CN112672740A - 大麻素组合物以及使用大麻素组合物的治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含Δ9‑四氢大麻酚(THC)与大麻二酚(CBD)的组合的液体组合物和口服递送系统，治疗受试者的疼痛、炎症和/或焦虑的方法，和控制受试者的心率的方法，所述方法包括口服施用所述液体组合物以及下调或上调特定相关基因的表达。

Description

大麻素组合物以及使用大麻素组合物的治疗方法
发明领域
本发明涉及一种组合物，所述组合物包含Δ9-四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)的组合。本发明还涉及使用所述组合物的方法。
背景
以下包括可用于理解本发明的信息。不承认本文提供的任何信息是当前描述或要求保护的发明的现有技术或与其相关，或者明确或隐含引用的任何出版物或文献是现有技术。
靶向内源性大麻素系统的疗法再次流行，这是由于对这些治疗功效的科学支持增加以及某些辖区对大麻产品的管制放松。监管批准了一些大麻衍生的治疗组合物用于有限范围的适应症，也证明了这种再现。内源性大麻素系统在许多动物物种(包括哺乳动物，如伴生动物)中高度保守。此系统包括大麻素受体CB1、CB2和GPR55，以及瞬时受体电位离子通道TRPV1。这些蛋白质中每种的表达模式不同；然而，内源性大麻素系统在全身(包括中枢神经系统(CNS)、外周神经系统(PNS)、胃肠道(GIT)、免疫和内分泌组织、生殖器官以及骨骼和/或与骨骼功能相关的组织)广泛表达。
当前，药用大麻在人患者和开处方者中同样受欢迎，这是由于大麻素据报道的益处、大麻植物的活性组分以及提供已知安全性特征的长期使用历史。这种受欢迎程度已经促使许多公司开发了用于人患者的大麻素配制品。然而，就配制品要求而言，可能存在显著的种间差异。
因此，持续需要开发适合于向非人受试者(优选除人之外的受试者)施用的基于大麻素的治疗选择。对用于治疗疼痛、炎症和/或焦虑的替代疗法也存在持续需要。
概述
在一方面，本发明提供了一种液体组合物，所述液体组合物包含Δ9-四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)的组合以及口服递送系统。
在一些实施例中，THC:CBD的重量比为1:1.2或更多。
在一些实施例中，THC:CBD的重量比为1或更多:1。
在另外的方面，本发明提供了一种食物产品，所述食物产品包含本发明的液体组合物。
在另一个方面，本发明提供了一种治疗疼痛、炎症和/或焦虑的方法，所述方法包括向有需要的受试者口服施用有效量的本发明的液体组合物或本发明的食物产品。
在另外的方面，本发明提供了本发明的液体组合物或本发明的食物产品在制造用于治疗疼痛、炎症和/或焦虑的药物中的用途。
在另一个方面，本发明提供了一种控制受试者的心率的方法，所述方法包括向所述受试者口服施用有效量的本发明的液体组合物或本发明的食物产品。
在另外的方面，本发明提供了本发明的液体组合物或本发明的食物产品在制造用于控制受试者的心率的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了一种下调趋化因子(C-C基序)配体5基因(CCL5，如SEQID NO:4中所示)的表达和/或下调小脑变性相关蛋白2基因(CDR2，如SEQ ID NO:2中所示)的表达和/或上调大麻素受体2基因(CNR2，如SEQ ID NO:3中所示)的表达和/或上调白介素8基因(CXCL8，如SEQ ID NO:1中所示)的表达和/或上调肾上腺素能受体β2基因(ADRB2，如SEQ ID NO:5中所示)的表达的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。
在另外的方面，本发明提供了一种下调白介素8基因(CXCL8，如SEQ ID NO:1中所示)的表达和/或上调趋化因子(C-C基序)配体5基因(CCL5，如SEQ ID NO:4中所示)的表达和/或上调大麻素受体2基因(CNR2，如SEQ ID NO:3中所示)的表达和/或上调肾上腺素能受体β2基因(ADRB2，如SEQ ID NO:5中所示)的表达的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更高。
在另一个方面，本发明提供了一种影响与炎症相关的生物标志物的浓度的方法，所述生物标志物选自粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-15(IL-15)或其组合，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触。
在另外的方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒以分开的部分包含：
(a)Δ9-四氢大麻酚(THC)和口服递送系统；以及
(b)大麻二酚(CBD)和口服递送系统。
附图说明
可以参考以下非限制性附图进一步描述本发明，其中：
图1示出了在施用本发明的组合物后第一犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图2示出了在施用本发明的组合物后第二犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图3示出了在施用本发明的组合物后第三犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图4示出了在施用本发明的第一方面的组合物后第四犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图5示出了在施用本发明的组合物后第五犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图6示出了在施用本发明的组合物后第六犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图7示出了在施用本发明的组合物后第七犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图8示出了在施用本发明的组合物后第八犬类受试者中THC的药物代谢动力学曲线的图表；
图9示出了在施用本发明的组合物后第一犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图10示出了在施用本发明的组合物后第二犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图11示出了在施用本发明的组合物后第三犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图12示出了在施用本发明的组合物后第四犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图13示出了在施用本发明的组合物后第五犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图14示出了在施用本发明的组合物后第六犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图15示出了在施用本发明的组合物后第七犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图16示出了在施用本发明的组合物后第八犬类受试者中CBD的药物代谢动力学曲线的图表；
图17示出了施用后12小时，3个治疗组(11只犬)的心率的图；
图18示出了施用后12小时，3个治疗组(11只犬)的呼吸率的图；
图19示出了施用后72小时，3个治疗组(11只犬)的心率的图；
图20示出了显示如下内容的图表：在施用(i)中链甘油三酯(MCT)油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，血液中1.5h和72h处趋化因子配体5基因(CCL5)表达的变化；
图21示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，血液中1.5h和72h处小脑变性相关蛋白2基因(CDR2)表达的变化；
图22示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，血液中1.5h和72h处大麻素受体2基因(CNR2)表达的变化；
图23示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，血液中1.5h和72h处白介素8基因(CXCL8)表达的变化；
图24示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，血液中1.5h和72h处肾上腺素能受体β2基因(ADRB2)表达的变化；
图25示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，24小时的血液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的浓度；以及
图26示出了显示如下内容的图表：在施用(i)MCT油、(ii)包含重量比为2:1的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物、和(iii)包含重量比为1:2的THC:CBD和MCT油的本发明的组合物之后，24小时的血液中白介素15(IL-15)的浓度。
定义
在详细描述本发明之前，应该理解，本发明不限于特定示例性实施例(如组合物、方法和用途)，它们当然可以发生变化。还应理解，本文所用的术语是仅出于描述本发明的特定实施例的目的，并不旨在进行限制。
本文引用的所有出版物、专利和专利申请均通过援引以其全文特此并入。
在本说明书中引用了专利说明书、其他外部文件或其他信息来源，这通常是出于提供用于讨论本发明特征的上下文的目的。除非另有明确声明，否则对此类外部文件的引用不应解释为承认此类文件或此类信息来源在任何管辖权内是现有技术或形成本领域公知常识的一部分。
术语“施用”是指向患有待治疗的一种或多种障碍和/或病症或处于待治疗的一种或多种障碍和/或病症风险中的受试者提供组合物。
“有效量”是指如下量，当向受试者施用时，所提供的组合物的量足以实现效果。在治疗性方法的情况下，此效果可以是治疗疼痛、炎症和/或焦虑，或控制受试者心率。因此，“有效量”可以是“治疗有效量”。“治疗有效量”是指如下量，当向受试者施用时，所提供的组合物的量足以治疗疾病、障碍和/或病症，或疾病、障碍和/或病症的症状。
如本文所用，术语“治疗(treating、treatment、treat)”等意指影响受试者(例如患者)、组织或细胞以获得所希望的药理作用和/或生理作用。在完全地或部分地预防疾病或相关症状、或减轻疾病或相关症状的严重程度方面，此效果可以是预防性的；和/或在部分或完全治愈疾病方面，此效果可以是治疗性的。例如，对“治疗”炎症的提及可能因此涵盖：(a)阻止疾病的进展，例如防止症状或并发症随时间推移而恶化；(b)缓解或减轻炎症的影响，即使炎症的至少一种症状或并发症得到改善；(c)防止炎症的另外的症状或并发症发展；和/或(d)防止受试者出现炎症或与炎症相关的症状。在另一个实例中，对“治疗”疼痛的提及可能因此涵盖：(a)防止疼痛的严重程度加剧；(b)缓解或减轻受试者所经历的疼痛的严重程度；(c)防止疼痛从其起源处扩散；和/或(d)防止或延迟受试者的疼痛发作。在另外的实例中，对“治疗”焦虑的提及可能因此涵盖：(a)防止焦虑的严重程度加剧，例如通过防止受试者的心率增加；(b)缓解或减轻受试者短期和/或长期所经历的焦虑的严重程度，例如通过降低受试者的心率；(c)防止与焦虑相关的另外的症状发展；和/或(d)预防或延迟受试者的焦虑发作。
必须注意的是，除非上下文另有明确指出，否则如本文和所附权利要求书中所用的单数形式的“一个(a)”，“一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。因此，例如，对“脂肪酸”和/或“至少一种脂肪酸”的提及可以包括一种或多种脂肪酸，等等。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管可以使用与本文所述的那些类似或等效的任何材料和方法来实践或测试本发明，但是现在描述优选的材料和方法。
名词前面的术语“一个或多个”考虑了单数或复数形式，或同时考虑了两种形式。
术语“和/或”可以意指“和”或者“或”。
除非上下文另有要求，否则本文所提及的所有百分比均是组合物的重量百分比。
除非上下文另有要求，否则本文所提及的所有量旨在是按重量计的量。
参考特定值或值的范围来描述本发明的各种特征。这些值旨在与各种适当测量技术的结果相关，并因此应解释为包括任何特定测量技术固有的误差范围。本文所指的一些值由术语“约”表示，以至少部分地解释这种可变性。当用于描述一个值时，术语“约”可以意指该值的±25％、±10％、±5％、±1％或±0.1％内的量。
术语“包括”以包含性意义使用，即在本发明的各个实施例中用于指定所陈述的特征的存在，但不排除另外的特征的存在或增加。当解释本说明书中包括该术语的陈述时，在每个陈述中以该术语引导的特征都需要存在，但也可以存在其他特征。诸如“包括”和“包含”的相关术语将以相同的方式解释。
在化合物的形式或组合物的添加剂的上下文中，术语“药学上可接受的”旨在意指该化合物的形式或组合物的添加剂适合于在药学意义上使用。因此，药学上可接受的形式和/或添加剂在本文所述的组合物中的存在量对受试者是无毒的。在一些实施例中，本发明的组合物是营养制品(nutraceutical)组合物。应当理解，任何药学上可接受的成分也将适合于营养制品用途。
在化合物的形式或组合物的添加剂的上下文中，术语“兽医学上可接受的”旨在意指该化合物的形式或组合物的添加剂适合于在兽医学意义上使用。因此，兽医学上可接受的形式和/或添加剂在本文所述的组合物中的存在量对非人受试者是无毒的。
在化合物的形式或组合物的添加剂的上下文中，术语“营养制品学上可接受的(nutraceutically acceptable)”旨在意指该化合物的形式或组合物的添加剂适合于在营养制品学意义上使用。因此，营养制品学上可接受的形式和/或添加剂在本文所述的组合物中的存在量对受试者是无毒的。应当理解，所有药学上可接受的形式和添加剂将通常也是营养制品学上可接受的。
如本文所用，术语“大麻素”涉及具有关于内源性大麻素系统的活性的任何化合物。
术语“植物大麻素(phytocannabinoid)”是指已经在大麻植物的萃取物(无论来自大麻植物还是合成产生)中报道的大麻素。
术语“大麻素级分”用于描述在大麻萃取物中存在的大麻素的组合。
对本文披露的数字范围(例如1至10)的提及旨在也包含提及该范围内的全部有理数(例如1、1.1、2、3、3.9、4、5、6、6.5、7、8、9和10)，以及该范围内的任何有理数范围(例如2至8、1.5至5.5和3.1至4.7)，并且因此，特此明确地披露本文中所明确披露的全部范围的全部子范围。这些仅仅是具体意图的实例，并且在所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能组合都应被认为在本申请中以类似方式明确地陈述。
具体实施方式
本发明提供了一种液体组合物，所述液体组合物包含Δ9-四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)的组合以及口服递送系统。
诸位发明人惊奇地发现，向受试者口服施用本发明的液体组合物在使两种大麻素具有足够的生物利用度以在受试者中提供生物应答的同时不会导致任何明显观察到的不良事件。
THC是大麻的主要精神药物成分，它的主要药理作用包括镇痛、肌肉松弛、止吐、食欲刺激和影响精神。THC是CB1和CB2受体的部分激动剂。CB1受体上的THC活性主要涉及其精神药物作用。CB1受体主要在中枢神经系统(包括脑内)表达，而CB2受体通常在全身(包括外周神经系统)表达。此外，由于具有证据充分的精神药物功效，众所周知，THC在以多种形式施用时(包括吸入和口服给药)可以穿越血脑屏障。
关于THC活性的最新数据大多集中在人内源性大麻素系统方面。然而，在本发明之前，通常假设由伴生动物(例如犬或猫)摄入THC会导致THC毒性，其包括以下症状：
·气喘(在犬中)、焦虑和极度躁动
·瞳孔扩大、眼睛有光泽和外表“茫然而困惑”
·极度无精打采
·摇摇晃晃、跌跌撞撞、以及行走时必然跌倒或失去平衡
·流口水和呕吐
·腹泻(尤其是在宠物食用了高脂食物、大麻油或油的情况下)
·无法控制膀胱
·心率和血压异常。
CBD是存在于大麻(Cannabis sativa)植物萃取物中的主要非精神药物大麻素，在一些情况下占萃取物的高达40％，这取决于植物遗传学和所采用的萃取技术。动物和人类研究均显示，CBD的药物代谢动力学和药效动力学非常复杂。CBD似乎同时作用于内源性大麻素系统(ECS)中的CB1和CB2内源性大麻素受体，其通过抑制脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)来间接刺激内源性大麻素信号传导(花生四烯酸乙醇胺)，脂肪酸酰胺水解酶是分解花生四烯酸乙醇胺的酶。重要的是，这使得更多的花生四烯酸乙醇胺保留在受体上，从而引发抗焦虑和抗抑郁等作用。大麻素受体上的这种间接激动剂特性也可以解释其有前途的安全性特征。此外，CBD还显示出对香草素(vanilloid)、腺苷和血清素受体起作用，这解释了其在动物模型和人中的广谱的潜在治疗特性，包括抗焦虑、抗抑郁、神经保护、抗炎性和免疫调节作用。
据信，组合使用的THC和CBD在一些适应症的治疗中具有协同作用，例如使生物应答最大化。已经证明CBD可拮抗THC的一些不良作用(包括中毒、镇静和心动过速)，同时有助于镇痛、止吐和抗致癌的特性。因此，本发明的液体组合物包含THC和CBD的组合，以利用这两种活性大麻素的有益协同作用。
本发明的组合物处于液体形式。液体形式组合物可能是优选的，因为与其他剂型(例如片剂)相比，液体形式组合物可以更容易地根据受试者的需求而调整施用量。另外，对于向不能吞咽固体组合物的受试者(例如非人受试者)进行口服给药，液体形式组合物也是优选的。因此，液体组合物可以是药物组合物、兽医学组合物和/或营养制品组合物。液体组合物通常是口服递送系统中大麻素的溶液和/或悬浮液。
还令人惊讶地发现，施用本发明的液体组合物影响了受试者的基因表达谱(实例4)和炎性生物标志物浓度(实例5)。另外，取决于组合物中含有的THC:CBD比例，基因的表达令人惊讶地呈现差异(参见图20-26)。
因此，在一些实施例中，液体组合物包含较高量的THC与CBD的重量比例。此类液体组合物在本文中可以被称为“高THC组合物”。在这些实施例中，THC:CBD的重量比可以高于1:1。例如，在一些实施例中，THC:CBD的重量比可以是约1.01:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、20:1、30:1、40:1、50:1、60:1、70:1、80:1、90:1、95:1、99:1或更高。THC:CBD的重量比可以是从这些比率中的任一项至这些比率中的任何其他项，而没有限制。例如，THC:CBD的重量比可以是从约1.01:1至约99:1、约1.01:1至约10:1或约1.1:1至约3:1。
令人惊讶地，施用高THC组合物显示治疗后72h的CDR2下调、以及施用后1.5h和72h的CXCL8上调，这与施用媒介物(对照)或施用包含较低的THC与CBD比的组合物所获得的结果显著不同。
在其他实施例中，液体组合物包含较低量的THC与CBD的重量比例。换言之，在这些实施例中，液体组合物包含较高量的CBD与THC的重量比例。此类液体组合物在本文中可以被称为“高CBD组合物”。在这些实施例中，THC:CBD的重量比可以是1:1.2或更高。例如，在一些实施例中，THC:CBD的重量比可以是约1:1.2、1:1.21、1:1.25、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6:、1:1.7:、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4:、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90、1:95、1:99或更低。THC:CBD的重量比可以是从这些比率中的任一项至这些比率中的任何其他项，而没有限制。例如，THC:CBD的重量比可以是从1:1.2至约1:99、约1:1.3至约1:10或约1:1.4至约1:5。
令人惊讶地，施用包含较高的CBD与THC比的液体组合物显示：治疗后1.5h和72h的CCL5上调、治疗后1.5h的CDR2下调、治疗后1.5h的CNR2上调(其水平高于施用2:1THC:CBD组合物后的水平)、施用后1.5h和72h的CXCL8下调、以及ADRB2多于3倍的上调。另外，令人惊奇地，与施用对照和高THC组合物相比，高CBD组合物的炎性生物标志物GM-CSF和IL-15的浓度升高。
据信，THC和CBD是从大麻植物中分离和萃取的人工产物，其中它们的天然生物合成的前体分别是Δ9-四氢大麻酚酸(THCA)和大麻二酚酸(CBDA)。在分析上，还由于THCA和CBDA易于分解为脱羧基的THC和脱羧基的CBD，很难检测出THCA和CBDA的精确浓度。在一些实施例中，液体组合物包含非天然量的脱羧基的THC和脱羧基的CBD。在一些实施例中，液体组合物包含少于约0.5mg/ml THCA和/或CBDA。
通常，当从大麻萃取物中获得大麻素时，由于在分析条件(例如与气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)或超高效液相色谱法(UPLC)技术相关的条件)下难以防止脱羧，将THC和THCA的浓度一起报道，以及类似地将CBD和CBDA的浓度一起报道。除非上下文另有要求，否则本文中提及的THC的任何量可以被理解为是指THC和THCA的组合量。除非上下文另有要求，否则本文中提及的CBD的任何量可以被理解为是指CBD和CBDA的组合量。此外，除非上下文另有要求，在一些实施例中，以上描述的THC:CBD的相对量可以指相对于CBD和CBDA的组合量的THC和THCA的组合量。在一些实施例中，液体组合物可以包含THC、THCA、CBD和CBDA的组合。下表1中示出了THC、THCA、CBD和CBDA的结构。
表1
Figure BDA0002931004890000121
Figure BDA0002931004890000131
组合物可以包含任何有效量的THC。在一些实施例中，THC的最小量可以是至少约0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。在一些实施例中，THC的最大量可以不超过约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％或0.6％。组合物可以包含THC，其量为从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约0.01％至约10％或约0.1％至约1％。
组合物可以包含任何有效量的CBD。在一些实施例中，CBD的最小量可以是至少约0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。在一些实施例中，CBD的最大量可以不超过约10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％或0.6％。组合物可以包含CBD，其量为从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约0.01％至约10％或约0.1％至约1％。
组合物中存在的THC和CBD可以从天然或合成来源、或组合来源(包括半合成来源)提供。可以将从天然来源提供的大麻素进行分离、纯化、并且然后合并。可替代地，可以使用大麻植物的萃取物(例如已经富含THC、THCA、CBD和CBDA中的一种或多种的萃取物)提供大麻素。可以将合成的或半合成的或经分离的天然THC、THCA、CBD和/或CBDA添加至大麻萃取物，从而使萃取物富含这些大麻素中的任一种。可以通过本领域已知的任何手段制备这些混合物。
在一些实施例中，除了THC和CBD的组合之外，液体组合物还包含一种或多种另外的大麻素。所述一种或多种另外的大麻素可以选自大麻萜酚(CBG)、大麻萜酚酸(CBGA)、大麻酚(CBN)和大麻色原烯(CBC)。在其他实施例中，这些另外的大麻素中任一种的量可以不超过约1％、0.7％或0.5％，或所述组合物可以不含这些另外的大麻素中的任一种或全部。
在一些实施例中，以大麻萃取物的形式提供THC和CBD的组合。
至今，在大麻萃取物中已经鉴定出超过100种大麻素。这些大麻素的完整列表可见于：Mahmoud A.El Sohly和Waseem Gul,“Constituents of Cannabis Sativa[大麻的成分]”于Handbook of Cannabis[大麻手册]中,Roger Pertwee(编辑)Oxford UniversityPress[牛津大学出版社](2014)(ISBN:9780199662685)。已经在大麻植物中鉴定出的大麻素包括：大麻萜酚(E)-CBG-C5、大麻萜酚一甲基醚(E)-CBGM-C5 A、大麻萜酚酸A(Z)-CBGA-C5 A、次大麻萜酚(Cannabigerovarin)(E)-CBGV-C3、大麻萜酚酸A(E)-CBGA-C5 A、大麻萜酚酸A一甲基醚(E)CBGAM-C5 A和次大麻萜酚酸A(E)-CBGVA-C3 A；(±)-大麻色原烯CBC-C5、(±)-大麻色烯酸A CBCA-C5 A、(±)-次大麻色烯、(±)-次大麻色酚(Cannabichromevarin)CBCV-C3、(±)-次大麻色酚酸A CBCVA-C3 A；(-)-大麻二酚CBD-C5、大麻二酚一甲基醚CBDMC、大麻二酚-C4 CBD-C4、(-)-次大麻二酚CBDV-C3、大麻二苔黑酚(Cannabidiorcol)CBD-Cl、大麻二酚酸CBDA-C5、次大麻二酚酸CBDVA-C3；大麻二醇(Cannabinodiol)CBND-C5、次大麻二醇(Cannabinodivarin)CBND-C3；Δ9-四氢大麻酚Δ9-THC-C5、Δ9-四氢大麻酚-C4Δ9-THC-C4、Δ9-四氢次大麻酚Δ9-THCV-C3、Δ9-四氢大麻苔黑酚(Tetrahydrocannabiorcol)Δ9-THCO-Cl、Δ9-四氢大麻酚酸AΔ9-THCA-C5 A、Δ9-四氢大麻酚酸BΔ9-THCA-C5 B、Δ9-四氢大麻酚酸-C4A和/或BΔ9-THCA-C4 A和/或B、Δ9-四氢-次大麻酚酸A Δ9-THCVA-C3 A、Δ9-四氢大麻苔黑酚酸(Tetrahydrocannabiorcolicacid)A和/或BΔ9-THCOA-Cl A和/或B、(-)-Δ8-反式-(6aR,10aR)-Δ8-四氢大麻酚Δ8-THC-C5、(-)-Δ8-反式-(6aR,10aR)-四氢大麻酚酸AΔ8-THCA-C5 A、(-)-(6aS,10aR)-Δ9-四氢大麻酚(-)-顺式-Δ9-THC-C5；大麻酚CBN-C5、大麻酚-C4 CBN-C4、次大麻酚CBN-C3、大麻酚C2 CBN-C2、大麻苔黑酚(Cannabiorcol)CBN-Cl、大麻酚酸A CBNA-C5 A、大麻酚甲基醚CBNM-C5、(-)-(9R,10R)-反式-二羟基大麻酚(Cannabitriol)(-)-反式-CBT-C5、(+)-(9S,10S)-二羟基大麻酚(+)-反式-CBT-C5、(±)-(9R,10S/9S,10R)-二羟基大麻酚(±)-顺式-CBT-C5、(-)-(9R,10R)-反式-10-O-乙基-二羟基大麻酚(-)-反式-CBT-OEt-C5、(±)-(9R,10R/9S,10S)-二羟基大麻酚-C3(±)-反式-CBT-C3、8,9-二羟基-Δ6a(10a)-四氢大麻酚8,9-二-OH-CBT-C5、大麻二酚酸A二羟基大麻酚酯CBDA-C5 9-OH-CBT-C5酯、(-)-(6aR,9S,10S,10aR)-9,10-二羟基六氢大麻酚、Cannabiripsol、Cannabiripsol-C5、(-)-6a,7,10a-三羟基-Δ9-四氢大麻酚(-)-大麻四醇(Cannabitetrol)、10-氧代-Δ6a(10a)四氢大麻酚(OTHC)；(5aS,6S,9R,9aR)-大麻艾尔松(Cannabielsoin)CBE-C5、(5aS,6S,9R,9aR)-C3-大麻艾尔松CBE-C3、(5aS,6S,9R,9aR)-大麻艾尔松酸(Cannabielsoic acid)A CBEA-C5A、(5aS,6S,9R,9aR)-大麻艾尔松酸B CBEA-C5 B；(5aS,6S,9R,9aR)-C3-大麻艾尔松酸BCBEA-C3 B、大麻环醚萜酚-C3 OH-异-HHCV-C3、脱氢大麻呋喃(Dehydrocannabifuran)DCBF-C5、大麻呋喃(Cannabifuran)CBF-C5、(-)-Δ7-反式-(1R,3R,6R)-异四氢大麻酚、(±)-Δ7-1,2-顺式-(1R,3R,6S/1S,3S,6R)-异四氢次大麻酚、(-)-Δ7-反式-(1R,3R,6R)-异四氢次大麻酚；(±)-(laS,3aR,8bR,8cR)-大麻环酚CBL-C5、(±)-(1aS,3aR,8bR,8cR)-大麻环酚酸A CBLA-C5 A、(±)-(laS,3aR,8bR,8cR)-次大麻环酚(Cannabicyclovarin)CBLV-C3；大麻二吡喃环烷(Cannabicitran)CBT-C5；大麻色满酮(Cannabichromanone)CBCN-C5、大麻色满酮C3 CBCN-C3、和大麻香豆酮(Cannabicoumaronone)CBCON-C5。
