影响(HCT-116细胞的小鼠移植瘤模型)。

图11为化合物HMH5450151的激酶谱选择性数据。

图12为化合物HMH5450151的激酶谱选择性数据。

图13为化合物HMH5450151的激酶谱选择性数据。

图14为化合物HMH5450151的激酶谱选择性数据。

图15为化合物HMH1320078的激酶谱选择性数据。

图16为化合物HMH1320078的激酶谱选择性数据。

图17为化合物HMH1320078的激酶谱选择性数据。

图18为化合物HMH1320078的激酶谱选择性数据。

图19为化合物580152的激酶谱选择性数据。

图20为化合物580152的激酶谱选择性数据。

图21为化合物580152的激酶谱选择性数据。

图22为化合物580152的激酶谱选择性数据。

具体实施方式

本发明所述化合物中，当任何变量(例如R等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。

本文所用短语“R_f取代”，“R取代”被认为与短语“被至少一个取代基取代”相当，且在此情况下优选的实施方案将具有1-4个取代基。

本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C₁-C₆烷基”中“C₁-C₆”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“C₁-C₆烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。术语“烷氧基”指具有-O-烷基结构的基团，如-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂CH₃、-O-CH₂CH(CH₃)₂、-OCH₂CH₂CH₂CH₃、-O-CH(CH₃)₂等。术语“杂环烷基”为饱和或部分不饱和的单环或多环环状取代基，其中一个或多个环原子选自N、O或S(O)m(其中m是0-2的整数)的杂原子，其余环原子为碳，例如：四氢吡咯基等。术语“杂芳基”指含有1、2或3个选自O、N或S的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基。正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。

本发明提供一种具有式Ⅰ所示结构的嘧啶并吡啶酮类化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、N-氧化物或其前药分子：

其中：

X任选自：C、N；当X为N时，没有R₄；

R₁任选自：C₃～C₁₀环烷基、

L₁，L₂各自任选自：-(CH₂)_aNH-、-(CH₂)_bL₃-；

L₃任选自：

R₂任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基；

R₃任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₆-C₁₀芳基；

R₄任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基；

R₅任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基、C₁～C₆烷基取代的C₃～C₈杂环烷基；

R₆任选自：氢、

Y任选自：CH、N；Z任选自：N、O；当Z为O时R₁₀不存在；

R₇任选自：C₁～C₁₂烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₈任选自：H、C₁～C₆烷氧羰基、C₁～C₆烷磺酰基、C₆～C₁₀芳磺酰基、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₉、R₁₁分别各自任选自：氢、C₁～C₆烷基；

R₁₀任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷酰基；.

n、m、a、b分别各自任选自：0、1、2、3、4；

c任选自：1、2。

本发明包括式(I)化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受的盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式(I)化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。

可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。

因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。

如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐.得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。

Berg等，“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.’1977：66：1-19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。

由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如羧基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。

在一个实施方案中，本申请提供了一种利用具有式(I)所示结构的化合物及其药学可接受的盐治疗人或其它哺乳动物肿瘤等过渡增殖性疾病或症状的方法。

在一个实施方案中，本申请所设计的化合物及其药学可接受的盐可以用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、子宫内膜癌、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤、恶性黑色素瘤、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、喉癌或多发性骨髓瘤、B淋巴瘤、白血病等。

药物代谢物及前药

本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。

药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。

本发明所述的“活性成分”包括本发明所述的式I化合物。

本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用作TRK抑制剂。在另一优选例中，用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物。

“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。

“相容性”在此指的是组合物中各组分能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。

药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂

润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

在另一优选例中，本发明式I化合物可与大分子化合物或高分子通过非键合作用形成复合物。在另一优选例中，本发明式I化合物作为小分子还可通过化学键与大分子化合物或高分子相连接。所述大分子化合物可以是生物大分子如高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。

本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。

在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：

(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；

(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；

(c)保湿剂，例如，甘油；

(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；

(e)缓溶剂，例如，石蜡；

(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；

(g)润湿剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；

(h)吸附剂，例如，高岭土；和

(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

所述的固体剂型还可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如降糖药)联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

联合用药

式(I)化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式和剂量保持不变，而同时或随后服用式(I)化合物。当式(I)化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式I化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式(I)化合物与其它一种或几种已知药物。当式(I)化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式(I)化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。

可以与式(I)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：

微管蛋白抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、视网膜样受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂，细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、Bcr-Abl抑制剂、c-Kit抑制剂、Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、MMP抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、CDK抑制剂、Bcl-2家族蛋白抑制剂、MDM2家族蛋白抑制剂、IAP家族蛋白抑制剂、STAT家族蛋白抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、COX-2抑制剂、p53、p53激活剂、VEGF抗体、EGF抗体等。

在一个实施方案中，可以与式Ⅰ化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：紫杉烷、阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomib、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞昔、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、己烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligard、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇制剂、17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫昔芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、1-β-D-阿糖呋喃糖胞噻啶-5’-硬脂酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司群、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊剂、戈舍瑞林、盐酸格拉尼西隆、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-la、白细胞介素-2、内含子A、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、6-琉基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、米替福新、美满霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、neupogen、尼鲁米特、三苯氧胺、NSC-631570、重组人白细胞介素1-β、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、美罗华、力度伸-A、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁膦酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲氨喋呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白质稳定制剂、acolbifene、干扰素r-lb、affinitak、氨基喋呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、BAY43-9006、阿瓦斯丁、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、DN-101、阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-PEG、ixabepilone、匙孔形血蓝蛋白、L-651582、兰乐肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米泼昔芬、米诺屈酸酯、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、PN-401、QS-21、夸西洋、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺维A酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素αl、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-lo7R、伐司朴达、伐普肽、vatalanib、维替泊芬、长春氟宁、Z-100和唑来麟酸或它们的组合。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本发明说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

下列实施例中所用试剂均可购买得到。

以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1化合物HMH1198032

步骤1.化合物1的合成

将4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(31.4g,135mmol)溶解于乙腈(200ml)中，加入碳酸钾(37.3g,270mmol)，于30分钟内分批加入顺式-1,4-环己二胺(32.2g,150mmol)。室温下搅拌过夜，薄层层析监测反应直至反应完全。旋干溶剂后用乙酸乙酯和水萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，然后抽滤旋干，柱层析分离(SiO₂,PE/EA梯度洗脱，10:1～5:1)得到化合物1(白色固体，42.3g,产率76％)¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(s,1H),8.46(d,J＝6.1Hz,1H),4.55(s,1H),4.32(m,3H),3.62(s,1H),2.51(s,3H),1.87-1.77(m,6H),1.53(m,2H),1.45(s,9H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H).MS(ESI)m/z 411.2[M+H]⁺.

步骤2.化合物2的合成

在氩气保护下，将化合物1(75.5g,184.1mmol)溶解于干燥四氢呋喃(100mL)中，冷却至-40℃，缓慢滴加氢化铝锂(41.0g,368.3mmol)的四氢呋喃悬浮液，搅拌并缓慢升至0℃，点板监测反应。原料反应完后，降温至-40℃，先后缓慢滴加14ml水，14ml的15％氢氧化钠水溶液，14ml水淬灭反应，随后加入无水硫酸钠，抽滤，浓缩。再用二氯甲烷和水萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，然后抽滤旋干，柱层析分离(SiO₂,DCM/MeOH梯度洗脱，40:1～20:1)得到化合物2(白色固体,37.2g,产率55％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(s,1H),6.17(d,J＝6.8Hz,1H),4.66(s,1H),4.46(s,2H),4.18(s,1H),3.58(s,1H),2.45(s,3H),1.75(m,6H),1.49(m,2H),1.42(s,9H).MS(ESI)m/z 369.1[M+H]⁺.

步骤3.化合物3的合成

将化合物2(17.0g,46.2mmol)溶解于二氯甲烷(200ml)中，分批加入活化的二氧化锰(40.0g,46.2mmol)，在室温下搅拌过夜，点板监测反应。原料反应完后用硅藻土抽滤，去除固体，滤液旋干后柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，40:1～20:1)得到化合物3(白色固体,15.7g,产率93％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.69(s,1H),8.79(d,J＝6.4Hz,1H),4.59(s,1H),4.34(s,1H),3.63(s,1H),2.52(s,3H),1.83(m,6H),1.56(m,2H),1.44(s,9H).MS(ESI)m/z 367.2[M+H]⁺

步骤4.化合物4的合成

将化合物3(4.7g,12.9mmol)溶解于干燥四氢呋喃(25ml)中，降温至-78℃。在氩气保护下，缓慢滴加1mol/L的环丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(25.8ml,25.8mmol)，将温度缓慢升至-40℃，搅拌反应，点板监测反应。原料反应完后加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应。旋干四氢呋喃后用二氯甲烷和水萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤旋干滤液，柱层析分离(SiO₂,DCM/MeOH梯度洗脱,40:1～20:1)得到化合物4(白色固体,3.3g,产率63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(s,1H),6.48(d,J＝6.6Hz,1H),4.54(s,1H),4.22(s,1H),3.77(d,J＝8.6Hz,1H),3.60(s,1H),2.60(br,1H),2.48(s,3H),1.78(m,6H),1.50(m,2H),1.45(s,9H),1.34(m,1H),0.71(m,1H),0.63(m,1H),0.46(m,1H),0.27(m,1H).MS(ESI)m/z 409.7[M+H]⁺.

步骤5.化合物5的合成

合成方法参照化合物3.收率80％。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.52(d,J＝7.0Hz,1H),8.79(s,1H),4.56(s,1H),4.33(m,1H),3.60(s,1H),2.52(br,4H),1.84(m,2H),1.77(m,4H),1.51(m,2H),1.44(s,9H),1.18(m,2H),1.00(m,2H).MS(ESI)m/z 407.5[M+H]⁺.

步骤6.化合物6的合成

将化合物5(1.7g,4.2mmol)，甲氧甲酰基亚甲基三苯基膦(2.8g,8.4mmol)，加入干燥甲苯中，在氩气保护下，回流搅拌反应2天。旋干后柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱,100:1～20:1)得到化合物6(白色固体,326mg,产率18％)，将未反应完的原料化合物5回收(800mg,2.0mmol)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.04(s,1H),6.23(s,1H),5.44(s,1H),5.10(s,1H),3.96(s,1H),2.79(d,J＝9.8Hz,2H),2.66(s,3H),1.95(d,J＝14.5Hz,2H),1.48(s,9H),1.11(m,2H),0.80(m,2H).MS(ESI)m/z 453.3[M+Na]⁺.

步骤7.化合物7的合成

将化合物6(326mg,0.8mmol)溶解于二氯甲烷中，降温至0℃，加入m-CPBA(392mg,2.3mmol)，在0℃下搅拌，点板监测反应。原料反应完后加入饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应。取有机相，并用二氯甲烷萃取水相，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干后柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～20:1)得到化合物7(白色固体,338mg,产率96％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H),6.52(s,1H),5.52(s,1H),5.34(s,1H),4.02(s,1H),3.38(s,3H),2.90(br,2H),2.10(m,1H),1.96(d,J＝11.9Hz,2H),1.70(m,2H),1.56(d,J＝11.4Hz,2H),1.49(s,9H),1.20(m,2H),0.87(m,2H).MS(ESI)m/z 485.4[M+Na]⁺.

步骤8.化合物8的合成

将化合物7(338mg,0.7mmol)、2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(177.9mg,0.8mmol)和三氟乙酸(65μl,0.9mmol)加入干燥仲丁醇(5ml)中，在氩气保护下，加热至95℃搅拌反应18小时。点板监测反应。原料反应完后冷却至室温，旋干溶剂后加入二氯甲烷(4ml)和三氟乙酸(2ml)，在室温搅拌。点板监测反应，原料反应完后旋干溶剂，加入二氯甲烷和饱和碳酸钠水溶液萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干后柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～10:1)得到黄色固体(76mg,产率21％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(s,1H),8.14(s,1H),7.61(s,1H),6.58-6.54(m,2H),6.02(s,1H),5.42(m,1H),3.91(s,3H),3.26(s,1H),3.21(m,4H),2.89(q,J＝13.3Hz,2H),2.61(m,4H),2.37(s,3H),1.85(d,J＝12.3Hz,2H),1.73(t,J＝13.3Hz,2H),1.50(d,J＝12.2Hz,2H),1.07(d,J＝7.8Hz,2H),0.85(t,J＝8.9Hz,1H),0.79(d,J＝4.9Hz,2H).MS(ESI)m/z 504.9[M+H]⁺.

步骤9.化合物HMH1198032的合成

将化合物8(76mg,0.2mmol)溶解于干燥二氯甲烷(10ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(31.6μl,0.2mmol)，降温至0℃。将丙酰氯(14.5μl,0.17mmol)溶解于二氯甲烷中(10ml)，缓慢滴加到上述反应体系中，于0℃搅拌10分钟。点板监测反应，原料反应完后旋干溶剂，柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～10:1)得到黄色固体(70mg,产率83％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.95(s,1H),8.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.67(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.24(s,1H),6.00(s,1H),5.54(t,J＝11.8Hz,1H),4.35(br,1H),3.91(s,3H),3.23(t,J＝4.7Hz,3H),2.73(q,4H,J＝9.9Hz),2.65(t,4H,J＝4.7Hz),2.40(s,3H),2.30(q,3H,J＝7.6Hz),2.03(m,1H),1.94(d,2H,J＝13.4Hz),1.69(d,2H,J＝13.7Hz),1.61(d,2H,J＝15.7Hz),1.24(d,2H,J＝6.8Hz),1.20(d,2H,J＝7.6Hz),1.10-1.05(m,2H),0.81-0.77(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.7,158.9,156.2,155.6,150.4,149.7,148.0,121.3,120.2,114.3,107.9,107.8,100.3,55.8,55.1,49.8,46.0,42.7,30.1,22.3,10.8,10.2,7.4.HRMS(ESI)for C₃₁H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:561.3323,Found:561.3346.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝16.28min,99.5％purity.

实施例2.化合物HMH5450156

步骤1.化合物9的合成

将丙基丙二酸(10.0g,75.7mmol)溶解于乙酸乙酯(150ml)中，降温至0℃，加入多聚甲醛(4.5g,151.4mmol)、二乙胺(11.7ml,113.5mmol)。移至室温搅拌10分钟后加热至回流。反应4小时，点板监测反应，原料反应完后旋干溶剂，柱层析分离(SiO₂,PE/EA梯度洗脱，5:1～2:1)得到无色液体(5.6g,产率65％)¹H NMR(400MHz,CDCl3),δ11.82(br,1H),6.30(s,1H),5.64(s,1H),2.28(t,J＝7.6Hz,2H),1.52(m,2H),0.93(t,J＝7.6Hz,2H).MS(ESI)m/z 113.0[M-H]^-.

步骤2.化合物10的合成

合成方法参照实施例1中化合物1的合成，收率96％。¹H NMR(400MHz,CDCl3),δ8.11(s,1H),5.49(d,J＝7.2Hz,1H),4.60(s,1H),4.17-4.13(m,1H),3.67(s,1H),1.88-1.80(m,4H),1.70-1.60(m,4H),1.44(s,9H).MS(ESI)m/z405.3[M+H]⁺.

步骤3.化合物11的合成

将化合物9(4.1g,36.0mmol)、化合物10(2.9g,7.2mmol)、N,N-二异丙基乙胺(12.5ml,72.0mmol)、二(氰基苯)二氯化钯(138mg,0.4mmol)、三(邻甲基苯基)磷(110.0mg,0.4mmol)加入装有干燥四氢呋喃(40ml)的烧瓶中，在氩气保护下，置于75℃加热油浴搅拌锅中回流搅拌16小时，点板监测反应直至反应完全后加入乙酸酐(1.8ml,1.9mmol)，并将温度升至95℃，继续加热回流搅拌24小时，点板监测反应直至反应完全。经硅藻土过滤去除固体，用二氯甲烷洗涤滤饼，取有机液，旋干后用二氯甲烷和水萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，然后抽滤旋干，柱层析分离(SiO₂,PE/EA梯度洗脱，5:1～2:1)得到白色固体(1.8g,产率60％)¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),7.43(s,1H),5.42(s,1H),5.26(s,1H),4.01(s,1H),2.82(m,2H),2.59(t,J＝7.5Hz,2H),1.95(d,J＝13.0Hz,2H),1.73-1.63(m,4H),1.57(d,J＝12.4Hz,2H),1.48(s,9H),1.02(t,J＝7.3Hz，3H).MS(ESI)m/z 443.3[M+Na]⁺.

步骤4.化合物12的合成

将化合物11(420.9mg,1mmol)、2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(234.0mg,1.1mmol)、三氟乙酸(89.0μl,1.2mmol)溶解于仲丁醇(5ml)中，在氩气保护下，加热至95℃搅拌反应18小时。点板监测反应。原料反应完后冷却至室温，旋干溶剂后加入二氯甲烷(4ml)和三氟乙酸(2ml)，在室温搅拌。点板监测反应，原料反应完后旋干溶剂，加入二氯甲烷和饱和碳酸钠水溶液萃取，取有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干后柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～10:1)得到黄色固体(165mg,产率33％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),8.19(s,1H),7.59(s,1H),7.28(s,1H),6.57-6.55(m,2H),5.47(br,1H),3.90(s,3H),3.20(t,J＝4.7Hz,4H),2.94(q,J＝10.1Hz,2H),2.61(t,J＝4.6Hz,4H),2.51(t,J＝7.5Hz,3H),2.37(s,3H),1.83-1.77(m,4H),1.63(q,J＝7.5Hz,2H),1.49(d,J＝10.9Hz,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,2H).MS(ESI)m/z 506.8[M+H]⁺.

步骤5.化合物HMH5450156的合成

将化合物12(165.0mg,0.2mmol)溶解于干燥二氯甲烷(10ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(68μl,0.4mmol)，降温至0℃。将丙酰氯(32μl,0.4mmol)溶解于二氯甲烷中(10ml)，缓慢滴加到上述反应体系中，于0℃搅拌10分钟。点板监测反应，原料反应完后旋干溶剂，柱层析分离(SiO₂，DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～10:1)得到黄色固体(163.2mg,产率89％)。¹HNMR(500MHz,CDCl₃),8.47(s,1H),8.23(d,J＝10.6Hz,1H),7.65(s,1H),7.30(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.12(s,1H),5.57(t,J＝14.8Hz,1H),4.34(br,1H),3.91(s,3H),3.25(br,4H),2.77(q,J＝14.5Hz,2H),2.70(br,4H),2.51(t,J＝9.4Hz,2H),2.43(s,3H),2.29(q,J＝9.2Hz,2H),1.97(d,J＝16.8Hz,2H),1.75-1.62(m,6H),1.21(t,J＝9.5Hz,3H),1.01(t,J＝9.1Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.5,158.3,157.6,154.9,149.5,147.9,131.6,131.5,121.5,120.0,107.9,106.9,100.3,55.8,55.2,53.4,49.9,46.1,42.8,32.5,30.3,30.1,29.8,22.6,21.5,14.0,10.1.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:562.35002,Found:562.34901,RT＝1.2min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝12.15min,98.5％

实施例3.化合物HMH1320017

合成方法参照实施例2。收率69％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.58(s,1H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.54(s,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,1H),6.57(s,1H),6.21(s,1H),5.89(m,1H),3.90(s,3H),3.21-3.18(m,6H),2.61(m,4H),2.37(s,3H),2.35(s,3H),2.26(q,J＝8.5Hz,2H),1.95(q,J＝10.2Hz,1H),1.85-1.78(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.4,158.9,156.3,155.7,150.3,148.2,144.4,121.2,121.0,118.5,108.0,107.5,100.3,55.7,55.2,49.9,47.7,46.1,27.6,17.1,15.4.HRMS(ESI)for C₂₄H₃₀N₆O₂[M+H]⁺,Calcd:435.2503,Found:435.25005,RT＝3.05min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝15.70min,99.4％purity.

实施例4.化合物HMH1320006

合成方法参照实施例2。收率59％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),8.16(d,J＝7.4Hz,1H),7.58(s,1H),6.57-6.60(,2H),6.22(s,1H),5.88(t,J＝7.2Hz,1H),3.90(s,3H),3.27(m,4H),2.78(br,4H),2.48(s,3H),2.36(s,3H),2.33-2.32(m,2H)2.01(m,2H),1.88-1.82(m,2H),1.67-1.65(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ162.7,158.0,155.4,154.7,149.0,147.2,143.2,120.3,120.0,117.6,107.1,106.7,99.5,54.8,54.2,52.7,49.0,45.1,27.1,24.6,16.0.HRMS(ESI)for C₂₅H₃₂N₆O₂[M+H]⁺,Calcd:449.26595,Found:449.26638,RT＝3.12min.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝11.74min,95.5％purity.

实施例5.化合物HMH1320018

合成方法参照实施例2。收率67％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.58(s,1H),8.24(s,1H),7.68(s,1H),6.58-6.57(m,2H),6.21(s,1H),5.40(br,1H),3.90(s,3H),3.21(m,4H),2.67-2.65(m,2H),2.61(br,4H),2.37(s,3H),2.35(s,3H),1.88(br,2H),1.71(br,2H),1.43-1.38(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.2,159.2,156.4,155.8,144.3,121.6,108.3,107.8,100.7,55.9,55.4,50.2,46.3,28.8,27.0,25.6,17.1.HRMS(ESI)for C₂₆H₃₄N₆O₂[M+H]⁺,Calcd:463.2816,Found:463.28138,RT＝3.15min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝20.69min,95.7％purity.

实施例6.化合物HMH1320019

合成方法参照实施例2。收率40％。

¹H NMR(500MHz,CDCl3),δ8.57(s,1H),8.31(d,J＝6.3Hz,0.7H),7.99(s,0.3H)7.72(s,0.7H),7.34(s,0.3H),6.57-6.56(m,2H),6.26-6.19(m,1H),5.63(s,0.7H),5.37(s,0.3H),3.91(s,3H),3.20(t,J＝4.2Hz,4H),2.61(t,J＝4.8Hz,4H),2.56-2.52(m,2H),2.37(s,3H),2.35(s,3H),1.82-1.79(m,5H),1.69(m,4H),1.59-1.57(m,2H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6),δ162.1,156.5,155.0,145.4,128.3,117.3,115.4,106.5,106.2,99.8,55.1,54.6,53.8,48.3,45.7,31.0,27.5,27.1,26.2,16.6.HRMS(ESI)for C₂₇H₃₆N₆O₂[M+H]+,Calcd:477.29725,Found:477.29841,RT＝3.22min.HPLC analysis:MeOH-H2O(85:15),RT＝27.16min,96.8％purity.

实施例7.化合物HMH1320012

合成方法参照实施例2。收率40％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.64-8.60(m,2H),8.31-8.2(m,1H),7.79-7.70(m,1H),6.75-6.54(m,2H),6.28(s,1H),4.46-4.41(m,1H),4.31(br,2H),3.91(s,1H),3.69(t,J＝10.3Hz,1H),3.44-3.34(m,4H),2.96-2.86(m,5H),2.64-2.54(m,4H),2.42-2.39(m,2H),2.29-1.72(m,10H),1.37(m,3H),1.25(m,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.1,172.0,163.5,159.1,158.9,156.0,155.7,149.8,149.3,147.7,146.9,145.3,145.1,122.0,121.5,120.3,119.9,117.4,117.3,108.8,108.2,107.2,100.6,100.5,55.8,54.7,54.5,49.8,49.3,49.0,46.0,45.6,45.4,45.1,43.5,42.3,36.5,34.8,31.9,29.7,29.4,29.2,28.5,26.6,26.4,25.3,24.6,22.7,17.3,17.3,14.1,9.5,9.4.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₃[M+H]+,Calcd:534.31871,Found:534.31802,RT＝1.17min.HPLC analysis:MeOH-H2O(85:15),RT＝10.17min,95.0％purity.

实施例8.化合物HMH1320013

步骤1：化合物13的合成参照实施例2中化合物12的合成。收率34％。

步骤2：将化合物13(98mg,0.21mmol)、甲醇水溶液(23μl,0.308mmol)、适量

分子筛、冰醋酸(10μl,0.2mmol)溶解于干燥的二氯甲烷(5ml)中，在氩气保护下在室温下搅拌2小时后加入三乙酰氧基硼氢化钠(176mg,0.83mmol)后在室温搅拌过夜。经硅藻土抽滤后旋干，柱层析分离(SiO2,DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～50:1)得到黄色固体(32mg,产率32.8％).¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.59(s,1H),8.21(d,J＝8.1Hz,1H),7.67(s,1H),6.55-6.53(m,2H),6.25(s,1H),4.32-4.27(m,2H),4.23-4.19(m,2H),3.89(s,3H),3.18(br,4H),2.78-2.74(m,2H),2.60(br,4H),2.38(s,3H),2.36(s,3H),2.24(s,3H),1.93(m,2H),1.74(m,2H),1.59(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ163.6,159.2,155.8,155.7,149.7,148.1,145.0,121.3,120.7,117.2,107.7,107.2,100.4,59.8,56.0,55.7,55.2,50.0,46.5,46.1,44.0,35.6,31.9,29.7,29.4,28.1,24.9,22.7,17.3,14.1.MS(ESI)m/z 492.2[M+H]⁺.HPLCanalysis:MeOH-H2O(85:15),RT＝11.15min,97.7％purity.

实施例9.化合物HMH1320047

合成方法参照实施例2。收率42％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.63(s,1H),7.93(s,2H),7.82(s,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.38(br,1H),7.18(s,1H),6.95(d,J＝7.6Hz,1H),6.41(br,1H),6.35(s,1H),6.10(m,1H),3.82(s,3H),3.11(br,4H),2.57(t,J＝4.8Hz,4H),2.46(s,3H),2.35(s,3H),2.25(q,J＝7.5Hz,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.2,163.8,158.7,157.0,155.8,147.6,146.7,140.5,137.0,130.0,123.6,121.3,120.1,120.0,117.5,108.2,106.9,99.7,55.9,55.4,49.9,46.3,30.5,29.9,17.5,9.6.HRMS(ESI)forC₂₉H₃₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:528.27176,Found:528.27183,RT＝2.97min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝7.35min,99.7％purity.

