CN112662587A - 海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 - Google Patents
海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112662587A CN112662587A CN202110059068.7A CN202110059068A CN112662587A CN 112662587 A CN112662587 A CN 112662587A CN 202110059068 A CN202110059068 A CN 202110059068A CN 112662587 A CN112662587 A CN 112662587A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- marine
- preservation
- aquatic products
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一种海洋植物乳杆菌SS‑128及其在水产品保鲜中的应用，属于食品保鲜技术领域，该菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为CGMCC No.17003。本发明中的植物乳杆菌SS‑128来源于海洋冷水鱼肠道，在低温冷藏条件下生长繁殖迅速，抑菌能力强，能降低水产品挥发性盐基氮水平，抑制水产品腐败变质，延长水产品保质期。本发明提供的海洋植物乳杆菌SS‑128可适用于水产品生物保鲜领域。
Description
技术领域
本发明属于食品保鲜技术领域，具体涉及一种海洋植物乳杆菌及其在水产品保鲜中的应用。
背景技术
传统的化学防腐剂如苯甲酸钠、亚硝酸钠、双乙酸钠的毒副作用已引起人们日益重视。因此,寻找安全无毒的生物防腐剂和生物防治技术已成为人们关注的热点。植物乳杆菌广泛存在于人体肠道与食品中，在发酵食品生产与肠道益生作用中起关键作用。近年来进一步的研究表明，植物乳杆菌除具有发酵和益生作用外，还具有良好的防腐性能。有研究表明，植物乳杆菌的产生的有机酸可抑制奶酪和鸡肉中单增李斯特菌和沙门氏菌的生长，从而保持食品品质。采用植物乳杆菌保鲜切分果蔬，不但能有效抑制果蔬表面细菌的增殖，而且对切分果蔬的风味、口感等无明显影响。
我国也有多项专利表明，植物乳杆菌和干酪乳杆菌等具有抗菌和抗炎的作用。专利201510232204.2公开了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum AB-1)，该株菌对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、弗氐志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单细胞李斯特氏菌等具有抑菌活性，可防治甜瓜枯萎菌和甜瓜疫霉菌。专利202010424344.0公开了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei zhang)，该株菌具有调节肠道菌群、提高机体免疫力、防治和修复慢性胃肠炎及缓解腹泻及腹部不适的功能。
由于食品腐败变质具有品种特异性，食品种类不同，引起食品腐败的微生物也各异。一般，果蔬腐败菌为真菌类，如扩展青霉、灰霉菌、黑霉菌和炭疽菌等，肉蛋奶主要腐败菌为假单胞菌，而冷藏水产品的主要腐败菌为希瓦氏菌、假单胞菌、不动杆菌、气单胞菌等。因此，只有针对食品种类和引起食品腐败的微生物实施精准筛选和控制，才能起到更好的防腐保鲜效果。
虽然植物乳杆菌具有一定的抑菌性能，但多用于植物性产品或食品，而对水产品的保鲜作用研究报道较少；从分离源头看，现有植物乳杆菌多从乳制品和发酵食品中分离得到，而从海洋中分离报道较少。
此外，目前的植物乳杆菌一般在高温和常温条件下生长繁殖迅速，但在冷藏条件下生长缓慢，限制了其在冷藏食品尤其是冷藏水产品中的应用。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一株能在低温冷藏条件下快速繁殖的海洋植物乳杆菌，使其能够应用于冷藏食品和水产品的保鲜，以克服现有技术的不足。
本发明所要解决的技术问题，是通过如下技术方案实施的：
从海洋冷水鱼黑头鱼(Sebastes schlegelii)肠道中分离鉴定出海洋植物乳杆菌SS-128，该菌株的保藏名称“植物乳杆菌SS-128”，分类为Lactobacillus plantarum，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2018年12月18日，保藏号编号为CGMCC NO.17003。
所述海洋植物乳杆菌的16s rDNA序列是如说明书序列表所示的核苷酸序列。
所述海洋植物乳杆菌SS-128在水产品保鲜中的应用
所述海洋植物乳杆菌SS-128作为水产品保鲜剂的应用。
由于现有植物乳杆菌多从乳制品和发酵食品中分离得到，而从海洋中分离报道较少，从海水鱼黑头鱼(Sebastes schlegelii)肠道分离具有抑菌性较强的植物乳杆菌还未见报道，因此本发明在本领域中具有首创性。
本发明与现有技术相比，最突出的优点是来源于海洋冷水鱼肠道，在低温冷藏条件下生长繁殖迅速，对水产品腐败菌希瓦氏菌、假单胞菌、不动杆菌、气单胞菌等有很强的抑菌能力。利用本发明提供的海洋植物乳杆菌SS-128产酸、产细菌素的优势和细菌-细菌之间天然的竞争作用，最终抑制水产品中腐败菌的生长，从而达到抑菌防腐、延长水产品保质期、提高水产品品质和安全性的目的。本发明产品经过实验检测，证实本发明产品的抑菌性更高，抑菌效果更好。
附图说明
图1本发明的海洋植物乳杆菌SS-128的分离鉴定流程。
图2本发明的海洋植物乳杆菌SS-128的生长曲线。
图3本发明的海洋植物乳杆菌SS-128对鲟鱼挥发性盐基氮的影响。
图4本发明的海洋植物乳杆菌SS-128对鲟鱼硬度的影响。
