CN112694526A - 一种白细胞介素29突变体蛋白 - Google Patents
一种白细胞介素29突变体蛋白 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112694526A CN112694526A CN202110169885.8A CN202110169885A CN112694526A CN 112694526 A CN112694526 A CN 112694526A CN 202110169885 A CN202110169885 A CN 202110169885A CN 112694526 A CN112694526 A CN 112694526A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leu
- protein
- ala
- mutant
- pro
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101001002470 Homo sapiens Interferon lambda-1 Proteins 0.000 title claims abstract description 197
- 102100020990 Interferon lambda-1 Human genes 0.000 title claims abstract description 197
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 75
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 75
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 66
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 62
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 61
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 53
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 20
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 20
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 14
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 14
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 13
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 13
- 230000036737 immune function Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 50
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 38
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 14
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 10
- OVPYIUNCVSOVNF-ZPFDUUQYSA-N Ile-Gln-Pro Natural products CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O OVPYIUNCVSOVNF-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 10
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 10
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 10
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- XWUIHCZETFNRPA-IHPCNDPISA-N His-His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XWUIHCZETFNRPA-IHPCNDPISA-N 0.000 description 8
- PJYSOYLLTJKZHC-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PJYSOYLLTJKZHC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 8
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 8
- VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N Leu-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VZBIUJURDLFFOE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 8
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 8
- KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 8
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 8
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 7
- NJIFPLAJSVUQOZ-JBDRJPRFSA-N Ala-Cys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)N NJIFPLAJSVUQOZ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 7
- LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Cys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O LJFNNUBZSZCZFN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 7
- WZZGXXNRSZIQFC-VGDYDELISA-N Cys-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CS)N WZZGXXNRSZIQFC-VGDYDELISA-N 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N Gln-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- PBYFVIQRFLNQCO-GUBZILKMSA-N Gln-Pro-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PBYFVIQRFLNQCO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 7
- WATXSTJXNBOHKD-LAEOZQHASA-N Glu-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WATXSTJXNBOHKD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 7
- KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N 0.000 description 7
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 7
- GVKKVHNRTUFCCE-BJDJZHNGSA-N Ile-Leu-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N GVKKVHNRTUFCCE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 7
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N Leu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 7
- ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N Leu-His-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 7
- WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 7
- IRVONVRHHJXWTK-RWMBFGLXSA-N Met-Lys-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N IRVONVRHHJXWTK-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 7
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 7
- MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N Phe-Pro-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N 0.000 description 7
- IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N Pro-Ala-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IFMDQWDAJUMMJC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- UPJGUQPLYWTISV-GUBZILKMSA-N Pro-Gln-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UPJGUQPLYWTISV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 7
- LXVLKXPFIDDHJG-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LXVLKXPFIDDHJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N Ser-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 7
- QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N Ser-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N Thr-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 7
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 7
- IQIRAJGHFRVFEL-UBHSHLNASA-N Trp-Ser-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N IQIRAJGHFRVFEL-UBHSHLNASA-N 0.000 description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 108010022588 methionyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 7
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 5
- MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 5
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 5
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 5
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 5
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DJIMLSXHXKWADV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 4
- 241000144282 Sigmodon Species 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 aliphatic amino acid Chemical class 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MCAVASRGVBVPMX-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MCAVASRGVBVPMX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- PNENQZWRFMUZOM-DCAQKATOSA-N Gln-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PNENQZWRFMUZOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- PPBKJAQJAUHZKX-SRVKXCTJSA-N Leu-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C PPBKJAQJAUHZKX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 3
- UUHXBJHVTVGSKM-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O UUHXBJHVTVGSKM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 241000144290 Sigmodon hispidus Species 0.000 description 3
- GTNCSPKYWCJZAC-XIRDDKMYSA-N Trp-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N GTNCSPKYWCJZAC-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 108700013356 oplunofusp Proteins 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- KSHJXDWYTZJUEI-UHFFFAOYSA-N 1-cyclopropyl-3-[[1-(4-hydroxybutyl)benzimidazol-2-yl]methyl]imidazo[4,5-c]pyridin-2-one Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2N(CCCCO)C=1CN(C1=O)C2=CN=CC=C2N1C1CC1 KSHJXDWYTZJUEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- PAIHPOGPJVUFJY-WDSKDSINSA-N Ala-Glu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PAIHPOGPJVUFJY-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- PEEYDECOOVQKRZ-DLOVCJGASA-N Ala-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PEEYDECOOVQKRZ-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N Arg-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Lys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N Cys-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ser-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000146324 Enterovirus D68 Species 0.000 description 2
- UWMDGPFFTKDUIY-HJGDQZAQSA-N Gln-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UWMDGPFFTKDUIY-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- SYMSVYVUSPSAAO-IHRRRGAJSA-N His-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYMSVYVUSPSAAO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- SYIPVNMWBZXKMU-HJPIBITLSA-N His-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N SYIPVNMWBZXKMU-HJPIBITLSA-N 0.000 description 2
- PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N His-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LNVILFYCPVOHPV-IHPCNDPISA-N His-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNVILFYCPVOHPV-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- 241000711911 Human respiratory syncytial virus A2 Species 0.000 description 2
- OVPYIUNCVSOVNF-KQXIARHKSA-N Ile-Gln-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OVPYIUNCVSOVNF-KQXIARHKSA-N 0.000 description 2
- NHJKZMDIMMTVCK-QXEWZRGKSA-N Ile-Gly-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NHJKZMDIMMTVCK-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 102100020989 Interferon lambda-2 Human genes 0.000 description 2
- 101710099622 Interferon lambda-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100020992 Interferon lambda-3 Human genes 0.000 description 2
- 101710099621 Interferon lambda-3 Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- AKVBOOKXVAMKSS-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O AKVBOOKXVAMKSS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JBRWKVANRYPCAF-XIRDDKMYSA-N Lys-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JBRWKVANRYPCAF-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N Lys-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000351643 Metapneumovirus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- SCKXGHWQPPURGT-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SCKXGHWQPPURGT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- VDHGTOHMHHQSKG-JYJNAYRXSA-N Pro-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O VDHGTOHMHHQSKG-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 2
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- KZURUCDWKDEAFZ-XVSYOHENSA-N Thr-Phe-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O KZURUCDWKDEAFZ-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- RGJZPXFZIUUQDN-BPNCWPANSA-N Tyr-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RGJZPXFZIUUQDN-BPNCWPANSA-N 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 238000002664 inhalation therapy Methods 0.000 description 2
- 108010018844 interferon type III Proteins 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010047926 leucyl-lysyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 2
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 2
- 238000003030 reporter gene method Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KZXPVYVSHUJCEO-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-Lys Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KZXPVYVSHUJCEO-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- VUGWHBXPMAHEGZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VUGWHBXPMAHEGZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MLJZMGIXXMTEPO-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- CSEJMKNZDCJYGJ-XHNCKOQMSA-N Asp-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O CSEJMKNZDCJYGJ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- ZLHPWFSAUJEEAN-KBIXCLLPSA-N Cys-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N ZLHPWFSAUJEEAN-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 108091081406 G-quadruplex Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XQDGOJPVMSWZSO-SRVKXCTJSA-N Gln-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCC(=O)N)N XQDGOJPVMSWZSO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- YYQGVXNKAXUTJU-YUMQZZPRSA-N Gly-Cys-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O YYQGVXNKAXUTJU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IXKRSKPKSLXIHN-YUMQZZPRSA-N Gly-Cys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IXKRSKPKSLXIHN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N Gly-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN BMWFDYIYBAFROD-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 241000218033 Hibiscus Species 0.000 description 1
- 235000005206 Hibiscus Nutrition 0.000 description 1
- 235000007185 Hibiscus lunariifolius Nutrition 0.000 description 1
- NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N His-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N 0.000 description 1
- MPXGJGBXCRQQJE-MXAVVETBSA-N His-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MPXGJGBXCRQQJE-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N His-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241000491226 Influenza A virus (A/WSN/1933(H1N1)) Species 0.000 description 1
- 102100022469 Interferon kappa Human genes 0.000 description 1
- 101710099623 Interferon lambda-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- LZHJZLHSRGWBBE-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LZHJZLHSRGWBBE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100032341 PCNA-interacting partner Human genes 0.000 description 1
- 101710196737 PCNA-interacting partner Proteins 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000144300 Peromyscus gossypinus Species 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N Pro-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N Pro-Thr-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N Pro-Thr-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- ZMLRZBWCXPQADC-TUAOUCFPSA-N Pro-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 ZMLRZBWCXPQADC-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N Ser-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- OJPHFSOMBZKQKQ-GUBZILKMSA-N Ser-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO OJPHFSOMBZKQKQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XVWDJUROVRQKAE-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CC1=CC=CC=C1 XVWDJUROVRQKAE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- YUOCMLNTUZAGNF-KLHWPWHYSA-N Thr-His-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O YUOCMLNTUZAGNF-KLHWPWHYSA-N 0.000 description 1
- XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N Thr-Leu-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 230000000531 effect on virus Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940125874 fusion protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000010196 hermaphroditism Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 108010080375 interferon kappa Proteins 0.000 description 1
- 108010045648 interferon omega 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 1
- 108700027921 interferon tau Proteins 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 108040006870 interleukin-10 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N remdesivir Drugs C([C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@](C#N)(O1)C=1N2N=CN=C(N)C2=CC=1)O)OP(=O)(N[C@@H](C)C(=O)OCC(CC)CC)OC1=CC=CC=C1 RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000844 retinal pigment epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 108010061514 sialic acid receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
本申请提供了一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白、包含所述突变体蛋白融合蛋白、偶联物、药物组合物、制品和试剂盒。本申请提供的IL29突变体蛋白具有良好的活性和稳定性，可有效预防和/或治疗病毒感染性疾病、肿瘤以及其他需要调节机体免疫功能的疾病。
Description
技术领域
本申请涉及多肽预防和/或治疗领域，具体地，本申请涉及一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，包含该突变体蛋白的融合蛋白、偶联物和组合物，用以提高机体抗病毒能力，调节机体免疫功能。
背景技术
干扰素是一类重要的家族性细胞因子，具有广谱的抗病毒和免疫调节作用。迄今，已经鉴定到7种(α、β、ω、δ、τ、γ、λ)形式的干扰素，它们分为三个大组：I型、II型和III型。所谓的“I型”干扰素包括干扰素α、干扰素β、干扰素ω、干扰素δ、干扰素τ。目前，干扰素γ是仅有的II型干扰素。 III型干扰素是最近发现的一类细胞因子家族，包括干扰素λ1、λ2和λ3，也称为IL-28A、IL-28B和IL-29。
IL-28A、IL-28B和IL-29与I型干扰素有序列同源性，并与IL-10有基因序列的同源性。从功能上说，IL-28和IL-29类似于I型干扰素，均能诱导细胞的抗病毒作用，与I型干扰素不同的是，它们没有显示出对某些B细胞系的抗增殖活性。
野生型IL-29(干扰素λ1，简写IFN-λ1)基因编码200个氨基酸的蛋白，如SEQ IDNO：3所示。其中在该序列中1-19个氨基酸为信号肽序列，该蛋白成熟氨基酸序列为181个氨基酸，如SEQ ID NO：2所示。IL-29分子是由A-F六个蛋白质螺旋组成，其中螺旋A、C、D和F形成一个经典的 up-up-down-down四螺旋束。IL-29通过与其受体复合物相互作用而启动下游信号通路，所述受体复合物由IFN-λRl和IL-10R2组成。值得注意的是， IFN-λRl是IFN-λ信号通路所特有。IFN-λ1与IFN-λRl特异性结合形成 IFN-λ1/IFN-λRl复合物，其中IFN-λ1与IFN-λRl结合的活性中心的氨基酸残基分别为Pro25，Leu28，lys32，Arg35，Asp36，Glu39，Trp47，Phe152，Phe155， Arg156，Arg160。
无论是I型干扰素、II型干扰素还是III型干扰素，作为蛋白质药物，由于稳定性差、活性低，体内半衰期短等因素，在临床治疗使用中受到很大限制。因此，通过基因工程技术获得更为稳定、比活性更高的干扰素重组蛋白药物是人们所期望的。特别是利用雾化吸入疗法预防和/或治疗呼吸系统疾病时，需要雾化装置将药物溶液雾化成微小颗粒，吸入呼吸道及肺部使药物沉积在呼吸道和肺部，这种情况对于药物的稳定性和活性要求更高，因此人们更渴望获得稳定性更高且活性更好的重组IL29蛋白。基因工程技术通过改变野生蛋白序列中的某个或某几个氨基酸，以获得相对更为稳定、比活性更高的重组蛋白，这在一定程度上可以解决蛋白药物引起的不稳定性问题。但同时因某个或某几个氨基酸的突变，可能使得蛋白质的折叠及空间结构受到影响，从而影响蛋白质的活性。因此是否能获得稳定性更高且活性更好的 IL29突变体蛋白是一个技术难题。
发明内容
综上，为解决现有技术问题，本申请提供了一种稳定性更高、活性更好、不良反应少且可用于雾化吸入疗法的IL29突变体蛋白。
本申请一方面提供了一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第162位氨基酸的取代突变，其中所述第 161位的天冬氨酸(D)或者第162位的甘氨酸(G)被其它天然氨基酸取代。
在一些实施方案中，本申请的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161位的天冬氨酸(D)被谷氨酸、苏氨酸或丝氨酸取代，或者第162位的甘氨酸(G)被脂肪族氨基酸取代。
在一些实施方案中，本申请的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白还包含 SEQ IDNO：1所示氨基酸序列上第165位氨基酸从半胱氨酸(C)到丝氨酸(S)的取代突变。
在本申请中，包含信号肽的全长野生型IL29蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，由200个氨基酸组成，其中1-19位氨基酸为信号肽，20-200 位氨基酸(181aa)组成IL29的成熟蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示)。
本申请白细胞介素29(IL29)突变体蛋白是在SEQ ID NO：3所示野生型蛋白的N-末端起始的第26位开始设计的。本申请的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列第161或第162位的氨基酸取代突变。
在本申请的一些实施方案中，本申请提供了一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第162位氨基酸的取代突变，其中所述第161位的天冬氨酸(D)或者第162位的甘氨酸(G) 被其它天然氨基酸取代，例如被选自如下的氨基酸取代：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸(蛋氨酸)、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸。
本领域技术人员可以理解，SEQ ID NO：1的第161位和第162位与SEQ ID NO：2(野生型白细胞介素29成熟蛋白)和SEQ ID NO：3(包含信号肽的野生型白细胞介素29全长蛋白)的相应位置的对应关系，因此，基于 SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3(或来源于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO： 3的不同长度的氨基酸序列)相应位置的氨基酸突变，也涵盖在本申请的保护范围内。本申请的保护范围还涵盖来源于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO： 3、但具有不同长度的氨基酸序列的上述第161位和第162位对应位置包含取代突变的白细胞介素29突变蛋白。
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第 162位氨基酸的取代突变，其中所述第161位的天冬氨酸(D)或者第162 位的甘氨酸(G)被其它天然氨基酸取代，还包含起始蛋氨酸(M)。这是因为IL29在原核细胞(例如E.coli)中表达时，则表达的IL29蛋白存在N- 末端或氨基末端的甲硫氨酸。
在本申请的一些实施方案中，本申请的IL-29突变体蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第162位氨基酸的取代突变，即从SEQ ID NO：1所示的蛋白的N-末端或者氨基-末端算起，在第161或第162位上的突变，例如所述第161位的天冬氨酸(D)或者第162位的甘氨酸(G)被其它天然氨基酸取代。在一些实施方案中，本申请的IL-29突变体蛋白是在原核细胞(例如E.coli)中表达的突变体蛋白，包含在第162或第163位(因为加了N-末端M，从M算起)上的取代突变，例如所述第162位的天冬氨酸(D)或者第163位的甘氨酸(G)被其它天然氨基酸取代。在一个具体的实施方案中，本申请的IL-29突变体蛋白如SEQ ID NO：4-9所示。
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第 162位氨基酸的取代突变，例如其中所述第161位的天冬氨酸(D)被谷氨酸、苏氨酸或丝氨酸取代，或者第162位的甘氨酸(G)被脂肪族氨基酸取代。在一些实施方案中，本申请的IL-29突变体蛋白是在原核细胞(例如 E.coli)中表达的突变体蛋白，包含在第162或第163位(因为加了N-末端 M，从M算起)上的取代突变，例如其中所述第162位的天冬氨酸(D)被谷氨酸、苏氨酸或丝氨酸取代，或者第163位的甘氨酸(G)被脂肪族氨基酸取代。
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含如下的氨基酸序列或由如下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：4，SEQID NO：6或SEQ ID NO：8。
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白还包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第165位从半胱氨酸(C)到丝氨酸(S)的取代突变。同上所述，当IL29突变体蛋白在原核细胞(例如E.coli)中表达时，所述第165位从半胱氨酸(C)到丝氨酸(S)的取代突变则会出现在第166位。
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白包含如下的氨基酸序列或由如下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：5，SEQID NO：7或SEQ ID NO：9。
在本申请的一些实施方案中，本申请提供了如以下SEQ ID NO：4所示的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白(IL29 DE)：
MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEA AAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQP QPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYV AEGNLCLRTS THPEST
在一些实施方案中，本申请提供了如以下SEQ ID NO：5所示的29(IL29) 突变体蛋白(IL29 DE+CS)：
MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEA AAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQP QPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYV AEGNLSLRTS THPEST(SEQ ID NO：5)
在一些实施方案中，本申请提供了如以下SEQ ID NO：6所示的29(IL29) 突变体蛋白(IL29 DS)：
MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEA AAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQP QPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLF RLLTRDLKYV ASGNLCLRTS THPEST(SEQ ID NO：6)
在一些实施方案中，本申请提供了如以下SEQ ID NO：7所示的29(IL29) 突变体蛋白(IL29 DS+CS)：
MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEA AAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRG RLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYV ASGNLSLRTS THPEST(SEQ ID NO：7)
在一些实施方案中，本申请提供了如以下SEQ ID NO：8所示的29(IL29) 突变体蛋白(IL29 GA)：
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ADANLCLRTS THPEST(SEQID NO：8)
在一些实施方案中，本申请提供了如SEQ ID NO：9所示的29(IL29)突变体蛋白(IL29 GA+CS)：
MKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEA AAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRG RLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYV ADANLSLRTS THPEST(SEQ ID NO：9)
在上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的一些实施方案中，所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白还包含为促进蛋白纯化的短序列(例如6个组氨酸的短序列)，或者为延长半衰期的短氨基酸序列。
在一些实施方案中，本申请涉及白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的融合蛋白，白细胞介素29(IL29)突变体蛋白在N端或C端与其它多肽或蛋白融合。如可与人白蛋白、转铁蛋白、人IgG分子的Fc部分等融合形成融合蛋白以增加蛋白在体内的半衰期。所述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白还可与其他针对不同靶点的蛋白融合，起到联合预防和/或治疗作用，以提高药物的预防和/或治疗效果。如可与DAS181融合，增强本发明的突变体蛋白预防和/或治疗病毒的活性。DAS181是利用一种独特的以宿主为导向的方法，通过切断人类呼吸道内的唾液酸受体来阻断呼吸道病毒传染。这些受体与大多数主要呼吸道病毒结合，导致患者感染。DAS181已经显示了对四种主要呼吸道病毒，包括流感病毒(IFV)、副流感病毒(PIV)、偏肺病毒(MPV)和人类肠道病毒-68(EV-68)的抗病毒活性。
在一些实施方案中，本申请涉及白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的偶联物，其中所述蛋白与聚烷氧化合物偶联。所述聚烷氧化合物例如聚乙二醇 (PEG)，例如直链或支链聚乙二醇，具体是单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG 丙醛)，例如20kD、30kD或40kD的mPEG丙醛。白细胞介素29突变体蛋白用PEG修饰形成偶联物的过程被称为PEG化。本申请中的突变体蛋白的PEG化可通过现有技术中已知的PEG化方式中的任何一种来进行，如使用酰化反应或烷基化反应来进行。通过在蛋白上偶联一个或多个增加总体大小的PEG可人为地增加蛋白质的治疗半衰期，避免体内快速降解。
在一些实施方案中，本申请涉及一种编码上述任一蛋白或融合蛋白的多核苷酸。
在一些实施方案中，本申请涉及包含上述的多核苷酸的载体。简言之，将编码白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的多核苷酸插入到合适的表达载体中，使得多核苷酸可操作性的连接到多克隆位点以表达相应的蛋白。
所述的载体可以为pET系列载体如pET-3a、pET-9a、pET-11a、pET-14b、 pET-15b、pET-16b、17b、19b、20b、21a、22b、23a(+)、24a、25b(+)、26b(+)、 27b(+)、28a(+)、29a(+)、30a(+)、31b(+)、32a(+)、39b(+)、40b(+)、41a(+)、 42a(+)、43.1a(+)、44b、45b、47b、48b、49b(+)、50b(+)、51b(+)、52b(+)； pMal系列载体如pMal-c2X、pMal-c5X；pGEX系列载体如pGEX-6p-1、 pGEX-6P-2；pRSET系列载体如pRSET A、B和C；pTricHis系列载体如 pTrcHisA、B和C。优选地，所述载体为pET-30a(+)。
在一些实施方案中，本申请涉及包含上述多核苷酸或载体的宿主细胞。所述宿主细胞用于表达本发明的IL29突变体蛋白。宿主细胞是指通过例如转化或转导接受外源基因的受体细胞。常见的宿主细胞有原核受体细胞和真核受体细胞。本申请优选原核受体细胞作为其宿主细胞。其中，所述的宿主细胞为大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)、Tuner(DE3)、Origami(DE3)、 Rosetta(DE3)、JM109(DE3)、BL21 star(DE3)、Rosetta-gami(DE3)、Rosetta-gami B(DE3)、BL21(DE3)pLysS或BL21 star(DE3)pLysS。优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。
在一些实施方案中，本申请涉及一种药物组合物，包含上述所述的IL29 突变体蛋白、其融合蛋白或其偶联物和药学上可接受的载体。
所述药物组合物可以为针剂、片剂、胶囊、吸入剂、栓剂等剂型。优选地，所述药物组合物为吸入剂，例如干粉吸入剂或液体吸入剂，例如雾化吸入剂、气雾剂、柔雾剂和喷雾剂等，通过吸入装置，例如雾化吸入装置、定量吸入装置、干粉吸入装置给药。
在一些实施方案中，本申请包含IL29突变体蛋白、融合蛋白或偶联物的药物组合物还包含适于肺部给药的载体，以用于各种呼吸道病毒感染的预防和/或治疗。
在一些实施方案中，本申请涉及白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的制备方法，包括：将编码上述白细胞介素29(IL29)突变体蛋白的核酸(多核苷酸) 导入宿主细胞，使宿主细胞表达该白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，例如，将所述核酸插入到表达载体中；将所述载体转入到宿主细胞(例如大肠杆菌)，得到相应的表达所述突变蛋白的宿主细胞(工程菌)；对所述宿主细胞(工程菌)进行培养(例如发酵)，诱导所述宿主细胞(工程菌)表达所述突变蛋白；收获所述突变蛋白。
在一些实施方案中，上述方法还包括纯化所述收获的突变蛋白和/或使突变蛋白复性。
附图说明
图1和图2为实施例2的IL29突变体SDS-PAGE电泳图(自左至右，图 1中，泳道1～4依次为IL29对照品、IL29DE、IL29DS、IL29GA；图2中，泳道1～4依次为IL29CS、IL29DE+CS、IL29DS+CS、IL29GA+CS)。
图3～图10分别为IL29对照品、IL29DE、IL29DS、IL29GA、 IL29CS、IL29DE+CS、IL29DS+CS、IL29GA+CS的稳定性反相高效液相纯度图谱(其中主峰含量高的代表的是0点测定曲线，主峰含量低的代表为14 天的曲线)。
图11为IL29突变体的雾化稳定性实验中气溶胶收集装置的图。
图12为利巴韦林和不同给药方案下的IL29突变体对RSV感染小鼠模型体内药效结果。
图13为利巴韦林和不同给药方案下的IL29突变体对RSV感染棉鼠模型体内药效结果。
图14为流感病毒感染的小鼠经治疗后的体重变化图。
图15为流感病毒感染的小鼠经治疗后的存活率变化图。
图16为小鼠肺细小支气管和肺小动脉损伤病理改变的图，其中A:组1； B:组2；C:组3；D:组4；E:组5。
图17为小鼠肺泡损伤病理改变的图，其中A:组1；B:组2；C:组3；D: 组4；E:组5。
图18a-c为小鼠肺部各部分病理损伤评分统计图，与组1相比， ***P<0.001；与组2相比，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。
图19为不同浓度的IL29突变体对Vero细胞的毒性作用。
图20为预防组、治疗组、阳性对照组对新型冠状病毒的抑制水平。
图21为预防组不同浓度受试药物对新冠病毒感染Vero细胞的抑制作用。
图22为治疗组不同浓度受试药物对新冠病毒感染Vero细胞的抑制作用。
图23为不同浓度瑞德西韦对新冠病毒感染Vero细胞的抑制作用。
具体实施方式
本申请提供了一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，包含所述突变体蛋白的融合蛋白或偶联物，所述突变体蛋白的制备方法，以及所述突变体蛋白、融合蛋白、偶联物或药物组合物在预防和/或治疗病毒感染、肿瘤疾病及呼吸道窘迫综合征中的用途。发明人筛选了多个突变位点，最后发现本申请提供的IL29突变体蛋白在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上非活性中心位点第 161位的D突变为E后或原核细胞(例如E.coli)中表达得到的SEQ IDNO： 1突变体蛋白第162位的D突变为E后，得到的IL29突变体蛋白活性与野生型IL29相比预料不到地增高了三倍左右，且更稳定，解决了现有抗病毒蛋白质药物活性低、稳定性差、不良反应严重等问题。
定义
术语“重组表达载体”或“载体”用于指线性或环状的DNA分子，其包含编码感兴趣的多肽的片段，其中所述片段与提供其转录的额外片段可操作地连接。这些额外片段包括启动子和终止子序列，并还可以包括一个或多个复制起点、一个或多个选择标记、增强子、多腺苷酸化信号等。表达载体一般来源于质粒或病毒DNA，或可以含有这两者的元件。
“多核苷酸”是指从5′向3′末端阅读的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸碱基的单链或双链聚合物。多核苷酸包括RNA和DNA，可以从天然来源分离、体外合成或通过组合天然和合成的分子来制备。多核苷酸的大小表示为碱基对(缩写″bp″)、核苷酸(″nt″)或千碱基(″kb″)。在上下文允许的情况下，后两个术语可以描述单链或双链的多核苷酸。在本发明中多核苷酸和核酸可以互换使用。
“多肽”是指通过肽键连接的氨基酸残基的聚合物，可以是天然产生的或合成产生的。在本申请中，多肽和蛋白质、蛋白可互换使用。
“突变”蛋白指野生型蛋白氨基酸序列发生改变，例如通过基因工程方法使野生型蛋白氨基酸序列突变获得的蛋白。在本申请中“突变蛋白”、“突变体蛋白”或“突变体”表达相同含义，可互换使用。
“药学上可接受的”或“药理学上相容的”是指不是生物学上或者其它方面不合需要的材料，例如该材料能够掺入到给予患者的药物组合物中而不会引起显著的不良生物反应或者与组合物包含的任何其它组分以有害的方式相互作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选满足毒理学或制造检测的所需标准和/或包含在美国食品和药品管理局编制的的非活性成分指南中。
在本申请的一些实施方案中提供了一种预防和/或治疗受试者病毒感染的方法，包括向受试者提供治疗有效量的本发明的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白。
在本申请的一些实施方案中提供了一种预防和/或治疗肿瘤的方法，包括向受试者提供治疗量的本发明的白细胞介素29(IL29)突变体蛋白。
在本申请的一些实施方案中提供了一种预防和/或治疗或改善受试者呼吸道窘迫综合征的方法，包括向受试者提供有效量的本发明的白细胞介素 29(IL29)突变体蛋白。
如本文中使用的，术语“治疗”指获得期望的药理和/或生理效果。所述效果可以是完全或部分预防疾病或其症状的发生、发作，部分或完全减轻疾病和/或其症状，和/或部分或完全治愈疾病和/或其症状，包括：(a)预防疾病在受试者体内发生或发作，所述受试者可以具有疾病的素因，但是尚未诊断为具有疾病；(b)抑制疾病，即阻滞其形成；和(c)减轻疾病和/或其症状，即引起疾病和/或其症状消退或消失。
术语“受试者”在本申请中指哺乳动物，包括但不限于鼠(大鼠、小鼠)、非人灵长类、人、犬、猫、有蹄动物(例如马、牛、绵羊、猪、山羊)等。
“治疗有效量”或“有效量”指在对哺乳动物或其它受试者施用以治疗疾病时足以实现对疾病的所述预防和/或治疗的量。“治疗有效量”会根据所使用的药物、要治疗的受试者的疾病和/或其症状的严重程度以及年龄、体重等而变化。本领域技术人员可以根据各种参数、尤其根据待治疗受试者的年龄、体重和病症、疾病或病症的严重程度以及给药途径来确定很容易的确定本发明所述蛋白或组合物合适的治疗有效量和给药频率。其中的给药途径包括但不限于，肠道、局部、栓剂、吸入以及非肠道给药，如皮下、肌肉或静脉注射。
常见的白细胞介素29(IL29)蛋白活性检测方法有细胞病变法、报告基因法等。其中，
细胞病变法是指使用人视网膜色素上皮细胞ARPE-19，使用水泡型口炎病毒(VSV)进行感染，通过结晶紫染色的比色法评价细胞受IL29保护的程度，进而评价IL29活性(Kotenko Sergei V,Gallagher Grant,Baurin Vitaliy V et al.IFN-lambdas mediateantiviral protection through a distinct class II cytokine receptor complex.[J].Nat.Immunol.,2003,4:69-77.)。
报告基因法是将干扰素刺反应原件(ISRE)启动子连接到碱性磷酸酶 cDNA上，并转染进HEK293细胞，给予IL29刺激后通过测定HEK293血细胞上清液中碱性磷酸酶评价IL29活性(LaFleur D W,Nardelli B,Tsareva T et al.Interferon-kappa,a novel type Iinterferon expressed in human keratinocytes.[J].J.Biol.Chem.,2001,276:39765-71.)。
白细胞介素29(IL29)蛋白的稳定性的检测方法也包括很多种，如反相高效液相色谱可以用来分析疏水性和极性有差异的杂质；离子交换高效液相色谱可以用来分离电荷差异较大的杂质；而分子筛排阻色谱用来分析二聚体、高聚体和单体。每种检测方法关注点不同，但均可用来表征蛋白纯度得知该蛋白的稳定性。
进一步通过以下非限制性的实施例来说明。
实施例
实施例1：IL29突变体蛋白的制备
1.1突变体蛋白表达工程菌的构建
使用化学合成的方式获得IL29突变体蛋白基因片段SEQ ID NO:11-17，通过NodeI和Xho I位点，将上述片段插入原核表达质粒pET-30a(+) (Novagen)中并测序验证。得到的用于转化测定的表达质粒。将上述获得的含有目的基因的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞(Invitrogen)，将 BL21感受态细胞50μl置于冰浴上融化，加入质粒，轻轻摇匀，并在冰浴中放置30分钟。继而42℃水浴热激30秒，然后快速将离心管转移到冰浴中，放置2分钟，该过程不要摇动离心管。向离心管中加入500μl无菌的LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃，180rpm培养1小时，使细菌复苏。吸取200μl已转化的感受态细胞加到含有卡那霉素抗性的LB琼脂培养基平板上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜培养。次日，使用接种环挑取转化平皿中的单克隆菌落，并接种于15ml的无菌LB培养基(含卡那霉素)，30℃过夜培养。
1.2 IL29突变体蛋白的表达和纯化
向50ml的LB培养基中加入50μl上述细菌的菌液，同时加入50μl卡那霉素，混匀后放30℃恒温振荡器中，接种过夜。取过夜接种的菌液10ml加入1000ml的LB培养基中，同时加入1000μl卡那霉素。摇匀后放于37℃摇床内，200rpm，培养至菌液OD600为0.4-0.6小时，加入终浓度为0.5mM IPTG 诱导，继续培养4h后收集菌体。表达的IL29突变体约占菌体总蛋白的 30-50％，主要以包涵体形式存在。
将发酵菌体以TE(10mmol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA,pH 6.5)溶液 (m:V＝1:10)洗涤菌体3次，然后60Mpa高压匀浆破碎，匀浆后，镜检破菌率。当菌体破碎率约95％时(约破菌2～3次)，8000rpm离心15min，收集破碎菌体沉淀。取破碎菌体沉淀置于烧杯中，加入包涵体洗涤液(10mM Tris-HCl+1mM EDTA+0.5％Triton-X100，pH 6.5，m:V＝1:10)，于磁力搅拌机上搅拌30min，洗涤3～5次。包涵体用包涵体裂解液(7M盐酸胍+50 mM Tris-HCl+10mMDTT，pH 6.5，m:V＝1:10)裂解，室温搅拌，过夜。裂解的蛋白慢速加入复性液(100mM Tris-HCl，0.5M精氨酸，0.5％PEG3350 (m:V)，2mM GSH:0.5mM GSSG，pH 8.5)中，使蛋白终浓度为0.2mg/ml，室温搅拌，过夜。
复性液8000rpm离心5min，收集上清。利用超滤膜包，超滤膜孔径为 10kDa，用20mM磷酸盐缓冲液pH 7.0平衡超滤膜，然后将1L上清液浓缩 10倍。浓缩液加入5倍体积的注射用水稀释待上样，Sepharose FF填料装柱， 50mmol/L Tris-HCl,pH8.5,0.1mol/L NaCl平衡，上样；然后用50mmol/L Tris-HCl,pH8.5,0.15mol/L NaCl进行洗脱，收集洗脱峰组分最终收集样品溶液600ml；Sepharose FF填料装柱，20mmol/L磷酸盐，pH7.4，0.05mol/L NaCl平衡，上样，直到检测器基线平稳。用20mmol/L磷酸盐,pH7.4,0.2mol/L NaCl 冲洗，收集洗脱峰组分。
得到七种IL29突变体蛋白(简称IL29突变体)，分别对应于蛋白氨基酸序列SEQ IDNO:4-10，分别命名为IL29DE、IL29DE+CS、IL29DS、IL29 DS+CS、IL29GA、IL29GA+CS、IL29CS。
同时，用上述同样的方法也合成了IL29野生型蛋白(简称IL29对照品)，对应于蛋白氨基酸序列SEQ ID NO:1并且N末端有额外的M氨基酸。
实施例2检测获得的IL29突变体的各种指标
2.1SDS-PAGE电泳检测获得IL29突变体的分子量及纯度：
利用SDS-PAGE电泳上样缓冲液，在加入巯基乙醇的情况下，将Marker 及10μg的上述得到的得到的蛋白分别上样，进行电泳，电泳条件为200V恒电压，45分钟。用考马斯亮蓝G-25进行染色，检测蛋白分子量及纯度，结果见图1和2所示。
由图1和2可知，IL29突变体蛋白及对照品的分子量分别为20kDa，说明所获得的目的蛋白正确，只有一条带无其他杂带，纯度可达到100％。
2.2采用色谱法检测IL29突变体的体外反相高效液相纯度
2.2.1反相液相色谱法
配制流动相A：乙腈:水:三氟乙酸体积比为20:80:0.1，流动相B：乙腈: 水:异丙醇:三氟乙酸体积比为70:20:10:0.1，使用色谱柱(XBridge BEH C18 Column,130A,5μm,4.6mm*100mm)，分析各蛋白供试品。其中分析条件为：流速1.0ml/min，采集时间：65min，采集波长214nm，柱温45℃，洗脱梯度如下表1：
表1
| 时间(min) | 0 | 5 | 5.01 | 45 | 55 | 55.01 | 65 |
| B％ | 27 | 27 | 27 | 49 | 70 | 27 | 27 |
平行进样两针供试品原液，根据样品浓度设定进样体积，进样量为 15μg～20μg；最后，按照面积归一化法积分，计算供试品主峰纯度。
2.2.2离子交换色谱法
配制流动相A：25mmol/L磷酸盐缓冲液pH7.0，流动相B：25mmol/L磷酸盐缓冲液，0.5mol/L氯化钠pH6.7)，使用色谱柱(Thermo ProPac WCX-10 4.0*250mm)，分析各蛋白供试品。其中分析条件为流速0.8ml/min，采集时间：55min，采集波长214nm，柱温25℃，洗脱梯度见下表2：
表2
| 时间(min) | 0 | 30 | 31 | 40 | 41 | 55 |
| A％ | 80 | 70 | 10 | 10 | 80 | 80 |
| B％ | 200 | 30 | 90 | 90 | 20 | 20 |
进样量为20μg，按照面积归一化法积分，计算供试品平行两针的主峰纯度。
2.3采用报告基因法测定IL29突变体的体外细胞生物学活性
使HEK293-ISRE-Luc细胞(购自中国食品药品检定研究院)在完全培养液中贴壁生长。按1:4传代，每周2～3次，于完全培养液中生长。取培养的细胞弃去培养液，用PBS洗涤1次后消化和收集细胞，用测定培养液(BIBCO) 配制成每1ml含3.5×105～4.5×105个细胞的细胞悬液。将配制完成的IL29 突变体蛋白和IL29对照品移入可用于细胞培养和化学发光酶标仪 (MolecularDevices)读数的96孔板中，每孔加入100μl，然后将上述细胞悬液接种于同一96孔板中，每孔100μl。于37℃、5％二氧化碳条件下培养19～ 23小时。小心吸净96孔板中的上清液，按荧光素酶检测试剂盒(Bright-GloTM Luciferase Assay System，Promega)说明书加入细胞裂解液和荧光素酶底物，用化学发光酶标仪进行测定，分别记录IL29突变体和IL29对照品的EC50值。如下计算其相对生物学活性：以IL29对照品作为标准，其0点活性定义为“100％”，相对生物学活性＝IL29对照品EC50(0点)/IL29突变体EC50。
测定IL29突变体各供试品的EC50，并将IL29对照品作为对照品计算各突变体的相对生物学活性测定，具体结果见下表3：
表3 IL29突变体的体外细胞生物学活性数据
| 蛋白类型 | EC<sub>50</sub>(ng/ml) | 相对生物学活性(％) |
| IL29对照品 | 4.783 | 100％ |
| IL29DE | 1.697 | 282％ |
| IL29DS | 4.316 | 90％ |
| IL29GA | 5.264 | 91％ |
| IL29CS | 4.639 | 103％ |
| IL29DE+CS | 1.428 | 335％ |
| IL29DS+CS | 4.982 | 96％ |
| IL29GA+CS | 3.985 | 120％ |
由上可知，虽然IL29的第162位的D不位于与IL29受体结合的活性中心，经实验意想不到的发现，单突变的IL29DE的EC50仅仅为1.697，远远低于IL29对照品的4.783，生物学活性竟然提高了近三倍，而其他的单突变位点的突变体IL29DS、IL29GA、IL29CS与IL29对照品相比EC50/生物学活性基本无变化。双突变的IL29DE+CS在IL29的第162位的D突变的基础上再加上第166位的C突变为S，其生物活性在单突变的IL29DE的基础上又有进一步的提高，但双突变的IL29DS+CS、IL29GA+CS突变体生物学活性与IL29对照品相比均无明显提高。本结果说明，不位于与IL29受体结合的活性中心第162位的D突变为E有想不到的提高突变后蛋白生物学活性的效果。
实施例3：IL29突变体的50℃稳定性检测结果
本申请中的蛋白的稳定性主要是由反相高效液相纯度表征的。
在50℃±2℃/75％相对湿度±5％相对湿度的条件下，按照表4取样，以与实施例2中2.2.1相同的方法进行IL29突变体各供试品的反相高效液相纯度测定，同以与实施例2中2.3相同的方法进行IL29突变体各供试品的生物学活性测定。详见表5，同时将表5中的0天和14天的纯度数值做对比色谱图，具体见图3～10。
表4 IL29突变体在50℃的稳定性验证方案
表5 IL29突变体在50℃时的反相高效液相纯度的测定结果
从上表5和图3～10结果可知，纯度降幅最大的两个供试品分别是IL29 对照品和IL29CS，其中IL29对照品在14天内纯度从85.82％急剧降到了 34.46％，降幅高达51.36％，IL29CS在14天内纯度从97.03％急剧降到了 46.20％，降幅高达50.83％；降幅最小的两个供试品分别是IL29DE和 IL29DE+CS，其中IL29DE在14天内纯度从92.68％降到了77.39％，降幅仅有15.29％，IL29DE+CS在14天内纯度从97.22％降到了86.66％，降幅更低只有10.56％。其他单点突变体IL29DS、IL29GA14天内的纯度降幅分别为24.22％和19.65％，其他双点突变体IL29DS+CS、IL29GA+CS14天内的纯度降幅分别为18.25％和14.97％。
从上述结果可推知，第162位位点从D突变为E的单点突变体中IL29DE 稳定性最好，在14天内纯度降幅最小。并且，因IL29CS的稳定性远小于 IL29DE，按照常规推论，双点突变体IL29DE+CS的稳定性可能会低于 IL29DE，而本发明中IL29DE+CS的稳定性还远高于IL29DE，说明此双点同时突变后在提高突变体稳定性方面还具有协同作用。同时检测突变体生物学活性，发现14天内突变体IL29DE和IL29DE+CS的生物学活性基本无变化。
实施例4：IL29突变体的25℃光照稳定性检测结果
在25℃±2℃/60％相对湿度±5％相对湿度/5000±500勒克斯的条件下，按照如表6取样，以与实施例2中相同的方法进行IL29突变体的稳定性测定，结果见表7，其中以IL29 CS作为对照品。
表6 IL29突变体25℃光照稳定性方案
表7 IL29突变体25℃光照时稳定性的测定结果
从以上的结果可以看出，IL29突变体IL29DE+CS后的稳定性在25℃光照条件下的稳定性要好于IL29 CS。
实施例5：IL29各突变体的雾化稳定性实验
采用德国PARI LCD型的射流雾化器和TurboBOY N雾化泵进行雾化实验，共雾化2ml样品，并采用如下图11方式进行气溶胶收集，收集的样品以与实施例2中2.2.1相同的方法进行IL29突变体各供试品的反相高效液相纯度测定以验证各突变体的雾化稳定性。其中以IL29 CS作为对照品，结果见下表8。
表8 IL29突变体雾化稳定性的测定结果
从上表结果可知，IL29突变体IL29 DE+CS、IL29 GA+CS雾化后纯度仅下降3％左右，IL29 DS+CS雾化后纯度下降了8.1％，而IL29CS的雾化后纯度大大下降，竟然下降了近11％之多。由此可看出，IL29突变体的雾化稳定性与IL29CS相比显著增强，尤其是IL29突变体IL29 DE+CS、IL29 GA+CS 雾化后稳定性特别好，特别适用于制备雾化吸入制剂。
实施例6：IL29突变体对RSV感染人支气管上皮细胞(HBEC)的体外药效测定
HBEC(human bronchial epithelial cell人支气管上皮细胞)的细胞分化 (CellApplication)完成后，将倍比稀释的IL29突变体(IL29 DE+CS)、阳性对照药(BMS-433771，上海药明康德提供，为呼吸道合胞病毒融合蛋白抑制剂) 加入分化后的HBEC细胞，并于37℃和5％CO2培养箱中孵育。呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，上海药明康德提供)在感染前24h，以及感染后1h和24h接种，活性测试孔中每孔加入滴度100TCID50(半数组织培养感染剂量)的RSV，细胞于37℃和5％CO2培养箱中培养3天后，应用 RNA提取试剂盒(货号74181，Qiagen)提取细胞中RSV RNA，并用RT-qPCR 定量。用GraphPad Prism软件分析化合物剂量反应曲线和计算EC50值及平均抑菌率，结果见表9及表10。
表9阳性对照药BMS-433771在HBEC细胞模型中对RSV感染的抑制
表10 IL29突变体在HBEC细胞模型中对RSV感染的抑制
结果表明，IL29 DE+CS在人支气管上皮细胞的体外模型中显示出很好的抗RSV药效，EC50为0.13ng/ml(6.5pM)，是对照药的1/100000，远低于对照药。
实施例7：IL29突变体对RSV感染小鼠模型的体内药效测定
在第0天，所有小鼠(雌性，6-7周龄，16-18g，无特定病原体(SPF)级 BALB/c小鼠(上海药明康德提供))通过腹腔注射戊巴比妥钠(75mg/kg)麻醉后，经滴鼻的方式接种RSV(人呼吸道合胞病毒A2(RSV-A2，购自BEI Resources,NIAID,NIHBethesda,MD)，接种量为1.1×105PFU每只动物，接种体积为50μL。
从第0天至第3天，根据表11方案对动物进行给药，给药方法为肺部喷雾小鼠经麻醉后，将预装药物溶液的液体雾化装置(购买于上海玉研仪器有限公司)的微喷头插管轻轻插入小鼠气管的合适位置，快速按压雾化器高压推送装置的活塞将定量体积的药物雾化至小鼠肺部(参考文献Joseph D. Brain，Dwyn E.Knudson，Sergei P.Sorokin，MichaelA.Davis，Pulmonary distribution of particles given by intratrachealinstillation or by aerosol inhalation，Environmental research 11,Volume 11,Issue 1,1976,Pages 13-33的给药方案)，频率为每天一次。感染后第5天为体内实验终点，对所有动物进行安乐死并收取肺组织，检测其中的病毒滴度(空斑实验)。结果见表12 及图12。
表11小鼠体内给药方案
注：本实施例中使用的IL29突变体为IL29 DE+CS。
表12不同药物对RSV感染小鼠模型体内药效结果
注：与溶媒(生理盐水)组相比，***P<0.001，**P<0.01
数据表明，RSV接种后可以在小鼠体内大量复制，阳性对照药物利巴韦林显著抑制了RSV在小鼠体内的复制，显示出预期的体内抗RSV活性证明此模型系统的有效性。利巴韦林的给药时间点为病毒感染前1h给药(预防模型)，而受试药物IL29突变体在设定测定条件下(病毒感染前1小时、病毒感染后1小时和病毒感染后24小时)，均可以显著抑制RSV病毒在小鼠体内的复制，其中接种前1小时(10μg)及接种后1小时(10μg)首次给药组小鼠肺组织中的病毒滴度均在检测下限以下，显示极佳的体内抗RSV药效。感染后24小时给药组也显示出了良好的抗RSV效果。利巴韦林在感染前1 小时给药的预防模型结果相比，IL29突变体感染后1小时给药的治疗模型的抗病毒效果与其相当。这也充分说明了IL29突变体有着非常好的抗病毒治疗潜力。
实施例8：IL29突变体对RSV感染棉鼠模型的体内药效测定
在第0天，所有小鼠(Sigmodon hispidus棉鼠，雌雄各半，5周龄，SPF级别(购自Envigo))通过腹腔注射戊巴比妥钠(75mg/kg)麻醉后，经滴鼻的方式接种RSV(人呼吸道合胞病毒A2(RSV-A2)，购自BEI Resources,NIAID, NIHBethesda,MD)，接种量为1.1×105PFU每只动物，接种体积为50μL。
从第0天至第3天，根据表13测定方案对动物进行给药，给药方法为肺部喷雾(参考文献Joseph D.Brain，Dwyn E.Knudson，Sergei P.Sorokin， Michael A.Davis，Pulmonarydistribution of particles given by intratracheal instillation or by aerosolinhalation，Environmental research 11,Volume 11,Issue 1,1976,Pages 13-33的给药方案)，频率为每天一次。在气管中插入一个22G 针头的3ml注射器，向肺中注入2mL 0.9％生理盐水，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。收集的BALF分装于无菌1.5mLEP管中，置于干冰上冷冻，-80℃保存至空斑试验分析。结果见表14和图13。
表13棉鼠体内给药方案
注：本实施例中使用的IL29突变体为IL29 DE+CS。
表14不同药物对RSV感染棉鼠模型体内药效结果
表14和图13数据表明，RSV接种后可以在棉鼠体内大量复制，受试药物IL29突变体在设定条件下(接种后1小时给药的治疗模型)，可以显著抑制RSV病毒在小鼠体内的复制，接种后1小时(1μg)首次给药组(第2、3、 4组)棉鼠支气管灌洗液中的病毒滴度和对照组相比均有统计学差异，并且 3个剂量组(第2-4组)显示出了剂量相关性，显示极佳的体内抗RSV药效。棉鼠被呼吸道合胞病毒感染后，病毒会在其肺部的支气管大量复制，而支气管灌洗液的病毒载量非常好的反映了的肺内的病毒复制情况。因此，IL29 突变体显示除了非常好的对呼吸道合胞病毒的治疗潜力。
实施例9:IL29突变体对新型冠状病毒(2019-nCov)的体外药效测定
在无菌96孔培养板的每孔中加入200μl浓度为5×104个细胞/ml Vero E6 细胞(非洲绿猴肾细胞系)，在37℃5％CO2培养24小时；将受试药物IL29 DE+CS稀释成100ng/ml，设定5个复孔，每孔加入100μl，作用24h；每孔加入100μl 100TCID50/ml滴度的病毒2019-nCoV(由中国医学科学院医学实验动物研究所病原中心-80℃保存，滴度为105TCID50/ml)、空白对照(溶剂对照)和病毒对照(阴性对照)；将细胞在37℃，5％CO2孵箱孵育4-5天；在光学显微镜下观察细胞病变(cytopathic effect，CPE)，细胞完全病变记录为“++++”，75％病变记录为“+++”，50％病变记录为“++”，25％病变记录为“+”，未病变记录为“－”。
结果显示：IL29突变体在100ng/ml(5nmol/L)浓度下，病变记录为“-”，100％保护了Vero E6细胞免受新冠病毒的侵染，显示出了非常好的抗新冠病毒 (2019-nCov)感染的效果。
实施例10：IL29突变体对小鼠体内流感病毒的药效测定
按照表15的给药方案，测定流感病毒在BALB/c小鼠(上海灵畅生物科技有限公司提供)体内药效，每组8只小鼠。结果见图14和图15。
表15测定IL29突变体对小鼠体内甲型流感病毒药效的方案
可见，在甲型流感病毒WSN/33的小鼠感染模型中，感染后48小时给药，IL29 DE+CS可以显著延长感染小鼠的生存期，对小鼠起到保护作用。实施例11：IL29 DE+CS治疗严重呼吸道窘迫综合征体内疗效
雄性C57小鼠(18-22g，30只，上海灵畅生物科技有限公司)麻醉后，剪开皮肤暴露气管；经气管缓慢注射脂多糖LPS溶液(50ul/只，0.3mg/kg)复制急性肺损伤模型；监测动物体重及健康状况，自建模开始到测定结束共计 24h。
根据表16的给药方案，测定地塞米松(dexamethasone，DEX)和IL29 DE+CS在严重呼吸道窘迫综合征小鼠模型中的疗效。建模后24h将小鼠安乐死，取肺组织固定用于后续病理学检测，结果见图16-18a-c。
表16测定地塞米松和IL29 DE+CS治疗严重呼吸道窘迫综合征体内疗效的方案
| 分组 | 动物数 | 模型 | 药物 | 给药方式 |
| 组1 | 6 | 否 | 生理盐水 | 雾化 |
| 组2 | 6 | 是 | 生理盐水 | 雾化 |
| 组3 | 6 | 是 | DEX-3mg/kg | 口服 |
| 组4 | 6 | 是 | IL29 DE+CS-240μg/kg* | 雾化 |
| 组5 | 6 | 是 | IL29 DE+CS-10mg/kg | 皮下 |
*组4为雾化组，药物浓度为1mg/ml,雾化30min。动物造模前给药，造模后 12h再次给药。
可见，在LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型中研究显示，在组织学评价中，与模型组相比，IL29 DE+CS雾化和皮下给药组有显著性的减轻肺损伤和炎症反应的疗效。
实施例12：IL29突变体对非洲绿猴肾细胞Vero的毒性作用
在Vero细胞培养体系内，采用CCK-8法检测不同浓度的抗体对Vero细胞的毒性。
将Vero细胞以5000个/孔的浓度接种至96孔培养板，培养至细胞单层，弃掉培养液，采用Hank’s溶液洗涤细胞2次；采用MEM培养基分别稀释受试药物IL29突变体IL29 DE+CS和瑞德西韦(Remdesivir)，起始浓度分别为 1000nmol/L(19.6μg/mL)和50μmol/L，连续3倍稀释8个浓度。每个药物浓度设3复孔，每孔加药液150μL，同时设Vero细胞正常生长对照孔，37℃、5％CO2孵箱培养48h。然后在每孔加入15μL的CCK-8试剂，3小时后用酶标仪测定在450nm处的OD值，计算药物对细胞的剂量毒性效应及最大无毒性浓度，绘制药物-细胞毒性反应曲线。
结果显示，1000nmol/L(19.6μg/mL)及1000nmol/L以下浓度的受试药物IL29 DE+CS对Vero细胞均无明显的毒性作用，细胞存活力大于90％以上。 50μmol/L及50μmol/L以下浓度的瑞德西韦对Vero细胞也无明显的毒性作用，细胞存活力大于90％以上。受试药物IL29 DE+CS CC50＞1000nmol/L (19.6μg/mL)，具体如图19所示，瑞德西韦CC50＞50μmol/L。
实施例13：IL29突变体体外对新型冠状病毒的抑制作用
在Vero细胞培养模型上，采用免疫荧光法和核酸检测试剂盒(荧光PCR 法)检测不同浓度的IL29突变体对新型冠状病毒的预防和治疗作用。
2.1药物病毒混合液配制
实验组：将受试药物IL29突变体IL29 DE+CS浓度从最高100ng/mL起始，用10％FBS的MEM培养基连续5倍稀释7个浓度的样品，并与新型冠状病毒株病毒液(浙江大学传染病诊治国家重点实验室保存，TCID50为 10-5.5/mL)按照MOI＝100比例混合。
阳性对照组：用10％FBS的MEM培养基将瑞德西韦阳性对照组稀释为 10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM的6个终浓度，并与新型冠状病毒株病毒液按照MOI＝100比例混合。
其中本实验设置预防模型组和治疗模型组，将Vero细胞用上述实验组中未与病毒混合前的不同浓度的受试药物IL29 DE+CS样品预处理24h作为体外预防模型组，不做预处理的细胞作为体外治疗模型组。
2.2实验过程
将Vero细胞以10000个/孔的浓度接种至48孔培养板，培养至细胞对数生长期。分为预防组、实验组、阳性对照组、阴性对照组(仅加入病毒液) 和单纯细胞组(不加病毒)，每个样品设置3个复孔。
其中将预防组中的细胞培养基吸净，加入不同浓度的受试药物IL29 DE+CS样品，每孔500μL。其余细胞不做处理，37℃、5％CO2孵箱培养24h。然后将四组中的细胞培养基均吸净，分别对应加入上述制备的药物病毒混合液，阴性对照组和单纯细胞组的不足部分用培养基补足体积。35℃、5％CO2孵箱培养3h，将细胞培养的培养基吸净，PBS洗涤后再每孔加入相应浓度的药物稀释液500μL，35℃、5％CO2孵箱培养48h。
2.2.1新型冠状病毒核酸检测
吸取培养上清液200μL，用磁珠法核酸提取试剂盒(MVR01，上海之江生物科技股份有限公司)和全自动核酸提取仪(EX3600，上海之江生物科技股份有限公司)提取病毒核酸，最终洗脱体积为50μL。取5μL核酸提取物，采用一步法新型冠状病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法，货号 Z-RR-0479-02-50，国械注准20203400057，上海之江生物科技股份有限公司)，检测病毒核酸水平。
结果以Ct值来表示病毒的水平。Ct值与病毒拷贝数对应关系为： y＝-3.33x+48.69，其中y为Ct值，x是以10为底的病毒数的对数。抑制率计算公式为:抑制率＝[1-10^((y病毒对照-y)/3.33)]×100％。实验结果如下表17和图 20：
表17各组对新型冠状病毒的抑制率测定结果
由上结果可知，预防组中0.0064ng/mL及0.0064ng/mL以上浓度的受试药物对新型冠状病毒感染复制均有抑制作用，其中4ng/mL及4ng/mL以上浓度的受试药物对病毒的抑制率达到98％以上；治疗组中0.0064ng/mL及以上浓度的受试药物对新型冠状病毒感染复制均有一定的抑制作用，但抑制效果较预防组差，除0.8ng/mL外，均低于75％。阳性对照组0.3μM及0.3μM 以上浓度的瑞德西韦对病毒的抑制率达到90％以上。
经计算，受试药物预防组的IC50＝0.0196ng/mL，治疗组的 IC50＝0.0612ng/mL，阳性对照组IC50＝0.12μmol/L。计算可知受试药物的预防组安全指数SI>106，治疗组的安全指数SI为>3.2×105，显示出良好的细胞毒性选择性。
2.2.2免疫荧光法检测
将上述48孔板中培养的细胞培养上清吸净，用PBS洗涤；每孔加入 200μL冰的80％丙酮溶液4℃固定30min后，PBS洗涤再入200μL含3％BSA 的PBS封闭液室温封闭30min，PBS洗涤后加入200μL的一抗(稀释2000 倍的兔抗SARS-CoV2 NP)蛋白血清(北京义翘神州科技股份有限公司)， 4℃孵育过夜。吸掉一抗，PBS洗涤加入稀释1500倍的200μL FITC标记的羊抗兔IgG二抗(Jackson)，室温避光孵育2h。吸掉二抗，PBS洗涤，加入200μL用PBS 1：500稀释DAPI，室温避光孵育5min。吸掉DAPI染液， PBS洗涤，镜检。
免疫荧光结果与核酸检测结果一致，预防组中0.032ng/mL及0.032ng/mL 以上浓度的受试药物对新冠病毒体外感染均具有一定的抑制作用，其中 4ng/mL及4ng/mL以上浓度的受试药物对病毒感染具有显著的抑制效果。治疗组中0.032ng/mL及0.032ng/mL以上浓度的受试药物对新冠病毒体外感染具有一定的抑制作用，但抑制效果较预防组低。阳性对照组0.3μM及0.3μM 以上浓度的瑞德西韦对病毒体外感染具有显著的抑制作用。具体结果见结果见图21、图22和图23。
序列表：
SEQ ID NO：1
KPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ADGNLCLRTS THPEST
SEQ ID NO：2
GPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLKNWSCSS PVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPLH TLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASV TFNLFRLLTRDLKYVADGNLCLRTSTHPEST
SEQ ID NO：3
MAAAWTVVLVTLVLGLAVAGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASF KKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTL KVLEAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHW LHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLCLRTSTHPES T
SEQ ID NO：4
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV AEGNLCLRTS THPEST
SEQ ID NO：5
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV AEGNLSLRTS THPEST
SEQ ID NO：6
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ASGNLCLRTS THPEST
SEQ ID NO：7
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ASGNLSLRTS THPEST
SEQ ID NO：8
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ADANLCLRTS THPEST
SEQ ID NO：9
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ADANLSLRTS THPEST
SEQ ID NO：10，
MKPTTTGKGC HIGRFKSLSP QELASFKKAR DALEESLKLK NWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAE LALTLKVLEA AAGPALEDVL DQPLHTLHHI LSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQ EAPKKESAGC LEASVTFNLF RLLTRDLKYV ADGNLSLRTS THPEST
SEQ ID NO：11
SEQ ID NO：12
SEQ ID NO：13
SEQ ID NO：14
SEQ ID NO：15
SEQ ID NO：16
SEQ ID NO：17
SEQ ID NO：18
序列表
<110> 杭州先为达生物科技有限公司
<120> 一种白细胞介素29突变体蛋白
<130> PD01201
<150> 2020104618263
<151> 2020-05-27
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 175
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 1
Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser
1 5 10 15
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe
35 40 45
Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
50 55 60
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala
65 70 75 80
Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
85 90 95
His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
100 105 110
Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
115 120 125
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
130 135 140
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala
145 150 155 160
Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 2
<211> 181
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 2
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
1 5 10 15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
20 25 30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
35 40 45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
50 55 60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65 70 75 80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
85 90 95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
100 105 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
115 120 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
130 135 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145 150 155 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
165 170 175
His Pro Glu Ser Thr
180
<210> 3
<211> 200
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 3
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
1 5 10 15
Ala Val Ala Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys
20 25 30
Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala
35 40 45
Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys
50 55 60
Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg
65 70 75 80
Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala
85 90 95
Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp
100 105 110
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
115 120 125
Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly
130 135 140
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
145 150 155 160
Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
165 170 175
Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg
180 185 190
Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
195 200
<210> 4
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 4
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Glu Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 5
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 5
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Glu Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 6
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 6
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Ser Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 7
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 7
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Ser Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 8
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 8
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Asp Ala Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 9
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 9
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Asp Ala Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 10
<211> 176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 10
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
20 25 30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
35 40 45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
50 55 60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
85 90 95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
100 105 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
115 120 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
130 135 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145 150 155 160
Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
165 170 175
<210> 11
<211> 528
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 11
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcggaaggca atctgtctct gcgtacctcg acccacccgg aatcgacc 528
<210> 12
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 12
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcgagcggca atctgtctct gcgtacctcg acccacccgg aatcgaccta ataataa 537
<210> 13
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 13
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcggacgcga atctgtctct gcgtacctcg acccacccgg aatcgaccta ataataa 537
<210> 14
<211> 528
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 14
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcggaaggca atctgtgtct gcgtacctcg acccacccgg aatcgacc 528
<210> 15
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 15
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcgagcggca atctgtgtct gcgtacctcg acccacccgg aatcgaccta ataataa 537
<210> 16
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 16
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcggacgcga atctgtgtct gcgtacctcg acccacccgg aatcgaccta ataataa 537
<210> 17
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 17
atgaaaccga ccacgaccgg caaaggctgc catattggtc gctttaagtc gctgtcgccg 60
caggaactgg cgagcttcaa gaaagcccgt gatgccctgg aggaatcgct gaaactgaag 120
aactggagct gtagctcgcc ggtgttcccg ggcaactggg atctgcgtct gctgcaggtt 180
cgcgaacgtc cggttgcgct ggaagcggaa ctggcgctga ccctgaaagt gctggaagcg 240
gcagcgggtc cggcgctgga agatgttctg gatcagccgc tgcacaccct gcatcatatt 300
ctgtcgcagc tgcaggcgtg cattcaaccg cagccgaccg cgggcccgcg tccgcgcggc 360
cgtctgcatc actggctgca ccgtctgcag gaagccccga agaaagagtc ggcgggctgt 420
ctggaagcgt cggtgacctt caatctgttc cgtctgctga cccgtgatct gaaatacgtt 480
gcggacggca atctgtctct gcgtacctcg acccacccgg aatcgaccta ataataa 537
<210> 18
<211> 534
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> artificial
<400> 18
aaaccgacca cgaccggcaa aggctgccat attggtcgct ttaagtcgct gtcgccgcag 60
gaactggcga gcttcaagaa agcccgtgat gccctggagg aatcgctgaa actgaagaac 120
tggagctgta gctcgccggt gttcccgggc aactgggatc tgcgtctgct gcaggttcgc 180
gaacgtccgg ttgcgctgga agcggaactg gcgctgaccc tgaaagtgct ggaagcggca 240
gcgggtccgg cgctggaaga tgttctggat cagccgctgc acaccctgca tcatattctg 300
tcgcagctgc aggcgtgcat tcaaccgcag ccgaccgcgg gcccgcgtcc gcgcggccgt 360
ctgcatcact ggctgcaccg tctgcaggaa gccccgaaga aagagtcggc gggctgtctg 420
gaagcgtcgg tgaccttcaa tctgttccgt ctgctgaccc gtgatctgaa atacgttgcg 480
gacggcaatc tgtgtctgcg tacctcgacc cacccggaat cgacctaata ataa 534
Claims (11)
1.一种白细胞介素29(IL29)突变体蛋白，包含SEQ ID NO：1所示氨基酸序列上第161或第162位氨基酸的取代突变，其中所述第161位的天冬氨酸(D)或者第162位的甘氨酸(G)被其它天然氨基酸取代。
2.权利要求1的蛋白的融合蛋白，其中所述蛋白在N端或C端与其它多肽或蛋白融合。
3.权利要求1的蛋白的偶联物，其中所述蛋白与聚烷氧化合物偶联，所述聚烷氧化合物例如聚乙二醇，例如直链或支链聚乙二醇，具体是单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG丙醛)，例如20kD、30kD或40kD的mPEG丙醛。
4.一种多核苷酸，编码权利要求1的蛋白或权利要求2的融合蛋白。
5.包含权利要求4的多核苷酸的载体。
6.包含权利要求4的多核苷酸或权利要求5的载体的宿主细胞。
7.一种制备权利要求1的蛋白或权利要求2的融合蛋白的方法，包括使权利要求6的宿主细胞表达所述蛋白或融合蛋白，并从所述宿主细胞培养物中分离所述蛋白或融合蛋白。
8.一种药物组合物，包含权利要求1的蛋白、权利要求2的融合蛋白或权利要求3的偶联物和药学上可接受的载体。
9.一种制品或试剂盒，包含权利要求1的蛋白、权利要求2的融合蛋白、权利要求3的偶联物或权利要求8的药物组合物。
10.权利要求1的蛋白、权利要求2的融合蛋白、权利要求3的偶联物或权利要求8任一项的药物组合物在制备用于预防和/或治疗病毒感染性疾病和肿瘤的药物中的用途。
11.一种预防和/或治疗病毒感染性疾病和肿瘤的方法，包括给药受试者治疗有效量的权利要求1的蛋白、权利要求2的融合蛋白、权利要求3的偶联物或权利要求8的药物组合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2020104618263 | 2020-05-27 | ||
| CN202010461826 | 2020-05-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112694526A true CN112694526A (zh) | 2021-04-23 |
| CN112694526B CN112694526B (zh) | 2023-01-20 |
Family
ID=75516681
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110169885.8A Active CN112694526B (zh) | 2020-05-27 | 2021-02-08 | 一种白细胞介素29突变体蛋白 |
| CN202110490889.6A Active CN113150107B (zh) | 2020-05-27 | 2021-05-06 | 一种白细胞介素29突变体蛋白 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110490889.6A Active CN113150107B (zh) | 2020-05-27 | 2021-05-06 | 一种白细胞介素29突变体蛋白 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN112694526B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101031316A (zh) * | 2004-07-29 | 2007-09-05 | 津莫吉尼蒂克斯公司 | Il－28和il－29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 |
| CN101829318A (zh) * | 2004-07-29 | 2010-09-15 | 津莫吉尼蒂克斯有限责任公司 | Il-28和il-29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 |
| CN105085658A (zh) * | 2014-05-14 | 2015-11-25 | 北京凯因科技股份有限公司 | 一种白细胞介素29突变体及聚乙二醇衍生物 |
| CN107698682A (zh) * | 2010-05-03 | 2018-02-16 | 百时美施贵宝公司 | 血清白蛋白结合分子 |
| CN109293782A (zh) * | 2014-01-08 | 2019-02-01 | 德益阳光生物技术（北京）有限责任公司 | 融合多肽及使用方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2616122A1 (en) * | 2005-07-20 | 2007-01-25 | Zymogenetics, Inc. | Il28 and il29 truncated cysteine mutants and antiviral methods of using same |
| CN103224952A (zh) * | 2013-01-25 | 2013-07-31 | 江南大学 | 人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸、35位精氨酸定点突变为精氨酸、赖氨酸的变异体及其制备方法 |
| CN103224951A (zh) * | 2013-01-25 | 2013-07-31 | 江南大学 | 人白细胞介素29成熟肽第35位精氨酸定点突变为赖氨酸的变异体及其制备方法 |
| CN104402988A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-03-11 | 江南大学 | 一种人白细胞介素-29的重组变异体及其制备方法 |
-
2021
- 2021-02-08 CN CN202110169885.8A patent/CN112694526B/zh active Active
- 2021-05-06 CN CN202110490889.6A patent/CN113150107B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101031316A (zh) * | 2004-07-29 | 2007-09-05 | 津莫吉尼蒂克斯公司 | Il－28和il－29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 |
| CN101829318A (zh) * | 2004-07-29 | 2010-09-15 | 津莫吉尼蒂克斯有限责任公司 | Il-28和il-29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 |
| CN107698682A (zh) * | 2010-05-03 | 2018-02-16 | 百时美施贵宝公司 | 血清白蛋白结合分子 |
| CN109293782A (zh) * | 2014-01-08 | 2019-02-01 | 德益阳光生物技术（北京）有限责任公司 | 融合多肽及使用方法 |
| CN105085658A (zh) * | 2014-05-14 | 2015-11-25 | 北京凯因科技股份有限公司 | 一种白细胞介素29突变体及聚乙二醇衍生物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112694526B (zh) | 2023-01-20 |
| CN113150107B (zh) | 2022-06-21 |
| CN113150107A (zh) | 2021-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101415723B (zh) | 具有改良生物学特性的hiv融合抑制肽 | |
| KR101872218B1 (ko) | 펩티드 및 바이러스성 뉴라미니다아제의 저해제를 포함하는 조성물 | |
| AU2021228098A1 (en) | Soluble ACE2 and fusion protein, and applications thereof | |
| CN113425832A (zh) | 干扰素λ在新型冠状病毒(2019-nCoV)感染治疗中的应用 | |
| CN111303245A (zh) | 一种抗合胞病毒膜融合抑制剂 | |
| CN113150107B (zh) | 一种白细胞介素29突变体蛋白 | |
| US20240052330A1 (en) | Blockade of sars-cov-2 infection using hydrocarbon stapled peptides | |
| US11098090B2 (en) | Mycobacteria tuberculosis chaperonin 60.1 peptides and uses thereof | |
| WO2021238302A1 (zh) | 一种白细胞介素29突变体蛋白 | |
| CN112870336B (zh) | 一种白细胞介素29突变体蛋白制剂 | |
| WO2020108427A1 (zh) | 一种新型干扰素α及其制备方法、组合物和用途 | |
| CN101671390B (zh) | 人干扰素α衍生物及其聚乙二醇化修饰物的制备和用途 | |
| WO2021164576A1 (zh) | 用于抗冠状病毒感染的药物及其应用 | |
| CN115385998A (zh) | 稳定的iii型干扰素蛋白及其融合蛋白 | |
| KR101563852B1 (ko) | 소 과립구 콜로니 자극 인자 및 그의 변이체를 위한 제제 | |
| CN113121668A (zh) | PEG修饰的可抑制gp96的多肽、其制备方法及用途 | |
| CN111825773B (zh) | 重组人TSG6-IFNα融合蛋白及其制备方法以及其作为抗病毒药物的应用 | |
| US20230374091A1 (en) | Annexin a5 compositions and methods | |
| US20240002437A1 (en) | Compositions and methods of treating inflammatory lung diseases | |
| US20240018207A1 (en) | Interferon tau fc-fusion proteins and methods for treating coronavirus infections | |
| CN113292638A (zh) | 用于抗冠状病毒感染的多肽药物及其方法和应用 | |
| EP4331571A1 (en) | Formulations of ace2-igm fusion proteins | |
| CN117043176A (zh) | 抗感染双环肽配体 | |
| CN114989246A (zh) | Fk3多肽类似物及其应用 | |
| CA3178840A1 (en) | Method of treating an inflammatory disorder |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 310018 Room 1802, Building 2, Hangzhou East International Business Center, Qiantang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee after: Hangzhou Xianweida Biotechnology Co.,Ltd. Address before: Room 815-818, building 17, No.57, kejiyuan Road, Baiyang street, Hangzhou Economic and Technological Development Zone, Hangzhou City, Zhejiang Province 310018 Patentee before: HANGZHOU SCIWIND BIOSCIENCES Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |