CN112717031A - 一种用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和应用，属于中药技术领域。所述药物组合物包括蔓荆子提取物。所述蔓荆子提取物为蔓荆子正丁醇提取物。优选的，所述药物组合物还可以包括蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物。所述蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物的重量配比为1:0.1‑10；更优选为1:1‑2。本发明还提供了上述药物组合物的制备方法及应用。

Description

一种用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和应用，属于中药技术领域。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。65岁以前发病者，称早老性痴呆；65岁以后发病者称老年性痴呆。现代医学认为可能与脑萎缩、遗传、免疫、慢性病毒感染诸多因素有关，在中医理论中归于“痴呆”、“文证”、“呆病”等病症的范畴。中医的传统观点认为痴呆的病理定位在脑，同时涉及心、肝、脾、肾四脏，为阴阳、气血、肺腑功能失调所引起的虚实夹杂的疾病，临床表现复杂，因肾气衰退引起。

目前，西医的治疗药物主要为乙酰胆碱酯酶抑制剂，例如：多奈哌齐、利斯的明、加兰他敏等，或者采用NMDA受体拮抗剂进行相关治疗，均是改善症状，但无法延缓或终止疾病。另外为了控制伴发的精神病理症状，还会使用抗焦虑药、抗抑郁药或抗精神病药等。近年来国内外进行了大量以Aβ、Tau蛋白为主要靶点的药物研究，但是从临床数据来看这些靶点研发的药物并不理想，导致近十年来关于阿尔茨海默症的新药近乎绝迹。

中医认为该病本质是本虚标实，意思是疾病的根源是虚证，源于肾精不足、髓海亏虚；而标实，即虚证又引致了实邪的产生，患者也会有实证的表现。经过中医证候分型研究，将疾病分为七种证型，同时又可以归为虚、实两类。虚证包括髓海不足证、脾肾两虚证、气血亏虚证。治疗多用补气养血、滋补肝肾、填精益髓之效的中药如归脾汤、左归丸等。实证包括痰浊蒙窍证、瘀阻脑络证、心肝火旺证和毒损脑络证。治疗多用化痰开窍、活血化瘀、清热泻火之效的中药如洗心汤、通窍活血汤、天麻钩藤饮、黄连解毒汤等。

蔓荆子是山东半岛沿海地区常见种植的中药材，其始载于《神农本草经》，传统中医认为其具有疏散风热、清利头目、清火解毒、除风止痛的功效。现代医学表明其在治疗感冒头痛、齿龈肿痛、风湿病关节肿痛、降血压、抗炎以及抗癌方面具有明显的疗效。但是，本发明发现蔓荆子在治疗阿尔茨海默症方面具有较大的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗阿尔茨海默症的药物组合物及其制备方法和应用。

一种用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物，所述药物组合物包括蔓荆子提取物。

优选的，所述蔓荆子提取物为蔓荆子正丁醇提取物。

优选的，所述药物组合物包括蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物。所述蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物的重量配比为1:0.1-10；更优选为1:1-2。

进一步的，本发明还提出了所述的药物组合物在制备用于治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。具体的是向所述药物组合物中加入药剂学上可接受的常用辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂。

所述药物制剂为水煎剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、片剂和口服液等。

本发明还提出了一种制备所述的用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物的方法，包括以下步骤：

1)蔓荆子总提物的制备

取蔓荆子药材，用10倍量的95％乙醇加热回流提取2次，每次1h，过滤后收集滤液，减压回收溶剂至稠浸膏，真空60℃干燥，得蔓荆子总提物。

2)蔓荆子正丁醇提取物的制备

取蔓荆子总提物用水混悬，用3倍量的石油醚进行萃取，收集石油醚层溶液，经石油醚萃取后的水悬液，用3倍量的正丁醇进行萃取，收集正丁醇层溶液。对正丁醇层溶液进行减压回收溶剂，浓缩至浸膏装，冷冻干燥，得蔓荆子正丁醇提取物。

优选的，所述制备方法中还包括步骤3)远志提取物的制备：

将远志用3倍量水煎煮三次，每次1h，过滤后合并水提取液，减压加热回收溶剂浓缩，然后装填入D101大孔吸附树脂柱，用蒸馏水，30％乙醇和70％乙醇分三次洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩并干燥洗脱液，得到远志提取物。然后按照比例将蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物混合即得所述药物组合物。

本发明首次发现蔓荆子提取物在治疗阿尔茨海默症方面具有较好的治疗效果，并且以蔓荆子正丁醇提取物效果最佳。在此基础上，本发明进一步发现蔓荆子提取物与远志提取物在治疗阿尔茨海默症方面具有明显的协同作用，具备作为中药复方进行开发的市场价值。

具体实施方式

为了进一步证明本发明的药物组合物具有滋阴补肾、补充髓海、养阴清热、化痰散结、活血祛瘀的功效，本发明对组合物高剂量、中剂量、低剂量对阿尔茨海默症小鼠的学习记忆能力进行了试验，用于评估药物组合物的治疗效果。

实施例1蔓荆子提取物在Aβ蛋白诱导PC12细胞凋亡模型中的治疗作用

(一)蔓荆子提取物的制备

1)蔓荆子总提物的制备

取蔓荆子药材10kg，用10倍量的95％乙醇加热回流提取2次，每次1h，过滤后收集滤液，减压回收溶剂至稠浸膏，真空60℃干燥，得蔓荆子总提物0.86kg。

2)蔓荆子石油醚提取物和蔓荆子正丁醇提取物的制备

取蔓荆子总提物500g用2kg水混悬，用3倍量的石油醚进行萃取，收集石油醚层溶液，经石油醚萃取后的水悬液，用3倍量的正丁醇进行萃取，收集正丁醇层溶液。分别对石油醚层和正丁醇层溶液进行减压回收溶剂，浓缩至浸膏装，冷冻干燥，分别得蔓荆子石油醚提取物117.5g和蔓荆子正丁醇提取物41.9g。

(二)细胞模型制备

将PC12细胞解冻复苏，用含10％FBS的DMEM培养液在孵箱(5％CO₂)中培养，每5天传代一次，传至3代后用于细胞实验。将PC12细胞消化离心用培养液混悬后接种于96孔板中(每孔细胞数2×10⁴个/孔)，培养2天后更换培养液并随机分组(每组4个复孔)，具体分为正常对照组、模型组、蔓荆子总提物1组、蔓荆子总提物2组、蔓荆子石油醚提取物1组、蔓荆子石油醚提取物2组、蔓荆子正丁醇提取物1组、蔓荆子正丁醇提取物2组。分组后，对模型组和各给药组分别添加终浓度20μM的Aβ_25-35(购自Sigma)，正常对照组给与等量的培养液，孵箱培养48h后检测各组细胞活性。

(三)检测方法

MTT法检测细胞活力：每孔加入20μlMTT，孵育3h后，弃去培养液，每孔加入100μlDMSO，震荡10min，待紫色结晶充分溶解后，置于酶标仪上检测各组OD值，并计算各组的细胞存活率。

细胞存活率＝各组OD值/正常对照组OD值×100％

(四)结果与讨论

结果见表1

表1各组细胞存活率

组别	剂量(mg/L)	细胞存活率(％)
			正常对照组		100
模型组		51.6±3.1<sup>##</sup>
			蔓荆子总提物1组	50	57.4±4.2
蔓荆子总提物2组	100	63.8±3.7<sup>**</sup>
			蔓荆子石油醚提取物1组	50	52.3±3.4
蔓荆子石油醚提取物2组	100	58.9±4.8
			蔓荆子正丁醇提取物1组	50	61.7±3.9<sup>**</sup>
蔓荆子正丁醇提取物2组	100	73.6±3.3<sup>**</sup>

^##代表经T检验与正常对照组相比P<0.01；*和**分别代表经T检验与模型组相比P<0.05和P<0.01。

PC12细胞是一种较为常见的神经细胞系，由于其来源广泛所以本发明采用其作为细胞模型的工作细胞。从上述结果可以看出，PC12细胞在受到Aβ_25-35蛋白损伤后，活力明显下降，蔓荆子总提物在高剂量条件下对该损伤存在一定的抑制作用。蔓荆子石油醚提取物在两个剂量条件下均未发现明显的抑制作用，而蔓荆子正丁醇提取物在抑制Aβ_25-35蛋白损伤方面效果最佳。

实施例2蔓荆子正丁醇提取物与远志提取物在抑制Aβ_25-35蛋白损伤方面协同作用考察

在发现蔓荆子正丁醇提取物在抑制Aβ_25-35蛋白损伤和保护神经细胞作用之后，从中药复方配伍角度本发明进一步考察了可和蔓荆子产生协同作用的中药。根据文献调研和山东省份道地药材实际情况，本发明选择了远志与蔓荆子进行组方。

(一)远志提取物的制备

将远志用3倍量水煎煮三次，每次1h，过滤后合并水提取液，减压加热回收溶剂浓缩，然后装填入D101大孔吸附树脂柱，用蒸馏水，30％乙醇和70％乙醇分三次洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩并干燥洗脱液，得到远志提取物。

所获得的远志提取物中以皂苷成分为主。

(二)实验方法

同实施例1

(三)结果

表2各组细胞存活率

^##代表经T检验与正常对照组相比P<0.01；*和**分别代表经T检验与模型组相比P<0.05和P<0.01。

为了进一步考察蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物的协同作用，参照非专利文献：金正均.合并用药中的相加[J].中国药理学报,1980,1(2):70-76.公开的技术内容进行两种药物的协同作用q值计算，各给药组的抑制率计算为E＝(给药组细胞存活率-模型组细胞存活率)/(正常对照组细胞存活率-模型组细胞存活率)

经计算得出组5的q值为1.37；组6的q值为2.02；组7的q值为1.07，结果表明组5和组6的联合给药组具有明显的协同作用，而组7的协同作用不明显，说明蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物的重量配比在1:1-2之间具有明显的协同作用，以1:1效果最佳。

实施例3药物组合物对阿尔茨海默症大鼠模型的影响

(一)实验动物：SD大鼠，体重280-300g。

(二)药物及试剂

蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物按照实施例1和2的方法进行制备。

D-半乳糖和东莨菪碱购自上海源聚生物科技有限公司。

Morris水迷宫装置系统购自安徽正华生物仪器设备有限公司。

(三)试验方法

各实验将小鼠随机分为假手术组、模型组、脑复康对照组、蔓荆子正丁醇提取物组、远志提取物组和联合给药组(蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物重量配比为1:1)共6组。除假手术组和模型组外，各给药组每天灌胃给药一次，给药剂量均为200mg/kg，连续给药4周，假手术组和模型组给与等量水。给药同时，模型组与各给药组每天同时腹腔注射100mg/kg的D-半乳糖和东莨菪碱(0.2mg/kg)，每天一次，连续给药4周。

(四)检测指标

1)水迷宫测试

在给药24天后，进行持续6天的Morris水迷宫行为学实验，测试各组大鼠的空间记忆能力。站台设置在第一象限(位于迷宫平面右下角)，试验时将大鼠面向池壁放入水中，自由游泳60s，视频系统记录大鼠找到平台的时间和游泳路径，若大鼠在1min内未找到平台，将其引导到平台上，并停留10s。连续5天，在第6天进行定位航行实验，1min内大鼠找到平台的时间即为潜伏期，超过1min的按照1min计算。

2)血清药理学检测

水迷宫实验结束后，处死大鼠，低温取脑，在液氮条件下研磨，然后用PBS制备成组织匀浆，离心取上清，每个样本BCA定量至总蛋白4mg/L，然后按照试剂盒操作方法进行SOD酶活性和AchE含量测定。

(五)实验结果

1)药物对大鼠阿尔茨海默症模型潜伏期的影响

表3大鼠阿尔茨海默症模型潜伏期统计

上述结果表明，蔓荆子提取物和远志提取物均可以明显降低大鼠的潜伏期，提高大鼠记忆力，其效果与脑复康对照组相似，而联合给药组效果最佳。

2)药物对大鼠阿尔茨海默症模型的SOD酶活性和AchE含量影响

表4对脑组织中SOD酶活性和AchE含量影响

组别	SOD(U/mg)	AchE(U/mg)
			假手术组	167.34±7.09	4.09±0.51
模型组	81.51±5.83	10.15±1.31
			脑复康对照组	127.65±5.52<sup>**</sup>	7.94±0.63<sup>*</sup>
蔓荆子正丁醇提取物组	108.27±6.24<sup>*</sup>	6.71±0.58<sup>**</sup>
			远志提取物组	114.68+7.13<sup>**</sup>	7.87±0.64<sup>*</sup>
联合给药组	121.94±6.71<sup>**</sup>	5.96±0.53<sup>**</sup>

上述结果表明，在SOD抗氧化活性方面，蔓荆子正丁醇提取物、远志提取物和联合给药组均表现出一定活性，但是协同作用并不明显。但是在抑制AchE活性方面体现出了较为强烈的协同作用，说明蔓荆子提取物和联合给药组的作用机制可能更偏重于乙酰胆碱的代谢途径通路上。

Claims (8)

1.一种用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括蔓荆子提取物。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述蔓荆子提取物为蔓荆子正丁醇提取物。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物，所述蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物的重量配比为1:0.1-10；更优选为1:1-2。

4.权利要求1-3所述的药物组合物在制备用于治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物组合物中加入药剂学上可接受的常用辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂；所述的药物制剂为水煎剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、片剂和口服液。

6.一种制备权利要求1-3所述的用于治疗阿尔茨海默症的药物组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)蔓荆子总提物的制备

取蔓荆子药材，用10倍量的95％乙醇加热回流提取2次，每次1h，过滤后收集滤液，减压回收溶剂至稠浸膏，真空60℃干燥，得蔓荆子总提物；

2)蔓荆子正丁醇提取物的制备

取蔓荆子总提物用水混悬，用3倍量的石油醚进行萃取，收集石油醚层溶液，经石油醚萃取后的水悬液，用3倍量的正丁醇进行萃取，收集正丁醇层溶液，对正丁醇层溶液进行减压回收溶剂，浓缩至浸膏装，冷冻干燥，得蔓荆子正丁醇提取物。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述制备方法中还包括步骤3)远志提取物的制备：

将远志用3倍量水煎煮三次，每次1h，过滤后合并水提取液，减压加热回收溶剂浓缩，然后装填入D101大孔吸附树脂柱，用蒸馏水，30％乙醇和70％乙醇分三次洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩并干燥洗脱液，得到远志提取物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤3)后按照比例将蔓荆子正丁醇提取物和远志提取物混合即得所述药物组合物。