实施例10.化合物YL1310018

合成方法参照实施例2。收率88％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.36(s,1H),7.41(d,J＝5.0Hz,1H,),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.55(d,J＝2.4Hz,1H),6.50(dd,J＝2.4,2.4Hz,1H),5.89(s,1H),4.93-4.88(m,1H),4.56(dd,J＝10.2,10.2Hz,1H),4.21-4.12(m,2H),3.79(s,3H),3.53-3.48(m,1H),3.17(t,J＝4.9Hz,4H),2.58(t,J＝4.8Hz,4H),2.35(s,3H),2.31(s,3H),2.28-2.23(q,2H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ174.9,161.5,156.9,152.5,151.6,148.9,148.5,146.8,130.3,123.6,112.8,108.9,102.2,97.6,58.7,56.1,55.6,50.4,50.2,46.5,42.8,30.1,30.0,17.6,10.1.HRMS(ESI)for C₂₆H₃₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:492.27176,Found:492.27205,RT＝1.47min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(80:20),RT＝6.03min,98.0％purity.

实施例11.化合物YL1310020

合成方法参照实施例2。收率89％.¹H NMR(400MHz,CDCl3),δ8.62(s,1H),7.99(m,1H),7.65(s,1H),7.48(s,1H),6.54-6.51(m,2H),6.25-6.13(m,2H),4.32(s,1H),4.02(m,1H),3.90(s,3H),3.79(br,1H),3.62(m,1H),3.52(m,1H),3.21(m,4H),3.03-2.85(m,1H),2.59(s,4H),2.36(s,6H),2.24-2.19(m,2H),2.07-2.05(m,1H),1.21-1.10(m,4H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.7,172.4,163.7,163.6,159.3,159.0,156.3,156.2,156.1,150.7,150.1,148.8,148.6,145.4,145.3,121.8,120.9,120.8,120.6,118.1,117.8,107.9,107.8,107.7,100.4,100.1,55.9,55.3,51.0,49.9,49.8,49.6,46.6,46.2,45.9,44.7,28.0,27.5,25.7,17.3,9.2,9.1.HRMS(ESI)for C₂₇H₃₅N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:506.28741,Found:506.2877,RT＝2.94min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝7.31min,99.4％purity.

实施例12.化合物HMH1320021

合成方法参照实施例2。收率56％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.62(s,1H),7.97(s,1H),7.65-7.49(m,1H),6.53(m,2H),6.25-6.15(m,2H),4.31(s,1H),3.99-3.97(m,1H),3.89(s,3H),3.78(s,1H),3.61(t,J＝8.0Hz,1H),3.51(m,1H),3.20(br,4H),3.03-2.88(m,1H),2.59(br,4H),2.35(s,6H),2.22-2.20(m,2H),1.24-1.11(m,4H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.6,172.3,163.6,163.5,159.0,158.8,156.2,156.1,155.9,155.8,149.9,148.6,148.4,145.4,145.2,121.5,120.6,120.3,117.9,117.6,107.7,107.6,100.2,99.9,55.7,55.1,50.8,49.7,49.6,49.5,46.5,46.1,45.8,44.5,27.9,27.4,17.2,9.1,9.0.HRMS(ESI)for C₂₇H₃₅N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:506.28741,Found:506.2877,RT＝2.95min.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(75:25),RT＝11.30min,96.2％purity.

实施例13.化合物HMH1320040

合成方法参照实施例1。收率52％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.60(d,J＝9.6Hz,1H),8.09(s,1H),7.64(s,1H),6.55-6.51(m,2H),6.21(s,1H),5.42(s,1H),4.66(s,1H),4.23(m,1H),3.89(s,4H),3.71(s,1H),3.20(br,4H),2.85(m,1H),2.60(s,4H),2.36(s,6H),2.28(m,2H),1.89-1.79(m,2H),1.20-1.07(m,3H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆),δ171.1,170.9,156.8,155.3,145.9,118.7,106.4,106.1,99.7,55.3,54.6,48.3,46.5,45.7,25.9,25.6,25.1,16.6,9.5,9.4.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:520.30306,Found:520.30305,RT＝2.97min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(80:20),RT＝8.31min,99.3％purity.

实施例14.化合物YL1310017

合成方法参照实施例1。收率55％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.55(d,J＝12Hz,1H),8.03(s,1H),7.65(s,1H),6.50-6.42(m,2H),6.14(d,J＝11.9Hz,1H),5.39(s,1H),4.61(s,1H),4.19(t,J＝11.7Hz,1H),3.84(s,3H),3.65(s,1H),3.18-3.12(m,4H),2.85-2.76(m,1H),2.56(m,4H),2.32(s,6H),2.29-2.22(m,2H),1.75(br,2H),1.59-1.55(m,1H),1.15(s,1H),1.02(s,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.6,172.1,164.0,159.4,156.2,156.0,145.2,145.0,118.4,107.9,107.6,100.6,100.3,55.9,55.3,50.1,49.8,47.4,46.3,43.3,42.2,26.9,26.7,25.8,17.3,9.9,9.7.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:520.30306,Found:520.30356,RT＝2.97min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝7.26min,99.9％purity.

实施例15.化合物YL1310023

合成方法参照实施例1。收率62％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),8.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.65(s,1H),6.56-6.52(m,2H),6.22(s,1H),5.63(br,1H),4.89(d,J＝13.0Hz,1H),4.02(d,J＝12.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.21(t,J＝5.0Hz,4H),3.13(t,J＝12.9Hz,1H),2.99-2.97(m,1H),2.86(br,1H),2.68(t,J＝11.5Hz,1H),2.60(t,J＝4.8Hz,4H),2.44-2.39(q,2H),2.36(s,6H),1.72-1.69(m,2H),1.19(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.3,163.7,158.7,155.9,149.6,148.1,144.8,120.9,120.2,118.4,107.7,100.0,55.7,55.1,49.7,46.1,45.8,42.1,29.7,28.3,27.6,26.6,17.1,9.6.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:520.30306,Found:520.30292,RT＝2.98min.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(75:25),RT＝13.09min,96.0％purity.

实施例16.化合物HMH1320078

合成方法参照实施例2。收率58％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.62(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.68(s,1H),6.57-6.53(m,2H),6.26(s,1H),6.19(s,1H),5.55(m,1H),4.34(m,1H),3.91(s,3H),3.21(t,J＝5.0Hz,4H),2.79-2.69(m,2H),2.61(t,J＝4.8Hz,4H),2.37(s,6H),2.32-2.27(q,J＝7.6Hz,2H),1.95(d,J＝13.1Hz,2H),1.71-1.68(m,2H),1.63-1.59(m,3H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.1,158.8,155.9,155.6,149.6,148.1,144.9,121.0,120.2,118.7,107.7,107.4,100.1,55.7,55.1,52.8,49.8,46.1,42.6,30.1,29.9,22.3,17.1,10.1.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:534.31871,Found:534.31879,RT＝3.04min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝12.11min,96.7％purity.

实施例17.化合物1320075

合成方法参照实施例2。收率62.8％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.58(s,1H),8.10(s,1H),7.50(br,1H),6.58(d,J＝2.2Hz,1H),6.22(s,1H),5.30(d,J＝7.6Hz,2H),3.96-3.95(m,1H),3.91(s,3H),3.24(br,4H),2.92(br,2H),2.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.36(s,3H),2.35(s,3H),2.20(q,J＝7.6Hz,2H),2.12-2.11(m,2H),1.66(d,2H,J＝11.2Hz),1.37-1.25(m,4H),1.16(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.8,163.8,159.2,156.3,155.8,150.5,148.7,144.7,122.0,120.7,118.1,108.3,107.6,100.2,55.8,55.3,53.0,49.7,47.7,46.1,33.1,29.9,27.0,22.7,17.1,14.1,9.9.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:534.31871,Found:534.31843,RT＝3.05min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝9.15min,99.9％purity.

实施例18.化合物HMH1320056

合成方法参照实施例2。收率73％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.64(s,1H),8.14(d,J＝8.8Hz,1H),7.71(s,1H),6.60-6.55(m,3H),6.27(s,1H),4.59(t,J＝5.4Hz,2H),3.90(s,3H),3.70-3.67(m,2H),3.20(t,J＝5.0Hz,4H),2.59(t,J＝4.9Hz,4H),2.40(s,3H),2.36(s,3H),2.08(q,J＝7.6Hz,2H),1.04(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ174.2,164.5,159.1,156.1,155.6,149.7,148.2,145.9,120.7,120.5,116.9,107.9,107.2,100.2,55.7,55.1,49.7,46.1,39.9,29.7,17.3,9.7.HRMS(ESI)for C₂₅H₃₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:480.27176,Found:480.27159,RT＝2.88min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(80:20),RT＝7.49min,97.3％purity.

实施例19.化合物YL1310035

合成方法参照实施例2。收率56％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.62(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.68(s,1H),6.57(d,J＝2.4Hz,1H),6.54(dd,J＝2.4,2.4Hz,1H),6.31(s,1H),6.19(s,1H),5.58-5.52(m,1H),4.34-4.32(m,1H),3.92(s,3H),3.21(t,J＝5.1Hz,4H),2.79-2.69(m,2H),2.62(t,J＝4.9Hz,4H),2.38(s,3H),2.37(s,3H),2.06(s,3H),1.95(d,J＝13.5Hz,2H),1.71-1.67(m,2H),1.60(s,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ169.7,164.3,159.1,156.1,155.9,149.9,148.3,144.9,121.3,120.5,118.9,107.9,107.6,100.4,55.9,55.3,52.9,50.0,46.3,43.1,30.2,23.8,22.5,17.2.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:520.30306,Found:520.30268,RT＝2.98min.,HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.93min,99.7％purity.

实施例20.化合物HMH5450129

合成方法参照实施例2。收率74％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.17(d,J＝7.9Hz,1H),7.68(br,1H),6.55-6.52(m,2H),6.18(s,1H),5.54(br,1H),4.35(s,1H),3.90(s,3H),3.20(br,4H),2.78(q,J＝12.4Hz,4H),2.60(br,4H),2.36(s,6H),2.25(s,2H),1.94(d,J＝12.3Hz,2H),1.69-1.59(m,4H),1.50(s,1H),0.96(br,2H),0.73(d,J＝4.2Hz,2H)¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.0,164.2,158.9,156.0,155.7,149.6,148.1,144.9,121.1,120.2,118.8,107.8,107.5,100.2,55.7,55.2,49.9,46.2,42.9,30.2,22.4,17.2,15.1,7.2.HRMS(ESI)for C₃₀H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:546.31871,Found:546.31834,RT＝1.18min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝12.76min,97.4％purity.

实施例21.化合物HMH5450130

合成方法参照实施例2。收率75％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.18(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(br,1H),6.57-6.53(m,2H),6.24(br,1H),6.19(s,1H),5.55(br,1H),4.33(s,1H),3.91(s,3H),3.20(br,4H),2.74(q,J＝13.7Hz,4H),2.61(br,4H),2.48-2.45(m,1H),2.37(s,6H),1.96-1.93(m,4H),1.70-1.59(m,4H),1.22(s,3H),1.20(s,3H).¹³CNMR(125MHz,CDCl₃),δ176.7,164.2,158.9,156.0,155.7,149.6,148.1,144.9,121.1,120.2,118.8,107.8,107.5,100.2,55.8,55.2,49.9,46.2,42.5,35.8,30.2,22.2,19.8,17.2.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:548.33437,Found:548.33407,RT＝1.18min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.46min,99.1％purity.

实施例22.化合物YL1310040

合成方法参照实施例2。收率68％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.68(s,1H),6.58-6.54(m,2H),6.40(d,J＝8.32Hz,1H),6.20(s,1H),5.56(m,1H),4.32-4.29(m,1H),3.91(s,3H),3.21(t,J＝5.0Hz,4H),2.74(t,J＝13.1Hz,2H),2.61(t,J＝4.9Hz,4H),2.37(s,6H),1.94(d,J＝12.6Hz,2H),1.70-1.59(m,4H),1.29(s,9H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ178.0,164.2,159.1,156.0,155.9,149.8,148.3,144.7,121.3,119.0,107.9,107.6,100.4,55.9,55.3,50.0,46.3,42.7,39.1,29.9,27.9,22.2,17.2.HRMS(ESI)for C₃₁H₄₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:562.35002,Found:562.35055,RT＝3.29min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝13.48min,97.8％purity.

实施例23.化合物HMH5450157

合成方法参照实施例2。收率73％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(br,1H),6.56-6.53(m,2H),6.21(s,1H),6.19(s,1H),5.54(br,1H),4.32(s,1H),3.90(s,3H),3.21(t,J＝4.25Hz,4H),2.74(q,J＝11.5Hz,4H),2.61(t,J＝4.35Hz,4H),2.37(s,6H),2.21(s,1H),1.95-1.92(m,4H),1.83-1.74(m,4H),1.69-1.58(m,6H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ175.7,164.3,159.0,156.0,155.8,149.7,148.1,144.8,121.3,120.3,118.9,107.9,107.5,100.3,55.8,55.2,49.9,46.3,46.2,42.7,30.6,30.1,22.3,17.2.HRMS(ESI)for C₃₂H₄₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:574.35002,Found:574.34795,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.09min,98.5％purity.

