CN112680456A - 水稻抽穗期负调控因子sof基因及其编码蛋白和应用 - Google Patents
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Abstract
水稻抽穗期负调控因子SOF基因及其编码蛋白和应用，涉及基因工程领域，具体涉及一种植物负调控因子SOF基因及其编码蛋白和应用。该基因的核苷酸序列如序列表中SEQID NO：1所示。编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。SOF基因过表达转基因水稻呈晚花表型；sof突变体表现出早花表型。对已知抽穗期基因的节律性表达检测发现，水稻开花促进因子Ehd1、Hd3a和RFT1在SOF基因过表达转基因水稻中表达量下降，而水稻开花抑制因子Hd2表达量升高。说明SOF基因能够通过激活Hd2的表达造成转基因水稻开花延迟。本发明应用于水稻熟期的分子育种领域。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种植物负调控因子SOF基因及其编码蛋白和应用。
背景技术
水稻是一种重要的粮食作物，世界上一半以上的人口以其为主食，提高水稻作物产量对提高粮食安全和稳定经济发展具有重要意义。
水稻抽穗期(heading date,HD)是指水稻从播种到抽穗(开花)所经历的时间，是水稻种植的区域和季节适应性的一个重要农艺性状，水稻是短日照作物，但具有较强的光适应性，在热带、亚热带和温带都可以种植，相对于原始品种O.rufipogon限定在28°N，目前的水稻品种已经可以北移到50°N，这归功于对水稻抽穗期的人工选育，此外通过对杂交水稻的杂种优势机制解析发现，在杂交种中多个抽穗期基因处于杂合状态，使水稻杂种的抽穗期适宜，既能充分利用当地温光环境，达到产量的最大化，又能安全成熟。充分说明了抽穗期是决定产量的关键因素之一。
因此采用基因的手段影响水稻抽穗期，进而调控水稻熟期具有重要的理论及实际意义。
发明内容
本发明的目的是提供水稻抽穗期负调控因子SOF基因及其编码蛋白和应用。
本发明水稻抽穗期负调控因子SOF基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
本发明水稻抽穗期负调控因子SOF基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明水稻抽穗期负调控因子SOF基因在延迟水稻开花中的应用。
进一步的，所述SOF基因能够负向调控水稻熟期。
进一步的，所述SOF基因通过激活抽穗期抑制因子Hd2基因的表达造成水稻开花延迟。
本发明的有益效果：
本发明利用PCR方法从水稻中克隆出水稻转录因子SOF基因。本发明通过遗传转化手段，将SOF基因在水稻中过量表达，发现SOF基因过表达转基因水稻呈晚花表型；通过CRISPR/Cas9敲除技术获得SOF基因敲除突变体，sof突变体表现出早花表型。对已知抽穗期基因的节律性表达检测发现，水稻开花促进因子Ehd1、Hd3a和RFT1在SOF基因过表达转基因水稻中表达量下降，而水稻开花抑制因子Hd2表达量升高，进一步研究发现SOF能够通过激活Hd2的表达造成转基因水稻开花延迟。
SOF基因能够激活抽穗期抑制因子Hd2基因的表达从而负向调控水稻熟期，水稻转录因子SOF作为抽穗期负调控因子的发现，在一定程度上丰富和完善了水稻抽穗期关系网络，对改造水稻熟期的分子育种提供重要理论依据，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为SOF基因过表达转基因水稻转录水平表达分析；
图2为SOF基因过表达转基因水稻抽穗期形态图；
图3为SOF基因过表达转基因水稻抽穗期数据统计；
图4为sof突变体敲除类型及测序结果；
图5为sof突变体抽穗期形态图；
图6为sof突变体抽穗期数据统计；
图7为Ehd1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照条件的节律性表达；
图8为Ehd1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中长日照条件的节律性表达；
图9为Ehd1在ZH11与sof突变体植株中短日照条件的节律性表达；
图10为Ehd1在ZH11与sof突变体植株中长日照条件的节律性表达；
图11为Hd3a在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照的节律性表达；
图12为Hd3a在ZH11与SOF过量表达转基因植株中长日照的节律性表达；
图13为Hd3a在ZH11与sof突变体植株中短日照的节律性表达；
图14为Hd3a在ZH11与sof突变体植株中长日照的节律性表达；
图15为RFT1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照的节律性表达；
图16为RFT1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中长日照的节律性表达；
图17为RFT1在ZH11与sof突变体植株中短日照的节律性表达；
图18为RFT1在ZH11与sof突变体植株中长日照的节律性表达；
图19为水稻抽穗期抑制基因Hd2在SOF基因过表达转基因植株短日照的节律表达；
图20为水稻抽穗期抑制基因Hd2在SOF基因过表达转基因植株长日照的节律表达；
图21为Hd2在突变体sof中短日照的节律性表达变化；
图22为Hd2在突变体sof中长日照的节律性表达变化；
图23为蛋白水平SOF对Hd2启动子区域的结合分析；
图24为原生质体转化所有载体示意图；
图25为转录激活活性的测定结果。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式水稻抽穗期负调控因子SOF基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
具体实施方式二：本实施方式水稻抽穗期负调控因子SOF基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
具体实施方式三：本实施方式水稻抽穗期负调控因子SOF基因在延迟水稻开花中的应用。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三不同的是：所述SOF基因能够负向调控水稻熟期。其它与具体实施方式三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三不同的是：所述SOF基因通过激活抽穗期抑制因子Hd2基因的表达造成水稻开花延迟。其它与具体实施方式三相同。
下面对本发明的实施例做详细说明，以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：水稻抽穗期负调控因子SOF基因的克隆
一、以野生水稻品种日本晴为实验材料，按照Invitrogen公司的TRIzol试剂盒的操作手册，提取叶片总RNA；
二、采用DNaseⅠ处理步骤一所提取的总RNA；
三、取1μg步骤二处理后的总RNA用于cDNA的合成，cDNA的合成操作按照购买自BDBiosciences Clontech公司的BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒的使用手册进行，获得cDNA；
四、以上述获得的cDNA为模板，参照TaKaRa公司的
HS DNAPolymerase操作说明书，用正向引物F1与反向引物R1扩增SOF基因。PCR反应条件如下：98℃预变性5min；98℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共38循环；72℃终延伸10min。最后，将PCR产物在ABI3130测序仪(ABI公司)上进行测序，测序结果表明，水稻抽穗期负调控因子SOF基因由462个碱基组成，其核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No：1所示。
正向引物F1：5'-ATGTCGAGTGGGACCTCGTC-3'
反向引物R1：5'-GAAGCACTGGTACTGGTACAAGTC-3'
实施例2：水稻SOF基因过表达转基因水稻的获得
一、载体构建：以日本晴cDNA为模板，参照TaKaRa公司的
HS DNAPolymerase操作说明书，以正向引物F2与反向引物R2为扩增引物，扩增SOF基因的编码区，并将扩增片段克隆进入植物表达载体pCAMBIA1300中，形成一个CaMV 35S启动子驱动的SOF融合体质粒。
正向引物F2：5'-ACGATGATAAGGGCGGTACCATGTCGAGTGGGACCTCGTC-3'
反向引物R2：5'-AGGCTACGTAGGATCCGAAGCACTGGTACTGGTACA-3'
二、目的载体转化农杆菌EHA105，农杆菌介导法转入水稻品种中花11(ZH11)中，对T0代转基因苗以粗提的DNA为模板，按照全式金公司的EasyTaq DNA Polymerase说明书，用潮霉素引物(F3和R3)进行扩增，获得转基因阳性苗。
正向引物F3：5'-TGCGCCCAAGCTGCATCAT-3'
反向引物R3：5'-TGAACTCACCGCGACGTCTGT-3'
实施例3：SOF基因过表达转基因水稻分子鉴定：
一、以待鉴定SOF基因过表达转基因水稻和其对照为材料，用购买自Invitrogen公司的TRIzol试剂盒的操作手册提取叶片总RNA；
二、采用DNaseⅠ处理步骤一提取的总RNA；
三、取1μg步骤二处理后的总RNA用于cDNA的合成，cDNA的合成操作按照购买自BDBiosciences Clontech公司的BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒的使用手册进行，获得cDNA；
四、以获得的cDNA为模板通过SOF基因正向引物F4与反向引物R4，水稻内参Actin正向引物F5与反向引物R5，以及SYBR Green PCR master mix(TransStart)进行Quantitative real-time PCR。数据从Bio-Rad chromo 4real-time PCR detector上获得；用
方法分析倍数变化。
正向引物F4：5'-TAACTGACATCCTGATGTGC-3'
反向引物R4：5'-GAAGCACTGGTACTGGTACAAGTC-3'
正向引物F5：5'-AGACCTTCAACACCCCTGCTATG-3'
反向引物R5：5'-TCACGCCCAGCAAGGTCG-3'
SOF基因过表达转基因水稻分子鉴定结果如图1(以2株具有代表性的能稳定遗传的SOF基因过表达转基因水稻为例)。SOF基因在对照ZH11中的表达水平设为1；SOF基因过量表达转基因水稻的2个株系中，SOF-OE1表达量是ZH11的17倍，SOF-OE2表达量是ZH11的15倍。以上结果证明本实验所采用的实验材料确实是SOF基因过量表达的。
实施例4：水稻SOF基因过表达转基因水稻抽穗期调查
将SOF-OE与对照中花11，种植于长日照(14h白天+10h黑暗)和短日照(10h白天+14h黑暗)条件下，记录SOF-OE与中花11的抽穗期。
如图2所示，SOF基因过表达转基因水稻与对照ZH11相比呈晚花表型，图3的数据统计结果显示在长日照条件。两个株系与对照相比分别晚花14天和25天，在短日照条件分别晚花8天和14天，直接证据表明SOF负向调控水稻抽穗期。
实施例5：sof突变体的获得
一、载体构建：设计两段SOF基因的打靶sgRNAs，顺序连入CRISPR/Cas9双元载体pYLCRISPR/Cas9Pubi-H中，连接U3启动子的打靶引物F6和R6，以及连接U6a启动子的打靶引物F7和R7的核苷酸序列如下：
正向引物F6：5'-GGCAGCACATCAGGATGTCAGTTA-3'
反向引物R6：5'-AAACTAACTGACATCCTGATGTGC-3'
正向引物F7：5'-GCCGTAGACCTCCGAGCCGACTCT-3'
反向引物R7：5'-AAACAGAGTCGGCTCGGAGGTCTA-3'
二、目的载体转化农杆菌EHA105，农杆菌介导法转入中花11(ZH11)中。提取转基因植物DNA，针对SOF基因，以引物F1与R1为鉴定引物进行PCR扩增，将PCR产物送至库美生物有限公司进行序列测定，鉴定获得2株以上SOF基因敲除纯合的突变体。
如图4所示，是两种SOF基因敲除突变体sof-1和sof-2的测序结果，分别是缺失3bp和缺失613bp，均造成后续移码突变，使表达出的氨基酸发生改变，SOF蛋白功能丧失。
实施例6：sof突变体的抽穗期调查
将sof与对照中花11，种植于长日照(14h白天+10h黑暗)和短日照(10h白天+14h黑暗)条件下，记录sof与中花11的抽穗期。
如图5所示，sof与对照ZH11相比呈早花表型，图6的数据统计结果显示在长日照条件，两个突变体与对照相比抽穗期分别提前36天和35天，在短日照条件分别提前19天和21天，再次表明SOF能够负向调控水稻抽穗期。
实施例7：已知水稻抽穗期相关基因表达量检测
一、以SOF基因过表达转基因水稻及其突变体sof为实验材料，同时播种ZH11为对照，培养40天后分分别转移到长日照(14h白天+10h黑暗)和短日照(10h白天+14h黑暗)条件下培养10天，随后从给光半小时后为0时间点，每隔4h取样一次，连续取样24h，每次均选取三个单株的相同部位的叶片，参照购买自Invitrogen公司的TRIzol试剂盒的操作手册提取叶片总RNA；
二、采用DNaseⅠ处理步骤一提取的总RNA；
三、取1μg步骤二处理后的总RNA用于cDNA的合成，cDNA的合成操作按照购买自BDBiosciences Clontech公司的BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒的使用手册进行；
四、以获得的cDNA为模板通过3个促进水稻抽穗基因引物：Ehd1基因(正向引物F8与反向引物R8)、Hd3a基因(正向引物F9与反向引物R9)和RFT1基因(正向引物F10与反向引物R10)，1个抑制水稻开花基因Hd2(正向引物F11与反向引物R11)，水稻内参Actin正向引物F5与反向引物R5，采用SYBR Green PCR master mix(TransStart)进行Quantitativereal-time PCR。数据从Bio-Rad chromo 4real-time PCR detector上获得；用
方法分析倍数变化。
正向引物F8：5'-ATGGCTTCAAGTGGAGACAC-3'
反向引物R8：5'-ATATTGATGGAGGATGACCG-3'
正向引物F9：5'-GGCAAGAGGTGATGTGCTAC-3'
反向引物R9：5'-TGCTGGATGATGATAGTGAG-3'
正向引物F10：5'-TGACCTAGATTCAAAGTCTAATCCTT-3'
反向引物R10：5'-TGCCGGCCATGTCAAATTAATAAC-3'
正向引物F11：5'-TCTGGAGGAGTCAAGTGTTCG-3'
反向引物R11：5'-TTTCCCTTCTGGCACTTTGG-3'
图7为Ehd1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照条件的节律性表达，图8为Ehd1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中长日照条件的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示SOF-OE#1，▲表示SOF-OE#2)，图9为Ehd1在ZH11与sof突变体植株中短日照条件的节律性表达，图10为Ehd1在ZH11与sof突变体植株中长日照条件的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示sof-ko#1，▲表示sof-ko#2)。结果表明，开花促进因子Ehd1无论长日照或短日照在SOF过量表达转基因植株中的表达量低于ZH11，在sof突变体植株中表达量高于ZH11。
图11和图12分别为Hd3a在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照和长日照的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示SOF-OE#1，▲表示SOF-OE#2)，图13和图14分别为Hd3a在ZH11与sof突变体植株中短日照和长日照的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示sof-ko#1，▲表示sof-ko#2)，图15和图16分别为RFT1在ZH11与SOF过量表达转基因植株中短日照和长日照的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示SOF-OE#1，▲表示SOF-OE#2)，图17和图18分别为RFT1在ZH11与sof突变体植株中短日照和长日照的节律性表达(其中◆表示ZH11，■表示sof-ko#1，▲表示sof-ko#2)。这两个基因表达情况与Ehd1相同，说明在过表达转基因水稻中抽穗期促进因子的表达受到抑制，进一步说明SOF基因能够负向调控水稻抽穗期。
图19和图20是水稻抽穗期抑制基因Hd2在SOF基因过表达转基因植株短日照和长日照的节律表达(其中◆表示ZH11，■表示SOF-OE#1，▲表示SOF-OE#2)，图21和图22分别是Hd2在突变体sof中短日照和长日照的节律性表达变化(其中◆表示ZH11，■表示sof-ko#1，▲表示sof-ko#2)，可以看出无论日照长短，Hd2在过表达转基因植株中表达量均高于野生型ZH11，而在突变体sof中，Hd2表达量低于对照，暗示着SOF可能通过Hd2发挥水稻抽穗期的调节功能。
以上结果表明，与对照野生型相比，过表达转基因水稻中3个抽穗期促进基因的表达量均显著降低，说明在过表达转基因水稻中抽穗期促进因子的表达受到抑制，而在突变体sof中，3个抽穗期促进基因的表达量均高于野生型，进一步说明SOF基因能够负向调控水稻抽穗期。
实施例8：蛋白水平检测SOF对Hd2的结合能力
一、载体构建：将SOF全长编码区序列插入融合GST标签的原核表达载体PGEX4T-1中，表示为GST-SOF，同时合成Hd2启动子序列中含有ACGT基序的正向引物F12和反向引物R12，参照碧云天公司的EMSA探针生物素标记试剂盒(产品编号GS008)标记探针；
正向引物F12：5'-GTTATCTTCCTACGTACGTAAGCTGGATC-3'
反向引物R12：5'-GTTATCTTCCTACGTACGTAAGCTGGATC-3'
二、原核蛋白纯化：挑选GST-SOF转化于BL21菌株的单克隆，大量菌液利用IPTG诱导表达原核蛋白，超声破碎菌体，利用GST-beads纯化蛋白，获得GST-SOF条带单一的原核蛋白用于体外实验；
三、参照碧云天公司化学发光法EMSA试剂盒(产品编号GS009)进行体外结合反应，加入1×loading buffer，煮沸5min，高速离心10min；
五、上样，进行SDS-PAGE电泳；
六、电泳结束后，进行转膜，将胶上的蛋白转移至尼龙膜(Bio-Rad)上；
七、待转膜结束后，用紫外交联仪(UV-light cross-linker)选择254nm紫外波长，120mJ/cm2，交联45-60秒；
八、化学发光法检测生物素标记的探针
取尼龙膜分别经封闭液及含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液在水平摇床上缓慢摇动15分钟，随后加入15ml洗涤液，在水平摇床上缓慢洗涤3次，每次5分钟，最后加入20ml检测平衡液在水平摇床上缓慢摇动5分钟；取5ml BeyoECL Star A液和5mlBeyoECL Star B液混匀，配制成BeyoECL Star工作液，在尼龙膜的表面小心加上此工作液，在扫膜仪进行发光检测。
如图23所示，是蛋白水平上，SOF对Hd2的结合能力检测。结果显示，SOF能够结合Hd2的启动子区域ACGT结构域，而将ACGT结构域突变后结合能力丧失，加入竞争探针后，结合能力减弱，加入突变后的竞争探针，SOF对的结合能力没有影响，这说明在蛋白水平SOF具有对Hd2的DNA结合能力，进一步说明SOF发挥抽穗期调控依赖于Hd2。
实施例9：转录水平SOF对Hd2转录激活活性分析
一、载体构建：将SOF全长编码区序列插入PRT107载体中(PRT107载体由中国科学院遗传与发育生物研究所的李传友老师馈赠)，表示为PRT107-SOF作为效应载体，同时将Hd2的ATG编码区前端5’UTR的-1～-318bp启动子插入pGreenⅡ0800-luc载体中(正向引物F13，反向引物R13)作为报告载体；
正向引物F13：5'-GGGCCCCCCCTCGAGGTCGACCACAAGGTTAGCACATGATGTCG-3'反向引物R13：5'-CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCAGCCTGACTCGAAGAGGTTG-3'
二、取培养15天左右的水稻幼苗，提取原生质体，进行效应载体和报告载体的转化。
三、利用碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(Dual LuciferaseReporter Gene Assay Kit)，先加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)，完成测定后，加入100微升海肾萤光素酶检测工作液，测定RLU(relative light unit)，最后用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU值。
图24为原生质体转化所有载体示意图，图25是转录激活活性的测定结果，用于说明在转录水平上，SOF对Hd2的结激活能力检测。结果显示，与Hd2空白报告载体相比，SOF对Hd2的激活表达高达6倍，说明SOF能够通过激活Hd2的表达发挥对水稻抽穗期的负调控。
序 列 表
<110> 中国科学院东北地理与农业生态研究所
<120>水稻抽穗期负调控因子SOF基因及其编码蛋白和应用
<160> 28
<210> 1
<211> 462
<212> DNA
<213>粳亚种（Oryza sativa L. japonica. cv. Nipponbare）
<220>
<223>水稻抽穗期负调控因子SOF基因
<400> 1
atgtcgagtg ggacctcgtc cgggtcgagc cagggaaccc ggagctccag gtcggaagat 60
gacctgaacc tccaggccca gatggagaag aagaggaaga ggaggaagga gtcgaaccga 120
gagtcggctc ggaggtctag gatgaggaag caacagcacc tcgacgaact cacctcgcag 180
gtgaaccagc tgaagaatca gaaccagcag ctgagcatgg cactgagcct gaccacacag 240
aaccttgtgg cagtgcaggc acagaactca gtgctgcaaa cccaggagtt ggagctgcag 300
agcaggctgt gtgccctaac tgacatcctg atgtgcatga acaacaccag tgctactcct 360
actcctacaa ttccagccac cactacaagt gcttgtgata tttttggtgc cagctcatgg 420
aaccagccac ccatagactt gtaccagtac cagtgcttct ga 462
<210> 2
<211> 153
<212> PRT
<213>粳亚种（Oryza sativa L. japonica. cv. Nipponbare）
<220>
<223>水稻抽穗期负调控因子SOF基因编码蛋白
<400> 2
MET Ser Ser Gly Thr Ser Ser Gly Ser Ser Gln Gly Thr Arg Ser
5 10 15
Ser Arg Ser Glu Asp Asp Leu Asn Leu Gln Ala Gln MET Glu Lys
20 25 30
Lys Arg Lys Arg Arg Lys Glu Ser Asn Arg Glu Ser Ala Arg Arg
35 40 45
Ser Arg MET Arg Lys Gln Gln His Leu Asp Glu Leu Thr Ser Gln
50 55 60
Val Asn Gln Leu Lys Asn Gln Asn Gln Gln Leu Ser MET Ala Leu
65 70 75
Ser Leu Thr Thr Gln Asn Leu Val Ala Val Gln Ala Gln Asn Ser
80 85 90
Val Leu Gln Thr Gln Glu Leu Glu Leu Gln Ser Arg Leu Cys Ala
95 100 105
Leu Thr Asp Ile Leu MET Cys MET Asn Asn Thr Ser Ala Thr Pro
110 115 120
Thr Pro Thr Ile Pro Ala Thr Thr Thr Ser Ala Cys Asp Ile Phe
125 130 135
Gly Ala Ser Ser Trp Asn Gln Pro Pro Ile Asp Leu Tyr Gln Tyr
140 145 150
Gln Cys Phe ***
153
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F1
<400> 3
atgtcgagtgggacctcgtc 20
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R1
<400> 4
gaagcactggtactggtacaagtc 24
<210> 5
<211> 40
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F2
<400> 5
acgatgataagggcggtaccatgtcgagtgggacctcgtc 40
<210> 6
<211> 36
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R2
<400> 6
aggctacgtaggatccgaagcactggtactggtaca 36
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F3
<400> 7
tgcgcccaagctgcatcat 19
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R3
<400> 8
tgaactcaccgcgacgtctgt 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F4
<400> 9
taactgacatcctgatgtgc 20
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R4
<400> 10
gaagcactggtactggtacaagtc 24
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F5
<400> 11
agaccttcaacacccctgctatg 23
<210> 12
<211> 18
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R5
<400> 12
tcacgcccagcaaggtcg 18
<210> 13
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F6
<400> 13
ggcagcacatcaggatgtcagtta 24
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R6
<400> 14
aaactaactgacatcctgatgtgc 24
<210> 15
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F7
<400> 15
gccgtagacctccgagccgactct 24
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<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R7
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aaacagagtcggctcggaggtcta 24
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<212> DNA
<213>人工序列
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atggcttcaagtggagacac 20
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<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R8
<400> 18
atattgatggaggatgaccg 20
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<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F9
<400> 19
ggcaagaggtgatgtgctac 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R9
<400> 20
tgctggatgatgatagtgag 20
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<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F10
<400> 21
tgacctagattcaaagtctaatcctt 26
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R10
<400> 22
tgccggccatgtcaaattaataac 24
<210> 23
<211> 21
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F11
<400> 23
tctggaggagtcaagtgttcg 21
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R11
<400> 24
tttcccttctggcactttgg 20
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<211> 29
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F12
<400> 25
gttatcttcctacgtacgtaagctggatc 29
<210> 26
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<213>人工序列
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<223>反向引物R12
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gttatcttcctacgtacgtaagctggatc 29
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<211> 44
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>正向引物F13
<400> 27
gggccccccctcgaggtcgaccacaaggttagcacatgatgtcg 44
<210> 28
<211> 42
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223>反向引物R13
<400> 28
cgctctagaactagtggatcccagcctgactcgaagaggttg 42
Claims (5)
1.水稻抽穗期负调控因子SOF基因，其特征在于该基因的核苷酸序列如序列表中SEQID NO：1所示。
2.权利要求1所述水稻抽穗期负调控因子SOF基因编码蛋白，其特征在于所述编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.权利要求1所述水稻抽穗期负调控因子SOF基因在延迟水稻开花中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述SOF基因能够负向调控水稻熟期。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述SOF基因通过激活抽穗期抑制因子Hd2基因的表达造成水稻开花延迟。
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