图5本发明的海洋植物乳杆菌SS-128对鲟鱼弹性的影响。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
实施例1海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128的分离纯化
海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128的分离依据分离纯化流程进行(图1)。简要步骤如下：
在无菌条件下，将挑取的黑头鱼肠道用无菌剪刀充分剪碎，取10g置于90mL无菌生理盐水中，匀浆后在含有1％CaCO3的MRS培养基上划线，30℃下培养48h。挑取有溶钙圈的白色菌落进一步分离、纯化，挑取单菌落进行革兰氏染色和过氧化氢酶实验。选取希瓦氏菌、假单胞菌和不动杆菌为指示菌，采用牛津杯法对分离菌株的抑菌活性进行初步筛选。取4mL指示菌菌液(浓度约为1×106-107CFU/mL)至200mL固体LB培养基中，倒板，向牛津杯中加入200μL发酵上清液，4℃下预扩散3h，30℃培养18h，测定抑菌圈直径。
将抑菌直径最大的菌株进一步进行16S rDNA鉴定，采用16S rRNA基因通用引物，27f：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1495r：5’-CTACGGCTACCTTGTTACG A-3’。PCR反应体系(25μL)：2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，10μmol/L引物各0.5μL，模板0.5μL，ddH2O 11μL。PCR反应条件：94℃变性5min；94℃变性1min、42℃退火30s、72℃延伸1.5min，30个循环；72℃后延伸10min。对所得PCR产物送至华大基因公司测序，将结果与NCBI中收录的其他菌株序列进行比对分析，并运用MEGA5.1软件，采用Neighor-joining法构建系统发育树。结果表明该菌株与植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ATCC 14917在同一分支上，同源性达到100％，确定该株菌为植物乳杆菌，编号为SS-128。
海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128于2018年12月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号编号为CGMCC NO.17003，16S rDNA序列为：
tagagcccttagcggctggttcctaaaaggttaccccaccgactttgggtgttacaaactctcatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccgacttcatgtaggcgagttgcagcctacaatccgaactgagaatggctttaagagattagcttactctcgcgagttcgcaactcgttgtaccatccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtctcaccagagtgcccaacttaatgctggcaactgataataagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtatccatgtccccgaagggaacgtctaatctcttagatttgcatagtatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgtagcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagccttgcggccgtactccccaggcggaatgcttaatgcgttagctgcagcactgaagggcggaaaccctccaacacttagcattcatcgtttacggtatggactaccagggtatctaatcctgtttgctacccatactttcgagcctcagcgtcagttacagaccagacagccgccttcgccactggtgttcttccatatatctacgcatttcaccgctacacatggagttccactgtcctcttctgcactcaagtttcccagtttccgatgcacttcttcggttgagccgaagctttcacatcagactttaaaaaaccgcctgcgctcgctttacgccataatccggacacgcttgccacctacgtattaccgcgctgctgcacgtagtagcgtggctttctgtaagtacggtccatactgacagtactctcagatatgttcttcttacacagagtttacgag
实施例2海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128的生理生化鉴定
采用光密度法测定该菌株生长曲线，将具有强抑菌性的菌株按照1％接种量接种于MRS液体培养基中，在4℃下静置培养，以MRS培养基作为空白对照，每隔3d测1次，分别测定培养液在600nm下的光密度值(OD600)，每组三个平行，以OD值大小判断各菌株的低温条件下生长情况。结果表明，该菌在4℃低温条件下生长迅速(图2)，
依照《伯杰氏细菌鉴定手册》对菌株SS-128进行初步鉴定，结果表明菌株SS-128呈杆状，革兰氏染色阳性，该菌可利用麦芽糖、纤维二糖、蔗糖、菊糖、乳糖、七叶苷、水杨苷、山梨醇、甘露醇等，具体结果见表1。
表1植物乳杆菌SS-128的生理生化鉴定结果
实施例3海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128对希瓦氏菌、气单胞菌的抑菌活性
