CN112739715A - 抗cd38抗体的皮下给药 - Google Patents

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Abstract

公开了以低剂量皮下施用经分离的抗CD38抗体的方法。所述方法为自身免疫性疾病和癌症，包含血液学疾病提供了有效治疗。还公开了所述抗CD38抗体的单位剂型。

Description

抗CD38抗体的皮下给药
相关申请的交叉引用
根据35 U.S.C.§119(e)，本申请要求于2018年1月12日提交的美国临时申 请序列号62/617,146的优先权，所述美国临时申请的全部公开内容通过引用并 入本文。
通过引用并入电子提交的材料
通过引用整体并入的是与此同时提交并且标识如下的计算机可读核苷酸/氨 基酸序列表：命名为“101588-5009-WO-序列表.txt (101588-5009-WO-Sequence-Listing.txt)”的20千字节的ASCII(文本)文件， 创建于2018年12月4日。
技术领域
公开了通过皮下(SC)施用以低剂量和低体积施用经分离的抗CD38抗体 的方法。
背景技术
CD38(也称为环ADP核糖水解酶)是具有长C端胞外结构域和短N端胞 质结构域的II型跨膜糖蛋白。CD38是一组相关的膜结合或可溶性酶的成员，所 述酶包括CD157和海兔属ADPR环化酶。此酶家族具有将NAD转化为环ADP 核糖或烟酸-腺嘌呤二核苷酸磷酸的独特能力。CD38参与Ca2+动员以及通过包 含磷脂酶Cγ、ZAP-70、syk和c-cbl在内的许多信号传导分子的酪氨酸磷酸化进 行的信号传导。基于这些观察，CD38是淋巴样细胞在其正常发育期间的成熟和 活化的重要信号传导分子。在造血细胞中，各式各样的功能作用均已经归因于 CD38介导的信号传导，所述功能作用包含淋巴细胞增殖、细胞因子释放、B细 胞和骨髓细胞发育和存活的调节以及树突细胞(DC)成熟的诱导。
CD38在未成熟的造血细胞中表达，在成熟的造血细胞中下调，并且在活化 的淋巴细胞和浆细胞中以高水平重新表达。例如，在活化的B细胞、浆细胞、 活化的CD4+ T细胞、活化的CD8+ T细胞、NK细胞、NKT细胞、成熟的DC 和活化的单核细胞中观察到CD38高表达(美国专利第8,362,211号)。小鼠中 CD38的缺乏已经与外周T调节型和恒定型NKT细胞的水平降低、体液B细胞 应答和DC转运缺陷以及胶原诱导的关节炎(CIA)的减弱形式相关联(Chiba 等人，(2005)《类风湿性关节炎(Arthrit.Rheum.)》52：1941-48)。
CD38自身抗体的存在已经与包含糖尿病、慢性自身免疫性甲状腺炎和格雷 夫氏病在内的多种疾病相关联(Antonelli等人，(2001)《临床与实验免疫学》(Clin.Exp.Immunol.)》126：426-431；Mallone等人，(2001)《糖尿病(Diabetes)》 50：752和Antonelli等人，(2004)《内分泌研究杂志(J.Endocrinol.Invest.)》27： 695-707)。
已经在包含自身免疫性疾病和癌症在内的各种疾病中记录了CD38表达增 加。此类疾病包含全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病 (IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、重症肌无力(MG)(Yilmaz等人，(2018)《临床 和转化神经病学年鉴(Ann Clin TranslNeurol.)》5(11)：1408-1414)；视神经脊 髓炎(NMO)(Chihara等人，(2011)《美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci. USA)》108(9)：3701-6)；免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少 性紫癜(TTP)(Behzad等人，(2018)APMIS 126(6)：523-532)；抗磷脂综合症(APS) (Alvarez-Rodriguez等人，(2018)《国际分子科学杂志(Int.J.Mol.Sci.)》19(2)：pii)；寻常型天疱疮(PV)、落叶型天疱疮(PF)、抗NMDAR脑炎(NMDR)、 自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、格雷夫氏病、膜性肾病、干燥综合征(SS)、 ANCA脉管炎、获得性大疱性表皮松解症(EBA)、大疱性类天疱疮(BP)、桥 本氏甲状腺炎、硬皮病和IgG4相关疾病。与对照组相比，患有RA的患者的关 节组织中的浆细胞增加。在患有SLE的患者中，患有更具活动性的疾病的患者 的外周血中的浆母细胞增加。然而，目前如利妥昔单抗(rimximab)等基于CD20 的B细胞消耗疗法有效地消耗CD20+B细胞，但由于其不表达CD20，因此无 法直接并有效地消耗浆细胞或浆母细胞。因此，具有高水平浆细胞或浆母细胞 的患有RA或SLE的患者不太可能从基于CD20的疗法中获得实质性的临床益 处。
在浆细胞、浆母细胞、NK细胞、活化的B淋巴细胞、浆细胞样树突细胞和 活化的T细胞上高表达的靶向CD38的疗法可以为RA和SLE以及以CD38表 达为特征的其它疾病提供有效治疗。用利妥昔单抗和口服类固醇治疗的成年SLE 患者的外周血中的CD38表达的浆母细胞水平是复发时间的最佳预测因子。此 外，在患有活动性疾病的SLE患者的外周血中识别出表达高水平CD38的循环 免疫球蛋白(Ig)分泌细胞并且此亚群的水平与治疗诱导的抗双链DNA(抗 dsDNA)抗体水平、蛋白尿和疾病活动性减少相关联(Grammer等人，(2003)《临 床研究杂志(J.Clin.Invest.)》112：1506-1520)。另外，浆细胞对蛋白酶体抑制 敏感并且在暴露于硼替佐米(bortezomib)的高度难治性SLE患者的外周血中降 低(Alexander等人，(2015)《风湿病年鉴(Ann.Rheum.Dis.)》74(7)：1474-1478)。 此降低与每个患者中的抗dsDNA抗体的减少和疾病活动性的相应改善相对应。 不幸地，疗法与治疗紧急不良事件(TEAE；例如，神经病、腹泻)相关联，所 述治疗紧急不良事件可能是由于非淋巴样细胞(例如，神经细胞、上皮细胞) 中的蛋白酶体抑制所致。总的来说，这些数据指示，特异性降低表达CD38的浆 细胞可以产生针对难治性SLE患者的风险概况的改善的益处。由于目前针对RA和SLE两者的疗法仅在少数患者中产生重大的临床应答和持续缓解，因此迫切 需要探索其它治疗机制。
CD38表达的增加已经在各种造血起源疾病以及由此衍生的细胞系中进行 了记录并且已经被描述为血液学癌症中的阴性预后标志物。此类疾病包含但不 限于多发性骨髓瘤(MM)、慢性成淋巴细胞性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性 白血病(B-CLL)；包含B细胞急性淋巴细胞性白血病、B和T急性淋巴细胞性 白血病(ALL)、急性成淋巴细胞性白血病、华氏巨球蛋白血症、套细胞淋巴瘤、 前淋巴细胞性/髓细胞性白血病、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病 (CML)、滤泡性淋巴瘤、NK细胞白血病、浆细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特淋巴瘤(BL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、毛细胞白血病(HCL)和霍奇金 淋巴瘤(HL)。此外，CD38表达是患有如以下等病状的患者的预后指标：例如， B-CLL(Dürig等人，(2002)《白血病(Leukemia)》16：30-35；和Morabito等 人，(2001)《白血病研究(Leukemia Res.)》25：927-932)和急性骨髓性白血病 (Keyhani等人，(1999)《白血病研究》24：153-159)。因此，CD38为治疗造血 系统的疾病提供了有用的靶标。
若干种抗CD38抗体正处于用于治疗CD38相关联癌症的临床试验中。然而， 这些现有技术治疗性抗CD38抗体与红细胞(RBC)和血小板结合，这可以解释 为什么需要更高的所需给药来克服与RBC结合而产生的下沉。例如，用达雷木 单抗(Daratumumab)(抗CD38 IgG1mAb
Figure BDA0002579022700000041
获得FDA批准并且可从 杨森肿瘤学(Janssen Oncology)商购获得)进行治疗需要非常高的剂量(≥16 mg/kg)和强化方案(每周8x，每两周8x，然后每月一次)以获得最佳的抗肿 瘤活性(Xu等人，(2017)《临床药理学与治疗学(Clin.Pharmacol.Ther.)》101(6)： 721-724)。达雷木单抗与RBC和血小板上的CD38的结合导致阳性抗球蛋白测 试(间接库姆斯测试)，所述阳性抗球蛋白试验在最后一次达雷木单抗输注后可 以持续长达6个月(Sullivan，(2017)《血液(Blood)》129(22)：3033-3037)。这 是达雷木单抗和其它结合RBC的抗体的重要性质。尽管CD38在RBC上的表达 水平比在骨髓瘤细胞上的表达水平低大约1000倍(deWeers等人，(2011)《免疫 学杂志(J.Immunol.)》186(3)：1840-1848)，但是患有活动性疾病的MM患者血 液中的每个骨髓瘤细胞中大约存在36,000个RBC(Witzig人，(1993)《癌症》 72(1)：108-113)。同样地，与肿瘤细胞群体相比，RBC群体表达的CD38分子多了36倍。因此，已经假设RBC结合大量所施用的任何抗CD38抗体，导致需要 施用大剂量以具有足够水平的抗CD38抗体以实现对肿瘤细胞的治疗作用。
因此，因为要达到治疗功效需要高体积抗体，所以使用抗CD38抗体的治疗 目前集中于静脉内(IV)施用，这是因为如此大的体积不适合于皮下施用并且 在可以如何调配Ab浓度上存在限制。例如，在至少2小时内IV施用1200mg 剂量的达雷木单抗被批准用于治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤(RRMM)和 新诊断的多发性骨髓瘤(NDMM)。由15mL中1800mg达雷木单抗组成的必须 与EnhanceTM(含卤素酶，以加速吸收)共调配并且每周8X、每两周8X并且然 后每月一次施用的皮下(SC)调配物目前正处于RRMM的Ph3试验中。
另一种抗CD38抗体伊沙妥昔单抗(可从赛诺菲健赞(Sanofi Genzyme)商 购获得，目前处于3期临床试验中)以10mg/kg和20mg/kg的剂量施用，相当 于每名70kg患者700-1400mg，其中预计进样体积为3.5-14mL。
当前处于临床中的现有技术抗CD38抗体所需的更高剂量和体积也可能引 起等严重的副作用，如例如，溶血性贫血这种RBC被破坏的速度比其被替换的 速度快的病状。在一项开放标签的单臂研究中，将伊沙妥昔单抗静脉以以下剂 量施用于97名患者：每2周3mg/kg(Q2W；n＝23)，10mg/kg Q2W持续2个 周期，然后是Q4W(n＝25)，10mg/kg Q2W(n＝24)和每周20mg/kg的4个 剂量(1个周期)，然后是Q2W(n＝25)。最常见的严重(3/4级)不良事件是贫血，其影响了24％的患者(参见http：//Www.onclive.com/conference-coverage/ asco-2016/isatuximab-monotherapy-effective-for-heavily-pretreated-myeloma，2016ASCO年会；Richter等人，(2016)《临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)》34(增刊)： 摘要8005)。在一项达雷木单抗研究中，所有患者中有45％经历贫血(其中19％ 为3级)并且48％的患者经历血小板减少(其中10％为3级并且8％为4级)(参 见例如，https：//www.rxlist.com/darzalex-side-effects-drug-center.htm；Costello (2017)《血液学治疗进展(Ther.Adv.Hematol.)》8(1)：28-37)。因此，必须 仔细监测用伊沙妥昔单抗或达雷木单抗治疗的患者的这些危及生命的副作用和 其它严重副作用。
在向患者皮下施用大量抗CD38 mAb上的身体挑战展示了本领域对更具效 力的抗CD38抗体的需要，因为更具效力的抗体可以以更小的量/容积实现期望 的药理作用并且从而使更有效的施用形式成为可能。更具效力的抗体可能导致 调配较低体积，与达雷木单抗(Darzalex)相比，所述更低体积将更有效地SC 施用于保证CD38表达细胞的消耗(如用于治疗自身免疫性疾病和血液学形式的 癌症)的患者。施用较低量药物的优点将包含与SC施用达雷木单抗数分钟和IV 施用达雷木单抗、伊沙妥昔单抗或MOR202数小时的花费数秒的施用以及更少 的输注反应(如已经针对SC施用达雷木单抗所见。降低患者需要在输注中心花费的时间将允许居家疗法、增加施用效率和输注中心的生产力；由于制度效率 的增加，因此每位患者的医疗保健支出降低；并且如果患者可以在不使用输注 中心的情况下使用所述药物，则效用会更广泛。
AB79是完全人免疫球蛋白IgG1单克隆抗体，可以以高亲和力(Kd＝3.5 nM)与CD38特异性结合(美国专利第US 8,362,211号，所述专利的全部内容 通过引用并入本文)。AB79通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细 胞毒性(CDC)的细胞消耗抑制表达CD38的肿瘤细胞的生长。AB79还可以降 低从健康受试者和全身性红斑狼疮(SLE)患者中分离出的血液中的浆细胞和浆 母细胞的水平。在SLE的病例中，包含短寿命和长寿命浆细胞的浆细胞群体降 低了80％。另外地，也降低了产生致病性自身抗体的细胞数量，包含VH4-349G4 +抗体(降低70％)、抗Ro抗体(降低70％)和抗dsDNA抗体(降低80％)。 抗人CD38 mAb达雷木单抗还在体外以剂量依赖性方式消耗患有SLE和RA的 患者的样品中的表达CD38的浆母细胞和浆细胞。与达雷木单抗相反，AB79与 由食蟹猴表达的CD38交叉反应，为确定降低细胞表达CD38的水平是否会影响 患自身免疫性疾病的非人灵长类动物模型中的炎症和组织损伤提供了独特的机 会。在健康的食蟹猴中，淋巴细胞以及B、T和NK细胞的消耗效率与CD38表 达水平和AB79剂量水平呈正相关(PCT申请第PCT/US2017/042128号；美国 专利第US 8,362,211号)。
考虑到临床上的许多CD38抗体不适合于低剂量或低容积皮下施用并且具 有危险的副作用，因此本领域仍然需要用于治疗指示与CD38结合的疾病(如自 身免疫性疾病和血液学形式的癌症)的更安全、更方便和更有效的抗体调配物。
发明内容
本文提供了用于治疗如例如自身免疫性疾病和血液学癌症等指示与CD38 结合的疾病的方法，所述方法包括以出乎意料的低剂量和/或小体积皮下施用经 分离的抗CD38抗体。
一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的指示与CD38结合的疾病的方 法，所述方法包括以下步骤：向患有指示与CD38结合的疾病的受试者皮下施用 足够治疗所述疾病的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗CD38 抗体包括可变重(VH)链区和可变轻(VL)链区，所述可变重链区包括具有氨 基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具 有氨基酸序列SEQ ID NO：5的CDR3；所述可变轻链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的CDR3。
另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的指示与CD38结合的疾病的 方法，所述方法包括以下步骤：向患有指示与CD38结合的疾病的受试者皮下施 用足够治疗所述疾病的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗 CD38抗体包括VH链区和VL链区，所述VH链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的CDR3；所述VL链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、 具有氨基酸序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的 CDR3，其中所述抗CD38抗体以3毫升或更小的体积施用。
另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的指示与CD38结合的疾病的 方法，所述方法包括以下步骤：向患有指示与CD38结合的疾病的受试者皮下施 用足够治疗所述疾病的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗 CD38抗体包括VH链区和VL链区，所述VH链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的CDR3；所述VL链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、 具有氨基酸序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的 CDR3，其中所述抗CD38抗体以0.03到0.6毫克每千克体重的剂量施用。
一方面，所述抗CD38抗体不会引起溶血性贫血或血小板减少。
一方面，施用所述抗CD38抗体导致一个或多个治疗紧急不良事件(TEAE) 的3级或4级的发生率小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于25％、 小于20％、小于15％、小于10％或小于5％，所述一个或多个治疗紧急不良事件 选自由以下组成的组：贫血、溶血性贫血、血小板减少、疲劳、输液相关反应 (IRR)、白细胞减少和淋巴细胞减少。
一方面，所述抗CD38抗体导致RBC消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％、小于50％。
一方面，所述抗CD38抗体导致血小板消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％、小于50％。
一方面，所述疾病选自由自身免疫性疾病和癌症组成的组。
一方面，所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组：全身性红斑狼疮(SLE)、 类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎、重症肌无力(MG)、 视神经脊髓炎(NMO)、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性 紫癜(TTP)、抗磷脂综合征(APS)、寻常型天疱疮(PV)、落叶型天疱疮(PF)、 抗NMDAR脑炎(NMDR)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、格雷夫氏病、膜 性肾病、干燥综合征(SS)、ANCA脉管炎、获得性大疱性表皮松解症(EBA)、 大疱性类天疱疮(BP)、桥本氏甲状腺炎、硬皮病、IgG4相关疾病和移植物抗宿 主病。(Yilmaz V等人，《临床和转化神经病学年鉴》2018年9月22日； 5(11)：1408-1414；Chihara N，Aranami T，Sato W，Miyazaki Y，Miyake S，Okamoto T， Ogawa M，Toda T，Yamamura T.《美国国家科学院院报》2011年3月1日； 108(9)：3701-6；Behzad MM等人，APMIS.2018年6月；126(6)：523-532；或 Alvarez-Rodriguez L.等人，《国际分子科学学报(Int J Mol Sci.)》2018年2月 16日；19(2)。
一方面，所述血液学癌症选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、NK/T细胞 淋巴瘤、慢性成淋巴细胞性白血病(chronic lymphoblastic leukemia)、慢性淋巴 细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)、浆细胞白血病、急性髓性白血病、 慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤。
一方面，所述血液学癌症是多发性骨髓瘤。在某些实施例中，所述多发性 骨髓瘤选自由RRMM和EDMM组成的组。
一方面，其中所述VH链区具有氨基酸序列SEQ ID NO：9并且所述VL链 区具有氨基酸序列SEQ ID NO：10。
一方面，所述抗CD38抗体包括重链氨基酸序列SEQ ID NO：11和轻链氨基 酸序列SEQ ID NO：12。
一方面，所述治疗有效量的剂量为0.03到0.6毫克每千克体重。
一方面，所述治疗有效量的体积为3毫升或更小。
一方面，所述治疗有效量的体积为2毫升或更小。
一方面，所述治疗有效量的体积为1毫升或更小。
一方面，所述人抗CD38抗体以药学上可接受的组合物的形式施用。
另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的血液学癌症的方法，所述 方法包括以下步骤：向患有血液学癌症的受试者皮下施用足够治疗所述血液学 癌症的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗CD38抗体包括VH 链区和VL链区，所述VH链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、 具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的 CDR3；所述VL链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、具有氨基酸 序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的CDR3。
另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的血液学癌症的方法，所述 方法包括以下步骤：向患有血液学癌症的受试者皮下施用足够治疗所述血液学 癌症的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗CD38抗体包括VH 链区和VL链区，所述VH链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、 具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的 CDR3；所述VL链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、具有氨基酸 序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的CDR3其中所 述抗CD38抗体以3mL或更小、2mL或更小或1mL或更小的体积施用。
另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的血液学癌症的方法，所述 方法包括以下步骤：向患有血液学癌症的受试者皮下施用足够治疗所述血液学 癌症的治疗有效量的经分离的人抗CD38抗体，其中所述抗CD38抗体包括VH 链区和VL链区，所述VH链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、 具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的 CDR3；所述VL链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、具有氨基酸 序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的CDR3其中所 述抗CD38抗体以0.03到0.6毫克每千克体重的剂量施用。
一方面，所述抗CD38抗体不会引起溶血性贫血或血小板减少。
一方面，施用所述抗CD38抗体导致一个或多个TEAE的3级或4级的发 生率小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于25％、小于20％、小于 15％、小于10％或小于5％，所述一个或多个TEAE选自由以下组成的组：贫血 (包含溶血性贫血)、血小板减少、疲劳、输液相关反应(IRR)、白细胞减少和 淋巴细胞减少。
一方面，所述抗CD38抗体导致RBC消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％或小于50％。
一方面，所述抗CD38抗体导致血小板消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％或小于50％。
一方面，所述血液学癌症选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、慢性成淋 巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、浆细胞白血病、急性髓性白血病、 慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤、NK/T细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤。
一方面，所述血液学癌症是多发性骨髓瘤。在某些实施例中，所述多发性 骨髓瘤选自由RRMM和EDMM组成的组。
一方面，所述VH链区具有氨基酸序列SEQ ID NO：9并且所述VL链区具 有氨基酸序列SEQ ID NO：10。
一方面，所述抗CD38抗体包括重链氨基酸序列SEQ ID NO：11和轻链氨基 酸序列SEQ ID NO：12。
一方面，所述治疗有效量的剂量为0.03到0.6毫克每千克体重。
一方面，所述治疗有效量的体积为3毫升或更小。
一方面，所述治疗有效量的体积为2毫升或更小。
一方面，所述治疗有效量的体积为1毫升或更小。
一方面，所述人抗CD38抗体以药学上可接受的组合物的形式施用。
另一方面，本发明提供了一种包括经分离的抗体的单位剂型，所述经分离 的抗体包括重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO：9和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO：10，其中所述经分离的抗体与CD38结合，其中所述单位剂型被调配成 以每千克体重0.03到0.6毫克的剂量皮下施用所述抗体。
一方面，所述重链包括氨基酸序列SEQ ID NO：11并且所述轻链包括氨基酸 序列SEQ ID NO：12。
一方面，所述单位剂型的体积为3毫升或更小。
一方面，所述单位剂型的体积为2毫升或更小。
一方面，所述单位剂型的体积为1毫升或更小。
一方面，所述单位剂型被调配成在血液学癌症的治疗中皮下施用所述抗体， 所述血液学癌症选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血 病、慢性淋巴细胞性白血病、浆细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血 病、B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤。
一方面，所述血液学癌症是多发性骨髓瘤。在某些实施例中，所述多发性 骨髓瘤选自由RRMM和EDMM组成的组。
一方面，所述抗CD38抗体不会引起溶血性贫血或血小板减少。
一方面，所述抗CD38抗体导致RBC消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％或小于50％。
一方面，所述抗CD38抗体导致血小板消耗小于10％、小于20％、小于30％、 小于40％或小于50％。
参照以下说明和附图，这些和其它实施例、性质和潜在优点将变得显而易 见。
附图说明
通过参考以下描述的附图，可以更好地理解本发明的目的和特征，其中
图1示出了表2中描述的SC剂量组的食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno) PK数据。用经验证的定性电化学发光(ECL)测定检测抗药物抗体(ADA)。 当其达到约1000(～log(7))的特定阈值滴度时，发病率随时间推移而增加并且 影响PK。
图2示出了针对AB79的食蟹猴PK数据和PK模型。图A和图B示出了来 自8项猴研究的IV数据的原始PK数据；图A为第一剂量后的前7天并且图B 为整个观察期间。省略了SC数据(SC数据参见图1)。图C描绘了包含标记为 蓝色框的靶标介导的药物处置(TMDD)的最终的PK模型结构。VC表示观察 到AB79浓度(标记为Conc)的中央房室的体积。VP表示外围房室的体积。Rtotal代表抗体结合和未结合受体CD38的房室。KSYN和KDEG表示受体的产生和降解 速率常数并且KINT表示内化速率常数(复合消除速率常数)。KSS是稳态常数， 定义为KSS＝(KOFF+KINT)/KON，其中KOFF是解离并且KON是结合速率常数。图 D-F示出了无TMDD组件的线性2-房室模型预测的覆盖图(中值，预测区间为 95％)和最低3个剂量的观察数据(研究8)。请注意图D、E和F之间的不同 时标。
图3示出了在13周食蟹猴毒理学研究中的ADA作用和PK。评估参考最终 群体PK模型(图2，表2)。呈现了以下按剂量和施用途径分层的拟合优度(GOF) 图(Keizer等人，(2013)CPT药物计量学和系统药理学(Pharmacometrics Syst.Pharmacol.2：e50)：(1)条件加权残差(CWRES)对时间；(2)观察浓度对 群体模型预测；(3)CWRES对群体模型预测；以及(4)观察浓度对个体模型 预测。
图4示出了按剂量和施用途径分层的最终群体PK模型的GOF图(IV-十字， SC-三角形)。图4A-总体的；图4B-剂量0.03mg/kg；图4C-剂量0.1mg/kg； 图4D-剂量0.3mg/kg；图4E-剂量1.0mg/kg；图4F-剂量2.0mg/kg；图4G-剂 量3.0mg/kg；图4H-剂量30mg/kg；图4I-剂量80mg/kg；图4J-剂量100mg/kg。
图5示出了人和猴NK、B和T细胞表面上CD38表达的比较。使流式细胞 仪测量结果标准化并且以等量可溶性荧光分子(MOEF)报告信号。人和猴血液 淋巴细胞结合类似的AB79水平。通过流式细胞术对猴NK细胞(CD3-， CD159a+)、B细胞(CD3-，CD20+)和T细胞(CD3+)与人NK细胞(CD3-， CD16/CD56+)、B细胞(CD3-，CD19+)和T细胞(CD3+)上的CD38表达水平的直接比较进行评估。使用用彩虹磁珠(Rainbow Beads)(利诺伊州森林湖的Spherotech公司(Spherotech，Lake Forest，IL))生成的标准曲线将每个细胞群 体的AB79染色的中值荧光强度(MFI)转换为单位MOEF。示出的数据来自每 个物种的3个个体并且示出了每种细胞类型的MOEF±SD。血液淋巴细胞之间 的CD38表达存在差异，其中其上的AB79的结合水平由高到低为NK细胞＞B 细胞＞T细胞。在来自猴的血细胞中，AB79结合的模式类似，但是AB79结合 /CD38表达水平较低。
图6示出了来自图5中所描绘的研究的安慰剂治疗动物的T细胞、B细胞 和NK细胞计数数据中的个体间和个体内变异性。图6A-NK细胞；图6B-B细 胞；图6C-T细胞。
图7示出了按研究(上排)或性别(下排)分层的给药前NK、B和T细胞 计数(每μL的细胞)。图7A-按研究的NK细胞；图7B-按研究的B细胞；图 7C-按研究的T细胞；图7D-按男性/女性的NK细胞；图7E-按男性/女性的B 细胞；以及图7F-按男性/女性的T细胞。
图8示出了AB79依赖性NK细胞、B细胞和T细胞消耗。这些图聚焦于用 第一剂量AB79治疗后的前7天内发生的变化。用每周或每隔一周的给药时间表 合并来自单个剂量和多个剂量研究的数据是可能的。图8A-NK细胞的最低点细 胞消耗；图8B-NK细胞的第1剂量后1周；图8C-NK细胞的每个剂量组的平 均曲线；图8D-B细胞的最低点细胞消耗；图8E-B细胞的第1剂量后1周；图 8F-B细胞的每个剂量组的平均曲线；图8G-T细胞的最低点细胞消耗；图8H- T细胞的第1剂量后1周；图8I-T细胞的每个剂量组的平均曲线图A-C分别示 出了单个最小细胞计数(即，最大的PD作用)、第一剂量后7天的单个细胞计 数以及NK细胞的平均每个剂量细胞消耗曲线和PK-PD模型结构。图D-F示出 了针对B细胞的相同信息并且曲线图G-I示出了针对T细胞的相同信息。
图9示出了研究7中的给药后两天的AB79治疗对红细胞的影响(图9A) 和给药后第一天的总淋巴细胞计数(表2)(图9B)。
图10示出了AB79的模拟的人类PK和NK细胞、B细胞和T细胞消耗曲 线。基于缩放的猴PK和PK-PD模型，模拟了5个单次IV和SC给药PK和细 胞消耗曲线(0.0003到1mg/kg)。左图示出了IV施用后的数据并且右图示出了 SC施用后的数据。图的第一排显示了PK曲线。水平虚线指示的定量下限 (LLOQ)为0.05μg/mL。最低剂量的PK完全被噪声叠加并且PK仅在0.03mg/kg 的剂量下才达到LLOQ以上的水平。图9A-通过IV的AB79；图9B-通过SC 的AB79；图9C-在NK细胞中通过IV；图9D-在NK细胞中通过SC；图9E- 在B细胞中通过IV；图9F-在B细胞中通过SC；图9G-在T细胞中通过IV； 图9H-在T细胞中通过SC。
图11示出了在健康志愿者中进行AB79单个上升剂量毒性研究的计划。对 74名受试者中的6个IV和4个SC群组进行随机分组并且接受单个剂量AB79。 在剂量递增前，在每个群组后审查广泛的盲法安全性、PK和PD数据。停止标 准包含消耗靶细胞以避免对健康志愿者的潜在免疫抑制。给药后对每个受试者 进行92天的随访。