在大麻萃取物中存在的任何大麻素的重量总和可以在本文中被称为大麻素级分。大麻素级分通常占大麻萃取物中存在的化合物的大部分。在一些实施例中，大麻萃取物包含高达约97％、96％、95％、94％、90％、80％、70％或60％的最大量的大麻素级分。大麻素级分的最小量可以是至少约15％、20％、30％、40％或50％。大麻萃取物可以包含从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项(例如，从约15％至约97％或约50％至约94％)的大麻素级分。
除大麻素级分外，大麻萃取物还可以包含多种次级代谢产物，包括萜烯和萜类、固醇(如植物甾醇)、甘油三酯、烷烃、鲨烯、生育酚、类胡萝卜素、类黄酮、多酚、大麻黄酮(cannflavins)和生物碱。这些次级代谢产物的混合物取决于若干种因素而变化，所述因素包括大麻品种、所萃取的大麻植物的部分、萃取方法、萃取物的加工和季节。在一些实施例中，大麻萃取物可以包含高达约20％、15％、10％、6％或5％的最大量的非大麻素级分。大麻萃取物可以包含至少约0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％或3％的最小量的非大麻素级分。大麻萃取物可以包含从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项(例如，从约0.001％至约20％或约0.1％至约6％)的量的非大麻素级分。
存在大麻植物的若干品种，所述品种已经根据两种不同的命名规范进行了描述。这些规范中的一种鉴定了大麻植物的三个不同物种，即寻常大麻(Cannabis sativaLinnaeus)、印度大麻(Cannabis indica LAM.)和莠草大麻(Cannabis ruderalis)。另一种规范将所有大麻植物鉴定为属于寻常大麻(Cannabis sativa L.)物种，其中各种品种被划分为若干个亚种，包括寻常大麻属物种和印度大麻属物种。如本文所用，术语“大麻”是指这些植物品种中的任一种和全部。
可以通过本领域已知的任何手段制备大麻萃取物。萃取物可以从大麻植物的任何部分形成。萃取物可通过使萃取剂与叶、种子、毛状体、花、大麻属晶体(keif)、花苞残片(shake)、芽、茎或其组合接触而形成。可以使用本领域已知的任何合适的萃取剂，包括例如醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙二醇等)、水、烃(例如丁烷，己烷等)、油(例如橄榄油，植物油等)、极性有机溶剂(例如乙酸乙酯，聚乙二醇等)或超临界流体(例如液态CO2)。萃取剂可以在大麻萃取物掺入组合物之前完全或部分去除，或者可以包括在组合物中，并且在一些实施例中可以形成口服递送系统的一部分。可以任选地在减压下(例如在真空下)通过加热萃取物来去除萃取剂。应当理解，一些挥发性更强的植物代谢产物(例如萜烯)也可以用萃取剂去除，并且一些大麻素可以在加热下分解，例如大麻素酸(例如THCA或CBDA)的脱羧。在一些实施例中，去除萃取剂可以富集萃取物的大麻素级分。在一些实施例中，例如通过使萃取物通过滤纸或细筛(例如具有5μm孔径的筛)，将萃取物过滤以去除颗粒材料。
在一些实施例中，通过对植物材料施加热量和压力而形成大麻萃取物。通常，在这些实施例中，不需要萃取剂。
口服递送系统
液体组合物包含口服递送系统。口服递送系统包含一种或多种药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的载体，从而以能够向受试者口服施用的方式溶解或悬浮THC和CBD。
组合物可以包含大量的口服递送系统。在一些实施例中，组合物包含至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％或96％的最低浓度的口服递送系统。组合物可以包含高达约99.99％、99.9％、99.5％、99％、98.5、98％、97.5％、97％或96.5％的最高浓度的口服递送系统。组合物中脂肪酸组分的浓度可以是从这些最小值中的任一项至这些最大值中的任一项，例如从约40％至约99.99％或约75％至约98％。
口服递送系统优选地包含所有液体成分。在一些实施例中，口服递送系统包含选自乙醇、甘油、丙二醇、脂肪酸(任选地处于油的形式)、乳化剂和水或其组合的液体成分。
合适的乳化剂包括阳离子、阴离子、两性离子和非离子表面活性剂。在一些实施例中，乳化剂可以选自以下组：硫酸酯、磺酸酯、磷酸酯、烷基羧酸酯、卵磷脂、季铵盐，聚乙二醇(PEG)、烷基化的脂肪酸和/或脂肪酸酯、多元醇的脂肪酸酯(例如山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单硬脂酸酯和山梨醇酐三硬脂酸酯)、烷基聚葡糖苷、乙氧基化的胺、乙氧基化的脂肪酸酰胺、泊洛沙姆、聚山梨酯(例如聚山梨酯20、40、60或80或吐温20、40、60或80)、聚乙二醇化的油(例如聚氧基35蓖麻油)及其组合。
因为THC和CBD均是脂溶性的，所以在一些实施例中，口服递送系统包含脂肪酸。脂肪酸可以处于游离酸或酯(例如甘油酯)的形式。因此，将理解的是，对“脂肪酸”的提及包括游离脂肪酸及其酯。脂肪酸酯包括甘油酯，例如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。包含在甘油二酯和/或甘油三酯中的脂肪酸残基可以相同或不同，并且可以选自本文所述的任何脂肪酸。
脂肪酸可以选自饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸或其组合。
不饱和脂肪酸可以包含从1至n/2个碳-碳双键，其中n是脂肪酸侧链中的碳原子数。通常，不饱和脂肪酸包含从1至10个碳-碳双键。碳-碳双键可以是顺式的或反式的。通常，碳-碳双键是顺式的。
脂肪酸可以是：
·包含从2至6个碳原子(包括羧基碳)的短链脂肪酸(SCFA)；
·包含从7至13个碳原子(包括羧基碳)的中链脂肪酸(MCFA)；
·包含从14至22个碳原子(包括羧基碳)的长链脂肪酸(LCFA)；和/或
·包含23或更多个碳原子(包括羧基碳)、例如从23至100个碳原子的极长链脂肪酸(VLCFA)。
在一些实施例中，脂肪酸组分包含MCFA、LCFA或其组合。
在一些实施例中，脂肪酸组分包含选自由以下组成的组中一种或多种的脂肪酸：丁酸(4:0)；己酸(6:0)；辛酸(8:0)；癸酸(10:0)；十一酸(11:0)；月桂酸(12:0)；十三酸(13:0)；肉豆蔻酸(14:0)；肉豆蔻脑酸(14:1)；十五酸(15:0)；顺式-10-十五酸；顺式-10-十五碳烯酸；棕榈酸(16:0)；棕榈烯酸(16:1n-9)；十六碳烯酸(16:1)；十六碳二烯酸(16:2)；十七酸(margic/heptadecanoic acid)(17:0)；顺式-10-十七酸；顺式-10-十七碳烯酸；十七碳一烯酸(margaroleic acid)(17:1)；硬脂酸(18:0)；异油酸(18:1)；油酸(18:1)；反油酸(18:1)；亚油酸(LA；18:2)；反亚油酸(18:2n-6)；亚麻酸(18:3)，包括α-亚麻酸(ALA)和γ-亚麻酸(GLA)；十八碳三烯酸(18:3)；亚麻油酸(SDA；18:4n-3)；花生酸(20:0)；二十烯酸(20:1)，包括鳕油酸(20:1n-11)、巨头鲸鱼酸(20:1n-9)和瓜拿纳酸(paullinic acid)(20:1n-7)；二十碳二烯酸(20:1n-6)；顺式-11、14、17-二十碳三烯酸；顺式-8、11、14-二十碳三烯酸；二十碳四烯酸；花生酸(AA；20:0)；二十碳五烯酸(20:5n-3)；二十一碳酸(21:0)；二十二酸(22:0)；鲸蜡烯酸/芥酸(22:1n-9)；二十二碳二烯酸(dicosadienoic acid)(22:2n-6)；二十二碳五烯酸(docosapentanoic/docosapentaenoic acid)(DPA；22:5)；二十二碳六烯酸(DHA；22:6n-3)；二十三酸(23:0)；二十四酸(24:0)；和神经酸(24:1n-9)。
脂肪酸组分可以包含衍生自天然或合成产生(即非天然)的脂肪酸。在一些实施例中，液体组合物包含至少一种来自非天然来源的脂肪酸。
在一些实施例中，以食用油的形式提供脂肪酸。在一些实施例中，食用油选自亚麻籽油、大麻籽油、鱼油、椰子油、可可脂、棕榈仁油、棕榈油、棉籽油、小麦胚芽油、大豆油、橄榄油、玉米油、向日葵油、红花油、卡诺拉油、芝麻油、花生油、迷迭香油、茴香油或其组合。在一些实施例中，脂肪酸组分包含2、3、4或更多种油(例如本文所述的任何油)的组合。
包含至少1种MCFA的甘油三酯在本文中可以被称为中链甘油三酯(MCT)。在一些实施例中，口服递送系统包含MCT。在这些实施例中，能以包含MCFA的油的形式提供MCT，在本文中被称为MCT油。当向受试者施用时，包括当以本发明的组合物施用时，MCT油有利地与一系列健康益处相关。
在一些实施例中，其中口服递送系统包含脂肪酸，组合物可以进一步包含抗氧化剂以延迟或防止脂肪酸的氧化。可以包括任何相容性抗氧化剂。抗氧化剂可以选自抗坏血酸、丁基化的羟基茴香醚、丁基化的羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯、生育酚和五环三萜酸(例如在澳大利亚临时专利申请号2019901093中描述的那些)或其组合。
组合物可以包含处于稳定量的抗氧化剂。稳定量是有效延迟脂肪酸组分发生氧化的量。
在一些实施例中，抗氧化剂的最低浓度可以是至少约0.0001％、0.0005％、0.001％、0.005％、0.01％、0.05％或0.1％。在一些实施例中，抗氧化剂的最高浓度可以不超过约20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％。组合物可以包含处于这些最低浓度中的任一项至这些最高浓度中的任一项(例如，从约0.0001％至约20％或从约0.05％至约6％)的浓度的抗氧化剂。
在一些实施例中，组合物可以包含除THC和CBD之外的另外的活性药学、兽医学和/或营养制品成分。可以包括任何相容性的活性药学、兽医学和/或营养制品成分。在一些实施例中，另外的活性成分可以选自以下中的任何一种或多种：抗炎剂、镇痛剂、鸦片剂、抗痉挛剂、抗生素、抗蠕虫剂、类固醇和激素、麻醉剂、镇静剂、抗溃疡剂、止吐剂、安定剂、抗寄生虫剂、支气管扩张剂、减充血剂、反流药剂、退热剂、利尿剂、抗寄生虫剂、抗止痒剂(antiprutitic agent)和拟交感神经剂。
当存在时，以治疗上有用的量包括另外的活性药学、兽医学和/或营养制品成分，所述量足以在施用后向受试者提供合适的剂量。因此，组合物可以包含有效量的另一种活性药学、兽医学和/或营养制品成分。
在一些实施例中，每种另外的活性药学、兽医学和/或营养制品成分以至少约0.0001％、0.0005％、0.001％、0.005％、0.01％或0.05％的最小量存在。在一些实施例中，每种另外的活性药学、兽医学和/或营养制品成分以不超过约10％、5％、1％或0.5％的最大量存在。组合物可以包含从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项(例如从约0.0001％至约10％或从约0.01％至约1％)的每种另外的活性药学、兽医学和/或营养制品成分。
对本文所述的各种化合物(例如THC和CBD)的提及包括相关化合物及其药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的盐、互变异构体和溶剂化物。
可以将各种化合物提供为药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的盐。药学和兽医学上可接受的盐的实例包括药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵)的盐；药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的无机酸(例如盐酸、正磷酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸)的酸加成盐；或药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的有机酸(例如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘液酸、葡萄糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、三卤甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、羟乙基磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、单宁酸、抗坏血酸、戊酸和乳清酸)的盐。胺基团的盐(如果存在的话)还可以包含季铵盐，其中氨基氮原子携带合适的有机基团，例如烷基、烯基、炔基或芳烷基部分。
可以通过常规手段，例如通过使化合物的游离碱形式与一个或多个当量的合适的酸反应来形成盐。
应当理解，对药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的盐的提及包括其溶剂加成形式或晶体形式，特别是溶剂化物或多晶型物。
“互变异构体”是化合物的结构异构体，所述结构异构体与所述化合物的另一种结构异构体处于平衡状态。这种平衡通常是由热力学驱动的，这使得无法通过常规技术分离表现出互变异构现象的化合物的仅一个互变异构体。在任何本发明的化合物表现出互变异构现象的程度上，本发明旨在包括各种化合物及其衍生物的所有互变异构体。
一种或多种化合物能以非溶剂化形式存在以及与可接受的溶剂(例如水、乙醇等)的溶剂化形式存在。溶剂化物含有化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂是水时，形成水合物。当溶剂是醇时，形成醇化物。通常，出于本文提供的组合物和方法的目的，溶剂化形式被认为等同于非溶剂化形式。
液体组合物可另外包含药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的添加剂。添加剂可以选自由以下组成的组：一种或多种着色剂、填充剂、赋形剂、粘合剂、防腐剂、调味剂、缓冲剂、人造甜味剂和天然甜味剂、分散剂、增稠剂和增溶剂及其组合。添加剂可以是美国药典/美国国家处方集(National Formulary)(USP/NF)、英国药典(BP)、欧洲药典(EP)、日本药典(JP)或中国药典(ChP)中包含的任何添加剂。在一些实施例中，组合物包含添加剂，所述添加剂可以是非天然的(例如合成产生的)。
可以根据诸如在药学、兽医学和/或营养制品配制品领域中熟知的技术来配制液体组合物(参见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学科学与实践],第21版,2005,Lippincott Williams&Wilkins[利平科特威廉姆斯与威尔金斯出版社]和/或Veterinary pharmacology and therapeutics[兽医学药理学与治疗学],Riviere,J.(编辑)；Papich,Mark G.,(编辑)；Wiley-Blackwell[威立-布莱克威尔出版社]；2017)。
可以按单位剂型制备药学、兽医学和/或营养制品组合物。以这种形式，将组合物细分为包含适当量的一种或多种成分的单位剂量。单位剂型可以是经包装的制剂，其中包装含有离散量的制剂。所述制剂可以是溶液，悬浮液，乳液，酏剂，酊剂，或填充有溶液、悬浮液、乳液、酏剂或酊剂的胶囊。
为了制备本文所述的药学、兽医学和/或营养制品组合物，药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的添加剂可以是固体或液体。在固体添加剂的情况下，这些应在液体组合物的液体组分内是可溶的和/或可分散的，从而以液体形式提供该组合物。
本发明的液体组合物可以是无菌的。无菌液体形式组合物包括无菌溶液、悬浮液、乳液、糖浆剂和酏剂。
通常，组合物的施用是口服施用。能以任何合适的形式配制组合物用于口服施用。例如，用于口服施用的组合物能以一种或多种以下液体形式配制：溶液，悬浮液，乳液，酏剂，糖浆剂；或填充有溶液、悬浮液、乳液、酏剂、糖浆剂、酊剂或其组合的胶囊。
在一些实施例中，剂量单位形式可以是胶囊。为形成胶囊，通常将一种或多种成分与药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的赋形剂(例如载体)中的一种或多种组合，以提供液体组合物，然后将所述液体组合物装入胶囊壳中。可以使用本领域已知的任何合适的胶囊壳，包括硬胶囊壳和软胶囊壳。合适的硬胶囊壳可以包括明胶、HPMC、淀粉、短梗霉聚糖和/或聚乙酸乙烯酯(PVA)。合适的软胶囊可包含用增稠剂(例如多元醇，如甘油或山梨糖醇)增稠的明胶。如上所述，胶囊壳可以填充有本文所述的以下剂型中的任一种：溶液、悬浮液、乳液、酏剂、糖浆剂或其组合。
各种其他材料可以作为涂层存在或以其他方式修饰剂量单位的物理形式。例如，胶囊可以用虫胶、糖或两者涂覆。当然，在制备任何剂量单位形式中使用的任何材料应该是药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的，并且在所用量的情况下基本上是无毒的。另外，可以将液体组合物掺入缓释制剂和配制品中。
还包括旨在使用前不久进行稀释的制剂。在此类情况下，可以在使用前不久用液体载体(例如口服递送系统)稀释本发明的液体组合物的浓缩形式(例如缺少全部或部分口服递送系统的形式)。可替代地，可以在使用前不久用液体载体进一步稀释本发明的液体组合物。
在一些实施例中，将本发明的液体组合物掺入食物产品中。因此，在另一个方面，提供了包含本发明的液体组合物的食物产品。应当理解，食物产品不限于液体。合适的食物产品包括固体食物产品(包括烘焙食品)和液体食物产品(如饮料)。可以将组合物在制造期间掺入食物产品中或可以添加至现有产品中。因此，本文披露的食物产品可以进一步包含至少一种一般公认为安全(GRAS)的成分。GRAS成分可以是美国食品和药物管理局(FDA)维护的GRAS数据库中包含的任何成分。在一些实施例中，食物产品是动物零食(animaltreat)，例如犬饼干。
食物产品可以是功能性食物产品，其中所述食物产品还包含药学、兽医学和/或营养制品学上的活性成分。以上所述的任何活性药学、兽医学和/或营养制品成分都可以包含在功能性食物中。活性药学、兽医学和/或营养制品成分可以作为组合物的一部分包括在内，或可以分开掺入功能性食物产品中。
药学、兽医学和/或营养制品学上可接受的载体和/或稀释剂包括任何和所有溶剂、分散介质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。
当需要时，可以采用适于使一种或多种活性成分缓释的配制品。另外，可以配制液体组合物以提供自乳化药物递送系统(SEED)、基于脂质的药物递送系统(LBDDS)和/或自微乳化药物递送系统(SMEDDS)。
除非另有说明，否则本发明的实践采用本领域技术范围内的常规药学和/或医学技术。此类技术对于技术人员是熟知的，并且在文献中被充分解释。
还提供了制备本发明的液体组合物的方法。所述方法包括：
·制备包含THC和液体载体的THC溶液；
·制备包含CBD和液体载体的CBD溶液；以及
将所述THC溶液的等分式样和所述CBD溶液的等分式样合并，以提供包含THC和CBD的组合的液体组合物。
通常，所述THC溶液包含第一浓度的THC，并且所述CBD组合物包含第二浓度的CBD。可以预先确定或通过分析技术评估所述第一浓度和第二浓度。可以采用任何合适的分析技术，包括GC、HPLC和UPLC。
根据此方法制备液体组合物允许控制THC:CBD的最终比。如果THC或CBD是通过萃取大麻植物材料获得的，则所述THC或CBD的浓度可能因提取物而异。无论THC和CBD的来源如何，该方法都允许调整等分试样的体积，以确保液体组合物中THC和CBD的最终比。
THC和/或CBD组合物的液体载体可以包含口服递送系统。可以使用本文所述的任何口服递送系统。
在一些实施例中，所述方法进一步包括对液体组合物进行稀释。可以用口服递送系统稀释液体组合物。可以使用本文所述的任何口服递送系统。
通过该方法产生的液体组合物可以是本文所述的液体组合物中的任一种。
治疗方法
本发明的液体组合物可以用于治疗与内源性大麻素系统相关的任何疾病、障碍或病症。THC和CBD疗法已经显示在对以下疾病、障碍和病症中的一种或多种进行治疗中是有用的：术后疼痛控制、关节炎、癌症、神经性疾病、损伤、缓解焦虑、癫痫治疗、胃肠道健康病症、改善的皮肤健康-特应性皮炎、瘙痒、食欲刺激、姑息治疗、抗炎、减轻青光眼、改善关节和骨骼健康、帮助睡眠、神经系统支持(包括OCD)、抑郁、偏头痛、孤独症、过敏(例如接触性过敏、食物过敏或任何其他过敏)、减少呕吐和恶心、有助于抑制肌肉痉挛、恐惧症的管理、行为障碍的管理、认知功能障碍的管理、癌症生长的减少、杀死细菌/真菌或减慢其生长、降低血糖水平和脂肪酸的失衡。
特别地，本发明提供了治疗疼痛、炎症和/或焦虑的方法。所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本发明的液体组合物。本文所述的本发明的任何液体组合物均可以在这些方法中使用。
在本方法中治疗的疼痛可以是伤害性疼痛、精神性疼痛和/或神经性疼痛。伤害性疼痛与感觉神经末梢(或伤害性感受器)的刺激相关。精神性疼痛与导致疼痛障碍的心理因素相关(通常在排除其他导致疼痛的物理原因后才被诊断出)。神经性疼痛与外周神经系统(PNS)或中枢神经系统(CNS)的损伤或故障相关。已经报道大麻素受体(例如CB1和CB2受体)在PNS和CNS中表达。待治疗的疼痛可以是与内源性大麻素系统相关的任何疼痛。
在本发明的方法中治疗的炎症可以是与内源性大麻素系统的活性相关的炎症的任何形式。所述炎症可能是局部的或全身性的。
在一些实施例中，所述炎症可以是症状或病因、疾病和/或障碍。所述疾病和/或障碍可以选自骨关节炎(OA)、类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎(PsA)、强直性脊柱炎(AS)、非放射性中轴型脊柱关节炎(nr-axSpA)、特发性关节炎、膝关节前疼痛、冻疮、慢性复发性多灶性骨髓炎、纤维肌痛、家族性地中海热(FMF)、痛风、生长疼痛、血色沉着病关节炎、局部硬皮病、狼疮、风湿性多肌痛、反应性关节炎、罗斯河热病、硬皮病、西弗氏病(Sever’sdisease)、干燥综合征和脊柱关节炎或其组合。
在本发明方法中治疗的焦虑可以是与内源性大麻素系统相关的、或与受试者经历与内源性大麻素系统相关的疾病和/或病症(如炎性疾病和/或障碍、和/或疼痛)相关的焦虑的任何形式。焦虑可以是广义的焦虑或特定的焦虑(例如，恐惧、对声音或旅行的焦虑、分离性焦虑等)。人和非人动物同样都会经历焦虑。例如，在犬中，焦虑降低的一个量度是心率。令人惊讶地发现，对于包含较低量的THC相对于CBD的本发明的实施例，受试者的平均心率在整个治疗期间降低。
所述方法包括施用有效量的本发明的液体组合物。所述有效量可以由技术人员基于多种因素来确定，包括受试者的症状的严重程度和种类、受试者的病史、受试者的身体属性(体重、性别等)、待施用的药物组合物中包含的活性成分的特定组合。
在一些实施例中，将液体组合物向受试者施用，以提供至少约0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.12mg/kg、0.15mg/kg或0.2mg/kg的最小剂量的THC。向受试者提供的THC的最大剂量可以不超过约10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.25mg/kg或0.24mg/kg。向受试者施用的THC的剂量可以是从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约0.3mg/kg或约0.12mg/kg至约0.24mg/kg。
在一些实施例中，将液体组合物向受试者施用，以提供至少约0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.12mg/kg、0.15mg/kg或0.2mg/kg的最小剂量的CBD。向受试者提供的CBD的最大剂量可以不超过约10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.25mg/kg或0.24mg/kg。向受试者施用的CBD的剂量可以是从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约0.3mg/kg或约0.12mg/kg至约0.24mg/kg。
以上给出的任何剂量的THC和CBD可以无限制地组合，并且可以例如根据组合物中所含的THC:CBD比例来决定。
本发明的液体组合物可以与食物一起施用或不与食物一起施用。在一些实施例中，受试者在施用前禁食至少约3、6、8、10或12小时。在其他实施例中，可以在消耗食物的约0.5、1或2小时内施用液体组合物。
所述方法包括施用至少两种活性成分(即THC和CBD)，任选地与另外的活性成分一起施用。尽管在一些实施例中，将THC和CBD配制成相同的液体组合物，但是这些方法的一些实施例可能涉及同时地、分别地或连续地施用活性化合物。“同时地”是指将每种活性成分在相同的组合物中同时施用。“分别地”是指将每种活性成分在不同的组合物中并且任选地通过不同的施用途径同时施用。“连续地”是指将每种组合物和另外的活性成分任选地通过不同的施用途径分别施用并且可以在不同的时间施用。通常，当活性成分被连续地施用时，它们在24小时内或在彼此之间的12、8、6、5、4、3、2或1小时内施用。可以在CBD之前或之后施用THC。
基于待治疗的疾病、障碍和/或病症，根据需要可以将THC和CBD施用1、2、3、4或更多次/天。通常，将组合物每天一次或每天两次(BID)施用。
在一些实施例中，在施用后约3、2、1.5或1小时内可以达到峰THC血浆浓度。施用后至少约0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.67小时后可以出现峰THC血浆浓度。在施用后约0.2小时至约3小时或施用后约0.67小时至约1.5小时可以达到峰THC血浆浓度。
在一些实施例中，在施用后约3、2、1.5或1小时内可以达到峰CBD血浆浓度。在施用后至少约0.2、0.3、0.4、0.5、0.6或0.67小时后可以出现峰CBD血浆浓度。在施用后约0.2小时至约3小时或施用后约0.67小时至约1.5小时达到峰CBD血浆浓度。
尽管即使同时给药也可认为组合物中THC和CBD的吸收是独立的，但在一些实施例中，THC和CBD的峰血浆浓度都在约0.5、0.4、0.3或0.2小时内达到。
在一些实施例中，达到的峰THC血浆浓度(Cmax)为从约19ng/mL至约71.3ng/mL。令人惊讶地，观察到在施用后72h，受试者的血液中可检测到THC。因此，在一些实施例中，THC血浆浓度可以是至少约0.11ng/ml、0.22ng/mL、0.28ng/ml、0.34ng/ml、0.47ng/ml、0.58ng/ml、1.48ng/ml、1.91ng/ml、10.5ng/ml、71.3ng/mL。达到的血浆THC浓度可以是从这些浓度中的任一项至这些浓度中的任何其他项，例如从约0.11ng/ml至约71.3ng/ml、约0.22ng/mL至约0.58ng/mL、约1.48ng/mL至约10.5ng/mL、约0.47ng/mL至约1.91ng/mL、或约0.11ng/mL至约0.46ng/mL。
在一些实施例中，达到的峰CBD血浆浓度(Cmax)是从约5ng/mL至约69ng/mL。令人惊讶地，观察到在施用后长达72h，受试者的血液中可检测到CBD。因此，在一些实施例中，CBD血浆浓度可以是至少约0.23ng/mL、0.26ng/mL、0.28ng/mL、0.46ng/mL、0.76ng/mL、0.88ng/mL、5.74ng/mL、69ng/mL。达到的血浆CBD浓度可以是从这些浓度中的任一项至这些浓度中的任何其他项，例如从约0.23ng/ml至约69ng/ml、约0.76ng/mL至约5.74ng/mL、约0.11ng/mL至约0.46ng/mL或约0.23ng/mL至约0.88ng/mL。