挑取海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128菌落接种于MRS肉汤，30℃条件下过夜培养，低温离心过滤，然后将该上清与LB肉汤配制成含9％植物乳杆菌SS-128无菌上清的培养基。将希瓦氏菌、气单胞菌过夜活化，在30℃培养过夜，分别取1％的希瓦氏菌、气单胞菌过夜培养物接种于所制备的含物乳杆菌SS-128上清液的培养基中，在30℃下培养24h后，测定抑菌圈直径，以相同pH培养基作为对照。结果表明，植物乳杆菌SS-128对水产品腐败菌希瓦氏菌、气单胞菌具有极强的抑菌活性，培养24h后，海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128无菌上清液对两种菌的抑菌圈直径分别达到17.8和24.3mm。
表2植物乳杆菌SS-128的抑菌活性
实施例4海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128对鲟鱼的保鲜效果
鲜活鲟鱼运送到实验室后，切开，去头，洗涤和切割成约10克的鱼片，将样品随机分为2组(每组10.0±0.2kg)，三次重复。对照组(未接种)，实验组使用本发明产品(喷洒1×107CFU/g的海洋植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128菌液)处理，所有样品独立包装于真空包装袋中，并置于4±1℃低温冷藏箱中冷藏贮存12d，每隔2d随机取样进行相关指标测定。
依据国标GB2733-2015《鲜、冻动物性水产品卫生标准》对实验样品的感官品质进行评价，结果表明，使用本发明产品后，鲟鱼色泽、气味、组织状态明显改善，新鲜鲟鱼评分为20分，对照组在第6-8d感官评价不可接受，此时，鲟鱼肉组织松软、色泽暗淡、有明显的臭味，感官评分低于最低可接受分8.0分。而本发明产品处理的样品在贮藏8d后的感官评分为11.0分，显著高与对照(P<0.05)。
在储藏期间，对照组和本发明产品组的TVB-N值均呈上升趋势，然而本发明产品组的TVB-N增长速度较为缓慢，在贮藏8d后，对照组达23.4mg/100g，达到不可食用状态，而使用本发明产品后，鲟鱼TVB-N值为18.9mg/100g，显著性低于对照组(P<0.05)(图3)。
在储藏期间，对照组和本发明产品组的质构指标中硬度和弹性均呈下降趋势(图4、图5)，然而本发明产品组的弹性和硬度下降较为缓慢，最大限度保存了水产品贮藏品质。
综上所述，本发明分离纯化的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum SS-128在低温条件下生长迅速、抑菌能力强，将本发明产品的菌悬液喷洒在水产品上，可显著降低水产品挥发性盐基氮的升高，组织结构保持较高的硬度和弹性，使用本发明产品后，水产品色泽、气味、风味、组织状态等得到改善，且本发明产品生产工艺简单、绿色环保、作用靶点明确，在食品保鲜领域具有广阔的应用前景。
序列表
<110> 中国海洋大学
<120> 海洋植物乳杆菌SS-128及其在水产品保鲜中的应用
<141> 2021-01-17
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1036
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumSS-128)
<400> 1
tagagccctt agcggctggt tcctaaaagg ttaccccacc gactttgggt gttacaaact 60
ctcatggtgt gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc ggcatgctga 120
tccgcgatta ctagcgattc cgacttcatg taggcgagtt gcagcctaca atccgaactg 180
agaatggctt taagagatta gcttactctc gcgagttcgc aactcgttgt accatccatt 240
gtagcacgtg tgtagcccag gtcataaggg gcatgatgat ttgacgtcat ccccaccttc 300
ctccggtttg tcaccggcag tctcaccaga gtgcccaact taatgctggc aactgataat 360
aagggttgcg ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacaacc 420
atgcaccacc tgtatccatg tccccgaagg gaacgtctaa tctcttagat ttgcatagta 480
tgtcaagacc tggtaaggtt cttcgcgtag cttcgaatta aaccacatgc tccaccgctt 540
gtgcgggccc ccgtcaattc ctttgagttt cagccttgcg gccgtactcc ccaggcggaa 600
tgcttaatgc gttagctgca gcactgaagg gcggaaaccc tccaacactt agcattcatc 660
gtttacggta tggactacca gggtatctaa tcctgtttgc tacccatact ttcgagcctc 720
agcgtcagtt acagaccaga cagccgcctt cgccactggt gttcttccat atatctacgc 780
atttcaccgc tacacatgga gttccactgt cctcttctgc actcaagttt cccagtttcc 840
gatgcacttc ttcggttgag ccgaagcttt cacatcagac tttaaaaaac cgcctgcgct 900
cgctttacgc cataatccgg acacgcttgc cacctacgta ttaccgcgct gctgcacgta 960
gtagcgtggc tttctgtaag tacggtccat actgacagta ctctcagata tgttcttctt 1020