实施例24.化合物HMH5450151

合成方法参照实施例2。收率70％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),8.18(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(br,1H),6.56-6.53(m,2H),6.18(s,1H),6.15(d,J＝7.1Hz,1H),5.53(t,J＝11.9Hz,1H),4.31(d,J＝7.6Hz,1H),3.90(s,3H),3.21(t,J＝4.3Hz,4H),2.74(q,J＝10.9Hz,4H),2.62(t,J＝4.3Hz,4H),2.37(s,3H),2.36(s,3H),2.16(t,J＝11.5Hz,1H),1.91(br,4H),1.79(d,J＝12.5Hz,2H),1.69-1.64(m,3H),1.59(d,J＝9.7Hz,2H),1.48(q,J＝9.7Hz,2H),1.34-1.22(m,4H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ175.6,164.2,158.9,155.9,155.7,149.6,148.0,144.8,121.1,120.2,118.9,107.7,107.4,100.2,55.7,55.1,49.8,46.1,45.7,42.4,30.1,29.8,25.8,22.3,17.2.HRMS(ESI)for C₃₃H₄₅N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:588.36567,Found:588.36509,RT＝0.19min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.58min,100％purity.

实施例25.化合物HMH5450154

合成方法参照实施例2。收率84％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.62(s,1H),8.20(d,J＝6.8Hz,1H),7.95(d,J＝6.8Hz,1H),7.70(s,1H),7.49-7.47(m,3H),6.97(br,1H),6.58-6.56(m,2H),6.22(s,1H),5.63(m,1H),4.57(s,1H),3.91(s,3H),3.23(br,4H),2.87(q,J＝12.6Hz,2H),2.63(br,4H),2.38(s,3H),2.39(s,6H),2.08(d,J＝12.7Hz,2H),1.99(br,1H),1.77(t,J＝13.7Hz,2H),1.67(d,J＝12.4Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ166.9,164.2,159.0,156.1,155.8,149.7,148.2,144.8,135.0,131.4,128.7,127.2,121.2,118.9,107.9,107.5,100.3,55.8,55.2,50.0,46.2,43.4,30.1,22.2,17.2.HRMS(ESI)forC₃₃H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:582.31871,Found:582.031856,RT＝0.11min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.42min,95.2％purity.

实施例26.化合物HMH5450153

合成方法参照实施例2。收率90％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.19(d,J＝8.3Hz,1H),7.68(br,1H),6.57-6.54(m,2H),6.32(d,J＝8.3Hz,1H),6.20(s,1H),5.54(t,J＝12.1Hz,1H,),4.33-4.31(m,1H),3.91(s,3H),3.23(t,J＝4.5Hz,4H),2.75(q,J＝10.7Hz,4H),2.65(br,4H),2.40(s,3H),2.37(s,3H),2.07(br,3H),1.95-1.94(m,7H),1.91(br,2H),1.75(br,6H),1.70-1.59(m,5H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ177.5,164.2,159.0,156.0,155.8,149.6,148.1,144.7,121.3,119.0,107.9,107.5,107.4,100.3,55.8,55.2,49.9,46.2,42.3,40.9,39.3,36.7,30.1,28.3,22.3,17.2.HRMS(ESI)for C₃₇H₄₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:640.39697,Found:640.39636,RT＝0.12min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝16.55min,96.7％purity.

实施例27.化合物HMH5450152

步骤1.将1-萘甲酸(112mg,0.7mmol)加入溶解于DMF(5ml)的HATU(228mg,0.6mmol)、DIEA(0.1ml,0.8mmol)溶液中，在室温下搅拌半小时，加入化合物14(239mg,0.5mmol)，在室温下搅拌2小时，点板检测反应，反应完全后，加入二氯甲烷稀释，水洗5遍去除DMF，取有机相，加入用无水硫酸钠干燥，然后抽滤旋干，柱层析分离(SiO₂,DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～10:1)得到黄色固体(70mg,产率77％).¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.59(s,1H),8.40(d,J＝8.5Hz,1H),8.22(s,1H),7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.86(d,J＝8.1Hz,1H),,7.75(d,J＝6.9Hz,1H),7.71(br,1H),7.57(t,J＝7.1Hz,1H),7.51(t,J＝7.5Hz,1H),6.74(d,J＝7.4Hz,1H),6.58-6.57(m,2H),6.13(s,1H),5.59(t,J＝11.6Hz,1H),4.65-4.63(m,1H),3.91(s,3H),3.24(br,4H),2.86(q,J＝11.9Hz,2H),2.65(t,J＝4.3Hz,4H),2.40(s,3H),2.33(s,3H),2.20(d,J＝13.6Hz,2H),1.84(q,J＝13.9Hz,2H),1.68(d,J＝12.0Hz,2H).¹³CNMR(125MHz,CDCl₃),δ169.2,164.2,159.0,156.0,155.8,148.2,144.8,134.8,133.9,130.7,130.5,128.4,127.2,126.4,125.7,125.3,125.1,121.3,118.9,107.9,107.5,100.3,55.8,55.3,53.5,50.0,46.2,43.8,30.4,22.8,17.2.HRMS(ESI)for C₃₇H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:632.33437,Found:632.33392,RT＝0.2min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.40min,99.2％purity.

实施例28.化合物HMH1320077

合成方法参照实施例2中化合物12的合成。收率68％.¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(s,1H),8.15(s,1H),7.60(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.21(s,1H),5.42(br,1H),3.90(s,3H),3.21(m,4H),2.92(m,2H),2.61(m,4H),2.37(s,3H),2.36(s,3H),1.82(m,2H),1.79(m,2H),1.49(d,J＝12Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ162.7,159.8,156.5,155.3,149.4,145.3,119.2,116.9,106.6,106.3,99.9,55.4,54.6,52.6,48.5,45.7,43.9,32.7,31.2,29.0,28.7,28.6,22.0,21.8,16.5,13.9.MS(ESI)m/z 478.3[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝23.76min,99.4％purity.

实施例29.化合物HMH1320095

合成方法参照实施例2。收率60％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.58(s,1H),8.15(s,1H),7.66(s,1H),6.56-6.51(m,2H),6.17(s,1H),5.46(m,1H),5.27(d,J＝8.8Hz,1H),4.0(br,1H),3.89(s,3H),3.19(t,J＝4.8Hz,4H),2.74(q,J＝12.4Hz,2H),2.59(t,J＝4.8Hz,4H),2.35(s,3H),2.34(s,3H),1.95(d,J＝13.2Hz,2H),1.65(t,J＝14.0Hz,2H),1.56(d,J＝12.0Hz,2H),1.44(s,9H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆),δ162.7,159.5,156.3,155.1,154.9,152.1,149.0,145.0,119.4,117.2,106.5,106.3,99.8,79.1,78.8,78.6,77.5,55.4,54.5,52.5,48.5,45.6,44.3,29.8,28.2,22.7,16.5.HRMS(ESI)for C₃₁H₄₃N₇O₄[M+H]⁺,Calcd:578.34493,Found:578.34562,RT＝3.39min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝14.53min,99.3％purity.

实施例30.化合物YL1310038

将化合物14(143.3mg,0.3mmol)溶解于无水二氯甲烷(15ml)，加入三乙胺(84μl,0.6mmol)，在冰浴下搅拌，加入甲磺酰氯(46μl,0.6mmol)。在冰浴下搅拌，薄层层析检测反应，反应完全后，旋干溶剂，柱层析分离(SiO₂,DCM/MeOH梯度洗脱，100:1～50:1)得到黄色固体(89mg,产率53％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆),δ8.69(s,1H),8.55(s,1H),7.62(s,1H),6.90(s,1H),6.65(s,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,1H),6.12(s,1H),5.23(s,1H),3.80(s,3H),3.56(s,1H),3.14(br,4H),2.93(s,3H),2.84(br,2H),2.47(m,4H),2.33(s,3H),2.23(s,3H),1.91(d,J＝12.9Hz,2H),1.51(br,2H),1.31(d,J＝11.3Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆),δ162.6,159.3,156.4,155.1,151.8,148.8,145.1,123.6,119.4,117.1,106.5,106.4,99.8,55.4,54.5,52.4,48.5,47.2,45.6,31.0,28.8,22.4,16.4.HRMS(ESI)for C₂₇H₃₇N₇O₄S[M+H]⁺,Calcd:556.27005,Found:556.26991,RT＝3.0min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝9.36min,97.9％purity.

实施例31.化合物YL1310046

合成方法参照实施例30。收率61％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆),δ8.68(s,1H),8.57(s,1H),7.90(d,J＝7.2Hz,1H),7.70(s,1H),7.65-7.56(m,4H),6.62(s,1H),6.49(d,J＝8.8Hz,1H),6.12(s,1H),5.16(br,1H),3.78(s,3H),3.11(br,4H),2.85-2.83(m,2H),2.42(br,4H),2.33(s,3H),2.21(s,3H),1.75(d,J＝12.8Hz,2H),1.36(br,2H),1.24(d,J＝10.4Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆),δ162.6,159.4,156.4,155.1,151.9,148.9,145.1,132.0,128.9,126.5,123.8,119.4,117.2,106.6,106.3,99.8,59.6,55.4,54.5,52.3,48.5,47.4,45.6,30.5,22.5,20.6,16.4,13.9.HRMS(ESI)for C₃₂H₃₉N₇O₄S[M+H]⁺,Calcd:618.2857,Found:618.28521,RT＝3.24min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝13.05min,98.6％purity.

实施例32.化合物HMH1320084

合成方法参照实施例8。收率11％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.18(d,J＝7.2Hz,1H),7.66(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.20(s,1H),5.49(s,1H),3.90(s,3H),3.20(t,J＝4.7Hz,4H),3.05(s,1H),2.80(q,J＝13.0Hz,2H,),2.61(t,J＝4.8Hz,4H),2.54(d,J＝6.8Hz,2H),2.37(s,3H),2.36(s,3H),2.32(br,3H),2.08(d,J＝13.2Hz,2H),1.61(t,J＝13.9Hz,2H),1.52(d,J＝12.3Hz,2H),1.11(m,1H),0.87(m,1H),0.55(d,J＝7.5Hz,2H),0.21(d,J＝3.2Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆),δ162.8,159.6,156.6,155.1,152.3,149.1,145.3,124.3,119.4,117.1,106.6,106.3,99.9,55.5,54.5,52.3,50.9,50.1,48.5,45.6,28.7,22.2,16.6,9.9,3.5.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₂[M+H]⁺,Calcd:532.33945,Found:532.33944,RT＝2.79min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝26.64min,96.3％purity.

实施例33.化合物HMH1320083

合成方法参照实施例8。收率21％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),8.21(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(s,1H),6.58-6.55(m,2H),6.19(s,1H),5.46(s,1H),3.91(s,3H),3.20(t,J＝5.0Hz,4H),3.12(s,1H),2.82-2.79(m,2H),2.61(t,J＝4.8Hz,4H),2.56-2.53(m,1H),2.37(s,3H),2.36(s,3H),1.99(d,J＝13.5Hz,2H),1.92(d,J＝11.5Hz,2H),1.74(m,2H),1.65-1.56(m,4H),1.49(d,J＝11.0Hz,2H),1.31-1.14(m,6H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.2,159.1,156.1,155.9,149.9,148.2,144.5,121.6,120.6,119.1,108.2,107.8,100.6,55.9,55.4,53.7,53.2,50.2,46.6,46.3,33.9,30.1,29.9,29.5,26.4,25.4,22.8,22.3,17.2.HRMS(ESI)for C₃₂H₄₅N₇O₂[M+H]⁺,Calcd:560.37075,Found:560.37162,RT＝2.86min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(80:10),RT＝23.25min,98.2％purity.

实施例34.化合物YL1310062

合成方法参照实施例2。收率78％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.50(s,1H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.71(s,1H),7.47(d,J＝9.3Hz,1H),6.58-6.54(m,2H),6.36(d,J＝9.3Hz,1H),6.23(s,1H),5.57(m,1H),4.36-4.34(m,1H),3.92(s,3H),3.21(t,J＝4.8Hz,4H),2.79-2.70(m,2H),2.61(t,J＝5.0Hz,4H),2.38(s,3H),2.30(q,J＝7.6Hz,2H),1.96(d,J＝13.0Hz,2H),1.72-1.68(m,2H),1.61(s,2H),1.22(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.5,159.0,158.6,155.9,149.8,148.3,135.8,121.1,120.4,119.4,107.8,106.9,100.2,58.4,55.9,55.3,49.9,46.3,42.7,31.7,31.6,30.2,30.1,29.8,22.2,18.6,14.2,10.2.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₃[M+H]+,Calcd:520.30306,Found:520.30446,RT＝2.98min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.21min,100％purity.

实施例35.化合物YL1310059

合成方法参照实施例2。收率88％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.67(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.66(s,1H),6.58-6.53(m,2H),6.28(s,1H),6.22(s,1H),5.59-5.53(m,1H),4.36-4.34(m,1H),3.92(s,3H),3.49(s,1H),3.21(t,J＝4.8Hz,4H),2.80-2.69(m,4H),2.61(t,J＝5.0Hz,4H),2.37(s,3H),2.31(q,J＝7.6Hz,2H),1.95(d,J＝14.2Hz,2H),1.72-1.67(m,2H),1.60(s,2H),1.31(t,J＝7.4Hz,3H),1.22(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.5,158.8,155.9,155.7,150.3,149.7,148.2,121.2,120.3,116.8,107.8,106.7,100.3,99.8,55.8,55.2,55.1,49.9,46.2,42.7,30.2,30.1,29.8,23.5,22.3,12.9,10.2.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:548.33437,Found:548.3341,RT＝3.15min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝12.51min,98.8％purity.

实施例36.化合物HMH1320175

合成方法参照实施例1。收率58％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.73(s,1H),8.19(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(s,1H),6.57-6.55(m,2H),6.26(s,2H),5.57(s,1H),4.35(s,1H),3.92(s,3H),3.26(br,4H),2.79-2.74(m,2H),2.71(br,4H),2.44(s,3H),2.31(q,J＝7.4Hz,2H),1.95(d,J＝12.8Hz,2H),1.69(d,J＝13.7Hz,2H),1.63(d,J＝15.8Hz,2H),1.32(s,3H),1.31(s,3H),1.23(t,J＝7.6Hz,3H)¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.7,158.7,156.0,155.6,154.9,149.7,148.2,121.2,120.4,114.7,107.9,106.2,100.3,55.8,55.2,52.7,49.9,46.1,42.7,30.2,30.1,27.6,22.3,10.2.HRMS(ESI)for C₃₁H₄₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:562.35002,Found:562.34874,RT＝1.19min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.84min,99.0％purity.

实施例37.化合物HMH1320158

合成方法参照实施例1。收率50％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.51(s,1H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.50(br,3H),7.43(br,2H),6.57-6.56(m,2H),6.32(s,1H),6.27(s,1H),5.63(br,1H),4.38(br,1H),3.92(s,3H),3.34(br,4H),2.90(br,4H),2.81(q,J＝13.8Hz,2H),2.57(s,3H),2.32(q,J＝7.2Hz,3H),1.99(d,J＝12.8Hz,4H),1.74-1.71(m,7H),1.23-1.22(m,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.7,164.0,158.3,149.7,147.4,135.4,129.5,129.0,128.8,122.2,118.6,108.9,100.7,55.9,54.7,49.2,42.8,30.3,30.2,29.8,22.8,22.3,14.3,10.2.HRMS(ESI)for C₃₄H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:596.32709,Found:596.33474.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝12.25min,98.4％purity.

实施例38.化合物HMH1320187

合成方法参照实施例2。收率63％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.45(s,1H),8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.65(s,1H),7.35(s,1H),6.57-6.53(m,2H),6.25(s,1H),5.57(m,1H),4.35-4.34(m,1H),3.91(s,3H),3.21(t,J＝4.7Hz,4H),2.77(q,J＝11.1Hz,2H),2.62(t,J＝4.8Hz,4H),2.37(s,3H),2.30(q,J＝7.6Hz,2H),2.16(s,3H),1.96(d,J＝13.8Hz,2H),1.78(s,6H),1.74-1.68(m,2H),1.61(d,J＝12.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.9,158.4,157.5,155.1,149.6,148.0,132.4,127.6,121.4,120.1,107.9,107.0,100.3,55.8,55.2,50.0,46.2,42.8,32.0,30.3,30.2,29.8,22.8,22.5,17.2,14.2,10.2.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:534.31871,Found:534.31825,RT＝1.2min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝10.54min,98.4％

实施例39.化合物HMH1320190

合成方法参照实施例2。收率78％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.48(s,1H),8.23(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.31(s,1H),6.57-6.55(m,2H),6.21(s,1H),5.57(t,J＝11.9Hz,1H),4.36-4.34(m,1H),3.91(s,3H),3.29(t,J＝4.4Hz,4H),2.81-2.78(m,2H),2.76(br,4H),2.57(q,J＝7.4Hz,2H),2.47(s,3H),2.30(q,J＝7.6Hz,2H),1.97(d,J＝13.3Hz,2H),1.71(t,J＝13.9Hz,2H),1.62(d,J＝12.1Hz,2H),1.25-1.20(m,6H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.5,158.4,157.7,154.9,149.5,147.6,133.2,130.6,121.9,120.0,108.4,107.1,100.5,55.9,55.0,49.7,45.8,42.8,30.4,30.2,23.4,22.6,12.5,10.2.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:548.33437,Found:548.33419,RT＝1.2min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(85:15),RT＝8.94min,98.5％

实施例40.化合物HMH5450187

合成方法参照实施例2。收率85％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.46(s,1H),8.21(d,J＝8.3Hz,1H),7.66(s,1H),7.36(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.39-6.38(m,1H),5.58(t,J＝12.5Hz,1H),4.37(br,1H),3.91(s,3H),3.23(t,J＝4.5Hz,4H),2.83(q,J＝12.8Hz,2H),2.67(br,4H),2.41(s,3H),2.17(s,3H),1.98(d,J＝13.3Hz,2H),1.72(d,J＝13.7Hz,2H),1.63(d,J＝12.0Hz,2H),1.50(br,1H),1.00-0.97(m,2H),0.76-0.73(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.1,164.9,158.4,157.5,155.1,149.6,147.9,132.4,127.6,121.5,120.1,108.0,107.0,100.3,55.8,55.2,53.5,49.9,46.1,43.0,30.4,29.8,22.5,17.2,15.1,7.3.HRMS(ESI)for C₃₀H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:546.31871,Found:546.31855,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.54min,100.0％

实施例41.化合物HMH5450185

合成方法参照实施例2。收率80％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.45(s,1H),8.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(s,1H),7.35(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.20(br,1H),5.57(t,J＝11.9Hz,1H),4.34(br,1H),3.91(s,3H),3.22(t,J＝4.4Hz,4H),2.77(q,J＝10.8Hz,2H),2.64(t,J＝4.5Hz,4H),2.46(q,1H,J＝6.8Hz),2.39(s,3H),2.16(s,3H),1.97-1.94(m,2H),1.70(t,J＝13.7Hz,2H),1.62(d,J＝11.8Hz,2H),1.63(d,J＝12Hz,H),1.22(s,3H),1.20(s,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ176.6,164.9,158.4,157.4,149.6,148.0,132.3,127.6,121.5,120.1,107.9,107.0,100.3,55.8,55.2,53.5,50.0,46.2,42.5,36.0,30.2,22.5,19.9,17.1.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₁N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:548.33437,Found:548.33308,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.48min,100.0％

实施例42.化合物HMH5450186

合成方法参照实施例2。收率80％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.44(s,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(s,1H),7.34(s,1H),6.57-6.55(m,2H),6.41(d,J＝7.8Hz,1H),5.58(m,1H),4.33-4.31(m,1H),3.91(s,3H),3.26(t,J＝4.6Hz,4H),2.81-2.74(m,2H),2.71(br,4H),2.44(s,3H),2.16(s,3H),1.95(d,J＝13.5Hz,2H),1.72(d,J＝13.8Hz,2H),1.63(d,J＝12Hz,2H),1.30(s,9H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ178.1,164.7,158.4,157.4,155.2,149.6,147.8,132.2,127.8,121.7,108.1,107.0,100.4,55.9,55.2,49.9,46.1,42.7,39.0,30.1,27.9,22.3,17.2.HRMS(ESI)for C₃₁H₄₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:562.35002,Found:562.34964,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.95min,100.0％

实施例43.化合物HMH5450184

合成方法参照实施例2。收率65％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.45(s,1H),8.21(d,J＝8.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.35(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.18(br,1H),5.57(m,1H),4.35-4.33(m,1H),3.91(s,3H),3.24(t,J＝4.7Hz,4H),2.78(q,J＝12.9Hz,2H),2.67(t,J＝4.5Hz,4H),2.62-2.6(m,1H),2.41(s,3H),2.17(s,3H),1.98-1.67(m,14H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ175.9,164.9,158.3,157.4,155.0,149.5,147.9,132.3,127.5,121.4,120.1,107.9,106.9,100.3,55.7,55.1,53.4,49.9,46.1,42.7,30.6,30.3,29.7,26.0,22.5,17.1.HRMS(ESI)for C₃₂H₄₃N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:574.35002,Found:574.34913,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.78min,97.5％purity.

实施例44.化合物HMH5450183

合成方法参照实施例2。收率68％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.43(s,1H),8.19(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.34(s,1H),6.56-6.52(m,2H),6.12(d,J＝7.5Hz,1H),5.56(m,1H),4.33(br,1H),3.89(s,3H),3.21(br,4H),2.76(q,J＝12.6,2H),2.63(br,4H),2.38(s,3H),2.15(s,3H),1.92(t,J＝15.6Hz,4H),1.79(d,J＝10.0Hz,2H),1.73-1.66(m,2H),1.60(d,J＝12.6Hz,2H),1.50(q,J＝12.0Hz,2H),1.32-1.24(m,4H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ175.7,164.9,158.3,157.4,155.0,149.5,147.9,132.3,127.5,121.4,120.1,107.9,106.9,100.3,55.8,55.8,55.1,53.4,49.9,46.1,45.8,42.5,30.3,29.8,25.8,22.5,17.1.HRMS(ESI)for C₃₃H₄₅N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:588.36567,Found:588.36393,RT＝0.1min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝13.08min,97.1％purity.

实施例45.化合物HMH5450182

合成方法参照实施例2。收率74％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.47(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H),7.97(d,J＝6.7Hz,2H),7.66(br,1H),7.52-7.46(m,3H),7.37(br,1H),6.98(br,1H),6.59-6.57(m,2H),5.69-5.63(m,1H),4.60-4.58(m,1H),3.91(s,3H),3.29(br,4H),2.88(q,J＝12.5Hz,2H),2.74(br,4H),2.46(s,3H),2.18(s,3H),2.10(d,J＝14Hz,2H),1.81(t,J＝13.6Hz,3H),1.70(d,J＝12Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ167.0,164.8,158.4,157.5,155.1,149.6,147.9,135.1,132.3,131.4,128.7,127.7,127.3,121.6,108.1,107.0,100.4,55.8,55.1,49.9,46.0,43.4,30.2,29.8,22.3,17.1.HRMS(ESI)for C₃₃H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:582.31871,Found:582.3162,RT＝0.1min.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.57min,97.1％purity.

实施例46.化合物HMH5450181

合成方法参照实施例2。收率68％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.45(s,1H),8.22(s,1H),7.66(br,1H),7.51(br,1H),7.35(s,1H),7.15(d,J＝3.4Hz,2H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),6.57-6.55(m,2H),6.49(br,1H),5.60(br,1H),4.51-4.49(m,1H),3.89(s,3H),3.24(m,4H),2.90(d,J＝9.6Hz,2H),2.67(m,4H),2.40(s,3H),2.17(s,3H),2.08(d,J＝13Hz,2H),1.95(br,2H),1.80(q,J＝13.9Hz,2H),1.67(d,J＝12Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.9,158.4,158.0,157.4,155.1,149.7,148.2,144.2,132.4,127.6,121.5,114.1,112.0,108.0,107.0,100.3,55.8,55.1,53.5,49.8,46.0,42.9,30.4,29.8,22.7,17.1.HRMS(ESI)for C₃₁H₃₇N₇O₄[M+H]⁺,Calcd:572.29798,Found:572.29568,RT＝0.11min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.85min,97.8％purity.

实施例47.化合物HMH5450190

合成方法参照实施例2。收率71％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ9.53(s,1H),8.46(s,1H),8.22(d,J＝7.6Hz,1H),7.66(br,1H),7.37(s,1H),6.98(br,1H),6.93(br,2H),6.58-6.55(m,2H),6.29(br,1H),5.66(br,1H),4.56-4.54(m,1H),3.91(s,3H),3.25(t,J＝4.7Hz,4H),2.84(q,J＝12.9Hz,2H),2.68(t,J＝4.7Hz,4H),2.42(s,3H),2.20(s,3H),2.03(d,J＝13.0Hz,2H),2.03(d,J＝12.9Hz,2H),1.78(d,J＝13.5Hz,2H),1.69-1.66(m,2H).¹³CNMR(125MHz,CDCl₃),δ164.7,160.7,158.4,157.5,155.0,147.9,132.3,127.6,126.6,121.6,121.2,110.0,109.9,108.1,107.0,100.4,55.8,55.2,49.9,46.1,42.7,30.2,29.8,22.0,17.1.HRMS(ESI)for C₃₁H₃₈N₈O₃[M+H]⁺,Calcd:571.31396,Found:571.31346,RT＝0.09min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.64min,97.3％purity.

实施例48.化合物HMH5450192

合成方法参照实施例2。收率65％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.67(d,J＝8.2Hz,1H),8.44(s,1H),8.22(d,J＝6.7Hz,1H),7.84(t,J＝7.6Hz,1H),7.63(br,1H),7.34(s,1H),6.59-6.56(m,2H),5.58(br,1H),4.51(br,1H),3.90(m,2H),3.28(m,4H),3.00(br,1H),2.70(m 4H),2.44(s,3H),2.18(s,3H),1.85(t,J＝14.5Hz,2H),1.68(d,J＝11.3Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.8,157.5,150.3,148.5,137.3,132.4,126.0,122.2,107.9,100.3,55.2,49.9,46.2,43.5,30.6,29.8,23.1,17.3.HRMS(ESI)for C₃₂H₃₈N₈O₃[M+H]⁺,Calcd:583.31396,Found:583.31383,RT＝0.09min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.2min,99.8％purity.

实施例49.化合物HMH5450189

合成方法参照实施例2。收率60％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.46(s,1H),8.20(s,1H),7.65(br,1H),7.36(s,1H),6.57-6.54(m,2H),6.29(br,1H),5.58(br,1H),4.43(br,1H),3.91(s,3H),3.25(m,4H),2.79(q,J＝11.2Hz,2H),2.69(m,4H),2.43(s,3H),2.16(s,3H),1.96(m,2H),1.72(t,J＝14.1Hz,2H),1.62(d,J＝12.3Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ164.8,160.8,158.5,157.6,132.5,107.8,107.0,100.3,55.8,55.2,52.9,49.9,46.2,41.9,30.1,29.8,22.1,17.1.HRMS(ESI)for C₃₂H₃₈N₈O₃[M+H]⁺,Calcd:583.31396,Found:583.30877,RT＝0.14min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝8.2min,100％purity.

实施例50.化合物HMH1198008

步骤1.将乙二醇甲醚(4.7ml,60mmol)溶解于无水四氢呋喃(60ml)中，冷却至-20℃，加入钠碎(138mg,6mmol)，于-20℃搅拌至钠完全消失。加入丙烯酸叔丁酯(2.9ml,20mmol)，缓慢升至室温，点板检测反应。反应完全后，加入水淬灭反应。旋干四氢呋喃后加入乙酸乙酯萃取，取有机相，加入无水硫酸钠干燥，然后抽滤旋干，柱层析分离(SiO₂,PE/EA梯度洗脱，20:1～10:1)得到化合物15(无色液体，1.69g,产率41％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ3.72(t,J＝6.5Hz,2H),3.61(q,J＝2Hz,2H),3.53(q,J＝2Hz,2H),3.38(s,3H),2.52(t,J＝6.5Hz,2H),1.45(s,9H).

步骤2.将化合物15(150mg,0.73mmol)溶解于二氯甲烷(2ml)中，加入三氟乙酸(1ml)，在室温下搅拌30分钟，点板检测，反应完后旋干直接用于下一步反应。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ3.79(m,2H),3.66(m,2H),3.63(m,2H),3.43(s,3H),2.68(t,J＝8Hz,3H).

步骤3.合成方法参照实施例27.收率82％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),.δ8.43(s,1H),8.21(s,1H),7.66(s,1H),7.33(s,1H),6.95(d,J＝7.8Hz,2H),6.57-6.53(m,2H),5.54(m,1H),4.31(br,1H),3.90(s,3H),3.81(t,J＝5.9Hz,2H),3.71(br,,2H),2.59(br,4H),3.35(s,3H),3.23(t,J＝4.8Hz,2H),2.80(m,2H),2.66(t,J＝4.8Hz,2H),2.58(t,J＝5.9Hz,2H),2.40(s,3H),2.14(s,3H),1.99(d,J＝11.9Hz,2H),1.71(t,J＝13.8Hz,2H),1.59(d,J＝11.7Hz,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ171.1,164.6,158.4,157.4,155.2,147.8,132.2,127.7,121.7,108.2,100.5,72.0,70.5,67.7,59.0,55.8,55.1,53.7,49.8,46.0,43.2,37.4,30.4,29.8,22.8,17.2.MS(ESI)m/z 608.4[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝14.62min,95.4％purity.

实施例51.化合物HMH5450134

合成方法参照实施例2。收率45％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),7.47(d,J＝8.7Hz,1H),6.93(d,J＝8.9Hz,2H),6.24(br,1H),6.19(s,1H),5.5(t,J＝11.7Hz,1H),4.31-4.30(m,1H),3.19(m,4H),2.72(q,J＝12.1Hz,2H),2.59(m,4H),2.36(s,6H),2.28(q,J＝7.4Hz,2H),1.93(d,J＝13.0Hz,2H),1.64(d,J＝13.8Hz,2H),1.58(d,J＝14Hz,2H),1.20(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.1,159.2,156.0,155.6,147.9,144.8,131.0,121.6,118.8,116.5,107.5,55.0,49.5,46.1,42.6,30.0,22.3,17.1,10.1.HRMS(ESI)for C₂₈H₃₇N₇O₂[M+H]⁺,Calcd:504.30815,Found:504.30775,RT＝1.17min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝7.98min,100％purity.

实施例52.化合物HMH1198078

合成方法参照实施例2。收率63％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.60(s,1H),7.63(br,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),6.92(d,2H,J＝8.4Hz),6.41(d,2H,J＝7.4Hz),6.18(s,1H),5.49(m,1H),4.30(s,1H),3.77(br,2H),3.63(br,2H),3.14(m,2H),3.10(m,2H),2.72(q,J＝13.0Hz,2H),2.35(s,3H),2.28-2.24(m,2H),2.14(s,3H),1.92(d,J＝12.6Hz,2H),1.63(d,J＝13.8Hz,2H),1.57(d,J＝13.1Hz,2H),1.18(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.6,169.2,164.2,159.2,156.1,155.7,147.6,144.9,132.0,121.6,119.0,117.6,117.4,107.7,52.8,50.5,50.3,50.0,46.3,42.7,41.5,30.1,22.4,21.4,17.2,10.2.MS(ESI)m/z 554.6[M+Na]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝8.29min,97.4％purity.

实施例53.化合物HMH1198070

合成方法参照实施例2。收率75％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.65(s,1H),7.34(s,1H),7.27(br,1H),7.00(s,1H),6.73-6.70(m,1H),6.28(s,1H),6.23(s,1H),5.52(m,1H),4.32(s,1H),3.28(t,J＝4.8Hz,3H),2.77-2.70(m,2H),2.66(t,J＝4.8Hz,3H),2.41(s,3H),2.39(s,3H),2.29-2.27(m,2H),1.92(d,J＝14.0Hz,2H),1.68-1.65(m,2H),1.60-1.56(m,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.4,164.0,159.1,156.0,155.6,152.1,144.7,139.6,129.4,129.2,119.1,111.7,111.6,110.8,108.0,107.8,106.9,55.0,52.3,49.1,49.0,46.1,45.9,42.6,30.0,29.8,28.4,27.9,22.1,21.1,20.7,17.1,10.1.MS(ESI)m/z 504.7[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.21min,95.3％purity.

实施例54.化合物HMH5450122

合成方法参照实施例2。收率65％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.64(s,1H),7.29(s,1H),7.20(d,J＝7.4Hz,1H),7.07(s,1H),6.93(d,J＝8.5Hz,1H),6.27(br,1H),6.21(s,1H),5.51(m 1H),4.32(m,1H),3.88(s,3H),3.09(br,4H),2.72(q,J＝12.9Hz,2H),2.64(br,4H),2.38(s,3H),2.36(s,3H),2.29(q,J＝7.5Hz,2H),1.93(m,2H),1.65-1.56(m,4H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.3,164.1,159.2,156.0,155.7,152.6,144.7,137.9,133.9,119.1,118.3,112.9,107.8,105.3,55.7,55.3,52.0,50.8,46.2,42.5,30.1,29.7,21.9,17.2,10.1.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₃[M+H]⁺,Calcd:534.31871,Found:534.31838,RT＝1.17min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝8.43min,99.2％purity.

实施例55.化合物HMH1198074

合成方法参照实施例2。收率48％.¹H NMR(500MHz,CDCl₃),δ8.64(s,1H),7.75(d,J＝13.7Hz,1H),7.32(s,2H),7.02(d,J＝7.8Hz,2H),6.94(t,J＝9.0Hz,2H),6.24-6.21(m,2H),5.52(m,1H),4.33(s,1H),3.13(br,4H),2.74(q,J＝12.3Hz,2H),2.66(br,4H),2.39(s,6H),2.30(q,J＝7.2Hz,2H),1.94(d,J＝13.3Hz,2H),1.71(t,J＝14.1Hz,2H),1.60(d,J＝12.8Hz,2H),1.22(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ172.7,162.7,158.3,156.6,155.5,155.1,153.5,145.2,134.8,134.7,134.4,119.2,117.9,115.4,107.5,107.4,106.9,59.7,54.5,50.1,45.5,43.1,40.0,39.8,39.7,39.5,39.3,39.2,39.0,31.2,29.8,29.6,28.9,28.5,22.9,20.7,16.6,14.0,10.1.MS(ESI)m/z 522.6[M+H]⁺.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.23min,95.6％purity.

实施例56.化合物HMH5450123

合成方法参照实施例2。收率58％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.59(s,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),6.93(s,1H),6.82-6.79(m,2H),6.27(br,1H),6.17(s,1H),5.42(m 1H),4.27(m,1H),3.20(m,4H),2.71(q,J＝12.0Hz,2H),2.60(m,4H),2.36(s,6H),2.30(s,3H),2.28-2.24(m,2H),1.88(d,J＝13.2Hz,2H),1.59-1.51(m,4H),1.19(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.4,164.2,160.2,156.3,155.8,149.1,144.9,128.9,125.0,118.9,118.2,114.2,107.6,55.2,52.2,49.2,46.2,42.7,30.2,29.9,22.3,18.7,17.2,10.2.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₂[M+H]⁺,Calcd:518.3238,Found:518.32366,RT＝1.18min.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.29min,95.3％purity.

实施例57.化合物HMH5450128

合成方法参照实施例2。收率49％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.62(s,1H),7.58(s,1H),7.49(s,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,2H),7.02(d,J＝8.5Hz,2H),6.29(br,1H),6.20(s,1H),5.53(m 1H),4.31(br,1H),2.93(br,4H),2.73(q,J＝13.2Hz,2H),2.59(br,4H),2.36(s,6H),2.33(s,3H),2.28(m,2H),1.92(d,J＝12.6Hz,2H),1.67-1.57(m,4H),1.19(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.4,163.9,158.9,155.8,155.5,147.5,144.6,133.8,133.2,122.7,119.2,118.8,118.3,107.4,55.4,52.2,51.7,46.0,42.4,29.8,29.7,21.9,18.0,17.0,9.9.HRMS(ESI)for C₂₉H₃₉N₇O₂[M+H]⁺,Calcd:518.3238,Found:518.32338,RT＝1.16min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝10.73min,100％purity.

实施例58.化合物HMH5450133

合成方法参照实施例2。收率48％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.65(s,1H),8.28(d,J＝8.1Hz,1H),7.83(s,1H),6.88-6.84(m,2H),6.22(s,2H),5.56(m,1H),4.35(br,1H),3.91(s,3H),2.99(d,J＝10.8Hz,2H),2.75(q,J＝14.0Hz,2H),2.50(m,1H),2.39(s,3H),2.34(s,3H),2.31-2.27(m,2H),2.07(t,J＝10.9Hz,2H),1.96(d,J＝13.4Hz,2H),1.86-1.78(m,6H),1.69(d,J＝14.0Hz,2H),1.62(d,J＝15.0Hz,2H),1.22(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.3,164.1,158.8,156.0,155.6,148.5,144.8,141.8,126.3,119.1,119.0,118.8,108.8,107.7,56.3,55.7,46.5,42.6,41.9,33.7,30.1,30.0,30.1,30.0,22.2,17.1,10.1.HRMS(ESI)for C₃₀H₄₀N₆O₃[M+H]⁺,Calcd:533.32347,Found:533.32355,RT＝1.18min.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝20.36min,100％purity.

实施例59.化合物HMH1198083

合成方法参照实施例2。收率51％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.63(s,1H),8.22(d,J＝8.8Hz,1H),7.71(s,1H),6.60(br,1H),6.55(d,J＝8.6Hz,1H),6.26-6.24(m,1H),6.20(s,1H),5.55(m,1H),4.35-4.34(m,1H),3.92(br,4H),3.91(m,2H),3.17(m,4H),2.79-2.70(m,2H),2.38(s,1H),2.30(q,J＝7.6Hz,2H),1.95(d,J＝13.1Hz,2H),1.69(d,J＝14.0Hz,2H),1.62(d,J＝15.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.2,158.9,156.0,155.8,149.7,147.8,144.9,121.8,120.2,119.0,107.6,100.1,66.9,55.8,52.8,50.4,42.7,30.2,29.8,22.4,17.2,10.2.MS(ESI)m/z 521.9[M+H]⁺.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝9.23min,99.0％purity.

实施例60.化合物HMH1198086

合成方法参照实施例2。收率44％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.63(s,1H),8.13(d,J＝8.9Hz,1H),7.39(s,2H),6.81-6.73(m,2.5H),6.55(s,0.5H),6.36(s,0.3H),6.26-6.22(m,1.8H),5.48(m 1H),4.32(m,1H),3.23(m,4H),2.73(q,J＝12.8Hz,2H),2.64(m,4H),2.39(s,3H),2.38(s,3H),2.30(q,J＝7.6Hz,2H),1.94(d,J＝12.3Hz,2H),1.67-1.58(m,4H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.2,159.1,156.2,155.8,148.3,144.9,142.3,123.0,122.8,119.4,118.7,116.6,114.5,113.2,108.1,107.8,55.0,522.8,49.5,49.2,46.1,42.7,42.4,30.2,30.1,29.8,28.3,28.3,22.4,20.9,17.3,10.2,10.1.MS(ESI)m/z 570.6[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝7.77min,97.0％purity.

实施例61.化合物HMH1198077

合成方法参照实施例2。收率74％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(s,1H),6.56-6.51(m,2H),6.33-6.31(m,1H),6.18(s,1H),5.55(m,1H),4.34-4.32(m,1H),4.12(q,J＝7.0Hz,2H),3.19(t,J＝4.6Hz,4H),2.78-2.68(m,2H),2.60(t,J＝4.9Hz,4H),2.36(s,6H),2.29(q,J＝7.6Hz,2H),1.94(d,J＝13.4Hz,2H),1.70-1.59(m,4H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H),1.20(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.2,158.8,156.0,155.7,148.9,148.0,144.9,121.3,120.2,118.7,107.8,107.3,101.2,64.4,55.2,55.1,52.9,50.2,49.8,46.1,42.7,30.2,30.1,29.7,28.2,22.4,17.2,10.1.MS(ESI)m/z 548.6[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝5.77min,95.6％purity.

实施例62.化合物HMH1198084

合成方法参照实施例2。收率71％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.61(s,1H),8.22(d,J＝8.6Hz,1H),7.73(s,1H),6.58-6.54(m,2H),6.28-6.27(m,1H),6.19(s,1H),5.56(m,1H),4.61(m,1H),4.35(m,1H),3.20(br,4H),2.74(q,J＝13.3Hz,2H),2.64(br,4H),2.39(s,6H),2.38(s,6H),2.29(q,J＝7.4Hz,2H),1.96(d,J＝2.5Hz,2H),1.68-1.60(m,4H),1.41(s,3H),1.39(s,3H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.2,158.8,156.0,155.7,148.9,147.9,147.7,144.9,122.3,120.2,118.8,108.2,107.4,103.0,71.6,55.1,52.9,50.2,49.8,46.1,42.7,30.2,30.1,29.7,28.3,22.3,20.8,17.2,10.1.MS(ESI)m/z 562.6[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝11.71min,96.2％purity.

实施例63.化合物HMH1198085

合成方法参照实施例2。收率48％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.59(s,1H),7.07-70.3(m,2H),6.74(d,J＝8.5Hz,2H),6.26(br,2H),6.16(s,1H),5.47(m 1H),4.32(m,1H),4.06(m,4H),3.64(s,1H),3.14(br,4H),2.73(q,J＝11.2Hz,2H),2.35(s,3H),2.30(d,J＝7.4Hz,2H),1.93(d,J＝12.0Hz,2H),1.65-1.56(m,4H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H).³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.3,164.3,160.4,155.9,155.6,144.9,143.3,138.8,128.1,125.9,123.8,123.4,121.6,118.6,118.2,115.6,115.6,115.5,114.5(q,J＝29.5Hz),106.2,51.9,50.9,44.1,42.6,30.1,29.9,22.7,22.0,17.1,10.1.MS(ESI)m/z 558.3[M+H]⁺.HPLCanalysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝8.49min,95.7％purity.

实施例64.化合物HMH1198090

合成方法参照实施例2。收率64％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ8.59(s,1H),7.80(d,J＝2.6Hz,1H),7.25-7.22(m,1H),6.24(br,1H),6.53(d,J＝8.8Hz,1H),6.25(s,1H),6.15(s,1H),5.47(m,1H),4.32-4.30(m,1H),4.05(t,J＝4.7Hz,4H),3.11(t,J＝5.0Hz,4H),2.78-2.68(m,2H),2.35(s,6H),2.29(q,J＝7.6Hz,2H),1.93(d,J＝13.0Hz,2H),1.64-1.56(m,4H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃),δ173.5,164.4,160.5,156.0,155.8,153.6,145.0,140.5,137.4,129.9,118.3,109.5,106.3,52.0,51.1,44.2,42.7,30.2,30.0,22.2,17.2,10.2.MS(ESI)m/z 491.4[M+H]⁺.HPLC analysis:MeOH-H₂O(90:10),RT＝7.43min,97.1％purity.

实施例65.嘧啶并吡啶酮类化合物对TTK激酶IC₅₀测试

使用Elisa技术测试TTK激酶的IC₅₀，并以阳性药BAY-1217389作为参照。

激酶活性检测：应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术。

化合物配制：

待测试的化合物离心5分钟，加入DMSO配制成10mM储液，涡旋均匀后超声10分钟待用，-40℃保存。测试时将化合物用DMSO从储液稀释到测试所需浓度。

试验方法：

本实验采用Abnova公司提供的人源TTK激酶筛选试剂盒(货号KA0079)

进行检测，具体操作如下：

1.配置测试所需的ATP溶液和激酶缓冲液，在96孔板中每孔加入10μL受试样品和90μL激酶缓冲液，每个样品和对照样品均设置两个复孔，密封后30℃反应1小时。

2.用洗脱液对测试孔洗脱5次，彻底除去洗液。

3.在测试孔中每孔加入100μL辣根过氧化酶偶联的检测抗体TK-21B，密封室温孵育1小时，然后弃去反应液。

4.再次用洗脱液对测试孔洗脱5次，弃去洗液。

5.在测试孔中每孔加入100μL底物试剂，室温孵育5-15分钟。

6.在测试孔中每孔加入100μL终止溶液(按照底物加入的先后顺序进行)。

7.使用EnVision Multilabel Reader(Perkin Elmer)检测450nm或540nm条件下的发射光强度。

8.利用GraphPadPrism 4进行数据分析和处理。结果见表1。

表1化合物编号以及对应激酶活性结果。

实施例66.嘧啶并吡啶酮类化合物对TTK激酶亲和力(K_d值)测试

对嘧啶并吡啶酮类化合物进行了TTK激酶亲和力测试，并以BAY-1217389作为阳性参照。

K_d值测试由Eurofins DiscoverX公司完成。

实验原理：

通过竞争性结合试验定量测量化合物与另一个固定配体竞争的能力。如图1(Lockhart,D.J.等Nat.Biotechnol,23(3):329-336.)所示该方法包括三部分：DNA标记的激酶、待测化合物和固定的配体。待测化合物的竞争能力则通过DNA标签的定量PCR进行衡量。

实验流程：

本实验使用源自BL21菌株的大肠杆菌表达T7噬菌体标记的激酶。将T7噬菌体转染进入对数生长期的大肠杆菌中，32℃震荡培养直到其裂解。将裂解液以6,000转离心力进行离心，过滤除去细胞碎片。将上清液中的激酶置于HEK293细胞中培养扩增，随后用DNA标记用于qPCR检测。在室温下将用链霉亲和素包被的磁珠用生物素标记的小分子配体处理30分钟，从而产生对激酶具有亲和力的树脂。配体小珠用过量的生物素进行封闭，并用阻断缓冲液[含SeaBlock(Pierce)、1％BSA、0.05％Tween20和1mM DTT]洗涤，除去未结合的配体，并减少非特异性的结合。把激酶、配体结合的磁珠和待测化合物一起加入到结合缓冲液(含20％SeaBlock、0.17×PBS、0.05％Tween20和6mM DTT)进行结合性实验。所有的反应都在96孔板中进行，将孔板置于室温震荡反应1小时，再用缓冲液(含1×PBS和0.05％Tween 20)洗涤亲和小珠。再将磁珠重新溶于缓冲液(含1×PBS、0.05％Tween20和0.5μM非生物素标记的亲和配体)，在室温下震荡30分钟，洗出液中的激酶浓度用qPCR来进行测定。通过测定不同浓度下的待测化合物所对应的激酶浓度，解离常数(K_d)可通过希尔方程作出的标准剂量-响应曲线得出：

希尔系数值取-1；

使用Levenberg-Marquardt算法拟合非线性最小二乘曲线，来计算K_d值。结果见表2。

表2化合物编号以及对应Kd值结果。

从表1和表2数据可以看出，本发明的嘧啶并吡啶酮类化合物有很好的TTK激酶抑制活性，大部分化合物的TTK激酶亲和力K_d值都小于1nM。

实施例67.嘧啶并吡啶酮类化合物的对肿瘤细胞的体外增殖抑制作用

化合物对人肺癌细胞NCI-H460以及人结直肠癌COLO-205，HCT-116细胞的增殖抑制作用以CCK-8细胞计数试剂盒(B34306,Bimake)检测，并选取BAY-1217389作为阳性参照。

具体步骤如下：处于对数生长期的肿瘤细胞按3000细胞/孔的密度接种至含有10％牛胎儿血清(BI)和青霉素-链霉素溶液(100units/ml的青霉素和100units/ml链霉素的牛胎儿血清)的96孔培养板中培养过夜后，加入不同浓度(0.000508-10μM)的化合物作用72小时，并设定溶剂对照孔和空白孔。待化合物作用细胞72小时后，化合物对细胞增殖的影响采用CCK-8细胞计数试剂盒(B34306,Bimake)检测，每孔加入10μL CCK-8试剂，置于37℃培养箱中放置2-4小时后，用全波长式微孔板酶标仪SpectraMax 190读数，测定波长450nm下的吸光度(O.D.值)。

采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：

抑制率(％)＝(OD对照孔-OD给药孔)/(OD对照孔-OD空白孔)×100％

IC₅₀值采用Graph Prism 5.0软件以四参数法回归求得。结果如表3所示。可以看到，本发明的嘧啶并吡啶酮类化合物能够有效抑制人肺癌细胞NCI-H460以及人结直肠癌COLO-205，HCT-116细胞的增殖，大部分化合物的IC₅₀小于1μM，且IC₅₀与化合物对TTK蛋白的体外活性IC₅₀/K_d值的趋势基本吻合。

表3化合物的细胞增殖抑制结果

实施例68.嘧啶并吡啶酮类化合物对HCT-116人结直肠癌肿瘤细胞中凋亡相关蛋白等蛋白的影响。

使用常规Western Blot(免疫印迹法)，其包括四个步骤：样品制备；电泳分离；蛋白的膜转移；免疫杂交与显色(蛋白检测)。

样品制备

1.将HCT-116细胞以合适密度接种到6孔板中，培养24小时，使其细胞汇合度达到80％左右，分别加入相应浓度的含药培养基，共培养48小时；

2.在预定的时间点，弃去培养基，用4℃预冷过的PBS清洗孔板两遍，洗去残留液体；

3.加入1x SDS样品缓冲液(CST推荐，6孔板，300μL)，用细胞刮刀将皿中的细胞全部刮下，转移到1.5mL EP管中，冰上操作；

4.细胞裂解液用超声处理10-15秒，切断DNA以降低样品的粘性；

5.煮沸样品5min；

6.在4℃下，离心12000g,5min，取上清,储存于-20℃或-80℃，用于蛋白免疫印迹分析；

蛋白样品的检测

1.电泳分离：使用8％～12％的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶，上样15-20μL，90v电泳上层胶，120v电泳下层胶。

2.装配转移三明治：将聚丙烯酰胺凝胶浸置于转移缓冲液中平衡10min。依据聚丙烯酰胺凝胶的大小剪取PVDF膜(Mili pore)和滤纸6片，放入转移缓冲液中平衡10min。PVDF膜需用甲醇浸泡3-5秒。按海绵→3层滤纸→胶→膜→3层滤纸→海绵的顺序放好，确保没有气泡。

3.转膜：将转移槽置于冰浴中，放入三明治，确保将胶面对着负极，PVDF面对着正极。加入1x转膜缓冲液，恒压，根据需要检测的蛋白分子量大小，110V转膜0.5-2h。

4.封闭：转膜结束后取出PVDF膜，用封闭液(1×TBS，含0.5％Tween-20和5％脱脂奶粉)进行封闭，水平摇床缓慢摇动2h。

5.孵育一抗：封闭完毕，1:200～1:1000稀释一抗(抗体p-Histone H3(S10)，Cleaved-PARP，Caspase3，GAPDH等)。将PVDF膜与抗体在湿盒中于4℃孵育过夜，使抗体与目的蛋白充分结合。

6.孵育二抗：将PVDF膜取出，1×TBST洗膜4次，每次5min。1×TBST溶液配制5％脱脂奶粉溶液，将辣根过氧化物酶(HRP,sigma)标记的二抗稀释1000倍，PVDF膜放入湿盒中，室温孵育2h。用1×TBST洗涤4次，每次10min。

7.显影：PVDF膜上的条带通过用ECLWestern Blotting Detection Kit(ThermoScientific,USA)按照说明书进行化学发光。用TBST清洗PVDF膜，均匀滴加显影液后，使用Amersham Imager 600system(GE,America)显影。如下图2所示。

从图2中可以看到，化合物HMH5450151可以剂量依赖性诱导细胞凋亡相关蛋白caspase 3,caspase 9,polyADP-ribose polymerase(PARP)的激活。而化合物对Phosphorylated histone H3的剂量依赖性抑制也说明了化合物对纺锤丝检验点(SAC)的阻滞作用。这些能够说明化合物HMH5450151通过对TTK功能的抑制进而阻滞SAC，最终造成细胞凋亡。

实施例69.嘧啶并吡啶酮类化合物诱导HCT-116人结直肠癌肿瘤细胞有丝分裂染色体的异常分配

使用免疫荧光实验(Immunofluorescence Microscopy Assay)检测化合物对细胞有丝分裂中染色体分配的影响，实验中，着丝粒经抗CENP-B抗体免疫后被染成绿色，纺锤体经抗β-tubulin抗体免疫后被染成红色，而细胞核则被DAPI染成蓝色。

将HCT-116细胞接种到事先置于4孔小室(627870,Greiner)上，然后用加或不加不同浓度待测化合物(111.1，333.3nM)处理24小时。室温下，使用4％的甲醛溶液固定15分钟。PBST洗涤，0.5％Triton x 100处理10分钟，并用含3％羊血清蛋白的PBS溶液封闭1小时。然后，用β-tubulin(2146S,CST)和CENP-B(SC-376283,SantaCruz)抗体在室温下孵育1小时。然后，用β-tubulin(2146S,CST)和CENP-B(SC-376283,SantaCruz)抗体在室温下孵育1小时。然后用PBST洗涤并用Alexa Fluor 667标记的兔二抗(ab97077,abcam)和Alexa Fluor528标记的鼠二抗(ab6785,abcam)在室温避光条件下共同孵育一小时，细胞核用ProLongGold antifade reagent(P36931；Invitrogen,USA)染色5分钟，使用激光扫描共焦显微镜(Zeiss710；Germany)观察并拍照记录细胞样品。结果如图3所示，HMH5450151能够剂量依赖性地诱导HCT-116细胞有丝分裂中染色体的异常分配。

实施例70.嘧啶并吡啶酮类化合物诱导HCT-116人结直肠癌肿瘤细胞非整倍性的增加

使用流式细胞技术检测细胞DNA含量来判断细胞非整倍性情况，用不同浓度的化合物处理HCT-116细胞48小时后，收集细胞，用PBS冲洗2次，取大约6×10⁵细胞重新悬浮于150μL的BD细胞固定/细胞周期缓冲液(#554722,BD)中，于4℃处理20分钟。取细胞，用BDPerm/Wash缓冲液(#554723,BD)清洗2次，并在4℃条件下避光孵育于200μL的染色缓冲液中(含0.1mg/ml碘化丙啶，2mg/ml核糖核酸酶A)，20分钟后用Guava easyCyte流式细胞仪(Merck,Whitehouse Station,NJ,USA)分析。结果如图4，可以看到，经过化合物HMH5450151处理后，HCT-116细胞的DNA含量异常增加，即剂量依赖性地加重了肿瘤细胞的非整倍性。

实施例71.嘧啶并吡啶酮类化合物抑制HCT-116人结直肠癌肿瘤细胞的克隆形成

将HCT-116细胞以合适密度(800/孔)铺板在六孔板中，同时，添加不同浓度HMH5450151处理。七天后，去掉培养基，添加含0.25％结晶紫的甲醇溶液，室温下染色30分钟，自来水冲洗干净孔中的结晶紫溶液，显微镜下拍照并统计单克隆数。结果如图5所示。可以看到，化合物HMH5450151能够剂量依赖性地抑制HCT-116细胞的克隆形成，在100nM浓度下即可明显抑制克隆形成。

实施例72.嘧啶并吡啶酮类化合物诱导HCT-116人结直肠癌肿瘤细胞的凋亡

实验通过使用AnnexinV以及7-ADD对细胞进行染色后使用流式细胞技术分析细胞凋亡/死亡情况。具体操作如下；

用不同浓度的化合物处理HCT-116细胞48小时后，收集细胞，用先用冰预冷的PBS冲洗2次，取大约6×10⁵细胞重新悬浮于100μL的BD细胞结合缓冲液(#556554,BD)中，并用Annexin V-PE(#556422,BD)和7-ADD(#559925,BD)避光孵育15分钟。最后加入400μL1×BD细胞结合缓冲液，随用Guava easyCyte流式细胞仪(Merck,Whitehouse Station,NJ,USA)分析结果。结果如图6，可以看到化合物HMH5450151能够剂量依赖性诱导肿瘤细胞的死亡/凋亡。使用111.1，333.3，1000nM化合物处理的细胞中死亡/晚期凋亡的比例分别为5.30％，13.81％以及21.18％；而早期凋亡的细胞比例分别为4.46％，13.50％以及18.81％。

实施例73.嘧啶并吡啶酮类化合物的体内药代动力学性质测试

本实施例以化合物HMH5450151和化合物HMH5450183为例，测试嘧啶并吡啶酮类化合物的体内药代动力学性质，并且以专利WO2019015593A1中的化合物580152作为对照。化合物580152的结构式如下：

将化合物以1.0和2.5mg/ml的浓度溶解于混合溶剂(5％DMA、10％Solutol、85％Saline)中，分别供口服和静脉注射使用。以5mg/kg的剂量给SD大鼠(每组3只)注射待测药物。分别在注射药物后0.083hr,0.25hr,0.5hr,1hr,2hrs,4hrs,6hrs,8hrs,24hrs各取其颈静脉血液0.25ml。往血样中加入肝素抗凝，于6800g离心6分钟-80℃保存。随后每个血样中取10μL加入100ng/mL IS的甲醇(1000μL)中进行蛋白质沉淀。样品震荡1分钟后于18000g下离心7分钟。取200μL上清至96孔板。取1μL样品进行LC-MS/MS分析。口服给药样品的制备参照静脉注射，但以25mg/kg口服给药，取血时间为口服给药后的0.5hr,1hr,2hrs,4hrs,6hrs,8hrs,10hrs,24hrs。结果使用WinNolin和WastonLim sofeware软件计算。结果见下表4，可见本发明的嘧啶并吡啶酮类化合物具备优秀的药代动力学性质，能够充分满足体内药效实验需要，并且其药代动力学性质远好于参照化合物580152。

表4化合物在SD大鼠体内的药代动力学性质参数

实施例74.嘧啶并吡啶酮类化合物的体内肿瘤抑制作用

通过人结直肠癌细胞HCT-116的小鼠移植瘤模型来评价化合物的体内肿瘤抑制作用。

选取6-8周龄雄性的C.B.-17SCID小鼠(购买自北京维通利华实验动物技术有限公司)作为实验对象。动物实验按照《实验室动物护理和使用指南》进行。所有动物实验程序均经暨南大学动物政策与福利委员会批准。向小鼠右肢腋下接种HCT-116细胞(5x10⁶细胞/只)。当肿瘤体积长至100-200mm³时，将小鼠随机分组，每组6只，每组小鼠口服给药。对于化合物HMH5450151的评价实验，采取一天给药一次，给药5天停药2天的给药方式给药16天。治疗组给药剂量分别为12.5，25mg/kg。对于化合物HMH5450157及HMH5450183的评价实验，采取一天给药一次，连续给药16天。治疗组给药剂量为30mg/kg。给药溶媒为0.5％CMCNa的水溶液。对照组按动物体重以0.1ml/10g给予溶媒喂食。每两天对小鼠肿瘤体积和小鼠体重进行测量并记录。

肿瘤体积(TV)计算公式为：TV＝L×W²/2，其中，L为肿瘤长度，W为肿瘤宽度。肿瘤生长抑制(TGI)计算公式为：TGI＝[1-(T-T₀)/(C-C₀)]×100，其中，T和T₀分别为治疗组实验开始和实验结束时的平均肿瘤体积；C和C₀分别为对照组实验开始和实验结束时的平均肿瘤体积。结果如图7-10所示：化合物HMH5450151、HMH5450157及HMH5450183均能有效抑制肿瘤的增长，且对小鼠体重无明显影响，展示出了一定的肿瘤抑制活性及安全性。其中化合物HMH5450151在12.5mg/kg，25mg/kg剂量下，肿瘤抑制率分别达到了26％和41％。化合物HMH5450157及HMH5450183在30mg/kg剂量下，肿瘤抑制率分别达到29％和54％。

实施例75.嘧啶并吡啶酮类化合物对468种激酶的选择性

以化合物HMH5450151和化合物HMH1320078为例，对其对468种激酶的选择性做了测试，并且以专利WO2019015593A1中的化合物580152作为对照。

激酶谱测试由Eurofins DiscoverX公司完成。其原理于实施例66所描述相似。也是通过竞争性结合试验定量测量化合物与另一个固定配体竞争的能力。但测试化合物的浓度固定为100nM，且对各个激酶的抑制率采用“％Ctrl”值来表示，％Ctrl数值越低表示测试化合物与激酶的结合能力越强。使用下面公式计算，阳性参照为％Ctrl值为0的参照物，阴性参照为DMSO(％Ctrl值为100)。

结果如图11-图22所示，其中化合物HMH5450151，HMH1320078，580152在激酶谱测试中所使用编号分别为D4035(5450151)，5610116，580152。

根据图11-图22所示的结果，计算化合物的激酶谱选择性指数(SelectivityScore)，结果如表5所示。选择性指数的计算如下：

S(35)＝(％Ctrl值小于35的野生型激酶数量)/(所测试的野生型激酶数量)

S(10)＝(％Ctrl值小于10的野生型激酶数量)/(所测试的野生型激酶数量)

S(1)＝(％Ctrl值小于1的野生型激酶数量)/(所测试的野生型激酶数量)

将符合％Ctrl值范围的激酶定义为Hits。

表5化合物的激酶谱选择性指数

可以看到，化合物HMH5450151和化合物HMH1320078均展示出了良好的激酶谱选择性，且远好于对照化合物580152。化合物HMH1320078在100nM浓度下，仅对TTK展示出良好的抑制，而对其他402种激酶的“％Ctrl”值均大于10。化合物HMH5450151在100nM浓度下，仅对6/403种激酶(包括TTK)展示出一定抑制(“％Ctrl”值小于10)。进一步地，对化合物HHMH5450151与这6种激酶的结合常数做了测试，测试方法与实施例66相同。结果如下表6。

表6化合物HMH5450151对6种潜在脱靶激酶的K_d值结果

激酶种类

TTK

DAPK3

IRAK1

MARK3

PI3C2G

PI3CD

K<sub>d</sub>(nM)

0.15

13

>1000

11

>1000

>1000

可以看到除了TTK外，化合物HMH5450151仅对DAPK3以及MARK3两种激酶有一定抑制作用，K_d值分别为13nM及11nM，且相对TTK的选择性分别为87和73倍。而对IRAK1，PI3C2G，PI3CD的K_d值大于1000nM。这说明化合物HMH5450151和化合物HMH1320078具有非常出色的激酶谱选择性，因而可以减少因其脱靶而可能存在的潜在副作用。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以下实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (17)

1.具有式Ⅰ所示结构的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子：

其中：

X任选自：C、N；当X为N时，没有R₄；

R₁任选自：C₃～C₁₀环烷基、

L₁，L₂各自任选自：-(CH₂)_aNH-、-(CH₂)_bL₃-；

L₃任选自：

R₂任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基；

R₃任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₆-C₁₀芳基；

R₄任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基；

R₅任选自：氢、卤素、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤素取代的C₁～C₆烷基、卤素取代的C₁～C₆烷氧基、C₁～C₆烷基取代的C₃～C₈杂环烷基；

R₆任选自：氢、

Y任选自：CH、N；Z任选自：N、O；当Z为O时R₁₀不存在；

R₇任选自：C₁～C₁₂烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₈任选自：氢、C₁～C₆烷氧羰基、C₁～C₆烷磺酰基、C₆～C₁₀芳磺酰基、C₁～C₆烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈杂环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₉、R₁₁分别各自任选自：氢、C₁～C₆烷基；

R₁₀任选自：氢、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷酰基；.

n、m、a、b分别各自任选自：0、1、2、3、4；

c任选自：1、2。

2.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，

R₁任选自：C₄～C₈环烷基、

L₁，L₂各自任选自：-(CH₂)_aNH-、-(CH₂)_bL₃-；

L₃任选自：

3.根据权利要求2所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₁任选自：环丁烷基、环戊烷基、环已烷基、环庚烷基、

L₁，L₂各自任选自：

n选自1或2。

4.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，

R₇任选自：C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、C₆～C₁₀芳基、金刚烷基、C₅～C₁₀杂芳基、

R₈任选自：C₁～C₆烷磺酰基、苯磺酰基、叔丁氧羰基；

n选自1或2。

5.根据权利要求4所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，

R₇任选自：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环已基、苯基、萘基、金刚烷基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、

R₈任选自：甲磺酰基，乙磺酰基、丙磺酰基、苯磺酰基、叔丁氧羰基。

6.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₂任选自：氢、C₁～C₃烷基。

7.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₃任选自：氢、C₁～C₃烷基；R₃更优选为：氢、甲基或异丙基。

8.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₄任选自：氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基、二氟丙氧基、二氟异丙氧基、二氟正丁氧基、二氟异丁氧基、二氟叔丁氧基；R₄更优选为：甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、二氟乙氧基。

9.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₅任选自：氢、卤素、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基；R₅更优选为氢。

10.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，R₆任选自：

Y任选自：CH、N。

11.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，R₉、R₁₁分别各自任选自：氢、C₁～C₃烷基；R₁₀任选自：氢、C₁～C₃烷基、甲酰基。

12.根据权利要求1-11任一项所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，所述的嘧啶并吡啶酮类化合物具有式Ⅱ所示结构：

13.根据权利要求1所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子，其特征在于，所述嘧啶并吡啶酮类化合物选自如下化合物：

14.权利要求1-13任一项所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子在制备TTK抑制剂中的应用。

15.权利要求1-13任一项所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的应用。

16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为：胶质瘤、多发性骨髓瘤、白血病、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、肝癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌。

17.一种预防或者治疗肿瘤的药用组合物，其特征在于，由活性成分和药学上可接受的辅料制备得到，所述活性成分包括权利要求1-13任一项所述的嘧啶并吡啶酮类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其互变异构体或者其N-氧化物或者其前药分子。

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