图12示出了基于施用途径(IV-红色；SC-蓝色)进行分层的PK-PD模型 的GOF图，其中图12A-NK细胞；图12B-B细胞；以及图12C-T细胞。
图13示出了AB79介导猴淋巴细胞的消耗。使用流式细胞术用Flow-CountTM荧光微球(贝克曼-库尔特(Beckman-Coulter))量化单个IV剂量的AB79后， 雌性食蟹猴(n＝4/剂量组)中的AB79剂量依赖性消耗的血液NK细胞＞B细胞 ＞T细胞。在以下时间收集样品：预处理(第-1周)；第1天；给药前；给药后 第15、30分钟；第1、4、8、24、48、96和168小时；第10、15、22、29、36、 43、50和57天。为了清楚起见，仅显示2周的数据。在每个时间点处计算平均细胞数值并且用于计算相对于基线计数的％。图13A-T细胞；图13B-B细胞； 以及图13C-NK细胞。
图14示出了通过AB79治疗降低人破伤风类毒素(TTd)记忆应答。用抗 去唾液酸GM1处理CB17/SCID小鼠以消除NK细胞并且然后给予25x 106个人 外周血淋巴细胞。7-10天后，收集血清样品以评估人Ig并且Ig水平是随机分组 的基础。给予小鼠TTd以诱导记忆应答并且每周两次用所指示的抗体治疗两次， 持续10天。最后一次治疗后三天，收集血清并且分析抗TTd抗体。AB79剂量 依赖性地将TTd记忆应答抑制到与利妥昔单抗(Rituxan/Rtx)(同种型(Iso)， Rtx和AB79均为10mg/kg)类似的程度。
图15示出了AB79不诱导细胞因子诱导。与IgG1同种型对照相比，孵育 24小时后，AB79不会增加从4个不同受试者中收集的PBMC中的IL-6水平。 阳性对照PHA和抗CD3在所有受试者中均增加了细胞因子水平，从而证明细胞 具有制造IL-6的能力。当测试IL-2、IL-4、IL-10、GM-CSF、IFNγ和TNFα时， 持续刺激48小时PBMC观察到相似的结果(数据未示出)。每个受试者的条形 图如下：(i)无Ab；(ii)同种型对照；(iii)AB79；(iv)抗CD3；(v)PHA。 每个值是孵育后24小时测量的三联孔的平均值±SD。
图16A示出了图16B的干结合、湿结合和可溶实验的设立(根据以下进行 改动：Stebbings等人，(2007)《免疫学杂志(J.Immunol.)》179：3325-3331)。
图16B示出了AB79不具有激动剂活性。当将AB79加入溶液中的孔中并 且允许其蒸发(干结合)对允许AB79结合到溶液中的孔(湿结合)或直接加入 PBMC(可溶)中时，AB79高度浓缩。在24小时后测试的条件中的任一个条件 下，AB79均不会刺激IL-6或IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、GM-CSF、IFNγ或TNFα。 IL-8由PBMC组成性地产生并且经任何处理都不会改变(数据未示出)。每个量 度是孵育后24小时从单个受试者中测量的三联孔的平均值。
图17示出了AB79与人RBC结合的评估。在此研究中，未观察到AB79(实 体直方图)或同种型对照(阴影直方图)与三十名人类志愿者的全血中的RBC 结合。示出了来自30名人类志愿者中的15名志愿者的代表性数据。
图18示出了AB79与食蟹猴RBC结合的评估。在此研究中，未观察到AB79 (实体直方图)或同种型对照(阴影直方图)与三十只食蟹猴的全血中的RBC 结合。示出了来自30只食蟹猴中的15只食蟹猴的代表性数据。
图19示出了AB79与人血小板结合的评估。在此研究中，未观察到AB79 (实体直方图)或同种型对照(阴影直方图)与三十名人类志愿者的全血中的 CD61+门控血小板结合。示出了来自30名人类志愿者中的15名志愿者的代表 性数据。
图20示出了AB79与食蟹猴血小板结合的评估。在此研究中，未观察到AB79 (实体直方图)或同种型对照(阴影直方图)与三十只食蟹猴的全血中的CD61+ 门控血小板结合。示出了来自30只食蟹猴中的15只食蟹猴的代表性数据。
图21示出了AB79与食蟹猴CD45+淋巴细胞结合的评估。AB79与未裂解 的食蟹猴全血中的CD45+淋巴细胞的结合。对CD45+淋巴细胞进行门控并且然 后评估AB79(实体直方图)的结合或同种型对照(阴影直方图)的结合。如竖 直虚线右侧的细胞部分所展示的，在淋巴细胞的亚群上检测到AB79结合。几乎 未观察到同种型对照与淋巴细胞的结合。
图22示出了用于人RBC的(A)RBC识别和(B)淋巴细胞识别的门控等 级。
图23示出了生物素-链霉亲和素-BV421 AB79和生物素-链霉亲和素-BV421 达雷木单抗的抗体结合能力。条形图代表(i)阴性磁珠；(ii)仅Sav-Bv421阴 性对照；(iii)AB79-生物素/Sav-BV421(5μg/ml)；(iv)达雷木单抗-生物素 /Sav-BV421(5μg/ml)；(v)AB79-生物素/Sav-BV421(10μg/ml)；(vi)达雷木 单抗-生物素/Sav-BV421(10μg/ml)。MFI＝中值荧光，Sav＝链霉亲和素。使 用电压为275的光电倍增管(PMT)。
图24示出了生物素-链霉亲和素-BV421 AB79和生物素-链霉亲和素-BV421 达雷木单抗与CD38+淋巴细胞的结合。条形图代表(i)AB79-生物素-链霉素 -BV421(0μg/ml)；(ii)未标记的AB79和AB79-生物素-链霉素-BV421(10 μg/ml)；(iii)AB79-生物素-链霉素-BV421(10μg/ml)；(iv)达雷木单抗-生物 素-链霉素-BV421(0μg/ml)；(v)未标记的达雷木单抗和达雷木单抗-生物素- 链霉素-BV421(10μg/ml)；(vi)达雷木单抗-生物素-链霉素-BV421(10μg/ml)。 竖直线代表标准偏差；n＝4个供体(3个供体用于未标记的病状)。MFI＝中值 荧光。
图25示出了AB79和达雷木单抗与人RBC的结合(单个供体的阳性结果 ％)。在存在或不存在未标记的AB79(500μg/ml)或未标记的达雷木单抗(500 μg/ml)的情况下、在温和振荡器上、在RT下用生物素-链霉亲和素-BV421 AB79 (0、0.1、10、100μg/ml)或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗(0、0.1、1、 10、100μg/ml)将来自四名健康志愿者的外周血孵育3小时。图例：
Figure RE-GDA0002626796920000011
AB79- 生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000012
冷的AB79和AB79-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000013
达 雷木单抗-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000014
冷的达雷木单抗和达雷木单抗-生物素-链 霉亲和素BV421。
图26示出了AB79和达雷木单抗与人RBC的结合(总结的阳性数据％)。 在存在或不存在未标记的AB79(500μg/ml)或未标记的达雷木单抗(500μg/ml) 的情况下、在温和振荡器上、在RT下用生物素-链霉亲和素-BV421 AB79(0、 0.1、10、100μg/ml)或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗(0、0.1、1、10、 100μg/ml)将来自四名健康志愿者的外周血孵育3小时。图例：
Figure RE-GDA0002626796920000015
AB79-生 物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000016
冷的AB79和AB79-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000017
达 雷木单抗-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000018
冷的达雷木单抗和达雷木单抗-生物素-链 霉素-BV421。
图27示出了AB79和达雷木单抗与人RBC的结合(单个供体的中值荧光)。 在存在或不存在未标记的AB79(500μg/ml)或未标记的达雷木单抗(500μg/ml) 的情况下、在温和振荡器上、在RT下用生物素-链霉亲和素-BV421 AB79(0、 0.1、10、100μg/ml)或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗(0、0.1、1、10、 100μg/ml)将来自四名健康志愿者的外周血孵育3小时。图例：
Figure RE-GDA0002626796920000019
AB79-生物 素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA00026267969200000110
冷的AB79和AB79-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA00026267969200000111
达雷 木单抗-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000021
冷的达雷木单抗和达雷木单抗-生物素-链霉 素-BV421。
图28示出了AB79和达雷木单抗与人RBC的结合(总结的中值荧光)。在 存在或不存在未标记的AB79(500μg/ml)或未标记的达雷木单抗(500μg/ml) 的情况下、在温和振荡器上、在RT下用生物素-链霉亲和素-BV421 AB79(0、 0.1、10、100μg/ml)或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗(0、0.1、1、10、 100μg/ml)将来自四名健康志愿者的外周血孵育3小时。图例：
Figure RE-GDA0002626796920000022
AB79-生 物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000023
冷的AB79和AB79-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000024
达 雷木单抗-生物素-链霉素-BV421；
Figure RE-GDA0002626796920000025
冷的达雷木单抗和达雷木单抗-生物素-链 霉素-BV421。
图29通过以下示出了人类红细胞的溶血(归一化％)：○以μg/ml为单位 的人IgG1同种型对照、
Figure RE-GDA0002626796920000027
达雷木单抗、△AB79和●皂素对照物。每个符号代 表人的3次重复的平均值(n＝5个供体)。
图30通过以下示出了食蟹猴红细胞的溶血(归一化％)：○以μg/ml为单 位的人IgG1同种型对照、
Figure RE-GDA00026267969200000211
达雷木单抗、△AB79和●皂素对照物。每个符号 代表食蟹猴的3次重复的平均值(n＝5个供体)。
图31示出了来自用AB79进行IV输注的猴血清中(A)的AB79的平均浓 度和IV输注AB79后猴外周血中的(B)CD20-/CD3-/CD16+NK细胞；(C) CD3-/CD20+B细胞；以及(D)CD3+T细胞的平均绝对细胞计数相对于给药前基 线的变化百分比。媒剂对照物(开放正方形)、0.1mg/kg(开放菱形)、0.3mg/kg (开放三角形)、1.0mg/kg(开放圆)、3.0mg/kg(封闭正方形)、30.0mg/kg(封 闭菱形)和80.0mg/kg(封闭三角形)的AB79。用开放符号(n＝7只动物)表 示的群组每周给药并且封闭符号(n＝5只动物)每两周给药，持续3个月。误 差条表示标准偏差。
图32示出了AB79与(A)表达重组食蟹猴CD38的CHO细胞以及与(B) 在CD3+T淋巴细胞、CD3-CD20+B淋巴细胞和CD3-/CD20-/CD16+NK细胞 上表达的内源性食蟹猴CD38的浓度依赖性结合。图22C中描绘了在培养基中 用AB79孵育48小时后的来自食蟹猴(n＝3)的全血中的NK细胞水平。
图33示出了实例7的给药策略时间表。
图34示出了(A)相对于入院时的变化百分比的归一化体重测量结果：非 关节炎对照动物(开放圆)；未经治疗的关节炎动物(封闭圆)；用AB79预防性 治疗的动物(开放正方形)；用AB79治疗性治疗的动物(封闭正方形)；用地塞 米松(dexamethasone)治疗性治疗的动物(开放三角形)；(B)16个关节的平 均临床关节炎评分：未经治疗的关节炎动物(封闭圆)；用AB79预防性治疗的 动物(开放正方形)；用AB79治疗性治疗的动物(封闭正方形)；用地塞米松治 疗性治疗的动物(开放三角形)；(C)具有关节肿胀的PIP关节数量；以及(D) 计算并报告为每只动物的平均关节肿胀的16个PIP关节的平均椭圆面积。X射 线成像后，对(E)DIP和(F)MCP的每个关节进行放射影像检查。数据是每 组的平均值±标准误差。*如与未经治疗的组相比，p＜0.05**p＜0.01(单因素 ANOVA\邓恩多重比较检验(One-ANOVA\Dunn′s Multiple Comparison Test))。
图35示出了相对于入院时的变化百分比的归一化体重(A)测量结果：非 关节炎对照动物(开放圆)；未经治疗的关节炎动物(封闭圆)；用AB79预防性 治疗的动物(开放正方形)；用AB79治疗性治疗的动物(封闭正方形)；用地塞 米松治疗性治疗的动物(开放三角形)。(B)CRP和(C)ALP随时间推移的血 清化学水平：数据是每组的平均值±标准误差。*如与未经治疗的组相比，p＜0.05 **p＜0.01(单因素ANOVA\邓恩多重比较检验)。
图36示出了由骨组织病理学家使用甲苯胺蓝染色的玻片(32x 22只动物＝ 704个玻片)对DIP关节的关节区域和表面盲法执行定量组织形态计量。将来自 每只动物的个体结果绘制为每组的平均值±标准误差。如上图所指定的进行统计 分析。(A)关节软骨总面积；(B)受损关节软骨的厚度；(C)受损关节表面的 百分比；(D)骨赘面积。数据是每组的平均值±标准误差。*如与未经治疗的组 相比，p＜0.05**p＜0.01(单因素ANOVA\邓恩多重比较检验)。
图37示出了(A)CRP和(B)ALP随时间推移的血清化学水平。非关节 炎对照动物(开放圆)；未经治疗的关节炎动物(封闭圆)；用AB79预防性治疗 的动物(开放正方形)；用AB79治疗性治疗的动物(封闭正方形)；用地塞米松 治疗性治疗的动物(开放三角形)。数据是每组的平均值±标准误差。*如与未经 治疗的组相比，p＜0.05**p＜0.01(单因素ANOVA\邓恩多重比较检验)。
图38示出了动物中的(A)红细胞；(B)血细胞比容；(C)网织红细胞； (D)血小板；(E)中性粒细胞和(F)淋巴细胞随时间推移的水平：非关节炎对 照动物(开放圆)；未经治疗的关节炎动物(封闭圆)；用AB79预防性治疗的动 物(开放正方形)；用AB79治疗性治疗的动物(封闭正方形)；用地塞米松治疗 性治疗的动物(开放三角形)。数据是每组的平均值±标准误差。*如与未经治疗 的组相比，p＜0.05**p＜0.01(单因素ANOVA\邓恩多重比较检验)。
图39示出了外周血中的(A)NK细胞；(B)B细胞；(C)T细胞和(D) 单核细胞随时间推移的水平：非关节炎对照动物(开放圆)；未经治疗的关节炎 动物(封闭圆)；用AB79预防性治疗的动物(开放正方形)；用AB79治疗性治 疗的动物(封闭正方形)；用地塞米松治疗性治疗的动物(开放三角形)。数据 是每组的平均值±标准误差。*如与未经治疗的组相比，p＜0.05**p＜0.01(单 因素ANOVA\邓恩多重比较检验)。
图40示出了当(A)预防性或(B)治疗性施用时，单个猴中AB79的血清 浓度。当预防性(C)或治疗性(D)施用时，单个猴中抗AB79抗体的血清浓 度。
图41示出了对健康受试者以0.03(正方形)和0.06(三角形)mg进行单 次2小时IV输注AB79或以0.6mg kg-1(圆)进行单次SC注射AB79后的AB79 的平均血清浓度-时间曲线。误差条代表标准偏差(n＝6)。IV，静脉内；SC， 皮下。
图42A-42B示出了单次IV或SC施用AB79后的健康受试者的外周血中的 NK细胞的水平。IV，静脉内；SC，皮下。
图43示出了单次注射安慰剂对照物、0.1、0.3或0.6mg kg-1的AB79 SC后 的来自健康受试者的外周血中的浆母细胞、单核细胞、B、T和NK细胞的水平。
Figure RE-GDA0002626796920000051
绝对单核细胞(细胞/μL)、
Figure RE-GDA0002626796920000052
NK细胞(细胞/μL)、
Figure RE-GDA0002626796920000053
总T细胞(细 胞/μL)、
Figure RE-GDA0002626796920000054
B细胞(细胞/μL)、
Figure RE-GDA0002626796920000055
浆母细胞(细胞/μL)。居中的曲线代表 中值。NK，自然杀伤(细胞)；SC，皮下。
图44示出了单次施用安慰剂或0.003到0.06mg kg-1的AB79IV、安慰剂或 0.03到0.6mg kg-1的AB79 SC后的来自健康受试者的血清中的总IgA、IgG和 IgM相对于基线水平的变化。符号代表群组的平均值并且误差条代表平均值的 标准误差。□安慰剂，○AB790.0003mg/kg，△AB79 0.001mg/kg，+AB79 0.003mg/kg，×AB79 0.01mg/kg，◇AB790.03mg/kg，
Figure RE-GDA00026267969200000512
AB790.06mg/kg，■ AB79 0.1mg/kg，●AB79 0.3mg/kg，
Figure RE-GDA00026267969200000513
AB79 0.6mg/kg。Ig，免疫球蛋白；IV， 静脉内；SC，皮下。
具体实施方式
本发明涉及用于通过皮下施用低剂量(≤600mg)和低体积(≤3mL)的抗 CD38抗体来治疗CD38相关疾病的方法。
AB79、达雷木单抗、伊沙妥昔单抗和MOR202是主要通过抗体依赖性细胞 毒性(ADCC)杀死肿瘤的IgG1。此机制需要效应细胞(如NK细胞)结合靶 细胞上的抗体并且形成裂解突触用于以集中方式分泌细胞毒性剂。血液中的这 些效应细胞的频率比RBC和血小板的频率低几个数量级。例如，血液中的RBC 与NK细胞的比率为20,000∶1。此外，与患有活动性疾病的患者的骨髓瘤细胞相 比，在RBC上表达的CD38分子大约多36倍。已经假定，达雷木单抗、伊沙妥 昔单抗和MOR202的效应子活性会从肿瘤转移，因为效应子细胞主要由那些与RBC和血小板结合的抗CD38抗体结合，从而防止与肿瘤形成裂解突触，这导 致低效率的ADCC。相反，相对于达雷木单抗，通过AB79减少的或更瞬时的 RBC和血小板结合可以允许效应细胞集中在肿瘤上，这导致更具效率的ADCC、 更高的杀肿瘤活性和更低的有效剂量。
用与RBC和血小板结合的抗CD38抗体治疗患者也可能导致危及生命的副 作用。例如，用MOR202治疗RRMM导致若干个严重的治疗紧急不良事件 (TEAE)(参见例如，Raab等人，(2015)《血液》126：3035)。最常见的任何级 的TEAE是贫血(15名患者，34％)；疲劳(14名患者，32％)；输注相关反应 (IRR)和白细胞减少(13名患者，各30％)；淋巴细胞减少和恶心(11名患者， 各25％)。报告有28名患者TEAE≥3级(64％)；最常见的包含淋巴细胞减少 (8名患者，18％)；白细胞减少(5名患者，11％)和高血压(4名患者，9％)。 IRR主要出现在第一次输注期间；除一名患者(3级)外，所有均为1-2级。普 遍报告有感染(26名患者，59％)，但在大多数情况下不被认为是治疗相关的。 MOR202已经仅在临床上通过IV输注使用。这与本发明相反，本发明允许以低 剂量和低体积皮下施用AB79，如本文所描述的。
靶向CD38的其它莫弗西斯(Morphosys)抗体是已知的(参见例如，WO 2006/125640，其公开了四种人抗体：MOR03077、MOR03079、MOR03080和 MOR03100以及两种鼠类抗体：OKT10和IB4)。这些现有技术抗体由于各种原 因而次于AB79。MOR03080与人CD38和食蟹猴CD38结合，但以低亲和力与 人CD38结合(Biacore KD＝27.5nm)。OKT10与人CD38和食蟹猴CD38结合， 但以低/中等亲和力与人CD38结合(Biacore KD＝8.28nm)。MOR03079以高亲和力与人CD38结合(Biacore KD＝2.4nm)，但不与食蟹猴CD38结合。 MOR03100和MOR03077以中等或低亲和力与人CD38结合(Biacore KD分别＝ 10nm和56nm)。相比之下，AB79以高亲和力与人和食蟹猴CD38结合(以 Biacore KD＝5.4nm与人CD38结合)。此外，现有技术抗体的ADCC以及CDC 活性差。
更具效率的ADCC的一个优点是递送抗CD38治疗剂作为低体积注射剂的 能力。如果以135mg/mL的浓度调配AB79，则针对80kg骨髓瘤患者的有效剂 量可以施用作为＜2.5mL的单个SC注射剂。相比之下，在Ph3临床试验中测试 的达雷木单抗的SC剂量是悬浮在15mLEnhanceTM(Halozyme)的共调配物中 的1800mg。
最初在猴中表征了IV和SC施用的AB79的安全性、耐受性、药代动力学 和药效学。通过IV推注或SC注射向无菌盐水(IV)或SC稀释液中的食蟹猴 (4只雌性/组)以0.03、0.1和0.3mg/kg的单个剂量施用AB79。对于IV途径， Cmax大约是0.03到0.3mg/kg AB79的剂量比例，并且AUC(0-t)大于0.03到0.1 mg/kg AB79的剂量比例，但大约是0.1到0.3mg/kg AB79的剂量比例。对于SC 途径，在0.03到0.3mg/kg的范围内，SC给药后，Cmax和AUC(0-t)随剂量增 加而增加，但AUC(0-t)的增加成比例地大于剂量。估计T1/2在120与144小时 之间。SC途径的平均生物利用度为大约100％(对于0.03、0.1和0.3mg/kg分 别为120％、73％和120％)。通过单次静脉内或皮下注射以0.03、0.1或0.3mg/kg 对雌性食蟹猴进行的AB79施用的耐受性良好。在所有剂量水平下并通过两种途 径观察到淋巴细胞(T淋巴细胞、B淋巴细胞)中预期的药理作用轻度至中度减 少并且NK细胞群体中剂量依赖性减少；在同一剂量水平下，SC给药后的最大 细胞消耗效应类似于或略小于IV给药后观察到的最大细胞消耗效应(Roepcke 等人，(2018)《药理学研究观点(Pharmacol.Res.Perspect.)》6(3)：e00402)。在此 研究的结果的基础上，通过静脉内和皮下注射途径两者未观察到的不良水平水 平(NOAEL)被认为是0.3mg/kg。经过56天的无AB79时期后，淋巴细胞和 NK细胞的变化得以解决。针对IV的与NOAEL相关联的血清AUC和Cmax分 别为574hr*μg/mL和7.94μg/mL并且针对SC分别为698hr*μg/mL和2.15 μg/mL。
然后，在健康人类受试者的递增剂量群组中，在单次静脉内(IV)输注或1 mL皮下(SC)注射的随机、双盲、安慰剂对照研究中对AB79的安全性、耐受 性、药代动力学和药效学进行临床表征。AB79耐受性良好，所有不良事件(AE) 均为轻度或中度并且没有由于AE或输注反应而停药(Fedyk等人，(2018)《血 液》132：3249)。在较高剂量群组中，细胞因子水平的瞬时、轻度至中度增加与 表达CD38的细胞降低一致；临床症状主要包含发热、头痛和体位性低血压。实 验室测试、心电图、生命体征或体格检查均未报告与AB79治疗相关的显著发现。 AB79以类似剂量降低了浆母细胞和自然杀伤(NK)细胞的水平，其中50％的 最大有效剂量(ED50)为0.003mg/kg IV和0.1mg/kg SC。总免疫球蛋白(Ig) M和A降低，但IgG未发生相当变化。对于所有剂量水平，总白细胞、粒细胞、 淋巴细胞、红细胞和血小板计数均保持在正常范围内。总而言之，当IV或SC 施用时，AB79选择性降低健康受试者的外周血中的浆母细胞和NK细胞的水平 并且总体上是安全且耐受性良好的。此浆细胞溶解概况可以用于治疗由血浆或 NK细胞、恶性对应物(例如，多发性骨髓瘤和NK细胞白血病)以及致病性抗 体或Ig引起的病症。
与靶向浆细胞的B细胞祖细胞的治疗剂(例如，抗BAFF mAb(例如，贝 利单抗(belimumab))、抗CD20 mAb(例如，利妥昔单抗)和BTK抑制剂(例 如，巴瑞替尼(baricitinib))不同，AB79可以直接靶向浆细胞，因此可以相对 快速地诱导Ig或抗体介导的疾病的治疗应答(例如，疾病缓解)。后一种策略间 接靶向浆细胞，从而通过抑制前体分化基本上消除了浆细胞的从头产生。预先 存在的浆细胞库保持相对不受影响并且贯穿其整个寿命期间继续产生致病性抗 体/Ig。因此，预先存在的浆细胞(其中一些存活数十年)的寿命将驱动致病性 抗体/Ig的潜在减少，这就是为什么间接策略可能比AB79表现出较慢的活性和 功效开始的原因。唯一被证明直接降低浆细胞的其它治疗剂是蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)并且这类药剂的耐受性相对较差并且包含剂量限制性不良事 件(例如，神经病、腹泻)，所述剂量限制性不良事件归因于非浆细胞(例如， 神经元、上皮细胞)中的蛋白酶体抑制，因为蛋白酶体在这些组织中普遍表达。 因此，与CD38的限制性表达谱相结合的AB79对CD38的特异性创建了一种直 接靶向浆细胞的作用机制，同时使非浆细胞的作用最小化并且具有在由浆细胞、 转化的对应物和/或致病性抗体/Ig引起的疾病中提供快速功效的潜力。
本公开的抗CD38方法和单位剂量首次提供了皮下施用治疗有效的低剂量 和低体积的抗CD38抗体，从而提供了意想不到的益处并且防止了施用高剂量全 身性抗CD38抗体疗法的副作用、不便性和费用。
本发明提供了用于向需要治疗的患者皮下施用治疗有效量的经分离的抗 CD38抗体以治疗指示与CD38结合的疾病(包含血液学癌症)的方法和单位剂 型。在一些实施例中，用于皮下施用的抗体包括重链可变区和轻链可变区，所 述重链可变区包括SEQ ID NO：9，所述轻链可变区包括SEQ ID NO：10。当以出 乎意料的低剂量施用时，本文所提供的抗CD38抗体能够具有治疗有效性并且因 此可以以令人惊讶的小体积施用，从而促进皮下施用。
本发明的抗CD38抗体的另一个优点是，与临床上一些其它抗CD38抗体不 同，本发明的抗CD38抗体(例如，AB79)能够与食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno)CD38结合，从而为临床前评估给药耐受性、毒性和功效等提供 了有用的动物模型。
本发明的抗CD38抗体的另一个优点是，其可以用于筛选在同一表位处竞争 与CD38结合的其它抗体并且可以用于本发明的方法和单位剂量中。
本发明的抗CD38抗体的另一个优点是，其可以用于筛选相对于达雷木单抗 具有与RBC和/或血小板减少或替代(例如，更瞬时)结合的其它抗体(例如， 与AB79竞争或结合同一表位的抗体)并且可以用于本发明的方法和单位剂量 中。
除非本文另外定义，否则结合本发明使用的科学和技术术语应当具有本领 域的普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰。然而，万一 存在任何潜在歧义，则本文所提供的定义优先于任何字典或外部定义。此外， 除非上下文另外要求，否则单数术语应当包含复数含义并且复数术语应当包含 单数含义。除非另有说明，否则术语“或”包含“和/或”。此外，术语“包含 (including)”、“包含(includes)”或“包含(included)”的使用是非限制性的。 除非另外明确说明，否则如“元素”和“组分”等术语涵盖包括一个单位的元 素和组分以及包括多于一个亚单位的元素和组分两者。
除非另有指示，否则通常根据本领域熟知的常规方法并且如贯穿本说明书 通篇所引用和讨论的各种一般的和更具体的参考文献中所描述的执行本发明的 方法和技术。本文所描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、 遗传学、蛋白质和核酸化学与杂交、分析化学、合成有机化学和药物和药物化 学的实验室程序和技术以及所使用的与其相关的术语是本领域熟知且常用的。 标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、调配、递送和患者的治疗。如 本领域通常实现的或如本文所描述的来根据制造商的说明执行商业的酶促反应 和纯化技术。
使用所有标题和章节命名仅仅是出于清楚和参考的目的并且不应当被认为 是以任何方式进行限制。例如，本领域的技术人员将认识到根据本文所描述的 本发明的精神和范围适当地组合来自不同标题和章节的本公开的各个方面的有 用性。
为了更容易地理解本发明，以下对选择的术语进行定义。
术语“人CD38”和“人CD38抗原”是指氨基酸序列SEQ ID NO：1或其 功能部分(如表位)，如本文所定义的(表1)。通常，CD38具有胞浆内短尾、 跨膜结构域和胞外结构域。术语“食蟹猴CD38”和“食蟹猴CD38抗原”是指 氨基酸序列SEQ ID NO：2，所述氨基酸序列与人CD38的氨基酸序列92％相同 (表1)。CD38的同义词包含环ADP核糖水解酶；环ADP核糖-水解酶1；ADP 核糖基环化酶ADP-核糖基环化酶1；cADPr水解酶1；CD38-rs1；I-19；NIM-R5 抗原；2′-磷酸-环-ADP-核糖转移酶；2′-磷酸-ADP-核糖基环化酶；2′-磷酸环-ADP- 核糖转移酶；2′-磷酸-ADP-核糖基环化酶；和T10。
表1.人和食蟹猴CD38的氨基酸序列
Figure BDA0002579022700000281
术语“治疗有效量”和“治疗有效剂量”是指以剂量计并且持续所需的时 间段以实现期望的治疗结果的疗法的量，所述量足够减轻或改善病症或其一种 或多种症状的严重程度和/或持续时间；预防病症发展；引起病症消退；防止与 病症相关联的一种或多种症状的复发、发展、发作或进展；或增强或改善另一 种疗法(例如，预防剂或治疗剂)的一种或多种预防或治疗效果。治疗有效量 可以根据如个体的疾病状态、年龄、性别和重量等因素以及药物在个体中引发 期望的应答的能力而变化。抗体的治疗有效量是抗体或抗体部分的治疗有益效 果超过其任何毒性或有害效果的量。用于肿瘤疗法的抗体的治疗有效量可以通 过其稳定疾病进展的能力来测量。可以在预示人类癌症中的功效的动物模型系 统中评估化合物抑制癌症的能力。
术语“患者”和“受试者”包含人类和其它动物。因此，本文所公开的组 合物、剂量和方法适用于人和兽医疗法两者。在一个实施例中，患者是例如人 等哺乳动物。
术语“指示与CD38结合的疾病”意指其中结合配偶体(例如，本公开的抗 CD38抗体)与CD38的结合提供预防或治疗作用(包含改善疾病的一种或多种 症状)的疾病。这种结合可能导致CD38的其它因子或结合配偶体的阻断、CD38 的中和、ADCC、CDC、补体活化或某种其它预防或治疗疾病的机制。CD38的 因子和结合配偶体包含针对CD38的自身抗体，所述因子和结合配偶体被本发明 的抗CD38抗体阻断。这种结合可以被指示为细胞或细胞亚群(例如，MM细胞) 表达CD38的结果，凭此向受试者提供CD38的结合配偶体例如通过溶血或凋亡 导致这些细胞的去除(例如，裂解)。相对于正常细胞或相对于其它细胞类型， 在非疾病状态或疾病状态期间，CD38的这种表达可以是例如正常的、过表达的、 表达不当的或CD38活化的结果。
术语“血液学癌症”是指血液形成组织的恶性肿瘤并且涵盖白血病、淋巴 瘤和多发性骨髓瘤。与CD38异常表达相关联的病状的非限制性实例包含但不限 于多发性骨髓瘤(MM)(Jackson等人，(1988)《临床与实验免疫学》72：351-356)， 包含复发性难治性MM(RRMM)或新诊断的MM(NDMM)；B细胞慢性淋巴 细胞性白血病(B-CLL)(Dürig等人，(2002)《白血病》16：30-35；Morabito 等人，(2001)《白血病研究》25：927-932；Marinov等人，(1993)《肿瘤》40(6)： 355-358；以及Jelinek等人，(2001)《肝脏病学杂志(J.Haematol.)》115：854-861)； 急性成淋巴细胞性白血病(Keyhani等人，(1999)《白血病研究》24：153-159； 以及Marinov等人，(1993)《肿瘤》40(6)：355-358)；慢性髓性白血病(Marinov 等人，(1993)《肿瘤》40(6)：355-358)；急性髓性白血病(Keyhani等人，(1999) 《白血病研究》24：153-159)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；慢性髓细胞性白 血病或慢性髓性白血病(CML)；急性骨髓性白血病或急性髓性白血病(AML)； 急性淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病(HCL)；NK/T细胞淋巴瘤；骨 髓增生异常综合症(MDS)(Nurulhuda等人，(2017)《血液》130：2814)；以及 这些白血病和其它血液学疾病的所有亚型和阶段(例如，CML急变期(BP)、 慢性期(CP)或加速期(AP))，这些病状均通过本领域技术人员熟知的形态学、 组织化学和免疫学技术进行定义。
术语“肿瘤”和“肿瘤性病状”是指与由失去正常对照表征的细胞增殖相 关联的病状，失去正常对照导致一种或多种症状，包含生长失调、分化不足、 去分化、局部组织浸润和转移。
术语“经分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的 抗体。例如，与CD38特异性结合的经分离的抗体基本上不含特异性结合除CD38 之外的抗原的抗体。然而，与人CD38或食蟹猴CD38的表位、同种型或变体特 异性结合的经分离的抗体可以具有与例如来自其它物种的其它相关抗原(如 CD38物种同源物)的交叉反应性。此外，经分离的抗体可以基本上不含其它细 胞物质和/或化学品。
术语“红细胞”、“RBC”和“红血球(erythrocyte)”是指骨髓衍生的含血 红蛋白的血细胞，所述血细胞将氧气携带到细胞和组织并且将二氧化碳携带回 呼吸器官。RBC也称为红细胞、红血球(red blood corpuscle)、血细胞(haematid) 和红系细胞。