acacagagtt tacgag 1036
Claims (4)
1.一种海洋植物乳杆菌SS-128，其特征在于该菌株来源于海洋冷水鱼黑头鱼肠道，保藏名称为“植物乳杆菌SS-128”，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2018年12月18日，保藏号编号为CGMCC NO.17003。
2.根据权利要求1所述的一种海洋植物乳杆菌SS-128，其特征在于所述海洋植物乳杆菌的16s rDNA序列是如说明书序列表所示的核苷酸序列。
3.权利要求1所述的海洋植物乳杆菌SS-128在水产品保鲜中的应用。
4.权利要求1所述的海洋植物乳杆菌SS-128作为水产品保鲜剂的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110059068.7A CN112662587A (zh) | 2021-01-17 | 2021-01-17 | 海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110059068.7A CN112662587A (zh) | 2021-01-17 | 2021-01-17 | 海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112662587A true CN112662587A (zh) | 2021-04-16 |
Family
ID=75415405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110059068.7A Pending CN112662587A (zh) | 2021-01-17 | 2021-01-17 | 海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112662587A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112094323A (zh) * | 2020-09-29 | 2020-12-18 | 福州大学 | 一种植物乳杆菌源广谱抗菌肽及其应用 |
| CN113046280A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-06-29 | 郑州大学 | 一株抑制病原菌的耐盐耐低温植物乳杆菌及其应用 |
| CN115948277A (zh) * | 2022-09-14 | 2023-04-11 | 大连理工大学 | 一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用 |
-
2021
- 2021-01-17 CN CN202110059068.7A patent/CN112662587A/zh active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| SAYED K. ALLAMEH等: "Characterization of a Probiotic Lactobacillus fermentum Isolated from Snakehead, Channa striatus, Stomach", 《JOURNAL OF THE WORLD AQUACULTURE SOCIETY》 * |
| 史国萃等: "海水鱼肠道低温乳酸菌的分离及其在南美白对虾保鲜中的应用研究", 《食品科技》 * |
| 崔天琦等: "植物乳杆菌DL3对草鱼片中腐败菌的抑制", 《食品工业科技》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112094323A (zh) * | 2020-09-29 | 2020-12-18 | 福州大学 | 一种植物乳杆菌源广谱抗菌肽及其应用 |
| CN112094323B (zh) * | 2020-09-29 | 2022-04-01 | 福州大学 | 一种植物乳杆菌源广谱抗菌肽及其应用 |
| CN113046280A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-06-29 | 郑州大学 | 一株抑制病原菌的耐盐耐低温植物乳杆菌及其应用 |
| CN115948277A (zh) * | 2022-09-14 | 2023-04-11 | 大连理工大学 | 一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7927639B2 (en) | Mixture of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for the use as natural preservation system | |
| CN112662587A (zh) | 海洋植物乳杆菌ss-128及其在水产品保鲜中的应用 | |
| Nilsson et al. | Growth control of Listeria monocytogenes on cold-smoked salmon using a competitive lactic acid bacteria flora | |
| Jeppesen et al. | Characteristics and antagonistic activity of lactic acid bacteria isolated from chilled fish products | |
| Østergaard et al. | Characterization of anti-listerial lactic acid bacteria isolated from Thai fermented fish products | |