在没有限制的情况下，本文所述的任何THC和/或CBD血浆浓度可以在施用后维持至少约6、12、18、24、32小时或更长时间。
除血浆浓度之外，计算施用的活性成分的曲线下面积(AUC)也是有用的。在一些实施例中，在向犬类受试者施用0.12mg/kg剂量的THC与0.24mg/kg剂量的CBD的组合后，THC浓度的AUC可以是从约90至约110，例如约95至约100。在向犬类受试者施用0.24mg/kg剂量的THC与0.12mg/kg剂量的CBD的组合后，THC浓度的AUC可以是从约145至约170，例如约150至约160。在一些实施例中，在向犬类受试者施用0.12mg/kg剂量的CBD与0.24mg/kg剂量的THC的组合后，CBD浓度的AUC可以是从约30至约50，例如约35至约45。在向犬类受试者施用0.24mg/kg剂量的CBD与0.12mg/kg剂量的THC的组合后，CBD浓度的AUC可以是从约95至约110，例如约100至约105。这些AUC结果表明口服给药本发明的液体组合物后，THC和CBD均达到可测量的血浆浓度。令人惊讶地，在施用0.24mg/kg THC/0.12mg/kg CBD后THC的AUC少于施用0.12mg/kg THC/0.24mg/kg CBD后THC的AUC的2倍。类似地，令人惊讶地发现，在施用0.12mg/kg THC/0.24mg/kg CBD后达到的CBD的AUC多于施用0.24mg/kg THC/0.12mg/kgCBD后CBD的AUC的两倍。THC和CBD两者在生物利用度方面的这种相对改善显示就本发明的高CBD组合物的口服吸收而言具有协同作用。
待治疗的受试者可以是人受试者或非人受试者。非人受试者可以是任何具有内源性大麻素系统的动物。据信内源性大麻素系统在所有脊椎动物以及在一些无脊椎动物中都是高度保守的。如本文所用，术语“动物”包括但不限于伴生动物、食物生产用动物(food-production animal)和动物园动物。伴生动物包括犬、猫、豚鼠、仓鼠和马。食物生产动物包括牛、山羊、绵羊、飞禽、家禽和猪。动物园动物包括猴子、大象、长颈鹿和其他有蹄类动物、熊、小鼠和其他小型哺乳动物。通常，受试者是犬或猫，最通常是犬。
在另一个方面，本发明提供了控制受试者的心率的方法。所述方法包括向受试者口服施用有效量的本发明的液体组合物。
在一些实施例中，控制心率意指在口服施用后一段时间使受试者的平均心率降低。在这些实施例中，液体组合物可以是高CBD组合物。
可以按本文所述的任何有效量给药液体组合物。因此，施用后THC和CBD的药物代谢动力学曲线还可以是本文所述的任何血浆浓度曲线。
在一些实施例中，控制心率意指在施用后一段时间防止平均心率升高。
所述施用后一段时间可以是至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、16、18、20、24小时或更长时间，例如长达约72小时。
本文还披露了套装盒，所述套装盒以分开的部分包含：
(a)包含THC和口服递送系统的液体组合物；以及
(b)包含CBD和口服递送系统的液体组合物。
部分(a)和(b)的口服递送系统可以是本文所述的任何口服递送系统。通常，部分(a)和(b)的口服递送系统是相同的。在一些实施例中，可以将部分(a)和(b)组合以提供本发明的液体组合物。
基因表达
本发明的一方面提供了调节一种或多种基因的表达的方法，所述基因选自趋化因子(C-C基序)配体5(CCL5，如SEQ ID NO:4中所示)、小脑变性相关蛋白2(CDR2，如SEQ IDNO:2中所示)、大麻素受体2(巨噬细胞)(CNR2，如SEQ ID NO:3中所示)、白介素8(CXCL8，如SEQ ID NO:1中所示)和肾上腺素能受体β2(ADRB2，如SEQ ID NO:5中所示)。在一些实施例中，可以在这些方法中调节所有这些基因的表达。
在一些实施例中，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触。
在一些实施例中，通过向受试者施用THC和CBD的组合，可以实现使细胞与THC和CBD的组合接触。
所述THC和CBD的组合可以按本文所述的任何液体组合物的形式提供。可以按本文所述的任何剂量向细胞提供液体组合物和/或向受试者施用液体组合物。
趋化因子(C-C基序)配体5基因(CCL5)编码趋化因子，并充当血液单核细胞、记忆T辅助细胞和嗜酸性粒细胞的化学引诱物。它导致组胺从嗜碱性粒细胞释放并活化嗜酸性粒细胞。在其相关的途径中，有色素上皮衍生因子(PEDF)诱导的信号传导和toll样受体信号传导途径。因此，该基因的上调可导致免疫细胞通讯、组织和协调的改善。
大麻素受体2基因(CNR2)编码CB2受体，也称为外周大麻素受体。CB2受体主要位于CNS内和外的免疫细胞中。该基因的上调可以在细胞水平上增强与经处理的活性化合物的代谢有关的生理摄取。
白介素8基因(CXCL8)编码白介素8(IL-8)，所述白介素8是一种蛋白质，其是CXC趋化因子家族的成员，并且是炎症反应的主要介质。编码的蛋白质主要由嗜中性粒细胞分泌，在其中它通过引导嗜中性粒细胞到达感染部位而充当趋化物。这种趋化因子也是有效的血管生成因子。在其相关途径中有PEDF诱导的信号传导。IL-8是一种趋化物，可吸引嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞，但不吸引单核细胞。它还参与嗜中性粒细胞活化。响应于炎性刺激，它从若干种细胞类型中释放。它是一种有效的促炎性细胞因子，并且涉及各种疼痛状态(包括癌症疼痛)。该基因的下调显示抗炎作用。
小脑变性相关蛋白2基因(CDR2)编码一种蛋白质，所述蛋白质在线粒体水平上在细胞钙转运和神经功能中起作用。CDR2与CB1受体活化相关，并被认为形成了用于归因于CBD的神经保护作用途径的一部分。
肾上腺素能受体β2基因(ADRB2)编码β-2肾上腺素受体。肾上腺素是该受体的配体。ADRB2与疼痛反应有关，据报道抗抑郁药抑制由外周β-肾上腺素能受体介导的抗肿瘤坏死因子-α(TNFα)机制介导的神经性疼痛。ADRB2的作用与促进格斗或逃跑反应有关，但也参与神经炎性过程。还认为ADRB2刺激可增加造血祖细胞和干细胞的迁移。
可以根据本领域已知的任何技术来确定基因的表达水平。
在一些实施例中，在施用THC和CBD的组合后，CNR2上调。上调可以是暴露于THC和CBD的组合之前获得的样品中基因表达水平的至少约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍或3倍增加。在THC和CBD暴露后，上调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。
在一些实施例中，在施用THC和CBD的组合后，ADRB2上调。上调可以是暴露于THC和CBD的组合之前获得的样品中基因表达水平的至少约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍或3倍增加。在THC和CBD暴露后，上调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。
在一些实施例中，基因的调控(上调或下调)取决于暴露于细胞和/或向受试者施用的THC:CBD比例。在一些实施例中，暴露于高THC组合物可以导致CCL5的下调。下调可以是暴露于THC和CBD之前获得的样品中基因表达水平的至少约-0.5倍或-1倍变化。在THC和CBD暴露后，下调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。在一些实施例中，暴露于高CBD组合物可以导致CCL5的上调。上调可以是暴露于THC和CBD的组合之前获得的样品中基因表达水平的至少约0.5倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍或3倍增加。在THC和CBD暴露后，上调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。
在一些实施例中，暴露于高CBD组合物可以导致CXCL8的下调。下调可以是暴露于THC和CBD之前获得的样品中基因表达水平的至少约-0.5倍或-1倍变化。在THC和CBD暴露后，下调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。在一些实施例中，暴露于高THC组合物可以导致CXCL8的上调。上调可以是暴露于THC和CBD的组合之前获得的样品中基因表达水平的至少约0.5倍、1倍、1.5倍或2倍增加。在THC和CBD暴露后，上调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。
在一些实施例中，暴露于高THC组合物可以导致CDR2的下调。下调可以是暴露于THC和CBD之前获得的样品中基因表达水平的至少约-0.5倍、-1倍、-1.5倍或-2倍变化。在THC和CBD暴露后，下调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。在一些实施例中，暴露于高CBD组合物还可以导致CDR2的下调和/或上调，例如在THC和CBD暴露的约70、48、36、24、12、6、5、4、3或2小时内，CDR2的表达可能下调，而在治疗后约2、3、4、5、6、12、24、36、48或70小时，CDR2表达可能上调。CDR2下调可以是暴露于THC和CBD之前获得的样品中基因表达水平的约-0.5倍、-1倍或-1.2倍变化。CDR2上调可以是暴露于THC和CBD之前获得的样品中基因表达水平的约0.5倍、1倍或1.2倍变化。在THC和CBD暴露后，下调可以持续至少约1、1.5、6、12、18、24、48、36、72小时或更长时间。
在一些实施例中，本发明提供了下调CCL5和CDR2以及上调CNR2、CXCL8和ADRB2的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。所述组合可以按本文所述的任何高THC液体组合物的形式提供。使细胞与THC和CBD的组合接触的步骤可以包括向受试者施用THC和CBD的组合。
在一些实施例中，本发明提供了下调CXCL8和CDR2以及上调CCL5、CNR2和ADRB2的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更多。所述组合可以按本文所述的任何高CBD组合物的形式提供。使细胞与THC和CBD的组合接触的步骤可以包括向受试者施用THC和CBD的组合。
在一些实施例中，本发明提供了下调CXCL8以及上调CCL5、CNR2和ADRB2的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更多。所述组合可以按本文所述的任何高CBD组合物的形式提供。使细胞与THC和CBD的组合接触的步骤可以包括向受试者施用THC和CBD的组合。
在一些实施例中，基因调控的方法也是用于治疗疼痛、炎症和/或焦虑的方法。
生物标志物
本发明的一个方面提供了影响与炎症相关的生物标志物的浓度的方法。所述生物标志物可以选自粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-15(IL-15)或其组合。
在一些实施例中，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触。使细胞与THC和CBD的组合接触的步骤可以包括向受试者施用THC和CBD的组合。
所述THC和CBD的组合可以按本文所述的任何液体组合物的形式提供。
当将THC和CBD的组合与细胞接触和/或向受试者施用时，GM-CSF的浓度降低。因此，可以通过本文所述的任何液体组合物提供组合。在一些实施例中，在施用THC和CBD的组合后，GM-CSF的最大峰血浆浓度可以高达约180pg/ml、150pg/ml、120pg/ml、100pg/ml、80pg/ml或70pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，GM-CSF CSF的最小峰血浆浓度可以是至少约20pg/ml、30pg/ml或40pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，GM-CSF CSF的峰血浆浓度可以处于从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约20pg/ml至约180pg/ml或约40pg/ml至约80pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，GM-CSF的峰浓度可以在施用后约7、6、5、4、3或2小时内发生。
在一些实施例中，提供了降低白介素15的浓度的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。所述组合可以按本文所述的任何高THC液体组合物的形式提供。
在一些实施例中，提供了降低白介素15的浓度的方法，所述方法包括向受试者施用THC和CBD的组合，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。所述组合可以按本文所述的任何高THC液体组合物的形式提供。
在降低IL-15浓度的这些方法中，在施用THC和CBD的组合后，IL-15的最大峰血浆浓度可以是高达约150pg/ml或100pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的最小峰血浆浓度可以是至少约20pg/ml、40pg/ml或50pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的峰血浆浓度可以处于从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约20pg/ml至约150pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的峰血浆浓度可以在施用后约4.5小时内达到。
在一些实施例中，提供了增加白介素15的浓度的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更多。所述组合可以按本文所述的任何高CBD组合物的形式提供。
在一些实施例中，提供了增加白介素15的浓度的方法，所述方法包括向受试者施用THC和CBD的组合，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。所述组合可以按本文所述的任何高CBD组合物的形式提供。
在增加IL-15浓度的这些方法中，在施用THC和CBD的组合后，IL-15的最大峰血浆浓度可以高达约1500pg/ml、1000pg/ml、750pg/ml、650pg/ml或600pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的最小峰血浆浓度可以是至少约250pg/ml、300pg/ml、350pg/ml、400pg/ml、450pg/ml或500pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的峰血浆浓度可以处于从这些最小量中的任一项至这些最大量中的任一项，例如从约250pg/ml至约1500pg/ml。在施用THC和CBD的组合后，IL-15的峰血浆浓度可以在施用后约4.5、4或3.5小时内达到。通过比较，在仅施用媒介物后，IL-15的峰血浆浓度在施用后约5小时处达到约220pg/ml。
本文所述的治疗方法的一些实施例进一步包括影响GM-CSF和/或IL-15的浓度。
根据本领域已知的任何技术可以确定取自受试者的样品中生物标志物的浓度。
实例
通过一个或多个非限制性实例进一步描述本发明。本发明所属领域的技术人员将理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下做出许多修改。
实例1-向犬施用含大麻素的组合物
该实例描述了向犬单次口服给药包含不同THC和CBD比的两种组合物。施用后，从动物身上采血，并且观察它们的不良作用或毒性的迹象。
在该研究中以不同的量施用两种组合物(IVP1和IVP2)。如本研究中的情况，可以将IVP分开施用，或可以将它们混合在一起以提供固定比的THC和CBD，如实例2和3所述。
调查研究的兽医学产品1(IVP1)：
组合物-MCT油中4.75mg/ml THC；配制品类型-油基溶液
调查研究的兽医学产品2(IVP2)：
组合物-MCT油中4.58mg/ml CBD；配制品类型-油基溶液
对照兽医学产品(CVP)：
组合物-中链甘油三酯(MCT)油，无活性成分；配制品类型-载体油
设计
使十一(11)只犬接受单次伴随口服剂量的大麻二酚(CBD)和四氢大麻酚(THC)油或安慰剂。
-将三(3)只犬作为对照，并且接受不含活性成分的MCT油(治疗组1)。
-向治疗组2给药2:1比例的IVP1和IVP2，向四(4)只犬施用所述IVP1和IVP2。
-向治疗组3给药1:2比例的IVP1和IVP2，向四(4)只犬施用所述IVP1和IVP2。
剂量计算
如下表2所示，根据第-1天的体重对犬进行治疗。在第0天之前计算剂量体积，以提供基于实际犬体重的靶剂量(以mg/kg体重计)和基于分析证书(Certificates ofAnalysis)的IVP活性成分组成。
表2：治疗方案
Figure BDA0002931004890000371
监测和记录不良事件
在整个研究期间，对每只研究动物进行严密监控，以观察以下临床体征(与THC毒性相关)的发展：镇静/嗜睡、躁动/不自主运动、运动问题、眼变化、咳嗽、流口水/流涎、作呕/干呕、呕吐、腹泻、失禁、心率、呼吸率、温度变化和/或任何其他异常观察。
严重的不良事件(SAE)被定义为致命或威胁生命、或导致重大残疾或无能力或先天性异常/出生缺陷、或导致永久或长期需要常规预防性措施以外的专业干预和常见的急救的体征的AE。如果报告了以下反应之一，则将AE自动归类为严重不良事件：休克(所有休克反应，不论起源于什么：循环性，过敏性)、昏倒、晕厥、免疫介导的疾病(针对不良反应)、痉挛/抽搐、失明、耳聋、麻痹/轻瘫、恶性瘤形成(包括施用部位处的肉瘤)、呼吸窘迫、呼吸困难、呼吸暂停、重要器官衰竭(功能完全丧失)、子宫出血、子宫破裂、或宫腔积脓、腹膜炎、糖尿病(如果有，报告为SAR)和/或注射部位反应伴随全身受累和活动度降低。
取血样
使用22号针头和5mL注射器，在每种药物浓度采样时间点处从每只动物采集大约5mL的血液样品。
结果
表3：施用的实际剂量
犬编号 第-1天的体重(kg) THC剂量(mg) CBD剂量(mg) 治疗组
犬1 17.6 4.22 2.11 2
犬2 17.6 4.22 2.11 2
犬3 20.7 4.97 2.48 2
犬4 18.2 4.37 2.18 2
犬5 21.2 2.54 5.01 3
犬6 18.6 2.23 4.46 3
犬7 16.1 1.93 3.86 3
犬8 18.5 2.22 4.44 3
犬9 17.7 0 0 1
犬10 21.1 0 0 1
犬11 20.7 0 0 1
表4列出了CBD的取血样结果，表5列出了THC的取血样结果。还对表4和表5的数据点进行作图，并且将这些图在图1-16中列出。
表4：CBD施用和采样的结果
Figure BDA0002931004890000381
Figure BDA0002931004890000391
表4中提供的CBD采样的结果表明受试者犬对CBD的摄取良好。在所有受试者中在0.67和1.5小时之间达到第一峰或Cmax。CBD的第一峰浓度范围在从5ng/mL至69ng/mL。施用后12小时在受试者中记录的CBD的最低水平为0.23ng/mL CBD。施用后12小时记录的最高水平为0.88ng/mL。施用后16和32小时在受试者中记录的CBD浓度为0.26ng/mL和0.28ng/mL。计算的AUC0-∞为0.339ng.小时/mL，并且终末半衰期(t1/2)为12.6小时。
表5：THC施用和采样的结果
Figure BDA0002931004890000392
Figure BDA0002931004890000401
表5中列出了在受试者血液血浆级分中记录的THC水平。在所有受试者中在0.67和1.5小时之间达到第一峰或Cmax。CBD的第一峰浓度范围在从19ng/mL至71.3ng/mL。施用后12小时在受试者中记录的CBD的最低水平为0.67ng/mL CBD。施用后12小时记录的最高水平为1.91ng/mL。施用后16和32小时在受试者中记录的CBD浓度为0.34ng/mL和0.28ng/mL。计算的AUC0-∞为0.6ng.小时/mL，并且半衰期(t1/2)为18.4小时。
表6：临床观察
Figure BDA0002931004890000402
Figure BDA0002931004890000411
施用后观察犬类受试者12小时。目视观察的结果记录在表6中。针对每个受试者记录的身体心率和呼吸率已包含在表7中，并且每个治疗组的平均值分别在图17和18中针对心率和呼吸率作图。
应该注意的是，在整个12小时观察中，没有证据表明施用CBD/THC会导致任何不良作用。有两只犬表现出红眼，然而对照(TG3)中的两只也表现出相同的体征，因此眼发红不归因于IVP施用。重要地，在施用中接受CBD和THC的第二和第三治疗组中未发现任何运动问题。尽管存在一些放松或轻度镇静的迹象，但犬似乎没有任何行为能力丧失，并且当它们起立准备移动时也不会行走艰难。没有观察到胃肠道反应(例如腹泻或呕吐)，并且所有动物都健康并且在施用后第二天正常进食。
表7：心率和呼吸率数据
Figure BDA0002931004890000412
Figure BDA0002931004890000421
图17中绘制的心率数据显示，在对照组(TG1)和(TG2)之间几乎没有差异，但似乎与TG3相比的确存在差异，其中TG3接受的THC剂量比之后接受的CBD剂量低。在图18的呼吸率图中，TG3还显示为比TG1(对照)和TG2(CBD增加)略低的水平。这表明在研究中观察到的大麻素的浓度在施用后长达12小时具有生理作用。
实例2
所述组合物包含在载体油中的THC和CBD的组合。将THC和CBD按已知浓度制备成在MCT油中的单独储备溶液，然后将每种储备溶液的一部分混合至预先确定的所希望的2:1THC与CBD比例。这一比例的大麻素在MCT油中。制备三种组合物，其包含的THC和CBD的组合浓度为0.9％(即，约0.6％THC和约0.3％CBD)、1.9％和2.7％。
实例3
所述组合物包含在载体油中的THC和CBD的组合。将THC和CBD按已知浓度制备成在MCT油中的单独储备溶液，然后将每种储备溶液的一部分混合至预先确定的所希望的1:2THC与CBD比例。这一比例的大麻素在MCT油中。制备三种组合物，其包含的THC和CBD的组合浓度为0.9％(即，约0.3％THC和约0.6％CBD)、1.9％和2.7％。
实例4
本实例描述了对实例1所述的研究期间采集的血液样品进行的基因表达分析。对治疗前、施用后1.5h和施用后72h采集的血液样品进行基因表达分析。
对犬抽血并将100μl血液立即添加至经标记的室温RNA保护动物血液管(RNAprotect Animal Blood Tube)中，将所述管封闭并轻轻颠倒8-10次，然后在15℃-25℃下直立储存2小时，然后在-20℃冰箱中储存，并且然后在干冰上装运。
使用RNeasy保护动物血液试剂盒(RNeasy Protect Animal Blood kit)，在RNA保护动物血液管(RNAprotect Animal Blood tube)中收集来自全血的RNA萃取物。将RNA以30μl洗脱到艾本德(eppendorf)管中，并用石蜡膜密封。
通过使用Nanodrop分光光度计测量样品的浓度和OD260/280值，并且使用AgilentRNA TapeScreen检查RNA质量，从而确定RNA质量和浓度。
为了进行完整性测量，使用Agilent TapeStation，用RNA ScreenTape对1μl的总RNA进行分析。
使用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结合微阵列分析(用RT2分析器PCR阵列(RT2 Profiler PCR Array))进行基因定量。
将实验性RNA样品转化成第一链cDNA。然后，将cDNA模板与即用型RT2 qPCRMaster Mix混合，并等分到含有预分配的基因特异性引物组的同一板的每个孔中。在qPCR后，用ddCt方法确定相对表达。结果在图20-24中示出。
使用QIAGEN RT2第一链试剂盒(目录号330401)进行互补的脱氧核糖核酸(cDNA)合成。或者，对于含有低RNA产率的样品，在qPCR分析之前使用RT2 PreAMP反应。
实例5
本实例描述了对实例1所述的研究期间采集的血液样品进行的生物标志物分析。对治疗前、施用后1.5h和施用后72h采集的血液样品进行分析。
使用包含磁珠的磁珠板测定生物标志物浓度，所述磁珠装载有针对每种目的生物标志物的抗体。
实例6
该实例描述了如下研究，所述研究涉及多达约45只犬，这些犬的性别大致均衡，处于不同品种和年龄，在任何一个或多个关节处患有骨关节炎(OA)，导致活动度受损和/或疼痛迹象。
治疗分配是双盲的、安慰剂对照的、和随机化的。犬被兽医诊断为患有OA。犬一直处于合理稳定的治疗方案中(已列出治疗方案)。在研究之前和研究期间，给犬饲喂相同的、进行记录的饮食类型和量。在研究之前和研究期间，持续2周不使用其他油基OA治疗或支持疗法。
患有OA的犬被分为四组。所有者和临床医生都不会知道增补的实际情况。
1.治疗组1(安慰剂组-15只犬)每天两次口服接受橄榄油，按1ml/10kg的剂量每天两次，持续八周。
2.治疗组2(CPAT01-0.75X组-15只犬)口服接受CannPal AUS；CPAT01调和油，按0.54mg/kg的剂量每天两次(在食物上)，持续八周。
3.治疗组3(CPAT01-1.5X组-15只犬)口服接受CannPal AUS；CPAT01调和油，按1.08mg/kg的剂量每天两次(在食物上)，持续八周。
4.治疗组4(CPAT01-2.5X组-15只犬)口服接受CannPal AUS；CPAT01调和油，按1.8mg/kg的剂量每天两次(在食物上)，持续八周。
在所有者的书面同意下，犬可以纳入。所有程序均符合适用的动物伦理委员会(AEC)要求以及澳大利亚动物保护法律和法规。
所有者定期(例如，在第-2、0、2、4、6和8周)填写有效的所有者问卷调查：犬类简易疼痛量表(Canine Brief Pain Inventory，CPBI)、犬类骨科指数(Canine OrthopaedicIndex，COI)和哈德森活动量表(Hudson Activity Scale)(或类似问卷调查)，以评估患有OA的犬的进展或恶化情况。在约第0、4和8周的兽医访视包括兽医主观评价和取血样。对血液样品进行CBC/生物化学测试，以监测肝酶和肾酶(尿素、肌酐、ALP、ALT)和白细胞。还在每次访视时对血液进行血浆大麻素(CBD和THC)测定。
序列表
<110> 康宝动物治疗有限公司（CannPal Animal Therapeutics Limited）
<120> 大麻素组合物以及使用大麻素组合物的治疗方法
<130> P111006.PCT
<150> AU 2018902143
<151> 2018-06-15
<150> AU 2019901525
<151> 2019-05-03
<160> 5
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 5341
<212> DNA
<213> 家犬（Canis familiaris）
<400> 1
taactcagga agtttaaaag tcatacaaaa attaggtggc tgaaccagag tttgaaccta 60
gatgctttta tctactacac atacactgct tactttccca ttaaatacca cttcatccca 120
ccccaaccaa gtagtcctag ggaaccactt cctggagcat agacatatct tcattcacct 180
gtccttgagc aatgtcttta tgtagaatgt gctgtttttc tccattttct cattcttcaa 240
cattttgctc acactgctta tggaatattc tgtccttatg cccttgttga aattaatcta 300
ttagagccac ttatctgtct tcaataaaag tggttgacaa gattgccttc tctatcattg 360
caacacatgt aatttaccta aagaaatgac cttgccctaa aaaagtaatc ataaatgacc 420
ttactctaac aaccgtcaga tagtacaaca ataaatttat ttatacatgg aaaagtacaa 480
ctgataatgt atcaaagaag cttgaatatt taacaaatat ttttaaacat gttttaaaac 540
acatatgttt taaataaaat gaattaaatc atgttaaaga tcaaatagaa cttcgaacat 600
gccaaaattc tgatgagaca aatttgatga tgactcactt ctgccctcaa agggcaggag 660
gttggttgca tattgtggaa tttcctctga cataattgaa gaatgaggct gcatattctc 720
tgctgctctg aataatataa aatgccacag aagctctcca tccaacagaa gtcctttggg 780
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tgtgtaaaca tgacttccaa gctggctgtt gctctcttgg cagcttttgt cctttctgca 900
gctctctgtg aaggtaagca gacttttctg gtttacagag ttttcctgtg tctgaatgtg 960
atcctcagat agcaagatta cccttaatgc tttaataaca aatatccttt ttattcaagt 1020
aaaggaaata atatttgcag tcacttaaca ttaaattgaa gctttgttta gattttatct 1080
ctacaacact tagaaaagta taaagtttaa ttaatataga catcttgttc ctattttccg 1140
tgctctatag gatgtttaca tataaatgca ttaatataaa tctatagagc gtatcttttt 1200
aaaaagatat atttatttat ttttagagag tgagagaaag gtgggggggt agagacggag 1260
agagagagag agagagagag agagagagaa tttcaagcag actcccagct gagtgtggag 1320
cccaatgtgg ggcccaatct aaccaccctg agatcatgac ctgagcctaa atcaggtgtg 1380
agatgcttaa ccaactgagc gccctagagt atatcttatt agggccacaa ttactcatat 1440
tatttattaa tattgagcag ataactcagg taattttact acatgtactg ttttattgac 1500
gaacttcaga caactatcat ttcctgtttg gtttaaagac aacaccccaa caaattgtaa 1560
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cttacatttt tcttttttct gctaagcatt aaagattttg ctaagatctg agacatcttt 1680
gtgcaatttc tattgctatt aattctttcc aaaggcaatt tttctgttac tgaattttag 1740
gttatatcct ataaatagca ttgtggtatc atagaagatt acacaatatc aagtagaaaa 1800
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caatcaatgt tgtcattaat gacagcattt ttttttttaa ctgaatttag gggctaggag 1920
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tcagttcaga acttcgatgc cagtgtataa aaacacactc cacacctttc catcccaaat 2160
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gctaaatact gatttagtca tatctctttt atttcagtgt aaagcttttc aatggaaatg 2520
aggtgtgcct ggaccccaag gaaaaatggg tacaaaaggt tgtgcagata tttctaaaga 2580
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atgttagcct ataaatttcc tcttgctgct ggaagtctac tcttttggaa atttgcctct 2700
ttaattaaaa aacaaaaaaa tagtagcaat agtgagtttg ttgtactcat aactgggaag 2760
accatacatg tcagtttgtc cagtgaagtc tgggcttatg cctgtgccct gtatcagtga 2820
tatggttccc tttcattctc agaagtgttc tggtttagat gataatttat ctttctactc 2880
ataattgaaa attagagtat ttctaacaca tgaatatctg agattattta tttccatagt 2940
atatatattt tcaagaatga tactttcctc cttattagac atttaattaa aatttgtttt 3000
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ggccaggatg catgagtccc ttttcaacct tgccttggtc tcttctttat tcctcaactg 3420
gagaaaaggt atcagcaagc atcctacctc acagaaatat gaggacatat ggaagcactt 3480
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ttatgtattt atttaagaaa caaatatggg aatatctgtg cataaatttg gaaaaatagg 3600
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atttagtgat gttatattaa agaactattt tgtttttttt ttttttaaag aactattttg 3720
aacaaggttg ctagatttag caaaattaaa aatgagatac tcatttaatt ttgatttcaa 3780
acaataattt tttattatat tattatttat ctgaaatttc aattgaaccg caatcctact 3840
tttgatactc ctagtcttgt ctattcactg acagccttgt tcaatgctgg gttgaatgat 3900
cagaaccctg agttagaatt gtttctccaa agagcaaaaa ctcgacaagc aatattaatg 3960
aagtaatttc ttgccagtta aaatttgtat atttataata tacaaataga ttcttataat 4020
tttacttatt gtgttcttaa acactgactt ttttgacttt aagatgcttt tatatgttcc 4080
ccaagagatt ttttttccta ctatttttga tgctatggaa atagaaatgt aaaatattta 4140
aaataaaact tattgtcaaa gtcatcaggt gtttgtcttt ctttggtagt tattgattta 4200
tttttttaca ttaaaaataa tattttgagt tgaaaagcat agatgcttgg ggttcctggg 4260
tggcttagtc agttaagtgt ttgactcttg gtttcagctc aggccacgat ctcagaatcc 4320
tgagacccag ccctgcatag atttccacac ttggcatgga ggctgcttgg gattctcact 4380
ctcccttggt ctctatcccc tctcctgttc tctctctgtc tctctcaaat aagtaaataa 4440
agtctaataa acaaacaaaa atgcttctct ttgtgttttt tatattatgt gggaaattat 4500
aaacctttgt aaaaaaacaa atttttttca gagatgggtt acaaacagta gtcctttcca 4560
tagagtgatg gaaattttct caactcccca attgtattcc attttgctaa taagagtgac 4620
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gacacctatg agataaggaa ttttaaatat gattaaagac caagtatatt tataaataag 4800
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ttttataaca gagtagacac tgctgaaaaa aaaaaaaaat cagagatcca ggaactaaaa 4920
ccaaagaact ttatctggag ttcacatcag agagatatag atgtaatgaa tagagaaaaa 4980
caatgagaag acatgggaga tttagggata aggtcttact atatctagtt ggatttttcc 5040
aggcagagga gagaggaaag ggttaggaac atttgaagtg acaatggcta aaaacgtacc 5100
acgtgaagaa gaataacaac tcatagtttc aagaaatcca acttatcaat gcctaacttt 5160
acatttctgg tcaagaaaga tggatcttag aactctgatt cactttaatc cacctcccag 5220
ctcatttact aatgctttta gttattttaa gtccactttc ttttaaagct ctacaaagtt 5280
gagaggaaga gagtcctctc ctatttttct cactcattgg ttcatattgc aacctgcttt 5340
t 5341
<210> 2
<211> 33741
<212> DNA
<213> 家犬
<400> 2
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atttttattt atttatgata gtcacagaga gagaaagaga ggcagagaca caggcagaga 120
gaagcaggct ccatgcaccg ggagcccgac gtgggaatcg atcctgggtc tccaggatcg 180
cgccctaggc caaaggcagg tgccaaaccg ctgcgccacc cagggatccc tgtttgtttg 240
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aaaaattaaa aaaaataaaa gagccactaa aaaaataagt aaataaaaat actattcttg 14280
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atactacttt tacactgata agttttcttt aaatgtgtgt gtttgtttct ttttaaagta 28320
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ttttgtttcc tgttgcagga cacatctaat ggtcatgaac tccctcagtt tttgttacct 28620
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<212> DNA
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tcctagactc ctgagctcca tatgccctta gctctccagg ttgcgtacat atttctgtgg 6300
gggttaatat gcacacagat ctgcttctgg cttggagccc tacgattcaa cagaagagga 6360
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<212> DNA
<213> 家犬
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caggtcgtga tcccagggtc atgggatcaa ggcctgcttc gtgctccgaa ctcagttgag 12720
tctgcttgtt tttcttcctc agcttctgcc ccacttgctc tctctctctc tctctctctc 12780
tctctctctc tctcaaataa ataaatagat ctaaaaaaaa aaaaacaaag aaacactgag 12840
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tctcttacta agtcgccggg tttctactct gcctctacta ccaggggccc ctctccactc 18540
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tatttattat ctgtgtccac tcactagagg gtaaactgca ggagggctgg ggttcgcctc 18840
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aaagaaacca ataaaaacca ctcatacttc ctccttctag atattacatc tgttaatatt 19020
ttggagtatt tctttttttt cagatctttt tttctcccta ggtacatgta ggacatatat 19080
atatatatat atatattaga tatataatat ctaataggaa ataaaattat attaaattgt 19140
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cttttaaaat aatattttaa atgctgcata gattacatac atatatcaaa attataaagc 19260
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aaccattcta tttttttaaa aaagatttta tttatttgag agagagaaaa gcagagaaag 19380
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gtttcaatga cttcctgttc gaaagataaa gtactctaag tgttcacaac tgagtagagt 19800
ccatggagaa acggaggcca ggccctgtta catctagtgc atactcttaa ctcaggggtg 19860
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ttcttttttt tttttttttt tttttttaat attttgtgat gtcgaagatc actttttttt 20400
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gggttttttc ctccaaacaa gctattttgt gga 26613

Claims (20)

1.一种液体组合物，所述液体组合物包含Δ9-四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)的组合以及口服递送系统。
2.如权利要求1所述的液体组合物，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更多。
3.如权利要求2所述的液体组合物，其中THC:CBD的重量比为约1:约2。
4.如权利要求1所述的液体组合物，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。
5.如权利要求4所述的液体组合物，其中THC:CBD的重量比为约2:约1。
6.如权利要求1-5中任一项所述的液体组合物，其中THC的浓度高达约6.5％。
7.如权利要求1-6中任一项所述的液体组合物，其中CBD的浓度高达约7.5％。
8.如权利要求1-7中任一项所述的液体组合物，其中所述口服递送系统包含脂肪酸组分。
9.如权利要求1-8中任一项所述的液体组合物，其中所述口服递送系统包含中链甘油三酯(MCT)油。
10.一种食物产品，所述食物产品包含如权利要求1-9中任一项所述的液体组合物。
11.一种治疗疼痛、炎症和/或焦虑的方法，所述方法包括向有需要的受试者口服施用有效量的如权利要求1-9中任一项所述的液体组合物或如权利要求10所述的食物产品。
12.一种控制受试者的心率的方法，所述方法包括向所述受试者口服施用有效量的如权利要求1-9中任一项所述的液体组合物或如权利要求10所述的食物产品。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述受试者的平均心率在施用后降低至少约2h。
14.如权利要求1-9中任一项所述的液体组合物或如权利要求10所述的食物产品在制造用于治疗疼痛、炎症和/或焦虑的药物中的用途。
15.如权利要求1-9中任一项所述的液体组合物或如权利要求10所述的食物产品在制造用于控制受试者的心率的药物中的用途。
16.一种下调趋化因子(C-C基序)配体5基因(CCL5，如SEQ ID NO:4中所示)的表达和/或下调小脑变性相关蛋白2基因(CDR2，如SEQ ID NO:2中所示)的表达和/或上调大麻素受体2基因(CNR2，如SEQ ID NO:3中所示)的表达和/或上调白介素8基因(CXCL8，如SEQ IDNO:1中所示)的表达和/或上调肾上腺素能受体β2基因(ADRB2，如SEQ ID NO:5中所示)的表达的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1或更多:1。
17.一种下调白介素8基因(CXCL8，如SEQ ID NO:1中所示)的表达和/或上调趋化因子(C-C基序)配体5基因(CCL5，如SEQ ID NO:4中所示)的表达和/或上调大麻素受体2基因(CNR2，如SEQ ID NO:3中所示)的表达和/或上调肾上腺素能受体β2基因(ADRB2，如SEQ IDNO:5中所示)的表达的方法，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触，其中THC:CBD的重量比为1:1.2或更高。
18.如权利要求17所述的方法，所述方法进一步包括在将所述细胞暴露于所述THC和CBD的组合后，下调CDR2长达约70小时。
19.一种影响与炎症相关的生物标志物的浓度的方法，所述生物标志物选自粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-15(IL-15)或其组合，所述方法包括使细胞与THC和CBD的组合接触。
20.一种试剂盒，所述试剂盒以分开的部分包含：
(a)Δ9-四氢大麻酚(THC)和口服递送系统；以及
(b)大麻二酚(CBD)和口服递送系统。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11759447B1 (en) 2019-06-26 2023-09-19 RCR BioPharma Compound and method for treating diseases and disorders
WO2022251912A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 Emyria Use of cannabinoid combination for the treatment of irritable bowel syndrome-related psychological distress
WO2022251916A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 Emyria Use of cannabidiol for the treatment of irritable bowel syndrome-related psychological distress
WO2023034568A1 (en) * 2021-09-03 2023-03-09 Yale University Specific therapeutic medical marijuana doses for stress and pain

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016092539A1 (en) * 2014-12-07 2016-06-16 One World Cannabis Ltd Use of cannabis to treat migraine
WO2017007833A1 (en) * 2015-07-06 2017-01-12 George Marc Healthful supplements
CA3006182A1 (en) * 2015-11-24 2017-06-01 Constance Therapeutics, Inc. Cannabis oil compositions and methods for preparation thereof
CA3054392A1 (en) * 2016-02-24 2017-08-31 Cannabics Pharmaceuticals Inc. Cannabinoid compositions, methods of manufacture and use thereof

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002064109A2 (en) * 2001-02-14 2002-08-22 Gw Pharma Limited Mucoadhesive pharmaceutical formulations
CH695661A5 (de) * 2001-03-06 2006-07-31 Forsch Hiscia Ver Fuer Krebsfo Pharmazeutische Zusammensetzung.
EP1542657B8 (en) * 2002-08-14 2012-03-14 GW Pharma Limited Cannabinoid liquid formulations for mucosal amdinistration
GB2414933B (en) * 2004-06-08 2009-07-15 Gw Pharma Ltd Cannabinoid compositions for the treatment of disease and/or symptoms in arthritis
GB2439393B (en) * 2006-06-23 2011-05-11 Gw Pharma Ltd Cannabinoids for use in the treatment of neuropathic pain
AU2015274698B9 (en) * 2014-06-11 2017-03-09 Poviva Corp. Food and beverage compositions infused with lipophilic active agents and methods of use thereof
CA2965493C (en) * 2014-10-21 2021-12-07 United Cannabis Corp. Cannabis extracts and methods of preparing and using same
CA2968929A1 (en) * 2014-11-26 2016-06-02 One World Cannabis Ltd Synergistic use of cannabis for treating multiple myeloma
AU2015360349B2 (en) * 2014-12-12 2020-10-08 Ojai Energetics Pbc Microencapsulated cannabinoid compositions
AU2016276563A1 (en) * 2015-06-11 2018-01-04 One World Cannabis Ltd Novel cannabinoid combination therapies for multiple myeloma (MM)
CN106074493A (zh) * 2016-06-14 2016-11-09 云南瑞酚生物科技有限公司 一种大麻提取物在制备治疗痛风性关节炎药物中的应用
EA201892396A1 (ru) * 2016-12-02 2019-04-30 Ресептор Лайф Сайенсиз, Инк. Быстродействующие растительные лекарственные соединения и биологически активные добавки
AU2018239222A1 (en) * 2017-03-18 2019-09-26 Thomas A. Asquith Pet food including cannabidiolic acid
AU2018333282A1 (en) * 2017-09-15 2020-03-19 Zelira Therapeutics Operations Pty Ltd Composition and method for treating autism
AU2018377175A1 (en) * 2017-11-30 2020-04-16 Canopy Growth Corporation Liquid dosage forms, methods of making and use

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016092539A1 (en) * 2014-12-07 2016-06-16 One World Cannabis Ltd Use of cannabis to treat migraine
WO2017007833A1 (en) * 2015-07-06 2017-01-12 George Marc Healthful supplements
CA3006182A1 (en) * 2015-11-24 2017-06-01 Constance Therapeutics, Inc. Cannabis oil compositions and methods for preparation thereof
CA3054392A1 (en) * 2016-02-24 2017-08-31 Cannabics Pharmaceuticals Inc. Cannabinoid compositions, methods of manufacture and use thereof

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