关于特定抗体、蛋白质或肽与抗原、表位或其它化学物种相互作用的术语 “特异性结合”、“与……特异性结合”和“对……具有特异性”意指明显不同于 非特异性相互作用的结合。特异性结合可以例如通过与对照分子的结合相比确 定分子的结合来测量，所述对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。 例如，特异性结合可以通过与类似于靶标的对照分子竞争来确定。本发明的抗CD38抗体特异性结合CD38配体。术语“特异性结合”、“与……特异性结合” 和“对……具有特异性”还意指相互作用取决于化学物种上的特定结构(例如， 抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体识别并结合具体的蛋白质结构，而不 是一般的蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记的“A”和 抗体的反应中，含有表位A(或游离、未标记的A)的分子的存在将降低与抗 体结合的标记的A的量。特定抗原或表位的特异性结合可以例如通过针对抗原 或表位的KD为以下值的抗体来展现：至少约10-4M、至少约10-5M、至少约 10-6M、至少约10-7M、至少约10-8M、至少约10-9M、至少约10-10M、至少约 10-11M、至少约10-12或更大，其中KD是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。 典型地，特异性结合抗原的抗体的KD比对照分子相对于抗原或表位的KD大 20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍。而且， 特定抗原或表位的特异性结合可以例如通过针对抗原或表位的KA或Ka为以下 的抗体来展现：针对相对于对照物的表位大至少20倍、50倍、100倍、500倍、 1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍，其中KA或Ka是指特定抗体-抗原相互 作用的缔合速率。
术语“在一段时间内”是指任何一段时间，例如，几分钟、几小时、几天、 几个月或几年。例如，在一段时间内可以指至少10分钟、至少15分钟、至少 30分钟、至少60分钟、至少75分钟、至少90分钟、至少105分钟、至少120 分钟、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至 少8小时、至少9小时、至少10小时、至少12小时、至少14小时、至少16小时、至少18小时、至少20小时、至少22小时、至少一天、至少两天、至少 三天、至少4天、至少5天、至少6天、至少一周、至少一个月、至少一年或 之间的任何时间间隔。换言之，组合物的抗体可以在以下时间段内被施用所述 抗体的个体吸收：至少10分钟、至少15分钟、至少30分钟、至少60分钟、 至少75分钟、至少90分钟、至少105分钟、至少120分钟、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、 至少10小时、至少12小时、至少14小时、至少16小时、至少18小时、至少 20小时、至少22小时、至少一天、至少两天、至少三天、至少4天、至少5天、 至少6天、至少一周、至少一个月、至少一年或之间的任何时间间隔。
“基本上”包括组分的组合物意指所述组合物含有大于约80重量％、在一些 实施例中大于约90重量％、在一些实施例中大于约95重量％、在一些实施例中 大于约97重量％、在一些实施例中大于约98重量％、在一些实施例中大于约99 重量％的组分。
术语“约”是指在数量、程度、体积、时间等方面接近的程度，其中在尺 寸上仅有多达10％的微小变化。
术语“药学上可接受的载剂”是指适合于向哺乳动物施用本发明的化合物 的药学上可接受的材料、组合物或媒剂。载剂包含液体或固体填充剂、稀释剂、 赋形剂、溶剂或包囊材料，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的一部分携 带或运输到另一个器官或身体的一部分。在与调配物的其它成分相容并且对患 者无害的意义上来讲，每种载剂必须是“可接受的”。在一个实施例中，所述药 学上可接受的载剂适合于静脉内施用。在另一个实施例中，所述药学上可接受 的载剂适合于局部区域注射。在另一个实施例中，所述药学上可接受的载剂适 用于皮下施用。在另一个实施例中，所述药学上可接受的载剂适用于皮下注射。
术语“药物组合物”是指适合于向受试者施用并治疗疾病的制剂。当将本 发明的抗CD38抗体作为药物施用于例如人等哺乳动物时，所述抗CD38抗体可 以“按原样”施用或作为含有抗CD38抗体的药物组合物与药学上可接受的载剂 和/或其它赋形剂组合施用。药物组合物可以呈用于以特定浓度、特定量或特定 体积施用特定剂量的抗CD38抗体的单位剂型的形式。提供了单独或与预防剂、 治疗剂和/或药学上可接受的载剂组合的包括抗CD38抗体的药物组合物。
传统抗体结构单位通常包括四聚体。每个四聚体通常由两对相同的多肽链 构成，每对具有一个“轻”链(通常分子量为约25kDa)和一个“重”链(通 常分子量为约50-70kDa)。人轻链被分类为κ和λ轻链。重链被分类为μ、δ、γ、 α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有 若干个亚类，包含但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包含 但不限于IgM1和IgM2。因此，“同种型”是指根据其恒定区的化学和抗原特性 定义的免疫球蛋白的亚类中的任何亚类。已知的人免疫球蛋白同种型是IgG1、 IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM1、IgM2、IgD和IgE。治疗性抗体还可 以包括同种型和/或亚类的杂合体。
每个可变重(VH)和可变轻(VL)区(长度为约100到110个氨基酸)由 称为“互补决定区”(CDR)的三个高变区和四个构架区(FR)(长度为约15-30 个氨基酸)构成，按以下顺序从氨基端到羧基端布置： FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。“可变”是指抗体之间的CDR序列差异 很大并且从而确定独特的抗原结合位点的事实。
高变区通常涵盖来自轻链可变区中的约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表 示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中的约31-35B (HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)的氨基酸残 基(Kabat等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》，第5版，马里兰州贝塞斯达的美国国家卫生研究院公 共卫生服务部(Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD)) 和/或形成高变环的那些残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52 (LCDR2)和91-96(LCDR3)以及重链可变区中的26-32(HCDR1)、53-55 (HCDR2)和96-101(HCDR3))(Chothia和Lesk，(1987)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196：901-917)。
当提及可变结构域中的残基(大约是轻链可变区的残基1-107和重链可变区 的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(Kabat等人，(1991)《具有免疫学 意义的蛋白质序列》，第5版，马里兰州贝塞斯达的美国国家卫生研究院公共卫 生服务部)，其中EU编号系统用于Fc区。
术语“免疫球蛋白(Ig)结构域”是指具有独特三级结构的免疫球蛋白区。 除可变结构域外，每个重链和轻链还具有恒定结构域：恒定重链(CH)结构域； 恒定轻链(CL)结构域和铰链结构域。在IgG抗体的上下文中，IgG同种型各 自具有三个CH区。每个HC和LC的羧基端部分限定了主要负责效应子功能的 恒定区。因此，在IgG的上下文中，“CH”结构域如下：根据如Kabat中的EU 索引，“CH1”是指位置118-220。根据如Kabat中的EU索引，“CH2”是指位 置237-340，并且根据如Kabat中的EU索引，“CH3”是指位置341-447。
重链的另一种类型的Ig结构域是铰链区。术语“铰链区”是指包括抗体的 第一恒定结构域与第二恒定结构域之间的氨基酸的柔性多肽。在结构上，IgG CH1结构域在EU位置220处终止，并且IgG CH2结构域在残基EU位置237 处开始。因此，对于IgG，抗体铰链在本文中被定义成包含位置221(IgG1中的 D221)到236(IgG1中的G236)，其中根据如Kabat中的EU索引进行编号。 在一些实施例中，例如在Fc区的上下文中，下部铰链包含在内，其中“下部铰 链”通常是指位置226或230。
术语“Fc区”是指包括抗体的除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的恒定 区的多肽并且在一些情况下是铰链的一部分。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG 的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域；IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白 结构域以及这些结构域的柔性铰链N端。对于IgA和IgM，Fc可以包含J链。 对于IgG，Fc结构域包括免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)以及位于 Cγ1(Cγ1)与Cγ2(Cγ2)之间的下部铰链区。虽然Fc区的边界可以变化，但 人IgG重链Fc区通常被定义成在其羧基端包含残基C226或P230，其中根据如Kabat中的EU索引进行编号。在一些实施例中，如以下更全面地描述，对Fc 区进行氨基酸修饰，例如改变与一种或多种FcγR受体或FcRn受体的结合。
CD38抗体
因此，本发明提供了经分离的抗CD38抗体，所述经分离的抗CD38抗体特 异性结合人和灵长类CD38蛋白并且与达雷木单抗相比与人RBC结合减少或小 于10％、小于20％、小于30％、小于40％、小于50％并且从而发现用于皮下施 用方法和单位剂型。在本发明中的特定用途是与人和灵长类CD38蛋白两者结合 的抗体，具体地是在临床测试中使用的灵长类，如食蟹猴(Macaca fascicularis/Crab eating macaque，在本文中也称为“cyno”)。
在一些实施例中，本发明的抗CD38抗体在许多氨基酸残基处与CD38相互 作用，所述氨基酸残基包含：K121、F135、Q139、D141、M142、D202、V203、 H205、Q236、E239、W241、S274、C275、K276、F284、C287、V288、K289、 N290、P291、E292和D293(AB79的表位)。与这些残基相互作用的任何抗体 也发现用于本发明的治疗方法和单位剂量中。
在一些实施例中，本发明的抗CD38抗体与CD38在许多氨基酸残基处相互 作用，所述氨基酸残基包含：K121、F135、Q139、D141、M142、E239、W241、 S274、C275、K276、F284、V288、K289、N290、P291、E292和D293。应当 注意，除了S274在食蟹猴中实际上是F274之外，这些残基在人和食蟹猴两者 中是相同的。这些残基可以代表特异性抗原结合肽的足迹内的免疫显性表位和/ 或残基。
在一些实施例中，所述抗CD38抗体包括重链，所述重链包括以下CDR氨 基酸序列：GFTFDDYG(SEQ ID NO：3；HCDR1 AB79)、ISWNGGKT(SEQ ID NO：4；HCDR2 AB79)和ARGSLFHDSSGFYFGH(SEQ ID NO：5；HCDR3 AB79)。在一些实施例中，所述抗体包括轻链，所述轻链包括以下CDR氨基酸 序列：SSNIGDNY(SEQ ID NO：6；LCDR1 AB79)、RDS(SEQ ID NO：7；LCDR2 AB79)和QSYDSSLSGS(SEQ ID NO：8；LCDR3 AB79)。在一些实施例中， 所述抗体包括重链和轻链，所述重链包括以下CDR氨基酸序列：GFTFDDYG (SEQ ID NO：3；HCDR1 AB79)、ISWNGGKT(SEQ ID NO：4；HCDR2 AB79)、 ARGSLFHDSSGFYFGH(SEQ ID NO：5；HCDR3 AB79)，所述轻链包括以下 CDR氨基酸序列：SSNIGDNY(SEQ ID NO：6；LCDR1AB79)、RDS(SEQ ID NO：7；LCDR2 AB79)和QSYDSSLSGS(SEQ ID NO：8；LCDR3 AB79)。在一 些实施例中，所述抗体包括重链，所述重链包括可变重(VH)链氨基酸序列SEQ ID NO：9。
Figure BDA0002579022700000361
在一些实施例中，所述抗体包括轻链，所述轻链包括可变轻(VL)链氨基 酸序列SEQ ID NO：10。
Figure BDA0002579022700000362
在一些实施例中，所述抗体包括重链和轻链，所述重链包括VH链氨基酸 序列SEQID NO：9，所述轻链包括VL链氨基酸序列SEQ ID NO：10。
如本领域技术人员将理解的，可以将可变重链和轻链与人IgG恒定结构域 序列(通常是IgG1、IgG2或IgG4)连接。
在一些实施例中，所述抗体包括重链(HC)氨基酸序列SEQ ID NO：11。
Figure BDA0002579022700000363
Figure BDA0002579022700000371
在一些实施例中，所述抗体包括轻链(LC)氨基酸序列SEQ ID NO：12。
Figure BDA0002579022700000372
在一些实施例中，所述抗体包括HC氨基酸序列SEQ ID NO：11和LC氨基 酸序列SEQID NO：12。
本发明涵盖与人和食蟹猴CD38两者结合并且与至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的这些氨基酸残基相互作用的 抗体。
在一些实施例中，抗体是全长的。本文的“全长抗体”意指构成抗体的天 然生物形式的结构，包含可变区和恒定区，包含本文所概述的一种或多种修饰。
可替代地，抗体可以是各种结构，分别包含但不限于抗体片段、单克隆抗 体、双特异性抗体、微抗体、结构域抗体、合成抗体(在本文中有时称为“抗 体模拟物”)、嵌合抗体、人源化抗体、抗体融合(有时称为“抗体缀合物”)以 及每种抗体的片段。特异性抗体片段包含但不限于：(i)由VL、VH、CL和CH1 结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iii)由单 个抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)dAb片段(Ward等人，(1989)《自 然(Nature)》341：544-546)，所述dAb片段由单个可变区组成；(v)经分离的 CDR区；(vi)F(ab′)2片段，包括两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链 Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域由肽连接子连接，所述肽连接子 允许两个结构域缔合以形成抗原结合位点(Bird等人，(1988)《科学(Science)》 242：423-426，Huston等人，(1988)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl Acad.Sci. USA)》85：5879-5883)；(viii)双特异性单链Fv(WO 03/11161)；以及(ix) “双抗体”或“三抗体”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(Tomlinson 等人，(2000)《酶学方法(Methods Enzymol.)》326：461-479；WO94/13804；Holliger 等人，(1993)《美国国家科学院院刊》90：6444-6448)。
抗体修饰
本发明进一步提供了变体抗CD38抗体。也就是说，可以对本公开的抗体进 行许多修饰，包含但不限于CDR中的氨基酸修饰(亲和力成熟)、Fc区中的氨 基酸修饰、糖基化变体、其它类型的共价修饰等。
术语“变体”意指不同于亲本多肽的多肽。氨基酸变体可以包含氨基酸的 取代、插入和缺失。通常，变体可以包含任何数量的修饰，只要蛋白质的功能 仍然存在，如本文所描述的。也就是说，例如，至于在任一AB79的CDR内生 成的氨基酸变体，抗体仍应当与人和食蟹猴CD38两者特异性结合并且不与RBC 结合或者与达雷木单抗相比与RBC的结合减少或小于10％、小于20％、小于 30％、小于40％、小于50％。术语“变体Fc区”意指借助于至少一个氨基酸修 饰而不同于野生型或亲本Fc序列的Fc序列。Fc变体可以指Fc多肽本身、包括 Fc变体多肽的组合物或氨基酸序列。例如，如果在Fc区内产生氨基酸变体，则 变体抗体应当维持针对抗体的特定应用或适应症所需的功能。例如，可以利用1 个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸取代，例如， 1-10个、1-5个、1-4个、1-3个和1-2个取代。可以如例如以下文献中所一般概 述的在一个或多个位置处进行适合的修改：美国专利第6,086,875号；第6,737,056 号；第7,317,091号；第7,670,600号；第8,084,582号；第8,188,231号；第8,367,805 号；第8,937,158号；以及第9,040,041号；所有文献均明确地通过引用整体并 入，并且具体地是针对增加与Fc受体结合的具体氨基酸取代。
可能期望例如在野生型或工程化蛋白质的Fc区中具有1-5个修饰以及在Fv 区中具有1到5个修饰。变体多肽序列将优选地具有与亲本序列(例如，AB79 的可变区、恒定区和/或重链和轻链序列)至少约80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
术语“氨基酸取代”意指亲本多肽序列中的特定位置处的氨基酸被另一种 氨基酸替换。例如，取代S100A是指变体多肽，其中位置100处的丝氨酸被丙 氨酸替换。术语“氨基酸插入”意指在亲本多肽序列中的特定位置处添加氨基 酸。术语“氨基酸缺失”意指在亲本多肽序列中的特定位置处去除氨基酸。
术语“亲本抗体”和“前体抗体”意指随后被修饰以产生变体的未经修饰 的抗体。在一个实施例中，本文的亲本抗体是AB79。亲本抗体可以指多肽本身、 包括亲本抗体的组合物或编码所述亲本抗体的氨基酸序列。因此，术语“亲本 Fc多肽”是指经修饰以产生变体的Fc多肽。
术语“野生型”、“WT”和“天然”意指在自然界中发现的氨基酸序列或核 苷酸序列，包含等位变异。WT蛋白质、多肽、抗体、免疫球蛋白、IgG等具有 尚未有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
在一些实施例中，在抗CD38抗体的一个或多个CDR中进行一个或多个氨 基酸修饰。通常，在任何单个CDR中仅取代1个、2个或3个氨基酸并且通常 在一组CDR内进行不超过4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个改变。然 而，应当理解，在任何CDR中未取代、1个、2个或3个取代的任何组合可以 独立地并任选地与任何其它取代组合。
在一些情况下，CDR中的氨基酸修饰有时称为“亲和力成熟”。“亲和力成 熟”抗体是在一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些一 个或多个改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力的改善。在一些情 况下，可能期望减少抗体对其抗原的亲和力。
可以进行亲和力成熟以使抗体对抗原的结合亲和力增加至少约10％到50％、100％、150％或更多，或与“亲本”抗体相比增加1到5倍。优选的亲和力成熟 抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟抗体通过已知 程序产生(例如，Marks等人，(1992)《生物技术(Biotechnol.)》10：779-783； Barbas等人，(1994)《美国国家科学院院刊》91：3809-3813；Shier等人，(1995) 《基因》169：147-155；Yelton等人，(1995)《免疫学杂志》155：1994-2004；Jackson 等人，(1995)《免疫学杂志》154(7)：3310-9；以及Hawkins等人，(1992)《分子 生物学杂志》226：889-896)。
可替代地，可以在本发明的抗体的一个或多个CDR中进行“沉默的”氨基 酸修饰，例如，不显著改变抗体对抗原的亲和力。这样做的原因有很多，包含 优化表达(如可以对编码本发明的抗体的核酸所进行的)。
因此，包含在本发明的CDR和抗体的定义内的是变体CDR和抗体；也就 是说，本发明的抗体可以包含AB79的一个或多个CDR中的氨基酸修饰。另外， 如以下所概述的，氨基酸修饰也可以独立地并任选地在CDR之外的任何区(包 含框架区和恒定区)中进行。
在一些实施例中，描述了对人CD38(SEQ ID NO：1)和食蟹猴CD38(SEQ ID NO：2)具有特异性的AB79的变体抗体。此抗体由六个CDR构成，其中此 抗体的每个CDR可以不同于被0个、1个、2个或更多个氨基酸取代而没有显 著改变或抑制功能的SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO： 6、SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8。
除了以上所概述的修饰之外，可以进行其它修饰。例如，可以通过并入连 接VH和VL结构域的二硫桥来使这些分子稳定化(Reiter等人，1996《自然生 物技术(NatureBiotech.)》14：1239-1245)。此外，存在抗体的各种共价修饰， 所述共价修饰可以如以下所概述的进行。
抗体的共价修饰包含在本发明的范围内，并且通常但非总是在转译后进行。 例如，通过使抗体的具体氨基酸残基与能够与所选择侧链或N端或C端残基反 应的有机衍生化试剂反应来将抗体的若干类型的共价修饰引入到分子中。
在一些实施例中，本发明的抗CD38抗体与CD38中的一个或多个残基或区 特异性结合，但也不与如BST-1(骨髓基质细胞抗原-1)和Mo5(也称为CD157) 等对CD38具有同源性的其它蛋白质交叉反应。
通常，缺乏交叉反应性意指当在适合的测定条件下使用足够量的分子来通 过ELISA和/或FACS分析进行评估时，分子之间小于约5％的相对竞争性抑制。
抑制CD38活性并降低副作用
所公开的抗体可以发现用于阻断配体-受体相互作用或抑制受体组分相互作 用。本发明的抗CD38抗体可以是“阻断”或“中和”。术语“中和抗体”是指 与CD38的结合导致CD38的生物活性(例如其与配体相互作用的能力、酶活性 和/或信号传导能力)的抑制的抗体。CD38的生物活性的抑制可以通过本领域已 知的若干种标准体外或体内测定中的一种或多种测定来评估。
术语“抑制结合”和“阻断结合”(例如，当涉及抑制/阻断CD38抗体与 CD38的结合时)涵盖部分和完全抑制/阻断两者。抑制/阻断CD38抗体与CD38 的结合可以降低或改变当CD38抗体与CD38结合而未抑制或阻断时发生的细胞 信号传导的正常水平或类型。与不与抗CD38接触的配体相比，抑制和阻断还旨 在包含当与抗CD38抗体接触时的CD38抗体对CD38的结合亲和力的任何可测 量的减少，例如将CD38抗体与CD38的结合阻断至少约10％、20％、30％、40％、 50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。
所公开的抗CD38抗体也可以抑制细胞生长。术语“抑制生长”是指与不与 抗CD38抗体接触的同一细胞的生长相比，当与抗CD38抗体接触时的细胞生长 的任何可测量的减少，例如，将细胞培养物的生长抑制至少约10％、20％、30％、 40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。
在一些实施例中，所公开的抗CD38抗体能够消耗活化的淋巴细胞和浆细 胞。在此上下文中的术语“消耗”意指与未经治疗的受试者相比，受试者的活 化的淋巴细胞和/或浆细胞的血清水平的可测量的减少。通常，观察到消耗至少 为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。 如以下实例所示出的，本发明的抗体展现出的一个特定优点是给药后这些细胞 的可恢复性；也就是说，正如一些治疗(例如用例如抗CD20抗体)所知，细胞 消耗可能持续很长的时间段，从而引起不希望的副作用。如本文所示出的，对 活化的淋巴细胞和/或浆细胞的作用是可恢复的。
与现有技术抗CD38抗体相比，本发明的抗CD38抗体允许降低副作用。在 一些实施例中，AB79不诱导TEAE。在一些实施例中，与其它抗CD38抗体(如 MOR202)相比，AB79允许降低TEAE。TEAE通常由1级、2级、3级、4级 和5级来提及，1级是最不严重的TEAE并且5级是最严重的TEAE。基于FDA 和用于肿瘤药物的不良事件通用术语标准(CTCAE)标准的其它指南(参见例 如，https：//evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_5x7.pdf；和https：//ctep.cancer.gov/protocoldevelopment/electronic_applications/ctc.htm；以及Nilsson和Koke(2001)《药物信息杂志(DrugInform.J.)》35：1289-1299)，以下关于通常如何确定此类级。1级为轻度：无症 状或轻度症状；仅临床或诊断性观察；指示无干预。2级为中度：指示进行最小 程度的局部或非侵入性干预；限制适当年龄的工具性ADL。3级为重度或有医 学意义，但不立即危及生命：指示住院或延长住院；禁用限制自我护理ADL。4 级为危及生命的后果：指示紧急干预。5级为与AE相关的死亡。
在一些实施例中，与其它抗CD38抗体(如MOR202)相比，AB79允许降 低TEAE的级。在一些实施例中，与其它抗CD38抗体相比，AB79允许将TEAE 的级从5级降低到4级。在一些实施例中，与其它抗CD38抗体相比，AB79允 许将TEAE的级从4级降低到3级。在一些实施例中，与其它抗CD38抗体相 比，AB79允许将TEAE的级从3级降低到2级。在一些实施例中，与其它抗 CD38抗体相比，AB79允许将TEAE的级从2级降低到1级。
在一些实施例中，AB79允许降低一种或多种TEAE的级，所述一种或多种 TEAE选自由以下组成的组：贫血(包含溶血性贫血)、血小板减少、疲劳、输 注相关反应(IRR)、白细胞减少、淋巴细胞减少和恶心。在一些实施例中，AB79 允许降低一种或多种TEAE的发生，所述一种或多种TEAE选自由以下组成的 组：贫血(包含溶血性贫血)、血小板减少、疲劳、输注相关反应(IRR)、白细 胞减少、淋巴细胞减少和恶心。
在一些实施例中，诊断测试用于确定贫血(包含溶血性贫血)的存在和/或 级。用于贫血(包含溶血性贫血)的诊断测试包含测量血红蛋白水平。通常， 血红蛋白水平的解释如下：(i)非常轻度/不存在贫血：≥12.0g/dL；(ii)轻度： 10-12g/dL；(iii)中度：8-10g/dL；(iv)重度：6-8g/dL；以及(v)非常重度： ≤6g/dL。用于贫血(包含溶血性贫血)的其它诊断测试包含测量触珠蛋白水平。 通常，触珠蛋白水平≤25mg/dL指示存在贫血(包含溶血性贫血)。其它诊断测 试包含直接抗球蛋白测试(DAT)(也称为直接库姆斯测试)，其用于确定RBC 是否已在体内被免疫球蛋白、补体或两者包被。
在一些实施例中，诊断测试用于确定血小板减少的存在和/或级。通常，血 小板减少的诊断测试包含测量每微升(μL)血液的血小板数量。通常，每μL血 液中存在150×103-450×103个血小板。通常，当每μL血液中存在＜150×103个血小板时，诊断为血小板减少。如果每μL血液中存在70-150×103个时，通 常诊断为轻度血小板减少。如果每μL中存在20-70×103个时，通常诊断为中度 血小板减少。如果每μL血液中存在＜20×103个时，通常诊断为重度血小板减 少。
疾病适应症
发现本发明的抗体、方法和剂量单位用于包含治疗或改善CD38相关疾病的 多种应用中。
CD38在未成熟的造血细胞中表达，在成熟细胞中下调，并且在活化的淋巴 细胞和浆细胞中以高水平重新表达。例如，在活化的B细胞、浆细胞、活化的 CD4+ T细胞、活化的CD8+ T细胞、NK细胞、NKT细胞、成熟的树突细胞(DC) 和活化的单核细胞中观察到CD38高表达。某些病状与表达CD38的细胞相关联 并且某些病状与细胞表面上的CD38的过表达、高密度表达或上调表达相关联。 如以下通常针对诊断应用所描述的，可以通过本领域已知的方法来确定细胞群 体是否表达CD38，例如，确定给定群体中被特异性结合CD38的抗体标记的细 胞的百分比的流式细胞术或免疫组织化学测定。例如，在约10％到30％的细胞 中检测到CD38表达的细胞群体可以被视为对CD38具有弱阳性；并且在大于约 30％的细胞中检测到CD38表达的细胞群体可以被视为对CD38具有确定阳性 (如Jackson等人，(1988)《临床与实验免疫学》72：351-356))，不过其它标准也 可以用于确定细胞群体是否表达CD38。可以使用本领域已知的方法来确定细胞 表面上的表达密度，如例如，已经使用特异性结合CD38的抗体进行荧光标记的 细胞的平均荧光强度的流式细胞术测量结果。
本发明的治疗性抗CD38抗体通过多种作用机制(包含CDC和ADCC途径 两者)与CD38阳性细胞结合，从而导致这些细胞的消耗。
本领域已知某些病状与表达CD38的细胞相关联，并且某些病状与细胞表面 上的CD38的过表达、高密度表达或上调表达相关联。如以下通常针对诊断应用 所描述的，可以通过本领域已知的方法来确定细胞群体是否表达CD38，例如确 定给定群体中被特异性结合CD38的抗体标记的细胞的百分比的流式细胞术或 免疫组织化学测定。例如，在约10％到30％的细胞中检测到CD38表达的细胞 群体可以被视为对CD38具有弱阳性；并且在大于约30％的细胞中检测到CD38 表达的细胞群体可以被视为对CD38具有确定阳性(Jackson等人，(1988)《临 床与实验免疫学》72：351-356))，不过其它标准也可以用于确定细胞群体是否表 达CD38。可以使用本领域已知的方法来确定细胞表面上的表达密度，如例如， 已经使用特异性结合CD38的抗体进行荧光标记的细胞的平均荧光强度的流式 细胞术测量结果。
一方面，本发明提供了治疗与表达CD38的细胞的增殖相关联的病状的方 法，所述方法包括向患者施用药学有效量的所公开的抗体。在一些实施例中， 所述病状是癌症，并且在特定实施例中，所述癌症是血液学癌症。在一些实施 例中，所述病状是多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性 白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病和浆 细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。
在一些实施例中，所述病状是多发性骨髓瘤，并且与达雷木单抗相比，治 疗性抗CD38抗体不与人RBC结合或结合减少。在一些实施例中，所述病状是 多发性骨髓瘤，并且与达雷木单抗相比，治疗性抗CD38抗体不与食蟹猴RBC 结合或结合减少。在一些实施例中，所述病状是多发性骨髓瘤并且治疗性抗 CD38抗体不与人或食蟹猴RBC结合或结合减少。
CLL是西方世界的成年人中最常见的白血病。CLL涉及成熟出现的淋巴细 胞(涉及具有骨髓的逐渐浸润并且存在于外周血中的淋巴结和其它淋巴样组织) 的克隆扩增。B细胞形式(B-CLL)代表大多数情况。
慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)的B细胞形式
B-CLL是一种无法治愈的疾病，其以多年来以长时间的方式积聚在骨髓和 外周血中的无变应性单克隆B谱系细胞逐渐增加为特征。CD38的表达被视为 B-CLL的独立不良预后因素(Hamblin等人，(2002)《血液》99：1023-9)。
B-CLL以惰性和侵袭性两种亚型为特征。这些临床表型与免疫球蛋白重链 可变区(IgVH)基因中体细胞突变的存在或不存在相关。如本文所使用的，惰 性B-CLL是指具有突变的IgVH基因和/或呈现出与惰性B-CLL相关联的一种或 多种临床表型的受试者的病症。如本文所使用的，短语侵袭性B-CLL是指具有 未突变的IgVH基因和/或呈现出与侵袭性B-CLL相关联的一种或多种临床表型 的受试者的病症。
如今，B-CLL的标准疗法是姑息疗法并且主要通过细胞抑制剂苯丁酸氮芥(chlorambucil)或氟达拉滨(fludarabine)进行。当复发时，通常开始组合使用 氟达拉滨、环磷酰胺(cyclophosphamide)和利妥昔单抗(抗CD20单克隆抗体) 或阿仑单抗(alemtuzumab)(抗CD52的单克隆抗体)的组合疗法。在一项研究 中，三十五名患有复发性或难治性侵袭性B细胞NHL的患者经受高剂量化学疗 法(HCT)，然后从第40天起每周经受共4个剂量的利妥昔单抗375mg/m2并且 从第180天开始重复多于四个剂量。利妥昔单抗输注耐受性良好，其中仅有一 种3/4级输注相关毒性。在此试验中提出的预料外不良事件是多于一半的患者出 现延迟的中性粒细胞减少(19/35患者中出现46次3级或4级中性粒细胞减少 的发作；Kosmas等人，(2002)《白血病》16：2004-2015，可以在 https：//www.nature.com/articles/2402639上在线找到)。在另一项研究中，六名患 者每隔一天接受通过静脉内输注的阿仑单抗，每周三次，持续12周。在每日的 基础上逐渐增加剂量(3、10并且然后30mg)，直到患者耐受为止。主要TEAE 为血液学不良事件中的贫血、中性粒细胞减少(各6/6位患者)和血小板减少(5/6 位患者)(Ishizawa等人，(2017)《日本临床肿瘤学杂志(Jpn.J.Clin.Oncol.)》 47(1)：54-60)。因此，对于血液学不良事件减少的B-CLL的治疗存在关键的未满 足的医疗需要。在一些实施例中，如以下所概述的，提供了用于使用所公开的 抗CD38抗体治疗B-CLL的方法，所述方法可以使用任选地且独立地包含任何 以上药物的组合疗法来进行。
多发性骨髓瘤(MM)
多发性骨髓瘤是B细胞谱系的恶性病症，其以浆细胞在骨髓和/或髓外部位 的肿瘤性增殖为特征。骨髓瘤细胞的增殖引起各种影响，包含溶解性骨病变 (孔)、器官损伤、贫血(红细胞数量减少)、异常蛋白质的产生(伴随肾脏、神 经和其它器官的损伤)、降低的免疫系统功能、肾损害和血钙水平升高(高钙血 症)。当前的治疗选择包含化学疗法，优选地在可能的情况下与自体干细胞移植 (ASCT)相关联。这些治疗方案展现出中等应答速率。然而，仅观察到总生存 期的微小变化并且中值生存期为大约3年。因此，对于多发性骨髓瘤的治疗存 在关键的未满足的医疗需要。在一些实施例中，提供了用于使用所公开的抗体 治疗多发性骨髓瘤的方法。
新诊断的MM(NDMM)区别于复发性MM或复发性和难治性MM (RRMM)。复发性MM被视为既往应答后的疾病复发，并且已经基于客观实验 室和放射学标准进行了定义：血清或尿液单克隆蛋白(M-蛋白)增加≥25％；或 来自其最低点的受累与未受累血清游离轻链之间的差异≥25％；或新浆细胞瘤或 高钙血症的发展。在患有非分泌性疾病的患者中，将复发定义为骨髓浆细胞增 加。通常，已经将复发治疗的指征定义为以上所描述的一种或多种MM症状的 出现或再次出现或快速且持续的生物化学复发。将复发性/难治性MM(RRMM) 定义为在既往疗法中已经实现最小应答(MR)或更好应答的患者在疗法中或在 最后一次治疗后60天内变得无应答或进展的疾病(Sonneveld和Broijl(2016) 《血液学(Haematologica)》101(4)：396-406)。
意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和冒烟型多发性骨髓瘤(SMM)
意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和冒烟型多发性骨髓瘤(SMM) 是无症状的恶变前病症，其以骨髓中的单克隆浆细胞增殖以及不存在终末器官 损伤为特征。
冒烟型多发性骨髓瘤(SMM)是具有进展为有症状或活动性多发性骨髓瘤 的高风险的无症状的浆细胞增殖性病症(Kyle等人，(2007)《新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)》356(25)：2582-2590)。定义SMM的国际共识标准于2003 年采用并且要求患者的M蛋白水平＞30g/L和/或骨髓克隆浆细胞＞10％(国际 骨髓瘤工作组(Internat.Myeloma Working Group)(2003)《肝脏病学杂志》121： 749-757)。患者必须无器官或相关组织损害，如骨病变或症状。最近的研究已经 识别了SMM的两个亚群：i)患有进化性疾病的患者和ii)患有非进化性疾病的 患者(国际骨髓瘤工作组(2003)《肝脏病学杂志》121：749-757)。
由于不存在终末器官损伤，因此SMM类似于意义未明的单克隆丙种球蛋白 病(MGUS)(Kyle等人，(2007)《新英格兰医学杂志》356(25)：2582-2590)。 然而，在临床上，SMM更有可能在20岁时进展为活动性多发性骨髓瘤或淀粉 样变性病(对于SMM为78％可能性对比对于MGUS为21％)(Kyle等人，(2007) 《新英格兰医学杂志》356(25)：2582-2590)。
定义MGUS的国际共识标准要求患者的M蛋白水平＜30g/L、骨髓浆细胞＜ 10％并且不存在器官或相关组织损害，包含骨病变或症状(国际骨髓瘤工作组 (2003)《肝脏病学杂志》121：749-757)。
CD38相关病状
本发明的抗体、方法和剂量单位发现用于各种应用中，包含治疗或改善 CD38相关疾病，如与炎症和免疫疾病相关联的疾病和病状，具体地是与活化的 淋巴细胞相关联的疾病。本发明的抗CD38抗体通过多种作用机制(包含CDC 和ADCC途径两者)与CD38阳性细胞结合，从而导致这些细胞(如活化的淋 巴细胞)的消耗。
因此，可以使用本发明的抗体治疗表现出作为疾病的组成部分的CD38表达 增加或表达CD38的细胞数量增加的任何自身免疫性疾病。这些包含但不限于同 种异体胰岛移植排斥、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄 森氏病、抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCA)、肾上腺自身免疫性疾病、自身 免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性中性粒 细胞减少症、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少症、自身免 疫性荨麻疹、白塞氏病(Behcet′s disease)、大疱性类天疱疮、心肌症、卡斯尔 曼综合症(Castleman′s syndrome)、腹腔云杉状皮炎(celiac spruce-dermatitis)、 慢性疲劳免疫功能紊乱综合症、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(hronicinflammatory demyelinating polyneuropathy)、查格-施特劳斯(Churg-StraussSyndrome)综合征、瘢痕性类天疱疮、CREST综合征，冷凝集素病、克罗恩氏 病(Crohn′sdisease)、皮肌炎、盘状狼疮、原发性混合性冷沉球蛋白血症、VIII 因子缺乏症、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球性肾炎、格雷夫氏病(Grave′s disease)、 格林-巴利综合征(Guillain-Barre)、古德帕斯彻氏综合症(Goodpasture′s syndrome)、移植物抗宿主病(GVHD)、桥本氏甲状腺炎、A型血友病、特发性 肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病、IgM多发性神经病、 免疫介导的血小板减少症、幼年型关节炎、川崎病(Kawasaki′s disease)、扁平 苔藓、狼疮性红斑、美尼尔氏病(Meniere′s disease)、混合性结缔组织病、多发 性硬化症、1型糖尿病、重症肌无力、寻常型天疱疮、恶性贫血，结节性多动脉 炎、多发性软骨炎、多腺综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发 性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷诺氏 现象(Reynauld′s phenomenon)、莱特尔氏综合征(Reiter′s syndrome)、类风湿 性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、实体器官移植排斥、僵人综合征、 全身性红斑狼疮、高安动脉炎(takayasu arteritis)、暂时性动脉炎/巨细胞性动脉 炎、血栓性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、如疱疹样皮炎血管炎等血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿(Wegner′s granulomatosis)。
在一些实施例中的特定用途是使用本发明抗体用于多种疾病的诊断和/或治 疗，所述疾病包含但不限于自身免疫性疾病，包含但不限于全身性红斑狼疮 (SLE)、类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎和移植物抗宿 主病。
因此，例如，可以治疗具有高浆细胞含量的患者，如表现出高浆细胞水平 的SLE患者以及示出对基于CD20的疗法无应答的RA患者。
用于体内施用的抗体组合物
通过将具有期望纯度的抗体与任选的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定 剂(《雷明顿氏药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)第16版(1980) Osol，A编辑》混合来制备根据本发明使用的抗体的调配物用于以冻干调配物或 水溶液的形式储存。
根据所治疗的特定适应症所必需的，本文的调配物还可以含有一种以上的 活性化合物，优选地是具有不会彼此产生不利影响的互补活性的活性化合物。 例如，可能期望提供具有其它特异性的抗体。可替代地或另外，组合物可以包 括细胞毒性剂、细胞因子、生长抑制剂和/或小分子拮抗剂。此类分子以对预期 目的有效的量适合地组合存在。
皮下施用
本发明基于出乎意料的发现：本文所描述的抗CD38抗体(如AB79)可以 以治疗有效的足够低的剂量施用，从而允许皮下施用低体积的液体调配物。皮 下施用是一种微创性施用模式并且被认为是最通用的，并且因此是可以用于短 期和长期疗法的期望的施用模式。在一些实施例中，皮下施用可以通过注射器 执行。在一些实施例中，当需要多个注射器或装置时，可以旋转注射器或装置 的部位。
因此，皮下调配物对于患者来说易于自行施用，特别是由于所述调配物可 能必须在患者的整个一生期间(例如，早在儿童一岁时就开始)定期服用。此 外，皮下递送的容易性和速度允许增加患者的依从性并且在需要时更快地获得 药物。因此，本文所提供的抗CD38抗体的皮下调配物提供了优于现有技术的实 质益处并且解决了某些未满足的需要。
在一些实施例中，根据已知方法将本发明的抗体通过皮下途径施用于受试 者。在一些实施例中，本发明的抗体可以通过皮下注射施用。在具体实施例中， 将皮下调配物以重复或连续注射方式皮下注射到患者的相同部位(例如，施用 于上臂、大腿的前表面、腹部的下部或上背部)。在其它实施例中，将皮下调配 物皮下注射到患者的不同或旋转部位。可以采用单次或多次施用调配物。
在一些实施例中，本文所描述的皮下单位剂型可以用于治疗癌症。在一些 实施例中，本文所描述的皮下单位剂型可以用于治疗血液学癌症。在一些实施 例中，本文所描述的皮下单位剂型可以用于治疗多发性骨髓瘤。
在一些实施例中，瞬时结合人RBC的本发明的抗体具有增加的生物利用度。 在一些实施例中，瞬时结合RBC的本发明的抗体的生物利用度增加10％、20％、 30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或更多。在一些实施例中， 瞬时结合人RBC的本发明的抗体的生物利用度为110％、120％、130％、140％、 150％、160％、170％、180％、190％、200％、250％、或300％或更多。
在一些实施例中，生物利用度的增加允许皮下施用。在一些实施例中，生 物利用度的增加是由于本发明的抗体瞬时结合RBC的事实。在一些实施例中， 人生物利用度的增加是由于本发明的抗体以不同的方式与人RBC结合的事实。
在一些实施例中，本发明的抗体导致NK细胞、B细胞和/或T细胞的消耗。 在一些实施例中，与B细胞或T细胞的消耗相比，本发明的抗体允许增加NK 细胞的消耗。在一些实施例中，与B细胞相比，本发明的抗体允许增加NK细 胞的消耗，以及与T细胞相比，允许增加NK细胞的消耗。在一些实施例中， 与B细胞相比，本发明的抗体允许增加NK细胞的消耗，以及与T细胞相比，允 许增加B细胞的消耗。在一些实施例中，与B细胞相比，本发明的抗体允许增 加NK细胞的消耗，并且与T细胞相比，允许增加B细胞的消耗。
在某些实施例中，与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所 描述的抗CD38抗体在皮下施用后的生物利用度介于至少50％与至少80％之间。 在某些实施例中，与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所描述 的抗CD38抗体在皮下施用后的生物利用度介于至少60％与至少80％之间。在 某些实施例中，与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所描述的 抗CD38抗体在皮下施用后的生物利用度介于至少50％与70％之间。在某些实 施例中，与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所描述的抗CD38 抗体在皮下施用后的生物利用度介于至少55％与65％之间。在某些实施例中， 与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所描述的抗CD38抗体在皮 下施用后的生物利用度介于至少55％与70％之间。
在某些实施例中，与对于同一剂量而言归一化的静脉内施用相比，本文所 描述的抗CD38抗体在皮下施用后的生物利用度为至少40％、至少45％、至少 50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至 少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、 至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、 至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、 至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％或至少85％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为50％-80％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少50％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少55％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少60％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少65％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少70％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少75％。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，其中与对于同一剂量而言归一 化的静脉内施用相比，瞬时结合人RBC的本发明的抗体在皮下施用后的生物利 用度为至少80％。
在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体以单次大剂量注射皮下施用。 在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体每月皮下施用。在某些实施例中， 本文所描述的抗CD38抗体每三周一次皮下施用。在某些实施例中，本文所描述 的抗CD38抗体每两周皮下施用。在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体 每周皮下施用。在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体每周两次皮下施用。 在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体每日皮下施用。在某些实施例中， 本文所描述的抗CD38抗体每12小时皮下施用。在某些实施例中，本文所描述 的抗CD38抗体每8小时皮下施用。在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗 体每六小时皮下施用。在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体每四小时皮 下施用。在某些实施例中，本文所描述的抗CD38抗体每两小时皮下施用。
在一些实施例中，所述皮下单位剂型以约0.01mg每千克体重到约0.8毫克 每千克体重的剂量施用。在一些实施例中，所述皮下单位剂型包括足够施用约 0.02mg每千克体重到约0.75毫克每千克体重的剂量的量。在一些实施例中，所 述皮下单位剂型包括足够施用约0.02mg每千克体重到约0.7毫克每千克体重的 剂量的量。在一些实施例中，所述皮下单位剂型包括足够施用约0.03mg每千克 体重到约0.6毫克每千克体重的剂量的量。在一些实施例中，所述量以介于约 0.25毫升(mL)与约3.5毫升(mL)之间的体积调配。在一些实施例中，所述 量以介于约0.5mL与约3mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介 于约0.5mL与约2.5mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约 0.5mL与约2mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约1mL与 约2mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.25mL与约1.25 mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.5mL与约1.25mL 之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.75mL与约1.25mL之间 的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.75mL与约1mL之间的体积 调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.9mL与约1.5mL之间的体积调配。 在一些实施例中，所述量以介于约0.9mL与约1.1mL之间的体积调配。在一些 实施例中，所述量以介于约1mL与约1.0mL之间的体积调配。在一些实施例 中，所述量以介于约0.95mL与约1.05mL之间的体积调配。在一些实施例中， 所述量以约3.5mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约3mL的体积调 配。在一些实施例中，所述量以约2.5mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约2mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约1.5mL的体积调配。 在一些实施例中，所述量以约1mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约 0.5mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约0.25mL的体积调配。
单位剂型
在一些实施例中，治疗性抗CD38抗体被调配作为单位剂型的一部分。在一 些实施例中，所述抗体包括重链，所述重链包括以下CDR氨基酸序列： GFTFDDYG(SEQ ID NO：3；HCDR1 AB79)、ISWNGGKT(SEQ ID NO：4； HCDR2 AB79)和ARGSLFHDSSGFYFGH(SEQ ID NO：5；HCDR3 AB79)。在 一些实施例中，所述抗体包括轻链，所述轻链包括以下CDR氨基酸序列：SSNIGDNY(SEQ ID NO：6；LCDR1 AB79)、RDS(SEQ ID NO：7；LCDR2 AB79) 和QSYDSSLSGS(SEQID NO：8；LCDR3 AB79)。在一些实施例中，所述抗体 包括重链和轻链，所述重链包括以下CDR氨基酸序列：GFTFDDYG(SEQ ID NO： 3；HCDR1 AB79)、ISWNGGKT(SEQ ID NO：4；HCDR2AB79)、ARGSLFHDSSGFYFGH(SEQ ID NO：5；HCDR3 AB79)，所述轻链包括以下 CDR氨基酸序列：SSNIGDNY(SEQ ID NO：6；LCDR1 AB79)、RDS(SEQ ID NO：7；LCDR2 AB79)和QSYDSSLSGS(SEQ ID NO：8；LCDR3AB79)。在一 些实施例中，所述抗体包括重链，所述重链包括可变重(VH)链氨基酸序列SEQ ID NO：9。
Figure BDA0002579022700000551
在一些实施例中，所述抗体包括轻链，所述轻链包括可变轻(VL)链氨基 酸序列SEQ ID NO：10。
Figure BDA0002579022700000552
在一些实施例中，所述抗体包括重链和轻链，所述重链包括VH链氨基酸 序列SEQID NO：9，所述轻链包括VL链氨基酸序列SEQ ID NO：10。
如本领域技术人员将理解的，可以将可变重链和轻链与人IgG恒定结构域 序列(通常是IgG1、IgG2或IgG4)连接。
在一些实施例中，所述抗体包括重链(HC)氨基酸序列SEQ ID NO：11。
Figure BDA0002579022700000553
Figure BDA0002579022700000561
在一些实施例中，所述抗体包括轻链(LC)氨基酸序列SEQ ID NO：12。
Figure BDA0002579022700000562
在一些实施例中，所述抗体包括HC氨基酸序列SEQ ID NO：11和LC氨基 酸序列SEQID NO：12。
在一些实施例中，包括抗CD38抗体的调配物是单位剂型。在一些实施例中， 所述单位剂型包括足够施用约0.01mg每千克体重到约0.8毫克每千克体重的剂 量的量。在一些实施例中，所述单位剂型包括足够施用约0.02mg每千克体重到 约0.75毫克每千克体重的剂量的量。在一些实施例中，所述单位剂型包括足够 施用约0.02mg每千克体重到约0.7毫克每千克体重的剂量的量。在一些实施例 中，所述单位剂型包括足够施用约0.03mg每千克体重到约0.6毫克每千克体重 的剂量的量。在一些实施例中，所述量以介于约0.25毫升(mL)与约3.5毫升 (mL)之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.5mL与约3mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.5mL与约2.5mL之间的 体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.5mL与约2mL之间的体积调 配。在一些实施例中，所述量以介于约1mL与约2mL之间的体积调配。在一 些实施例中，所述量以介于约0.25mL与约1.25mL之间的体积调配。在一些实 施例中，所述量以介于约0.5mL与约1.25mL之间的体积调配。在一些实施例 中，所述量以介于约0.75mL与约1.25mL之间的体积调配。在一些实施例中， 所述量以介于约0.75mL与约1mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量 以介于约0.9mL与约1.5mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于 约0.9mL与约1.1mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约1mL 与约1.1mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以介于约0.95mL与约 1.05mL之间的体积调配。在一些实施例中，所述量以约3.5mL的体积调配。 在一些实施例中，所述量以约3mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约 2.5mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约2mL的体积调配。在一些实 施例中，所述量以约1.5mL的体积调配。在一些实施例中，所述量以约1mL 的体积调配。在一些实施例中，所述量以约0.5mL的体积调配。在一些实施例 中，所述量以约0.25mL的体积调配。
在一些实施例中，本文提供的抗CD38抗体单位剂型可以进一步包括一种或 多种药学上可接受的赋形剂、载剂和/或稀释剂。
调整剂量方案以提供最佳的期望应答(例如，治疗应答)。例如，可以施用 单个大丸剂、可以随时间推移施用若干分次剂量或可以如治疗状况的紧急情况 所指示的成比例地降低或增加剂量。组合物可以以剂量单位形式调配以易于施 用和剂量均一性。在一些实施例中，如本文所使用的单位剂型可以指适合作为 待治疗个体的单位剂量的物理离散单位，每个单位含有与所需药物载剂缔合的、 经过计算产生所期望的治疗效果的预定量的活性化合物。
本发明的剂量单位形式的规格由如下决定并且直接依赖于：(a)活性化合 物的独特特性和待实现的特定治疗效果和(b)本领域中复合用于治疗个体的这 种活性化合物的固有局限性。
本发明中所使用的抗CD38抗体的高效剂量和剂量方案取决于待治疗的疾 病或病状的类型和严重程度并且可以由本领域的技术人员确定。
本文所提供的剂型基于皮下施用，所述皮下施用至少部分基于与达雷木单 抗相比较低的与RBC结合或保持与其结合的能力。不受任何特定理论的束缚， 但这种结合活性可能是由于AB79与RBC结合的瞬时性质。在一些实施例中， 所述治疗性抗体与人RBC瞬时结合。在一些实施例中，所述治疗性抗CD38抗 体与食蟹猴RBC瞬时结合。在一些实施例中，所述治疗性抗CD38抗体与人或 食蟹猴RBC瞬时结合。在一些实施例中，所述治疗性抗CD38抗体与人和食蟹 猴RBC瞬时结合。
在一个实施例中，抗CD38抗体以约0.01到约1mg/kg(如约0.02到约0.8 mg/kg)的每周剂量通过皮下施用来施用。可以重复这种施用，例如，1到14 次，如3到5次。治疗有效量的本发明中所使用的抗CD38抗体的示例性非限制 性范围为约0.01-1mg/kg，如约0.01-0.8mg/kg、约0.02-0.75mg/kg、约0.02-0.7 mg/kg或约0.03-0.6mg/kg。
作为非限制性实例，使用每24、18、12、8、6、4或2小时的单个剂量或 分次剂量或其任何组合，在治疗开始后，根据本发明的治疗可以以约0.01到约 1mg/kg(如0.009、0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.11、0.13、0.15、0.17、0.19、 0.21、0.23、0.25、0.27、0.29、0.31、0.33、0.35、0.37、0.39、0.41、0.43、0.45、 0.47、0.49、0.51、0.53、0.55、0.57、0.59、0.61、0.63、0.65、0.67、0.69、0.71、 0.72、0.73、0.75、0.77、0.79、0.81、0.83、0.85、0.87、0.89、0.91、0.93、0.95、 0.97或0.99、1.0或1.1mg/kg)的量作为抗体的每日剂量在以下时间提供：每天； 以下中的至少一天：第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39或40天；或可替代地，以下中的至少一周：第1、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周。
在一个实施例中，抗CD38抗体以约0.01到约1mg/kg(如约0.02到约0.8 mg/kg)的每周剂量来施用。可以重复这种施用，例如，1到14次，如3到5 次。所述施用可以通过在2到24小时(如2到12小时)的时间段内的连续输 注来执行。这种方案可以例如在6个月或12个月后根据需要重复一次或多次。 可以通过测量施用后血液中的本发明化合物的量(例如，通过取出生物样品并 且使用靶向抗CD38抗体的抗原结合区的抗独特型抗体)来确定或调整剂量。
在另外一个实施例中，抗CD38抗体每周施用一次，持续2到12周，如持 续3到10周，如持续4到8周。
在一个实施例中，抗CD38抗体通过维持疗法施用，例如，一周一次，持续 6个月或更长时间的时间段。
在一个实施例中，通过方案来施用抗CD38抗体，所述方案包含：一次抗 CD38抗体输注，然后输注与放射性同位素缀合的抗CD38抗体。所述方案可以 在例如7到9天之后重复。
在一些实施例中，本发明的抗CD38抗体与一种或多种另外的治疗剂(例如， 化学治疗剂)组合使用。DNA损伤化学治疗剂的非限制性实例包含拓扑异构酶 I抑制剂(例如，伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)、喜树碱 (camptothecin)及其类似物或代谢物以及多柔比星(doxorubicin))；拓扑异构酶 II抑制剂(例如，依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)以及柔红霉素 (daunorubicin))；烷化剂(例如，美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥、白消安 (busulfan)、噻替派(thiotepa)、异环磷酰胺(ifosfamide)、卡莫司汀(carmustine)、 洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、链脲霉素(streptozocin)、达卡 巴嗪(decarbazine)、甲胺喋呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)以 及环磷酰胺)；DNA嵌入剂(例如，顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin) 以及卡铂(carboplatin))；DNA嵌入剂以及自由基产生剂，如博莱霉素 (bleomycin)；以及核苷模拟物(例如，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、卡培他滨 (capecitibine)、吉西他滨(gemcitabine)、氟达拉宾(fludarabine)、阿糖胞苷 (cytarabine)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、喷司他汀 (pentostatin)以及羟基脲(hydroxyurea))。
破坏细胞复制的化学治疗剂包含：太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)和相关类似物；长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastin)和相 关类似物；沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)和相关类似物(例 如，CC-5013和CC-4047)；蛋白质酪氨酸激酶抑制剂(例如，甲磺酸伊马替尼 (imatinib mesylate)和吉非替尼(gefitinib))；蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐 米)；NF-κB抑制剂，包含IκB激酶抑制剂；与在癌症中过表达、表达不当或活 化的蛋白质结合并且从而下调细胞复制的抗体(例如，曲妥珠单抗(trastuzumab)、 利妥昔单抗、西妥昔单抗(cetuximab)和贝伐单抗(bevacizumab))；以及已知 在癌症中上调、过表达、表达不当或活化的蛋白质或酶的其它抑制剂，其抑制 下调了细胞复制。
在一些实施例中，本发明的抗体可以在万珂
Figure BDA0002579022700000601
(硼替佐米)治 疗之前、同时或之后使用。
治疗方式
在本发明的方法中，疗法用于提供关于疾病或病状的阳性治疗应答。“阳性 治疗应答”是指疾病或病状的改善和/或与疾病或病状相关联的症状的改善。例 如，阳性治疗应答将指疾病的以下改善中的一种或多种改善：(1)肿瘤细胞数 量降低；(2)肿瘤细胞死亡增加；(3)抑制肿瘤细胞存活；(5)抑制(即，减 慢到某种程度，优选地停止)肿瘤生长；(6)增加患者存活率；以及(7)来自 与疾病或病状相关联的一个或多个症状的一些缓解。
可以通过对所述疾病或病状具有特异性的标准化应答标准来确定任何给定 疾病或病状的阳性治疗应答。可以使用如磁共振成像(MRI)扫描、x放射影像 成像、计算机断层摄影术(CT)扫描、骨扫描成像、内窥镜检查和包含骨髓穿 刺(BMA)在内的肿瘤活检取样等筛选技术以及对循环中的肿瘤细胞进行计数 来评估针对肿瘤形态(即，总体肿瘤负荷、肿瘤大小等)变化的肿瘤应答。
除了这些阳性治疗应答之外，经受疗法的受试者可能经历与疾病相关联的 症状的改善的有益效果。对于B细胞肿瘤，受试者可能经历例如盗汗、发烧、 体重减轻和/或荨麻疹等所谓的B症状的减少。对于恶变前病状，用抗CD38治 疗性抗体的疗法可以阻断和/或延长相关恶性病状的发展，例如，患有意义未明 的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)的受试者中的多发性骨髓瘤的发展前的时间。
疾病的改善可以表征为完全应答。术语“完全应答”是指不存在临床上可 检测的疾病，所述疾病在骨髓瘤的情况下具有任何先前异常的放射学研究、骨 髓和脑脊髓液(CSF)或异常单克隆蛋白的正常化。
根据本发明的方法治疗后，这种应答可以持续至少4到8周或至少6到8 周。可替代地，疾病的改善可以归类为部分应答。术语“部分应答”是指不存 在新病变的情况下，所有可测量的肿瘤负荷(即，受试者中存在的恶性细胞的 数量或测量的肿瘤块的体积或异常单克隆蛋白的数量)减少至少约50％，所述 减少可以持续4到8周或6到8周。
根据本发明的治疗包含所使用的“治疗有效量”的药物。“治疗有效量”是 指以剂量计并且持续所需的时间段以实现期望的治疗结果的有效量。
术语“治疗有效量”和“治疗有效剂量”是指以剂量计并且持续所需的时 间段以实现期望的治疗结果的疗法的量，所述量足够减轻或改善病症或其一种 或多种症状的严重程度和/或持续时间；预防病症发展；引起病症消退；防止与 病症相关联的一种或多种症状的复发、发展、发作或进展；或增强或改善另一 种疗法(例如，预防剂或治疗剂)的一种或多种预防或治疗效果。治疗有效量 可以根据如个体的疾病状态、年龄、性别和重量等因素以及药物在个体中引发 期望的应答的能力而变化。治疗有效量也是抗体或抗体部分的治疗有益效果超 过其任何毒性或有害效果的量。用于肿瘤疗法的抗体的“治疗有效量”可以通过其稳定疾病进展的能力来测量。可以在预示人类肿瘤中的功效的动物模型系 统中评估化合物抑制癌症的能力。
可替代地，通过熟练的从业者已知的体外测定，组合物的这种性质可以通 过检验化合物抑制肿瘤生长或诱导凋亡的能力来评估。治疗有效量的治疗化合 物可以减小肿瘤大小或以其它方式改善受试者的症状。本领域普通技术人员将 能够基于如受试者的大小、受试者的症状的严重程度和特定组合物或所选择的 施用途径等因素确定此类量。
抗CD38抗体试剂盒
在本发明的另一方面，提供了用于治疗与血液学癌症相关联的疾病或病状 的试剂盒。在一个实施例中，试剂盒包括一定剂量的本文所描述的抗CD38抗体， 如AB79。在一些实施例中，本文所提供的试剂盒可以含有如本文所提供的一个 或多个剂量的液体或冻干调配物。当试剂盒包括本文所描述的抗CD38抗体(如 AB79)的冻干调配物时，试剂盒通常还将含有用于重构液体调配物的适合液体， 例如，无菌水或药学上可接受的缓冲液。在一些实施例中，试剂盒可以包括预 包装在注射器中的本文所描述的抗CD38抗体调配物以供医疗保健专业人员皮 下施用或用于家庭使用。
在某些实施例中，试剂盒将用于单次施用或单个剂量的本文所描述的抗 CD38抗体，如AB79。在其它实施例中，试剂盒可以含有多个剂量的本文所描 述的抗CD38抗体，如用于皮下施用的AB79。在一个实施例中，试剂盒可以包 括预包装在注射器中的本文所描述的抗CD38抗体调配物以供医疗保健专业人 员皮下施用或用于家庭使用。
制品
在其它实施例中，提供了含有可用于治疗上文所描述病症的材料的制品。 制品包括容器和标签。适合的容器包含例如瓶子、小瓶、注射器和试管。容器 可以由如玻璃或塑料等多种材料形成。容器容纳用于有效治疗病状的组合物并 且可以具有无菌接入端口(例如容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的静 脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的活性剂是抗体。容器上或与容器相关联的标签 指示组合物用于治疗选择的病状。制品可以进一步包括第二容器，所述第二容 器包括药学上可接受的缓冲液，如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。 其可以进一步包含从商业和用户的观点来看合乎期望的其它材料，包含其它缓 冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器和具有使用说明的包装插入物。
实例
实例1：食蟹猴中抗CD38抗体的基于模型的表征
抗CD38抗体AB79结合食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno)CD38，从而使 其区别于最近批准用于治疗多发性骨髓瘤的溶细胞CD38单克隆抗体——达雷 木单抗(DarzalexTM)。此独特功能支持使用食蟹猴进行临床前研究以表征AB79 药代动力学(PK)、药效学(PD)和安全性。为此，开发了测定法以测量药物 浓度、免疫原性并且定量食蟹猴血液中的T、B和NK淋巴细胞。在8项药理学 和毒理学临床前研究中评估这些参数。在经测试的细胞群体中，CD38在NK细 胞上表达最高；因此，假设药物对NK细胞的作用最接近对所考虑的靶细胞、 浆母细胞、浆细胞和其它活化淋巴细胞的作用。
使用0.03-100mg/kg的剂量范围从健康猴的8项研究中合并数据并且开发描 述细胞类型中的每一种类型的药代动力学和暴露-作用关系的数学模型。NK细 胞消耗被鉴别为AB79的最敏感的药效学作用。用翻转模型(消耗速率为EC50＝ 34.8μg/mL)描述此消耗并且用0.3mg/kg的IV剂量实现完全消耗。还使用直接 应答模型(EC50＝9.43μg/mL)观察到对T细胞计数的中间作用并且使用4转 运房室模型(消耗速率为EC50＝19.3μg/mL)观察到对B细胞计数的中间作用。 这些分析证实了以下观察结果：AB79以不同速率清除所测量的淋巴细胞亚群中 的每一个亚群并且需要不同时间跨度来消耗血液房室。
描述PK和PD数据的数学模型是用于从机械和定量见解中获得药物暴露与 作用之间关系的有用工具(Friberg等人，(2002)《临床肿瘤学杂志》20： 4713-4721；Mager等人，(2003)《药物代谢与处置(Drug Metab.Dispos.)》31： 510-518；Han和Zhou，(2011)《治疗递送(Ther.Deliv.)》2：359-368)。可以 利用IgG抗体的典型PK特征(包含分布和消除、猴与人之间的生理和遗传相似 性)来解释AB79的药理学(Glassman和Balthasar(2014)《癌症生物学与医学 (Cancer Biol.Med.)》11：20-33；Kamath(2016)《今日药物发现技术(DrugDiscov.Today Techn0l.)》21-22：75-83)。另外，这些模型已经成功应用于预测健 康人类受试者的PK浓度和PD作用(Han和Zhou(2011)《治疗递送)》 2：359-368)。
材料和方法
表2按时间顺序示出了猴研究的概要。主要进行单个剂量研究2、7和8以 评估静脉内(IV)和皮下(SC)施用AB79的PK和PD(图1)。执行重复剂量 研究以评估安全性、PK和PD，包含两项为期4周的研究(研究1和3)和在 GLP条件下进行的三项为期13周的研究(研究4、5和6)。在为期13周的研究 5中发生给药错误。最低剂量组的动物在一个时刻(第二剂量)接受0.01mg/kg 而不是预期的0.1mg/kg并且然后继续接受0.1mg/kg。将这些数据与实际施用的给药量的正确信息一起加入数据集中。研究6重复研究5的0.1mg/kg QW组的 低剂量。所有动物研究均按照美国国立卫生研究院(U.S.National Institutes of Health)采纳并颁布的《实验动物的护理和使用指南(Guide for the Care and Use of LaboratoryAnimals)》进行。
表2.按时间顺序进行的AB79猴研究
Figure BDA0002579022700000641
IV：30分钟静脉内输注(研究1-4)或推注(研究5-8)，SC：皮下注射(研究7的第4组和 研究8的3组)，PK：密集PK采样，PD：对全血进行密集采样以用于产生T、B和NK细胞 的细胞计数数据的流式细胞术分析。plc-安慰剂，“4周”或“13周”描述了治疗期的持续 时间，tox：毒理学研究，q2wk：每隔一周给药时间表。
生物分析
使用由内华达州里诺的查尔斯河实验室(Charles River Laboratories，Reno，NV)开发并执行的经验证的方法来分析PK。简而言之，使用间接酶联免疫吸 附测定(ELISA)测量猴血清中的AB79的浓度。96-孔微量滴定格式包被有抗 AB79的抗独特型抗体。将含有各种浓度的AB79的空白、标准和质量控制(QC) 样品加入到板中，并且在室温(RT)下孵育55-65分钟。对微量滴定板进行洗 涤后，加入过氧化物酶缀合的亲和纯化小鼠抗人IgG(过氧化物酶亲和纯化小鼠 抗人IgG，Fcγ片段特异性；杰克逊免疫研究所(JacksonImmunoResearch))， 并且在板上另外孵育55-65分钟。再次对板进行洗涤，并且将四甲基联苯胺 (TMB)加入孔中以产生发色团，并且通过加入终止溶液(2N硫酸)来终止显 色。使用
Figure BDA0002579022700000651
190酶标仪(美谷分子仪器公司(Molecular Devices)) 测量450nm处的吸光度并且使用4-参数逻辑加权(1/y2)标准校准曲线计算AB79 浓度。在研究1(表2)中，血清中AB79的定量下限(LLOQ)为0.061μg/mL 并且在所有其它研究中为0.05μg/mL。
抗AB79抗体的测定(免疫原性)
猴血清的抗药物抗体(ADA)筛选使用定性电化学发光(ECL)方法分析， 由内华达州里诺的查尔斯河实验室验证并执行。简而言之，将未经稀释的血清 样品与300mM乙酸一起孵育。将酸解离样品在生物素化的AB79、标记有 SULFO-TAG(Meso Scale Diagnostics，在查尔斯河实验室进行标记)的AB79 和1.5M Trizma碱的混合物中孵育以中和酸并且形成免疫复合物。然后将此复 合物加入链霉亲和素包被的MSD板(Meso Scale Diagnostics)中并且允许结合。 洗涤后，通过向板中加入MSD读取缓冲液T(Meso Scale Diagnostics)并且随 后通过Ru(bpy)3的电化学反应激发SULFO-TAGTM以产生发光(光)来检测复 合物，使用MSD Sector 6000(Meso Scale Diagnostics)读取。发光量与单个样 品的血清中存在的猴抗-AB79抗体水平相关。
血细胞的表征
为了评估并比较人与猴之间的AB79结合水平，将各自的血液样品收集到肝 素钠管中。将血液(100μL)的试样与适当体积的表征抗体(表3)混合并且在 RT下在黑暗中孵育15-20分钟。孵育后，将1mL的BD FACS裂解剂(1X；加 利福尼亚州圣何塞的BD生物科学(BDBiosciences，San Jose，CA))加入裂解 红细胞中并且将细胞在RT下在黑暗中孵育10分钟，然后离心、倾析并重新悬 浮在具有牛血清白蛋白的1mL染色缓冲液(BD生物科学)中。再次对细胞进 行离心、倾析并且使用FACSCantoTMII流式细胞仪(BD生物科学)来通过流式 细胞分析测量250μL的流体固定剂(含1％多聚甲醛的杜尔贝科-PBS无钙镁溶 液(加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命技术公司(Life Technologies，Carlsbad， CA)))和荧光。测量猴NK细胞(CD3-，CD159a+)、B细胞(CD3-，CD20+) 和T细胞(CD3+)以及人NK细胞(CD3-，CD16/CD56+)、B细胞(CD3-， CD19+)和T细胞(CD3+)。使用彩虹磁珠(伊利诺伊州森林湖的Spherotech 公司)生成的标准曲线将每个细胞群体的AB79染色的平均荧光强度转换为等量 可溶性荧光分子(MOEF)单位。
表3.用于表征血细胞的抗体
Figure BDA0002579022700000671
*仅用于染色人细胞
在表2所概述的研究中，使用由内华达州里诺的查尔斯河实验室开发并执 行的经验证的方法对细胞进行染色和分析。在AB79治疗前和多次治疗后将猴血 液样品收集到肝素钠管中并且使用FACSCantoTM II流式细胞仪(BD生物科学) 来通过流式细胞分析测量特异性淋巴细胞群体。将商业抗体和CD38抗体 (AB19；表3)(美国专利第8,362,211号)滴定至最佳染色浓度。鉴别猴CD38+/-、 T细胞(CD3+)、B细胞(CD3-/CD20+)和自然杀伤(NK)细胞(CD3-/CD20-/CD16+)群体并且使用CD45TruCountTM管(BD生物科学)定量 淋巴细胞。将每个血液样品的大约100μL试样放置到96孔板的适当孔中并且抗 体以指定体积加入、混合并且在RT下在黑暗中孵育至少30分钟。孵育后，红 细胞裂解，对样品进行混合并且在RT下在黑暗中另外孵育10分钟。对板进行 离心并且对上清液进行倾析。然后将细胞团块重新悬浮在1,800μL的染色缓冲 液中，对样品进行混合、离心并且对上清液进行倾析。将细胞团块重新悬浮在 具有胎牛血清的500μL的染色缓冲液中并且将大约300μL的细胞悬液转移到 96孔v底板中进行分析。将NK细胞百分比以及总T细胞和B细胞的百分比应 用于用TruCountTM管(加利福尼亚州圣何塞的BD生物科学)获得的细胞计数 值并且用于确定每个细胞群体的绝对细胞计数。在研究1-4中，在基线处用标记 的抗CD38抗体AB79或AB19评估CD38+NK、B和T细胞亚群。尽管AB19 与不同表位结合，但结果非常相似并且因此未单独呈现。立即分析经处理的样 品。
PK模型开发
在PK模型开发期间，研究了一房室、两房室和三房室模型结构。如通过拟 合优度(GOF)图和目标函数值(OFV)的降低所判断的，两房室模型明显优 于一房室模型。基于对诊断图的目视检查，不必引入第三房室来充分描述数据。 使用罗吉特变换(logittransformation)F＝exp(PAR)/(1+exp(PAR))对生 物利用度(F)进行建模，其中PAR指定模型参数以确保估计值介于0与1之间。 用靶标介导的药物处置(TMDD)过程的准稳态(QSS)近似模型对低浓度下的 非线性PK进行建模(Gibiansky和Gibiansky(2009)《药物代谢与毒理学专家见 解(Expert Opin.Drug Metab.Toxicol.)》5：803-812)。
图2C中提供了模型的示意图。对于QSS近似，假设与所有其它过程相比， 游离药物C、靶标R和药物靶标复合物RC的稳态浓度建立得非常快。这意味着 结合过程与解离和内化过程平衡并且以下方程式在适当的单位下成立：KON*C*R ＝(KOFF+KINT)*RC，其中KON表示结合速率常数，并且KOFF表示解离速率常 数，并且KINT表示内化速率常数。
对受试者间变异性(BSV)的所有参数进行研究并且用以下类型的指数模 型进行建模：PARi＝TVPAR*eETAPAR i，其中PARi是个体，并且TVPAR是典型参 数估计值，并且ETAPARi是个体i的偏差估计值。假设ETAPARi值遵循平均值为 零的正态分布。用组合加法和比例误差模型(combined additive and proportional error model)描述残差(Beal和Sheiner(1992)加利福尼亚州加利福尼亚大学的 《NONMEM用户指南(NONMEM User Guides)》)。
研究以下参数以鉴别对AB79的PK的潜在协变量作用：体重、性别、剂量、 施用途径和研究。
PK-PD模型开发
对于三种细胞类型中的每一种类型，分别执行PK-PD模型开发。要注意， 未使用与药物施用(＜给药后8小时)接近的模型开发测量结果，因为所述模型 开发测量结果受到了非特异性非药物依赖性作用的影响，这是由于在短时间内 提取了多个血液样品。估计PK模型和参数是固定的。测试各种形式的翻转、转 运房室和直接应答模型(Friberg等人，(2002)《临床肿瘤学杂志》20：4713-4721； Mager等人，(2003)《药物代谢与处置)》31：510-518)。在翻转模型中，以具有 或不具有希尔因子(Hill factors)的Emax型模型的形式将药物作用引入细胞消 除速率。以符号形式，Emax模型是以下形式的药物浓度c的函数f：f(c)＝EMAX *cH/(cH+C50H)，EMAX表示最大作用，C50表示实现一半最大作用的浓度，并 且H表示希尔因子。在转运房室模型(TCM)中，引入药物作用并且在不同位 置处进行测试：增殖速率、循环细胞和第三转运房室。还测试了这些作用的组 合以及数据是否支持从循环到增殖速率的反馈机制的存在。另外，测试具有和 不具有希尔因子的Emax型直接应答模型以描述药物浓度-作用曲线。
引入随机作用参数以估计基线细胞计数、细胞产生速率(KIN)、转运房室 模型(MTT)中的转运时间、C50和EMAX上的受试者间变异性。数据集中提 供了单个平均基线细胞水平(BL列)。在模型中将此用作典型值。加入随机作 用参数以使得能够基于个体的所有测量结果调整个体基线估计值。用比例误差 模型描述PD残差。
为了在建模过程(PK和PK-PD)中进行模型验证，使用OFV、标准误差、 GOF图以及个体预测对数据图来评估模型并且将其与替代性模型进行比较。
使用以下软件包：NONMEM(版本7.2)、KIWI(版本1.6)、Berkeley Madonna (版本8.3.14)、PSN(版本4)和R(版本3.3.0)。
数据集准备
对来自8项猴研究的数据集进行收集，以单个格式进行重组并且合并为三 个独立的NONMEM可读PK-PD数据集。这三个数据集中的每一个数据集均含 有猴的个体特性(研究、ID、组、体重、性别)；给药信息；PK和NK、B或T 细胞数据。对于对照组的动物，假设隐含地无AB79的血清水平，数据集中仅加 入细胞计数，而不加入PK数据。将有关抗药物免疫原性状态(ADA)的时间 分辨信息，即含有定量测量结果和0/1标志变量ADAF(如果ADA影响AB79 的浓度，则ADAF＝1；如果不影响，则ADAF＝0)的TITER加入每个观察结 果的单独列中。在不同研究中，用不同方法规范测量ADA滴度，并且因此，在 研究之间，不能直接定量地比较这些值。为了在所有研究中以一致的方式利用 ADA信息，分别对每只动物应用以下程序：在比初始测量水平晚7天的时间点 上增加的ADA滴度被认为是ADA阳性的并且标记在数据集中(ADAF＝1)。 如果在一个时间点将样品标记为ADA阳性，则在此动物中，无论所测量的滴度如何，在所述时间点之后提取的所有样品也均标记为ADA阳性。在模型开发期 间，ADA阳性观察结果未用于参数估计。要注意，来自受ADA影响的PK浓度 的采样时间点的PD测量结果也标记为ADAF＝1。
对于细胞计数数据，将每种细胞类型(NK、B和T细胞)的个体基线值计 算作为给定动物的所有可用给药前测量结果的平均值。在大多数研究中，此为 单个测量结果。然后，将每只动物的基线值作为第一给药事件时(TIME＝0) 的观察结果和BL栏中的恒定值加入相应动物的每个观察结果中。基于此基线值 计算每个所观察的细胞计数的基线百分比并且将其加入数据集中。
猴PK参数的缩放
最终的PK和PK-PD模型用作模拟首次人类临床试验的PK和PK-PD曲线 的起点。尽管尚无定论，但对来自治疗性单克隆抗体的数据的比较分析已经示 出可以对衍生自猴研究中的PK参数进行缩放以帮助预测具有可接受准确度的 人类PK曲线(Han和Zhou(2011)《治疗递送)》2：359-368)。出版物指示可以 使用0.85的固定指数可靠地预测人类的单克隆抗体清除率。因此，将此关系应 用于缩放人类清除率参数(CL，Q)，而使用体重(BW)之间的直接关系缩放 体积参数(VC，VP)：
Figure BDA0002579022700000711
Figure BDA0002579022700000712
结果
AB79的药代动力学
从除了安慰剂组之外的所有8项健康猴研究中合并PK数据集(表2)。所 述集总共含有来自140只动物的数据，其中58只为雄性并且82只为雌性。所 研究动物的体重范围为2.1到4.7kg并且剂量范围为每kg体重0.03到100mg (mg/kg)。在研究7的一个组和研究8的三个组中，SC施用0.03、0.1、0.3和1 mg/kg的剂量(总共15只动物)。所合并的数据集含有大于LLOQ的2,199个可 测量的PK观察结果(图2A和2B)。PK采样在第一剂量后最为密集并且即使 在长期毒理学研究中，大多数动物均在第98天前终止给药。仅研究4包含恢复 组并且仅可以收集来自4只动物的PK数据，2只来自80mg/kg组并且30mg/kg 和3mg/kg组各一只(图2B)。与AB79浓度同步评估ADA。229个PK观察结 果受ADA的影响(图3)。
最初，对于猴研究中的每项研究，使用标准无房室技术(NCA)执行PK分 析。基于单个剂量研究(IV推注或30分钟IV输注)，计算出终末阶段(Vz) 期间的分布体积范围为64到116mL/kg，清除率为6.04到14.7毫升/千克/天， 并且终末消除半衰期(T1/2)为4.75到11.2天。发现浓度时间曲线下面积(AUC) 和最大浓度(Cmax)值在较大范围内随剂量成比例增加。仅最低剂量组(＜1 mg/kg，图2D-2F)的PK曲线提供了以下证据：浓度低于0.5μg/mL时非线性 增加的清除率可能是由靶标介导机制(TMDD)引起的(Kamath(2016)《今日 药物发现技术》21-22：75-83)。基于除了两个最低剂量组之外的所有猴研究的数 据(剂量＞0.3mg/kg)构建线性2房室模型。当模拟最低剂量组的PK并且将其 与所测量的浓度叠加时，线性模型明显过度预测了浓度(图2D-2F)。
单个剂量SC施用后的可用PK数据显示，与同一剂量的IV组相比，SC组 的Cmax低了70-80％并且AUC相当。在雄性与雌性猴之间未观察到PK参数的 差异。将这些初始分析的结果用作模型开发的起点。
PK模型开发
模型开发从单个IV剂量数据开始并且然后利用更复杂的数据逐渐扩展初始 模型。与其它治疗性抗体类似，PK大致遵循线性2房室模型(Kamath(2016)《今 日药物发现技术》21-22：75-83)。用准稳态(QSS)近似法对描述低浓度下的加 速清除率的非线性消除组分(TMDD)进行建模(Gibiansky和Gibiansky(2009) 《药物代谢与毒理学专家见解)》5：803-812)。以下假设导致TMDD模型的简化 (图2，表4)：药物-靶标缔合过程比药物解离、分布和消除过程以及靶标和药物 -靶标复合物消除过程要快得多。低浓度下的数据量相对较小，使得无法在软件 程序的单次估计运行中估计所有参数。因此，首先通过聚焦于低单个剂量研究7 和8的数据来估计TMDD模型的参数。然后，在整个数据集的最终估计期间， 使所得TMDD参数估计值保持固定(表4)。
表4.群体PK建模结果、参数估计值和标准误差百分比(SEM％)
Figure BDA0002579022700000731
$KSYN是受体CD38的合成速率。由于无法获得实际浓度测量结果或有关CD38的体内合成或 降解速率的信息，因此将“u”用作CD38的某个未知量的单位。
*从聚焦于低剂量组数据的单独运行中获得TMDD参数的估计值和标准误差，并且然后针对 其它PK参数的最终估计进行固定。NE：未估计。
当加入SC组的数据时获得吸收参数KA和F的估计值。所有SC数据均来 自研究7和8的四个较低单个剂量组。这些较低剂量(≤1mg/kg)覆盖了临床 相关范围，但可能会限制较高剂量的参数估计值的普遍性。
用指数模型对PK参数的受试者间变异性(BSV)进行描述。吸收速率(KA)、 清除率(CL)和外围分布体积(VP)的经估计的BSV为约40％并且中心分布体 积(VC)为约20％(表4)。协变量分析鉴别了施用途径对VC的影响。如果IV 施用，则VC的典型值为0.141L，而如果SC施用，则为0.043L(约小70％)。 尚未鉴别出其它显著的协变量作用。因为在低浓度下的数据量有限，所以仅针 对内化速率KINT(BSV：49％)估计TMDD参数的受试者间变异性和个体预测。 基于残留误差、OFV、标准误差、GOF图和个体曲线拟合的模型评估证实：最 终模型充分描述了健康猴中AB79的PK(表4，图4A-4J)。
药效学
通过流式细胞术分析来比较在人和猴血液NK细胞、T细胞和B细胞上AB79 的结合水平。如图5所示出的，基于AB79等量荧光分子(MOEF)，猴淋巴细 胞的CD38表达水平略低于其人对等物的水平，但在细胞类型之间具有类似关 系，例如，CD38表达从高到低为NK细胞＞B细胞＞T细胞。这些数据支持将此 非人灵长类物种用作相关模型以帮助预测AB79对于人的PD活性的潜力。
为了深度定量分析药物暴露(PK)与细胞消耗(PD)的程度和持续时间之 间的关系，根据包含经安慰剂治疗的动物(在可用的情况下)的所有8项猴研 究的PK浓度、NK细胞、B细胞和T细胞计数对数据集进行汇编(表2)。数据 集的初始表征显示，在基线处，T细胞的中值为3,732个细胞每μL(四分位差 (IQR)：2，881-5，176)并且与1,279个细胞每μL(IQR：860.8-1，890)的B细胞 和685个细胞每μL(IQR：482.8-970.1)NK细胞相比是最富集的淋巴细胞亚型。 在研究1-4中评估了这些细胞群体上的基线CD38表达(表2，n＝67)。86.7％ (SD11.3)的NK细胞以较小变异性表达CD38。相反，58.7％(SD 27.0)的B 细胞和34.5％(SD24.5)的T细胞以较大变异性表达CD38。
来自经安慰剂治疗的动物的数据显示，细胞类型中的每一种类型的平均数 量在个体动物之间随时间变化，所述变化超出对一个个体内的变异性的预期(图 6)。例如，个体安慰剂曲线的B细胞计数的平均变异系数为27％，但个体平均 B细胞水平范围为436.6到4,389。另外，来自雄性和雌性动物与来自不同研究 的动物的平均基线淋巴细胞数量之间存在的差异增加了变异性(图7)。基于这 些结果，相对于其个体基线值百分比而不是每个时间点处的绝对细胞数量来计 算每个治疗后细胞计数。例如，值为33％意指样品细胞计数是基线细胞计数的 1/3。这提供了可以在整个数据集中进行比较的标准化值。
AB79结合细胞消耗的快速开始表明，初始血液浓度驱动淋巴细胞计数减少 (图8)。在IV剂量为0.3mg/kg AB79时，对NK细胞的最大作用中值为93.9％ 的消耗(即，基线细胞计数的6.1％剩余)。在0.1mg/kg时，峰值消耗为71％(基 线的29％剩余)。在剂量＞0.3mg/kg时，NK细胞在血液房室中几乎完全消耗(最 低点(范围)：基线的1.06％(0.17，6.23)；图8A)。在施用0.3mg/kg的单个剂 量后，NK细胞大约花费7天恢复到基线的平均50％，尽管恢复的动力学在个体 之间具有高变异性(图8B和8C)。与这些结果相一致，还测试了研究7中的动 物亚群的NK功能(n＝3/组；表2)。实验显示，在用0.1mg/kg AB79治疗的动 物中，治疗后48小时剂量依赖性降低，其中血液NK活性变化最小化(比率为 100∶1的效应子∶靶标下的裂解％±SD；44.5％±23.6％对41.4％±25.8％)，而在 用1.0mg/kg治疗的动物中，NK活性几乎完全丧失(比率为100∶1的效应子∶靶 标下的裂解％±SD；37.4％±10.3％对6.8％±12.5％)。NK细胞功能示出了在57 天时在下一个时间点所测量的恢复(比率为100∶1的效应子∶靶标下的裂解％± SD；16.0％±11.9％)。
与NK细胞相比，B细胞和T细胞的消耗程度较小，这与其较低的CD38 表达水平一致(图5)。例如，在0.3mg/kg IV AB79下，B细胞的中值最大消耗 水平为基线的45％，而T细胞的消耗为基线的43％(图8D和8G)。在此剂量 水平下，并非在所有动物中实现B细胞计数相对于基线降低50％。B细胞仅在≥ 30mg/kg的最高剂量下才几乎完全消耗(图8D)。T细胞的消耗程度与B细胞 类似，但恢复更快(图8G-8I)。
在两项研究7和8中，对IV和SC给药进行比较(图8C、8F和8I)。细胞 消耗在施用途径之间不存在明显差异。在较低剂量下(研究8)，仅在NK细胞 群体中观察到持续(＞24小时)低于基线值50％的细胞消耗，而在T细胞和B 细胞中则未观察到；尽管所有细胞在早期均示出了特异性细胞消耗。不论施用 途径如何，剂量组之间NK细胞消耗的开始时间似乎均是类似的并且消耗的持 续时间是剂量依赖性的。在第57天观察到所有测试组的细胞恢复。
PK-PD模型
开发单独的PK-PD模型以描述AB79暴露对NK细胞、B细胞和T细胞的 作用。在PK-PD建模期间，将PK参数保持固定为最终PK模型的估计值并且 尝试各种PD模型。用翻转模型充分描述外周血中的NK细胞群体并且用Emax 型模型通过PK浓度将消耗药物作用与消耗速率联系起来。在此模型中，EMAX 代表另外的NK细胞消耗的最大速率并且C50代表另外的NK细胞消耗的速率 为最大值一半时的浓度。NK细胞的结构性PK-PD模型具有以下形式：
Figure BDA0002579022700000761
在所述式中，NK代表实际NK细胞计数，KIN代表产生速率并且KOUT代表 不存在药物时的消除速率。要注意，对于给定基线测量结果，BL KOUT由方程式 KOUT＝KIN/BL定义。c代表中央房室中的AB79浓度。当一次性估计所有参数时， 软件程序无法产生稳定结果。KIN、EMAX和C50的个体估计值高度相关。此 外，由于不同剂量的最大作用(参见先前章节)与较大个体间变异性之间的受 限区别，因此无法预期所有参数的准确估计值。在一系列估计值中，将三个参 数KIN、EMAX和C50中的一个或两个参数固定为不同的值并且估计其它参数。实现了固定KIN为10,000并且EMAX为322的稳定运行和合理拟合优度。典 型的C50估计值为29.0μg/mL(表5)。另外，通过选择较高和较低值的不同组 合来测试所选择的KIN和EMAX值的灵敏度。受试者间变异性很大，其中NK 产生速率KIN为113％并且其中C50为149％，这与基线处和经治疗的动物之间 较大的个体差异一致。基于残留误差、OFV、标准误差、GOF图和个体曲线拟 合对模型进行评估(表5，图9)。
表5.PD建模结果、参数估计值和标准误差百分比(SEM％)
Figure BDA0002579022700000771
*对于每只个体动物，将典型基线值计算作为所有给药前测量结果的平均值；NE：未估计
转运房室模型优于直接应答或翻转模型以描述AB79诱导的B细胞消耗。 结果证明四个转运房室是足够的并且用Emax型模型描述药物对消耗速率的作 用。与NK细胞消耗模型类似，EMAX代表最大速率并且C50代表速率为最大 值一半时的浓度。因此，B细胞的结构性PK-PD模型由以下五个方程式给出：
Figure BDA0002579022700000772
对于i＝2，3，4，
Figure BDA0002579022700000773
Figure BDA0002579022700000774
TRi(i＝1-4)代表四个转运房室。KTR、KPROL和KCIRC由以下方程式定义：KTR＝KPROL＝KCIRC＝4/MTT，其中MTT是平均转运时间(Friberg等人，(2002)《临 床肿瘤学杂志》20：4713-4721)。B代表血液中的B细胞计数并且c代表中央房 室中的AB79浓度。
其中固定EMAX为2.37，典型C50为19.5μg/mL并且典型平均转运时间 (MTT)为8.48天(表5)。最大作用相对于最大AB79浓度的延迟被很好地捕 获。模型指示AB79主要影响循环B细胞。另外的作用和祖细胞上的反馈环对 描述可用的猴B细胞数据而言是非必要的。MTT上135％以及基线B细胞水平 (BASE)上24.1％的受试者间变异性指示动物之间较大的个体差异。
用直接应答模型充分描述快速恢复的T细胞的药物诱导的消耗：T(c)＝BLT *(1-EMAX*c/(c+C50))，其中T代表实际T细胞计数，BLT代表基线处的T 细胞计数并且c代表中央房室中的AB79浓度。估计典型C50为11.86μg/mL且 典型EMAX为0.47，这指示在这种情况下，仅约一半的T细胞可以被AB79消 耗(表5)。然而要注意，EMAX上受试者间变异性为将近70％。在此模型中， 与NK细胞和B细胞消耗模型不同，C50代表T细胞消耗为最大值一半时的浓 度。
至于NK细胞，基于残留误差、OFV、标准误差、GOF图和个体曲线拟合 对B细胞和T细胞的最终PK-PD模型进行的模型评估证实：所述最终PK-PD 模型充分描述了可用的猴数据(表5，图9)。
人类PK和细胞消耗的模拟
将猴PK和PK-PD模型用作用于人类PK和细胞计数数据的基于模型的模 拟的起点以支持设计并且证明针对健康志愿者的首次人类(FIH)临床试验所选 择的剂量是合理的。为此，假设包含衍生自猴数据的TMDD的模型结构也描述 了人类PK和随后的淋巴细胞消耗的主要特征。为了获得对人类PK参数的预测， 采用简单明了的方法来缩放以下猴PK参数的估计值以获得单克隆抗体：中央和 外围分布体积(VC，VP)、清除率(CL)以及房室间清除率(Q)(Han和Zhou (2011)《治疗递送)》2：359-368)。AB79是一种完全人类单克隆抗体，并且因此预期在人类中的免疫原性低于在猴中所观察到的。因此，为了进行建模和模 拟，从数据集中排除ADA阳性样品。
如针对FIH研究所计划的，使用缩放模型模拟暴露以及通过2小时输注(IV) 或通过皮下注射(SC)0.0003到1.0mg/kg的单个剂量的NK细胞、B细胞和T 细胞消耗曲线(图10)。根据模拟，在0.0003mg/kg的IV剂量后，对淋巴细胞 计数的任何可观察到的药物诱导的作用以及甚至高于LLOQ的不可测量的PK 浓度将无法预期。由于变异性和剂量组的大小限制，假设对NK细胞计数的最 小化可检测药物作用将降低至少10％。在0.01mg/kg IV和0.03mg/kg SC的剂 量下，预测NK细胞将消耗到少于剩余基线的90％。
在0.3mg/kg的IV剂量下，预测输注结束后3小时内NK细胞消耗到剩余 基线的17％并且在11天后恢复到多于50％(图10)。在同一剂量下，模型预测 B细胞在2.5天后最大消耗到基线的67％并且T细胞立即消耗到基线的86％。 对于0.3mg/kg的同一剂量的皮下施用，模型预测其会导致最大消耗更少并更晚 (相对于基线的最低点：NK细胞37％、B细胞74％、T细胞94％)。
这些体外和体内临床前研究证明，猴是用于研究AB79的药理学的适当的动 物模型。来自具有不同剂量和给药方案的八项猴研究的NK、B和T淋巴细胞的 密集采样PK和细胞计数数据为全面和定量理解AB79剂量、暴露与细胞消耗之 间的关系提供了丰富的数据来源。产生的群体PK和PK-PD模型充分描述了观 察到的数据并且提供了强大的工具以预测暴露和淋巴细胞消耗，不仅用于猴的 未来研究，还用于人类受试者的临床试验。
已经在健康志愿者中进行了首次人类(FIH)单个上升剂量试验(www.clinicaltrials.gov：NCT02219256)(图11)。AB79的预期药理作用是消耗 活化的淋巴细胞。然而，淋巴细胞的深远且持久的消耗(增强的药理作用)可 能导致免疫系统损害，这对于患者或健康的研究参与者而言是无法忍受的。因 此，针对FIH试验选择0.0003mg/kg的安全I.V.起始剂量。
猴数据表明，将NK细胞消耗确定为最敏感的生物作用。PK-NK模拟结果 帮助确定0.01mg/kg IV的最小剂量水平，预期在所述最小剂量水平下在人类中 可检测到最敏感的药理作用(NK细胞消耗)。FIH试验的新兴数据显示，AB79 的剂量依赖性和细胞类型特异性消耗作用的总体模式与基于模型的预测一致 (手稿准备中)。AB79似乎比预测的更高效。例如，在0.03mg/kg的IV剂量下， 人类受试者的NK细胞消耗到低于剩余基线的10％。在此剂量下，猴的中值最 低点(最低消耗点)为20.0％(图8)。
三种溶细胞抗CD38单克隆抗体(达雷木单抗、SAR650984和MOR202) 处于针对多发性骨髓瘤的临床开发中(van de Donk等人，(2016)《免疫学综述 (Immunol.Rev.)》270：95-112)。最近达雷木单抗(DarzalexTM，以静脉内输注 的方式给予)在美国被批准用于多发性骨髓瘤并且在欧洲用于非霍奇金淋巴瘤。 与AB79不同，达雷木单抗不与猴CD38交叉反应。因此，不可能在食蟹猴中将 用AB79得到的结果与达雷木单抗进行比较。此外，多发性骨髓瘤患者具有高水 平的CD38阳性恶性细胞，对于此癌症适应症可能需要更高的有效抗体浓度(de Weers等人，(2011)《免疫学杂志》186：1840-1848)。
然而，值得注意的是，尽管AB79在约1mg/kg的剂量下实现了外周NK细 胞的完全消耗并且在约3mg/kg的剂量下实现了B细胞的完全消耗，但达雷木 单抗在多发性骨髓瘤中被批准每周16mg/kg的IV剂量(图8)。
尽管有来自8项猴研究的丰富数据库，但还是认识到一些局限性。即使在 0.03mg/kg的最低研究剂量下，AB79也有效地消耗NK细胞。在如此低的剂量 下，PK迅速下降到生物分析测定的定量极限以下，这阻止在较低剂量下解决暴 露-作用关系。此外，在临床前开发期间，认识到在最大药物浓度不久后发生最 大细胞消耗，但消耗早期阶段的分离度在技术上受到总样品数量的限制并且由 于重复血液收集(抽血效应)可能受到非特异性细胞消耗的限制。观察到抽血 效应是以不结合AB79的细胞类型(例如，RBC)的消耗为特征的瞬时性全血细 胞减少症并且是非剂量依赖性的，这表明是由于多次抽血而非AB79的任何特异 性效应导致的血容量损失(图12)。因此，准确估计模型参数(尤其地是针对 NK细胞消耗的模型参数)的能力受到限制并且KIN和EMAX的典型值需要固 定以实现稳定且充分的估计结果。
无法测量AB79对组织浆细胞或浆母细胞的作用。然而，像浆细胞和浆母细 胞一样，NK细胞在其表面上具有高水平的CD38并且特异性淋巴细胞亚群的细 胞消耗效率至少部分取决于CD38的表达水平。因此，AB79对浆母细胞和浆细 胞的细胞溶解作用可能与对NK细胞的作用相当。目前，有关在猴中的AB79 治疗的长期作用的信息有限。在为期13周的毒理学研究中，仅在较长时间段内 对恢复组中的动物的一个小亚群进行研究并且所有剂量组中的大多数动物发展 有ADA(图3)。此外，不同淋巴细胞亚群的基线值和消耗曲线在个体之间具有 高变异性。因此，无法在猴中研究AB79的长期作用，而必须在人类中进行研究。
借助新兴人类数据详细比较人类和猴PK和PD数据将会很有趣。基于人类 数据构建PK模型并且与猴模型进行的比较将允许完善AB79的TMDD模型。 在患者研究中产生的数据将提供关于如何在RA和SLE患者与多发性骨髓瘤患 者和健康受试者之间比较AB79介导的B谱系细胞消耗的见解。除了CD38表 达水平之外，对受试者或可能影响细胞消耗效率的疾病相关因素的研究也很重 要并且可能导致治疗的个性化。另外，在体外和体内对AB79与达雷木单抗和/ 或其它CD38抗体进行彻底的头对头比较将显示有关抗CD38抗体的药理作用及 其最佳应用的有价值的信息。
丰富的药理数据以及PK和PK-PD模型能够表征食蟹猴中的暴露-作用关 系。对NK、B和T细胞进行的基于模型的分析支持并量化了以下发现：血液淋 巴细胞亚群中的每一个亚群都以不同的速率被抗体消耗并且需要不同的时间跨 度来充满血液房室。模型被证明是用于在临床试验准备中模拟不同给药方案下 的PK和PD数据的绝佳手段。
实例2：通过AB79进行的CD38+细胞消耗
表6示出了AB79通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒 性(CDC)介导细胞消耗。CD38表达增加的细胞系对ADCC更为敏感。在不 表达CD38(MV-4-11)的人类淋巴母细胞细胞系或用与CD38密切相关的分子 CD157转染的中国仓鼠卵巢细胞系中未观察到ADCC(数据未示出)。与靶向 CD20并且不直接消耗浆母细胞(CD20低/阴性)的其它B细胞选择性疗法不同， CD38在浆母细胞和浆细胞上以高水平表达，从而使这些细胞成为AB79的直接靶标。如以下所讨论的，对人类血细胞和细胞系的体外研究显示，AB79与CD38 的结合不会导致PBMC细胞因子活化，从而证明AB79不是激动剂。相反，AB79 通过ADCC和CDC介导人类B谱系细胞系的细胞消耗并且在大多数情况下 CD38表达增加的细胞系更容易发生细胞裂解。
表6.AB79通过ADCC和CDC介导人类B细胞系的细胞消耗。
Figure BDA0002579022700000821
EC50，50％有效浓度；nd，未完成；SD，标准偏差。
这与在健康食蟹猴中的发现一致，其中消耗效率与CD38表达水平和AB79 剂量水平相关。表达高水平CD38的NK细胞比表达更少CD38的CD20+B细 胞和CD3+ T细胞的消耗程度更大(图13)。在体内，AB79在小鼠过继转移模 型中有效抑制了人类B细胞对抗原的记忆应答(图14)。这些数据一起支持AB79 在自身免疫性疾病中的进一步研究。
在多种条件下用AB79处理人PBMC并且测量炎性细胞因子释放。因为AB79与猴CD38(与人蛋白共有91％的蛋白同一性)交叉反应，所以食蟹猴用 于示出细胞类型特异性消耗与AB79剂量之间的关系。第二种动物模型(小鼠过 继转移的人PBMC)用于确定AB79是否可以靶向人类抗体产生细胞。
AB79结合CD38并且介导ADCC和CDC
使用小鼠抗人CD38抗体(克隆号HIT2)用FIKIT(DAKO，目录#K0078) 来确定受体编号并且通过将染色样品的平均荧光强度(MFI)转换成由结合限定 数量的抗体分子的5个磁珠群体的MFI产生的校准曲线来计算所述受体编号。 通过从抗CD38抗体MFI中减去同种型对照(小鼠IgG1)MFI来计算绝对受体 #。
通过以10,000个细胞/孔接种细胞系并且加入AB79、对照IgG或培养基来 评估CDC。通常执行5点剂量-应答曲线(0.001-10mg/ml)。将兔补体(2-15ul； #CL 3441CedarLane实验室)加入除了对照孔之外的每个孔中。CytoTox-Glo试 剂(普洛麦格(Promega)，G7571/G7573)用于通过发光检测细胞毒性。测试组： 单独细胞；细胞+补体；细胞+IgG对照+补体；细胞+AB79+补体。CDC％ 方程式：CDC％＝100-((RLU(测试)/RLU(单独补体))X 100)。
通过用50ml的AB79、对照IgG、Triton X-100(1％；西格玛化学公司(SigmaChemical))或单独培养基和50ml的人效应(E)PBMC以比率介于1∶25到1∶50 的T∶E细胞接种5000个靶细胞/孔(T，细胞系)来测试ADCC。通常执行9点 抗体剂量-应答曲线(0.000001-100nM)。实验裂解＝PBMC+细胞系+抗体。 自发裂解＝PBMC+无抗体的细胞系。最大裂解＝细胞系+Triton X-100。使 用CytoTox-GloTM细胞毒性发光测定法(普洛麦格)来评估细胞毒性。
AB79不具有激动剂活性
将AB79治疗诱导人PBMC中的细胞因子产生的能力与阴性IgG1同种型对 照和阳性对照、PHA、抗CD3(克隆号OKT3)或抗CD52(坎帕斯(Campath)) 抗体进行比较(图15和16)。
与IgG1同种型对照相比，孵育24小时后，可溶性AB79不会增加从4个 不同受试者中收集的PBMC中的IL-6水平(平均值±SD)。PHA增加了所有受 试者中的细胞因子水平，从而证明细胞具有产生IL-6的能力(图15)。并且当 测试IL-2、IL-4、IL-10、GM-CSF、IFNγ和TNFα时，持续刺激48小时PBMC 观察到相似的结果(数据未示出)。
向细胞呈递抗体的方法可能有助于抗体的产生：配体结合和细胞应答(Stebbings等人，(2007)《免疫学杂志》179：3325-3331)。Stebbings等人显示， 当抗体高度浓缩并且粘附在孔表面时，如与允许抗体与溶液中的孔结合(湿结 合)或直接加入PBMC(可溶)中相比，将抗体加入溶液中的孔中并且允许液 体蒸发(干结合)时，对激动性抗体的最大细胞应答(细胞因子释放)便会发 生(图16A)。在使用这些方法中的任一种方法时，AB79均不会刺激细胞因子 产生(图16B)。
在24小时后测试的条件中的任一个条件下，AB79(100mg/ml)均不会刺 激IL-2、-4、-6、-8、-10、GM-CSF、IFNγ或TNFα。AB79不会诱导IL-10或 GM-CSF，但这两者均由抗CD3诱导(未示出，除了抗CD3之外的所有值均低 于LLOQ)。IL-8由PBMC组成性地产生并且经任何处理都不会改变(数据未示 出)(表7)。
表7.AB79和细胞因子刺激
Figure BDA0002579022700000851
根据制造商的说明(Bio-Plex ProTM人细胞因子标准8-Plex)，使用多重细胞因子测定以测量 IL-2、-4、-6、-8、-10、GM-CSF、IFNγ和TNFα浓度。缩写：LLOQ，定量下限；nd，未完 成；PHA，植物凝集素；PBMC，外周血单核细胞。
AB79消耗CD38+细胞
AB79以高亲和力结合CD38并且介导CDC和ADCC。AB79不是激动剂并 且不会诱导来自人类PBMC的细胞因子释放。AB79结合来自人类和食蟹猴两者 的CD38。基于AB79染色的中值荧光强度，来自这两个物种的淋巴细胞具有类 似的细胞特异性CD38表达模式，其中NK细胞＞B细胞＞T细胞。用AB79治 疗以可逆、细胞特异性和剂量依赖性的方式使猴淋巴细胞消耗。AB79在小鼠过 继转移模型中有效阻断了人类抗体记忆应答。
实例3：评估AB79与人类和食蟹猴红细胞和血小板的结合
评估针对人CD38的完全人的、高亲和力的、非激动剂的IgG1单克隆抗体 AB79以确定其与人类或食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno)红细胞(RBC)或 血小板的结合。与具有不与RBC或血小板结合的无关特异性的同种型匹配对照 单克隆抗体帕利珠单抗(Palivizumab)相比，评估了来自健康人类志愿者的三 十份血液样品和来自健康食蟹猴的三十份全血样品的AB79结合。
方法
从纽约州长岛的生物再生公司(Bioreclamation，Long Island，NY)购买了 来自30名正常人类受试者(15名男性和15名女性的血小板，25名男性和5名 女性的RBC)和30只来自中国的食蟹猴(15只雄性和15只雌性)的血液样品。 将全血收集在柠檬酸钠试管中并且在环境温度下运输过夜。
为了评估AB79与血小板的结合，用食蟹猴交叉反应性抗人CD61 FITC mAb (BD生物科学，目录#555753)对50μL的全血进行染色以识别结合Alexa Fluor 647(AF647)缀合的AB79或同种型匹配对照——AF647缀合的帕利珠单抗 (MedImmune目录#60574-4113-1)(一种对呼吸道合胞病毒(RSV)(不存在于 RBC或血小板上的抗原)的F蛋白的A抗原位点的抗原表位具有特异性的人源 化单克隆抗体)的血小板。染色后执行RBC裂解并且使用BD Canto流式细胞 仪分析样品。对CD61+血小板进行门控以供分析。
为了评估AB79与RBC的结合，用AF647缀合的AB79或同种型匹配对 照——AF647缀合的帕利珠单抗对50μl的全血进行染色。在一些实验中，使用 食蟹猴交叉反应性抗人CD45PERCP(BD生物科学，目录#552724)对淋巴细 胞进行染色以提供AB79与淋巴细胞的亚群结合的证据，如在先前研究中所观察 到的。使用BD Canto流式细胞仪分析样品。将数据表示为AB79或同种型对照 的平均荧光强度(MFI)。
结果和讨论
使用流式细胞术评估AB79与来自三十名健康人类志愿者和三十只健康食 蟹猴的RBC结合的能力。在人类血液样品(图17和表8)或食蟹猴血液样品(图 18和表8)的任一个中，用AB79对RBC进行的染色不超过用同种型对照抗体 观察到的染色水平。在任一个物种中均未观察到可检测的结合并且在人类与食 蟹猴之间未观察到AB79/同种型对照的MFI比率存在差异。
表8.RBC AB79/同种型对照平均荧光值的比率
供体# 人类 食蟹猴
1 1.047 1.025
2 1.018 0.904
3 1.006 0.912
4 0.867 0.878
5 0.800 0.805
6 0.937 0.980
7 0.900 0.893
8 0.920 0.861
9 0.896 0.839
10 0.958 0.868
11 0.896 0.863
12 0.950 0.866
13 1.016 1.027
14 0.946 0.989
15 0.985 0.969
16 0.829 0.990
11 0.861 0.985
18 0.903 1.022
19 0.914 0.915
20 0.914 0.911
21 0.813 0.882
22 0.859 0.888
23 0.947 0.960
24 0.917 0.940
25 0.976 0.948
26 0.933 0.931
27 0.889 0.967
28 0.938 0.949
29 0.976 0.941
30 0.934 0.951
平均值 0.928 0.929
StDev 0.056 0.057
使用流式细胞术评估AB79与来自三十名健康人类志愿者和三十只健康食 蟹猴(供体1-15为雄性；供体16-30为雌性)的CD61+血小板结合的能力。在 人类(图19和表9)或食蟹猴血液样品(图20和表9)的任一个中，血小板的 AB79染色不超过用同种型对照观察到的染色水平。在任一个物种中均未观察到 可检测的结合并且在人类与食蟹猴之间未观察到AB79/同种型对照的MFI比率 存在差异。
表9.血小板AB79/同种型对照平均荧光值的比率
供体# 人类 食蟹猴
1 1.46 0.96
2 1.10 0.88
3 1.76 0.90
4 1.16 0.88
5 1.21 1.28
6 1.53 1.19
7 2.14 0.85
8 1.14 0.78
9 1.14 0.97
10 0.53 1.37
11 0.38 0.63
12 0.60 0.98
13 1.06 0.71
14 1.33 0.93
15 0.78 1.06
16 1.06 1.03
17 0.95 0.83
18 1.25 0.80
19 1.09 1.55
20 0.89 1.28
21 0.95 1.61
22 1.24 1.24
23 0.36 0.99
24 1.34 1.40
25 0.53 1.04
26 0.91 1.29
27 0.85 1.14
28 0.68 1.05
29 1.03 1.46
30 1.13 2.28
平均值 1.05 1.11
StDev 0.39 0.33
作为AB79染色的阳性对照，在一部分血液样品中测量AB79染色。由于 RBC在血液中占高优势，因此获得了200,000个事件并且对小群体的CD45+淋 巴细胞进行门控以供进一步评估。未观察到同种型对照的结合；然而，AB79与 小群体的CD45+淋巴细胞结合(图21)。此证实了AB79能够在未观察到AB79 与RBC或血小板可检测结合的条件下对血细胞进行染色。
实例4：使用更高灵敏度流式细胞术测定法评估AB79与人类和食蟹猴红细 胞和血小板的结合
开发了一种更高灵敏度流式细胞术测定法以进一步评估AB79是否与人类 或食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno)RBC结合，以防先前的测定法可能不够灵 敏而无法检测到RBC上的低水平CD38表达。将来自4名健康人类志愿者的血 液样品与荧光标记的AB79或荧光标记的达雷木单抗(已知在RBC上与CD38 结合的另一种抗CD38抗体)一起孵育。将每个样品与其相应未标记的药物产品 一起预孵育以阻断CD38与充当测定法的阴性对照的荧光标记的药物产品结合。 将抗CD45和CD235a抗体加入样品中以识别RBC阳性细胞并且随后在流式细 胞仪上进行分析。荧光标记的达雷木单抗用作阳性对照。结果指示，AB79和达 雷木单抗与来自健康人类供体的RBC结合。
方法
根据公司协议，收集了来自四名健康人类供体(千年血液供体计划)的血 液样品。简而言之，将用于RBC结合测定的外周血样品收集到肝素钠管中并且 进行淋巴细胞染色，将外周血样品收集到BD
Figure BDA0002579022700000901
CPTTM管(美国新泽 西州富兰克林湖(Franklin Lake，NJ，USA)的BD生物科学)中。使用单独的 管收集外周血单核细胞(PBMC)以证实荧光标记的AB79和荧光标记的达雷木 单抗与CD38+淋巴细胞的结合。对于RBC结合和淋巴细胞染色实验两者，将外 周血样品在RT下储存并且在收集的2小时内进行处理以维持细胞活力。对于RBC结合，首先将外周血样品在染色缓冲液(BD生物科学，美国新泽西州富兰 克林湖)中以1∶10,000的比率稀释以稀释样品中存在的高数量RBC。由于健康 人类血液样品中RBC的正常范围为大约每微升5百万个细胞，因此需要对样品 进行充分稀释以获得可接受数量的RμBC来进行染色以供流式细胞术分析。然 后将样品转移到V型底96孔板中并且在4℃下在温和振荡器上与未标记的25 毫升/孔AB79(500μg/mL)、未标记的达雷木单抗(500μg/mL)或仅BD缓冲 液(无药物)一起孵育过夜。在孵育期间，使用板振荡器防止RBC沉降。将外 周血样品与未标记的药物产品一起预孵育以阻断充当测定法的阴性对照的RBC 表面上的CD38抗原位点。孵育期后，将临床上相关浓度的生物素-链霉亲和素 -BV421达雷木单抗(0、0.1、1、10和100μg/mL)或生物素-链霉亲和素-BV421 AB79(0、0.1、1、10和100μg/mL)在RT下在温和振荡器上加入样品中，持 续3小时。然后用BD缓冲液将样品洗涤若干次并且用细胞表面标志物CD45和 CD235a进行染色以进行RBC识别(RBC为CD45-，CD235a+)并且用链霉亲 和素-BV421进行染色以结合生物素化抗体。通过使用生物素-链霉亲和素，可以 扩增RBC上低水平的CD38表达。选择BV421荧光染料是因为其是可商购获得 的最亮的荧光团之一并且在流式细胞仪上使用紫激光，从而使与面板中的其它 通道/标志物的光谱重叠量最小化。总之，此信号扩增方法提供了检测细胞表面 分子的机会，否则所述分子将落入仪器噪声内。随后对样品进行洗涤并且在BD FACSCantoTM II(美国新泽西州富兰克林湖的BD生物科学)上获得。靶细胞获 得被设置为10,000个CD235a+事件。对于淋巴细胞结合，对收集到CPT管中的来自同一健康供体的外周血进行离心并且使用标准技术分离外周血单核细胞 (PBMC)。如针对RBC实验所描述的，对细胞进行洗涤、染色和处理。
为了制备生物素化抗体，在同一天使用商业蛋白A柱试剂盒(英国剑桥的 Abcam)同时纯化AB79(21.4mg/mL，美国加利福尼亚州的武田)和达雷木单 抗(20mg/mL，美国宾夕法尼亚州霍舍姆市的杨森生物技术(Janssen Biotech， Horsham，PA，USA))以去除可能干扰生物素化过程的物质。通过A280/260 确定经纯化的产物的蛋白质浓度并且使用Lightning Link快速生物素缀合试剂盒 (英国剑桥的英诺华生物科学(InnovaBiosciences，Cambridge，UK))将每种抗 体的等量蛋白质与生物素缀合。过程结束时，再次使用A280/260测量蛋白质浓 度。两种抗体均与具有与任何抗体同种型或惰性磁珠(阴性磁珠)结合的抗体 结合能力的商用聚苯乙烯微球缀合。将磁珠与生物素-链霉亲和素-BV421AB79 或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗混合后，混合在一起的两种组分提供具 有适当阴性群体的独特的高信号阳性对照，所述高信号阳性对照可以用于通过 流式细胞术估计每种测试抗体的平均荧光强度(MFI)。使用BD生物科学 FACSDivaTM(美国新泽西州富兰克林湖的BD生物科学)在BD生物科学 FACSCANTOTM II仪器上获得样品。将原始数据文件传递到安全服务器上并且 然后使用
Figure BDA0002579022700000921
版本10(美国俄勒冈州阿什兰(Ashland，OR，USA)的FlowJo 有限责任公司)进行线下分析。对于RBC识别，首先对CD235a+细胞进行门控。然后，针对经门控的细胞确定几何MFI和生物素-链霉亲和素-BV421AB79和生 物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗事件的阳性百分比并且将其绘制成直方图 (图22)。将其与同种型对照进行比较(样品与未标记的AB79或未标记的达雷 木单抗一起预孵育并且然后与其相应的生物素-链霉亲和素-BV421标记的药物 产品一起孵育)。对于淋巴细胞识别，首先使用前向对侧向散射(FSC-A与SSC-A) 排除碎片。然后对CD45阳性群体进行门控并且针对经门控的细胞确定MFI和 生物素-链霉亲和素-BV421 AB79和生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗的阳 性百分比并且将其绘制成直方图(图22)。将其与同种型对照进行比较(样品与未标记的AB79或未标记的达雷木单抗一起预孵育并且然后与其相应的生物素- 链霉亲和素-BV421药物产品一起孵育)。
表10.AB79和达雷木单抗红细胞结合总结(几何中值荧光)
Figure BDA0002579022700000931
ND＝未确定；SD＝标准偏差
结果和讨论
使用高灵敏度流式细胞术测定法确定AB79和达雷木单抗上的生物素含量。 如图23中的结果所示出的，生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗结合的抗体 结合磁珠比生物素-链霉亲和素-BV421 AB79多1.6到2.0倍。因此，与生物素- 链霉亲和素-BV421 AB79相比，生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗是“更亮 的”抗体。因此，应当针对此标记中的差异校准MFI强度的比较。
证实生物素标记的药物产品的特异性是确保观察到的结果是与靶蛋白特异 性结合的结果的重要步骤。竞争测定法是用于测试抗体特异性的常用方法。流 式细胞术测定法用于此竞争评估。简而言之，将来自健康志愿者的外周血样品 与未标记的AB79或未标记的达雷木单抗一起预孵育并且然后随后分别用生物 素化的AB79或生物素化的达雷木单抗进行染色。预期与未标记的药物产品一起 预孵育的样品会阻断生物素化药物产品的结合。如图24所证明的，可以使用未 标记的药物产品将生物素化的AB79和生物素化的达雷木单抗阻断到外周血淋 巴细胞。
使用总共四份来自健康志愿者的外周血样品确定生物素-链霉亲和素 -BV421AB79和生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗与RBC结合的百分比。 如图25和26所示出的，在所有四个所测试的供体中，AB79以剂量依赖性方式 结合表达CD38的RBC。健康志愿者中的峰值RBC结合水平有所不同并且在1 与10μg/mL之间观察这两种药物产品。在10和100μg/mL的生物素-链霉亲和 素-BV421 AB79或生物素-链霉亲和素-BV421达雷木单抗下，所测试的4个供体 中有3个供体的RBC水平较低。有几个因素可以解释药物与CD38结合水平降 低，包含RBC溶血增加或催化结构域从细胞外部翻转到细胞内部(Yoshiga等 人，(2008)《国际分子医学杂志(Int.J.Mol.Med.)》22：369-374)。另外，达雷 木单抗通过胞啃作用至少部分降低了CD38表达水平(Cole等人，(2018)《关节 炎研究与治疗(Arthritis Res.Ther.)》20(1)：85)；CD38复合物和伴随的细胞膜从 多发性骨髓瘤细胞活跃地转移到单核细胞和粒细胞(Kraan等人，(1999)《风湿 病学(Rheumatology)》(牛津大学(Oxford))38(11)：1074-1080)。一个供体 (供体3)的RBC水平随药物量的增加而增加，这可能是由于表面RBC CD38表达较多所致。将需要进行另外的实验以更好地理解最高测试浓度下药物结合 的下降。
比较AB79和达雷木单抗的RBC结合曲线。如表10以及图27和28所描绘 的，在所测试的4个供体中的3个供体中，药物产品之间的RBC结合程度(即， MFI)似乎存在差异；然而，此差异可能归因于每种抗体上的差异化生物素水平， 其中达雷木单抗具有的生物素比AB79多1.6到2.0倍。控制抗体的荧光标记中 的潜在差异的交替分析方法是比较每种抗体的浓度对结合曲线并且有用的度量 是最大结合(即，抗原的最大特异性结合(Bmax))发生时的浓度。在4个供体 中的3个供体中，两种抗体的Bmax是相同的(例如，对于供体1为1μg/mL)。 总的来说，这些数据指示，在测定的当前分辨极限(10倍)内，这两种抗体以 类似的亲和力结合。总之，在此测定中，AB79和达雷木单抗两者均以彼此间10 倍内的亲合力与RBC结合；在此测定系统内，这些抗体对RBC的结合亲和力 不存在10倍或更大的差异。
实例5：人类或猴RBC的体外AB79溶血评估
对来自正常健康人类志愿者和食蟹猴(cynomolgus monkey/cyno)的新鲜全 血(每个物种五个(n＝5)个体)进行体外溶血评估以响应用AB79(27.3mg/mL； 美国加利福尼亚州的武田)、人IgG1同种型对照(7.14mg/mL；Bio X Cell)和 达雷木单抗(20mg/mL；美国宾夕法尼亚州霍舍姆的杨森生物技术)进行的体 外治疗。在0、0.03、0.08、0.25、0.74、2.2、6.6和20μg/ml下检查感兴趣的测 试品的剂量应答。以用作血液应答性的技术阳性对照的最高1％的皂苷溶液开始 评估皂苷的半对数稀释。在37℃、5％CO2的条件下执行治疗1小时以供急性溶 血测量。使用分光光度计在540nm波长下测量吸光度并且溶血百分比计算如下：
Figure BDA0002579022700000951
溶血指数分级如下(溶血指数＝溶血级别)：0-2＝非溶血；2-5＝轻度溶 血，＞5＝溶血。
结果：每个物种(人类和食蟹猴)的所有个体的RBC均响应于溶血指数大 于5的1％皂苷溶液滴定而表现出体外急性溶血。AB79、达雷木单抗和人IgG1 同种型对照在用为零的非溶血指数评估的物种的血性样品中未诱导任何可检测 的溶血(图29和30)。
实例6：AB79在食蟹猴胶原诱导性关节炎模型中的评估
胞外酶CD38在淋巴细胞上的表达响应于抗原攻击而增加并且假设靶向这 些活化的淋巴细胞可以改善自身免疫性疾病中的病理活动。食蟹猴是用于评估 靶向CD38对人的潜在作用的适当模型，因为此物种表现出类似的CD38表达谱 并且人抗CD38抗体AB79以能够进行药理干预的亲和力(EC50＝4.5nM)与猴 CD38结合。因此，在自身免疫性疾病的猴胶原诱导性关节炎(CIA)模型中研 究了AB79的潜在活性。与在研究过程内表现出具有放射损伤和恶化的临床评分 的进行性疾病的经媒剂治疗的对照动物相反，预防性施用AB79(每周3mg/kg i.v.)具有良好耐受性并且防止了关节炎的发展。用AB79(每周3mg/kg i.v.)对 患有关节炎的猴进行治疗性治疗也具有良好耐受性并且降低了疾病进展和症 状。关节炎评分和关节肿胀显著低于媒剂对照并且此伴随有CRP、ALP、NK、 B和T细胞的血液水平减小。组织病理学、形态测定学和放射学显示，与经媒 剂治疗的动物相比，预防性暴露于AB79治疗的动物的关节损伤显著减少，并且 用AB79或地塞米松(每日0.1mg/kg p.o.)治疗性治疗的动物的损伤显著(p＜ 0.05)减少，从而展示了潜在的疾病修饰活性。总之，这些数据指示，消耗CD38 表达细胞可能是一种用于治疗自身免疫性疾病的无类固醇的有害作用的治疗性替代方案。
方法与材料
抗体
AB79可内部获得。荧光染料缀合的抗小鼠IgG购自宾夕法尼亚州西格罗夫 的杰克逊免疫研究实验室(Immunoresearch Laboratories，West Grove，PA)。 Pharmlyse缓冲液从BD生物科学(加利福尼亚州圣何塞)获得。猴蛋白的荧光 染料缀合的抗体购自各种来源：来自BD生物科学(加利福尼亚州圣何塞)的 CD20；来自eBioscience生物科学(加利福尼亚州圣地亚哥)的CD3小鼠抗体； 来自Miltenyi生物技术(加利福尼亚州奥本)的CD16小鼠抗体；来自R&D系 统的CD4和CD8小鼠抗体。除了Alexa Fluor 647缀合的AB79之外，还可内部获得AB79非缀合抗体和具有不同抗原特异性但具有相同Fc IgG1的人源化对照 抗体。用于猴组织交叉反应性研究的主要抗体是兔抗AB79(内部产生)和阴性 对照人IgG1(加利福尼亚州特曼库拉的密理博生物科学研究试剂(Millipore Bioscience Research Reagents，Temecula，CA))。
组织的免疫组织化学
使用免疫组织化学比较从健康人类和食蟹猴供体收集的15种不同组织类型 中的CD38抗原的表达谱。使用抗相关跨膜受体CD31的阳性对照抗体(丹科北 美有限公司(DakoNorthAmerica，Inc.))验证每种组织对于检测CD38的适合性。 从嵌入OCT化合物(加利福尼亚州托兰斯的Sakura Finetek)中的新鲜冷冻组织 样品中切下切片(5μm)并且在RT下在丙酮中固定10分钟。即将染色前，将 玻片在10％中性缓冲福尔马林中固定10秒钟。将经丙酮/福尔马林固定的冷冻切 片在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中冲洗两次并且与被设计成降低非特异性结合的蛋 白质区块(PBS；0.5％酪蛋白；5％人γ球蛋白；0.02％山羊IgG；1mg/ml热聚人IgG)一起孵育20分钟。将未缀合AB79或阴性对照人IgG1(密理博生物科 学研究试剂)以5或25μg/ml涂敷于切片并且在RT下孵育1小时。然后将玻片 用PBS冲洗两次并且执行间接免疫过氧化物酶程序以检测这些主要试剂。然后 将第二抗体——兔抗AB79以5μg/ml涂敷30分钟并且用PBS冲洗两次。通过 将玻片与Dako EnVision+试剂盒中提供的过氧化物酶溶液一起孵育5分钟并且 然后用PBS冲洗两次来阻断内源性过氧化物酶。然后将玻片用DakoEnVision+ 试剂盒中提供的过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG聚合物处理30分钟、用PBS 冲洗两次并且用Dako EnVision+试剂盒中提供的底物色原体(DAB+)溶液处理8分钟。将所有玻片用自来水冲洗、用苏木精复染、洗涤；在饱和碳酸锂中“变 蓝”、洗涤；通过醇脱水、在二甲苯中变澄清并且按照标准方法进行盖片。染色 强度由经美国兽医病理学家学会(ACVP)认证的匿名解剖病理学家进行半定量 分级。
AB79与重组CD38的结合
产生稳定地表达人、小鼠或猴CD38的中国仓鼠卵巢K1(CHO-K1)细胞 以研究抗CD38抗体的细胞表面结合。用人、小鼠或食蟹猴CD38的全长cDNA 克隆体(马里兰州洛克维尔的傲锐东源技术公司(Origene Technologies， Rockville，MD))转染CHO-K1细胞(龙沙美国(Lonza，USA))。选择后，通 过流式细胞术对库进行分类并且利用表达最高的人、小鼠或食蟹猴CD38的克隆 体(最高15％平均荧光强度(MFI))进行结合研究。将每孔200,000个细胞接 种在96孔圆底板中并且用66.7nM的与Abs直接缀合的Alexa
Figure BDA0002579022700000981
488在冰 上在50μl的FACS缓冲液(含1％BSA的PBS)中染色30分钟到1小时。将 细胞在最终体积为200到250μl的FACS缓冲液中洗涤3到4次。将最终的细 胞团块重新悬浮在含1％多聚甲醛的100μl的FACS缓冲液中。在FACS Canto II HTS(BD生物科学)上对样品进行评估并且使用Flojo软件(美国的Tree Star) 进行分析。
细胞系和全血的流式细胞术
为了对细胞系进行染色，将细胞以2×106/ml重新悬浮在FACS缓冲液(5％ 胎牛血清和含0.05％叠氮化钠的D-PBS(不含钙和镁的杜尔贝科磷酸盐缓冲盐 水)(宾夕法尼亚州西切斯特的VWR))中并且将200μl样品用适当的单克隆抗 体在4℃下染色30分钟。用FACS缓冲液洗涤样品并且通过流式细胞术(BD的 FACSCalibur)进行分析。为了对全血进行染色，将来自猴的200μl样品用适当 的单克隆抗体在4℃下染色30分钟。用BD FACS裂解液裂解红细胞，并且然后 用FACS缓冲液洗涤样品，并且通过流式细胞术进行分析。在所有情况下，抗体均在饱和浓度下使用，并且在许多情况下，每个样品最多使用四个抗体。
来自食蟹猴的全血中的AB79活性
食蟹猴全血从查尔斯河实验室(美国马萨诸塞州威明顿市)获得。对于结 合测定，将抗凝性食蟹猴外周全血(100μl)与浓度递增的AB79抗体(43-690nM) 一起在RT下孵育30分钟。使用PE标记的山羊抗人IgG Fc抗体(赛默飞世尔 科技(Thermo FisherScientific))测定AB79与细胞的结合。抗体结合之后，使 用不含固定剂的高产率裂解液(fixative-free high yield lyse)(赛默飞世尔科技) 裂解红细胞(RBC)。然后将细胞用含有0.5％BSA(Miltenyi Biotec)的磁性活 化细胞分选(MACS)缓冲液洗涤两次。通过流式细胞术(Attune NxT声波聚焦 流式细胞仪)收集细胞染色数据并且使用FlowJo软件进行分析。
对于细胞溶解测定，将90μL的全血接种在96孔U型底板的每个孔中。接 种后立即用0.69、2.06、6.17、18.52、55.56、166.67和500nM的AB79或PBS 对照处理全血6、24和48小时。在每个时间点处，将96孔U型底板中经对照 和测试分子处理的全血转移到深孔板中以进行RBC裂解。裂解后，将细胞重新 悬浮在具有CD16-BV605、CD56-PE和CD38-FITC抗体的染色缓冲液中以进行 表面标志物染色。使细胞避光并且在4℃下孵育20分钟。孵育后，将细胞在RT 下以350g离心5分钟并且用1X膜联蛋白V结合缓冲液洗涤。将细胞在RT下 在含有膜联蛋白V Alexa Fluor 647的1X膜联蛋白V结合缓冲液中重新悬浮15 分钟。使用BDFACSCelesta流式细胞仪分析经染色的细胞并且用BD FACSDiva 软件8.0.1版记录数据。绘制每个测试浓度下的NK细胞活力和每个时间点处的 AB79 NK细胞消耗的IC50值并且用GraphPad Prism 7.04进行拟合。
健康猴中的剂量范围发现研究
在一系列研究中，健康的、专门饲养的、实验上的原初食蟹猴通过20分钟 的静脉内输注每周接受媒剂对照、0.03、0.1、0.3和1mg/kg的AB79或每两周 接受3、30或80mg/kg(查尔斯河实验室)。在所有研究中，对动物的临床体征 变化进行评估(每日两次笼旁观察、给药后观察、每周详细检查、食物消耗量 和每周体重)。在所有研究中，在给药前和给药后收集血液样品以评估药代动力 学、药效学和灵长类抗人抗体(PAHA)。根据测试设施SOP(查尔斯河实验室) 对食蟹猴进行研究，所述测试设施SOP符合USDA动物福利法案(9CFR，第 1、2和3部分)中所概述的规定以及《实验动物护理和使用指南》(ILAR出版 物，1996，国家科学院出版社(National Academy Press))中所规定的条件。
用于测定AB79血清浓度的生物分析程序
使用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测量食蟹猴血清中的AB79的浓度。 此方法是利用96孔微量滴定格式的间接ELISA。所述板包被有抗AB79的小鼠 抗独特型抗体。将含有各种浓度的AB79的空白、标准和质量控制(QC)样品 以及猴血清样品加入经包被的微量滴定板中并且在RT下孵育55-65分钟。对微 量滴定板进行洗涤后，加入检测抗体(过氧化物酶缀合的亲和纯化小鼠抗人 IgG)，并且将板另外孵育55-65分钟。再次对板进行洗涤，并且将四甲基联苯胺 (TMB)加入孔中以产生发色团，并且通过加入终止溶液(2N硫酸)来终止显色。测量450nm处的吸光度并且使用4参数逻辑加权(1/y2)标准校准曲线计 算AB79浓度。
用于测定抗AB79抗体的生物分析程序
使用增强化学发光(ECL)方法测量食蟹猴血清的抗AB79抗体筛选。此定 性ECL方法的设计是使得未经稀释的食蟹猴血清样品与300mM乙酸一起孵育。 将酸解离样品在生物素化的AB79、标记有SULFO-TAG的AB79和1.5M Trizma 碱的混合物中孵育以中和酸并且形成免疫复合物。然后将此复合物加入链霉亲 和素包被的MSD板中并且允许其结合。洗涤后，通过向板中加入MSD读取缓 冲液T并且随后通过Ru(bpy)3的电化学反应激发SULFO-TAGTM以产生发光来 检测复合物，使用MSD Sector 6000读取。发光量与单个样品的血清中存在的食 蟹猴抗AB79抗体水平相关。将针对此测定的食蟹猴血清的最小所需稀释度(MRD)设置为1/30。出于图示的目的，所有动物均被单独绘制成抗体滴度和登 记日的函数(图31)。使用标称滴度值绘制具有位于或低于板特异性切点处的值 的血清样品以促进绘制。
猴胶原诱导性关节炎模型
通过对食蟹猴对AB79的药效学应答进行建模并且然后外推每个治疗组所 需的最小动物数量来确保在伦理上负责任地使用非人灵长类动物，以产生统计 学上显著的PD应答差异。从生物医学研究(GZ)有限公司(中国SNBL)获得 三十四只3-4岁、体重2.5-3.3kg的原初雌性食蟹猴。一旦收到，则由合同研究 组织(澎立生物医药技术中国有限公司(PharmaLegacy Laboratories，Inc.，China)) 对每只动物执行健康检查。每个笼子圈养一只动物，并且在实验程序开始前使 其至少适应14天。动物房间的温度维持在20-29℃、相对湿度为40-70％，并且 明/暗周期为12小时。在研究开始前，训练动物接受静脉内输注或口服强饲。按 照常规方案，猴可随意获得蔬菜、水果、食物(中国上海仕林生物科技有限公 司(Shanghai Shilin Biologic Science&Technology Co.Ltd.，China))和水。在笼 架内对笼子进行分层以降低任何环境影响对研究的影响。根据中国动物实验法， 此实验设计、所有研究方案和实验程序均由主办伦理委员会(澎立生物医药技 术有限公司)审查并批准。
基于预筛选标准选择猴以进行研究。未向一只原初动物施用胶原并且将其 维持为疾病诱导的阴性对照。在第0天和第21天向剩余动物皮下施用溶解在0.01 N乙酸(中国上海的SPGC国药集团化学试剂有限公司(SPGC Sinopharm Chemical Reagent Co.，Ltd；Shanghai，China))中的最终浓度为4mg/mL的牛II 型胶原(中国四川)，(Mihara M.等人，《临床免疫学(Clin Immunol.)》2001； 98(3)：319-26；Uchiyama Y.等人，《生物学与药学通报(Biol Pharm Bull.)》2008； 31(6)：1159-63；Uchiyama Y、Koike N、Mihara M，“猴胶原诱导性关节炎中的 贫血与血清IL-6而非TNFa相关(Anemia in monkey collagen-inducedarthritis is correlated with serum IL-6，but not TNFa.)”《国际风湿病学(Rheumatol Int.)》2008 28：879-883；Kato A.等人，《实验和分子病理学(Experimentaland Molecular Pathology)》200884：262-270)(Mihara等人，(2001)《临床免疫学》98(3)：319-26； Uchiyama等人，(2008)《生物学与药学通报》31(6)：1159-63；Uchiyama等人，(2008)《国际风湿病学》28：879-883；Kato等人，(2008)《实验和分子病理学》 84：262-270)。用等体积的完全弗氏佐剂(CFA)(美国圣路易斯的西格玛奥德里 奇(Sigma-Aldrich；St.Louis，USA)；)使胶原乳化。用氯胺酮(4mg/kg i.m.) 对动物进行预镇静并且如果需要，则应用另外的麻醉，如1.5-5％异氟醚(吸入 麻醉机，Matrix vip3000异氟醚)以0.8-1.5升的氧气流速起作用。每次对动物进 行镇静时，免疫部位产生的任何溃疡性皮肤病变均要用碘进行治疗，以防止感 染。
在第0天将接受胶原的七只动物分配到预防性AB79组(图31A)。预防性 AB79动物从第7天开始每周接受3mg/kgAB79输注，其中在第56天施用最后 一个剂量，总共8个剂量(图31A)。在第63天将此组中的动物处死。从第7 天开始，将剩余的免疫动物作为一组进行治疗并且接受每周30分钟静脉内输注 媒剂(盐水)，直到动物达到或超过(≥)最高临床关节炎评分(CIA)的15％。 此时，将动物登记进入媒剂对照组、治疗性AB79组或治疗性地塞米松组并且登 记由于疾病发作的时间差异而在滚动的基础上持续进行(图31A)。对于登记进入媒剂对照组的动物，执行每周媒剂输注，持续5周(图31A)。最后一个剂量 后7天将此组中的动物处死。对于登记进入治疗性AB79组的动物，每周执行输 注，持续5周(图31A)。最后一个剂量后7天将此组中的动物处死。登记进入 治疗性地塞米松组的动物每日接受口服强饲，持续5周(图31A)并且在最后 一个剂量后1天被处死。每日观察动物的健康欠佳体征和对治疗的一般反应。 记录正常健康外观和行为的所有例外情况并且在标准临床观察表格中详细说 明。
关节炎活动性评估
在驯化期(实验开始前5天)期间、在每个疾病诱导周期的前一天测量一 次猴的体重，并且然后每周一次，直到研究结束。在第0天和第21天，记录一 组中具有关节肿胀的动物数量，并且然后每日记录，直到研究结束。在第0天、 第21天，记录每只动物的关节肿胀的近端指间(PIP)关节(分别为每只手和 脚)数量，并且然后每周记录一次，直到研究结束。在第0天、第21天，用卡 钳测量前后肢(无拇指)的PIP关节的纵向轴和横向轴，并且然后在疾病发作 后每周测量一次，直到针对所有具有关节炎的PIP的研究结束。计算16个PIP 关节的平均椭圆面积并且采用作为单独数据。使用下式计算每个PIP的椭圆面 积：椭圆面积＝纵向轴×横向轴×3.14×1/4。使用下式计算椭圆面积变化百分比 和关节肿胀：椭圆面积变化％＝(在第X天的平均椭圆面积/第1次致敏当天的 平均椭圆面积)×100。关节肿胀＝(在第X天的平均椭圆面积-第1次致敏 当天的平均椭圆面积)。
临床关节炎评分
在第0天和第21天，对猴的每个肢体的关节炎严重程度进行评分，并且然 后根据以下这些标准每周评分一次，直到研究结束：(0)正常；(1)轻度关节 炎，轻微但明确；(2)中度肿胀；(3)重度关节炎，具有显著肿胀和/或明显关 节畸形。对每个爪子的以下关节进行检查和评分：总共15个关节，包含5个掌 指(MCP)关节、4个PIP(近端指间)关节、4个DIP(远端指间)关节、1 个第一趾指间关节；每个腕关节或踝关节均作为单个复合关节进行评分。还评 估了每个肢体的膝盖/肘的疾病严重程度。每只动物的关节炎评分是每个单独关 节的总评分，其中最高评分为192(16X 3x 4)(16：每个肢体的关节总数加膝 盖/肘；3：每个单独关节的最高评分；4：每只猴的肢体数量)。
血液收集与分析
血液样品用于CBC、针对抗体的血液化学和血清制备、PK和ADA测量， 并且在以下所指示的时间点处从动物中收集。来自媒剂对照组和预防性AB79 组的动物：在第1周和第5周期间，采血两次，一次在给药前，并且一次在第 二天。在第2周、第3周、第4周、第6周、第7周和第8周期间，在即将施 用AB79前收集血液样品。在第9周期间，当动物终止给药时收集血液样品。对 所有其它动物进行每周血液收集，直到疾病达到最高关节炎评分的15％的阈值。 在分配到媒剂组、治疗性AB79组或治疗性地塞米松组后，在给药前和终止给药 时每周收集血液样品。另外，在第一剂量药物后的第二天和第五剂量后的第二 天收集样品。对于媒剂对照、预防性AB79、治疗性AB79和地塞米松组，在第 一剂量(输注当天)前、第一剂量后的第二天、第二剂量(给药当天)前、第 五剂量(给药当天)前和终止给药当天收集用于流式细胞术的血液样品。对于 治疗性AB79组，在第一剂量药物前、第一剂量后的第二天、第8剂量前、第 29剂量前和终止给药当天收集用于流式细胞术的血液样品。
射线影像检查
在研究结束时，对活的、失去知觉的动物的手和脚的每个关节(DIP、PIP、 第1IP和MCP-通常涉及人类RA的部位)执行检查。放射影像分级基于0-4 分级系统以盲法方式进行：(0)正常；(1)关节软骨层和/或软骨下骨区域的轻 度畸形；(2)关节软骨层和软骨下骨区域的严重畸形，在骨膜表面和关节边缘 存在少量模糊但仍可见的骨赘；(3)与在2级中观察到的变化类型相同，但进 一步发展并且在骨膜表面存在大量骨赘，关节腔难以辨别或不可见；(4)与3 级相同的变化类型，但进一步发展，关节腔变得无法检测，骨骼出现硬化或僵硬，出现重大畸形。
来自患有关节炎的猴的组织的组织病理学和组织形态计量学
研究结束时，在麻醉下通过放血对动物进行安乐死。收集爪、脾、结肠和 淋巴结(肠系膜和腹股沟)并且将其固定在中性缓冲福尔马林中。PIP关节和 DIP关节用15％EDTA脱钙、脱水并且嵌入石蜡中：(8块/爪×4爪×22只动 物＝704块)。使用旋转式切片机获得关节的额冠状切片。骨组织病理学家使用 甲苯胺蓝染色的切片(32x 22只动物＝704个玻片)执行组织病理学评分。对 组织学切片的以下组织病理学特征进行定性评估：细胞浸润、血管翳、软骨病 变和骨吸收。使用与Nikon Eclipse E400光/荧光显微镜和视频子系统连接的 Osteomeasure软件(佐治亚州亚特兰大的OsteoMetrics)执行定量组织形态计量。 骨组织病理学家使用甲苯胺蓝染色的玻片(704个玻片)对关节区域和表面盲法 执行组织形态计量学测量。
统计分析
数据以平均值±平均值的标准误差(SEM)呈现。使用GraphPad Prism对 原初药物、模型药物和参考药物(地塞米松)以及测试品组中的每个参数进行 统计分析。p＜0.05被认为具有显著差异。
结果
CD38在食蟹猴中的表达谱
为了确定食蟹猴是否可以作为用于评估靶向CD38对人的潜在作用的适当 模型，对从健康人类和食蟹猴供体收集的15种不同组织类型中的CD38抗原的 表达谱进行比较。免疫组织化学显示，AB79与两个物种的结肠、胃、小肠、骨 髓和淋巴结中的单核白细胞以及结肠、胃和小肠的固有层中的一些内皮细胞结 合(表11)。
表11.在人类和猴组织中的CD38表达谱的比较
Figure BDA0002579022700001061
相反地，在人而非猴中，AB79还与肝、肺、前列腺和子宫(子宫颈)中的 单核白细胞以及前列腺腺泡上皮细胞结合。在任一个物种的心脏、肾脏、胰腺、 皮肤和子宫内膜中均未观察到AB79结合。AB79染色在人组织中的强度通常为 中度到显著(3+到4+)并且在食蟹猴组织中的强度为最小到轻度(1+到2+)(表 11)，这可以反映AB79在人对猴CD38的亲和力上的差异和/或CD38表达量上 的差异。染色模式以细胞质为主并且在一些细胞中细胞膜被染色(表11)。总的 来说，得出的结论是：猴是用于在自身免疫性疾病的模型中评估靶向CD38的一 或多种潜在的药理作用的适当的模型物种。
AB79与由食蟹猴表达的CD38结合
人CD38蛋白的氨基酸序列与其食蟹猴直系同源物表现出91％的氨基酸同 一性，与小鼠和大鼠的氨基酸同一性为59％并且与兔的氨基酸同一性为54％。 人CD38中AB79的结合表位与猴CD38中对应序列的比较显示，在位置274处 用谷氨酸盐对赖氨酸进行单个氨基酸取代。为了确定AB79是否可以用于评估靶 向CD38在猴中的潜在作用，在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达猴CD38并且 AB79以4.5nM的最大有效浓度(EC50)的一半与猴CD38结合(图32A)。此 值比由CHO细胞表达的人CD38的AB79的结合亲和力低大约10倍(KD＝0.7 nM)，从而指示AB79在食蟹猴中结合猴CD38的效力比在人对等物中弱。AB79 还与全血中的猴B、NK和T细胞结合并且NK细胞表现出比B细胞和T细胞 更高的平均荧光强度(图32B)，从而指示猴NK细胞的每个细胞表达的CD38 密度更高。与猴全血一起在体外孵育后，AB79以剂量依赖性方式溶解NK细胞 (图32C)，表现出的平均EC50为29.6nM，这比AB79从人外周血中溶解NK细胞的效力低大约30倍(数据未示出)。总的来说，这些数据指示，食蟹猴对AB79 的药理作用可能不如人敏感。尽管如此，此交叉反应谱以及CD38表达谱的相似 性表明，食蟹猴是用于研究AB79在体内的一种或多种潜在药理作用的适合的模 型物种。
AB79在健康猴中的药理作用
为了表征AB79在体内的药理作用，每周以0.03、0.1、0.3和1mg/kg并且 每两周以3、30和80mg/kg向健康食蟹猴IV输注AB79，持续3个月，并且最 后一个剂量后对动物亚群进行监测，持续3个月(图31A)。峰值AB79浓度通 常在输注结束时出现并且通常与剂量成比例(表12)。
表12.向雌性食蟹猴静脉内输注AB79后的平均血清药代动力学参数
Figure BDA0002579022700001081
在未表现出抗AB79抗体的动物中，暴露通常以成剂量比例的方式在稳态下 增加并且第13周累积1.7到2.4倍(表12)，这与由于AB79的靶标介导的药物 处置导致的清除率减小一致。未表现出抗AB79抗体的3和80mg/kg群组中的 动物的最后一个剂量后的半衰期分别为237小时和415小时(表12)。未观察到 PK特性上的性别差异。
NK细胞群体以均匀的高密度表达CD38(图32B)，并且在第13周第一次 输注ED50为0.3mg/kg(图31B)、对应Cmax为7.63ug/mL并且总平均暴露量为 665hr*μg/mL(表12)的AB79后，外周血中的NK细胞群体降低。相反，B细 胞群体以低于NK细胞的中值密度不均匀地表达CD38(图32B)，并且在第13 周初次输注ED50为1.0mg/kg(图31C)、Cmax为21.1ug/mL并且总平均暴露量 为2700hr*μg/mL(表12)的AB79后，外周血中的B细胞群体降低。T细胞群 体也以甚至低于B细胞的中值密度的中值密度(数据未示出)不均匀地表达 CD38，并且在第13周第一次输注ED50为30mg/kg(图31D)、Cmax为62.1ug/mL 并且总平均暴露量为18400hr*μg/mL(表12)的AB79后，外周血中的T细胞 群体降低。总的来说，这些剂量范围发现数据指示，每周3mg/kg的剂量将维持 外周血中的总NK、B和T细胞群体分别相对于基线水平高出80％、60％和20％。
AB79在胶原诱导性关节炎中的概况
在食蟹猴——一种免疫系统、关节和骨骼解剖与人类足够类似到能够使用 临床指标的物种中用CIA模型研究了AB79的潜在功效。为了诱导关节炎，在 第0天和第21天用II型胶原对猴进行皮内治疗(图33)并且抗胶原抗体的出现 证实了每只动物均已成功免疫(数据未示出)。在第7天用持续8周的3mg/kg 的预防性AB79治疗方案对一组动物进行治疗。在这3个治疗组中，将患有显性 疾病的猴随机分组并且施用媒剂对照、3mg/kg TAK 079或0.1mg/kg地塞米松。 开始治疗后，治疗性治疗持续了5周(图33)。
AB79在预防性和治疗性方案两者中均具有良好耐受性。健康对照猴的体重 随着时间推移而增加，而其它四组中的免疫胶原猴从第7天开始体重减轻(图 34A)，从而指示与关节炎发展相关联的全身性影响。基于体重相对于登记时的 基线体重的变化百分比，发现预防性AB79组、治疗性AB79组和治疗性地塞米 松组的动物的体重在治疗开始后14天开始重新增加，从而表明AB79和地塞米 松阳性对照治疗均具有治疗益处。与健康的、未经治疗的对照相比，经AB79 和地塞米松治疗的猴的体重增加接近正常水平；用媒剂治疗的患有关节炎的动 物体重减轻(图34A)。使用临床关节炎评分对关节炎的严重程度进行评估，所 述临床关节炎评分是使用192分评分系统在研究过程内考虑动物的每个可测量 关节的对疾病活动性进行的总体评估。经媒剂治疗的动物表现出进行性疾病， 其中在研究过程内临床评分不断增加(图34B)。与媒剂对照相比，预防性暴露 于AB79显著地(p＜0.01)防止了关节炎的发展。类似地，与媒剂对照相比， 用AB79或地塞米松进行的治疗性治疗显著地(p＜0.05)抑制了关节炎的发展 并且相对于治疗前基线降低了关节炎评分(图34B)。关于发炎的PIP关节的数 量(图34C)和所有PIP关节的总体平均肿胀(图34D)，在PIP关节的亚群中观察到类似影响。为了获得对关节炎关节以及AB79在人关节炎中具有“疾病修 饰”活动性的潜能的综合评估，对每个IP和MCP关节执行射线影像检查。与 媒剂对照相比，预防性暴露于AB79显著(p＜0.01)防止了PIP(数据未示出)、 DIP(图34E)和MCP(图34F)关节损伤。类似地，与媒剂对照动物相比，治 疗性暴露于AB79或地塞米松导致PIP(数据未示出)、DIP(图34E)和MCP (图34F)关节损伤显著减少(p＜0.05)。为了表征进行性关节炎的组分，针对 细胞浸润、血管翳严重程度、软骨损伤、骨吸收和骨赘形成对DIP和PIP关节 进行组织学分析。预防性暴露于AB79导致复合评分显著低于(p＜0.01)媒剂 对照值并且在大小上与未用胶原进行免疫的动物相当(图35A)。AB79对每个 组分的作用类似；血管翳(图35B)、浸润性白细胞(图35C)、软骨病变(图 35D)、骨吸收(图35E)和骨赘形成(图35F)的评分显著低于(p＜0.01)媒 剂对照值。对于用AB79或地塞米松进行的治疗性治疗，也观察到了较小程度的 类似差异(图35A-E)，尽管并非所有差异均具有统计学意义。
在盲法研究中，由经委员会认证的兽医病理学家对所有DIP和PIP关节执 行定量组织形态计量，包含关节软骨面积(图36A)、受损关节软骨的厚度(图 36B)、受损关节表面的百分比(图36C)以及骨赘面积对总骨膜表面(图36D)。 所有参数均展示了预防性暴露于AB79显著防止了关节损伤的发展。用AB79进 行的治疗性治疗降低了疾病的严重程度，尽管一些组织形态计量学测量未实现 统计学意义。AB79的治疗作用与治疗性施用的地塞米松类似。
C反应蛋白(CRP)(图37A)、碱性磷酸酶(ALP)(图37B)和白蛋白(ALB) (数据未示出)的水平与疾病严重程度相关。用AB79进行的预防性治疗防止了 在媒剂对照动物中观察到的与炎症相关联的CRP(图37A)和ALP(图37B) 增加。用AB79进行的治疗性治疗引起CRP和ALP快速减少，而用地塞米松则 需要进行延长治疗才能降低CRP和ALP水平(分别为图37A和37B)。在血清 化学参数中未发现肝损伤的证据(例如，ALT或AST增加)，这表明ALP增加 是由于患有CIA的动物的骨疾病发展，并且ALP降低是由于暴露于AB79的动 物的骨损伤降低。肌酸酐、血尿素氮、葡萄糖和总蛋白的血清化学值随时间推 移而变化，但示出与关节炎严重程度或治疗方案无一致相关性(数据未示出)。
在研究期间进行了血液学、全血细胞计数和差异分析并且报告了关键参数。 暴露于AB79或地塞米松后，未观察到RBC的水平变化(图38A)。此外，在关 节炎发展后，血细胞比容计数减少，而在用AB79或地塞米松治疗后，血细胞比 容计数又回到了空白对照水平(图38B)。在关节炎发展后，网织红细胞升高， 并且AB79和地塞米松治疗两者均使网织红细胞计数降低到在空白对照中发现 的正常水平(图38C)。血小板和中性粒细胞水平均随着关节炎升高，并且AB79 治疗使血小板和中性粒细胞水平两者均降低到空白对照，而地塞米松则无作用 (分别为图38D和38E)。相反，相对于空白对照和用AB79进行的治疗，总淋 巴细胞水平随着疾病减小，如所预期的，进一步降低了淋巴细胞水平，而用地 塞米松治疗则无作用(图38F)。
在外周血的淋巴细胞亚群中，NK细胞在暴露于AB79的24小时内降低到 基线水平以下＞95％(图39A)，而B细胞(图39B)、T细胞(图39C)和单核 细胞(图39D)的基线水平分别最大降低60％、55％和50％。NK和B细胞降低 在整个给药过程中是持续的，而T细胞和单核细胞降低是瞬时的并且仅在第一 次输注后观察到。在AB79预防性治疗后，在每个细胞群体中均观察到类似的降 低模式，除了此组动物在治疗前的单核细胞水平较低之外，并且单核细胞水平 并未响应于治疗而改变。经媒剂和地塞米松治疗的动物之间的B、NK、T细胞 或单核细胞计数均未观察到差异(分别为图39A、29D和29F)。
进行血清生物分析以测量AB79和抗AB79抗体的浓度。在以范围为24-97 ug/mL的Cmax预防性(图40A)或治疗性(图40B)给药的每只动物中均实现 了实质性暴露。所有暴露于AB79的动物均在体外表现出超过CD38饱和(图32A)和NK细胞裂解(图32C)的EC50的谷浓度。从初始给药后14-30天并且 直到研究结束，在预防组的7只动物中的4只动物中检测到抗AB79抗体(图 40C)。到第31天，两只动物均表现出与这些动物中AB79的低浓度相对应的高滴度(图40A)，从而指示这些抗AB79抗体可能影响清除率。从初始给药后21 天到研究结束，在治疗组的5只动物中的4只动物中也检测到了抗AB79抗体(图 40D)，并且到研究结束时，两只动物均表现出与这些动物中AB79的低浓度相 对应的高滴度(图40B)。尽管如此，所有动物均包含在数据分析中，因为在整 个研究期间，大多数靶细胞保持相对于基线水平降低(图39E和39F)，除了第 二治疗剂量后的T细胞之外(图39G)。
讨论
据报告，小鼠中CD38的缺乏导致CIA的减毒形式，从而说明此分子在自 身免疫性疾病的模型中具有一种或多种非冗余功能，然而尚未研究CD38细胞在 灵长类动物模型中的作用。另外，大量研究已经指示，外周血细胞上CD38表达 的总体水平与人RA和SLE患者的疾病活动性呈正相关(Cole S.等人，《关节炎 研究与治疗》2018年5月2日；20(1)：85；KraanM.C.等人，《风湿病学》(牛津 大学)1999年11月；38(11)：1074-80；Vital E.M.等人，《关节炎与风湿病(Arthritis Rheum.)》2011年10月；63(10)：3038-47；或Banchereau R.等人，《细胞(Cell)》 2016年4月21日；165(3)：551-65)。抗CD38 mAb AB79在体外消耗来自患有RA或SLE的患者的血液或骨髓样品中的浆细胞(Smithson等人，(2017)《免疫 学杂志》198(1增刊)224.20；Cole等人，(2018)《关节炎研究与治疗》20(1)：85； Wang等人，(2016)《关节炎与风湿病》68(增刊10)2016ACR/ARHP年会，1085； Mihara M.等人，《临床免疫学》2001；98(3)：319-26；以及Uchiyama Y.等人，《生 物学与药学通报》2008；31(6)：1159-63)。与处于开发中的其它抗CD38 mAb(例 如，达雷木单抗、伊沙妥昔单抗和MOR202)相反，AB79与由食蟹猴表达的 CD38结合，并且为确定降低细胞表达CD38的水平是否将预防和/或改善自身免疫性非人灵长类动物模型中的炎症和组织损伤提供了独特的机会。AB79是一种 有效介导CD38+细胞消耗的高亲和力单克隆抗体(Smithson，G.等人，《免疫学 杂志》2017年5月1日，198(1增刊)224.20)。综合分析显示，CD38是针对富 含浆细胞的前期疾病和经确定的类风湿性关节炎和全身性红斑狼疮的治疗靶点 (Cole S.等人，《关节炎研究与治疗》2018年5月2日；20(1)：85)。
将食蟹猴确定为用于评估AB79在自身免疫性疾病中的潜在作用的适合的 模型，因为这些猴中的CIA以类似于人RA的对称性小关节多发性关节炎为特 征(Mihara等人，(2001)《临床免疫学》98(3)：319-26；Uchiyama等人，(2008)《生 物学与药学通报》31(6)：1159-63；Uchiyama等人，(2008)《国际风湿病学》 28：879-883；Kato等人，(2008)《实验和分子病理学》84：262-270，这些物种之 间的CD38表达谱类似(表11)，并且AB79以比与人CD38结合的亲和力低10 倍的亲和力与猴CD38结合(图32)。得出的结论是：每周3mg/kg的AB79剂量足以用于评估CD38在CIA中的潜在作用，因为在健康猴中的剂量范围研究 指示，每周3mg/kg的AB79剂量将使外周血中的总NK、B和T细胞群体分别 相对于基线水平降低80％、60％和20％以上(图31B、31C和31D)。尽管在一 些动物中出现了抗AB79抗体(图39C和39D)，但在用于预防性给药的CIA模 型中实现了类似的NK、B和T细胞降低(图37E、37F和37G)。在预防性暴露 的3只动物中，随时间推移的AB79浓度的减小(图39A)指示，这些抗体可能 具有增加的清除率，然而到研究终止时，B、NK和T细胞尚未恢复到基线水平 (图37E、37F和37G)，从而指示在整个研究过程中，暴露于AB79足以维持PD 作用。因此，这些动物均包含在所有分析中。对于用AB79进行的治疗性治疗通 常也是如此。到研究终止时，NK细胞和B细胞尚未恢复到基线水平(图37E、 37F和37G)，从而指示在整个研究过程中，暴露于AB79足以维持PD作用。 相反，到研究终止时，T细胞计数已经恢复到基线水平(图37G)，从而表明抗AB79抗体可能部分混淆了对治疗数据的解释(即，低估了表达CD38的T细胞 在猴CIA中的贡献)。
如所有评估中一致展示的，预防性施用AB79防止了关节炎的发展，而用 AB79进行的治疗性治疗抑制了关节炎的发展和关节损伤(图34、35和36)。关 节的组织学评估证明，AB79发挥了相对广泛的作用，防止了血管翳形成(图 35B)、浸润(图35C)、软骨病变(图35D)、骨侵蚀(图35E)和骨赘形成(图 35F)。值得注意的是，用AB79和地塞米松进行的治疗性治疗还抑制了这些进 行性组织学改变，尽管其大小小于预防性施用。随着治疗性治疗的进行，关节 炎评分随时间推移而降低(图34B，34C和34D)，从而指示了潜在的损伤逆转。 总的来说，这些数据证明了与预防性或治疗性暴露于AB79一致的疾病修饰作 用。
这些治疗性AB79和地塞米松治疗的作用在所研究的方案中似乎彼此相当。 治疗性使用类固醇(如地塞米松)在治疗人类自身免疫性疾病(包含RA和SLE) 上高度有效，然而有害的副作用(例如，骨质疏松症、高血压、糖尿病、体重 增加、白内障、青光眼、皮肤变薄和淤青)限制了这些疗法的长期使用。靶向 CD38细胞消耗以在无类固醇的有害副作用的情况下在人类自身免疫性疾病中 提供相当疗效保证了未来的临床研究。
AB79的预防和治疗作用与总淋巴细胞(图38F)、NK细胞、B细胞和T细 胞(图37C-37E)的血液水平持续降低、单核细胞瞬时降低(图37F)以及红细 胞(图38A)、血小板(图38D)和中性粒细胞(图38E)无变化相关联。这些 药效学数据显示，表达CD38的细胞通过AB79降低的敏感性存在差异。降低通 常与细胞表达CD38的密度相关；NK细胞群体均匀地表达了所检查的所有细胞 类型中的最高中值密度的CD38(图32B)并且对AB79最敏感(图31B和37C)。 在B细胞上表达的CD38的最高密度比在NK细胞上低大约3倍(图32B)并且 B细胞群体对AB79的敏感性低于NK细胞(图31C和37C)。CD38通常以低 于在B细胞表达的中值密度在T细胞上表达(图32B)，并且T细胞通过AB79 降低的敏感性低于B细胞和NK细胞(图31D和37D)。表达低密度的CD38的 细胞(例如，红细胞)或不表达CD38的细胞(例如，中性粒细胞)不受AB79 的影响(图37A、37D和37E)。单核细胞是例外，其以中等密度均匀地表达CD38 并且仅通过AB79瞬时降低(图37F)。单核细胞瞬时降低的动力学不同于针对 B细胞、T细胞和NK细胞所观察到的持续降低并且指示了不同机制。在体外观 察到了由AB79对NK细胞进行的直接细胞溶解(图32C)，并且在单个剂量的 AB79后在体内发生NK细胞、B细胞和T细胞的持续降低(数据未示出)，这 指示CDC和/或ADCC在体内介导这些B细胞、T细胞和NK细胞降低。相反， 单核细胞在体外未被细胞溶解(数据未示出)并且在体内未表现出持续降低(图37F)，这指示交替机制(例如，边集)在体内介导瞬时降低。在健康受试者中 也已经观察到了人类单核细胞对AB79细胞溶解的抗性(未出版)并且已经针对 多发性骨髓瘤患者中的达雷木单抗进行了描述(Nijhof等人，(2016)《血液》 128(7)：959-70)。人类单核细胞对CDC和ADCC抑制剂的表达与达雷木单抗对 细胞溶解的抗性无显著相关性，并且单核细胞对达雷木单抗和AB79相对不敏感 的原因仍然是未知的。
虽然在难治性骨髓瘤患者中，用AB79观察到的NK细胞的降低与通过达雷 木单抗观察到的NK细胞降低在定性上是一致的，但在定量上存在差异。在猴 中将外周血NK细胞维持在低于基线水平50％处所需的AB79的IV输注剂量(0.3 mg/kg)、最大浓度(Cmax＝4.32ug/mL)和暴露量(AUC366＝327μg·hr/mL)(图 31B)比在难治性骨髓瘤患者中通过达雷木单抗实现NK细胞的相当降低所需的 对应IV输注剂量(24mg/kg)、最大浓度(Cmax～573ug/mL)和暴露量(AUCinf～97175μg·hr/mL)低大约80倍、116倍和297倍(Casneuf等人，(2017)《血液进展(Blood Adv)》1(23)：2105-2114；Clemens等人，(2017)《临床药代动力学(Clin.Pharmacokinet.)》56(8)：915-924。值得注意的是，AB79以与达雷木单抗与 表达人CD38的细胞结合的亲和力(KD＝4nM)类似的亲和力(KD＝4nM) 与猴淋巴细胞结合(药物评估与研究中心(Center For Drug Evaluation And Research)申请号：761036origls00一个或多个药理学综述)，然而尚不清楚这些 差异是否由物种之间的潜在差异、疾病状态和/或相应抗体的效力所致。尽管如 此，更明确的比较需要难治性骨髓瘤患者中AB79的药代动力学和动态数据，因 为达雷木单抗不会与来自小鼠、大鼠、兔、猪、食蟹猴和恒河猴的CD38交叉反 应(2016年4月1日EMA/278085/2016人用药品委员会(CHMP)评估报告达 雷木单抗国际非专利商标名：达雷木单抗程序编号EMEA/H/C/004077/0000)。
总之，当预防性施用时，用溶细胞抗体AB79降低表达CD38的细胞防止了 猴中的CIA发展，而当治疗性施用时，逆转了疾病进展。利用来自SLE患者的 血液和骨髓样品的先前研究证明，AB79在体外消耗80％的短期和长期存活的浆 细胞并且降低自身抗体(例如，VH4-34 9G4+、抗Ro和抗dsDNA)(Wang等人， (2016)《关节炎与风湿病》68(增刊10)2016ACR/ARHP年会，1085)。这些综合 数据表明，此治疗策略在治疗人RA、SLE以及其它自身免疫性疾病上可能是有 效的。
实例7：AB79在健康人类志愿者中的评估
此研究通过在健康受试者中以递增剂量进行单次静脉内(IV)输注或皮下 (SC)注射AB79的随机、双盲、安慰剂对照研究来表征AB79的安全性、耐受 性、药代动力学和药效学。
结果
AB79耐受性良好。所有不良事件(AE)均为轻度或中度，并且在所测试 IV和SC剂量分别高达0.06和0.6mg kg-1时，未由于AE或输注或注射部位反 应而停药。在较高剂量下，细胞因子水平的瞬时增加(主要在IV施用后)与 CD38表达细胞的降低同时发生；临床症状主要包含轻度发热、头痛和体位性低 血压。实验室测试、心电图、生命体征或体格检查均未报告与AB79治疗相关的 显著发现。AB79以类似剂量降低了浆母细胞和自然杀伤(NK)细胞水平，其 中针对IV和SC施用的50％的最大有效剂量分别为大约0.003和0.1mg kg-1。免 疫球蛋白(Ig)M和IgA降低，但IgG未发生相当变化。对于所有剂量水平， 总白细胞、粒细胞、淋巴细胞、红细胞和血小板计数均保持在正常范围内。
结途
当IV或SC施用时，AB79降低了健康受试者的外周血中的浆母细胞和NK 细胞水平并且总体上是安全且耐受性良好的。与IV给药相比，SC给药耐受性 更好并且靶细胞消耗更持久。此浆细胞溶解概况可以用于治疗由血浆或NK细 胞、恶性对应物(例如，多发性骨髓瘤和NK细胞白血病)以及致病性免疫球 蛋白引起的病症。
研究设计和目标
这是在健康成人受试者中进行的首次人类(FIH)1期、随机、双盲、安慰 剂对照、单个剂量的AB79研究。主要研究目标是评估IV输注或SC注射后AB79 的单个递增剂量的安全性和耐受性。次要目标是评估血细胞群体上的PK和PD 以及免疫原性。此研究登记了共74名受试者。在随机分配前的28天窗口期内， 间隔至少五天的两次筛选访视后，受试者在给药前第-2天入院进行基线评估。 AB79在第1天在六个群组中以0.0003、0.001、0.003、0.01、0.03或0.06mg kg-1的顺序递增剂量通过2小时IV输注施用，或在另外四个群组中以0.03、0.1、0.3 或0.6mg kg-1的剂量通过SC施用。剂量选择基于衍生自一系列食蟹猴研究的 PK/PD模型(Roepcke等人，(2018)《药理研究与展望(Pharmacol Res Perspect.)》 6(3)：e00402)。在每个剂量水平下，六到八名受试者被随机分配到AB79(n＝4 到6)或匹配的安慰剂(n＝2)。
哨兵给药用于每个群组，其中最初的两个受试者接受AB79或安慰剂(1∶1)。 在对每个群组中的剩余受试者进行给药前，对这两个受试者的24小时给药后安 全性和耐受性数据进行审查。将参与者限制在住院临床药理学单位(CPU)中 直到第8天，然后每周或每两周进行随访，其中在第78天进行最后一次计划的 临床访视以进行一般安全性评估以及PK、PD和免疫原性分析。在第92天进行 最终电话随访。
剂量递增主要基于使用不良事件分级标准的通用术语标准进行分级的AE 严重程度。如果一个群组中至少有两名受试者经历导致中度临床综合征或中度 到重度施用反应的细胞因子释放综合征(CRS)，则要停止剂量递增。鉴于AB79 是一种淋巴细胞细胞消耗性抗体，如果观察到淋巴细胞计数的总数或亚群的临 床相关降低(名义上相对于受试者的最低给药前值降低＞50％并且低于正常参考 范围(NRR)下限)并且维持≥29天，则不允许进一步的剂量递增。在开始下 一个更高剂量前，研究者和主办者审查了每个剂量水平下的所有参与者的所有 盲法安全性数据。
所述研究根据位于英国哈罗市北威克公园医院的百瑞精鼎国际公司1期 CPU(Parexel International Phase 1 CPU)的良好临床实践指南进行。所述协议由 当地独立伦理委员会——英国伦敦的伦敦-布伦特研究伦理委员会(the London-Brent ResearchEthics Committee，London，UK)审查并批准(批准号 16/LO/2067)。在开始任何研究程序前，所有受试者均签署知情同意书。
研究参与者
符合条件的参与者为年龄介于18到55岁、体重为50到100kg并且身体质 量指数(BMI)为18.5到30kg m-2的健康男性或女性。
考虑到CD38在NK细胞上高表达，CD45+淋巴细胞、T细胞、CD4+ T细 胞和B细胞的基于流式细胞术的计数要求高于NRR下限并且NK细胞计数在 NRR的前百分之50内。NRR由执行流式细胞分析的武田定义。
如果参与者符合协议中定义的排除标准，如已知的免疫缺陷、感染风险升 高、恶性肿瘤史或在研究前服用可能影响研究试验药物效果的另一种试验药物， 则将参与者排除在外。
为了测量血清AB79浓度，在给药前和给药后多达168小时收集连续的血液 样品，并且在给药后的中间时间点或提前终止(ET)时收集另外的血液样品。 使用在ICON(纽约州怀特斯伯勒)验证的酶联免疫吸附测定确定血清AB79浓 度。
为了评估AB79的PD应答，在筛选访视时、给药后第-1天、第1天、第2 天(仅SC)、第3天(仅SC)、第4天(仅IV)、第5天(仅SC)、第6天、第 8天、第15天、第22天、第29天、第50天和第78天或ET时收集外周血样 品。PD的主要和次要终点分别是在血液中测量的浆母细胞和NK细胞计数。另 外的评估包含总白细胞计数以及差异化的总T细胞、CD4和CD8 T细胞亚群、 B细胞、单核细胞和粒细胞计数。在比利时布鲁塞尔的科文斯(Covance，Brussels， Belgium)通过流式细胞术测量淋巴细胞亚群、单核细胞和浆母细胞。在ICON 证实电化学发光测定用于检测人血清中的抗AB79抗体。
在筛查时、给药前以及整个限制和随访期间监测常规安全参数，如AE、临 床实验室参数、体格检查、心电图(ECG)和生命体征。
施用于MM患者的其它抗CD38抗体的临床研究中已经报告了IV输注后的 输注反应(Voorhees等人，(2015)《血液》126：1829)。尽管离体实验未示出AB79 在人血细胞中具有激动剂活性的证据，并且AB79的输注未诱导表明猴的非临床 研究中的输注反应的可观察到的发现，但要密切监测输注反应或CRS(头痛、 发热、寒战、低血压、恶心和呕吐)的症状。在第1天、第2天和第4天(仅 SC群组)的不同时间点评估包含血清C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子(TNF) α的炎症介质以及白介素1(IL-1)和6(IL-6)水平。如果需要，可以允许减小 扑热息痛(对乙酰氨基酚)和抗组胺药(抗H1和抗H2)的输注和/或口服预防 性用药前的速率以使副作用最小化。
对于SC群组，监测注射部位反应(ISR)的体征，如注射部位疼痛、灼热、 发红、瘙痒、肿胀或硬结。
使用SAS版本9.2和R版本3.5.1进行汇总统计和数据分析。使用非房室分 析计算PK参数。在活性剂量组之间以及每个AB79剂量水平与安慰剂之间评估 并比较PD变量。
结果
七十四名受试者被登记并且接受单个剂量的AB79(n＝54)或安慰剂(n＝ 20)。对以0.0003、0.001、0.003、0.01、0.03或0.06mg kg-1的剂量接受AB79 或匹配的安慰剂的六个IV群组和以0.03、0.1、0.3或0.6mg kg-1的剂量接受 AB79或匹配的安慰剂的四个SC群组进行监测，持续92天；全部完成研究。除 了SC安慰剂组有一名女性之外，参与者均为男性。研究群体由白种人(n＝51)、 亚洲人(n＝13)、非洲人(n＝4)和多民族(n＝6)种族组成。IV群组与SC 群组之间以及AB79与安慰剂治疗组之间的平均年龄(34.4岁，范围为19到55 岁)和BMI(24到25kg m-2)类似。
在此研究中，所有剂量的AB79均具有良好耐受性。AE强度为轻度到中度， 其中安慰剂与AB79治疗组之间的大多数AE为轻度且均衡(表13)。不存在严 重的AE(SAE)或死亡，并且也无导致研究或访视中止的AE。实验室测试、 ECG、生命体征或体格检查均未报告与AB79治疗相关的显著发现。
表13.任何治疗组中的两个或更多个受试者中报告的总体TEAE和AE
Figure BDA0002579022700001211
TEAE被定义为在接受第一剂量的研究药物后以及最后一个剂量的研究药物后94天内发生或 恶化的AE。在治疗组和MedDRA术语水平内的具有一种或多种AE的受试者在该水平中仅 计数一次。百分比基于每次治疗的安全集中的受试者数量。MedDRA(版本18.0)用于编码 AE。AE，不良事件；IV，静脉内；MedDRA，监管活动医学词典；SC，皮下；TEAE，治疗 紧急不良事件。
如表13所示出的，除了头痛、头晕和寒战等在与较高的CRS发生率一致的 较高IVAB79剂量组中更常见之外，大多数AE是不定时发生的，无剂量关系 趋势。这些作用(表14)大多在接受较高剂量的受试者(分别接受0.03和0.06 mg kg-1IV的一名受试者和六名受试者；分别接受0.3和0.6mg kg-1SC的一名受 试者和两名受试者)中观察到。这些受试者表现出浆母细胞和NK细胞的降低， 从而表明这些症状由表达CD38的细胞消耗所致。
表14.患有临床CRS的受试者的数量和百分比
Figure BDA0002579022700001221
SC注射后，仅观察到轻度、瞬时的ISR，其中大部分在7天内消退。这些 反应表现出相反的剂量-作用关系，因为用最低SC剂量治疗的六名受试者中的 五名受试者以及两个最高剂量群组中的每一个群组中的仅一名受试者出现反 应。
来自IV群组1(0.0003mg kg-1)到4(0.01mg kg-1)的所有PK采样时间点 的AB79的血清浓度均低于检测测定的定量下限(LLOQ)(即，10ng mL-1)， 这可能是由于剂量低以及不存在抗药物抗体(数据未示出)。IV输注0.03和0.06 mg kg-1AB79后，观察到的最大血清浓度(Cmax)分别为21.4和100.4ng mL-1， 并且在输注结束后5分钟发生(表15和图41)。随后，血清浓度分别在输注结 束后1或4小时内快速减少到LLOQ以下，并且无法准确计算出暴露量。Cmax似乎在0.03到0.06mg kg-1的两倍剂量增加内增加了大约五倍。由于可从IV 0.03 和0.06mg kg-1群组中获得的AB79血清浓度有限(每名受试者在一到三个时间 点处)，因此不能对除了达到最大血清浓度的时间(tmax)和Cmax之外的PK参数 进行可靠地估计。
表15.对健康受试者进行单次2小时IV输注0.03和0.06mg kg-1的AB79 或单次SC注射0.6mg kg-1的AB79后的AB79的PK参数汇总
Figure BDA0002579022700001231
a n＝5。除了tmax中呈现出中值(最小值，最大值)之外，值表示平均值(％CV)。AUClast， 从时间0到最终可量化浓度的血清浓度-时间曲线下面积；Cmax，观察到的最大血清浓度；CV， 变异系数；IV，静脉内；NA，不适用；PK，药代动力学；SC，皮下；tmax，达到最大血清浓 度的时间。
SC群组1(0.03mg kg-1)到3(0.3mg kg-1)中所有受试者的AB79血清浓 度在所有时间点均处于检测测定的LLOQ以下。在单次0.6mg kg-1AB79 SC注 射后，此群组中的五名受试者在注射后大约24小时表现出中值tmax。此群组中 所有六名受试者(包含一名血清浓度在LLOQ以下的受试者)的平均Cmax为23.0 ng mL-1，大约是以0.06mg kg-1进行2小时IV输注后Cmax值的23％(此群组中 SC剂量的十分之一)。注射后3到14天，AB79的血清浓度逐渐减小到LLOQ 以下(图41)。0.6mg kg-1SC群组中的一名受试者在整个PK采样期间未表现出 可检测的AB79水平。与来自IV群组的PK参数相比，在以0.6mg kg-1进行SC 注射后观察到较高的受试者间变异性。注射后，此群组中具有可测量浓度的五 名受试者的个体tmax的范围大约介于8到96小时(0.33到4天)之间。
在通过IV输注施用AB79的群组中，在≥0.003mg kg-1的剂量下观察到NK 细胞的剂量依赖性降低，其中在接受0.06mg kg-1输注的所有受试者中均发生≥ 90％的降低(图42)。最大反应50％时的有效浓度(EC50)低于PK测定的LLOQ (即，10ng mL-1)，尽管如此，通过IV施用AB79降低的NK细胞的最大有效浓 度的75％(EC75)为21.4ng mL-1(表15)。尽管到输注结束时NK细胞的水平 相对于基线持续降低，但恢复到基线水平(＜-20％)的持续时间是可变的并且 通常与剂量有关；0.003、0.01、0.03和0.06mg kg-1剂量恢复到基线水平分别需要平均4天、4天、6天和8天(图43)。IV施用AB79未观察到总淋巴细胞、 B细胞和T细胞、辅助性T细胞和细胞毒性T细胞、粒细胞、红细胞或血小板 具有临床意义的降低(数据未示出)。
在通过SC注射用AB79治疗的群组中，在剂量≥0.1mg kg-1时观察到NK 细胞(图42)和浆母细胞(图43)的剂量依赖性降低，以及在接受0.6mg kg-1注射的所有受试者中，浆母细胞降低≥90％。在0.6mg kg-1(数据未示出)时， NK细胞减少75％，Cmax为23.0ng mL-1(表15)。浆母细胞和NK细胞的水平在 注射后8小时内相对于基线降低并且表现出48小时的tmax。恢复到基线水平的 持续时间是可变的；0.1、0.3和0.6mg kg-1剂量恢复到基线(即，在基线水平的 -20％以内)分别需要平均4天、78天和50天(数据未示出)。观察到总淋巴细胞、B细胞和T细胞、细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、单核细胞(图43)和 粒细胞、红细胞和血小板的降低很少或没有降低(数据未示出)。
虽然总Ig的水平仍在NRR内，但在IV施用0.03和0.06mg kg-1AB79的群 组中，总IgM水平降低，并且在第15-64天显著(P＜0.05)低于时间匹配的安 慰剂对照群组(图44，上图)。对于以0.3和0.6mg kg-1SC施用的AB79，在第 15-64天观察到总IgM水平也显著(P＜0.01)降低(图44，下图)。IgM水平在 第78天呈现恢复到基线的趋势。对于IV或SC施用的AB79，未观察到对IgA 和IgG水平的显著作用(数据未示出)。
在接受AB79的54名受试者中，0.03mg kg-1SC群组中的一名受试者表现 出持续性(即，第15天、第29天和第78天)抗-AB79抗体的较高滴度(即， 160、1280和320)(数据未示出)。在整个研究期间，此受试者的AB79血清浓 度处于LLOQ以下，同一群组中抗药物抗体(ADA)阴性受试者的AB79水平 也是如此，因此不能确定ADA对AB79的PK的潜在影响。还需要提及的是， ADA与AE不一致。
治疗SLE和RA的一种治疗策略是降低CD38+淋巴细胞的水平，这是基于 一些显示CD38+淋巴细胞水平与疾病活动性之间的关联的报告(Cole等人， (2018)《关节炎研究与治疗》20(1)：85；Kraan等人，(1999)《风湿病学》(牛津 大学)38(11)：1074-1080；Vital等人，(2011)《关节炎与风湿病》63(10)：3038-3047； Banchereau等人，(2016)《细胞》165(3)：551-565；以及Grammer等人，(2003)《临 床研究杂志》112(10)：1506-1520)。这可以用AB79来实现，因为其与CD38特 异性结合并消耗细胞(Smithson等人，(2017)《免疫学杂志》198(1Supp1)：224.20)。 向患有SLE或RA的患者的血液或骨髓样品中添加AB9减少了PC群体并降低 自身抗原特异性抗体的产生(Wang等人，(2016 ACR/ARHP年会摘要1085)《关 节炎与风湿病》68(增刊10))。AB79还减少了猴中表达高水平CD38的淋巴细 胞(Roepcke等人，(2018)《药理研究与展望》6(3)：e00402)，防止了预防性施用 时CIA的发展并且抑制了治疗性施用时关节炎的发展(Smithson等人，(2017) 《免疫学杂志》198(1Suppl)：127.17)。因此，本研究的目的是表征健康受试者中 单次IV输注和SC注射AB79的安全性、耐受性、PK和PD并且确定对患者进 行的临床研究是否有保证。
这是对健康受试者施用的溶细胞CD38抗体的耐受性、PK和PD的第一表 征。在此研究中，所有剂量的AB79均具有良好耐受性。AE的强度为轻度到中 度，其中大多数为轻度(表13)。没有SAE或死亡，而且也没有导致研究或访 问中断的AE。实验室测试、ECG、生命体征或体格检查均未报告与AB79治疗 相关的显著发现。尽管在本研究中未观察到与输注相关的反应，但在AB79 IV 输注组中的七名受试者和AB79 SC组中的三名受试者中观察到了CRS(表14)。 CRS的情况与浆母细胞和NK细胞降低(图42和43)、细胞因子(例如，TNF-α、 IL-1β和IL-6；数据未示出)中度增加、以及血液C反应蛋白(数据未示出)同 时发生。这些数据与猴研究一致，表明细胞消耗与TNF-α的血清水平升高同时 发生(Roepcke等人，(2018)《药理研究与展望》6(3)：e00402)。与IV治疗组相 比，在外周血中AB79浓度相当的情况下(例如，0.03mg kg-1IV与0.6mg kg-1 SC)，SC治疗群组的CRS发生率较低，并且细胞因子水平增加很少。这些结果 与对难治性骨髓瘤患者进行的SC对IV施用达雷木单抗的输注反应发生率低相 符。将不同的调配物用于达雷木单抗的IV对SC施用，但是采用相同的调配物 用于健康受试者AB79的IV对SC施用。AB79的数据表明，较低的CRS率主 要归因于SC施用途径，而不是调配物不同。
AB79在猴体内的非临床评估表明，在单次IV和SC注射AB79后，血清浓 度-时间曲线下面积比剂量成比例地增加(Roepcke等人，(2018)《药理研究与展 望》6(3)：e00402)。由于健康受试者的血清浓度数据有限，因此无法对AB79的 剂量比例或SC生物利用度进行正式评估。然而，IV输注后的Cmax似乎比剂量 成比例地增加(即，与从0.03到0.06mg kg-1的剂量增加两倍相比，剂量增加大 约五倍)，这与在具有AB79的猴中观察到的类似趋势以及针对具有靶介导消除 的其它单克隆抗体发表的趋势一致。SC注射后的剂量归一化Cmax显著低于2小 时IV输注后的剂量归一化Cmax。达到Cmax后，SC注射后血清浓度减小的速度 要慢得多，并且与IV输注相比，保持在LLOQ以上的时间更长。
健康受试者对AB79 IV的PD应答是迄今为止所描述的抗CD38单克隆抗体 导致的NK细胞消耗的最有效的例子。AB79在0.06mg kg-1下产生的平均Cmax为100.4ng mL-1，并且每个健康受试者的外周血NK细胞比其基线水平低至少 90％(图42)。在IV输注高达24mg kg-1且平均Cmax高达573μg mL-1的达雷木 单抗的复发/难治性MM患者中，没有达到这种程度的NK细胞减少(Clemens 等人，(2017)《临床药代动力学》56(8)：915-924；Xu等人，(2017)《临床药理学 与治疗学(Clin.Pharmacol.Ther.)》101(6)：721-724)。尚不清楚这种效力上的差异是否是由研究人群的差异和/或相应抗体的性质造成的。虽然健康受试者和骨 髓瘤患者具有类似数量的NK细胞，并且这些细胞表达类似密度的CD38(Krejcik 等人，(2016)《血液》128(3)：384-394)，但是骨髓瘤患者具有更高水平的其它CD38+靶细胞(即，骨髓瘤细胞)，这可能使得这些群体之间的NK细胞消耗的 效力产生差异。更明确的分析需要在复发/难治性骨髓瘤患者的类似群体中获得 AB79的PK和PD数据。
更高效力的属性是需要更小的治疗量和体积来引发相当的PD作用。可以通 过小剂量SC注射施用来提高抗-CD38 mAb IV输注治疗患者的有效性，因为它 可以在一分钟内施用，相比之下，接受IV输注通常需要2到4个小时，并且在 慢性治疗中，患者可以在家中安全地自己施用，这具有便利性和药物经济学上 的优势。这是SC注射溶细胞性抗CD38抗体进入人类受试者后细胞降低的第一 个证明，这表明SC注射比IV输注具有更好的耐受性。这也是1mL SC注射0.1 到0.6mg kg-1的抗CD38抗体引起外周血中最大的PD活性(例如，浆母细胞减 少＞90％)的第一份报告。在IV剂量≥0.1mg kg-1时，AB79以剂量依赖性方 式降低浆母细胞和NK细胞(图42和43)。浆母细胞减少的对应EC90为大约23.0 ng mL-1，而对于NK细胞减少则为100.4ng mL-1(表15)。这种潜在的敏感性差 异可能与这些群体表达的CD38表达水平有关；浆母细胞表达的CD38密度大约 比NK细胞的高五倍(Krejcik等人，(2016)《血液》128(3)：384-394)。目前尚不 清楚这种差异是否存在于SLE、RA和/或MM患者中，因为迄今尚未报道描述 这些患者群体中浆母细胞和NK细胞水平的数据。如果在患者中观察到类似的 活性，则低容量的SC注射的功效可能为无法使用输注设备的患者提供治疗，并 且降低总体医疗保健支出。
在健康受试者中，循环单核细胞、B细胞和T细胞表达较低的CD38水平， 并且AB79不能将这些细胞类型降低到与浆母细胞和NK细胞相同的程度。这些 数据与在最初剂量的AB79以及慢性暴露3个月后描述的食蟹猴的数据一致； NK细胞均匀地表达高水平的CD38并且比B和T淋巴细胞对AB79更敏感，所 述B和T淋巴细胞异源表达CD38并且通常比NK细胞水平低(Roepcke等人， (2018)《药理学研究展望》6(3)：e00402)。这些数据还与长期暴露于达雷木单抗 的复发性/难治性骨髓瘤患者的描述一致；单核细胞未受影响，并且外周血中CD38+B和T细胞的亚群减少(Krejcik等人，(2016)《血液》128(3)：384-39)。
Ig主要由存在于淋巴组织(例如，骨髓、淋巴结、脾脏等)中的PC产生。 在暴露于多种剂量的蛋白酶体抑制剂硼替佐米的SLE患者中也有类似的作用； 总IgM(34％)、IgA(34％)和IgG(15％)的血清水平显著降低，这与血浆母 细胞(54％)、骨髓PC(50％)和疾病活动性评分的降低相对应(Alexander等 人，(2015)《风湿病年鉴)》74(7)：1474-1478)。总的来说，这些数据表明AB79 可以有效降低Ig水平，并且潜在地相对于IgG可以选择性降低IgM和IgA。这 种概况可以在IgM、IgA和IgG肾病中提供治疗效用，同时最小化对免疫系统其它成分的抑制。
总之，健康受试者对IV或SC施用的单剂量AB79耐受良好。AB79消耗了 浆母细胞和NK细胞，并且降低了血清IgM和IgA的水平。这种溶细胞酶活性 可能有益于治疗各种血液恶性肿瘤和/或免疫失调，包含失调的PC、致病性抗体、 Igs和/或NK细胞。
引用参考
在本申请中可能引用的所有引用的参考文献(包含参考文献、专利、专利 申请和网站)的内容出于任何目的均特此明确地通过引用以其整体并入本文， 作为其中引用的参考文献，其程度就如同具体和单独指示每个单独的参考文献 出于任何目的通过引用以其整体并入一样。
等效物
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序列表
<110> 武田制药有限公司（Takeda Pharmaceutical Company Limited）
Dahl, Martin
Fedyk, Eric
Evans, Robert
Zhao, Lin
<120> 抗CD38抗体的皮下给药
<130> 101588-5009-WO
<140> PCT/US19/13547
<141> 2019-01-14
<150> US 62/617,146
<151> 2018-01-12
<160> 13
<170> PatentIn版本3.5
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Gly Arg Cys Ala Glu Tyr Arg Ala Leu Leu Ser Pro Glu Gln Arg Asn
50 55 60
Lys Asn Cys Thr Ala Ile Trp Glu Ala Phe Lys Val Ala Leu Asp Lys
65 70 75 80
Asp Pro Cys Ser Val Leu Pro Ser Asp Tyr Asp Leu Phe Ile Asn Leu
85 90 95
Ser Arg His Ser Ile Pro Arg Asp Lys Ser Leu Phe Trp Glu Asn Ser
100 105 110
His Leu Leu Val Asn Ser Phe Ala Asp Asn Thr Arg Arg Phe Met Pro
115 120 125
Leu Ser Asp Val Leu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Phe Leu Ser Trp Cys
130 135 140
Arg Gln Lys Asn Asp Ser Gly Leu Asp Tyr Gln Ser Cys Pro Thr Ser
145 150 155 160
Glu Asp Cys Glu Asn Asn Pro Val Asp Ser Phe Trp Lys Arg Ala Ser
165 170 175
Ile Gln Tyr Ser Lys Asp Ser Ser Gly Val Ile His Val Met Leu Asn
180 185 190
Gly Ser Glu Pro Thr Gly Ala Tyr Pro Ile Lys Gly Phe Phe Ala Asp
195 200 205
Tyr Glu Ile Pro Asn Leu Gln Lys Glu Lys Ile Thr Arg Ile Glu Ile
210 215 220
Trp Val Met His Glu Ile Gly Gly Pro Asn Val Glu Ser Cys Gly Glu
225 230 235 240
Gly Ser Met Lys Val Leu Glu Lys Arg Leu Lys Asp Met Gly Phe Gln
245 250 255
Tyr Ser Cys Ile Asn Asp Tyr Arg Pro Val Lys Leu Leu Gln Cys Val
260 265 270
Asp His Ser Thr His Pro Asp Cys Ala Leu Lys Ser Ala Ala Ala Ala
275 280 285
Thr Gln Arg Lys Ala Pro Ser Leu Tyr Thr Glu Gln Arg Ala Gly Leu
290 295 300
Ile Ile Pro Leu Phe Leu Val Leu Ala Ser Arg Thr Gln Leu
305 310 315

Claims (28)

1.一种用于治疗受试者的指示为与CD38结合的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者皮下施用经分离的人抗CD38抗体的单位剂型，其中所述抗CD38抗体包括可变重(VH)链区和可变轻(VL)链区，所述可变重链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：3的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的CDR3；所述可变轻链区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的CDR1、具有氨基酸序列SEQ ID NO：7的CDR2和具有氨基酸序列SEQ ID NO：8的CDR3，其中所述单位剂型的体积为3mL或更小。
2.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体以每千克体重0.03到0.6毫克的剂量施用。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述VH链区具有氨基酸序列SEQ ID NO：9并且所述VL链区具有氨基酸序列SEQ ID NO：10。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的方法，其中所述抗CD38抗体包括重链氨基酸序列SEQ ID NO：11和轻链氨基酸序列SEQ ID NO：12。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述单位剂型的体积为2mL或更小。
6.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述单位剂型的体积为1mL或更小。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述抗CD38抗体不会引起溶血性贫血或血小板减少。
8.根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中施用所述抗CD38抗体导致一个或多个治疗紧急不良事件(TEAE)的3级或4级的发生率小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或小于50％，所述一个或多个治疗紧急不良事件选自由以下组成的组：贫血、溶血性贫血、血小板减少、疲劳、输液相关反应(IRR)、白细胞减少和淋巴细胞减少。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述抗CD38抗体导致RBC消耗小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或小于50％。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用所述抗CD38抗体导致血小板消耗小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或消耗小于50％。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述疾病选自由自身免疫性疾病和癌症组成的组。
12.根据权利要求1到10中任一项所述的方法，其中所述疾病选自由以下组成的组：全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、重症肌无力(MG)、视神经脊髓炎(NMO)、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、抗磷脂综合征(APS)、寻常型天疱疮(PV)、落叶型天疱疮(PF)、抗NMDAR脑炎(NMDR)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、格雷夫氏病、膜性肾病、干燥综合征(SS)、ANCA脉管炎、获得性大疱性表皮松解症(EBA)、大疱性类天疱疮(BP)、桥本氏甲状腺炎、硬皮病、IgG4相关疾病和移植物抗宿主病。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血病(chronic lymphoblastic leukemia)、慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia)、浆细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病是多发性骨髓瘤。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病是复发性多发性骨髓瘤(RMM)、复发性和难治性多发性骨髓瘤(RRMM)或新诊断的多发性骨髓瘤(NSMM)。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人抗CD38抗体以药学上可接受的组合物的形式施用。
17.一种包括经分离的抗体的单位剂型，所述经分离的抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NO：9，所述轻链可变区包括SEQ ID NO：10，其中所述经分离的抗体与CD38结合并且其中所述单位剂型被调配成以每千克体重0.03到0.6毫克的剂量皮下施用所述抗体。
18.根据权利要求17所述的单位剂型，其中经分离的抗体包括重链和轻链，所述重链包括SEQ ID NO：11，所述轻链包括SEQ ID NO：12。
19.根据权利要求17或18所述的单位剂型，其中所述单位剂型的体积为3mL或更小。
20.根据权利要求17或18所述的单位剂型，其中所述单位剂型的体积为2mL或更小。
21.根据权利要求17或18所述的单位剂型，其中所述单位剂型的体积为1mL或更小。
22.根据权利要求17到21中任一项所述的单位剂型，其中所述单位剂型被调配成在血液学癌症的治疗中皮下施用所述抗体，所述血液学癌症选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、浆细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤。
23.根据权利要求22所述的单位剂型，其中所述血液学癌症是多发性骨髓瘤。
24.根据权利要求23所述的单位剂型，其中所述疾病是复发性多发性骨髓瘤(RMM)、复发性和难治性多发性骨髓瘤(RRMM)或新诊断的多发性骨髓瘤(NSMM)。
25.根据权利要求17到24中任一项所述的单位剂型，其中施用所述抗CD38抗体不会引起溶血性贫血或血小板减少。
26.根据权利要求17到24中任一项所述的单位剂型，其中施用所述抗CD38抗体导致一个或多个治疗紧急不良事件(TEAE)的3级或4级的发生率小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或小于50％，所述一个或多个治疗紧急不良事件选自由以下组成的组：贫血、溶血性贫血、血小板减少、疲劳、输液相关反应(IRR)、白细胞减少和淋巴细胞减少。
27.根据权利要求17到24中任一项所述的单位剂型，其中施用所述抗CD38抗体导致RBC消耗小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或小于50％。
28.根据权利要求17到24中任一项所述的单位剂型，其中施用所述抗CD38抗体导致血小板消耗小于10％、小于20％、小于30％、小于40％或消耗小于50％。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112021012685A2 (pt) 2019-01-11 2021-12-28 Omeros Corp Métodos para tratar câncer, para aumentar o nível de citocinas th1 nas células mononucleares de sangue periférico humanas, para realçar uma resposta imune antitumoral e para estimular e/ou amplificar uma resposta imune em um sujeito mamífero sofrendo de ou em risco de desenvolver câncer ou metástase de câncer, e, composição farmacêutica
CN112876563B (zh) * 2019-11-29 2022-08-16 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 药物组合物及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103282383A (zh) * 2010-12-30 2013-09-04 武田药品工业株式会社 抗cd38抗体

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1355919B1 (en) 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US7497862B2 (en) 2001-08-03 2009-03-03 Tyco Healthcare Group Lp Tissue marking apparatus and method
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20090123950A1 (en) 2005-05-24 2009-05-14 Morphosys Ag Generation And Profiling Of Fully Human Hucal Gold®-Derived Therapeutic Antibodies Specific For Human CD38
WO2007041635A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
EP2704751B1 (en) * 2011-05-02 2019-04-17 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
US20170121417A1 (en) * 2015-11-03 2017-05-04 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous Formulations of Anti-CD38 Antibodies and Their Uses

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103282383A (zh) * 2010-12-30 2013-09-04 武田药品工业株式会社 抗cd38抗体
CN107365385A (zh) * 2010-12-30 2017-11-21 武田药品工业株式会社 抗cd38抗体

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