| JP2002540805A (ja) | 新規な保護培養物と食品保存においてのその使用 | |
| JP4041850B2 (ja) | 低温で良好な生育を示し、ナイシンを高生産する糖質資化性に優れγ−アミノ酪酸を生産する新規乳酸菌およびγ−アミノ酪酸高生産法と酒類の火落ち防止技術等への利用 | |
| Strack et al. | Food biopreservation using antimicrobials produced by lactic acid bacteria | |
| Jeppesen et al. | Antagonistic activity of two strains of lactic acid bacteria against Listeria monocytogenes and Yersinia enterocolitica in a model fish product at 5 C | |
| CA2665238C (en) | Enhanced preservation of processed food | |
| MAKARIOS‐LAHAM et al. | Protein hydrolysis and quality deterioration of refrigerated and frozen seafood due to obligately psychrophilic bacteria | |
| Sharma et al. | Potential of Lactococcus lactis subsp. lactis MTCC 3041 as a biopreservative | |
| Sarika et al. | Efficacy of bacteriocin of Enterococcus faecalis CD1 as a biopreservative for high value marine fish reef cod (Epinephelus diacanthus) under different storage conditions | |
| Tomé et al. | Could modifications of processing parameters enhance the growth and selection of lactic acid bacteria in cold-smoked salmon to improve preservation by natural means? | |
| Ibrahim et al. | Application of locally isolated lactic acid bacteria metabolites as bio-preservatives to increase shelf-life, safety and quality of some fruits | |
| Zhu et al. | Isolation, identification and application of lactic acid bacteria from Chinese traditional fermented sea-fish | |
| US20040249129A1 (en) | Novel lactic bacteria of the genus lactococcus lactis and use thereof for preserving food products | |
| Ashenafi et al. | Development of microorganisms during cold storage of pea and chickpea tempeh and effect of Lactobacillus plantarum on storage microflora | |
| CN116426441B (zh) | 戊糖乳杆菌p307及其应用和利用其制备细菌素的方法 | |
| Ndaw et al. | Effect of controlled lactic acid bacterial fermentation on the microbiological and chemical qualities of Moroccan sardines (Sardina pilchardus) | |
| Al-Otaibi et al. | Camel's milk as a natural source for probiotics | |
| Fadahunsi et al. | Effect of inoculation of Pediococcus acidilactici metabolites on the microbial profile of turkey meat stored at different low temperature range | |
| CN115975853B (zh) | 类肠膜魏斯氏菌及其应用 | |
| Bouchefra et al. | Application of bacteriocin-producing lactic acid bacteria isolated from salted dried camel meat (El Kadid) in the preservation of goat cheese against Staphylococcus aureus. | |
| Oh | Influences of squid ink added to low salt fermented squid on its changes in lactic acid bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210416 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |